Lisina Hierro Agar.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilacin /
desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa
es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas
decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de
cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y
de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del
indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa
sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje
de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al
consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de
hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido
alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del
medio.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona de gelatina 5.0
Extracto de levadura 3.0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro
Glucosa 1.0 de agua destilada. Dejar embeber unos 15 minutos.
Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y
Lisina 10.0
hervir durante un minuto hasta la disolucin
Citrato de hierro y amonio 0.5 completa. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15
Tiosulfato de sodio 0.04 minutos. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo
Prpura de bromocresol 0.02 vertical apto para la puncin.
Agar 15.0
pH final: 6.7 0.2

Siembra
Por puncin profunda con aguja de inoculacin.

Incubacin
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.

Resultados
1- Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.
3-Produccin de cido sulfhdrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y fondo)

Color en el pico de flauta Color en la base del

Microorganismos Ennegrecimiento del medio
tubo
Proteus mirabilis ATCC 43071 Rojo Amarillo Negativo
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Prpura Prpura Positivo
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Prpura Prpura Positivo
Providencia spp. Rojo Amarillo Negativo
Citrobacter freundii Prpura Amarillo Positivo
Morganella spp.* Rojo Amarillo Negativo
Edwarsiella spp. Prpura Prpura Positivo
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Prpura Prpura Negativo
Escherichia coli ATCC 25922 Prpura Prpura Negativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.

Caractersticas del medio

Medio preparado: color violeta.
TSI Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de
glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el
desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato
de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la
fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color
negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el
cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Extracto de carne 3.0
Pluripeptona 20.0 Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua
Cloruro de sodio 5.0 destilada. Mezclar bien y calentar con
agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos
Lactosa 10.0
hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera
Sacarosa 10.0 parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a
Glucosa 1.0 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de
Sulfato de hierro y amonio 0.2 flauta profundo.
Tiosulfato de sodio 0.2
Rojo de fenol 0.025
Agar 13.0
pH final: 7.3 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.

Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.

Resultados

1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o
sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.

Microorganismo Pico/Fondo Produccin de gas Produccin decido

sulfhdrico
E. coli ATCC 25922 A/A + -
K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + -
P. mirabilis ATCC 43071 K/A + +
S. typhimurium ATCC 14028 K/A - +
S. enteritidis ATCC 13076 K/A + +
S. flexneri ATCC 12022 K/A - -
P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - -

A: cido
K: alcalino

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo
Simmons Citrato Agar
Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de
carbono y energa.

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de
carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el
magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador
de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces
de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente
produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido
tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un
medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Citrato de sodio 2.0 Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro
Cloruro de sodio 5.0 de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y
Fosfato dipotsico 1.0 mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2
minutos. Distribuir en tubos y esterilizar en
Fosfato monoamnico 1.0
autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar en
Sulfato de magnesio 0.2 posicin inclinada.
Azul de bromotimol 0.08
Agar 15.0
pH final: 6.9 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.

Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin.

Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Microorganismo Citrato permeasa Color del medio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Positivo Azul
S. typhimurium ATCC 14028 Positivo Azul
E. coli ATCC 25922 Negativo Verde
S. flexneri ATCC 12022 Negativo Verde

Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo-
amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizacin azul de un resultado positivo.
-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de inoculacin
antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgnica puede originar
resultados falsos positivos.

Caractersticas del medio

Medio preparado: verde.
SIM Medio
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en
un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que
puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas
llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovacs o de Erlich,
para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la
turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de
sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato
siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Triptena 20.0 Suspender 30 g del polvo por litro de agua
Peptona 6.1 destilada. Mezclar hasta disolver; calentar
Sulfato de hierro y amonio 0.2 agitando y hervir durante un minuto.
Distribuir unos 4 ml en tubos de hemlisis y
Tiosulfato de sodio 0.2
esterilizar en autoclave a 121C durante 15
Agar 3.5 minutos. Solidificar en posicin vertical.
pH final: 7.3 0.2

Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de
inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2
tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en
lnea recta.

Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.

Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.

Microorganismo Movilidad Indol Produccin de cido

sulfhdrico
E. coli ATCC 25922 + + -
K. pneumoniae ATCC 700603 - - -
P. mirabilis ATCC 43071 + - +
S. typhimurium ATCC 14028 + - +
S. enteritidis ATCC 13076 + - +
S. flexneri ATCC 12022 - - -

Limitaciones
-En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la movilidad puede ser difcil de observar.
-Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe
confundirse con el color negro debido a la produccin de cido sulfhdrico.

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar.
Mac Conkey Agar.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios
y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras
clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en
el mismo.

Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el
cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram
positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje
del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las
sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0 Suspender 50 g del polvo por litro de
Lactosa 10.0 agua destilada. Reposar 5 minutos y
Mezcla de sales biliares 1.5 mezclar hasta uniformar. Calentar
Cloruro de sodio 5.0 suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta
Agar 13.5 disolver. Esterilizar en autoclave a 121C
Rojo neutro 0.03 durante 15 minutos.
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 0.2

Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15
ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.

Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica

Resultados

Microorganismos
Escherichia coli ATCC 25922
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Shigella flexneri ATCC 12022
Proteus mirabilis ATCC 43071
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Colonias
Rojas con halo turbio
Rosadas mucosas
Incoloras, transparentes
Incoloras, transparentes
Incoloras, transparentes
Diminutas, incoloras,
opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura
E.M.B. Agar.
Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram
negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies
de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor
rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La
diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de
hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un
caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp.
como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en
C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que
Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir
aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin
de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de
Salmonella y Shigella.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 10.0
Suspender 36 g del polvo en un litro de
Lactosa 5.0 agua destilada. Reposar 5 minutos;
Sacarosa 5.0 mezclar, calentando a ebullicin durante 1
Fosfato dipotsico 2.0 o 2 minutos hasta su disolucin. Esterilizar
Agar 13.5 en autoclave a no ms de 121C durante
Eosina 0.4 15 minutos. Enfriar a 45C y distribuir
agitando suavemente.
Azul de metileno 0.065
pH final: 7.2 0.2

Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Incubacin
De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Tipo de Colonia

Verdosas con brillo metlico y centro negro
Escherichia coli ATCC 25922
azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Mucosas, rosa prpura, confluentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, pequeas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras

Caractersticas del medio:

Placas preparadas: color prpura.

La esterilizacin del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color prpura se restaura
por agitacin. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya
que es parte esencial del mismo.
Verde Brillante Bilis 2% Caldo.
Este medio est recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la tcnica del nmero ms probable.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde
brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepcin de
coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentacin de la lactosa con produccin de cido y gas.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Bilis de buey deshidratada 20.0 Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de
Lactosa 10.0 agua destilada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo
Peptona 10.0 con campanita de Durham. Preparar adems, el
medio a doble concentracin. Esterilizar en autoclave
Verde brillante 0.0133 a 121C durante 15 minutos.
pH final: 7.2 0.2

Siembra
a.- Para el anlisis de coliformes totales en muestras fluidas, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble concentracin y
1ml y 0,1 ml en caldo simple concentracin.

Nmero Volumen de la Volumen de Concentracin

de tubos muestra medio del medio
3 10 ml 10 ml Doble
3 1 ml 10 ml Simple
3 0.1 ml 10 ml Simple

b.- Para el anlisis de coliformes totales en muestras slidas (alimentos, cosmticos, frmacos), efectuar diluciones
seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilucin por triplicado en medio de cultivo simple concentracin.

