NORMA VENEZOLANA

ALIMENTOS.

IDENTIFICACION Y PREPARACION DE MUESTRAS PARA EL ANALISIS MICROBIOLOGICO.

(1 ra .. REVISION)

COVENIN 1126-89

La presente norma sUltituyetotalmente ~ la Norma Venezolana CaVENIN 1126-77 Alimentos. Codlfitation y prepificion de muestras p.ra el an~li~is mierobiologjco.

[OMITE:

CTIO PRODUCTQS AlIMENTICI05

PRESIDOlTE: ORA. FANNV CARRILLO DE PADILLA

SECRETARIAl LIC. GISELA PADRON

SUBCOMITEl CT10/5(3: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

COORDINADORA: LtC. GISELA PADRON

MINISTERIO DE SANIDAD Y A5lBTENC1A SOCIAL

INSTITUTO NAC10NAL DE HIBJENE

INSTITUTO NACIONAl DE NUTRItiON

UNIVERSIDAD CENTRAL DE YENEZUELA FACUlTAD DE FARMACJA

lJNIIJERSlIiAD SIMON BOLIVAR

FUNDAC ION C t EPE

ASDCIACION AMERICANA DE SOYA

BRDLAB S.k.l.

INDULAC

DISCUSION PUBLICA

FECHA DE ENIJ10; 15-08-88

DlJRACrONl .45 DIAS

FECHA DE APROBACIDN PDR EL CDHITE: 20-03-99

FECHA DE APROBACrON POR LA COVENIN: 07-06-89

\/ICMAR DE PERNIA

MIlA6ROS POLANCO MARIA LUISA NOVOA MANUELA DE BELGRAD BETS I BASTAHUO

ROSAR r 0 GAeRR I DO

FANNY CARRILLO DE PADILLA CARMEN ELENA GARCIA

SILVIA MErmOl.A

EUME.LI A. GOME Z

JOSE FELIX CHAVEZ

OLGAMAR FRANCESCHI

ZULlA SRAH M1ROSlAVA MORLES

NORMA VENEZOLANA AUMENTDS IDENTIFICACION Y PREPARACION DE MUESTRAS PARA EL ANALISIS MICROBIOLOGICD

COVENIH 1126-89

l r a , REVISION

Esta norma es completa.

Esta Norma Venezo!ana contempl~ el prccedimiento a seguir para la identlfjcaci~n y prepax.aciOn u9ptica til! la·s. Iiluestras destin.adas· 031 analisis microbio!ogito a fin de ast!gUTill" 1.11. obtenciOnde resultados valerle·ros, c;onfiables y'reJ]l"ododbles Y proteger tanto a las lIIuastras como 031 personal de laboratario de posibles c ont ami n.iIt ion es .

3.1 UCl!ada.ra. de do!! velDcidades 0 velocidao simple con control reostlltico, que opere a una velocidad no menor deB.OOO r.p.m.y no mayor de 45.000 r.p.iII.

3.2 HOIil0gen~i~ador mBc~nico (STOMACHER), que opere a 230 r.v.m., con una

capacidad de 400 mI.

3.3 Jarra met~lica 0 de vidrio, de 250 ml a 1000 ml de ~apac'dad, provista de

tapa) debidament~ esierilizadas.

3.13 Bol sas de poll eti lena de paredes delgBdas y fonde sell ado ;de 18 Cfll X 30 CII! X 250 81 d&bidamente esterilizadas.

3.5 Belanza de 2.000 9 de capacidad y una apreciacibn de 0,1 g.

3.6 £nvases apr op i ados uti., i 1 es r para c ont&n sr 1 as fIIuestr as.

3.7 Fra.scos c on capaci dad p ara tontener 90',99 y 4,50 1111 de di I uente.

3.B Inst~umento5 para prepsrsr las muestras: cuchillD5, e5p~tulas, tenedores,

pinzas, tijeras, cucharas y atros, debioamente esterili~ados.

