Coprocultivo

Esquemas Diagnósticos
Y Tablas

PPB. 2012

1
 COMBINACIONES DE TSI-LIA

Bisel Taco Gas H2S Sospechar de: Conducta a seguir

TSI Ac AC - - A. caviae ANP

LIA Alc Ac V. fluviales
TSI Ac Ac + - V. furnissii ANP
LIA Alc Ac
TSI Ac Ac + + Salmonella Grupo III I+U+C+M+
LIA Alc Alc Bioquímica completa de
Alc N Enterobacterias+ANP+AN
T+ CST+ Antibiograma
TSI Ac Ac + - A. hydrophila ANP
LIA Alc Alc A. veronii biovar sobria
Alc N
TSI Ac Ac - - V. cholerae ANP
LIA Alc Alc
Alc N
TSI Alc Ac - - Shigella I+U+C+M+Orn+DC+
LIA Alc Ac V. hollisae Manitol+Acetato de
Sodio+ANT+ANP+
CST+ Antibiograma
TSI Alc Ac + - Shigelas productoras de I+U+C+M+Orn+DC+
LIA Alc Ac gas Manitol+Acetato de
Salmonella paratyphi A Sodio+ANT+ANP+
CST+ Antibiograma

TSI Alc Ac + - Salmonelas H2S negativo Indol+Urea+ANP

LIA Alc N Aeromonas
Alc Alc
TSI Alc Ac + + Salmonelas productoras de I+U+C+M+
LIA Alc Alc H2S Bioquímica completa de
Alc N Enterobacterias+ANP+AN
T+CST+ Antibiograma
TSI Alc Ac - - P. shigelloides ANP
LIA Alc Alc V. parahaemolyticus
Alc N V. mimicus
Aeromonas

TSI Alc Ac - V Salmonella typhi I+U+C+M+

LIA Alc Alc Bioquímica completa de
Alc N Enterobacterias+ANP+AN
T+CST+ Antibiograma

PPB. 2012

2
 Género: Shigella
Clasificación

Especies Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae A A1-A15
S. flexneri B B1-B6
S. boydii C C1-C19
S. sonnei D -

Diferenciación de Especies

Especies Manitol Ornitina Indol

S. dysenteriae - - V (2,7,8)*

S. flexneri + - V (1-5)*
S. boydii + - V
(excepto (5,7,9,11,13,15,16,17)*
serotipo 13)
S. sonnei + +

*: serotipos Indol +

PPB. 2012

3
 Género: Salmonella
Identificación Bioquímica de
Serotipos Clínicamente Importantes

Serotipo G
A Citrato Lisina Ornitina Arabinosa Ramnosa Trehalos
(Especie) H2S
S
S. Choleraesuis -/+ + V + + - + -

S. Paratyphi A - + - - + + + +

S. Typhi +/- - - + - - - +

S. spp. +++/- + + + + + + +

4
 PPB. 2012

PRUEBAS PARA DIFERENCIAR ESPECIES Y SUBESPECIES

DE SALMONELLA
Salmonella enterica Salmonell
Prueba a
I II IIIa IIIb IV VI bongori

Dulcitol + + - - - Ve +

Lactosa - - -a +b - Vf -

ONPG - -a + + - Vg +

Salicin - - - - +d - -

Sorbitol + + + + + - +

Galacturonato - + - + + + +

Malonato - + + + - - -

Mucate + + + -c - + +

Crecimiento en KCN - - - - + - +

Gelatina - + + + + + -

5
 Tartrato + - - - - - -

(+) 90% son positivas entre 1 y dos días (-) 90% o mas en 7 días (a) 15 % son positivas (b) 85% son
positivas (c) 30% son positivas (d) 60% son positivas (e) 65% son positivas (f) 22% son positivas (g) 44%
son positivas