Nmero Dilucin dela Volumen de la Volumen de Concentracin

de tubos muestra muestra medio del medio
3 10-1 1 ml 10 ml Simple
3 10-2 1 ml 10 ml Simple
3 10-3 1 ml 10 ml Simple

c.- Para anlisis de coliformes fecales, a partir de cada tubo positivo en el test presuntivo de coliformes totales (proveniente
de Verde Brillante y Bilis 2% Caldo Mac Conkey Caldo Lauril Sulfato, utilizando la tcnica del NMP), o a partir de colonias
presentes en diferentes medios, que se presume sean coliformes, transferir una ansada a un tubo con Verde Brillante y Bilis
al 2% caldo fresco, incubando a 45 +/- 0.5 C y otra en Agua Triptona con incubacin a 35-37 C, para detectar la
produccin de indol.

Incubacin
a- Para de coliformes totales: a 35-37 C durante 24 horas.
b- Para coliformes (fecales): a 44.5-45.5 C durante 24 horas.Resultados
-Positivo: presencia de gas.
Con el nmero de tubos positivos, calcular el nmero mas probable. El resultado se expresa por gramos 100 ml de
producto
-Negativo: ausencia de gas.

Microorganismos Crecimiento Gas Indol#

Escherichia coli ATCC 25922 + +* +*
Enterobacter spp. + + -*
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 + +* -*
Salmonella typhimurium ATCC 14028 + - -
Bacterias no fermentadores de lactosa + - Variable
Staphylococcus aureus ATCC 25923 - - -

+* -* 10-25% de cepas negativas o positivas

# a partir de Agua Triptona
Caractersticas del medio
Medio preparado: verde esmeralda, transparente
Caldo m-Endo.
Desarrollado para el recuento de coliformes totales en agua, bebidas y otras muestras por medio de la tcnica de filtracin
por membrana.

Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona junto con la peptona, la triptena y el extracto de levadura, aportan los nutrientes
necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable. El fosfato dipotsico y el
fosfato monopotsico otorgan la capacidad buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Es un medio selectivo debido al lauril sulfato de sodio y al desoxicolato de sodio que inhiben el desarrollo de la flora
acompaante, y es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa.
Las bacterias fermentadoras de lactosa producen durante la fermentacin aldehdos, que en combinacin con la fucsina y el
sulfito presentes en el medio le confieren a la colonia un brillo metlico, mientras que las colonias de las no fermentadoras
son rosadas.

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona 10.0
Peptona 5.0
Triptena 5.0
Extracto de levadura 1.5
Lactosa 12.5
Cloruro de sodio 5.0
Fosfato dipotsico 4.375
Fosfato monopotsico 1.375
Lauril sulfato de sodio 0.05
Desoxicolato de sodio 0.1
Sulfito de sodio 2.1
Fucsina bsica 1.05
pH final: 7.2 0.2

Siembra
- Filtrar la muestra a analizar. El volumen que se filtra depende de la probable contaminacin de la muestra.
- Embeber la almohadilla con el caldo m-Endo hasta la saturacin (la cantidad de medio de cultivo depende del grado de
absorcin de la misma).
- Apoyar la membrana filtrante sobre la almohadilla embebida con el medio de cultivo.

Incubacin
Incubar las placas a 35-37 C por 24 horas. Ocasionalmente, los microorganismos no coliformes pueden producir brillo
metlico. Para confirmar las colonias sospechosas, transferirlas a tubos con caldo verde brillante y bilis al 2%, con
campanitas de Durham. Incubar los tubos por 24-48 horas a 35-37 C. Los coliformes habrn producido gas por
fermentacin de la lactosa, al cabo de ese perodo.

Resultados
El recuento debe realizarse en aquellas placas que contengan entre 20 y 80 colonias y no ms de 200, ya que se trata de un
medio selectivo.
La concentracin microbiana debe expresarse como el nmero de microorganismos presentes en 100 ml de muestra.

