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Cinetica de Fermentaciones PDF
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CINETfCA DE FERMENTACIONES
Esc\,~a'dj, Ing*n(erIMllpquJmica.
Universldad Cst6lica de ~alPararSO"
. ,'\ )
' r
,. CRECIMIENTO MICROBIA NO
l~LAl "
Los metodos qere delerminan numero de celulas SOIl2flCl gNle/al preterldos en traba/os de
eCletAtfP.der~y~Ia[~
f')~ ~q"'-<l ~
ql.i~ no haY ,Ui'r!m~odo
en paniculat que
piJe. eb'e' estlldiaf las ceraCleristicas del
culli,vO y $eleccionar de acuerdo a ell,,&. el metodo adecuado.. ES:.ittTj:fb"ante $enalar que el pro-
~~:~st~~n~~:1 ~C::/ed~::~a~::~-':~~~~~~hC~~~~:~,~:.~e::;~U;;Z~~~~~na~::t~:~~6;~
:u: ~~fi~~~~adl: 6~~~d~rt~~~~,~\~9Peaf~~y <!~Cj~:iJo~~i~_~~~P~~:i~~~~~~~i~~a~~c:~:~
verado. Q V";U:- 1.0,; '''_ ,) :'::;~,:~ :..I; ,,;' ~
1.2. Cinefica de Cullivo por Lotes . ' ,
EI conocimienlo del ttanscurso temporal 0 cinetlca de crecimiento Ij plbducCI6n de metabolitos
resulla fundamental en el Iralamiento cuant,tatlvo de los procesos blotecnol6glcos. Borzani
(1966 Y 19B6a) ha presentado y discutido con gran daridad los objetivos y metodologias de la
clnetlca de fermentaciones. Basta por ahora cori"establecer que el adecuado conocimie'1to de
la cine.lca de un cultivo permite la predicci6n del transcurso de !a fermentaci6n, la e~a!uaci6n de
velocidades, rendimientos y productividades y entfega informaci6n Util para estable,per estrate-
glas de producci6n y optimizaci6n del proceso. '
EI componamiento cinlnico de una poblaci6n eS!3 "determinado por un compfejo conjunto
de factores gen~ticos y ambient ales, Entre estos ultimos destacan las Uamadas condiciones de
opera06n (composici6n del medio, temperatura, pH y olras) y la ,modalidad de cultivo, enlre las
que dl511ngUlmos el cuttivo por 10les (liamado tambian por cargas a tandas), e~Cultlvo continuo y
el cufTivo pot 10les alimenlados a semicontinuo. .'•. ' .'~' -.
Se puede delinir el cuilivo por Ioles como aque! que se realiza ~ sin lntefcambio de materia
con los alrededores, salvo 10 felef ente a los gases (aireaci6n, producci6n~ae CO;y
ottOS gases)
que se suminiSlran y retiran del sistema en forma continua. E'n esta modalidad de CUitlVO se
cargan los nutrientes inicialmente y luego se inocula con una determinada canlidad de cajulas
vlables Se Inlcia asi el cuhivo, et que tfanscurre de una forma caracteristica, dada por la Hamada
cUiva de crecimienlo, hasta que algun evento, tal .como el agotamienlo de un nutriente 10
dellene
La Figura 1 esquematiza la curva de crecimienlo. La formaC""que-se 'aprecia se da siempre
que se cumplan cienas condiciones: el cultivo se realiza por lOtes, todas las celulas que COtTY
ponen la poblaci6n se reproducen a inlerva/os regulares, no existen en el media de cuhivo sus-
tanClas Inhlbldoras del crecimiento y su composici6n es simple,''«l especial en relacf6n a las
fuentes de carbona y nilf6geno.
.0
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~
"
w
u
It
8
Fase de muene 0 decaimiento (d): eSla fase se presenta en aquallos cull!vos en los que
se inducen enzimas autoliticas an condiciones de inanlCJ6n. .
