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Resumen de Microbiologi?A

Fundamentos de Microbiología (Universidad de Córdoba España)

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Resumen de Fundamentos de Microbiología 2ºBioquímica.

Tema 1: Microbiología y microorganismos

a) Microbiología y microorganismos

La palabra microbiología viene de “micro”-pequeño, “bio”-vida y “logía”-disciplina que


estudia.
La primera vez que se usó la palabra microbio fue en 1878 de la mano del médico
Sédillot en una conferencia de Louis Pasteur.
En la actualidad se conoce a como microbio a aquel ser vivo que para su observación
nos es necesario emplear la microscopía. Un microbio es un ser unicelular e
independiente.

b) Cometidos de la Microbiología: Aspectos básicos y aplicados:

Se puede estudiar la microbiología desde dos puntos de vista diferentes:

! 1- Considerándola como ciencia biológica básica: Se emplean a los


microorganismos para el estudio de procesos biológicos básicos, para luego aplicarlos
a seres superiores.

! 2- Considerándola como una ciencia biológica aplicada: La microbiología


médica estudia a los microbios que actúan sobre el hombre, la microbiología industrial
como obtener beneficio de los microbios, también existen otras como la microbiología
veterinaria, la microbiología agrícola...

Los microbios son de vital importancia biológica, contribuyendo a mantener la vida


sobre la Tierra y existiendo millones de años antes que plantas o animales.

c) Reseña histórica de la Microbiología:

A lo largo de la historia se han realizado muchas alusiones a los microbios a


pesar de no poder demostrar su existencia.
Anton Van Leeuwenhoek usando lentes biconvexas observó diferentes cosas como
por ejemplo una gota de agua y pudo encontrar la presencia de microorganismos los
cuales denominó con el nombre de “animáculos”.
En el siglo XVIII aparecen dos grupos de pensamientos opuestos:

! 1- Generación espontánea: Postulaban que los animáculos surgían a partir de


la materia inerte. Un seguidor de esta corriente fue Willian Harvey, aunque el creía en
la existencia de unas semillas invisibles a partir de las cuales surgía la vida.

! 2- Generación normal: Postulaban que a partir de los seres vivos se forman


nuevos seres vivos. Su principal defensor fue Francesco Redi, que realizó un
experimento para desacreditar la generación espontánea: Introdujo un trozo de carne
en un bote abierto y otro trozo en un bote que era hermético, dejó pasar el tiempo y se
comprobó como en el bote hermético no había presencia de microorganismos. Louis
Joblot, realizó una experiencia de hervir extractos de plantas, cubrir unas y dejar
abiertas otras, y observar cómo sólo en la abierta se formaban los microorganismos.

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! Louis Pasteur puso fin a la discusión entre los dos grupos descritos. Se


considera el padre fundador de la Microbiología. Descubrió las fermentaciones y
presintió que las enfermedades humanas contagiosas se transmitían por
microorganismo.

! Pasteur ideó la manera de esterilizar a temperatura ambiente; cerró un matraz


con un cuello estrecho, parecido al de un cisne, pero abierto al exterior. Hirvió el
contenido del matraz, que era un caldo de cultivo, y lo dejó enfriar. Pero aunque el
matraz estaba en contacto con el aire no se desarrollaban los microorganismos al
quedar atrapados en la superficie del cuello de cisne, y al abrirlo, la proliferación de
microorganismo era la normal.

! Robert Koch parte de las deducciones de Pasteur y sienta las bases de la


Microbiología. Usó el microscopio para ver bacterias, diseñó métodos para su tinción,
usó gelatinas que permitieron fijar los microorganismos a una placa, etc. También
contribuyó a la industria alemana del vidrio y a la mejora de la óptica de los
microscopios. Fue el creador de los postulados de Koch:

• El agente patógeno debe estar presente en cada caso de la enfermedad en las


condiciones apropiadas y ausente en las personas sanas.
• El agente no debe aparecer en otra enfermedad de manera fortuita o saprófita.
• El agente debe ser aislado del cuerpo en un cultivo puro a partir de las lesiones
de la enfermedad.
• El agente debe provocar la enfermedad en un animal susceptible al ser
inoculado.
• El agente debe ser aislado de nuevo de las lesiones producidas en los animales
de experimentación.
En cuanto a la bioterapia destacó Fleming con el descubrimiento de la penicilina.

d) Organización celular y clasificación general de los microorganismos:

Dentro los microorganismos podemos distinguir los siguientes grupos:


 
■ Bacterias.
■ Hongos.
■ Parásitos.
■ Virus.
■ Priones.

-Bacterias:

! Las bacterias son microorganismos unicelulares cuyo tamaño suele oscilar


entre los 0,5 a 5 micrómetros (µm), son los organismos más abundantes de la Tierra
siendo en su mayoría inocuas para el ser humano, las podemos encontrar en
cualquier medio bien sea en el suelo, en el agua e incluso en medios donde no sería
posible la vida, pueden presentar formas variadas como esferas, hélices, comas y/o
barras.

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        En función de la presencia de determinadas estructuras que le confieren su
funcionalidad, las bacterias se clasifican dentro de los procariotas ya que a diferencia
de los eucariotas como son las células de los seres humanos, carecen de núcleo y de
algunos orgánulos internos, además de presentar una pared celular de peptidoglicano.
Algunas de ellas, dentro de su estructura, presentan flagelos, fimbrias o pilis que
intervienen en la movilidad de la bacteria o en procesos de reproducción.
 
        Se estima que en el cuerpo humano hay tantas bacterias como células
poseemos, concentrándose en la piel y en el tracto digestivo.

-Hongos:

! Los hongos organismos eucariotas ya que a diferencia de las bacterias


presentan una serie de estructuras como:
Núcleo definido, Mitocondrias, Retículo endoplásmico, Pared celular compuesta por
quitina, glucano o manano, Membrana citoplasmática rica en esteroles...

        Pueden ser unicelulares como es el caso de las levaduras o pluricelulares como
es el caso de los mohos u hongos filamentosos, en el primer caso, los mohos, están
formados por estructuras tubulares llamadas hifas que se entrelazan para formar el
micelio, algunas especies pueden presentarse en forma de levadura y en su forma
pluricelular.
 
       En relación a su metabolismo, éste puede ser aerobio, heterótrofo y su
reproducción puede ser de cuatro tipos:
Asexual por gemación, Sexual, Por esporulación, Por fragmentación.

Algunos de ellos pueden llevar vida saprófita y otros parasitaria.

-Parásitos:
!
! Un parásito se define como aquel ser vivo que se nutre a expensas de otro,
llamado hospedador, sin que le aporte un beneficio, dentro de estos organismos nos
podemos encontrar con aquellos cuyo tamaño se ven a simple vista tales como las
pulgas, los piojos, las chinches, gusanos entre otros y aquellos que solo son visibles
bajo la visión de un microscopio tales como determinados protozoos dentro de los
cuales se encuentra Naegleria fowleri, agente causal de la Meningoencefalitis
Amebiana Primaria.
 
     La relación que existe entre el parásito y el hospedador, es siempre desigual
debido a que mientras el primero se beneficia del segundo, este último sufre las
consecuencias de este tipo de relación.

-Virus:
!
! Curiosamente los virus se definen como “parásitos intracelulares obligados”,
esto quiere decir que para poder multiplicarse necesitan de la “maquinaria genética de
la célula” para poder realizar dicha función, y así, expandirse. Dentro de su estructura,
los virus están compuesto de 4 elementos como máximo:
 
!

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! Material genético que puede ser de ADN o de ARN y que forma parte de la
clasificación de un virus.Envoltura proteica llamada cápsida. Proteínas virales que
tienen funciones estructurales y enzimáticas.
!
! Su tamaño es variable, pero todos coinciden en que no son visibles mediante
un microscopio óptico, necesitan ser visualizados mediante un microscopio
electrónico, como ejemplos de este tipo de microorganismos se tienen el virus de la
gripe, el virus de la polio o el virus del papiloma humano.

-Priones: !

! Por último, mención especial se le deben hacer a los priones, estos no son
microorganismos, son exclusivamente proteínas y su  capacidad infecciosa se debe a
que dichas proteínas tienen una configuración diferente a las proteínas normales
induciendo a éstas a adoptar una configuración anormal, consecuencia de ello
esque estas proteínas no pueden realizar sus funciones normales y tienden a
polimerizar formando depósitos y placas en las células infectadas, como ejemplo se
tiene la “ encefalitis espongiforme bovina” también conocida como “el mal de las vacas
locas”.

Acariontes
,VIROIDES,  PRIONES

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Tema 2: Taxonomía microbiana

a) Introducción:

! La taxonomía se encarga de clasificar a los diferentes organismos según sus


características fenotípicas, estructurales o genéticas. Es un sistema jerárquico, que se
basa en el sistema binomial “género-especie” creado por Carolus Linnaeus.

b) Rangos taxonómicos:

! Los organismos se clasifican según diferentes grupos taxonómicos: Dominio,


Reino, Tribu, División...

! La nomenclatura taxonómica nos permite definir a un organismo mediante un


nombre científico que sigue un código internacional. El nombre debe escribirse
subrayado o en itálica, con la primera letra del Género en mayúscula. El nombre de un
organismo no se escoge al azar, suele tener relación con el descubridor y suelen ser
muy descriptivos. Un nombre es único para cada especie.
!
! La identificación de un organismo nos permite encuadrarlo dentro de un grupo
taxonómico conocido. Cada grupo taxonómico recibe el nombre de taxa.
El rango taxonómico es la posición relativa que ocupa en la clasificación taxonómica
un individuo.

c) Especies bacterianas:

! La especie es la categoría básica dentro de la microbiología. Una especie


bacteriana es una colección de cepas que comparten numerosas propiedades
estables y difieren significativamente de otros grupos de cepas.

! Una cepa bacteriana es un cultivo puro aislado, mientras que un clon es aquel
genéticamente idéntico al progenitor, descendiente de una única bacteria aislada. La
cepa tipo es aquella primera cepa que caracteriza a la especie en la organización
taxonómica y la cepa neotipo es igual que la anterior pero no es la primera, sino que
son generaciones posteriores.

d) Clasificación general y filogenia de procariotas:

! A) El Reino taxonómico Mónera comprende, entre otras, a las eubacterias


(las bacterias "verdaderas") y las cianobacterias (o bacterias fotosintetizadoras).

1. Los organismos de este grupo no poseen orgánulos rodeados por membranas


(como las formas superiores de vida) y se conocen como procariotas.
2. Procesos bioquímicos que en eucariotas ocurren normalmente en los
cloroplastos o mitocondrias, tienen lugar en la membrana citoplasmática.
3. El cromosoma bacteriano esta constituido por ADN circular que se ubica en la
región denominada nucleoide.

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4. Distribuidos en el citoplasma bacteriano se encuentran pequeños lazos de ADN


conocidos como plásmidos.
5. Los genes bacterianos se encuentran organizados en un sistema conocido
como operón.

! Su pequeño tamaño, velocidad de reproducción (Escherichia coli se reproduce


por fisión binaria cada 15 o 20 minutos), y la "ocupación" de diversos hábitats y modos
de existencia hacen de Móneras el Reino más abundante y diversificado sobre la
Tierra.

Una manera de clasificar las bacterias es subdividirlas de acuerdo a la forma en que


adquieren su energía en:

-Quimiosintetizadoras:

! Son  autótrofas, y obtienen energía de la oxidación de compuestos inorgánicos


como el amonio, los nitritos (a nitratos) o los sulfuros (a sulfatos).

- Fotosintetizadoras:

! Convierten la energía lumínica en energía almacenada en carbohidratos. El


grupo mas importante es el de las cianobacterias. Probablemente las primitivas
cianobacterias formaron el oxígeno que se liberó en la primitiva atmósfera terrestre.
Poseen clorofila a y también el pigmento azul ficocianina y el rojo ficoeritrina.

-Heterotrófas:

! Los miembros de este grupo obtienen su energía de materia orgánica


elaborada por otros organismos. Podemos señalar dos grandes grupos: las saprofitas 
y las simbióticas.

! Las  saprófitas se alimentan de materia muerta o en descomposición siendo


por lo tanto importantes recicladores de nutrientes. 

! Muchas de las que entablan relaciones simbióticas  lo hacen en forma


mutualística y colaboran con su huésped, ejemplo de ellos son las bacterias que en la
vaca y otros rumiantes convierten la celulosa en glucosa asimilable por el animal.
Otras entablan una relación parasitaria y se constituyen en patógenas para su
huésped produciendo enfermedades tales como la fiebre reumática, cólera, gonorrea,
sífilis.