N de colonias X 100
Recuento de colonias =
ml de muestra filtrada

Caractersticas de las
Microorganismos Crecimiento
colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Brillo metlico
Proteus mirabilis ATCC 43071 Bueno Incoloro
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido ------

Limitaciones
Ocasionalmente, los microorganismos no coliformes pueden producir brillo metlico, por lo que se considera necesario
realizar la confirmacin bioqumica.

Caractersticas del medio

El medio puede presentar turbidez y/o un ligero precipitado.
Nutritivo Agar
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos
poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.

Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de
microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores
del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo
bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u
otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Pluripeptona 5.0 Suspender 31 g de polvo por litro de
Extracto de carne 3.0 agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5
Cloruro de sodio 8.0 minutos. Calentar suavemente agitando
y hervir 1 o 2 minutos hasta su
Agar 15.0 disolucin. Distribuir y esterilizar a
121C durante 15 minutos.
pH final: 7.3 0.2

Siembra
En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.

Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.

Resultados
a-Agar nutritivo:

Microorganismos Crecimiento
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno-excelente
E. coli ATCC 25922 Bueno-excelente
S. aureus ATCC 25923 Bueno-excelente
B. cereus ATCC 10876 Bueno-excelente
E. faecalis ATCC 29212 Bueno-excelente
P. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente

b-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero:

Microorganismos Crecimiento Hemlisis

S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta
S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa
S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar claro a medio ligeramente opalescente.
Agua Peptonada.
Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos y
otros materiales de inters sanitario.

Fundamento

Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de

solucin fisiolgica para recuperar clulas de enterobacterias daadas por procesos
fisicoqumicos, a los que ha sido sometido el alimento. Si es utilizado como medio base
para la fermentacin de hidratos de carbono, se debe adicionar el indicador de Andrade
y el hidrato de carbono en cuestin.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona de carne 10.0 Suspender 15 g de polvo en 1 litro
de agua destilada. Mezclar bien y
Cloruro de sodio 5.0 distribuir. Esterilizar en autoclave a
121C durante 15 minutos.
pH final: 7.2 0.2

Siembra
Por inoculacin directa del material en estudio.
Como diluyente: realizar las diluciones 1:10 y 1:100, dependiendo del uso que se le
quiera dar.

Incubacin
Aerbica, a 35-37 C durante 18-24 horas.

Resultados

Microorganismos Crecimiento
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Bueno
Control Negativo Resultado
Medio sin inocular Sin cambio

Caractersticas del medio:

Medio preparado: mbar claro.
Christensen Medio (Urea Agar Base).
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras
enterobacterias y estafilococos.

Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono.
Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la
fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos
organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Triptena 1.0
Glucosa 1.0 Suspender 24 g de polvo en 950 ml de agua destilada.
Cloruro de sodio 5.0 Dejar reposar 2 minutos. Esterilizar en autoclave a
121C durante 15 minutos. Enfriar a 50C y agregar 50
Fosfato monopotsico 2.0
ml de una solucin de urea al 40% previamente
Rojo de fenol 0.012 esterilizada por filtracin o cloroformo. Fraccionar en
tubos de hemlisis y solidificar en pico de flauta con
Agar 15.0 fondo profundo.

pH final: 6.8 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de flauta. Algunos microorganismos
pueden requerir mayor tiempo de incubacin.
Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.

Incubacin
En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C.

Resultados

Microorganismo Actividad uresica Color del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071 Positiva Rojo-Rosado
K. pneumoniae ATCC 700603 Positiva dbil Rojo-Rosado
Escherichia coli ATCC 25922 Negativa Amarillo
S. flexneri ATCC 12022 Negativa Amarillo
S. typhimurium ATCC 14028 Negativa Amarillo

Limitaciones
-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter, viran al color
rojo-rosado de todo el medio de cultivo luego de varios das de incubacin.
-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone facilmente.

Caractersticas del medio

Medio preparado: amarillo
Sabouraud Glucosado Agar
Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y
saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.