Fase de cfecimianlo criplico (e): en algunos CUItIVOS es poslQle aprecl3f una zona de
J
crecimlemo lento despu~s de la laSEi- de muene EI conteOido ciloplasmalJco llberacto por las
celulas hsadas proporciona tos nutrientes requeridos para el crecimiento,
Es poslble distinguir tambien conas lases de aceleraci6n y desaceleraci6n del crecimiento_
La tase estacionaria puede presentar una leve pendiente positiva si el nutriente agotado es,
per StSmplo, la 'uente de nitr6geno, En ese caso el catabolismo de la fuenle de carbono y
energia puede contlnuar por algun tiempo, con acumulaci6n de compuestos de reserva y sub-
secuenle eumenlo de la biomasa,
51 18 curva se construye utilizando numero de celulas en vez de biomasa, tambien apatece·
ran algunas dilerencias. Durante la lase de latencia no habra aurnento alguno y bien puede
haber una clerta disminuci6n en el recuento de ceJulas viables, En cuanlo a la lase estacionaria,
no se apreclara el aumento discutido en el parrato anterior en caso de lirnitaci6n por nitr6geno.
La fOlma de la curva de crecirniento se altera en el caso de otganlsrnos filamentosos que no
presentan una lase propiamenle exponenciat, en especial cuando et Cfecimienlo es en forma de
mesilio dlfuso,
EI crecimiento de una poblaci6n bacteriana puede set represenlado por.
(1)
,<
, A.=_'_~=-~ (2)
)(. dt dt
Durante la lase eXpo1)encial es posible Integrar la ecuacI6n (1l entre limltes adecuados
resuhando: '. -
~/,'
X-Xoe(;t.t ? (4)
102
(5)
'd"-,...--
La Tabla 2 enlfega rangos de vaJores caraCleristlc,?s de 1<1'
, ,
,£
TABLA 2
Tipode celule
Los valores dados como pauta general en la Tabla 2 no son minimos nj milximos, sino que
cilrastipicas.
Las ecuaciones presentadas en los parralos precedentes. estricamente validas para el caso
de fisi6n bin aria, se emplean tambien con bastanle seguridad en el case de levaduras y con
reservas para organismos filamenlosos, pala los cuales se han propu9SIO e)(presiones dlsMlas
(Koch, 1975).
(6)
TABLA 3
Un faClor ambiental que liene una decisiva inlluencia en e! valor de "",es la temperatura de
cuttivo. La Figura 3 enlrega la forma tipica de la dependencia de estes parametros.
Fig. 3.lnlluencia de la temperatura en la velOCidad;espedlica de crecimienlO.
(9)
No se dispone aun de una ecuaci6n simple que modele adecuadamente loda la curva.
Los valores de la energia de activaci6n varia en el rango de 8·26 kca1jmol, dependiendo del
microorganismo en cuesli6n y de la composid6n del medio de cultivo.
La ubicacibn de la lemperatura 6plima determina la clasificaci6n del microorganismo en
2. ,. Requerimiemos Nulriciona/es
. EI proceso de reproducci6n celular puede represenlarse esquematlcameme en la forma que
muestra la FIgura 4a. S! la sltuaCl6n se examlna desde una perspeCl!va cuantilaliva, se debera
conduir que para que la representaci6n a) sea posible, se debera cumptir con 10 formulado en
b), de manera de no vi olar los principi os de conseNaei6n de masa y energia y poder sinlelizar
una nueva eelula igual a la anterior.
o
-, o )
o
bl
MATERI.
ENERGIA
3 [CElUlAS
1 C. H,,oc + mNHJ + ... + n01 - - - > q C"H.O,N, + r CO, + tHP + u C~I"IPIN. (1q
(celulas) (producto)
Compuesto
TABLA 5
Componenle Ofigen
Me!aza Induslriaazuc81111a
UCOI de maceraci6n de marz SubploduCIC del procesamlenlo de malz.
Ucor de sulfito Oesecho de la indu$IfJa da pulpa y papal.