! B) Las arqueobacterias, constituyen un fascinante grupo de organismos y por


sus especiales características se considera que conforman un Dominio separado:
Archaea. Son el grupo más antiguo de bacterias.

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Si bien lucen como bacterias poseen características bioquímicas y genéticas que las


alejan de ellas. Por ejemplo:

1. No poseen paredes celulares con peptidoglicanos;


2. Poseen secuencias únicas en su ARN;
3. Algunas de ellas poseen esteroles en su membrana celular (una característica
de eucariotas);
4. Poseen lípidos de membrana diferentes tanto de las bacterias como de los 
eucariotas (incluyendo enlaces éter en lugar de enlaces éster).

! El Árbol filogenético Universal establecido por Carl Woese y su discípulo


Gary Olsen muestra los tres grandes Dominios: Archaea, Bacteria y Eucaria.

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Tema 3: Métodos y técnicas en


Microbiología

a) Introducción:

! Los microorganismos tienen un tamaño que por lo general no superan las


pocas micras, aunque depende de muchas factores como el medio de cultivo en el
que se desarrollen o su edad.
Al ser de tan reducido tamaño, para su estudio y observación es necesario el uso del
microscopio.

! El poder de resolución es la máxima capacidad para distinguir dos puntos


separados como independientes.

b) Técnicas de observación de microorganismos:

! Podemos agrupar los diferentes tipos de microscopios existentes en dos


grandes categorías, estas son:

1. Microscopios ópticos: Campo claro, campo oscuro, contraste de fases, de


fluorescencia, contraste de interferencia diferencial, fuerza atómica, confocal...

- Campo claro: Es el más simple de todos, la luz pasa directamente a través de la


bacteria y la capacidad para distinguir los componentes celulares depende del
contraste que se obtiene según la cantidad de luz que estos absorban. Es
frecuente la tinción de partes concretas de la bacteria para facilitar su
observación. Antes de teñir las bacterias son tratadas con fijadores como el
alcohol para conservar su estructura. Todo este proceso de preparación impide
la observación de tejido celular vivo en este microscopio.

- Campo oscuro: Este microscopio tiene un condensador especial (el condensador


es la parte del microscopio encargada de concentrar los rayos de luz en un único
punto, la muestra). Con este microscopio se ve el fondo oscuro y la muestra
clara.

- Contraste de fases: Traducen los cambios de fase de la luz en imágenes con


diferentes tipos de contraste. Gracias a esto se pueden observar células sin
teñir, por lo que el microorganismo no tiene por qué estar muerto. Ofrece unas
imágenes muy efectistas.

- Fluorescencia: Es un método muy utilizado para el estudio de la distribución


intracelular de las moléculas. Se utiliza una tinción fluorescente para marcar las
moléculas que interesan tanto en células fijadas o como vivas. La tinción es una
molécula que absorbe la luz a una longitud de onda y emite luz con una segunda
longitud de onda que es detectada por unos filtros específicos para esa longitud.
La proteína verde fluorescente (GFP) de las medusas es extremadamente útil
para seguir la localización y movimientos de una amplia variedad de proteínas.

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- Contraste de interferencia diferencial: Utiliza una fuente de luz polarizada


generando imágenes tridimensionales.

- Fuerza atómica: Una muestra es recorrida con una pequeña aguja, que va
transmitiendo la información y se obtiene una imagen digital similar a la del
microscopio de barrido. Permite que las células permanezcan vivas.

- Confocal: La fuente de iluminación empleada es un láser, con esto se consigue


una iluminación mucho más precisa que se enfoca en un punto muy concentro
de la preparación. El detector solo recibe una fracción de la luz del láser debido
a que esta pasa antes por un agujero pequeño llamado “apertura focal”. Gracias
a esto se consigue una plano bidimensional de la preparación casi perfecto.

2. Microscopios electrónicos: De transmisión o de barrido.

- Transmisión [TEM]: Se observan células teñidas con metales pesados (Osmio,


Uranio, Plomo...), que proporcionan contraste mediante los electrones dispersos.
Las zonas teñidas de la célula teñidas aparecerán más oscuras debido a que no
dejarán pasar los electrones.

- Barrido: En ella la muestra se recubre de un metal pesado y se utiliza un haz de


electrones que barre la muestra con lo que se recoge una imagen tridimensional.
Sin embargo la resolución máxima de este tipo de microscopía es de tan solo 10
nm.

c) Cultivo de microorganismos: Cultivos ordinarios y cultivos celulares:

! Un medio de cultivo es una mezcla de sustancias que permitirá el crecimiento


de un tipo de microorganismos determinados. Un buen medio debe contener una
fuente de carbono y de nitrógeno, elementos minerales, factores de crecimiento,
factores estimulantes, un pH adecuado, un medio isotónico (NaCl<1%), con presencia
o no de oxígeno según sean los microorganismos aerobios o anaerobios
respectivamente, debe ser rico en agua, con una temperatura entre los 35 y 37ºC, etc.

! Los medios de cultivo de pueden clasificar según:

1) Consistencia

1)a. Líquidos
1)b. Sólidos: llevan un agente solidificante (Agar) que es un polisacárido acídico
producido por ciertas algas rojas que gelifica por debajo de 45° C. Se usa a una
concentración del 1,5%.
1)c. Semisólidos: Agar a una concentración del 0,7%.

2) Origen

2)a. Naturales: Huevos, leche...


2)b. Sintéticos: Son artificiales y se conoce perfectamente su composición. Ej:
Glucosa.
2)c. Semisintéticos: Son los más utilizados. Tienen mezcla de las características de
los anteriores.

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3) Composición

3)a. Comunes: Tienen las sustancias mínimas para el desarrollo bacteriano.


3)b. Enriquecidos: Se les añaden sustancias que potencian el desarrollo de las
bacterias más exigentes. En este grupo se encuentran el agar sangre y el
agar chocolate.

4) Finalidad

4)a. Selectivos
4)b. Diferenciales
4)c. Enriquecimiento
4)d. Identificación
4)e. Multiplicación
4)f. Conservación
4)g. Transporte

Consultar cuaderno de prácticas, práctica 2.

d) Diagnóstico microbiológico:

Consultar cuaderno de prácticas, práctica 3.

e) Métodos moleculares en Microbiología:

Consultar cuaderno de prácticas, práctica 1.

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Tema 4: Morfología y estructura de la


célula procariota

a) Introducción: Morfología. Estructura general de la célula procariota:

! La bacteria es una unidad celular que tiene completa autonomía. Su


estructura difiere en muchos aspectos de la estructura de las células
eucarióticas:

Las células superiores carecen de pared bacteriana, que es un elemento de gran


protagonismo en procariotas y en ella se basa la tinción de gram.
La membrana citoplasmática difiere en que las células superiores contienen
esteroles y en cambio la membrana de la mayoría de las bacterias carecen de
ese compuesto.
El citoplasma es más rico en eucariotas con gran cantidad de orgánulos
membranosos.
Los ribosomas de los eucariotas son 80S y los de las bacterias son 70S.
Los procariotas carecen de membrana nuclear.

! Hay algunas excepciones que no siguen las reglas generales en el mundo


bacteriano: La Borrelia burgdorferi es una bacteria que en lugar de tener el genoma
circular, como la mayoría de las bacterias, posee un genoma lineal haploide. Otra
excepción son las bacterias del género Tenericutes que carecen de pared celular.

! En cuanto a la
morfología bacteriana, los
cocos tienen forma
redondeada se pueden
disponer en forma de
estreptococos, estafilococos o
sarcinas; los bacilos tiene
forma alargada y se pueden
disponer en forma de
estreptobacilios o empalizada;
también hay otras morfologías
pero son menos comunes.
[Ver foto de la derecha]

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b) Elementos bacterianos obligados:

! Estos elementos están presentes en todas las bacterias y son indispensables


para la vida de la propia bacteria.

1.Pared celular

! Es el límite externo de la célula. Tiene una estructura semirrígida parecida a la


pared celular de las células vegetales.Tiene las funciones siguientes :

Protege a la bacteria de cambios externos adversos


Ayuda a mantener la morfología de la célula
Proporciona a la bacteria resistencia frente a los antibióticos
Permite el paso selectivo de algunas sustancias
Está implicada en la patogenicidad de la bacteria (endotoxinas)
Participa en la división celular

! Existen bacterias sin pared celular: Micoplasmas y Ureoplasmas; y otras que al


perderla se transforman en formas L. Pueden ser formas L estables que no vuelven a
recuperarlas (protoplastos) o formas L inestables que pueden llegar a recuperar la
pared celular en algún momento (esferoplastos).

! La pared se pone de manifiesto mediante la tinción por el método de gram, que


permite, de acuerdo con la afinidad tintorial, dividir a las bacterias en gram positivas y
gram negativas. No obstante tanto las bacterias gram positivas como las gram
negativas poseen un componente común, que es el péptidoglicano (glucopéptido-6-
mureína), que es un heteropolisacárido formado por dos aminoazúcares alternantes:
N-acetil-glucosamina (G) y el ácido N-acetil-murámico (M). Cada cadena permanece
unida a las adyacentes mediante un tetrapéptido, formándose una especie de malla ó
red.

a) Gram positivas: Se pueden encontrar ácidos teicoicos en la parte más externa


(proteínas y carbohidratos). Tiene una zona amplia de péptidoglicanos (mureína
o mucocomplejo de Park), puede llegar a tener 40 capas (entre el 50 y 90% de
la pared celular). El tetrapéptido cambia el ácido diaminopimélico por L-lisina.

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b)Gram negativas: Es más compleja en


composición y estructura que la anterior.
Su red de peptidoglicano solo contiene
una capa y apenas supone un 10% de la
pared. El tetrapéptido se une a la D-
alanina. Su pared celular nunca contiene
lisina y carece de ácidos teicoicos. El
componente mayoritario de su
membrana externa es el
lipopolisacárido compuesto de la
cadena glucídica (Ag O) que le concede
tipo especificidad al tratarse de un
antígeno de superficie; parte central o
core que es grupoespecífica y una
porción lipídica (lípido A), este último
actúa como endotoxina en ciertas
bacterias. Hacia la cara externa de la
membrana se localizan unas proteínas
denominadas porinas, que forman tres
canales ó poros en su interior.

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2. Membrana citoplasmática

! Es la estructura delgada que se encuentra por debajo de la pared celular,


encerrando el citoplasma de la célula. Sus funciones son:

Actúa como barrera selectiva: A través de ella se produce el paso de moléculas


en ambas direcciones debido a la presencia de permeasas.
En ella se localizan los enzimas respiratorios: Citocromo-oxidasas.
Posee invaginaciones ó plegamientos grandes e irregulares llamados
mesosomas, que parecen estar relacionados con la duplicación del cromosoma
bacteriano y en la división celular.
En su cara externa se localizan las PBP (Proteínas fijadoras de penicilina) que
intervienen en la síntesis del peptidoglicano y son la diana de los betalactámicos.

3. Citoplasma bacteriano

! Limitado por la membrana, es una masa heterogénea que engloba todos los
demás elementos de la célula, incluyendo los ribosomas, el material genético e
inclusiones de reserva (polifosfatos, glucógeno, lípidos...). Está formado por un
80-90% de agua, principios inmediatos, minerales y enzimas.

3.a) Mesosomas: Son ovillos que surgen por una invaginación de la membrana
plasmática. Se encuentran en bacterias gram positivas con mayor frecuencia.
Se pueden dividir en mesosomas septales que son los que inician el septo que
da lugar a la reproducción binaria y en mesosomas laterales encargados de la
respiración y de la excreción de exotoxinas al medio.

3.b) Ribosomas: Es otro componente esencial de las bacterias. En ellos se


sintetizan las proteínas. Tienen un menor coeficiente de sedimentación que los
ribosomas de células eucarióticas.

3.c) Inclusiones citoplasmáticas: Son elementos bacterianos facultativos, como


las vacuolas que almacenan líquidos en su interior y son signo de senectud, y
las granulaciones que son sólidas y son usadas como reserva de componentes.
Ej. Gránulos metacromáticos.

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c) Elementos bacterianos facultativos:

! Son aquellos elementos que pueden estar o no presentes en la bacteria.

1. Glucocálix

! Homopolisacárido sintetizado por algunas bacterias en posición extracelular.


