Vacuna rHVT/ILT

Juan Francisco Ríos Cambre

MSD Salud Animal México
 Desarrollo
• Determinación del gene promotor
• Promotor = gene responsable de activar (promover) a un gene
determinado de la secuencia para comenzar a transcribir en
un ARN mensajero (mARN), el cual transcribirá a su vez la
secuencia de una proteína específica
• Sinónimo = es el responsable de iniciar el estímulo de la
expresión
• Factor clave en el desarrollo de una vacuna recombinante

7/16/2014 Presentation Name

 Desarrollo
• Determinación del plásmido bacteriano para la construcción del plásmido
recombinante
• Los genes del donador se ensamblan junto con el promotor y el sitio de
inserción del genoma del virus HVT en el plásmido
• El plásmido se clona en E. coli, éste se lisa para cosecha de los plásmidos
clonados y posteriormente se separa en paquete génico (“construct”)
• Transinfección con virus HVT y ADN de HVT y paquetes génicos en
fibroblastos de embrión de pollo, tinción específica, cosecha de placas con
tinción positiva

7/16/2014 Presentation Name

 Construcción del rHVT/ILT
• Extracción de grandes cantidades de ADN de HVT
(varios µg)
• Transinfección en cultivo de células de fibroblastos
de embrión de pollo SPF:
– ADN extraído de HVT + ADN del plásmido recombinante
purificado, se mezclan y se inoculan en el cultivo celular
– Se practica una inmunohistoquímica específica
• Cosechado de placas de efecto citopático con tinción
positiva

7/16/2014
Vacuna recombinante
Presentation Name
rHVT/ILT
vLTI Extracción del genoma ILT

HVT
región US54 no esencial

“Corte” del gene F

Plásmido de
transferencia

HVT
Seq US54.
ILT gen gI Cultivo de
gen gD
E. Coli
HVT
Seq US55.

7/16/2014 Presentation Name

 Construcción del rHVT/F

D I
US54 US55

7/16/2014 Presentation Name

Construcción del rHVT/ILT (animación)
Genoma viral ILT DNA
Gen I Gen D

Genes I/D
Promotor Terminador

Genes non esenciales HVT

Plásmido recombinante
ADN

Transformación del plásmido en E.coli

Plásmido clonado en cultivo de E. coli

7/16/2014 Presentation Name

 Aspectos de importancia
• Factor crítico: estabilidad.
– Pruebas de ensayo y error en múltiples intentos
– ¡Casi siempre la expresión de antígenos se pierde
después de n generaciones!
• Cuidado de las patentes:
– Sitio de inserción
– Genes promotores y terminadores y cassette
definitivo (conjunto de gen promotor/genes del
donador/gen terminador)
 Ventajas de HVT vs. Viruela
• Virus vacunal seguro, apatógeno natural
• Se aplica en todo tipo de aves al día de edad o “in ovo”
• Una sola aplicación es suficiente para conferir inmunidad de por vida
(persistencia) contra sus antígenos y los insertados
• El HVT se propaga tras infección vía célula a célula, sufriendo
relativamente poca o nula interferencia con anticuerpos maternos
• El virus de la viruela se puede neutralizar con anticuerpos maternos
• El vector de viruela estimula esencialmente inmunidad humoral (corta
duración de la inmunidad, sin persistencia), contra el antígeno insertado.
• Los equipos de vacunación en la planta de incubación son más fáciles de
supervisar y sufren menor rotación de personal
7/16/2014 Presentation Name
 Herramientas actuales
Tipo Características
CEO (embrión de pollo) Diseminación horizontal
muy eficiente, reversión
de patogenicidad
TCO (cultivo celular) Diseminación horizontal y
reversión de
patogenicidad muy
ineficientes
rFP-ILT Estímulo de inmunidad
¡No es una vacuna viva de corta duración,
de ILT! interferencia con
inmunidad por exposición
previa (Ac’s maternos),
requiere booster.
rHVT-ILT NO se disemina;
¡No es una vacuna viva Aplicación en la
de ILT! incubadora..
Presentation
Beneficios
Ideal para vacunación
sobre brote; vacunación
de áreas focales
No infectará parvadas
adyacentes. Ideal para
vacunación en anillo
Primer desarrollo de
biología molecular
NO brotes inducidos por
virus vacunales. No
requiere booster.
Protección de por vida.
Ideal para cerrar un
programa
de erradicación
Name
Necesidades del
productor
Ganarle al virus de
campo
Protección de parvadas
“vírgenes”
NO reacciones pos
vacunales
NO reacciones pos
vacunales. Protección de
parvadas “vírgenes” de
por vida.
7/16/2014
 Eficacia contra desafío de LTI: Duración de la inmunidad
100
90
80
70
P r o t e cción ( % )