3.9 Pipetas graduadas est~riles, de 1, 2, 5, 10 Y 11 mi.

3.1.0 Tubas de ensayo esUrUes de 16 111m X 160 film, 18 ffi.1II X lao 11'1111, 20 IIHt! X 200 mill U otros apropiados.

3.11

Autoclave. hortzontal 0 vertIcal.

3.12

Horno de Bire calie~te ~e temperatura regulable (entre lbO - ISO ~I

3. !3

Re fr i g~r CIder.

3. iii

Barlo de aqlla.

3. 1!5

Termo!lletro.

4.1 DILUEN1E5 iVfase anexo II

4.1.1 SeluciOn tampon fosfato a p~ 7,2 (SolutiOn de Butterfield).

4.1.1 Aqua peptonada al 0,1%.

~Q!fl = Para e 1 c as oel e al gUODS mi e r oor ga'.ni smos -0 ill i men t O£ Esperi f j c as don d e sea

he-cesar) 0 utili z ar otros c1Ul.lentes, sa ccnsut ter an laS nor nas respectiv<!s.

EI m~teria} a ensayar conslste en una muestra representatlva del alimento IVer

bib)iografia inciso d} •

•• 1 IDENTIFICACION DE LA MUESTRA

6.1.1 Al lie-gar la IlllJest.r<l al liil'boratorio deoera an o t ar s e l a fecha d:e jle'gad'<I y aSlgnarse un n~mero para e1 an~lisis, a ~in de prateder posteriormente <I su lebioa identificati6n tomando nota de los asp~ctos si~ulentes=

6.1.1.1 Condiciones en Que 51'2 reci~io la IUeStra. tales romol

a) h:mperatu.ra t e n c as e de que 1a l!Iuesira requi€ra refrigeration [) tOIH)ej.atlon)"

b) Aspecto eNterno del envase lsi est6 roio, oestapado, clerre no hermetico. II present a o~idaci.on, D_ombaje, ab nt l adur-a.s , etc."!.

t) As,petto ex t er no _del produr.to. en taso de que este pu;eda s'er observado.

6.1.1.2

La ~uestra debe-fa astar acompa~ada de la siguiente informacidn=

al Ferha de toma de la mue-sira

oj Nombr& y tipo de producto

t-

c) ~~r[a· comercial

dl Fabril:ante y/e e i st r ibu idc r ,

eJ NUmero del lote de tabrlCacion.

fJ Conte-nice neto del anvase.

gJ lng-reoientes

h) Facha de fabricacion y/c vencimianto.

I) Cualquler o t r a i n+or nac i on que s i rv a de cri antac inn para e1 an~11S1S

mi.crobiciOgico, ejemp1o: diagrama de flujo del prote-so u ct r a .

h.1.2

[;onserVi!C10n de 1 a .mLlestr a prev·i 0 a su anal 151 S.

6.1.2.1 Las mue-stras deber~n sar ~naljzadas 10 mas pronto posibie una Nez

fscibidas en 91 laboratorlO.

6.1.2.2 Si el analisjs debe ser posterqedo se almacenan las ffiu9stras conqeladas a - 20°C. Las muestras refriqeradas se deben ajmac~nar entre 0 - 4.4~ por no m~s dv 36 noriS.

b.l.2.3 En el caso de muestras no pereceueras, *stas deberan almacenarsl! a

temperatura ambient~ ~n un lugar secD y fresco.

6,1.3 Cuando 51! ,pr o c e d ... a hacer s I an a I isi s debl! tOlliatse' nota del asp·ecto oe 1 a

muestra: color, olor, ron53stencia, tl!~tura. Debe eVltarSI! l~ evalUatlon del sabor de 1a .uestra.

6.2 PREPARAtION OE LA MUESTRA

6.2~I."J £1 sHin dORdese rep1!zara e I anal i s i s IiIjUOblOlogi.CD deberoi reun i r las condiciones de asepsia inoispensables. £1 material y equlpo a utilizar deben estar convenientemente preparados, ident1ficados y 11StoS para IOU usa.

