MARCO TEÓRICO BACTERIAS

Los microorganismos como las Levaduras son organismos vivos microscópicos unicelulares
pertenecientes al reino de los hongos y al dominio eucariota, se alimentan principalmente de
azúcar produciendo fundamentalmente dióxido de carbono y alcohol; su forma puede ser
desde esférica, ovoide o alargada. Las dimensiones varían entre 2 y 4 µm de ancho y 2 a 8
µm de largo, se encuentran levaduras alargadas de 10, 15 o 25 µm de longitud. Poseen pared
celular, membrana fundamental, citoplasma y núcleo.

Imagen 1. Imagen de levadura Saccharomyces

cerevisiae. Tomada de google imágenes

Las levaduras son muy importantes debido a que contribuyen en la elaboración de procesos
fermentativos, Un ejemplo claro es la Saccharomyces cerevisiae que es empleada
industrialmente en la fabricación de pan, cerveza y vino. Se forma de nutrición varía desde
los carbohidratos hasta los aminoácidos. Entre los azúcares que pueden utilizar están los
monosacáridos como la glucosa, fructuosa y galactosa, también puede emplear disacáridos
como la maltosa y la sacarosa.

Para identificar una levadura se parte de cultivos puros, y se tienen en cuenta ciertas
características

 Morfológicas: Forma, medida, reproducción asexual

 Características de reproducción sexual
 Características fisiológicas y bioquímicas

Con lo anterior ya mencionado es necesario que los microorganismos para reproducirse

necesitan de medios de cultivo, ser aislados y a su vez identificados por medio de pruebas de
coloración como la Gram y pruebas bioquímicas como se mencionarán a continuación.
Medios de Cultivo

Los medios de cultivo son soluciones compuestas por nutrientes específicos para que así los
microorganismos puedan desarrollarse en un laboratorio. La composición precisa dependerá
de la especie que se quiera cultivar, ya que las necesidades nutricionales varían
considerablemente. Se pueden clasificar de acuerdo a su estado, complejidad, y aplicaciones.

En cuanto al estado se encuentran medios sólidos, semisólidos y líquidos, los sólidos

contienen una sustancia gelificante conocida como agar-agar, los semisólidos contienen una
menor concentración de agar-agar (0.5 a 0.7%) y los líquidos no contienen agar-agar, debido
a su naturaleza los medios sólidos o agares se sirven en cajas de Petri mientras que los medios
líquidos o caldos de cultivo y los semisólidos se sirven en tubos de ensayo. Según las
aplicaciones de los medios de se clasifican en enriquecidos, selectivos, diferenciales.1

Imagen 1. Medios de cultivo sólido

(Agar), tomada de google imágenes

Para la preparación de cultivos se requieren de ciertas condiciones generales tales como la

disponibilidad de nutrientes adecuados, la consistencia adecuada del medio, presencia (o
ausencia) de oxígeno y otros gases, condiciones adecuadas de humedad, luz ambiental, pH,
temperatura y esterilidad del medio.

Aislamiento de Microorganismos de Interés

Cuando se examina en el microscopio una gota de agua de lluvia, se observa una gran
variedad de microorganismos; algunos de ellos podrían ser útiles al hombre, mientras que
otros podrían ser patógenos. La separación de cada una de estas variedades es lo que se
conoce como aislamiento de microorganismos.

.
Los microorganismos son ubicuos (pueden estar en cualquier lugar), gracias a esta
característica pueden colonizar cualquier ambiente, desde un rio hasta una escultura de hierro,
esa habilidad es debido a sus procesos metabólicos y sistemas enzimáticos. Para aprovechar
esas características de los microorganismos, en beneficio de la industria y el medio ambiente,
es de vital importancia poder aislarlos de su medio natural y llevarlos a medios sintéticos para
poder manipularlos en el laboratorio.2

Tinción de Gram o Coloración de Gram

La coloración de Gram es un tipo de tinción empleado en microbiología que permite

diferenciar dos grandes grupos de bacterias: las Gram positivas aquellas que se visualizan en
morado y las Gram negativas aquellas que se visualizan de color rosa, rojo o grosella según se
comporten ante su tinción. El fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular
de ambos grupos: la Gram positivas poseen una gruesa capa de peptidoglicano mientras que
las bacterias Gram negativas poseen una capa peptidoglicano más fina y una capa de
lipopolisacarídica externa. Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal
violeta) con mayor facilidad que las Gram positiva debido al grosor de la pared celular.

Imagen 2. Imagen de bacterias Gram

positivas (color morado) y bacterias
Gram negativas (color rosa). Tomada de
google imágenes

Para realizar la coloración de Gram son necesarios el uso de ciertos reactivos y colorantes
tales como: el cristal violeta, lugol, etanol y fucsina.

