Informe de laboratorio Bioprocesos N°1 presentado el 04 de septiembre de 2013

DETERMINACIÒN DE AZÚCARES REDUCTORES MÉTODO DNS

Resumen: Se desarrolló un procedimiento para determinar la concentración los azucares que
poseen extremos carbonilos fácilmente oxidables (azúcares reductores) por el método del ácido
3,5 dinitro salicílico (DNS); la determinación de estos azúcares se realizó con el objeto de
obtener una curva de calibración, con este reactivo (DNS) que tiene capacidad de oxidar a
los azúcares reductores dando resultados colorimétricos que se pueden medir con una
longitud de onda de 540nm en el espectrofotómetro.
Palabras clave: Reactivo 3,5 dinitro salicílico (DNS), curva, calibración, azucares reductores,
espectrofotómetro.
1. INTRODUCCIÓN
Hoy en día la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de métodos analíticos para
la determinación azúcar y alcohol en los licores y/o bebidas a utilizar como medio de
venta. Uno de los métodos más acordes y con mejor resultados en la determinación de los
azucares con carácter reductor, es el método (DNS), método que ha sufrido varias
modificaciones a través de los años para adecuarse al análisis de diferentes materiales y su
principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un método
espectrofotométrico; el procedimiento se basa en una reacción redox que ocurre entre el
DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra, sin embargo a nivel industrial no es
recomendable utilizarlo cuando dicha trata sustancias tales como mieles y caldos de
fermentación que lo contengan, esto debido a según estudios realizados en la materia, a los
altos niveles de dispersión.
El presente informe desarrollara el procedimiento respectivo para la determinación de
azucares reductores a partir de una solución patrón de glucosa de concentración 1g/L, que
permitirá realizar y ajustar una curva de calibración, y una solución desconocida; por el
método del ácido 3,5 dinitro salicílico (DNS).

2. DATOS
Se utilizó una solución patrón de glucosa ( l ) (1g/L)
En la Tabla 1.0 se muestra las cantidades de volumen de solución de glucosa, agua
destilada y solución DNS necesarias para la realización de las 5 soluciones y el blanco (que
es la referencia de 0 para la toma de absorbancia en el espectrofotómetro), para proceder a
la toma de datos en el espectrofotómetro.

Dilución Blanco 1 2 3 4 5
Volumen de solución I 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
(mL)
Volumen de agua 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
(mL)
Volumen DNS (mL) 2 2 2 2 2 2
Volumen Total (mL) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
Tabla No.1 Datos para la preparación de soluciones
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Para la construcción de la curva de calibración es necesario conocer las concentraciones de

azúcar en cada solución después de haber realizado la dilución con el agua destilada. Esta
concentración se puede determinar con la ecuación:
𝑉1 𝐶1 = 𝑉2 𝐶2 (Ec. 1)

Esta es la ecuación No. 1 (Ec. 1), despejando de esta ecuación la C2, que es la de interés se
obtiene
𝑉1 ∗ 𝐶1
𝐶2 =
𝑉2
De esta ecuación se sabe que la C1 es la concentración de la solución patrón de glucosa
(1g/L), y el volumen final (V2) que es 6,5mL que es el volumen obtenido después de
agregar los 4mL de agua en todas las soluciones. A partir de esta ecuación se determinan
las concentraciones de la siguiente manera:
 Para la solución No. 1 se obtiene

0.1𝑚𝐿 ∗ 1𝑔/𝐿 1
𝐶2 = = 𝑔/𝐿
6.5mL 65
Este proceso se repite hasta obtener las concentraciones de azúcar de las 5 soluciones a
estudiar, los cuales están registrados en la Tabla No. 2

Dilución Blanco 1 2 3 4 5
Concentración (g/L) 0 1/65 2/65 3/65 4/65 5/65
Tabla No. 2 Concentración de azúcar de las 5 soluciones.

Después de preparadas las soluciones, se mide la absorbancia con el espectrofotómetro y se

obtiene la tabla No. 3, que muestra las absorbancias medidas con el espectrofotómetro,
tomando como 0 la solución sin concentración de glucosa (blanco).

Dilución Blanco 1 2 3 4 5
Absorbancia (Abs) 0 0.029 0.178 0.396 0.571 0.778
Tabla No. 3 Datos de absorbancia tomados con el espectrofotómetro.