6.2.1.2 Cuando SI! abra el recipientl! con la muestra debe evitarse cualquier tipo de contaminaclon.

~9I8: Si no 59 dispone ae cabinas especiaJes, d.ben abrlr5e primero los protiuctOI que se supone uel1en mener carqt! nl1C.fObl!\na (p a s t eur r z adas , p r e c o.c i dns) V por ultimo los crudos 0 desecado5, feto e5 con la flnalldld de preventr 1& contamination del area de trabajo y asi evitar contamlnaclones cruZBdas.

6.2.1.3 Las lata" Jarras y otras re(lplentes cerraoos deber," lavarse y deSlnfl!ctar el ~rea de preparaclon de la muestra mediante algun agente

.t~,l c cno eJ aj~onoJ tie 70", (II r.u al lOB elimina a La JlaflHI 1flamea.doi.

deben flamear aouellos enVilse! 0 empaques que puedan da~arse ylo e~pIotar.

secarS9; aoecuado :!ilo 59

~Q!a: En cas~ d~ que se requieran condiciones de asepsia mas ~strlttas Iprueba del deteriore microbiologicol deDen utiill.rse edemas otros deSlnfectantes, tales como elaltohol vnd s d o (2 i: de vo e o l y compuestos deriv?dos de amonio t uat er nar i a .

3

Daban utlllzarse eabi~~s espetjaJe~ (flujo lamiAar). 51 no se dispone ~e estas,

deberan utilitarse ~reas desinfectadas y protegidas de las corrlentes de aIrs.

6.2,1.4 Cuando.l producto este envuelto en cart6n, pape! (elof~n. papel alu.inio y ~ualquier otro material de emDaque Slmilar, ~ste ~eber* llmpj~rse con una tela 0 aspon)a hu~edeci~a con un agente desinfeetante (alcohol de 700! para ell.inar 1. contaminaCl6n superficiai y el palvo. Debe aarse una eten~iOh esaecla! al area de abertura del empaQue a envase.

6.2.1.5

Depe tomarse una muestra representativa del allmento.

6.3 TRATAHIENTO DE LA MUESTRA SEGUN SU EST~DU FISICO

6.3.1 Si sa trata de alimentos liquitlcs 0 material ~ue fluva libremente, envasados I?n recipientes pequeNO'?, debe aQitarse por 25 veees hacienda ur; angulo de 4So con el brazo 0 por rotatIon del recipiente nasta que e1 contenido sea hDmoq~neo. En el caso de ~ue los recip1entes sean grandes y ~e difitll ManalO se deban tamar muestras relresent~tlvas Y trasvasarlas asjpticamente a anvas!?s est~riles ~'s peque~DS.

6.3.2 51 la .uestra esta congeladal se deja deseongeiar en

orlQinaJ 10 en el cual se recibi6 en el laboratorial par un periodo a 4SOC ~n ba~o de aqua mezelando continuamente 0 18 heras entre 2 y Sf I a muestril. conge1 ada puede traba)arse +ad illiente (ej. un hela.llo) d esc: enge 1 ar '.

su reciplente de 15 minuto~ 5°C.

se procede sin

6.3.3 5i elmateria.l as solido caban tOA)iilfSe portiones de dlferentes .. i t i c .. del

prooutto para tener una lIIueatra representatlva.

6.3.4 tuaneo Sf: tanga un materjal de dillej] manejo debe eolotarseen un reciplente nr anue y esteril, romperse en peQu,e.,os trozos usando rnetodoa iI.,decuados baJo condiciones aseptlcas y de alII se toma una muestra, la cual se tr~nsfiere a un reciPlentE': esteril.

