Biotecnologa - Bioprocesos II

INTRODUCCION A LOS PROCESOS BIOTECNOLOGICOS

Separacin y purificacin en Biotecnologa
(Downstream processing)

La comercializacin de nuevos productos obtenidos a travs del empleo de la biotecnologa

requiere un coordinado acople de operaciones unitarias a fin de desarrollar un proceso eficiente.
El objetivo general de este proceso es convertir materia prima relativamente de bajo costo en
productos de mayor valor comercial. En este sentido la biotecnologa se puede definir como la
coleccin de procesos industriales que involucran el uso de sistemas biolgicos. Un esquema
general de un proceso biotecnolgico se muestra en la Figura 1. El punto central de este
proceso es el biorreactor. En esta unidad de operacin se utilizan catalizadores biolgicos
(microorganismos, clulas vegetales animales, enzimas, virus, etc.) para la produccin de
sustancias, alimentos, agentes teraputicos, etc. de inters. No obstante, el biorreactor no
existe aislado, sino que la eficiencia y xito de la operacin depende de un adecuado upstream
processing (procesado previo) que incluye desde el diseo del medio de cultivo hasta la
esterilizacin del mismo. Por otro lado, la recuperacin del producto final requiere una serie de
operaciones referidas colectivamente como downstream processing (SP). Estas operaciones
comprenden todos los tratamientos que requiere el cultivo, una vez finalizado, para la obtencin
del producto en las condiciones de pureza y actividad deseadas.
Los productos que resultan de los proceso biotecnolgicos pueden ser muy variados. La
variedad estar dada por:

a. La naturaleza qumica del mismo: sustancias simples (alcoholes, cidos orgnicos);

protenas, sustancias con actividad teraputica (antibiticos, hormonas) etc.

b. El volumen de produccin y la concentracin del producto en el caldo de fermentacin: los

llamados commodities (etanol, cido ctrico, etc.) se obtienen de a cientos o miles de ton./ao
y en altas concentraciones en la fermentacin. Mientras que los agentes teraputicos de ltima
generacin (hormonas, factores de coagulacin, etc.) se producen slo algunos kg/ao y su
concentracin en la produccin es baja. Esto determina la escala de produccin.

c. Los requerimientos de pureza del producto final. Las molculas a ser utilizadas en salud
humana requerirn una pureza final muy diferente a las enzimas a ser utilizadas en los polvos
para lavar de un acidulante para alimentos.

Con estos criterios podemos agrupar a los productos tal como se muestra en la Tabla 1. En la
Tabla 2 vemos los volmenes de produccin de ciertos productos. En la Tabla 3 vemos las
concentraciones de productos en los caldos luego de la etapa de produccin. En la Fig. 2 vemos
como tanto volumen (2.a) como concentracin (2.b) n i ciden en los precios finales de estos
productos. Por supuesto la ubicacin de un producto en este grfico no es fija. El mejor ejemplo
son los antibiticos. La concentracin de los mismos en los caldos fue incrementndose a
medida que se conoca ms del producto, se mejoraba la productividad de las cepas, se
desarrollaban nuevas metodologas de produccin y as fue aumentndose el volumen y bajando
los precios. Lo mismo puede ocurrir con los agentes teraputicos de ltima generacin.
Por ello hablar de SP en Biotecnologa no es referirnos a algo invariable. Las etapas y
metodologas a emplear estn determinadas por todo lo dicho, pero de cualquier manera se
puede trazar un esquema general que sea aplicable a cualquier proceso.

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 El esquema puede simplificarse como se muestra en la Figura 1.

Estrategias de diseo de procesos de SP

Para todos aquellos productos de la Biotecnologa llamada tradicional hay un gran

conocimiento tecnolgico y de las propiedades bsicas de las molculas a purificar tanto como
del entorno en que se encuentran luego de la etapa de produccin. No ocurre lo mismo con los
productos de ltima generacin ya que, por las necesidades comerciales para aprovechar la baja
competencia, el elevado precio, y dada la baja escala actual de produccin, la estrategia es
llegar rpido con el producto al mercado con la tecnologa de SP que se posea (por lo general la
desarrollada a escala de laboratorio). Esta estrategia posibilita un buen posicionamiento en el
mercado que permite, posteriormente, el desarrollo de nuevas tecnologas de cambio de escala
y SP. Otra vez el ejemplo de este tipo de evolucin son los antibiticos.
Las estrategias de diseo de procesos de SP para los productos conocidos pueden resumirse
en:
1- Conocer las propiedades fsicas y qumicas bsicas del principio activo y caractersticas del
producto final (por ejemplo definir pureza requerida).
El uso determina la pureza. Para agentes teraputicos se requiere un alto grado de pureza
del principio activo. Se tolera un mximo de 100 ppm de impurezas de 10 pg/dosis, adems
de estar libre de pirgenos.

2- Definir perfectamente el material de partida.