Se suele desprender con facilidad.Ej. Streptococcus mutans, productor de la caries
dental. Sus principales funciones son:

Adherencia a superficies
Intervención en la respuesta inmune
Disminución de la eficacia de los antibióticos

2. Cápsula

! Es un gel hidrofílico de naturaleza polisacárida (y solo en algunas ocasiones


tiene una naturaleza polipeptídica como el Bacillus anthracis). Su existencia permite la
utilización de la tinción negativa o china. Según el tipo de cápsula, las colonias se
pueden clasificar en colonias M o mucosas, colonias S/L o acapsuladas y colonias R
que han perdido el lipopolisacárido. Sus principales funciones son:

Mayor adherencia a superficies


Protección frente a la fagocitosis y antimicrobianos, luego es un factor de
virulencia.
Tienen el antígeno capsular K o Vi de virulencia asociado.

Algunos ejemplos son:

➡Streptococcus pneumoniae, es un coco gram positivo que requiere muchos


elementos para su crecimiento por lo que se suele cultivar en agar sangre.
Produce la neumonia.
➡Neiseria meningitidis, es una bacteria gram negativa que también requiere de
agar sangre. Produce meningitis.
➡Haemophyllus influenzae, es un bacilo gram negativo.
➡Cryptococcus neoformans, es levaduriforme y se reproduce por gemación. Se
encuentra en las heces de las palomas.

3. Flagelos

! Se encuentran presentes en bacterias móviles o tricas, son sinuosos,


ondulados, de naturaleza proteica (antígeno H) y libres. No se encuentran en cocos, a
excepción de los planococcus. Son comunes en bacilos. Su función principal es la
quimiotaxis, por la cual la bacteria puede acercarse a algo beneficioso o alejarse de
algo perjudicial para la misma.

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! Hay diferencias en los cuerpos basales de los flagelos de bacterias gram


positivas y gram negativas. En el caso de las bacterias gram negativas los cuerpos
basales de los flagelos tienen dos pares de anillos: El anillo unido a la membrana
externa es el anillo L, el anillo P se une al péptidoglicano y tanto el anillo S como el
anillo M están unidos a la membrana plasmática. En las gram positivas solo hay un
par de anillos: un anillo P unido a la capa de péptidoglicanos y un anillo M unido a la
membrana plasmática.

Según la posición de los flagelos tenemos bacterias:

3.1.Monotricas: Un flagelo en un extremo.


3.2.Logotricas: Varios flagelos en un extremo.
3.3.Anfitricas: Varios flagelos en ambos extremos.
3.4.Peritricas: Flagelos en toda la superficie.

4. Fimbrias/Pilis

! Apéndices de naturaleza proteica que poseen algunas bacterias . Son más


cortos y numerosos que los flagelos y se disponen por toda la superficie bacteriana.
Se dan casi de forma exclusiva en bacterias gram negativas. Su función es la
adherencia a superficies (sobre todo epitelio de las vías urinarias) y también tienen
propiedades antigénicas. Existe una subclase de fimbrias (pilis sexuales) que son
más largas y poco numerosas, cuya función es la intervención en la conjugación
bacteriana.

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5. Esporas

! Aquellas bacterias que las producen obtienen un alto poder de resistencia. Son
exclusivas de algunas especies bacilares. Pueden encontrarse en el interior de las
bacterias (endosporas) o permanecer libres (exosporas). Participan en un proceso
llamado esporulación, en el se duplica el ADN de la bacteria y se recubre por dos
membranas y estas dos a su vez por una cubierta. Se producen sustancias como el
dipicolinato cálcico, que hacen que la espora pueda sobrevivir en un medio falto de
agua. La germinación es el paso de la forma esporulada de la bacteria a la forma
vegetativa y sucede cuando la espora encuentra un medio óptimo para desarrollarse y
rompe su cubierta o exosporio.

! Para clasificar a las bacterias con esporas tenemos en cuenta: la localización


de las mismas que puede ser ser central, terminal (en un extremo) ó subterminal
(próxima a un extremo); y la deformación o no del soma bacteriano.

! Las esporas no se tiñen con los colorantes convencionales, por lo que


requieren de técnicas de tinción especiales.

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Tema 5: Núcleo bacteriano

a) Introducción:

! La presencia del núcleo bacteriano se manifestó gracias a la tinción de


Feulgen, y su composición y estructura se determinó gracias a la invención del
microscopio electrónico.

! El cromosoma bacteriano no está delimitado por ninguna membrana y tiene


toda la información genética de la bacteria. Si se desplegara tendría una estructura
circular de doble cadena, cuyos extremos se encuentran unidos mediante enlaces
covalentes.El superenrollamiento en el cromosoma bacteriano se debe a la asociación
con enzimas denominadas topoisomerasas (que producen cortes en las cadenas de
ADN, aumentan o disminuyen el superenrollamiento y resellan) por lo que son
indispensables para el mantenimiento y la división del ADN bacteriano. Generalmente
parte del ADN del cromosoma bacteriano toca en algún punto la membrana
plasmática, ese será el punto de inicio para la replicación.

b) Replicación: ADN y ARN.

! El ADN se replica siguiendo un mecanismo semiconservador, sirviendo cada


una de las cadenas como molde para formar las nuevas cadenas.

! El cromosoma es considerado un replicón, es decir, que es quien decide el


momento de duplicarse pues es portador de los genes iniciador y autoduplicador. El
autoduplicador es el gen que está unido a la ADN-polimerasa y el iniciador es el gen
que le informa al autoduplicador para que comience la replicación.

! El autoduplicador estaría unido a la membrana y ocuparía un sitio del ADN


denominado oriC y en ese lugar iría girando la molécula de ADN. La duplicación del
ADN por la ADN-polimerasa implica la ruptura de los puentes de hidrógeno entre
ambas cadenas y su separación y esto ocurre por giro del cromosoma sobre el punto
de unión en el mesosoma. Terminada la replicación los dos cromosomas se separan
dividiendo el mesosoma sobre el cual estaban fijos, asegurando al mismo tiempo la
división bacteriana mediante la formación de septos.

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El ADN tiene las siguientes características clave:

Contiene toda la información genética de la bacteria.


Interviene en la división bacteriana. A+G
Regula la síntesis proteica. Coef . de Chargaff =
C +T
Es el sitio de acción de algunos antimicrobianos.
Es el sustrato de toda mutación.

Son tres los tipos de ARN presentes en el citoplasma bacteriano:

1.ARN mensajero (ARNm): Lleva el menaje genético que codifica la síntesis de


proteínas recogida en forma de tripletes de bases (codones).

2.El ARN ribosómico (ARNr): Traduce el mensaje del ARNm. Consta de dos
subunidades (50S y 30S) con dos lugares funcionales: aminoacil o aceptor (sitio A)
donde se unen los aminoácidos y peptidil o dador (sitio P).

3.El ARN de transferencia (ARNt): Encargado de transportar los aminoácidos hacia


el ribosoma para realizar la síntesis proteica.

c) ADN extracromosómico: Plásmidos y episomas

! Los plásmidos son moléculas no esenciales para el funcionamiento de la


bacteria, son muy similares al cromosoma bacteriano, aunque se duplican
independientemente del mismo. Hay diferentes tipos de plásmidos: Plásmidos
resistentes que dotan de cierta resistencia a algunas bacterias, plásmidos crípticos de
los cuales no conocemos su función, en bacterias gram negativas están los plásmidos
conjugativos, plásmidos curativos, etc.

! A veces pueden tener la capacidad para integrarse en el cromosoma


bacteriano, entonces pasa a llamarse episoma.

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Tema 6: División bacteriana

a) Introducción:

! La mayoría de las bacterias se dividen por fisión binaria transversa; su


velocidad de división varía con la especie (entre 20 y 60 minutos), el tiempo que tarde
en duplicarse es el tiempo de generación.

! El proceso es el siguiente:
Replicación ADN»Elongación celular»Formación del septo»Terminación del
septo»Separación celular.

b) División, crecimiento y muerte de las bacterias:

! Decimos que existe crecimiento bacteriano cuando hay un incremento en el


número y componentes celulares de la bacteria.Hay una serie de factores que
permiten un crecimiento óptimo de la bacteria: pH, temperatura, humedad, elementos
nutritivos...

! En un medio de cultivo suele darse el tipo de crecimiento que podemos


observar en esta gráfica:

1) Fase de latencia: La bacteria se está adaptando al medio. Si el medio es similar al


su medio natural la fase de latencia será muy breve, si en cambio el medio es
diferente la bacteria tendrá que adaptar su sistema metabólico al cambio llegando
incluso en algunos casos a morir.

2) Fase exponencial: Las bacterias se duplican a una gran velocidad, siempre


teniendo en cuenta la presencia de factores limitantes como oxígeno, temperatura,
concentración de sustancias...

3) Fase estacionaria: El número de bacterias que mueren es igual al número de


bacterias que se dividen.

4) Fase de declinación y muerte: Cada vez hay menos bacterias, ya que estas mueren
bien por autolisis o bien por falta de nutrientes. En esta fase se puede ver si hay
alguna bacteria superviviente sembrando en un medio rico en nutrientes.

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! La medición del crecimiento bacteriano se puede hacer determinando el


número o la masa, mediante un sistema de rejillas. Se pueden contar las colonias
viables pasando el cultivo a placas, y una vez allí contar el número de colonias.
Para medir la masa se suele determinar la masa seca, que es entre un 10 y un 20%
de la masa húmeda. Esto se hace dejando el medio de cultivo entre 90º y 100ºC una
noche. Otra forma de medir la masa es midiendo la turbidez en un fotómetro.

Los factores ambientales que regulan el crecimiento de las bacterias son:

A) Temperatura: Al aumentar la temperatura se favorecen las reacciones enzimáticas,


hasta un determinado punto en el que se desnaturalizan las proteínas. Por tanto
podemos decir que para un tipo de bacteria existen 3 temperaturas: La
temperatura mínima de crecimiento, la temperatura óptima de crecimiento y la
temperatura máxima de crecimiento. Según la temperatura, las bacterias se
pueden clasificar en:
A)1. Psicrófilas: Son las bacterias de ecosistemas fríos. Pueden ser
psicrotoletantes (bacterias de suelo, agua, frutas...) si por debajo de las 4ºC
no mueren. Si se les añade glicerol o dimetilsulfato se impide que se formen
cristales de hielo en estas bacterias, permitiendo su conservación hasta los
-196ºC.
A)2. Mesófilas: Son aquellas bacterias que se desarrollan en animales de
sangre caliente. Su temperatura óptima de desarrollo se encuentra entre los
28 y los 37ºC.
A)3. Termófilas: Son bacterias que habitan ecosistemas calientes. Su
temperatura óptima de desarrollo se encuentra entre los 55 y los 77ºC.
A)4. Hipertermófilas: Son aquellas bacterias que viven en ambientes
extremadamente calientes como los géiseres. Son bacterias ricas en ácidos
grasos y usan proteínas muy estables.

B) pH: Cada bacterias tiene un pH de crecimiento óptimo. Suele estar cercano a la


neutralidad.

C) Agua: Es indispensable para la vida. Si el agua entra en la bacteria se dice que el


balance de agua es positivo.

D) Oxígeno: Podemos encontrar diferentes necesidades de oxígeno según el tipo de


bacteria:
D)1. Aerobias: Requiere de la presencia de O2.
D)2. Anaerobias: Crecen en ausencia total de O2.
D)3. Facultativas: Pueden desarrollarse tanto en presencia como en ausencia
de O2.
D)4. Microaerófilas: Necesitan un 5% de CO2 para su crecimiento.

c) Esporulación:

! Cuando hay una falta de nutrientes en el medio puede ocurrir la muerte de la


bacteria o que esta forme esporas que le permitan mantenerse en ausencia de los
metabolitos que necesita para desarrollarse. Este último proceso recibe el nombre de
esporulación, y la realizan las bacterias bacilares gram positivas que habitan en el
suelo. [Ver página 17]

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Tema 7: Metabolismo y nutrición


bacteriana

a) Introducción:

! Para que las bacterias puedan llegar a realizar sus funciones vitales requieren
tanto de alimento como de energía.