60
50
40
30
20
10
0
3 7 Semanas 10 15

rHVT/ILT + SB1 HVT + SB1

HVT – 8800 PFU, SB1 Hecho en la Universidad de Delaware, Estados Unidos

rHVT/ILTV
 Eficacia contra desafío de LTI: Duración de la inmunidad

100
90
80
Protección (%)

70
60
50
40
30
20
10
0
20 25
Semanas
HVT – 8800 PFU, SB1
rHVT/ILT + SB1 HVT + SB1
rHVT/ILTV
 Duración de la inmunidad
contra LTI Vacunados
Desafío infraorbital con cepa del USDA Controles 4 sms
100

80

60

40

20

0
10 sms 20 sms 30 sms 40 sms 50 sms 60sms
Ruta Subcutánea
 Experiencias de campo
• Avicultura de Jalisco (tierra del mariachi, el
tequila, los charros… y de las gallinas)
• Franja de 120 km de largo por 20 km de
ancho: 65 millones de gallinas en producción
– Sin contar aves en levante, pollo de engorda y
reproductoras livianas
• Zona de los Altos de Jalisco, mejor conocida
como Laringolandia
7/16/2014 Presentation Name
 Proan (Huevo San Juan)
• 2° productor mundial de huevo
(1°perteneciente a un solo dueño)
• 27 millones de gallinas en producción
• Recibe 1.5 millones de pollitas de reemplazo
por mes
• Vacunadas con rHVT/ILT (gI/gD) desde Julio
2013
– Sin “booster”
• Parvada más vieja: 51 semanas de edad
Problemas de ILT: 0
 Más experiencias
• Avícola La Aventura.
• Productor muy pequeño. 150,000 gallinas en
producción
• Una sola granja (multiedades) de postura
• 5 casetas vacunada 2 veces con CEO
• 2 casetas vacunadas con rHVT/ILT (gI/gD)
• Casetas con CEO, brote de LTI, revacunación sobre
brote
• Casetas vacunadas con rHVT/ILT (gI/gD), cero brote
Empresas Guadalupe/Huevo Salo
• 4° productor nacional de huevo (10 millones
de gallinas)/empresa pequeña (500,000
gallinas) propiedad del yerno.
• Granjas aledañas en levante (Guadalupe) y
postura (Salo)
• Vacunación en granja de levante (450,000
pollas) con rFP/ILT en incubadora
• Vacunación en Salo (50,000 pollas) con
rHVT/ILT en incubadora 6 meses antes
• Brote de LTI en levante de Guadalupe a las 16
semanas.
• Aves contiguas en producción de Salo: NO
BROTE
 Uso en pollo de engorda
• Desafortunadamente, existe contraindicación
en el uso de dos vacunas con el vector HVT en
forma simultánea.
• En México, es mucho (pero mucho) más
importante la ENC que la LTI en pollo, por lo
que carecemos de información.
• Sin embargo, tenemos información del uso en
el Perú (cortesía del Dr. Raúl Guillermo)
Resultado de las granjas de la
zona de Chincha
 MORTALIDAD

16
14
12
10
% 8
No Vac
6
rHVT-ILT
4
2
0
1 2 3 4 5
Planteles
 INDICE DE CONVERSION ALIMENTICIA

1.92
1.9
1.88
1.86
ICA 1.84
No Vac
1.82
rHVT-ILT
1.8
1.78
1.76
1 2 3 4 5
Planteles
 INDICE DE EFICIENCIA PRODUCTIVA

300

250

200

150 No Vac
100 rHVT-ILT

50

0
1 2 3 4 5
Planteles
 RESUMEN

Población :1 200 500

Item Mortalidad ICA IEP

%
Sin Vacuna 10.89 1.879 277

Vacunadas 4.29 1.860 305

rHVT-ILT
Diferencia 6.6 0.019 28
Resultado de las granjas de la
zona de Lima
 MORTALIDAD

14

12

10

8
% Sin Vacuna
6 rHVT-ILT

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Planteles
 INDICE DE CONVERSION ALIMENTICIA

2.05

1.95

1.9
Sin Vacuna
1.85 rHVT-ILT

1.8

1.75

1.7
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Planteles
 INDICE DE EFICIENCIA PRODUCTIVA

350

300

250

200
Sin Vacuna
150 rHVT-ILT

100

50

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Planteles
ELISA : ILT (Comparación serológica)
POLLOS DESAFIADOS CONTRA ILT POLLOS VACUNADOS CON rHVT- ILT
 RESUMEN

Población :3 341 225

Item Mortalidad ICA IEP

%
No Vacunado 8.3 1.96 265

rHVT- ILT 4.99 1.90 294

Diferencia - 3.31 - 0.06 + 29

Aspectos importante para vacuna
vs LTI
• Herramientas más modernas NO se
transmiten
• La efectividad en la vacunación es
FUNDAMENTAL
• Eficiencia: 98% mínimo (>5% de aves mal
vacunadas significa 5% de mortalidad por LTI)
• Asegurar que no se utilicen otras vacunas con
HVT (recombinantes o no)
¡Muchas gracias!