En la Tabla 4 se muestra un ejemplo de caracterizacin de material de partida para la
purificacin de un producto. Muchas veces la metodologa de SP condiciona etapas de
produccin. Por ejemplo, pueden existir componentes del medio de cultivo (por lo general
subproductos como agua de hidrolizado de maz, extracto de malta, sueros animales, albmina
otros) que posean sustancias muy similares al producto final que, por lo tanto, interfieren en
la purificacin del mismo. En este caso se debe eliminar ese componente del medio de cultivo.

3- Trazar diferentes esquemas tentativos de SP y llevarlos a etapas de laboratorio y piloto.

Algunas reglas que se siguen para ello son:

a. Elegir en etapas sucesivas procesos basados en diferentes propiedades fisicoqumicas. Por

ejemplo si una primera etapa es cromatografa de intercambio inico (propiedad: carga) se
puede seguir con una cromatografa de filtracin por geles (propiedad: tamao).

b. Separar las impurezas que estn en mayor proporcin en las primeras etapas. Por esta
causa la etapa de separacin siempre finaliza en una concentracin, ya que el agua es por lo
general la impureza mayoritaria (mayor del 90% en cualquier proceso fermentativo).

c. Luego de la concentracin usar en las primeras etapas de purificacin propiamente dicha

un mtodo de alta resolucin (por ejemplo cromatografa de afinidad). Estos mtodos poseen
un alto rendimiento aunque no brinden la mayor pureza. En cierta medida lo que se hace es
seguir concentrando para reducir la cantidad de muestra a tratar en las etapas posteriores.

d. Dejar el proceso ms complejo (y por lo general ms caro) para el final. Se usan estos
mtodos cuando tenemos la sustancia a purificar concentrada y pre-purificada.

Volviendo al diagrama original de SP en la Figura 3 podemos ver algunos mtodos usados en

cada una de esas etapas.

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Figura 1 . Esquema general de un proceso biotecnolgico

Esterilizacin y preparacin del

Inculo medio de cultivo

Produccin en
BIORREACTOR

Recuperacin del producto

Separacin slido-lquido
(separacin celular)
Producto
Intracelular

Ruptura celular Producto

extracelular

Separacin restos
celulares

Recuperacin y
Concentracin

60-70 g/l protenas

Agua
Mayor concen. Sust
simples

Purificacin

Acondicionamiento del producto

Mtodos de alta resolucin

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Tabla 1. Caractersticas de algunos productos biotecnolgicos

Generacin
Caractersticas primera segunda tercera
Antibiticos - Insulina Humana
Producto tipo Factor VIII tPA
aminocidos HC
Tipo de clulas No recombinantes Recombinantes Recombinantes
Extracelular e
Localizacin Intracelular Extracelular
intracelular
Tamao Intermedio Macromolculas Macromolculas
Concentracin en el
alta baja baja
caldo de fermentacin
Volumen de
alto bajo bajo
produccin
Actividad al secretarse Si No Si
Pureza Alta Muy Alta Muy Alta
Similitud con
Baja Alta Alta
contaminantes
Valor Bajo Alto Alto

Figura 2.b

Figura 2.a

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Tabla 2. Produccin mundial aproximada de algunos productos biotecnolgicos

Producto Toneladas por ao

Etanol 5.10 6
JMAF 5.10 6
SCP 5.10 5
Aminocidos 5.10 5
Acido ctrico 5.10 5
Levadura de panificacin 5.10 5
Enzimas 5.10 4
Antibiticos 5.10 4

Tabla 3. Concentraciones tpicas de algunos productos biotecnolgicos a la salida del

biorreactor

Producto Concentracin (kg/m3)

Etanol 70-120
Compuestos orgnicos (c. ctrico) 40-100
SCP 30-50
Interfern 50-70
Antibiticos 10-30
Enzimas (proteasas) 2-5
Vitamina B12 0.02

Tabla 4. Caractersticas generales del material de partida para realizar SP

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 Figura 3 . Metodologas utilizadas en los procesos de SP

Etapa
SEPARACION Filtracin
SOLIDO-LIQUIDO Centrifugacin

Mtodos mecnicos
RUPTURA Permeabilizacin
CELULAR Mtodos qumicos
biolgicos
RECUPERACIN
DEL
PRODUCTO SEPARACION Filtracin
RESTOS
CELULARES Centrifugacin

Ultrafiltracin,
precipitacin, destilacin,
CONCENTRACION extraccin con solventes,
extraccin por 2 fases
acuosas, etc.

Adsorcin, Crom. de
PRETRATAMIENTO O
Intercambio, Precipitacin,
ACONDICIONAMIENTO
Crom. de Afinidad

PURIFICACION
DEL Crom. de Intercambio, Crom.
PRODUCTO ALTA RESOLUCION de Afinidad, Crom. de
Ligandos, Cristalizacin

TERMINACION Filtracin por geles, HPLC,

FPLC

Como podemos observar, la economa de los procesos biotecnolgicos depende en gran

medida de las operaciones de bioseparacin que involucran, de tal manera que la correcta
seleccin de estas operaciones tiene un fuerte impacto en el xito del proceso.