Laboratorio de Bioquímica QIM117 1° Semestre 2018

INFORME DE ANÁLISIS DE RESULTADOS

PRÁCTICO Nº3

Nombre: Israel Alejandro Moreno Molina Sección: 3 Fecha: 09 /04 /2018

1. Calcule las concentraciones correspondientes. (1.0 punto)

[PNPP] p-nitrofenol v0
N° Tubo A410nm
(mM) (M) (M min-1)
Sin inhibidor
1 0,8 0,199 0,00069 0,00023
2 1,6 0,263 0,00091 0,00030
3 2 0,355 0,0012 0,00040
4 4 0,559 0,0019 0,00063
5 6 0,549 0,00219 0,00073
6 8 0,727 0,00253 0,00084
Con inhibidor
7 0,8 0,146 0,00050 0,00016
8 1,6 0,216 0,00075 0,00025
9 2 0,209 0,00072 0,00024
10 4 0,257 0,00089 0,00029
11 6 * - -
12 8 0,321 0,0011 0,00036

* El Dato se descarto por orden de la profesora a cargo del practico

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2. Grafique de acuerdo con Michaelis-Menten el comportamiento de la enzima

en ausencia y presencia del inhibidor. (1.5 puntos)

Grafico Michaelis-Menten 1 “Enzima sin inhibidor”

Grafico Michaelis-Menten 2 “Enzima con inhibidor”

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3. Complete la Tabla 2 e indique los cálculos correspondientes. (0.5 puntos)

1/[PNPP] 1/v0
N° Tubo
(mM-1) (M-1 min)
Sin inhibidor
1 1,25 4324,90
2 0,625 3272,45
3 0,5 2424,38
4 0,25 1539,63
5 0,166 1363,95
6 0,125 1183,84
Con inhibidor
7 1,25 5894,90
8 0,625 3984,51
9 0,5 4117,97
10 0,25 3348,85
11 0,166 -
12 0,125 2681,17
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4. Grafique de acuerdo con Lineweaver-Burk el comportamiento de la enzima

en ausencia y presencia del inhibidor. Obtenga las ecuaciones de la recta
correspondientes y determine Km y vmax. (2.0 puntos)
4.1 Gráficos

Grafico Lineweaver-Burk 1 “Enzima sin inhibidor”

Grafico Lineweaver-Burk 2 “Enzima sin inhibidor”

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Grafico 3 “Enzima con y sin inhibidor”

4.2 Determinacion de Km y Vmax

1/V0 = Km/Vmax * 1/[PNPP] + 1/Vmax

Se determina Km y Vmax a partir de los interceptos del grafico 1 de la

siguente forma:
Intercepto en Y = 1/Vmax
Y = 952,33 = 1/Vmax
Vmax = 1,05*10-3 M*Min-1
Intercepto en X = -1/Km
X = -0,33 = -1/Km
Km = 3,03 mM

Para determinar que tipo de inhibicion ejerce el fosfato en la enzima se

determina Km y Vmax en el grafico 2 de la misma forma:
Interepto en Y = 1/Vmax
Y = 2520,8 = 1/Vmax
Vmax =3,96*10--4 M*Min-1
Intercepto en X = -1/km
X = -0,933 = -1/km
Km = 1,07 mM
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α’ = 0,353

5. De acuerdo con sus datos indique el tipo de inhibición que ejerce el fosfato
en la reacción enzimática. (1.0 punto)

El Fosfato ejerce una inhibición a competitiva ya que a base de los gráficos

presenta un comportamiento paralelo a la recta sin inhibidor y disminuye
tanto su Km y su Vmax en un factor de α’.

Considerando esto, la ecuación respectiva para este tipo de inhibición es:

1/V0 = Km/Vmax * 1/[PNPP] + α’/Vmax