PPB. 2012

Salmonella

Esquema de Identificación
de Salmonelas Productoras de H2S

TSI - LIA

Taco: Ácido Taco: Alcalino

Bisel: Alcalino/ Ácido Bisel: Alcalino
H2S: + H2S: +/-
Gas: +/-

Bioquímica
Primaria y Secundaria
CST- Antibiograma
Agar Nutritivo

Identificación Serológica

6
 PPB. 2012

Salmonella

Esquema de Identificación
de Salmonelas No Productoras de H2S

TSI - LIA

Taco: Ácido Taco: Alcalino

Bisel: Alcalino Bisel: Alcalino
H2S: - H2S: -
Gas: +/-

Bioquímica
Primaria: ó Indol+Urea+ANP *
Indol
Urea
Citrato
Motilidad
Ornitina
Lisina
Arginina
DC
ANP

7
 AN tubo
CST

Bioquímica Completa Antibiograma

para Enterobacterias Serología

*
: Salmonelas H2S negativo son infrecuentemente aisladas, por lo que se prefiere
usar un limitado número de pruebas, ya que esta combinación de TSI-LIA la dan
con frecuencia bacterias de la flora normal intestinal

PPB. 2012

Salmonella-Shigella

Aislamiento

Heces frescas o Hisopado rectal

MC XLD SSA Caldo Selenito

Inc. 35-37ºC Inc. 35-37ºC
24-48 h 6-18 h

Colonias Sospechosas

TSI
LIA

Inc. 35-37ºC

8
 24 h

Identificación
Bioquímica y Serológica
Pruebas de Susceptibilidad

PPB. 2012

Shigella

Esquema de Identificación

TSI - LIA

Taco: Ácido Taco: Ácido

Bisel: Alcalino Bisel: Alcalino
H2S: - H2S: -
Gas: -/+

Bioquímica
Primaria:

Indol: -/+
Urea: -
Citrato: -
Motilidad: -
Ornitina: -/+
DC

9
 Acetato de Sodio: -/+
Manitol: +/-
Agar Nutritivo placa (Oxidasa -)
Agar Nutritivo en tubo (Serología)
CST (Antibiograma)

Bioquímica Completa Antibiograma

para Enterobacterias Identificación
Serológica

PPB. 2012

Shigella

Identificación Serológica

Agar Nutritivo

35ºC 18-24 h

Suspensión densa en SSF

Probar Antisueros Polivalentes “O”

de Grupo (A, B, C, D)

- +

10
 Calentar Probar individuales
15’ a 100ºC del Polivalente Aglutinante

Dejar enfriar y
Probar nuevamente los
Antisueros Polivalentes

Reportar:
Género
Especie
Serotipo

PPB. 2012

Salmonella

Identificación Serológica

Agar Nutritivo

35ºC 18-24 h

Suspensión densa en SSF

Probar Antisueros Polivalentes “O”

de Grupo (A, B, C, D, E)

11
 - +

Calentar Probar individuales

15’ a 100ºC del Polivalente Aglutinante

Dejar enfriar y
Probar nuevamente los
Antisueros Polivalentes

Reportar:
Género
Grupo Serológico

PPB. 2012

Salmonella

Salmonelas No Productoras de H2S

Serotipo Grupo Serotipo Grupo

Serológico Serológico
S. Paratyphi A A S. Mathura D2
S. Fulica B S. Canoga E3
S. Abortusequi B S. Senfterberg E4
S. Choleraesuis C1 S. Dessan E4
S. Typhisuis C1 S. Nashua M
S. Paduana C1 S. Santgeorg M
S. Sendai D1 S. Emmastad P

12
S. Ndolo D1 S. Mondeor Q
S. Gallinarum Var. Duisburg D1 S. Humber 53
S. Uccle 54

PPB. 2012

Identificación de Especies Termófilas

de Campylobacter

CBM

Colonias características:
grises no hemoliticas,
pequeñas de bordes enteros
o crecimiento confluente

Oxidasa (papel de filtro): +

Gram Modificado:

13
 Bacilos Gram Negativo curvos o en espiral

Bioquímica para Campylobacter

- A partir del CBM sembrar Directamente:

