ESARROLLO DE LA ESCHERICHIA COLI EN MEDIO

LIQUIDOOBJETIVOOBJETIVO::Construir una curva de relación para la medida

indirecta del crecimientoConstruir una curva de relación para la medida indirecta del
crecimientodiversas bacteriadiversas bacterias E. s E. colicoliInocular unos medios de
cultivo liquido de la bacteria Escherichia coliInocular unos medios de cultivo liquido de
la bacteria Escherichia colipara observar su crecimiento en el tiempopara observar su
crecimiento en el tiempoMARCO TEORICOMARCO TEORICOMMeeddiioos s
llííqquuiiddooss: : SSoon n lloos s qquue e sse e pprreesseennttaan n een n eesstte e
eessttaaddoo,,denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado
esdenominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado esel el
llallamadmado o calcaldo do nunutritritivtivo, o, cocompmpueuesto sto
prprinincipcipalmalmenente te eetratracto cto dedelevadura, tripteina de so!a
caldo , cloruro de sodio ! a"ua destilada.levadura, tripteina de so!a caldo , cloruro de
sodio ! a"ua destilada. Se utiliza #undamentalmente cuando se pretende la obtención
de una Se utiliza #undamentalmente cuando se pretende la obtención de
unasuspensión bacteriana de una determinada concentración. Cuando sesuspensión
bacteriana de una determinada concentración. Cuando sea$ade una peque$a
cantidad de c%lulas vivas a una disolución líquidaa$ade una peque$a cantidad de c
%lulas vivas a una disolución líquidaque contiene nutrientes esenciales a p& !
temperatura adecuados, elque contiene nutrientes esenciales a p& ! temperatura
adecuados, elcultivo crece.cultivo crece.El crecimiento tiene dos mani#estaciones
di#erentes se"'n la naturalezaEl crecimiento tiene dos mani#estaciones di#erentes
se"'n la naturalezade las c%lulas implicadas. (ara or"anismos unicelulares, que se
dividende las c%lulas implicadas. (ara or"anismos unicelulares, que se dividencuando
crecen, el aumento de biomasa va acompa$ado del aumento delcuando crecen, el
aumento de biomasa va acompa$ado del aumento deln'n'memerro o de de c%c
%lululalas. s. ((or or tatantnto, o, el el prproboblelema ma se se plplanantetea a
cocomo mo el el dedecrcrececimimieientnto o de de la la popoblblacacióión
n )u)urarantnte e el el crcrececimimieientnto o de de ununa a c%c%lululalaocurren
otros dos procesos asociados: captación de ciertos materialesocurren otros dos
procesos asociados: captación de ciertos materialesddel el mmedediio o ! !
lilibbeerracacióión n dde e prproodduuctctoos s mmeetatabbóólilicocos s **nnalales es
a a lolossalrededores.alrededores. +a velocidad de estos procesos varía mucho a lo
lar"o del crecimiento +a velocidad de estos procesos varía mucho a lo lar"o del
crecimientocelular, ! la compleidad de los modelos que proporcionen la
descripcióncelular, ! la compleidad de los modelos que proporcionen la
descripcióncin%tica adecuada depende de la compleidad del cultivo ! del
obetivocin%tica adecuada depende de la compleidad del cultivo ! del obetivocon
el que se plantee la cin%ticacon el que se plantee la cin%tica-ase de latencia, en la
que no se produce un aumento sustancial del-ase de latencia, en la que no se produce
un aumento sustancial deln'mero de c%lulas ! en la que tiene lu"ar la adaptación al
medio !n'mero de c%lulas ! en la que tiene lu"ar la adaptación al medio !condiciones
de cultivo.  continuación se inicia la #ase de crecimientocondiciones de cultivo. 
continuación se inicia la #ase de crecimientoeeppoonenencnciaial, l, en en la la
quque e el el crcrececimimieientnto o se se e#e#ecect't'a a a a la la
vevelolocicidadaddeespspececí*í*cca a coconnststaanntete. . En En eeststa a #a#ase
se se se ppuueedde e coconnsisiddereraar r qquue e eellcrcreecicimmieiennto to
eeststá á bbalalanancceeaadodo, , een n el el sesenntitiddo o dde e qquue e nno o
eeiiststeennlimitaciones ! el comportamiento metabólico ! *sioló"ico de las c
%lulaslimitaciones ! el comportamiento metabólico ! *sioló"ico de las c%lulases
básicamente constante /a veces se de*ne como un comportamientoes básicamente
constante /a veces se de*ne como un comportamiento
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pseudoestacionario0 -inalmente se lle"a a una #ase de muerte celular,en la que
decrece el n'mero de c%lulas: una vez que se a"otan lasreservas de nutrientes,
los microor"anismos metabolizan su propiomaterial celular, sin que ha!a reposición, de
#orma que tiene lu"ar ladestrucción de las c%lulas /respiración endó"ena0.
1urbidimetría: +aturbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido
apartículas de una suspensión ! cuanti*ca la luz residual transmitida.Estudios
teóricos ! eperimentales han mostrado que soluciones diluidasde di#erentes tipos de
bacterias, independientemente del tama$ocelular, tienen casi la misma absorbancia
por unidad de concentraciónde peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones
diluidas, laabsorbancia es directamente proporcional al peso seco,independientemente
del tama$o celular del microor"anismo. Sinembar"o, se encuentran absorbancias mu!
di#erentes por partícula o por2-C /2nidad -ormadora de Colonia0 cuando los tama$os
de las c%lulasbacterianas son di#erentes. (or esta razón, para estimar el n'mero
demicroor"anismos tota3les o el n'mero de microor"anismos viables deuna suspensión
bacteriana debe realizarse una 4curva de calibración4con cada tipo de
microor"anismo, sólo de esta #orma es posiblerelacionar bsorbancia /)ensidad
5ptica0 con el n'mero demicroor"anismos totales o con 2-C.FLUJOGRAMA DE
PROCEDIMIENTO6lancoSembrar una colonia"itar periódicamente2tilizar el blanco
paraMedio líquido78 ml "uardar a9 C despu%sMedio liquido78 mlIncubar aMedir
laabsorbancia a=98 nm