! El metabolismo se divide en dos tipos principales de reacciones: Catabólicas o


de degradación y anabólicas o de síntesis. El producto final de las reacciones
catabólicas es energía y productos de desecho que deben ser expulsados de la célula.
La energía es empleada en procesos anabólicos para la biosíntesis de moléculas
grandes a partir de otras más pequeñas.

b) Los nutrientes:

! Hay dos clases de nutrientes: Macronutrientes y micronutrientes. Todos ellos se


deben encontrar disueltos en el medio líquido de la célula.

➡ Macronutrientes:

! La célula los necesita en grandes cantidades. Son el carbono, necesario para


formar glucosa; el nitrógeno, para formar aminoácidos, ácidos nucleicos...; el fósforo,
para formar ácidos nucleicos y fosfolípidos; el azufre, para formar algunos
aminoácidos como la cisteína y para formar vitaminas; el potasio, para activar
enzimas; el magnesio, para estabilizar membranas y ribosomas; el hierro...

! Las bacterias que obtienen el carbono de componentes orgánicos son


heterótrofas, si lo obtienen de componentes inorgánicos como el CO2 son autótrofas.

! Hay bacterias que usan nitrógeno de compuestos orgánicos como los


aminoácidos y otras que usan compuestos inorgánicos como el ClNH4.

! El resto de macronutrientes mencionados se suelen obtener en todos los tipos


de bacterias a partir de sales inorgánicas.

➡ Micronutrientes:

! Son necesarios en muy pequeñas cantidades. Se clasifican en:

๏ Oligoelementos: Necesarios para la vida de la bacteria. Ej. Cobalto, cobre,


cinc...
๏ Factores de crecimiento: Varían según el tipo de bacteria. Una bacteria que
sea prototrofa para un factor determinado quiere decir que puede crecer y
desarrollarse en su ausencia. Sin embargo, si una bacteria es auxótrofa
para un factor de crecimiento necesita que se le añada al medio para
poder desarrollarse. Ej. Aminoácidos, vitaminas, coenzimas...

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c) Condiciones fisicoquímicas:

! Para el desarrollo adecuado de las bacterias tienen que existir una serie de
condiciones fisicoquímicas adecuadas:

1) Concentración de iones de H2
2) Temperatura
3) Presión osmótica: Viene dada por la concentración de sales del medio.Las bacterias
capaces de soportar en medios muy ricos en sales se denominan halófitas.
4) Presencia de O2
5) Presencia de CO2
6) Humedad y desecación
7) Influencia de la luz y de las radiaciones

[Ver página 21]

d) Metabolismo:

1. Catabolismo

! Conjunto de procesos metabólicos que transforman los nutrientes en moléculas


sencillas asimilables y capaces de transformarse en energía útil para la bacteria.

! Se distinguen distintos tipos nutricionales según la fuente de energía utilizada:


las bacterias que utilizan la luz son fotótrofas y las que utilizan los procesos de
oxirreducción usando compuestos químicos son quimiótrofas.

! Las bacterias pueden utilizar un sustrato mineral ya que solo requieren


sustancias inorgánicas sencillas (litótrofas) o un sustrato orgánico ya que requieren
de hidrocarburos, lípidos, proteínas... (organótrofas). Las bacterias patógenas que
viven a expensas de la materia orgánica son quimioorganótrofas.

! Como ya hemos visto, las bacterias pueden ser autótrofas o heterótrofas


según puedan sintetizar carbono ellas mismas o necesiten incorporarlo a su dieta
respectivamente. Existe otro clase más: las bacterias hipótrofas que son aquellas
que cogen su fuente de carbono directamente de un hospedador ya que no tienen los
complejos enzimáticos necesarios para sintetizar carbono, ni a partir de compuestos
orgánicos ni a partir de compuestos inorgánicos.

! Según cual sea la última molécula aceptora de electrones en la cadena


respiratoria las bacterias pueden ser aerobias, si tienen O2 como último aceptor, o
anaerobias, en caso de que tenga otra molécula.

! El catabolismo de las bacterias que usan compuestos orgánicos está basado


en las siguientes etapas:
Digestión»Absorción»Preparación»Preparación»Oxidación

! Para que los nutrientes puedan entrar en las bacterias se fabrican exoenzimas
que se encargan de hidrolizar los nutrientes en moléculas más sencillas, y estas
entran por difusión activa o pasiva. Una vez dentro de la célula las endoenzimas
realizan procesos de oxidación para obtener energía de las moléculas sencillas.

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! Los procesos de oxidación-reducción de estas moléculas sencillas muchas


veces no requieren de oxígeno, sino que basta con el hidrógeno (H2) para transferir los
electrones de un donador a un aceptor. Estas reacciones son necesarias para la
producción de energía en forma de ATP.

! En el caso de las bacterias anaerobias, si el último aceptor de la cadena


respiratoria es una molécula orgánica se producirá una reacción de fermentación,
mientras que si la molécula es inorgánica se producirá respiración anaerobia.
!

2. Anabolismo

! Conjunto de procesos metabólicos que utilizan la energía producida en el


catabolismo para la síntesis de biomoléculas como polisacáridos, ácidos nucleicos,
proteínas...

! Otros productos finales que sintetizan algunas bacterias son toxinas,


exoenzimas, antibióticos, vitaminas, pigmentos...

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Tema 8: Genética bacteriana

a) Introducción:

! Cualquier organismo está determinado por su material genético y su interacción


con el medio ambiente que selecciona,activa, reprime o cambia el material genético.

! Las bacterias poseen un genotipo que transmiten por herencia y un fenotipo


que depende de las circunstancias que les rodean.Las bacterias sufren variaciones en
sus caracteres y son de dos tipos ; fenotípicas o adaptaciones y genotípicas
( mutaciones,fenómenos de transferencia, elementos transponibles, integrones).

! El estudio de la genética bacteriana, atendiendo a los dos aspectos anteriores,


permite entender mejor las funciones esenciales de su material genético y las
características que rigen su comportamiento, su capacidad de adaptación al medio
ambiente, la expresión de mecanismos de virulencia que les permite colonizar, invadir,
y dañar células eucariotas, y como consecuencia, el desarrollo de un gran espectro de
enfermedades clínicas.
!
! Existen varias teorías: El pleomorfismo defiende que los microorganismos
tienen una gran capacidad de variación tanto respecto a su aspecto morfológico como
a su función fisiológica, mientras que el monomorfismo defiende que presentan
constancia y especificidad de forma y función.

b) Variaciones Fenotípicas: Morfológicas y fisiológicas.

! Los conceptos principales que hay que tener en cuenta en cualquier variación
fenotípica son:

Se producen por la presión ambiental sobre las bacterias, pero no afecta al


genoma.
Son de alta frecuencia. Afectan a toda la población bacteriana sometida a la
modificación ambiental.
Son reversibles ; cuando cesa la causa,retornan al estado primitivo.
No son hereditarias, porque no se modifica el ADN.

Hay variaciones fenotípicas de varios tipos:

1. Morfológicas: Cambios en forma, tamaño, características tintoriales... Suceden en


presencia de ciertos productos químicos o antibacterianos. Ej. Bacilos cortos y móviles
se convierten en bacilos largos e inmóviles debido al agotamiento de nutrientes.

2. Cromógenas: Según a la temperatura a la que se incuben ciertas bacterias


producen o no un pigmento.

3. Enzimáticas ; Algunas bacterias producen enzimas en presencia de determinados


sustratos, por ejemplo, penicinilasa en presencia de penicilina.

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4. Patogénicas; Bacterias que producen toxinas según el ambiente en el que crecen,


así Corynebacterium sólo lo hace si dispone de hierro en el medio..

5. Sensibilidad a antibióticos; Hay bacterias que son sensibles en determinadas


condiciones pero no lo serán en otras.

c) Variaciones Genotípicas: Mutaciones.

! Las variaciones genotípicas no son por fenómenos ambientales, sino que


suceden de forma espontánea o por agentes mutágenos (físicos o químicos)
afectando a un único carácter. Este tipo de cambios son permanentes y hereditarios.
La variabilidad genética es interesante desde el punto de vista de que muchos de
estos cambios genéticos aportan resistencia a estas bacterias a ciertos antibióticos.

! Se dice que la bacteria mutante es aquella resultante de una variación


genética y que la bacteria salvaje es la bacteria original.

! Las mutaciones genéticas pueden provocar cambios morfológicos,


bioquímicos, patogénicos, mutantes letales, sensibilidad a fagos, bacteriomicinas y
antimicrobianos...

! Estas mutaciones pueden ser puntuales y suficientes para dar lugar,por


ejemplo, a una resistencia por el cambio en la transducción de un proteína.
Pueden ser mutaciones de segmentos del ADN o incluso mutaciones cromosómicas,
sustituciones de nucleótidos, y microinserciones, o por el contrario provocar
alteraciones en regiones más grandes (inserciones y delecciones). Un sólo cambio
de un nucleótido lleva a la fabricación de un proteína totalmente distinta, con lo que
cambios leves pueden conllevar importantes consecuencias.

Los agentes mutágenos se pueden clasificar en:

1. Físicos: Radiaciones cósmicas, rayos UVA, rayos X, rayos Y, radiactividad natural...


2. Químicos: Ácido nitroso, hidroxilamina, análogos de bases púricas y pirimidínicas...

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d) Trasferencia y recombianción genética:

! Una bacteria es capaz de adquirir ADN de otra bacteria o de un virus mediante


diferentes procesos: Transformación, transducción, transfección, conversión y
conjugación.

1. Transformación: Una bacteria coge ADN de otra bacteria, esto es algo raro que
suceda ya que se requiere que el ADN de ambas bacterias sea similar.

2. Transducción: Aquí intervienen los virus bacteriófagos, específico de cada grupo de


bacterias. [Ciclo lítico]

3. Transfección: Igual que la transducción, pero esta se realiza sintéticamente en el


laboratorio.

4. Conversión: El ADN lisogénico latente se puede integrar en el cromosoma


bacteriano, introduciendo nuevo caracteres.

5. Conjugación: El ADN pasa de una bacteria a otra por contacto directo, a través de
los pilis sexuales. Hay de varios tipos:

5.1. Transferencia cromosómica: El factor de transferencia o factor sexual (las


bacterias que lo poseen se denominan F+) es transferido de la bacteria
donante a la bacteria receptora.
5.2. Transferencia plasmídica: Tiene lugar cuando el cromosoma bacteriano está
pegado al factor F, transfiriéndose a la bacteria F-.
5.3. Conjugación: En ciertas bacterias el factor sexual se separa del ADN
bacteriano y se lleva uno o más genes que transfiere a la bacteria receptora.

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Tema 9: Lucha contra los


microorganismos

a) Conceptos clave:

! Esterilización: Proceso cuyo objetivo es la destrucción de cualquier forma


microbiana en una proporción inferior a 10-6 esporas.

! Desinfección: Mediante procesos químicos, eliminar formas bacterianas. Es


menos eficaz que la esterilización porque en este caso no se consiguen destruir las
esporas y no actúan frente a virus de alta toxicidad como el de la hepatitis B. Los
desinfectantes son los elementos utilizados a la hora de desinfectar.

! Asepsia: Métodos químicos similares a los utilizados en procesos de


desinfección, pero menos agresivos. Este tipo de métodos pueden aplicarse sobre
tejidos. El antiséptico es el elemento empleado para realizar la asepsia.

! Antimicrobianos: Sustancias químicas que a baja concentración inhiben o


destruyen a microorganismos.

! Higienización: Proceso que emplea sustancias químicas que controlan la


aparición de microorganismos.

! Conservantes: Sustancias que añadidas a alimentos o medicamentos impiden


la proliferación de microorganismos en los mismos.

b) La esterilización:

! La esterilización es la destrucción de toda forma microbiana y se puede hacer


mediante:

1. Agentes físicos:

1.1. Calor seco: [Ver practica 1]. Ya sea por flameado, incineración o usando un
horno Pasteur. Se pueden hacer diferentes programas: 180ºC durante 20
minutos, 175ºC durante 40 minutos o bien 160ºC durante 60 minutos.

1.2. Calor húmedo: Nos permite romper las proteínas microbianas,


obteniéndose una mayor eficacia a la hora de eliminar microorganismos que
aplicando el calor seco.

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1.2.1. Con vapor: Usando un autoclave a 121ºC durante 15-20


minutos. Como control se emplea un bacilo gram positivo (Bacillus
stearothermophylus) que tiene unas esporas muy resistentes.