 CBM (para preservar la cepa)*
 ANP (catalasa)*
 TSI con tira de Acetato de Plomo (Prod. De H2S)*
 TTC al 0.04%*
 Preparar una Suspensión densa del microorganismo en una
solución de Hipurato de sodio al 1% (Inc. X 2 h a 37ºC y
añadir 0.2 de Ninhidrina)
 Preparar una suspensión estandarizada del microorganismo
en Caldo Tioglicolato

- A partir de la suspensión estandarizada en Caldo Tioglicolato

realizar:
 Motilidad en gota pendiente o entre lámina y laminilla
 Crecimiento a 25 y 37ºC en Sangre Humana (Inc. En CO2)
 Susceptibilidad a Cefazolin (CZ), Ácido Nalidixico (NA) en MH
o MHS*

*: Incubar a 42ªC por 24-48 horas en atmósfera microaerofilica.

PPB. 2012

Identificación de Especies Termófilas

de Campylobacter

Hidrólisis Hidrólisis TTC Susceptibilidad Susceptibilidad

Especies del del A Ácido A Cefalosporina
Hipurato Indoxil Nalidixico
Acetato

+
C. jejuni + R S* R

C. coli - + R S* R

C. lari - - S R R

*
: Cepas de C. jejuni y C. coli pueden ser Resistentes al Ácido Nalidixico.

14
PPB. 2012

15
 DIFERENCIACIÓN DEL GÉNERO AEROMONAS Y OTROS GÉNEROS
RELACIONADOS

PRUEBAS GÉNEROS

AEROMONAS PLESIOMONAS VIBRIO

a - V
MANITOL +

- + b
INOSITOL -

LISINA V + V

ORNITINA V + V

ARGININA V + V

- - +/-
NaCl 6%
PRUEBA DE LA - - +
HEBRA
DNASA + - V

Los signos + o – indican el resultado de las pruebas para el 90% o más de las cepas. +/- la
reacción puede variar, con mayor frecuencia positivo. V: variables
a: A. schubertii es negativo
b: V. metschnikovii y V. cincinnatiensis positivo (40% y 100% respectivamente)

PPB. 2012

16
 PRUEBAS BIOQUÍMICAS ÚTILES PARA SEPARAR ESPECIES DE AEROMONAS
INVOLUCRADAS EN ENFERMEDADES EN HUMANOS
PRUEBAS a

VP LIS ARG ORN Gas Arabinosa Sucrosa Manitol Hidrólisis Cefalotina Inositol Salicin
b
Glucosa Esculina
(30 ug)
A. caviae - - + - - + + + + R - V

A. hydrophila + + + - + V + + + R - V

A. jandaei + + + - + - - + - R - -

A. schubertii V V + - - - - - - S - -

A. trota - + + - V - + + - R - -

A. veronii + + + - + - + + - S - -
bv. sobria

A. veronii bv. + + - + + - + + + S - +
veronii

a: VP: Voges Proskauer; LIS: Lisina Decarboxilasa; ARG: Arginina Dehidrolasa; ORN: Ornitina Decarboxilasa; +: mayor a 90%
de las cepas;
V: variable: 11 a 89% de las cepas positivas; -: - 10% de las cepas positivas; +: positivo; S: susceptible; R: resistentes.
b: Prueba por el Método estándar CLSI.

PPB-2012

17
 Propiedades Fenotípicas para Diferenciar las Especies de Campylobacter
y Arcobacter de Relevancia Clínica

NitritoReducción de Nitrato a
Hidrólisis del Indoxil Acetato
Sensible a

Hidrólisis del Hipurato

Crecimiento a 25ºC

Crecimiento a 42ºC
disco 30ug

H2S (TSI)
Catalasa

Ácido Nalidíxico
Género y Especies

Cefalotina
C. coli - + - + - + + - +
C. concisus - + - - + - + - -
C. curvus a - + - - + + + NP +
C. fetus subsp. fetus + -/+ - + - + + + -
C. hyointestinalis +/- + - + + - + + -
C. jejuni subsp. jejuni - + + + - + + - +
+/- o +
C. jejuni subsp. doylei - +/- +
débil
- + - + +
C. lari - + - + - - + - -
C. rectus a
- + leve - - + + + NP +
C. sputorum - + - -/+ + - + + -/+
C. upsaliensis - + + -/ + débil - + + + +
A. butzleri b + - - -/ + débil - + + - +/-
A. cryaerophilus c
+ - - +/- - + + - +/-
a
anaerobio, no microaerobio.
b
crece a 40ºC. Se desarrolla en MacConkey.
c
aerotolerante, no microaeróbios. No crecen en agar MacConkey, excepto pocas cepas.
NP: No Probado.

