PROTOCOLO DE PURIFICACIÓN DE LA GLICINA

Según la información proporcionada del portal web Schedl Lab (Genética de la

Universidad de Washington), aplica un método de purificación por afinidad
debido a la facilidad de producir rápidamente cantidades pequeñas pero útiles
de proteína recombinante pura en una sola etapa de cromatografía.

Elución de glicina (purificación por afinidad)

Elución de la columna con Glicina-HCl (pH 2.3)

El autor describe 2 pasos fundamentales para hacer 0.1M de glicina-HCl, pH a

2.3; y en cada paso están las indicaciones necesarias con la ayuda del
producto glicina-HCl (100mM) antes de usar verificar el nivel de pH (Arur).

1er Paso: Enlazar los anticuerpos a su columna de proteína favorita

1) Lavar la columna con 5 volúmenes de TBS / PBS.

2) Lavar la columna con 10 volúmenes de tampón de lavado / (NaCl 500
mM, Tris 20 mM (pH 7,4), Triton X-100 al 0,1%).
3) Lavar la columna con 5 volúmenes de TBS / PBS.

2do Paso: Eluir los anticuerpos unidos

1) Eluir las proteínas unidas con 2 ml de tampón de elución de glicina.

2) Recoger 10 x 200 μl fracciones en tubos que contienen 50 μl 2M Tris
(pH 8,5).
3) Lavar la columna con 10 volúmenes de TBS / PBS.
4) Lavar la columna con 5 volúmenes de TBS / PBS + azide y almacenar la
columna a 4 grados C.

Bibliografía
Arur, S. (s.f.). Schedl Lab (Genética de la Universidad de Washington).
Obtenido de http://genetics.wustl.edu/tslab/protocols/protein-
stuff/glycine-elution-affinity-purification/