Fundamento
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los
asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.).
En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido,
favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.
Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Pluripeptona 10.0 Suspender 65 g del polvo por litro de agua
Glucosa 40.0 destilada. Reposar 5 minutos y mezclar
Cloranfenicol 0.05 hasta uniformar. Calentar agitando
frecuentemente y hervir 1 minuto hasta
disolver. Distribuir y esterilizar 15 minutos
a 118-121C. Mantener en lugar fresco,
pues la exposicin al calor hidroliza los
Agar 15.0 componentes. Distribuir en placas o en
tubos con cierre hermtico

pH final: 5.6 0.2

Siembra
Depende del uso, puede ser tanto en tubo como en placa. Consultar referencias de mtodos
recomendados.

Incubacin
El tiempo de incubacin depender del microorganismo que se est buscando aislar.

Resultados

Microorganismos Crecimiento
Saccharomyces cerevisiae Bueno
Aspergillus niger Bueno
Candida albicans ATCC 10231 Bueno

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar claro, ligeramente opalescente sin ningn precipitado.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-150-05 x 500g :Cdigo: B02-150-06 6x50ml: B04-150-84
Baird Parker Medio Base.
Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos
coagulasa positiva en alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento
En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne constituyen la fuente de
carbono y nitrgeno, el extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato
estimulan el crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro de litio, los cuales
inhiben el desarrollo de la flora acompaante. La yema de huevo permite demostrar la actividad lecitinsica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color grisceo-negro, y
dan reaccin sobre la yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo
tiene una zona clara mas externa.
Se pueden encontrar cepas no lipolticas, que presentan igual caractersticas de colonias pero sin la zona
opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioqumicas.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona de casena
Extracto de carne
Extracto de levadura
Cloruro de litio
Agar
Glicina
Piruvato de sodio
10.0 Suspender 60 g del medio deshidratado en
5.0 940ml de agua destilada. Dejar en reposo 5 a
1.0 10 minutos. Calentar agitando
frecuentemente y hervir durante 1 minuto.
5.0
Distribuir y esterilizar en autoclave a 121C
17.0 (15 libras) durante 15 minutos. Enfriar a 45-
12.0 50C y agregar 50 ml de la emulsin de yema
de huevo y 10ml de la solucin de telurito
10.0 (Cdigo B03-601-61). Homogeneizar y
distribuir en cajas de Petri.
pH final: 6.8 0.2

Siembra
Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0.1 ml de la dilucin de la muestra a analizar.

Incubacin
24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Apariencia

E. coli ATCC 25922 Inhibido ---
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno Colonias marrones sin zona clara u opaca alrededor
Colonias negras con borde incoloro, convexas, rodeadas
S. aureus ATCC 25923 Bueno a excelente
de una zona opaca, con una zona clara externa.
Colonias negras, de tamao irregular. Zona opaca
S. epidermidis ATCC 14990 Escaso o bueno
alrededor de la colonia (no hay zona clara).

Caractersticas del medio:

Medio preparado: mbar claro opalescente (sin el agregado de yema de huevo).

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-141-05 x 500g :Cdigo: B02-141-06
Sangre Agar Base
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.
Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de
hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.

Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una
gran variedad de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento
bacteriano, y permite detectar hemlisis.

Frmula (en gramos por litro)

Infusin de msculo de corazn 375.0
Peptona 10.0
Cloruro de sodio 5.0
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.2

Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una
suspensin homognea. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121C. Enfriar a 45-
50C agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.

Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de sangre estril desfibrinada a temperatura
ambiente, el agar debe estar a 45C.

Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a
80C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo chocolatado.

Siembra
Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.

Incubacin
El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del microorganismo que se quiera aislar.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Hemlisis

E. coli ATCC 25922 Abundante --
Beta
S. aureus ATCC 25923 Abundante

S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta

S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa
S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa

Limitaciones
-Las reacciones hemolticas de muchos microorganismos son diferentes al usar sangre de caballo respecto a la sangre de
carnero, tal es el caso de algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta hemlisis en el agar suplementado
con sangre de caballo pero no en agar suplementado con sangre de carnero, y son mal clasificados como Estreptococos
Grupo A al usar sangre de caballo.