Permeado de suelO SUbprodueto del plocesamiento del SUBIO de tache.
VinaZAS Subproducto de la Ploduccl6n de elanol POI
felmeOlaci6n .
Harinas de soya y pescado IndustriaJizacl6n de soya y pescado.
Hid/oliudo y .xl/acto de Industlia produelora de leva dura levadu,a fOllaJera
ydepanificaci6n
Cada tipo de medio presenta caraClerislica favorables, asr como lamblen algunas desventa·
jas. Los medias compleJos son preferidos a nlvel industrial fundamental mente por ser mas
baralOs, pero tam bien porque en cienos casas se abllenen can elias mejores rendimientas y
produClividades.
-
, _ '''' g/I (w",,,,,-kdo . d:, lob
It) SO 9/1 ( ,,.v:J,...,J-,;a / .
lcO- 1-SO ':1/1 Clb """"'~)
L" II "",k ",6r ~co
10
~ ~,c...or, cek.>lor C-Jc,b\a.3''\ .
: fUeu1e r!e ~odc el~i<>·
i Rer.dJ"""",-lu y~ IS
t:JemplQ5 tn. l,n,",1H,I~ V'l!"'" ......:.
:~~~4
3.2 6.0
~HS*S04 7H O 03. 0.'
2
~~~~~4 0.66
0.008
K2HP
N." 04 1.2
0.02
~~:?C~~O
FeSO" 7H O 0.002 0.02
2
CuS0 4 5H O 0001 40.0
2
2IIS04 7H O 0003 15aminoacidos 01'().6
2
CeCI 0028 4nucle61idos
COC1
2
2
6H O
2 0.0002 10\lItaminas 2JtlO~·~0·3
media minima caJculado pafa 6 gil, eon (NH,'2S0. como nUlfiente I1mitante y biomasa de 7.5'" N. ..
"B, medio pafa ensayo de lisina. Dilco Labofatories Inc.
Ena es debida a que al contener una variedad de moleculas orgfmicas evila a la celula ellra-
balo de sinlelizarlas a panit de glucosa y compuestos inorganicos. Par otro lade los medIa
definidos, si bien son mas onerosos, permlten un mejor control de las conchclones ambienlales
de crecimienlo y producci6n, res!Jltando lacil excluir sustancias t6xicas 0 inhibidoras e incluir
precursores e inductores en los niveles adecuados. Par ello eienas lermentaciones que requie-
ren un control ambiental estricto resultan mas ptoductivas cuando utilizan un medio definido
que un medio complejo.
L - - - - --=t'2)
('3)
_/0 ",,"'e~~ -F 11
'/. <!.!.k>& 4 CfI"'/al/ 1·
----------------- -----
Para encontrar 18 relaOOn entre ambas S8 puede recurm a f n balaQI18 de masa de la tuenla de
carbona y 8n8rgia: Jo,.f'""t4 :-cv): (tA'!'l
t'" ..,o".r ~'"
65T - 6.Sc; + 6,SM + 6,Sp t£: (14)
En Ia ecuaci6n (14) S8 expresa que al tOiai de IU5ttato consumldo S8 utlhza para creci-
mlenlo, mantencl6n y produccl6n de 81gun metabollto ex1racelular.
El termino de crecimienlo engloba 81 suslrato consumido desllnado a format parte de la
biomasa y 81 utitizado para generar la energia necesana para la biosinlesis; esta ultima porci6n
aparece como CO en la ecuaci6n (10): Ellermlno de mantenci6n S8 reriere al sustralo utllizado
2
para generar energia para tunoones dlSMlas at creclmlenlo, como son 81 transporte de nulnen-
tes, la rota06n de proteinas. el equilibno osm611co y ottas (Pu't. 1965). Elt6rmino de proclucto
puede 0 no estar presents a&Qun 81 mlroorganismo consIder ado y las condiciones de cultivo.
..l:::. Oividlendo la ecoaci6n (1 4) par 6 t y lIevandoallimlfe cuando 1-> O.