1.2.2. En medio líquido: Puede ser bien por ebullición a 100ºC durante
30 minutos, pasteurización (usada para esterilizar la leche) a 55-75ºC
durante 30 minutos o por tindalización a 63-65ºC durante 30 minutos
para eliminar la forma negativa vegetativa de los microorganismos,
luego se pone a 37º para que las esporas pasen a sus formas
vegetativas y luego de nuevo a 63-65ºC durante 30 minutos (dos
veces).

1.3. Humedad: Cuando hay un exceso de humedad y la pared bacteriana se


ensancha pero sin llegar a la plasmoptisis o turgencia. En un medio
hipertónico la bacteria se arruga dando lugar a la plasmólisis o ruptura
celular. El Staphylococcus aureus es capaz de resistir ambientes de humedad.

1.4. Radiaciones:

1.4.1. Rayos infrarrojos: Desnaturalizan las proteínas de las bacterias.

1.4.2. Rayos ultravioleta (UVA): Al igual que las radiaciones solares son
capaces de desnaturalizar el ADN.

1.4.3. Radiaciones ionizantes: Se usan para esterilizar aquellos objetos


que no se pueden meter en un autoclave como las placas de Petri. El
control biológico que se usa en este caso es el Bacillus Pumillus, gram
positivo.

1.5. Mecánicos:

1.5.1. Filtración por membranas: Se una una membrana de poros de un


diámetro comprendido entre los 0,0005 y los 3 µm. Esta membrana
permite filtrar el líquido impidiendo el paso de microorganismos y por
tanto dejando el líquido filtrado estéril.

1.5.2. Ultrasonidos: Sirven para romper las bacterias y así obtener


antígenos para la creación de anticuerpos.

1.5.3. Cámara de flujo laminar: Permiten esterilizar salas completas,


una aplicación de las mismas es como estancia para personas
inmunodeprimidas.

2. Agentes químicos:

2.1. Óxido de etileno: Se aplica durante 4 o 6 horas entre 50-60ºC con


humedad controlada.

2.2. Formaldehído: Se usa para esterilizar ambientes, tóxico para seres


humanos.

2.3. Glutaraldehído: Se emplea para esterilizar material de plástico.

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c) Agentes desinfectantes y antisépticos. Mecanismo de Acción:

Podemos distinguir entre:

1. Compuestos orgánicos: Derivados argénticos (nitrato de plata), derivados


mercuriales, agua oxigenada, permanganato potásico, derivados clorados,
derivados yodados (Povidona Yodada “Betadine”)...
2. Compuestos inorgánicos: Alcoholes, fenoles, biguanidinas, detergentes aniónicos,
detergentes catiónicos, glicoles...

Se pueden clasificar de acuerdo a su mecanismo de acción:

· Agentes que dañan la membrana:

! Los solventes orgánicos (fenoles, alcoholes) y los desinfectantes


tensioactivos (detergentes) dañan la integridad estructural de la membrana (es
decir, la disposición ordenada de lípidos y proteínas), de modo que interfieren
con su función, ejerciendo un efecto neto de interferencia con procesos de
transporte y metabolismo energético y salida de pequeñas moléculas de la
célula.

1. Detergentes: Los detergentes sintéticos, al igual que los jabones, contienen una
porción hidrofóbica (normalmente una larga cadena lipófila) y una porción hidrófila
(un grupo polar), lo cual les permite formar micelas en solución acuosa, así como
formar capas que cubren y solubilizan moléculas hidrófobas. Según sea la porción
hidrófila, los detergentes se pueden clasificar en:

a. Catiónicos:

! Son los detergentes más potentes en cuanto a su actividad desinfectante,


siendo activos contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas.

! Los principales son las llamadas sales de amonio cuaternario, sobre todo
aquellas que van como cloruros o bromuros, como el cloruro de benzalconio.

! Mecanismo de acción: La porción hidrófoba penetra en las membranas,


mientras que el grupo polar catiónico se asocia con los fosfatos de los fosfolípidos,
provocando alteraciones en dichas membranas, reflejadas en la pérdida de su
semipermeabilidad, con salida de metabolitos de N y P desde el citosol. Es entonces
cuando el detergente puede entrar al interior celular, con un efecto secundario de
desnaturalización de proteínas. Su actividad se mejora a pH alcalino.

! Son rápidamente bactericidas a concentraciones muy bajas (del orden de una


parte por millón, 1 ppm), siempre que en el material a tratar no exista materia
orgánica.

! Usos, ventajas e inconvenientes: Tienen baja toxicidad, por lo que se pueden


emplear como desinfectantes y antisépticos de la piel. Se emplean igualmente en la
desinfección de material de industrias alimentarias.Su actividad se ve neutralizada por
jabones y fosfolípidos, precipitando en su presencia.

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b. Aniónicos:

! Pueden contener grupos carboxilo en su porción hidrofila, como jabones o


ácidos biliares, o puede contener grupos sulfato, como el sulfonato de alquilbenceno.

! Mecanismo de acción: Provocan una gran disrupción de membranas, con


efectos de lisis. Son activos sobre todo a pH ácido, preferentemente sobre bacterias
Gram-positivas, pero poco sobre Gram-negativas, ya que éstas quedan más
protegidas por la barrera del lipopolisacárido de la membrana externa.

! Usos: Cuando los detergentes aniónicos se combinan con ácidos, se logran


desinfectantes sanitarios muy potentes (debido al efecto sinérgico de ambos
componentes) y de rápida actuación (unos 30 segundos).

c. No iónicos:

! No tienen actividad antimicrobiana, pero algunos tienen empleo en otros


campos de la Microbiología: los ésteres del ácido oleico pueden adicionarse a
medios de cultivo para evitar la formación de grumos y favorecer el crecimiento
disperso de ciertas bacterias (como Mycobacterium tuberculosis).

2. Compuestos fenólicos: Son rápidamente bactericidas a bajas concentraciones,


causando:
Daños a membranas, con pérdida de constituyentes citoplásmicos;
Inactivación irreversible de oxidasas y deshidrogenasas de membrana;
Desnaturalización de proteínas.
Tienen baja solubilidad en agua, por lo que se emplean en fórmulas que incluyen
agentes emulsificadores (jabones) que, además, aumentan su actividad.

a. Fenol:

! El fenol, históricamente uno de los primeros desinfectantes en usarse, sólo se


emplea en la actualidad como patrón para ensayar el poder desinfectante de otros
compuestos.

! A partir del fenol se pueden lograr desinfectantes con mayor actividad


antibacteriana y con menor toxicidad sustituyendo hidrógenos del anillo bencénico
por radicales alquílicos o por halógenos.

b. Cresoles:

! Son los alquilfenoles. El radical alquílico puede estar en posición orto, meta o
para, dando respectivamente el ortocresol, el metacresol y el paracresol. Normalmente
se emplea la mezcla de los tres, denominada tricresol.

! Se obtienen por destilación del alquiltrán de carbón, y se emplean como


emulsiones de jabón verde. Se usan como desinfectantes de material de desecho
bacteriológico y como desinfectantes de la piel.

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c. Difenilos halogenados:

! El hexaclorofeno (hexacloro-orto-difenilmetano) es bacteriostático a bajas


concentraciones (sobre todo contra cocos Gram-positivos), incluso incorporado en
jabones, pasta de dientes y cosméticos.

! Algunas marcas comerciales incluían hace unos años este compuesto, hasta
que se comprobó que su absorción por la piel, sobre todo inflamada, puede causar
neurotoxicidad e incluso, toxicidad sistémica, por lo que en la actualidad ha dejado de
usarse.

d. Alquilésteres del parahidroxibenzoico:

! Actúan de forma similar a los alquilfenoles, pero no son tóxicos, debido a que al
ser ingeridos, se hidrolizan rápidamente, dando el inocuo parahidroxibenzoato. Se
emplean como conservantes de alimentos y de productos farmacéuticos.

e. Aceites esenciales de origen vegetal:

! Desde la antigüedad, y de modo empírico, se vienen usando algunos aceites


esenciales de plantas aromáticas como conservantes y antisépticos, ya que como se
ha podido comprobar, contienen varios compuestos fenólicos. Ej. El timol del tomillo o
el eugenol que se utiliza actualmente en odontología.

3. Alcoholes: Los alcoholes desorganizan las bicapas lipídicas penetrando en la


región hidrocarbonada de los lípidos. No afectan a las endosporas, por lo que no
son esterilizantes. Su acción desinfectante mejora conforme aumenta la longitud de
la cadena alifática de los alcoholes, hasta aquellos con 8 a 10 átomos de carbono
(C8-C10), ya que los alcoholes de cadenas más largas de C10 tienen una baja
solubilidad en agua. Ej. El etanol se usa en la desinfección cutánea y es más
efectivo en disoluciones acuosas que 100% puro, el isopropanol que es más
efectivo que el etanol pero algo más tóxico...

· Agentes desnaturalizantes de proteínas:

1. Ácidos y alcalis fuertes: Son activamente bactericidas, debido a sus grupos H+


y OH- disociados, respectivamente. En principio, su actividad es proporcional al
grado de disociación, pero algunos hidróxidos son más potentes de lo sugerido por
su mero grado de disociación, debido a la acción tóxica directa que puede ejercer el
catión metálico.

2. Ácidos orgánicos: Los ácidos orgánicos, que son poco disociables, ejercen su
efecto en cuanto moléculas intactas (sin disociar), que penetran a la célula. Ej.El
ácido benzoico y el ácido sórbico que se usan ampliamente como conservantes
alimentarios.

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· Agentes modificantes de grupos funcionales de proteínas y de


ácidos nucleicos:

! Esta amplia clase de agentes se caracteriza, en general, por alterar


grupos que forman parte de los centros activos de enzimas y otras proteínas;
y/o alterar grupos funcionales de ácidos nucleicos, componentes de pared y de
membrana.

1. Metales pesados: Las sales solubles de Hg, As, Ag, Cu, etc, "envenenan" la
actividad enzimática formando mercáptidos con los grupos -SH de la cisteína.
También interaccionan con -NH2, -COOH y radicales fosfato. Los más efectivos son
los derivados del mercurio (como el cloruro de mercurio) y de la plata bien sea en
forma de sales solubles (nitrato de plata), o en preparaciones coloidales en las que
los iones Ag+ se van liberando lentamente.

2. Agentes oxidantes: Los efectos de los agentes oxidantes que se tratan a


continuación son la inactivación de proteínas enzimáticas (convirtiendo los radicales
-SH en disulfuros -S-S-). Además, los más potentes también atacan radicales
amino, el grupo indol (presente en el triptófano), y la tirosina.

a. Halógenos: Son bactericidas muy útiles y muy potentes. El iodo no tiene


parangón como desinfectante de la piel, y el cloro no tiene igual en el
tratamiento de aguas.

b. Agua oxigenada: El peróxido de hidrógeno (H2O2), en solución al 3%, se usó en


otro tiempo como desinfectante, pero está actualmente en desuso, debido a que
algunas bacterias son resistentes, por la posesión de catalasas y peroxidasas.
Además, en desinfección de heridas abiertas su efecto es muy pobre, porque el
agua oxigenada es descompuesta por la catalasa tisular.

c. Permanganato potásico: Al 1%, se usa como antiséptico uretral.

d. Ácido peracético: Es un fuerte agente oxidante. En forma de vapor se usa en la


esterilización de cámaras de cría de animales libres de gérmenes.

3. Tinturas de colorantes básicos: Algunos colorantes derivados de la destilación


del alquitrán de carbón, sobre todo los trifenilmetanos y las acridinas, no sólo
tiñen las bacterias, sino que también actúan como antibacterianos, incluso a
pequeñas concentraciones.

4. Agentes alquilantes: Son agentes esterilizantes, activos tanto sobre células


vegetativas como sobre esporas, que ejercen su efecto letal por su acción alquilante
de proteínas y ácidos nucleicos. Ej. Formaldehído, glutaraldehído, óxido de etileno..

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Tema 10: Los antimicrobianos

a) Conceptos clave:

! Antibiótico (natural): Aquella sustancia sintetizada por un microorganismo y


es capaz de destruir a otros microorganismos. Ej. Pseudomonas produce eritromicina,
Penicinillium produce penicilina, Cephalosporium produce la cefalosporina...

! Quimioterápico (sintético): Tiene las misma características que un antibiótico,


pero este es de origen sintético.

! Antimicrobiano (semisintético): Sustancia inicialmente creada por un


microorganismo, pero que ha sido mejorada artificialmente en el laboratorio para ser
más eficaz a la hora de destruir microorganismos. Ej. Antivíricos, antiprotozoos,
antihelmínticos...