 Cristal violeta: Es un colorante primario de la coloración de Gram que se adhiere a la

pared de todas las células bacterianas, las Gram positivas absorben este colorante debido al
grosor de su pared celular y al porcentaje mayor de ácido teicoico.
 Lugol: Es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio)
y SI (siulterio), Cumple la función de fijar el colorante primario (cristal violeta) en la
preparación.

 Alcohol-cetona: Funciona para realizar la decoloración en este paso los microrganismos

Gram positivos no se decoloran mientras los Gram negativos si lo hacen.

 Safranina: Funciona como colorante de contraste, es el último compuesto que se le

adiciona a la coloración en Gram y en el cual se puede determinar las Gram positivas y las
Gram negativas de acuerdo al color y al contraste.

Aislamiento por Estrías

Una vez aislados los microorganismos e identificadas las colonias de interés, es necesario
realizar aislamientos que permitan obtener cultivos puros de los microorganismos objeto de
estudio. La técnica de aislamiento por estría o técnica de siembra por agotamiento de colonias
y la obtención de cultivos axénicos (una sola especie microbiana proveniente de una sola
célula) a partir de cultivos mixtos; esta técnica diluye la muestra de microorganismos a partir
del trazo de estrías sucesivas sobre una placa de agar permitiendo el posterior crecimiento de
colonias totalmente aisladas.3

Consiste en cargar el asa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la
superficie de la placa; se quema el asa, se enfría, se gira la placa a 90°c y se vuelve a estriar
tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de placa. Por
último, sin quemar el asa, se estría el resto de la superficie sin sembrar (Ver imagen 3).

Imagen 3. Imagen de procedimiento de

aislamiento de microorganismos por estrías.
Tomada de google imágenes
 Identificación de Microorganismos a partir de Pruebas Bioquímicas

La identificación microscópica y macroscópica de los microorganismos proporciona una idea

general acerca de la identificación de microorganismo, de hecho estas son técnicas
preliminares que permiten seleccionar pruebas de mayor especificad como la realización de
pruebas bioquímicas que dejan ver las características metabólicas de los microorganismos
frente a un compuesto específico; así como por ejemplo el caso del género Saccharomyces,
es necesario determinar las características de asimilación y fermentación de diversos
azúcares, así como la capacidad de tolerancia al etanol y su reacción frente a la urea. 4

Las pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones que determinan la actividad de una
vía metabólica de la bacteria a partir de un sustrato de que se incorpora en un medio de cultivo
y que la bacteria al crecer transforma o no. Para ello, hay que partir de un cultivo obtenido
en el aislamiento, subcultivando de una colonia bien aislada. La identificación de una especie
requiere de estas pruebas. Es aconsejable tener en cuenta:

 Cambios que se producen

 Reacciones químicas que se producen
 Enzimas que intervienen
 Productos intermedios
 Secuencia de las reacciones bioquímicas

 Prueba de Fermentación de azúcares: En esta prueba se determina si la bacteria es capaz

de fermentar un carbohidrato particular (producción de ácidos acompañados o no de gases).
Se aplica a bacterias con metabolismo fermentador, ensayándose por separado con diferentes
carbohidratos (glucosa, lactosa, sacarosa, entre otras).

 Prueba de Tolerancia al Etanol: En este tipo de ensayo se determina si los

microorganismos obtenidos son resistentes al etanol y si son capaces de presentar mayor
rendimiento de este, ya que es una característica de las levaduras.
CONCLUSIONES

Se prepararon los respectivos medios de cultivo agar-agar Sangre y

Chocolate para el crecimiento y desarrollo del microorganismo de
interés (levaduras y bacterias acéticas), realizando los respectivos
cálculos y adecuándolos de acuerdos a lo requerido.

Se realizó aislamiento microbiano a partir de la caracterización

macroscópica de los cada uno de los microorganismos.

Se caracterizaron algunas colonias obtenidas en la preparación de

medios de cultivo y realizar el correspondiente conteo de acuerdo a las
cantidades halladas en la caja de Petri.

Se efectuó coloración de Gram para identificación de Gram positivas

y Gram negativas de acuerdo a las colonias ya caracterizadas.
MARCO TEORICO HONGOS

Los hongos son organismos de organización eucariota y de mayor tamaño que las
bacterias; estos se diferencian de las otras Eucariotas, por ser inmóviles. Los hongos
poseen un tipo de nutrición heterótrofa. Pueden ser unicelulares (como las levaduras o
multicelulares (como los mohos que son hongos filamentosos).