6.3.5 Si e1 contenidodel e nv e se as lIeteraqenee, 51? prep~ra una lIIe2Cia homoCjr!l1ea de todD 5ucontenido 0 Ie an~llzan porClenel gepijradas del milmc d~pendienoo del prop6sito del ensayo.

~QIa; En c~so de alimentos Que presQnten una euoiertanatural ihuevo .. , cstras, &~c), I. mDdifioaei6~ en 1a preparaciOn d~ la maestra Ie esps[lficarA en ja norma parti~ular.

6.4 HO«OGENEIZACION Y PREPARACION DE LAS DIlUCIDNES

6.4.1.1 Se pesan 10, 25 0 50g ! Oll de la muestr. en una Jarra, fraseo aproplado o en balsas de peltetileno, estariLel, prevlamente tarados,

6.4.1.2 Sa OIria.den 90, 2250450 &1 dediluente tespectivamente \SOlUClon ta'mpon fosfato 0 aqua peptonada al 0,1 ~ I.

4

6.4.1.3 5e hOIDogenelza por no mas de 2 mInutos a BOOO r.p.n ••

- 3 minutes hasta que desaparezea 101 espu.a fermada. En el casp

homogene .. i z adnr mecanico (Stomacher) 51'! agita Iii muestra par un segundO!;.

Jiebe esperarse t de emplean.e un tiempo oe 60

En eJ caseete a.lime.nt,os solido; c'u.ya f-lora ~Ii.crolliam.\ est~ limitada a r a

sup er j i c ia tmani., nueces, alme-ndra!2., pasas.! at"eitunas sin deshuesar U otros) Sl? pesan 50 q Y sa aRaden 50 m1 del diluente, s& aqita vigarosamente 50 ve~es en un angulo de 45°'. Cada ml de. I .. soluciOn dE! -en ruaque 5E'ra eouivalente-a 19 de muestra.

NOTA 2: Cuando Sf analicen aljmentos con alto tontenldo de qras~ (mayor de 20X) 0 i~i;o; que formen grumos~ pueden a~adirs~ al diluente, agentes humectantes tales como &1 tergltol 7 anionieo (1 ~ p/v) para f~ci11tar Ii emulsiticaeiOn(EJI Quesos, crema de leeh.e, mantequllla, c nor i z o , albLlm1na).

."

~Q!B~: Be re[o~ienda tom~r Slempre que sea posible, Is mayor cantidad de muesira 150 gJ a fin de obten~r resultados mas eon+iables.

6.4.2.J Se miden con una pipeta 10 u jj ml ~e Ii muestra y se transfie~en a un

Frasco de d1lucion ~ue contenga 90 099 m1 respectiva~ente ae ~iluente (tampdn fosfato 0 agua peptonada). En el caso de mtlestras muy viscosas (Ej~ Chicha, jarabes, leche condensada, yogurt, cre~a de leche, pulpas de frut~$1 ~stas d~ben pes.rse. En el caso de muestras liquiDas con etevaoa c~ntlDad de g~s (refresco5, malta, agua mi.nersi gu:ificsds) dlibell t r e svas er s e a un r e r a p i ent a est~ri I V agitar por rotacj6n durante 15-30 mlnutos hasta que liberenel gas.

6.4.2.2 La ~ue5tra 59 agita luego 25 veees, bien sea por un movi.iento del braz~

en un ~nQulo de 45° 0 por rotaciOn del recipiente en diferentes sentleas.

~Q!e: La homogeneizati6n de Ie muestra, bjen sea salida a jjqUlda en Iii ~orma

il n t es d Ii! S C r it a, cor r es p on d e a J apr i Iiler it d 11 uc ion (J 0 ~J ).

