BIORREACTORES

Various types of fermentors have been

designed by many researchers since the
end of 1950's.
En la actualidad se encuentran desarrollados, entre
otros, a escala industrial de produccin los procesos
para obtencin de shikonina por cultivo de clulas de
Lithospermun erythrohizon, puesto a punto por la
Industrias Petroqumicas Mitsui,

as como la produccin de berberina

O

OCH 3

O-Glc-Glc
OCH 3
OH

y biomasa de ginseng
Glc-Glc-O
Los procesos industriales requieren de tres puntos
fundamentales:

Crecimiento eficiente en grandes volmenes

Acumulacin de metabolitos secundarios en el cultivo

Si el proceso implica bioconversin o produccin de

enzimas, que esto ocurra en las condiciones de
operacin del proceso
Es necesario ajustar algunos parmetros :

Presin parcial de oxgeno

Presin parcial de dixido de carbono

pH

Agitacin y mezclado

densidad del cultivo

Temperatura

Iluminacin de ser necesario

Caractersticas clulas clulas vegetales consecuencias en el
microbianas dediferenciadas biorreactor

Tamao 2-10 mm 10-200 mm Rpida sedimentacin,

mayor sensibilidad al corte
Clulas pueden forman agregados Rpida sedimentacin
individuales obtenerse
Velocidad de Alta Baja Largos procesos,
crecimiento td 1-2 horas td 2-5 das problemas para mantener
esterilidad
Densidad del pequeo 5-20 % Problemas de manipuleo.
inculo Dificulta la posibilidad de
escalado
Sensibilidad al no sensitivo sensitivo/tolerante Disminucin de la
esfuerzo de velocidad de agitacin
corte
Aireacin alta baja Baja demanda de oxgeno,
bajo KLa
agitacin transferencia de oxgeno

Aumenta el rea de transferencia de oxgeno por la

formacin de pequeas burbujas

Retarda el escape de burbujas desde el lquido

Previene la coalescencia de las burbujas de aire

Disminuye el grosor de la interfase gas/lquido al crear

un flujo turbulento
La agitacin como factor de transferencia de masa

Asegurar el suministro de nutrientes a nivel celular

Prevenir la sedimentacin

Asegurar la transferencia de gases

Solubilizar componentes menos solubles de los medios

Diseos bsicos de biorreactores para mltiples
propsitos

aire aire aire

Tanque agitado Columna de air lift
burbujas
Tanque agitado

Proporciones tpicas de un tanque agitado

Reactores de lecho fluido (columna de burbujas)

a) Reactor de lecho fluido

b) Reactor de lecho fluido cnico
Dalton en 1978 dise un reactor de bajo esfuerzo
de corte denominado air lift

Draft tube

Airlift - uses air sparging to pneumatically mix the media

Algunas variantes

Reactores de lecho fijo por goteo Mini air lift invertido

Bolsas descartables
Comparison of Yield and Productivity for Cell Mass and Anthraquinones in
Various Reactor Systems
Bubble
flat blade Perforated column
Shake flask turbine disk impeller air-lift reactor
reactor

Wagner, F. In "Plant Tissue Culture and Its Bio-technological application"

Ed. Barz, W. et al., p. 250 (1977). Springer-Verlag, Berlin Heidelberg.t reactor
PROCESS MONITORING AND CONTROL

Que parmetros controlar?

Temperatura
pH
Presin parcial de O2
Formacin de espuma
Ej. Produccin de alcaloides terpenoindlicos con cultivos celulares de Uncaria
Tomentosa ua de gato en tanque agitado

Reactor

Batch
Biorreactores para el cultivo de races
Bioreactor de lecho de goteo
con malla para inmovilizar a las races

Entrada de medio Salida de aire

Malla de
inmovilizacin
Adicin de nutrientes

Reservorio
Aire Aire

Bomba
Biorreactores para el cultivo de races
Bioreactor de lecho de niebla
(nutrient mist reactor)

Filtro de aire
peristltica
Bomba

Bomba de aire

Generador de niebla

Intensidad
Condensador
On Off de niebla

Cmara
Controlador de cultivo
A nutrient mist reactor is substantially the same as
aeroponic growth of plants as proposed by botanists

Growth of hairy roots in the 3 L

MTR on the 16th day
Biorreactores para cultivo de otros rganos
 Para cultivo de rganos

MTB

Centaurium erythraea shoot culture in mist trickling bioreactor after 21 days.

Modelos para clulas inmovilizadas
Operacin de Biorreactores

1 2 3

1.Batch:
Son sistemas cerrados que se caracterizan por cambiar las
condiciones fisiolgicas y ambientales.

No hay entrada ni salida de medio de cultivo.