~'~I'~I'(:~I
T c M P
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- - • - - . - .. m ( - ) ('~
YM YM ~ J
= b..dra"" rdvvdo.
s.,sJ.,,;1o Cou~~d. "'"' ""ev"'fQU~
'2
TABLA 7
(mgluenle e nergia/geelulallh)
LactobaciJtuscasei 0.135
Ae robacta r cloacae 0.094
Saccharomyces carevisiae 0.036
~nici'hvm chrysogenum 0.022
CandIda vlrlls 0.170
Alobac,ervinala ndll 0.15
KlabSlalla a"ogenes 0.04
101 I bl
Fig 5 Relaei6n de YXI S con pala laluante de carbono Ve nergia. a) Relacl6n hiperb6lica entre ambos.
b) Unealizaci6n de ec.(17) en Ie que II pendian,a as m V at intercepto en II OIdenldl es IfY~/s'
mas~o:~a~o~e~e~:r~Mi!ou~~I:~~I~te;~~v~d~::~il~e;~I~le~~eSI~~~~'~~~u~:~~r:~e;~~ ~:!~~
segun se determine pOr anaHs!s. En cullivo por loles aliment ados se debe considerar las masa y
no las concenlraciones, Va que el volumen de culhvo es var.able con eillempo. En culhvO con.-
(18)
La ecuaci6n (18) conSldera que lodo el nUllienle se utihza en creciml9nto y par 10 tanto
supone nulo 0 despreclable el nutneme ullhzado para manteno6n (en el caso de la luenle de
carbono y energia) y producci6n.
13
En el caso de la fuenle de carbono se debe lamar en cuenla que no lodo el carbono mela·
bolrzado aparace an la biomasa, sino que una ciena po/cion forma pane de los productos de
oJCldaCl6n (C0 y moleculas organicas pequenas en el caso de melabolismo anaeroblo). Para
2
este caso se Ilene que:
(I!!
En metabolismo aerobio f eSla comprendido entre 0.5 y O.B, mienlras que para el creci-
mlenlO anaerobio f es aproximadamenle O. I .
Para la eSllmaci6n de Y para la 'uente de carbono y energia se han propueslos dlversos
metodos basados en los ~~ceptos de elect/ones disponibles y reduG1ancia (Abbot, 1973;
Enckson y col., 1978; Eroshin y Minkevich, 1982; Bell, 1972).
La Tabla 8 entrega valores de YxIS determinados experimental mente y pot di'lersos meto-
dos.
TABlA!
NutHenle
14
las fuenles de cada efemento que se ulihlaran como nulrienles, ademas de los requerlmientos
de lactores de crecimienlO. Los langos de concentlaciones celulares mas uhhzados apalecen
en fa Tabla 9.
TABLA 9
SO=SI+~ (21)
EI valor de S, se supone cero en primera instancia. luego los valores de S obtenidos son
multiplicados por 1.5-2.0, a excepcl6n del caso del nutriente que se quiere sea eFlim,tante.
Una forma allernallva de abordar la eSlimaci6n del Y , que resulla de gran utihdad, es la
determinaCIon del rendlmlento te611co de un metabolitoP/~ . Este parametro entrega una
eSlimaci6n delllalor maximo que se podria alcanzar en c~nye%f6n del sustralO a produclO, balO
la condlci6n ideal que no hubiera consumo de sustrato para crecimienlo ni manlenCi6n. De
15
:~:~~~UI~t~S.ecuaci6n (14) Y PIS coincide plenamente con Y PIS en 81 casc de m81abolilos
los valores de Y s pueden set Ullhzados como referencia para evaluar 81 componam,ento
de una determinada f~,men,aci6n y adopt8r declslones soble aceiones a seguir. Asi, un YPIS
muy alelado de Y P 5 es un ind,ce que ese proceso podria set malorado ,nwtiendo recurSOs
adlclonales en su intssligaci6n y desarrollo. Contrariamenle, "alOf8s de Y ~/S cercanos al limite
TABLA 10
16
l'
TABLA!!