PPB-2012

18
 Reacciones de aglutinación con antisuero absorbido de
serotipos de Vibrio cholerae serogrupo O1
V. cholerae Serotipo 01 Antisuero Ogawa Antisuero Inaba
Ogawa + -
Inaba - +
Hikojima + +

Diferenciación de los biotipos Clásico y El Tor de Vibrio cholerae O1

Biotipo
Pruebas Bioquímicas
Clásico El Tor
Voges Proskauer - +
Susceptibilidad a Polimixina B (disco 50 U) + -
Hemólisis de eritrocitos - +
Lisis por bacteriófago:
Clásico IV + -
Eltor 5 - +

PPB-2012

19
Identificación Bioquímica de Plesiomonas shigelloides
Pruebas Bioquímicas Plesiomonas shigelloides
Oxidasa +
String Test -
Inositol +
Manitol -
Arginina (Moeller; +
Lisina (Moeller; +
Ornitina (Moeller +
Caldo Salado (NaCl 6%) -
Gas D-Glucosa -
Salicin -
Arabinosa -
Sucrosa -
Esculina -
DNAsa -
Voges-Proskauer -

PPB-2012

20
 Aislamiento e identificación de Aeromonas Productoras de Diarrea

Heces
Hisopado Rectal

MC-SSA-XLD-TCBS AN Agua Peptonada Alcalina

18-24 h, 35°C, aerobiosis 18-24 h, 35°C, aerobiosis 6-8 h, 35°C

TSI-LIA-ANP Oxidasa positiva ANP

18-24 h, 35°C 18-24 h, 35°C

TSI-LIA-ANP
AN, oxidasa y String Test 18-24 h, 35°C
Solo en coprocultivos oxidasa
(+)
TSI
Taco: ácido; bisel: ácido/alcalino
H2S: -; Gas: +/-
Oxidasa (+); String test (-/+)

Bioquímica Primaria
Manitol
Inositol
Arabinosa
Salicin
Sucrosa
Gas de glucosa
Ornitina decarboxilasa
Lisina decarboxilasa
Arginina dehidrolasa
NaCl 6%
Voges-Proskauer
Bilis Esculina
DNasa
ANT
Pruebas de Susceptibilidad

Figura 1 Aislamiento e identificación de especies de Aeromonas.

21
Crecimiento y Aspecto de las Colonias en TCBS de Especies de Vibrio
Color de las colonias*
Especies Desarrollo en TCBS
Verde Amarilla
V. cholerae Bueno 0 100
V. mimicus Bueno 100 0
V. parahaemolyticus Bueno 99 1
V. fluvialis Bueno 0 100
V. furnissii Bueno 0 100
V. hollisae Muy Pobre 100 0
V. metschnikovii Bueno 0 100
* Porcentaje de cepas en base a la apariencia de las colonias en TCBS

Pruebas Claves para Diferenciar

Especies de Vibrio Asociadas con Producción de Diarrea

V. parahaemolyticus
V. metschnikovii
V. cholerae

V mimicus

V. hollisae

V. furnissii
V. fluvialis
Pruebas Bioquímicas

Desarrollo en Caldo Nutritivo:

Sin NaCl + + - - - - -
1% Nacl + + + + + + +
Producción de Oxidasa + + - + + + +
Reducción de Nitrato a Nitrito + + - + + + +
Fermentación del mio-Inositol - - V - - - -
Arginina dehidrolasa - - V - + + -
Lisina decarboxilasa + + V - - - +
Ornitina decarboxilasa + + - - - - V

PPB-2012

22
23