Los hongos al proliferar asumen dos formas básicas que son la de levaduras y la de mohos.
Esta última forma ocurre por la producción de colonias filamentosas multicelulares
integradas por túbulos cilíndricos ramificados llamados hifas, cuyo diámetro varía de 2 a
10 micrómetros (μm). Recibe el nombre de micelio la masa de hifas entremezcladas,
acumulada durante la fase de crecimiento activo. Algunas hifas se dividen y forman
células gracias a la intervención de estructuras cruzadas llamadas tabiques o septos, que
de manera típica se forman a intervalos regulares durante la fase de hifas. Un grupo de
mohos de importancia en medicina que son los cigomicetos, produce hifas que rara vez
están tabicadas. Las hifas que penetran en el medio de sustento y absorben nutrientes son
las vegetativas o de sustrato. A diferencia de ello, las hifas aéreas sobresalen de la
superficie del micelio y por lo común poseen las estructuras reproductivas del moho. En
una situación de proliferación estandarizada en el laboratorio, los mohos producen
colonias con características propias como la rapidez de proliferación, textura y
pigmentación. Es posible conocer el género (y tal vez la especie) de muchos mohos que
afectan humanos, por el examen microscópico de la ontogenia y la morfología de sus
esporas reproductivas asexuales o conidios.

Las levaduras son células únicas de formas esféricas o elipsoidales, y diámetro que varía
de 3 a 15 micrómetros. Muchas de ellas se reproducen por gemación, y algunas especies
producen yemas que de manera característica no se desprenden, y terminan por alargarse;
el paso siguiente en ese proceso produce una cadena de levaduras alargadas llamadas
seudohifas. Las colonias de tales células por lo común son suaves, opacas, de 1 a 3 mm
de diámetro y de color crema. La morfología de las colonias y la microscópica de muchas
levaduras son muy semejantes, razón por la cual se identifican las especies de ellas con
base en estudios fisiológicos y unas cuantas diferencias morfológicas clave. Algunas
especies de hongos son dismórficas y pueden proliferar en la forma de levadura o moho,
según las características ambientales.

Todos los hongos cuentan con una pared esencial rígida que es el elemento que les da su
forma. Las paredes están compuestas en gran medida de capas de carbohidratos (cadenas
largas de polisacáridos) y también glucoproteínas y lípidos. Durante la infección las
paredes de los hongos desempeñan funciones biopatológicas importantes. Los
componentes superficiales de la pared son los que median la fijación del hongo a las
células del hospedador. Los polisacáridos de la pared pueden activar la cascada de
complemento y desencadenar una reacción inflamatoria; el hospedador casi no los
degrada y se les puede detectar por medio de tinciones especiales. La pared libera
antígenos inmunodominantes que pueden originar respuestas inmunitarias de tipo celular
y anticuerpos característicos útiles para el diagnóstico. Algunas levaduras y mohos
poseen paredes melanizadas, que le dan un color pardo o negro y los hongos con tales
características se denominan dematiáceos. En varios estudios, la melanina ha sido
vinculada con la virulencia.
 Además de su proliferación vegetativa en la forma de levaduras o mohos, los hongos
producen esporas para mejorar su supervivencia. Éstas pueden ser dispersadas fácilmente,
son más resistentes a situaciones adversas y germinan cuando surgen circunstancias
adecuadas para la proliferación. Las esporas derivan de la reproducción asexual o de la
sexual, que son los estados anamórfico y teleomórfico, respectivamente. Las esporas
asexuales son los descendientes mitóticos, es decir, las mitosporas, y genéticamente
idénticas. Los hongos de importancia médica generan dos grandes tipos de esporas
asexuales o conidios y, en el caso de los cigomicetos, las esporangiosporas.
Características orientadoras propias de las esporas son su ontogenia (algunos mohos
producen estructuras conidiógenas complejas), y su morfología (tamaño, contorno,
textura, color, y carácter unicelular o multicelular). En el caso de algunos hongos, las
células vegetativas pueden transformarse en conidios (como serían los artroconidios, o
las clamidosporas). En otros casos, los conidios son producidos por una célula
conidiógena como una fiálide que por sí misma puede unirse a una hifa especializada,
llamada conidióforo. En los cigomicetos, las esporangiosporas surgen por replicación
mitótica y producción de la espora dentro de una estructura sacular llamada esporangio,
apoyada por un esporangióforo.

CONCLUSIONES

 Que los hongos al igual que las bacterias son seres vivos microscópicos ya que
estos también poseen una estructura morfológica lo cual es indispensable para que
puedan subsistir.
 También aprendimos que cuando trabajamos con hongos debemos ser más
cuidadosos de lo común y hay que hacer las cosas con precaución, ya que
podríamos contagiarnos o ser alérgicos ante ellos.
 Se pude concluir que los hongos son dependientes de otros factores para poder
desarrollarse, tal como la humedad.
 Es de suma importancia identificar los hongos por medio de su morfología, para
saber si son mohos o levaduras, si contienen esporas o no.
 Y por último se concluye que los hongos microscópicos son unicelulares como
las levaduras o pluricelulares como los mohos. Como sus nutrición es heterótrofa
necesitan de sustancias orgánicas ya elaboradas; la mayoría son saprofitos, por lo
que se alimentan de materia en descomposición, de ahí su importancia.