Sus principales características son:

Eficaces a baja concentración.


Mínima toxicidad
Son específicos
Elevada potencia biológica

Se pueden clasificar por:

➡Su efecto
i. Bactericidas: Mata a los organismos de forma irreversible.
ii.Bacteriostático: Solo paralizan el crecimiento y correcto desarrollo de
los microorganismos

➡Su espectro
i. Amplio espectro, eliminan una amplia variedad de bacterias.
ii. Espectro intermedio, entre amplio y reducido espectro.
iii.Espectro reducido, como algunos que solo atacan a micobacterias.

➡Mecanismo de acción
1.Inhiben la síntesis de la pared bacteriana.
2.Alteran la permeabilidad de la membrana celular.
3.Inhiben la síntesis de proteínas.
4.Bloquean la síntesis de ácidos nucleicos.
5.Interfieren en las vías metabólicas.
6.Inhiben los ácidos micólicos.
!
! [Ver páginas 30-33 y memoria de práctica 3, antibiograma]

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b) Valoración a la sensibilidad a los antimicrobianos:

! Se pueden utilizar diferentes técnicas en laboratorio para detectar la


sensibilidad de un microorganismo a un antimicrobiano determinado. Principalmente
se pueden subdividir en dos grandes clases, pruebas de difusión y pruebas de
dilución. Ambas siguen normas que previamente se encuentran estandarizadas.

· Técnicas de difusión:

1- Método del antimicrobiano disco-placa: A aquella concentración de antibiótico


que existe en la interfase entre bacterias en crecimiento y bacterias inhibidas se
conoce como conoce como concentración mínima inhibitoria (CMI).

! Los materiales empleados para realizar esta técnica son tubos de suero
fisiológico, escobillones estériles y el medio de cultivo que suele ser agar Mueller-
Hinton suplementado con calcio y magnesio, discos de antibióticos que se conservan
a 4ºC y, por último.el inóculo que debe tener una concentración de 0,5 Mc Farland
(uFC/mL) por lo que son poco turbios.

! Para la mayoría de microorganismos cuando el diámetro de inhibición es


superior a 30-35 mm diremos que estos son sensibles al antimicrobiano, mientras que
si no hay halo de inhibición de crecimiento diremos que son resistentes.

! La técnica de Kirby-buer es la más básica, y una de las más sencillas de


implementar. Se usa para obtener un resultado cualitativo, es decir, nos informa de
si una bacteria es resistente o sensible a un determinado antimicrobiano. Consiste en
sembrar en una placa diferentes microorganismos y después de la siembra añadir un
papel de filtro en forma de disco impregnado con el antibiótico a evaluar. Si las
bacterias no pueden crecer cerca de ese disco se dice que son sensibles al mismo,
en cambio si pueden crecer se dice que son resistentes al antimicrobiano.

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2- E-test:

! Consiste en una tira de


plástico no poroso de 6 x 5 cm que
incorpora un gradiente
antimicrobiano predefinido
equivalente a 15 diluciones.

! Nos da una información más


exacta que usando el método disco-
placa, ya que nos da la
concentración mas o menos precisa
necesaria para poder matar al
microorganismo. La zona de
inhibición suele tener forma de
elipse.

· Técnicas de dilución:

! Se usan en la mayoría de los estudios de susceptibilidad para los


antimicrobianos. Nos dan un resultado cuantitativo, dándonos tanto la CIM
como la concentración mínima bactericida (CMB) o concentración necesaria
para matar por completo a las bacterias. Se pueden realizar tanto en medio
líquido como en medio sólido.

1- Macrodilución en caldo: Es muy difícil de llevar a cabo. La CMI se puede


determinar a simple vista, mientras que la CMB se puede determinar realizando un
nuevo subcultivo en un medio sin antimicrobianos, si la bacteria no crece en el nuevo
medio quiere decir que la cantidad de antimicrobianos del cultivo inicial fue necesaria
para matarlas.

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2- Método de microdilución: Las placas de microdilución tienen una serie de pocillos


con diferentes concentraciones de antimicrobianos preparadas en el laboratorio o
comprados. También pueden usarse placas de microtiter. El sistema puede ser
semiautomático en el caso de que la inoculación del antimicrobiano la realice una
máquina. Las placas tienen 96 pocillos y se pueden estudiar en ellas 8
microorganismos y hacer 11 disoluciones con diferentes concentraciones de
antimicrobiano para cada uno de ellos.

3- Dilución en agar: Se incorpora el antimicrobiano en el medio de cultivo de agar,


una vez que el mismo haya sido esterilizado , al bajar a los 55ºC. Las placas se
inoculan con el microorganismo en estudio usando un replicador y luego incubadas
por 16 a 18 horas. Después de la incubación, se examina si el organismo crece o no
en cada una de las placas, con lo cual se determina la concentración inhibitoria
mínima (CIM) para el antibiótico.

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c) Métodos especiales para estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos:

1. Capacidad bactericida:

! La concentración mínima bactericida CMB es determinar la concentración


mínima de antimicrobiano necesario para matar a un tipo de bacteria. Por lo general
CMB y CMI suelen ser similares, si esto no es así puede ser por tres motivos:

a. El fenómeno paradójico consiste en que hay un mayor número de bacterias


supervivientes en CMB que en CMI.
b. El fenómeno de tolerancia, el antimicrobiano necesita concentraciones más
elevadas para matar a la bacteria.
c. El fenómeno de persistencia, en el que hay una pequeña parte de la población
que resiste la presencia del antimicrobiano.

! Para realizar la curva de letalidad o muerte se cuentan en intervalos de


tiempo de unas 2 horas el número de colonias que hay en diferentes concentraciones
de antimicrobiano. Se utiliza en la investigación de nuevos antimicrobianos.

! Actividad bactericida del suero [NO ENTRA],Es uno de los pocos métodos
de sensibilidad "in vitro" que valora las interrelaciones existentes ente el
antimicrobiano, el microorganismo y el paciente. Permite estudiar la actividad
bactericida de un agente antimicrobiano en presencia de suero y frente al
microorganismo responsable del proceso.

2. Actividad combinada de antimicrobianos:

! La combinación de antimicrobianos se utiliza principalmente con pacientes que


sufren infecciones graves y que pueden llegar a desarrollar una septicemia. También
se utiliza de forma menos frecuente cuando un microorganismo es resistente a un
antimicrobiano pero se muestra sensible en asociación con otro. En los dos casos, lo
que se consigue es disminuir la probabilidad de aparición de subpoblaciones que sean
resistentes a todos los antimicrobianos administrados.

! Usar dos antimicrobianos simultáneamente estos pueden interaccionar y


producir diferentes efectos causados por su asociación:

- Indiferencia: No interfieren.
- Adición: Se suman las actividades de los dos antimicrobianos.
- Sinergismo: Un mayor rendimiento incluso que en el caso de la adición.
- Antagonismo: Hay una menos actividad que en el caso de que los
microorganismos actuaran por separado.

! Para combinar dos antimicrobianos se usan técnicas de tablero (tubos con


caldo, disolución en agar, microdisolución automatizada...), la técnica de la curva de
letalidad o el método de difusión.

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3. Detección de mecanismos de resistencia:

! Las ß-lactamasas son enzimas producidas por microorganismos capaces de


hidrolizar el enlace amida del anillo ß-lactámico de las penicilinas, cefalosporinas y
otros antibióticos ß-lactámicos dando lugar a compuestos sin actividad antibacteriana.

! En ocasiones, es necesario conocer, incluso antes del resultado de las pruebas


de sensibilidad, si un aislamiento produce este tipo de enzimas. Para ello, se han
desarrollado diferentes métodos rápidos de detección de ß-lactamasas que, con una
información preliminar, contribuyen a una correcta elección del antimicrobiano. Los
más difundidos son:

a) El método acidimétrico que detecta ácido peniciloico después de la hidrólisis de la


penicilina y su presencia se pone de manifiesto mediante un indicador de pH.

b) El método yodométrico que utiliza yodo-yoduro potásico que reacciona con el


ácido peniciloico, impidiendo que se forme el complejo iodo-almidón de intenso
color azul.

c) El método mas difundido, el cromogénico, que detecta la presencia de ß-


lactamasa al hidrolizarse una cefalosporina cromogénica (nitrocefín o PADAC). El
color inicial del nitrocefín no hidrolizado, amarillo-naranja, cambia al rojo intenso al
hidrolizarse. Existen discos y tiras comerciales con nitrocefín que permiten en pocos
segundos demostrar la producción de ß-lactamasa. En todos los casos deben
utilizarse cepas control.

4. Farmacocinética:

! Hasta hace pocos años, la dosificación de los antimicrobianos se basaba sobre


todo en parámetros farmacocinéticos, y las dosis se administraban para mantener el
mayor tiempo posible las concentraciones del antimicrobiano por encima de la óptima
e impedir que los microorganismos recuperaran el crecimiento. Gracias a los
parámetros farmacocinéticos podemos clasificar a los antibióticos en tiempo-
dependientes y en concentración-dependientes.

! Al mismo tiempo que las primeras sustancias antimicrobianas empezaban a


aplicarse en la terapéutica y en estudios en laboratorio, algunos investigadores ya
notaron que existía un visible retraso en el crecimiento de los microorganismos que
habían sido expuestos a algunos antibióticos durante cortos espacios de tiempo. Sin
embargo, no fue hasta los años 70 cuando estas observaciones y estudios
preliminares fueron aplicados de manera sistemática al estudio de los antimicrobianos.
Desde entonces se ha tratado de estandarizar las técnicas empleadas tanto "in vitro"
como "in vivo" y a definirse de una forma aceptable el verdadero significado de este
efecto.

! Mc Donald definió el efecto postantibiótico o EPA como la supresión de


crecimiento bacteriano que persiste tras una limitada exposición de los
microorganismos a un antimicrobiano. Es tal vez la definición más aceptada, ya que
enfatiza el hecho de que no se debe a la acción de antimicrobiano residual, sino a una
previa exposición a este. Es frecuente en bacilos gram negativos, (aunque inexistente
en ß-lactámicos) en donde el fármaco se concentra y permanece dentro del
microorganismo.

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Tema 11: Ecología microbiana

a) Introducción:

! En cualquier ambiente van a existir muchos tipos diferentes de


microorganismos, cuyas características están influenciadas por ese ambiente. El
microorganismo que mejor se adapte será el que sobreviva. Un cambio de condiciones
implicaría un cambio en los microorganismos del hábitat.

! La adaptación evolutiva se da por cambios en el ADN del microorganismo,


creando mutantes resistentes a las situaciones adversas y adaptaciones fisiológicas
como la pérdida de flagelos a altas temperaturas.

! La ecología microbiana se encarga de estudiar la biodiversidad y la actividad


de los microorganismos, ya que estos son de gran importancia debido a que realizan
tareas como la descomposición de residuos, nos dan información acerca de la calidad
del aire y de las aguas, son indicadores de la calidad ambiental...

El sistema microbiano se compone de:

Ecosistema > Comunidad > Gremio > Población

! Ecosistema: Conjunto de comunidades de micro y macroorganismos que


coexisten en un ambiente. Tiene una serie de características determinadas como el
tamaño del hábitat, suministro de alimento...

! Comunidad: Conjunto integrado de poblaciones microbianas que interaccionan


entre ellas y coexisten en un espacio determinado (hábitat).

! Gremio: Agrupación de poblaciones que utilizan los mismos recursos.

! Población: Conjunto de individuos de una misma especie de microorganismo.

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b) Asociaciones microbianas:

! Las asociaciones microbianas las podemos clasificar según como sean de


beneficiosas para los dos organismos:

1. Indiferentes: Neutralismo.
2. Benéficas: Mutualismo.
3. Perjudiciales: Antagonismo, competencia, parasitismo, depredación.

! Neutralismo: Dos poblaciones conviven sin afectarse entre ellas.

! Mutualismo: Los dos organismos se benefician de su relación, pasa a llamarse


! sintrofismo en el caso de que uno produzca lo que necesite el otro. Ej. La flora
! intestinal que forma parte de la flora microbiana normal impide que se
! desarrollen microorganismos patógenos.
! !

! Comensalismo: Uno se beneficia y el otro no sufre ninguna afectación.

! Antagonismo: Un microorganismo afecta negativamente a otro. Ej. Penicilina.

! Competencia: Sobrevive el que mejor se adapte al medio.

! Parasitismo: Un microorganismo vive a expensas del otro.