<\re':1'"
~iI
Destino del sustl.to en 18 producci6n de
penicilina y 'eido Inosinico la' ,.".-oe-C- dO& "
% ulilizado en . / (Ij>
7
ProduCIO Cfeclmlento manlenci6n pIoduCl0
Panlcilina
Penlcillna
IMP
(')
(2)
(3)
2.
I.
25
61
57
66
I.I."
IMP
IMP
(')
(5) "
28 61
17
13
(25)
Por 10 tanto,
(27)
17
0)1 = ~~ :c X - Xp (26)
~+~ + + ~ ~o
1
i 0 tI2!J....=.
Ooode t, es el tiempo de latencia. ~
Cuando el objetivo es evaluar 0 comparar la capacldad de dlver5~ cepas j?!fa produClf un
determinado meta bolito, resulta mas adecuado utilizar Itroauctiviaa especifica: .
1 dp
q, =X- dt
z
o
;
U
e II
III
TtEMPO It
Fig 7 Ctasihcaci6n de Gaden de la prodUCCI6n de metabolitos en cultlvo pOI lotes
18
Los metabolitos tipo I 0 asociados al crecimienlo son aqueuos que se praOucsn UUICllIltl III
periodo de crecimienlo exponenclal del cultillo. EI hpo III 0 no asoclado al crecimlenlo cOr/es-
ponde a lOs melabolitos producidos durante la lase eSlacionaria, mientras que el tipo II reprs-
senta una siluaci6n inlermedia, en la que la pfOducci6n empieza en la fase lardia de crecimlento
y confinua en fase estacionaria.
Es necesario recalcar que eSla es una clasificaci6n sstriclamente clniltlca y aphcableen rigor
solo a CUllilios por lotes. Resulta interesante discUlir las semejanzas y dlferenclas de estos con-
ceplos con los de metabolito primario y secunda rio, que se basan en consideraclones fisiol6gi-
q~=+---f-=u~.B (32)
19
'-I"'''
micellales, sistemas por Ioles y continuo. lal vez la clave oe su generalloau r~~IUi:l till '-'VI 1-
liene un termino asociado al crecimiento (<<..{A..) y uno no asociado (P). por 10 que el modelo
S9 acomoda bien a dislintas situaciones segun sean los valores relativos de .(. y P .
Los modelos estructurados lambiim son numerosos y en permananle aumenlO. Puede ser
que lodavia no hayan alcanzado un grado de madurez suficiente. ya que en su mayoria no son
simples ni de aphcaci6n muy general. Como ilu5tralivo S9 puede senalarel modelo de Dean,
forrnulado en base a su tecrama de la red (Dean y Hinshelwood. 1966), que Irala al melabolismo
como una red cerrada de reacciones entre las cuates no as posible indlvidualizar una como
clave 0 limitanla. EI caso mas simple de ted as una sucesi6n de reacciones en las que el · pri-
mer· reaClante es generado por la ' ultima' reacci6n. En el caso limite de 5610 dos componentes
celulares, Y y Z (por ejemplo una polimerasa y su mensajero), se puede escribir:
~= k,Z
(34)
Estas ecuaciones se pueden generaJizar para n componentes y permiten predecir una sene
de propiedades de los cultivos microbianos, como ser el crecimiento exponenciaJ, el cred-
mienlo balanceado, el caracter oscilatorio de los sistemas biol6gicos, el requerimlenlo de un
in6culo en pleno crecimiento y otras (Pirt, 1975).
NOMENCLATURA
20
rendlmlenlo de U 2 en celUlas
rendimiento de un nutriente en producto
rendimiento maximo de un nutriente en producto
rendimiento te6rico de un nLJtrienle en producto
constanles en modelo de l uedeking y Pilet, ecs.(31)y(32)
velocidad especifica de crecimiento
velocidad especifica maxima de crecimiento
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