CUESTIONARIO PREVIO

• Investiga la composición de los siguientes medios de cultivo y de las características de

los microorganismos que crecen en ellos (cuadro 1).
• Clasifica los medios de cultivo según su aplicación (generales, selectivos, diferenciales,
etc.). Cuando se trate de un medio selectivo o diferencial, señala los componentes que
le dan dicha característica.
• Identifica las fuentes de C y energía de los mismos.

Cuadro 1. Composición y desarrollo típico de colonias en los medios de cultivo.

Medio de cultivo Composición Características típicas de

EMB (Eosina, Azul de
Metileno)
Medio diferencial y selectivo.
Los colorantes eosina y azul
de metileno inhiben el
desarrollo de bacterias Gram
positivas y a las Gram
negativas exigentes.
Diferencial al cambiar el pH
del medio por la producción
de ácidos vía fermentación.
MSA (Agar Salino Manitol)
Medio selectivo de
estafilococos por su alta
concentración de cloruro de
sodio.
Diferenciación de
estafilococos patógenos y no
patógenos, los primeros
fermentan el manitol (colinas
amarillas), los segundos no
(colonias rosas).
las colonias que crecen
En gramos por litro: Aislamiento selectivo de una
Peptona 10 g gran cantidad de
Lactosa 5 g (Fuente de enterobacterias y otras
carbono) especies de bacilos Gram
Sacarosa 5 g (Fuente de negativos.
carbono)
Fosfato dipotásico 2 g
Eosina 0.4 g
Azul del metileno 0.065 g
Agar 13.5 g
pH Final 7.2 ± 0.2
En gramos por litro: Aislamiento y diferenciación
Extracto de carne 1 g de estafilococos a partir de
Peptona de carne 5 g diversas muestras.
Tripteína 5 g
Manitol 10 g (Fuente de
carbono)
Cloruro de sodio 75 g
Rojo de fenol 0.025 g
Agar 15 g
pH Final 7.4 ± 0.2

• ¿Qué características de un microorganismo deben tomarse en cuenta para su

aislamiento?

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposible

diferenciarlas sólo con el uso del microscopio. En este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo
especiales. Así, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría
de las especies bacterianas, pero no la del tipo que se desea averiguar si está presente. Otras
veces, el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar
algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian de color
cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolismos ácidos.
Si las bacterias son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser
detectados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Otra característica es la producción
de ciertas enzimas que cambiaran el medio en el que se encuentran.

• Si únicamente tuvieras a tu disposición medios generales y las incubadoras comunes

¿qué harías para lograr el aislamiento de:
a) Una bacteria esporulada
Someter la muestra en agua a calentamiento a temperaturas relativamente altas (mayores a
80° C) y sembrándolo en agar nutritivo e incubar a temperatura normal.
b) Un microorganismo sacarófilo
Utilizando un medio rico en azucares e incubar a condición normal para obtener nuestro
microorganismo.
c) Un microorganismo aerobio estricto
Utilizando un medio semisólido, sembrándolo e incubando en condiciones normales
obteniendo nuestro microorganismo aerobio estricto quedando en la superficie del tubo.
d) Una bacteria anaerobia estricta.
Utilizando un medio semisólido, sembrándolo e incubando en condiciones normales
obteniendo nuestro microorganismo aerobio estricto quedando al fondo del tubo.

• ¿Cuáles son las características de una muestra que deben considerarse antes de iniciar
el aislamiento de un microorganismo?

A partir de nuestro cultivo mixto de necesita saber cuales son las condiciones y sustratos que
tienes para crecer dentro de los cuales se elegirá el medio de cultivo para obtener la mayor
cantidad de microorganismos los cuales se diferenciará por sus colonias aislando cada una de
ellas o la de principal importancia.

• ¿Por qué es importante conocer y aplicar la metodología para aislar un microorganismo

en:

a) Un laboratorio clínico
Si es un organismo patológico se necesita saber exactamente cual es, independientemente de
las otras bacterias no patógenas que coexisten con esta, para así poder dar un tratamiento
efectivo en contra del microorganismo patológico.
b) Industria alimentaria
Es necesario garantizar la calidad del alimento ya que es un producto que consumen millones
de personas por lo cual es importante asegurarse de que no hay microorganismos más que
los que son benéficos para el alimento.
c) Estudios ambientales
Al ser donde se encuentran la mayor cantidad de microorganismos, estos pueden tanto ser
muestras patológicas como no patológicas y que contribuyen a la producción de oxigeno por
lo tanto es necesario conocer y prevenir los riesgos y beneficios que pueden llegar a ocasionar
estos en una población.
d) Ambientes hospitalarios
Al ser una zona donde se necesitar estar mayormente estéril, si lograra un organismo pasar la
zona estéril se requerirá aislarlo y eliminarlo para que no produzca más daño a los pacientes.
 e) Industria cosmética
Se necesita tener un control de calidad en los productos que tienen contacto constantemente
con la piel de las personas si estos llegaran a traer un agente que ocasionara lesiones graves
la industria estaría en problemas, teniendo en cuenta eso se necesita tener un control estricto
de lo que se va a vender si llegara a haber alguna contaminación se necesita aislar y eliminar
para seguir con la producción.
f) Industria farmacéutica
Al haber tanto microorganismos patológicos, como lo patológicos, estos ayudan a la industria
farmacéutica a conseguir nuevos medicamentos para combatirlos, teniendo la necesidad
constante de saber que organismo es el que provoca estos cambios y como poder eliminarlo.
Sin embargo, si es una bacteria que produce antibióticos o enzimas que puedan beneficiar al
ser humano, se aislaría y obtendría productos constantemente de este microorganismo.

• ¿Qué técnicas de conservación existen y cuáles son las ventajas y desventajas de las
mismas?

Conservación por congelación, se congelan las células en suspensión en un medio liquido con
un agente criprotector y se guarda en temperaturas inferiores a cero grados. Es el mejor
método de conservación, pero tiene inconveniente en requerir aparatos especiales.
Conservación por transferencia periódica se guarda en forma de cultivo activo en el medio de
cultivo que ha crecido, es un método que afecta la estabilidad genética impidiendo la
conservación de características.
Liofilización consiste en la eliminación del agua por sublimación, disminuyendo el metabolismo
celular y por consiguiente conservación de bacteria. Esta es afectada por temperatura,
contenido de humedad y presencia de humedad. Uno de los mejores métodos para conservar.