Con estos datos tomados durante la práctica se construye la curva de calibración, que
relaciona las concentraciones de las diferentes soluciones y la absorbancia medida en cada
una de ellas. La tabla No. 4 nos relaciona estos datos.
No.
Solución Concentración Absorbancia
Blanco 0 0
1 0,015384615 0,029
2 0,030769231 0,178
3 0,046153846 0,396
4 0,061538462 0,571
5 0,076923077 0,778
Tabla No. 4 Datos para la construcción de la curva de calibración
Informe de laboratorio Bioprocesos N°1 presentado el 04 de septiembre de 2013

3. RESULTADOS

Con la (Tabla No.4) se obtiene la (Gráfica No. 1) que es la curva de calibración obtenida
de acuerdo con los datos tomados durante la práctica.
Curva de Calibración
0.9
0.8
0.7
0.6 y = 10.649x - 0.0842
0.5
Absorbancia

R² = 0.9672
0.4
0.3
0.2
0.1
0
-0.1 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
-0.2
Concentración de azucar

Gráfica No. 1 Curva de calibración

Con la curva obtenida se realiza una gráfica de tendencia lineal que se ajusta a los
datos, el R2 obtenido para la ecuación de la recta es de 0.9672. Teniendo en cuenta que
el R2 es mayor a 0.95 los datos no tienen mucha dispersión y por lo tanto son
aceptables.

 Muestra problema
Para el estudio de la muestra es necesario hacer una dilución ya que los azucares están muy
concentrados y se obtendrían resultados que no se ajustan a la curva de calibración.
Las dos diluciones realizadas para la muestra fueron 1:20 y 1:30
 1:20 Por 1mL de muestra, se agregan 19mL de agua.
 1:30 Por 1mL de muestra, se agregan 29mL de agua.

Para estas dos diluciones se realiza el mismo procedimiento que con las soluciones
anteriores y se mide la absorbancia en el espectrofotómetro, utilizando el mismo blanco
utilizado en las anteriores soluciones. De estos datos tomados se obtiene la Tabla No. 6, que
muestra las absorbancias tomadas para las muestras.

No. De Muestra Dilución Absorbancia (Abs)

1 1:20 0.944
2 1:30 0.410
Tabla No. 5 Datos de absorbancia tomados para la muestra
Informe de laboratorio Bioprocesos N°1 presentado el 04 de septiembre de 2013

Para la muestra a estudiar se tienen los datos mostrados en la Tabla No. 5, que es la
información obtenida de la información nutricional que viene del fabricante de la
muestra, con la cual se podrá comparar con los resultados obtenidos durante la
realización de la práctica.
Muestra: jugo de naranja sintético marca Cifrut de la compañía AJE; cuyo
concentración de azucares es de 27g/240ml es decir 112,5g/L
Dilución Muestra Problema “Jugo
Cifrut”
Volumen de solución 1:20 (mL) 0,500
Volumen de DNS (mL) 2,000
Volumen total (mL) 2,500
Absorbancia a (540nm) 0,944
Tabla No. 5 Muestra problema (1:20) para encontrar su concentración de azucares

Dilución Muestra Problema “Jugo

Cifrut”
Volumen de solución 1:30 (mL) 0,500
Volumen de DNS (mL) 2,000
Volumen total (mL) 2,500
Absorbancia a (540nm) 0,410
Tabla No. 6 Muestra problema (1:30) para encontrar su concentración de azucares

Utilizando la ecuación de la recta obtenida por la tendencia lineal de la curva de calibración

observada en la (Grafica No.1) y el valor de las absorbancias que se encuentran en la
(Tabla No. 5 y Tabla No.6) Se llega a:

𝑌 = 10,649𝑥 − 0,0842 (Ec.2)

Despejando X de la Ec. (2)

𝑌 + 0,0842
𝑋=
10,649

Donde Y es la Absorbancia de la muestra problema igual a 0,944 con la (Tabla No.5)

0,944 + 0,0227
𝑋= = 𝟎, 𝟎𝟕𝟕𝟎 𝒈/𝑳
12,551

Donde Y es la Absorbancia de la muestra problema igual a 0,410 con la (Tabla No.6)

0,410 + 0,0227
𝑋= = 𝟎, 𝟎𝟑𝟒𝟒𝟕𝟓𝟏 𝒈/𝑳
12,551