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Calibrar el instrumento>uardar el cultivo bacteriano a 9CCALCULO DE LA
PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVOEtracto de levadura7" ?888ml@ 78ml@A
8,B7"Cloruro de sodio 1ripteina so!a caldo;7" ?888ml@ 78ml@A ?,<7"?8" ?888ml@
78ml@A 8,7"epetir el proceso ;+a muestra se utiliza enla si"uiente práctica

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REGISTRE EN LA TABLA DE MEDICIÓN EN ELESPECTROFOTÓMETRO
VERSUS ABSORBANCIADeterminacine!Tiem" #ra!a$!r%ancia ??8,?
=DB;?,9=;;?7?,9989??,=?<?B;97=<D?8???B?;?9?7 ?= ?<88.B8.98.=8.D??.B?.9?.=?.Da$!r
%anciaOBSERVACIONESealizar la practica con cuidados ! mediciones correctas
para lapreparación de cultivo. 1ener en cuenta el remover la medio de cultivo cada 8
min para quesi"a el crecimiento bacteriano.ealizar de manera cuidadosa las lectura
de en el espectro#otómetro !evitar la contaminación del medio.CONCLUSIONES

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Se inocularon correctamente unos medios de cultivo líquido con labacteria Escherichia
Coli para un posterior análisis de absorbancia en elespectro#otómetro, proceso que se
repitió cada 8
minutos.BIBLIOGRAFIAhttp:FFGGG.u"r.esFHclFmediosB8deB8cultivo.pd# ht
tps:FFlibroslaboratorio.*les.Gordpress.comFB8?
BF8Fmedios3de3cultivo3en3un3laboratorio3de3microbiolo"c;ada.pd# https:FFprezi.c
omFssnzrtvat<rFdeterminacion3de3la3curva3de3crecimiento3de3la3bacteria3escF
DESARROLLO DE LA ESCHERICHIA COLI EN MEDIO LIQUIDO
DESARROLLO DE LA ESCHERICHIA COLI EN MEDIO LIQUIDO
OBJETIVO
OBJETIVO
::
Construir una curva de relación para la medida indirecta del
crecimiento Construir una curva de relación para la medida indirecta
del crecimiento diversas bacteria

diversas bacterias E. s E. colicoli

Inocular unos medios de cultivo liquido de la bacteria Escherichia coli

Inocular unos medios de cultivo liquido de la bacteria Escherichia coli
para observar su crecimiento en el tiempo

para observar su crecimiento en el tiempo

MARCO TEORICO
MARCO TEORICO
M
Meeddiioos s llííqquuiiddooss: : SSoon n lloos s qquue e sse e
pprreesseennttaan n een n eesstte e eessttaaddoo,, denominándose
por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es
denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado
es el

el llallamadmado o calcaldo do nunutritritivtivo, o, cocompmpueuesto

sto prprinincipcipalmalmenente te eetratracto cto dede levadura,
tripteina de so!a caldo , cloruro de sodio ! a"ua destilada.

levadura, tripteina de so!a caldo , cloruro de sodio ! a"ua destilada.

Se utiliza #undamentalmente cuando se pretende la obtención de una

Se utiliza #undamentalmente cuando se pretende la obtención de una
suspensión bacteriana de una determinada concentración. Cuando se
suspensión bacteriana de una determinada concentración. Cuando se
a$ade una peque$a cantidad de c%lulas vivas a una disolución líquida
a$ade una peque$a cantidad de c%lulas vivas a una disolución líquida
que contiene nutrientes esenciales a p& ! temperatura adecuados, el
que contiene nutrientes esenciales a p& ! temperatura adecuados, el
cultivo crece.

cultivo crece.