Operacin de Biorreactores

1 2 3

2.Batch alimentado:

Estos sistemas operan adicionando medio fresco,

pero sin remocin del existente.

Son muy tiles cuando se requiere una elevada

densidad celular en la etapa de iniciacin del
proceso que implica un alto consumo de nutrientes,
especialmente de fuente hidrocarbonada que suele
funcionar como sustrato limitante.
Variante del batch alimentado:

2.1-Draw-fill o semicontnuo:

Consiste en remover, al final de la operacin entre

un 80 y un 90 % del cultivo y reemplazarlo por
medio fresco.

De esta manera puede eliminarse el perodo lag,

satisfacerse sencillamente la necesidad de
contar con inculos de gran tamao y a su vez
evitar la esterilizacin del reactor entre dos ciclos.
Operacin de Biorreactores

1 2 3

3.Continuo:
el caudal de entrada de medio fresco es igual al de salida de medio
utilizado.

Son utilizados en cultivos donde la velocidad de crecimiento celular es

constante por lo que existe un suministro constante de nutrientes o para
la remocin permanente de producto sobre todo en sistemas
inmovilizados.
Operacin de Biorreactores

3.Continuo:
Este tipo de operacin presenta grandes inconvenientes con respecto al
mantenimiento de las condiciones de asepsia del proceso, y se dificulta
debido a la tendencia a formar agregados de las clulas vegetales en
cultivo, la formacin de merengue y el lento crecimiento celular.

Para su buena aplicacin se requiere del diseo de sistemas que

permitan suplementar continuamente el medio de cultivo evitando la
remocin de las clulas y as minimizar lo que se denomina lavado del
cultivo.

Una variante es la Perfusin que implica la remocin y suministro de

medio dejando la biomasa ocluida en una malla.


Continuous Culture

Growth
Batch Culture

0 5 10 15 20 25
Time (days)
Remocin Lquido-lquido:
de producto Compuestos inmiscibles en agua, como solventes
orgnicos o lpidos (sistemas de dos fases agua-orgnico).
in situ Ejemplos: migliol, hexadecano, dodecano.

Slido-lquido:
La segunda fase es un material slido como resinas u otros
absorbentes. Generalmente resinas como XAD, RP18, etc.

Requerimientos:
- Autoclavables
- No txicos
- Fcil separacin del producto de inters
de la segunda fase
- No modificacin del medio de cultivo
- Permanencia de las clulas en la fase acuosa
Adaptaciones para la extraccin in situ del producto

Diagrama de un tanque de agitacin mecnica

modificado para operar con remocin in situ
del producto.

1: tanque;
2: malla de acero inoxidable para inmovilizar
races;
3: sensor de oxgeno;
4: malla acero inoxidable;
5: medidor DO; 6: agitador;
7: lana de vidrio;
8: resina XAD-2;
9: filtro de vidrio;
10: generador de aire;
11: condensador;
12: marco de la malla

Tomado de: Hairy Roots, Culture and Application, 1997.

Adaptaciones para la extraccin in situ del producto

Un bioreactor de agitacin por lquido

con loop externo
ROOTec Mist Bioreactor (RMB)

http://www.rootec.com/index.php?p=2
Ejemplo integrado
Ejemplo integrado
Produccin de shikonina por suspensiones celulares
de Lithospermum erythrorhizon

Shikonina
Yamasaki Plant Photo Gallery

Planta entera
- La extraccin se realiza en plantas de aproximadamente 3 aos.

Suspensiones celulares
- 2,4-D estimula el crecimiento pero no la produccin.
- Las bajas concentraciones de nitrgeno y la elicitacin inducen
la produccin de shikonina.
 Proceso para la produccin de shikonina a partir de clulas
de Lithospermum erythrorhizon por Mitsui Petrochemical Ind.

Tomado de: Scraag. Plant

Biotechnology, 1992.

Se utilizan fermentadores de agitacin mecnica y tambor rotatorio.

La productividad de shikonina es 840 veces superior a la de planta entera.
 Seleccin de la planta por su contenido de
Secuencia en la metabolitos secundarios para iniciar cultivos in
optimizacin de vitro
un proceso para
la produccin Establecimiento de cultivos in vitro
de metabolitos
secundarios
Estabilizacin y seleccin de cultivos
in vitro: velocidad de crecimiento, niveles de
producto, liberacin al medio

Optimizacin de medio de cultivo para produccin

por diseo factorial: nutrientes, precursores,
elicitacin, liberacin y remocin in situ

Optimizacin en bioreactores: escalado

Sistema de cultivo: batch, continuo, fed-batch,
perfusin, en dos etapas.
Extraccin y purificacin del producto
Esquema de un proceso completo para la produccin de un
metabolito secundario por cultivo in vitro de clulas y rganos
vegetales