! Depredación: Muerte e ingestión de microorganismos por otra especie.

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Tema 12: Aplicación de los microorganismos (I):

Bacterias Gram positivas

a) Cocos Gram positivos:

Podemos encontrar los siguientes géneros:

1. Micrococcus: Las bacterias pertenecientes a este género se encuentran presentes


en la flora normal humana: Piel, intestino... Tienen una disposición en racimos o en
tétradas. Son Glu -, Catalasa + y movilidad -.

2. Staphylococcus (+): Las bacterias de este género son las más representativas de
los cocos gram positivos. Se agrupan en racimos o en pares (diplococos). Son Glu +
por lo que producen ácido a partir de glucosa, Catalasa + esta prueba permite
diferenciarlos del Streptococcus y de algunos otros géneros de cocos gram positivos
y movilidad -. Los Staphylococcus son parásitos habituales de los humanos y otros
animales que pueden causar infecciones graves.

a. Staphylococcus aureus, una forma pigmentada amarilla que está asociada


corrientemente a situaciones patogénicas, incluyendo granos y forúnculos,
neumonía, osteomielitis, meningitis y artritis.

b. Staphylococcus epidermis, forma no pigmentada y no patógena, que vive en la


piel y en membranas mucosas.

c. Staphylococcus saprophyticus, posee la enzima ureasa y es capaz de adherirse


a las células epiteliales del tracto urogenital. Es resistente a la novobiocina.

3. Planococcus: De todos los cocos gram positivos son los únicos que tienen
capacidad móvil. Se disponen en pares (diplococos) o en tétradas. Son Glu +,
Catalasa + y movilidad +.

4. Deinococcus: Son capaces de soportar grandes cantidades de radioactividad. Se


disponen en pares o tétradas. Son Glu -, Catalasa - y movilidad -.

5. Peptococcus: Se caracterizan por ser anaerobios. Se disponen en racimos y en


parejas. Pueden ser Glu + o Glu - dependiendo de la especie de la que estemos
hablando.

6. Sarcina: Se encuentran en el suelo, barro, heces... Tienen una disposición especial


en paquetes de 8 o más células. Son Glu +.

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b) Bacterias del ácido láctico:

Podemos destacar los siguientes géneros:

1. Streptococcus (+):

! El género Streptococcus está formado por bacterias esféricas u ovoides que


crecen en pares o cadenas de longitud variable. La mayoría son anaerobios
facultativos, existiendo algunas especies anaerobios obligados. Son Gram positivos,
no formadores de esporos, catalasa negativos e inmóviles, y tienen complejos y
variables requerimientos nutricionales. La infección estreptocócica es una de las
más frecuentes, siendo algunos de los cuadros más importantes relacionados con el
género: amigdalitis aguda, otitis media, sinusitis, neumonía, meningitis, infección del
tracto urinario, infección abdominal o cutánea, etc.

! Cuando los estreptococos son cultivados en agar sangre se puede observar,


además de la morfología macroscópica característica de cada cepa, la presencia de
un halo transparente alrededor de la colonia donde los glóbulos rojos han sido
completamente lisados. Este patrón es designado hemólisis de tipo beta y es de
considerable importancia ya que la exhibe Streptococcus pyogenes y muchos otros
Streptococcus patógenos humanos. Un segundo grupo de microorganismos, produce
hemólisis parcial o hemólisis alfa, observándose como un halo verdoso alrededor
de la colonia; perteneciendo a este grupo S. pneumoniae así como otros
Streptococcus que habitan el tracto respiratorio superior y gastrointestinal del hombre.
Finalmente, el término hemólisis gamma se utiliza para designar aquellas especies
que no producen hemólisis, aunque el término estreptococo no hemolítico es
preferible. Un ejemplo de este último tipo de hemólisis es S. bovis.

2. Lactococcus:

! Las bacterias de este género son típicamente esféricas u ovoides, de 0,5 a 1,2
μm por 0,5 a 1,5 μm, y se agrupan en pares o en cadenas cortas. Son no formadoras
de esporas y no mótiles. Lactococcus difiere de otras bacterias ácido lácticas por su
tolerancia al pH, sal y temperatura de crecimiento. Lactococcus se emplea en la
industria láctea en la manufactura de fermentados como quesos o yogures.

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3. Leuconostoc:

! Leuconostoc es un género de bacterias del ácido láctico Gram-positivas de la


familia Leuconostocaceae. Las especies de Leuconostoc tienen generalmente forma
de cocoide ovoide y a menudo forman cadenas. Son resistentes intrínsicamente a la
vancomicina y catalasa-negativos (lo cual los distingue de Staphylococcus). Son
heterofermentativos, capaces de producir dextrán a partir de la sacarosa.

! Algunas especies son también capaces de producir infecciones a los seres


humanos. Debido a que estas enfermedades son raras, los kits de indentificación
comerciales estándar a menudo no identifican estos organismos.

4. Enterococcus:

! Enterococcus es un género de bacterias del ácido láctico del división


Firmicutes. Los enterococos son coco Gram-positivos que se presentan en parejas
(diplococos), siendo difícil distinguirlos de Streptococcus sólo en base a sus
características físicas. Dos de las especies son comensales en el intestino humano:
E.faecalis y E. faecium. El enterococo es un organismo facultativo anaerobio, esto es,
prefiere usar oxígeno, aunque sobrevive bien en su ausencia. Típicamente exhiben
gamma-hemolisis en agar sangre de cordero.

5. Lactobacillus (+):

! Es un género de bacterias Gram positivas anaerobias, denominadas así debido


a que la mayoría de sus miembros convierte lactosa y otros monosacáridos en ácido
láctico. Normalmente son benignas e incluso necesarias, habitan en el cuerpo humano
y en el de otros animales, por ejemplo, están presentes en el tracto gastrointestinal y
en la vagina. Muchas especies son importantes en la descomposición de material
vegetal.

! La producción de ácido láctico hace que su ambiente sea ácido, lo cual


inhibe el crecimiento de bacterias dañinas. Algunas especies de lactobacillus son
usadas industrialmente para la producción de yogur y otros alimentos fermentados.
Algunas bebidas de yogur contienen Lactobacillus como suplemento dietético.

! Muchos Lactobacillus son los únicos seres vivos que no requieren hierro para
vivir y tienen una tolerancia extremadamente alta al peróxido de hidrógeno.

! Destacan L.Lactis, L.acidophilus y L.delbrueckii, siendo los tres de


metabolismos homofermentativo.

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c) Familia Bacillaceae:

! Las características de esta familia son que son capaces de producir


endosporas, pueden tener o no cápsula según la especie, cuando son móviles
siempre son peritricos, pueden ser aerobios, anaerobios o anaerobios facultativos.

Dentro de esta familia podemos encontrar los siguientes géneros:

1. Bacillus (+):

! Son bacilos de entre 1 y 5 µm de longitud por 1-2 µm de ancho. Son inmóviles


generalmente, aunque a veces los hay móviles (peritricos). Son gram positivos aunque
en algunas fases de su desarrollo son gram negativos. Son productores de esporas no
deformantes. Unas veces anaerobios y otras anaerobios facultativos.

! 1.1 B. Antracis (Carbunco): Fue aislado por Koch en 1877. Son bacilos rectos
! con extremos !cortados en ángulo recto. En las muestras se encuentran
! aislados, en parejas ! o en cadenas cortas con cápsula. En medio de cultivo se
! encuentra con forma !de caña de bambú, inmóviles, con esporulado central o
! subterminal no deformante. Propiedades biológicas: Su temperatura de
! crecimiento se sitúa ! entre los 12 y los 42ºC, siendo su temperatura óptima de
! desarrollo a los 37ºC. Crece fácilmente en medios comunes como el agar
! común (crece en colonias con forma de cabeza de medusa) o en agar sangre
! (es no hemolítica). Se identifican por capsulación y esporulación de género y
! especie.

! La estructura antigénica del B.Antracis consta de un antígeno capsular, que


! es una cadena polipeptídica con 3 capas (interna, media y externa), mediada
! por un plásmido, un antígeno polisacárido, con dos fracciones: D-galactosa y
! un compuesto de naturaleza química compleja, y la exotoxina, que consta de
! un factor edenatoso, antígeno protector y fecto letal todos mediados por un
! plásmido sensible a la temperatura. Estos 3 componentes miden la virulencia
! del B.Antracis.

! 1.2. B. Anthracoides: Son móviles, sin cápsula y ß-hemolíticos. Destacan B.


! cereus, B.subtilis, B.stearothermophilus y B. Polymyxa.

Forma Cápsula Movilidad Hemólisis Lisis por


fagos

B.Antracis Cuadrada Si No Gamma Si

B.Anthracoides Ovoide No Si Beta No

2. Clostridium (+):

! Clostridium es un género de bacterias anaerobias, bacilos grampositivas,


parásitas y saprófitas algunas de ellas, que esporulan y son móviles, en general por
intermedio de flagelos peritricos. Toman la forma de fósforo, palillo de tambor o huso
de hilar.

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2.1. C.tetani: Móviles con flagelación perítrica, con esporas ovales terminales y
deformantes. Produce la enfermedad del tétanos.

2.2. C.botulinum: Móviles con flagelación perítrica, tienen 7 tipos antigénicos


diferentes. Produce la enfermedad del botulismo y se emplea en la producción de
Botox.

2.3. C.perfringens: Inmóvil y formadora de esporas. Causa enfermedades como la


enteritis necrótica o la gangrena gaseosa.

3. Sporolactobacillus

4. Desulfotobacillus

5. Sporosarcina

c) Género Corynebacterium:

! A este género pertenecen bacilos con las siguientes características: extremos


redondeados, no esporulados, débilmente gram positivos (NAAR), poseen
granulaciones de polimetafosfato, tienen tendencia a la ramificación, tienen afinidad
por micobacterias y no-cardias: Ácidos micólicos, diaminopimélicos, arabinosa y
galactosa. Anaerobios facultativos, aunque prefieren la aerobiosis. Son catalasa
positivos.

! Dentro de este género hay que destacar a C. diphteriae cuyas bacterias son
inmóviles, no capsuladas, no esporuladas, con granulaciones metacromáticas, son
pleomórficos con extremos en forma de maza, se agrupan en empalizada. Pueden ser
aerobio o anaerobio facultativos, crecen bien en medios ordinarios aunque prefieren
medios con suero o telurito (como agar sangre, agar cisteína telurito, medio de
Loëffler, medio de pai...), catalasa positivo, nitratos positiva, ureasa negativa,
fermentación de glucosa y maltosa positiva, son resistentes a la desecación y
congelación, sensibles a la temperatura y desinfectantes. Para detectarlo mediante
pruebas de toxicidad “in vitro” se emplea el test de Elik e “in vivo” el test de cobayo.

d) Orden Actinomycetales:

! Es un orden de las Actinobacteria. Son muy diversos, se clasifican en una serie


de subdivisiones y muchas muestras están todavía sin clasificar.

! Las Actinomycetales son bacterias Gram-positivas. Sin embargo, varias


especies tienen complejas paredes celulares que hacen la tinción de Gram
inadecuada; por ejemplo, las Mycobacteriaceae. Varias Actinomycetales son
patógenos para los seres humanos o los animales, plantas u otras células. El
patógeno de los humanos más conocido es Mycobacterium tuberculosis.

Algunas especies se utilizan en la industria farmacéutica y en investigación debido a


sus propiedades. Las bacterias de la familia Streptomycetaceae tienen una singular
morfología y ciclo celular y producen una gran variedad de antibióticos.
! Streptomyces es el género más extenso de actinobacterias. Se encuentran
predominantemente en suelos y en la vegetación descompuesta y la mayoría produce
esporas. Se distinguen por el olor a «tierra húmeda» que desprenden.

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Tema 13: Aplicación de los microorganismos (II):

Bacterias Gram negativas

a) Enterobacterias:

! Son una familia de bacterias Gram negativas que contiene más de 41 géneros
y más de 100 especies que pueden tener morfología de bacilos o cocos.

! Este grupo de organismos incluye a varios que causan infecciones primarias


del tracto gastrointestinal humano. Por tanto, se les refiere como entéricos (sin
importar si causan o no enfermedades intestinales).

! Algunas especies pueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuáticos.


Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes comunes, incluido el cloro. Con
frecuencia se encuentran especies de Enterobacteriaceae en la bio-industria: para la
fermentación de quesos y productos lácteos, alcoholes, tratamientos médicos,
producción de toxinas en el uso de cosméticos, fabricación de agentes antivirales de la
industria farmacéutica, etc.

Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y otros


pleomórficos.
No son exigentes, son de fácil cultivo.
Son oxidasa negativo, es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
Son capaces de reducir nitrato en nitrito, nitrato positivas.
Son aeróbios o anaeróbico facultativos.
Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la
producción de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia
gama de substratos en condiciones aeróbicas.
Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse (móviles),
aunque algunos géneros no son móviles.
Es frecuente la presencia de plásmidos, trasposomas y fagos.

FAMILIAS Oxidasa Respiración Movilidad

Enterobacteriaceae - Anaeróbicos Variable


facultativos /
Aeróbicos

Vibrionaceae + Anaeróbicos Si
facultativos

Pseudomonadaceae + Aeróbicos Si

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! Los antígenos se sitúan en la pared externa de la membrana celular a nivel de


polisacárido, con unas cadenas externas de oligosacárido que determinarán la
especificidad y con una fracción interna llamada lípido A que es la endotoxina.

! Las enterobacterias poseen 4 grupos de antígenos que se han usado para su


clasificación: 1) flagelares “H” que son termolábiles; 2) capsulares “K” de naturaleza
polisacárida, 3) somáticos “O”, durante una infección se generan anticuerpos
dirigidos mayormente contra el antígeno somático “O” y 4) en fimbrias “F”.

! Las enterobacterias son importantes debido a que son de fácil manejo en el


laboratorio, se pueden manipular genéticamente, es sencillo estudiar sus reacciones
bioquímicas e incluso pueden ayudar a potabilizar el agua.

! Como se ha dicho antes, dentro de esta familia hay unos 41 géneros de


bacterias los cuales pueden clasificarse en fermentadores lentos (citrobacter,
serratia, yersinia), rápidos (escherichia, enterobacter, klebsiella) y no fermentadores
(salmonella, shigella, proteus).

! Se define biotipo como aquella variación bioquímica que tiene lugar dentro de
una misma especie, mientras que un serotipo es una clasificación de un
microorganismo infeccioso según los antígenos que presentan en su superficie celular.

! En biología molecular, el término polimorfismos en la longitud de los


fragmentos de restricción o RFLP (del inglés Restriction Fragment Length
Polymorphism) se refiere a secuencias específicas de nucleótidos en el ADN que son
reconocidas y cortadas por las enzimas de restricción (también llamadas
endonucleasas de restricción) y que varían entre individuos. Las secuencias de
restricción presentan usualmente patrones de distancia, longitud y disposición
diferentes en el ADN de diferentes individuos de una población, por lo que se dice que
la población es polimórfica para estos fragmentos de restricción.

! Resultan patógenos para el ser humano algunos serotipos de E.Coli, Shigella,


Salmonella, Yersinia. Los factores que determinan su virulencia son sus toxinas, la
presencia de adhesinas, de antígeno somático capsular, genes de virulencia,
antígenos O-K, sideróforos... También hay algunos serotipos que son oportunistas
que se aprovechan de un huésped inmunodeprimido para producir una enfermedad
como Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Serratia.

[Aislamiento, identificación y tipificación]

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b) Familia Vibrionaceae:

! Es una familia de Proteobacteria que se incluye en su propio orden. Viven en


agua dulce o salina y varias especies son patogénicas, incluyendo la especie tipo
Vibrio cholerae, que es el agente responsable del cólera. Además, la mayoría de las
bacterias bioluminiscentes pertenecen a esta familia y típicamente se encuentran
como simbiontes de animales que habitan las profundidades.
Las vibrionaceae son organismos Gram-negativos anaerobios facultativos capaces de
fermentación. Contienen oxidasa y presentan uno o más flagelos, que son
generalmente polares.

! Podemos dividir a los géneros de esta familia en dos grandes grupos:

1. Bacterias luminiscentes: Son bioluminiscentes y por tanto tienen la capacidad de


emitir luz.

a. Lucibacterium
b. Phohobacterium

2. Bacterias no luminiscentes: No tienen capacidades bioluminiscentes.

a. Plesiomonas: Suelen ser microorganismos acuáticos, gram negativos,


fermentadores y oxidasa positivos. Fermenta flagelos lototróficos e inositol. Son
resistentes a las penilinas pero sensibles a la mezcla de penicilinas con ß-
lactamasas (cefalosporinas).

b. Aeromonas: Se pueden encontrar en la interfase entre agua salada y agua


dulce, aunque se les considera de agua dulce. Actúan como patógenos de
animales de sangre fría como ranas y serpientes. También pueden infectar al ser
humano si heridas se exponen a tierra o agua contaminadas. Poseen un flagelo
polar, son bacilos gram negativos, fermentadores y oxidasa positivos. Crecen en
medios comunes. Son sensibles a tetraciclinas y resistentes a penicilinas y a ß-
lactámicos.

c. Vibrios:

! Las especies de género Vibrio son invariablemente bacilos Gram negativos, de


entre 2 y 3 µm de largo, de forma algo curva, dotados de un único flagelo polar que les
permite una elevada movilidad. Soportan bien los medios alcalinos, así como las
concentraciones salinas. No forman esporas, son oxidasa positiva, y anaerobios
facultativos. Es posible encontrarlas unidas en sus orillas, por lo que forman
agregados espirales o en forma de S.
!
! Varias de las especies de Vibrio son patógenas, provocando enfermedades del
tracto digestivo, en especial V. cholerae, el agente que provoca el cólera, V.
parahaemolyticus causante de diarrea inflamatoria autolimitada y V. vulnificus, que
se transmite a través de la ingesta de marisco.

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Tema 14: Biología de los virus

a) Introducción:

! En biología, un virus (del latín virus, «toxina» o «veneno») es una entidad


infecciosa microscópica que sólo puede multiplicarse dentro de las células de otros
organismos. Los virus infectan todos los tipos de organismos, desde animales y
plantas, hasta bacterias y arqueas. Los virus son demasiado pequeños para poder ser
observados con la ayuda de un microscopio electrónico, por lo que se dice que son
submicroscópicos. Hay virus grandes (200-300 nm), virus medianos (100 nm) y virus
pequeños (20 nm).

! El primer virus conocido, el virus del mosaico del tabaco, el cual Ivanowsky
en 1892 descubrió una sustancia capaz de atravesar filtros bacterianos.

b) Elementos estructurales de un virus:

! Una partícula vírica completa, conocida como virión, consiste en un ácido


nucleico, que puede ser ADN o ARN pero nunca los dos al mismo tiempo, rodeado
por una capa de protección proteica llamada cápside. Las cápsides están compuestas
de subunidades proteicas idénticas llamadas capsómeros. Los virus pueden o no
tener un «envoltorio lipídico» derivado de la membrana celular del huésped. La
cápside está formada por proteínas codificadas por el genoma vírico, y su forma es la
base de la distinción morfológica que puede ser icosaédrica, helicoidal, mixta o
completa.

! Las subunidades proteicas codificadas por los virus se autoensamblan para


formar una cápside, generalmente necesitando la presencia del genoma viral. Sin
embargo, los virus complejos codifican proteínas que contribuyen a la construcción de
su cápside. Las proteínas asociadas con los ácidos nucleicos son conocidas como
nucleoproteínas, y la asociación de proteínas de la cápside vírica con ácidos nucleicos
víricos recibe el nombre de nucleocápside.

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En un virus podemos distinguir dos tipos de proteínas:

1. Proteínas de superficie: Se encuentran en la cápside o en la envoltura lipídica y


tienen funciones tan importantes como la de proteger al ácido nucleico frente a
influencias adversas, tienen afinidad por los receptores a la superficie de las células
susceptibles al ataque del virus, dotan al virus de capacidad antigénica y nos
permiten clasificar los diferentes tipos de virus.

2. Proteínas internas:
a. Estructurales: Como la proteína M, capsómeros situados por debajo de la
cápside, proteínas asociadas al núcleo...
b. No estructurales: Como enzimas o transcriptasas asociadas a la nucleocápside
y que no tienen funciones metabólicas.

! Los virus son resistentes frente a antibióticos usados contra las bacterias,
sin embargo agentes físicos como una temperatura constante a 55-65ºC son capaces
de destruir la mayoría de los virus a excepción de los de la hepatitis B. También se
pueden inactivar usando agentes químicos que actúan directamente sobre la
envoltura lipídica del virus haciendo que este pierda su virulencia.

! Los virus se pueden conservar a bajar temperaturas (hasta un mínimo de


temperatura de -196ºC y un máximo de duración de varios años) o mediante
liofilización.

c) Mecanismo de replicación de un virus:

La replicación de un virus consta de las siguientes fases diferenciadas:

! 1- La adhesión o adsorción es una unión específica entre proteínas de la


cápside vírica y receptores específicos de la superficie celular del huésped, pero
algunos bacteriófagos también son capaces de adherirse a los flagelos, vellosidades
(pili)... Este mecanismo ha evolucionado para favorecer los virus que sólo pueden
infectar células en que se pueden replicar. La adhesión al receptor puede inducir
cambios en la proteína de la envoltura viral que resultan en la fusión de las
membranas viral y celular, los virus con envoltura se unen mediante espículas.

! 2- La penetración en la célula sigue a la adhesión, los virus se introducen en


la célula huésped mediante endocitosis mediada por receptores o por fusión de
membrana. Las bacterias, como las de las plantas, tienen una fuerte pared celular que
los virus tienen que romper para infectar la célula. Algunos virus han evolucionado
mecanismos para inyectar su genoma a la célula bacteriana mientras la cápside viral
permanece en el exterior, sucede en aquellos virus que infectan bacterias de
membranas gruesas.

! 3- El despojo o decapsidación es el proceso en que la cápside vírica es


degradada por enzimas virales o del huésped, liberando así el ácido nucleico del
genoma vírico.

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! 4- La replicación o fase de eclipse implica la síntesis de ARN mensajero


(ARNm) vírico en todos los virus con rasgos de ARN positivos, la síntesis de proteínas
víricas, el ensamblaje de proteínas víricas y la replicación del genoma viral. El proceso
de replicación es esencial para mantener la estabilidad de la información genética
contenida en el ADN. Esta replicación utiliza enzimas idénticas a las involucradas en la
replicación del ADN celular y una característica común es la presencia de estructuras
circulares temporales por lo menos en algunas de dicho proceso.

! 5- Tras el ensamblaje de partículas víricas, a menudo se produce una


modificación postraduccional de las proteínas víricas. El ensamblaje puede producir
nuevas partículas virales. Los virus pueden autoensamblarse en un proceso similar a
la cristalización, ya que las partículas virales, al igual que los cristales, constituyen
estructuras que se encuentran en un estado mínimo de energía libre.

! 6- Los virus son liberados de la célula huésped por lisis—un proceso que
mata la célula reventando su membrana. Los virus envueltos (como el VIH) son
liberados de la célula huésped por gemación. Durante este proceso, el virus adquiere
su envoltura, que es una parte modificada de la membrana plasmática del huésped.
Las células en que los virus es latente e inactivo presentan pocos signos de infección
y a menudo funcionan normalmente.108 Esto causa infecciones persistentes y el
virus a menudo permanece durmiente durante muchos meses o años.

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d) Un tipo de virus, los bacteriófagos:

! Los bacteriófagos son virus que infectan bacterias, las lisan y continúan
realizando su ciclo. Son muy específicos y por tanto solo afectan a especies de
bacterias concretas y dentro de estas a unas determinadas cepas.

! Las principales aplicaciones prácticas de los bacteriófagos es la transferencia


genética por conversión o por transducción lisogénicas, fagoterapia (como sustituto
de antibióticos, aunque es demasiado costosa y no se usa demasiado) y la fagotipia
(importante en epidemiología de bacterias de igual especie pero con distintos
receptores para fagos).

e) Viroides:

! Se descubrieron por Dienner en 1971. Producen enfermedades en vegetales.


Son siempre de una sola cadena de ARN.

f) Priones:

! Son exclusivamente glicoproteínas capaces de producir enfermedades


degenerativas del sistema nervioso central, como en el conocido caso de “las vacas
locas”. No son antigénicos, al no producir una reacción inflamatoria y son resistentes
a los antivirales, al calor y a los agentes desinfectantes, además de ser capaces de
pasar por filtros con poros de entre 25 y 100 nm. Existen de forma inactiva hasta que
en un determinado momento pasan a su forma activa capaz de afectar al organismo.

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