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Metodo de Cunatificacion de Proteinas
Metodo de Cunatificacion de Proteinas
INTRODUCCIÓN
Las proteínas ocupan un lugar de máxima importancia entre las moléculas
constituyentes de los seres vivos (biomoléculas). Prácticamente todos los
procesos biológicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de
moléculas (Berg et al, 2008).
OBJETIVO GENERAL
Aplicar un método colorimétrico para determinar la concentración de proteína en
una muestra problema.
OBJETIVOS PARTICULARES
- Aprender el manejo del espectrofotómetro y su aplicación en los métodos
colorimétricos.
- Aprender el empleo de una curva patrón para la determinación de la
cantidad de moléculas presentes en una muestra, en este caso de
proteínas.
- Determinar la concentración de proteínas en una muestra de leche,
utilizando el método de Biuret.
HIPÓTESIS
Si se mide la absorbancia a 540 nm de una muestra coloreada con el reactivo de
Biuret ésta será proporcional a la concentración de proteína de dicha muestra.
MATERIAL Y MÉTODO
En seguida, los tubos 7 con 0.25ml y 8 con 0.5ml de caseína, el 9 con 0.25ml y el
10 con 0.5ml de sobrenadante, el 11 con 0.25 ml y el 12 con 0.5ml de leche
diluida, (todo esto obtenido en la práctica anterior); a todos los tubos se les agrego
Cloruro de Sodio al 0.9% con diferente cantidad de 2.9ml al 2, 2.8ml al 3, 2.6ml al
4, 2.2ml al 5 y 2ml al 6. Para tener una solución de 3ml y reactivo de Biuret con la
misma cantidad de 3 ml, así logramos una solución de 6ml, se homogenizo la
solución por medio de un agitado tipo vortex. (Solamente al tubo 1 se le agregaron
3 ml de reactivo de biuret y 3 ml de NaCl)
Absorbancia
Tubo No. Solución * Proteína (mg)
a 540 nm
1 3 ml NaCl, 0 Blanco
2 0.1 ml BSA y 2.9 ml NaCl 1 0.034
3 0.2 ml BSA y 2.8 ml NaCl 2 0.071
4 0.4 ml BSA y 2.6 ml NaCl 4 0.142
5 0.8 ml BSA y 2.2 ml NaCl 8 0.277
6 1 ml BSA y 2 ml NaCl 10 0.345
7 0.25 ml caseína y 2.75 ml NaCl ¿? 0.079
8 0.5 ml caseína y 2.5 ml NaCl ¿? 0.198
9 0.25 ml sabrenadante y 2.75 ml NaCl ¿? 0.221
10 0.5 ml sobrenadantey 2.5 ml NaCl ¿? 0.240
11 0.25 ml leche diluida y 2.75 ml NaCl ¿? 0.044
12 0.5 ml leche diluida y 2.5 ml NaCl ¿? 0.068
*A todas las soluciones se agregaron 3 ml del reactivo de Biuret.
Con los valores de la tabla anterior, tubos dos a seis, se realizó la gráfica 1, de la
curva patrón de proteína, obtenida por el método de regresión lineal de mínimos
cuadrados; donde las abscisas (x) representan la concentración en mg de
proteína, y las ordenadas (y) los valores de la absorbancia de cada concentración.
0.35
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Proteina (mg)
DISCUSIÓN
De acuerdo a los resultados finales (tabla 4) obtenidos en la determinación de la
concentración de proteína en las muestras de caseína, sobrenadante y leche
diluida, que aunque no son los esperados, pues, la concentración de proteínas
tendría que ser mayor en la leche diluida que en el sobrenadante y los valores de
la concentración de cada muestra problema iguales entre sí, no se descarta este
método de cuantificación de proteínas, pero es recomendable utilizar los
materiales de laboratorio correctos para hacer las diluciones y ser precisos, mas
aun exactos, en la medición de volúmenes.
CONCLUSIÓN
Efectivamente, aplicando el método Biuret se puede determinar la concentración
de proteína en una o varias muestras problema, que resultan al interpolar los
valores de absorbancia en una curva patrón originada a partir de concentración de
proteína conocida.
BIBLIOGRAFÍA
Berg, J.M.; John, L.T.; Lubert, S. (2008) Bioquímica. 2ª ed. Reverté, Barcelona.
Harris, D.C. (2003). Quantitative chemical analysis. San Francisco: W.H. Freeman.
ANEXO (CUESTIONARIO)
1.- describa que es el espectrofotómetro y para que sirve.
Sirve para calcular las concentraciones de las distintas sustancias en función de la
absorción del color. Técnicas de bioquímica y biología moleculas.freifelder David.
Editorial reverte.2003
6.- explique si una curva patrón puede ser empleada para cuantificar sustancias
diferentes a las proteínas y cual seria la diferencia con estas.
11.- elabore una lista de 5 compuestos que se podrían cuantificar empleando una
curva patrón, y menciona que importancia tiene determinar la cantidad de dichos
compuestos.