6.4.2.3 A partir de Ia primera dilUcl6n obtenida en 6.4.2.1 y 6.4.~.~ se procede De Inmedlato a preparar las dilucions! neC9sarias de Ia slgulente +orma=

0.4.2.,3.1 Se mide 1 iii I de]a e i Iuc i cn 10-1 v;;e tra.nsfiere a un tubo que cont eriqs 9 ml tie cit iuerlte 0 10 u 11 rn] de h di lucian 10.1 y se transfiere a. un frasca de dilucibn ~ue conten~iI 90 0 99 rnl resperttvameQte de dIluente pars cbten~r Is

d i Luc i on 1(1-.2

S@ a q i t e 131 tube 0 frasco u t i l i z a.do 25 veces, bien sea per un movlmiento del hraz o @n un anqu l c de 45°0 por r o t ac i on del recioiente en diferentes sen t i uns ,

b.4.2.J.2 Se repit@ Este proceoimiento a fin oe obtener las otres

ne c e s arr a s para e1 an a l i s i s (10-3 J, (1fJ""') etc. Cl aque Llas que

experlencia necesite el ailmento 0' ffilcraorganlsmo obJeto de anal iSis.

dilutione", segun 101

La inoculaciOn del medio se debe IJevar a cabo dentro de los 20 minutos

.igui~ntes a la preparaelon de las diluciones.

5

I r'

a.- ICM5F. 1980. MicroorganiSms in foods. 1. Their signifIcance and methods of enumeration. The lnternational ~omm,sion on Hicr~biologicaj Specificatioh of foods. Editoria.i. University of Toront-oE'ress. Toronto. Canalia..

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f---

l}~s!Q 1

~Q~~~b~ Y E~§EeB~~!Q~ ~€ bQ§ ~!b~€~!€§ B€QygBIQQ~ E88a be EB~E~8B~!Q~ Q~ ~y§§!~a~ eeae §b 8~Bb!§!§ ~1~8Q§!QbQ§!~Q

Fosfato II i at i ti~ de: potasi 0 iKH 2 PO 4 )...................... 34 q

AgllC!: tlestilada •· " c.s.ll. 1000 illl

L 1.2

.'

5e disuelve el toshto eisc i d.o tie pot.asio en 500 .Ill de agua destilada, s e aju!5tC1 a. pH 7,2 con aproximadamente J75 ml tie NaOH 1M. Se diiuye a 1 litro, SE' e5teriliza a 121°C por 15 minutos y 50e almace~a balD refrigera~lon.

Se diluye 1,25 ml de 5oDlu~i6n madre hasta i litr~ con aqua destilada. 5e reparte la solutiOn en frascDs a tubas de dlluciOn adecuados. 5e esterlli2a s 121GC par 15 mi nUt05,

Pp.ptana

, • II _ f' •• " •. , , " II ~, ! " .. " , f .. '" ',.",. " I cjo It II' 10 • ~ ~ '" •• f ..

Agua destila,da

j. ~ ••• ~ •••.• ,.~ .. !".,I j .' .. ~.'I"i ~. p,. ~ II ~ ~ ii iI •• 1i ii'.;

1 (lOO 1111

Se disuelve la peptone en el aqua destilada y se ajusta eJ pH d~l media de manera que despu~s de Ia ssterillzaciOn sea de 7,0 ± (},1. Se dl5trlbuye p.n porciones adecuadajl en 10·5 f:rascM 0 tubes de d.i l uc i cn y 58 e s t er i Li z a a 121 ac per 15 minutes, t~n:;'{.endQen cuan t a las p ar o i c as por avap or a c r cn que ccurr-an durante la ester ill Z .1C1,on.

COVENIN 1126 - 89

COMISION VENEZOLANA DE NORMAS INDUSTRIALES MINISTERIO DE FOMENTO

Av. Andres Bello Edifo Torre Fondo Comiin Pisos 11 y 12 Telf. 575. 41. 11 Fax: 574. 13. 12

CARACAS

publicaci6n de:

cnu, 641.576.8.08

FONDONORMA

Cualquier traduccion 0 reproduccion parcial o total de la presents Norma debora ser aurorizada por cl Ministerio de Fomento

ISBN: 980 - 06- 0382 - 4