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar.
Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-149-05 x 500g :Cdigo: B02-149-06 6 x 50 ml: B04-149-84
Cerebro Corazn Infusin Agar.
Es un medio slido muy apropiado para el cultivo de bacterias y hongos, incluyendo los de difcil desarrollo.

Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La
infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y la peptona, son la fuente de
carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad buffer. El agar es el
agente solidificante.
El agar cerebro corazn mantiene los mismos principios que el caldo para el cultivo de
estreptococos y otras bacterias exigentes. Con el agregado de 10% de sangre de caballo
desfibrinada, fue utilizado para el crecimiento de Histoplasma capsulatum y de hongos
patgenos. Por tratarse de un medio que contiene glucosa, no es un agar sangre apropiado para
la observacin de reacciones de hemlisis.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 40 g/ml de estreptomicina, se utiliza este medio para
el aislamiento de hongos patgenos.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Infusin de cerebro de ternera 200.0
Infusin corazn vacuno 250.0 Disolver 52 g de polvo en un litro de
agua destilada. Calentar a ebullicin
Peptona 10.0
hasta su disolucin total. Esterilizar en
Cloruro de sodio 5.0 autoclave durante 15 minutos a 121C.
Glucosa 2.0
Fosfato disdico 2.5
Agar 15.0
pH final: 7.4 0.2

Siembra
De acuerdo a los fines de empleo.

Incubacin
El tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin, sern las ptimas y dependern del microorganismo
que se est investigando.

Resultados

Microorganismos Crecimiento
Aspergillus niger Bueno
Neisseria meningitidis Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 Bueno

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar claro.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-147-05 x 500g :Cdigo: B02-147-06
(AGAR ROGOSA) M.R.S. agar
El Agar M.R.S. fue desarrollado por Man, Rogosa y Sharpe para proveer un medio que pudiera evidenciar un buen
crecimiento de lactobacilos y otras bacterias cido lcticas

Fundamento
El medio de cultivo permite un abundante desarrollo de todas las especies de lactobacilos. La peptona y glucosa constituyen
la fuente de nitrgeno, carbono y de otros elementos necesarios para el crecimiento bacteriano. El monoleato de sorbitn,
magnesio, manganeso y acetato, aportan cofactores y pueden inhibir el desarrollo de algunos microorganismos. El citrato de
amonio acta como agente inhibitorio del crecimiento de bacterias Gram negativas.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Proteosa peptona N 3 10.0
Extracto de carne 8.0
Extracto de levadura 4.0
Glucosa 20.0
Monoleato de sorbitn 1 ml Suspender 64 g del medio en un litro de agua
destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a
Fosfato dipotsico 2.0
ebullicin durante 1 2 minutos. Esterilizar en
Acetato de sodio 5.0 autoclave durante 15 minutos a 121 C.
Citrato de amonio 2.0
Sulfato de magnesio 0.2
Sulfato de manganeso 0.05
Agar 13.0
pH final: 6.4 0.2

Siembra
-Por inoculacin directa del material a analizar.
-Tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de la muestra y agregar aproximadamente 15 ml del medio de cultivo fundido y
enfriado a 45-50 C. Mezclar por rotacin, dejar solidificar.

Incubacin
En atmsfera aerbica con 5-10 % CO2, a 35-37 C hasta 3 das a 30 C hasta 5 das.

Resultados
Caractersticas de las colonias: generalmente pequeas, blanco-grisceo, lisas o rugosas.

Microorganismos Crecimiento
Lactobacillus fermentum ATCC 9338 Bueno
Lactobacillus gasseri ATCC 33323 Bueno

Caractersticas del medio

Medio preparado: amarillo.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 2-8 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-205-05 x 500g :Cdigo: B02-205-06