El crecimiento tiene dos mani#estaciones di#erentes se"'n la naturaleza

El crecimiento tiene dos mani#estaciones di#erentes se"'n la naturaleza
de las c%lulas implicadas. (ara or"anismos unicelulares, que se dividen
de las c%lulas implicadas. (ara or"anismos unicelulares, que se dividen
cuando crecen, el aumento de biomasa va acompa$ado del aumento
del cuando crecen, el aumento de biomasa va acompa$ado del
aumento del n'
n'memerro o de de c%c%lululalas. s. ((or or tatantnto, o, el el
prproboblelema ma se se plplanantetea a cocomo mo el el dede cr

crececimimieientnto o de de la la popoblblacacióión n )u)urarantnte e

el el crcrececimimieientnto o de de ununa a c%c%lululala ocurren otros
dos procesos asociados: captación de ciertos materiales ocurren otros
dos procesos asociados: captación de ciertos materiales d

del el mmedediio o ! ! lilibbeerracacióión n dde e prproodduuctctoos s

mmeetatabbóólilicocos s **nnalales es a a loloss alrededores.

alrededores.

+a velocidad de estos procesos varía mucho a lo lar"o del crecimiento

+a velocidad de estos procesos varía mucho a lo lar"o del crecimiento
celular, ! la compleidad de los modelos que proporcionen la
descripción celular, ! la compleidad de los modelos que proporcionen
la descripción cin%tica adecuada depende de la compleidad del
cultivo ! del obetivo cin%tica adecuada depende de la compleidad
del cultivo ! del obetivo con el que se plantee la cin%tica

con el que se plantee la cin%tica

-ase de latencia, en la que no se produce un aumento sustancial del -

ase de latencia, en la que no se produce un aumento sustancial del
n'mero de c%lulas ! en la que tiene lu"ar la adaptación al medio !
n'mero de c%lulas ! en la que tiene lu"ar la adaptación al medio !
condiciones de cultivo.  continuación se inicia la #ase de crecimiento
condiciones de cultivo.  continuación se inicia la #ase de crecimiento
e
eppoonenencnciaial, l, en en la la quque e el el
crcrececimimieientnto o se se e#e#ecect't'a a a a la la
vevelolocicidadadd e

espspececí*í*cca a coconnststaanntete. . En En eeststa a #a#ase se se

se ppuueedde e coconnsisiddereraar r qquue e eell cr

creecicimmieiennto to eeststá á bbalalanancceeaadodo, , een n el el

sesenntitiddo o dde e qquue e nno o eeiiststeenn limitaciones ! el
comportamiento metabólico ! *sioló"ico de las c%lulas limitaciones ! el
comportamiento metabólico ! *sioló"ico de las c%lulas es básicamente
constante /a veces se de*ne como un comportamiento es básicamente
constante /a veces se de*ne como un comportamiento

(2)
pseudoestacionario0 -inalmente se lle"a a una #ase de muerte celular,
en la que decrece el n'mero de c%lulas: una vez que se a"otan las
reservas de nutrientes, los microor"anismos metabolizan su propio
material celular, sin que ha!a reposición, de #orma que tiene lu"ar la
destrucción de las c%lulas /respiración endó"ena0. 1urbidimetría: +a
turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a
partículas de una suspensión ! cuanti*ca la luz residual transmitida.
Estudios teóricos ! eperimentales han mostrado que soluciones
diluidas de di#erentes tipos de bacterias, independientemente del
tama$o celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de
concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones
diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco,
independientemente del tama$o celular del microor"anismo. Sin
embar"o, se encuentran absorbancias mu! di#erentes por partícula o
por 2-C /2nidad -ormadora de Colonia0 cuando los tama$os de las c
%lulas bacterianas son di#erentes. (or esta razón, para estimar el
n'mero de microor"anismos tota3les o el n'mero de microor"anismos
viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una 4curva de
calibración4 con cada tipo de microor"anismo, sólo de esta #orma es
posible relacionar bsorbancia /)ensidad 5ptica0 con el n'mero de
microor"anismos totales o con 2-C.
FLUJOGRAMA DE PROCEDIMIENTO
6lanco

Sembrar una colonia

"itar periódicamente

2tilizar el blanco para

Medio líquido 78 ml "uardar a 9 C despu%s Medio liquido 78 ml

Incubar a  Medir la absorbancia a =98 nm

(3)
Calibrar el instrumento

>uardar el cultivo bacteriano a 9C

CALCULO DE LA PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

Etracto de levadura 7" ?888ml

@ 78ml

@A 8,B7"

Cloruro de sodio
1ripteina so!a caldo

;7" ?888ml @ 78ml @A ?,<7" ?8" ?888ml @ 78ml @A 8,7" epetir el

proceso ; +a muestra se utiliza en la si"uiente práctica