PRINCIPIO DEL ENSAYO INMUNOABSORBENTE LIGADO A ENZIMAS (ELISA)

Permite la detección y/o cuantificación de antígenos (Ags) o anticuerpos (Acs), por medio de la
utilización de un conjugado, Ac o Ag, unido a una enzima , que actúa sobre un sustrato
específico para desarrollar un color visible.

En esta prueba, se utilizan placas de poliestireno con múltiples pocillos (platos de 96 pozos)
que se “tapizan” con el Ag o con el Ac, sobre los cuales se adiciona el suero o muestra
problema.

La reacción Ag-Ac, será revelada mediante la adición de un sustrato que al ser blanco de la
acción de la enzima, unida al conjugado, producirá un color observable a simple vista (amarillo,
azul, etc), que puede ser cuantificado mediante el uso de un espectrofotómetro o colorímetro
(“Lector de ELISA”). La utilidad de la prueba de ELISA, radica principalmente en su sensibilidad,
especificidad y reproducibilidad, y es muy utilizada en el diagnostico de numerosas
enfermedades humanas infecciosas o no infecciosas, tales como, infección por VIH, dengue,
Lupus Eritematoso Sistémico (LES)

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

1. Conocer el fundamento y pasos en la realización de la prueba de ELISA, y las variantes de

este método.

2. Realizar con destreza la prueba de ELISA para la detección de anticuerpos antinucleares

Para la detección de anticuerpos:

• ELISA indirecto: emplea placas tapizadas con el Ag; Ac anti-Ig o anti-especie secundario unido
a la enzima (conjugado).

• ELISA de competición: emplea placas tapizadas con Ac específico. El suero problema se

incuba previamente (preincubación) con el Ag antes de añadirlo a la placa, y por tanto,
compite con él. La ausencia de color es resultado positivo.

Para la detección de antígeno:

• ELISA directo: Detección de Ag, que se fija a la placa, con el Ac específico primario unido a la
enzima (conjugado).

• ELISA EN SANDWICH: Aunque sirve tanto para detectar Ac como Ag, es la modalidad más
empleada para detección de Ag. Emplea placas tapizadas con el Ac específico; Ac específicos
marcados o sin marcar (conjugados con enzima). Este puede ser de dos tipos: ELISA
“sándwich” directo (DAS) o ELISA “sándwich” heterólogo (HADAS).

En el caso de la ELISA para la detección de anticuerpos antinucleares, la sensibilidad de la

prueba es superior al 95%