UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA BIOLOGICA

LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR APLICADA

PRACTICA No. 3
ELECTROFORESIS DE ADN EN GEL DE AGAROSA

Material
1. Matraz Erlenmeyer de 250 ml
2. Tubos de centrfuga de 50 ml, de polipropileno, fondo cnico
3. Papel de aluminio
4. Esptula de plstico
5. Bandejas de plstico para teido

Reactivos
1. Agarosa
2. TAE 1X
3. Azul de bromofenol
4. Bromuro de etidio 10g/l

Equipo
1. Balanza analtica
2. Horno de microondas
3. Cmara de electroforesis horizontal con fuente de poder
4. Pipetas automticas de 2 a 20 l, 200 a 1000 l
5. Transiluminador
6. Fotodocumentador

Procedimiento
1. Preparar una solucin de agarosa al 1.5 %. Para ello pesar 0.3 g de agarosa y
colocarla en un matraz Erlenmeyer, agregar 20 ml de TAE 1X y fundirla en horno de
microondas por 20 segundos.
2. Colocar los separadores en la cmara de electroforesis y vaciar la agarosa fundida.
Colocar el peine en la hendidura correspondiente y dejar enfriar a temperatura
ambiente durante 20 a 30 minutos (hasta que se haya solidificado).
3. Retirar el peine y llenar la cmara con TAE 1X hasta la marca.
4. Preparar las muestras mezclando 4 l de DNA y 0.5 l de azul de bromofenol y
colocarlas en los pozos.
5. Tapar la cmara y encender la fuente de poder. Hacer el corrimiento a 80-100 volts
durante aproximadamente 45 minutos.
6. Sacar el gel de la cmara de electroforesis y teirlo colocndolo a temperatura
ambiente durante 30 a 45 minutos en buffer TAE 1X adicionado de bromuro de etidio,
a una concentracin de 0.5 g/ml.
7. Lavar el gel en agua destilada durante 10 minutos.
8. Realizar otro lavado del gel en agua destilada durante 5 minutos
9. Visualizar los resultados en el transiluminador con luz ultravioleta, procediendo a
digitalizar la imagen del gel.
 Prctica No. 1

Preguntas:

1.- Qu es la electroforesis?
Una tcnica para separar y conocer la cantidad y calidad del ADN; por
espectrofotometra es una de las metodologas ms utilizadas en el laboratorio en
todo lo relacionado a cidos nucleicos, y es segura siendo una herramienta de
importancia primordial en el desarrollo de las tcnicas de ADN recombinante o
ingeniera gentica
2.- En que se basa la electroforesis?
En que en la electroforesis hay una combinacin de fuerzas elctricas y de friccin
que permite el desplazamiento y separacin en funcin del tamao o topologa de
diferentes molculas de ADN. Sometidos a un campo elctrico la electroforesis, la
carga neta negativa, de ADN y ARN harn que estos se muevan en direccin al
nodo, as se fuerza al cido nucleico a moverse a travs del gel de agarosa; la
friccin har que las molculas ms pesadas y grandes migren lento y las ligeras
lo contrario
3.- Cmo deben prepararse los geles de agarosa para separar con
buena resolucin fragmentos de ADN de distintos tamaos?
Las electroforesis de garosa de utilizan para separar y purificar fragmentos de
ADN cuando no requerimos un alto poder de resolucin, se corre en forma
horizontal; se pueden separar fragmentos de 50pb- 40kb dependiendo de la
concentracin. Cuanto ms baja la concentracin mayor es el tamao de las
molculas que pueden separarse y viceversa; se puede combinar esta tcnica con
Southern blot.
1.

M.C. Clara Elena Yerena Aguilar 2