BIOS.

NOTAS INSTANTNEAS DE
BIOQUMICA Cuarta edicin

David Hames
Nigel Hooper
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 David Hames y Nigel Hooper
Faculty of Biological Sciences, University of Leeds

Traduccin
Hctor Ral Planas Gonzlez

 
 
   
       
      
      
Director editorial: Javier de Len Fraga
Editor sponsor: Edgar Emilio Salas Castillo
Editor de desarrollo: Hctor F. Guerrero Aguilar
Supervisor de produccin: Juan Jos Manjarrez de la Vega

NOTA
La medicina es una ciencia en constante desarrollo. Conforme surjan nuevos conocimientos, se requerirn cambios de la teraputi-
ca. El (los) autor(es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosicacin medicamentosa sean precisos y acordes con
lo establecido en la fecha de publicacin. Sin embargo, ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina, ni los editores
ni cualquier otra persona que haya participado en la preparacin de la obra garantizan que la informacin contenida en ella sea
precisa o completa, tampoco son responsables de errores u omisiones, ni de los resultados que con dicha informacin se obtengan.
Convendra recurrir a otras fuentes de datos, por ejemplo, y de manera particular, habr que consultar la hoja informativa que se
adjunta con cada medicamento, para tener certeza de que la informacin de esta obra es precisa y no se han introducido cambios en
la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administracin. Esto es de particular importancia con respecto a frmacos
nuevos o de uso no frecuente. Tambin deber consultarse a los laboratorios para recabar informacin sobre los valores normales.

Prohibida la reproduccin total o parcial de esta obra,

por cualquier medio, sin autorizacin escrita del editor.

DERECHOS RESERVADOS 2014, respecto a la primera edicin en espaol por,

McGRAW-HILL/INTERAMERICANA EDITORES, S.A. DE C.V.
Prolongacin Paseo de la Reforma 1015, Torre A,
Piso 17, Colonia Desarrollo Santa Fe,
Delegacin lvaro Obregn,
C.P. 01376, Mxico, D. F.
Miembro de la Cmara Nacional de la Industria Editorial Mexicana, Reg. Nm. 736

ISBN: 978-1-4562-2378-6

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0/2014

Translated from the fourth English edition of:

Biochemistry, David Hames and Nigel Hooper, 4th ed. (BIOS instant notes).
Copyright 2011, by Garland Science, Taylor & Francis Group, LLC.
All Rights Reserved
ISBN: 978-0-415-60845-9

1234567890 2356789014

Impreso en Mxico Printed in Mexico

Comit asesor para la
revisin cientfica de
la edicin en espaol

MC Rosa Mara Dvila Mrquez

Maestra en Ciencia y Tecnologa de los Alimentos
Profesor Investigador Titular A de tiempo completo
Facultad de Ciencias Qumicas
Benemrita Universidad Autnoma del Estado de Puebla

Dra. Marina Gavilanes Ruiz

Departamento de Bioqumica
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)

MC Ariadna Gonzlez Sols

Departamento de Bioqumica. Conjunto E
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)

Dr. Javier Plasencia de la Parra

Profesor titular. Departamento de Bioqumica
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)

Dra. Sobeida Snchez Nieto

Departamento de Bioqumica. Conjunto E
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)
 Informacin adicional disponible en el
Centro de aprendizaje en lnea
(On-line Learning Center)
www.mhhe.com/medicina/hames_bioquimica4e
Contenido
Prefacio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ix

Seccin A Clulas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
A1 Clulas procariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
A2 Clulas eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
A3 Crecimiento celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
A4 Imgenes de las clulas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
A5 Fraccionamiento celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Seccin B Aminocidos y protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

B1 Estructura de los aminocidos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
B2 Estructura y funcin de las protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
B3 Mioglobina y hemoglobina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
B4 Colgena . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
B5 Motores moleculares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
B6 Anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54

Seccin C Estudio de las protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60

C1 Purificacin de protenas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60
C2 Electroforesis en gel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66
C3 Secuenciacin de protenas y sntesis de pptidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
C4 Inmunodeteccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77

Seccin D Enzimas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
D1 Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
D2 Termodinmica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
D3 Cintica enzimtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
D4 Inhibicin enzimtica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94
D5 Regulacin de la actividad enzimtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97

Seccin E Membranas y sealizacin celulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103

E1 Lpidos de la membrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103
E2 Estructura de la membrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108
E3 Transporte de membrana: molculas pequeas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115
E4 Transporte de membrana: macromolculas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 120
E5 Transduccin de seales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 124
E6 Funcin nerviosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 132

Seccin F Estructura y replicacin del DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 136

F1 Introduccin al DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 136
F2 Genes y cromosomas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 140
F3 Replicacin del DNA en las bacterias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 145
F4 Replicacin del DNA en los eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150

Seccin G Sntesis y procesamiento del RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154

G1 Introduccin al RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154
G2 Trascripcin en procariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 156
G3 Operones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 160
viii CONTENIDO

G4 Transcripcin en eucariotas: descripcin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 166

G5 Transcripcin de los genes que codifican protenas
en los eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168
G6 Regulacin de la transcripcin por la polimerasa II de RNA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 172
G7 Procesamiento del pre-mRNA eucariota . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 179
G8 Transcripcin y procesamiento del RNA ribosmico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 189
G9 Transcripcin y procesamiento del RNA de transferencia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 195

Seccin H Sntesis de protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 199

H1 El cdigo gentico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 199
H2 Traduccin en procariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 204
H3 Traduccin en eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 210
H4 Direccionamiento de protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 213
H5 Glucosilacin de protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 220

Seccin I Tecnologa del DNA recombinante. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224

I1 El poder de los mtodos de DNA recombinante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224
I2 Enzimas de restriccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 227
I3 Hibridacin de cidos nucleicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 232
I4 Clonacin del DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 236
I5 Secuenciacin del DNA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 240
I6 Reaccin en cadena de la polimerasa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 243
I7 Mutagnesis dirigida al sitio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 247

Seccin J Metabolismo de carbohidratos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 252

J1 Monosacridos y disacridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 252
J2 Polisacridos y oligosacridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 257
J3 Gluclisis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 260
J4 Gluconeognesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 268
J5 Va de la pentosa fosfato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 275
J6 Metabolismo del glucgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 278
J7 Control del metabolismo del glucgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 281

Seccin K Metabolismo de lpidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 285

K1 Estructura y funcin de los cidos grasos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 285
K2 Descomposicin de los cidos grasos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 288
K3 Sntesis de cidos grasos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 294
K4 Triacilgliceroles. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 299
K5 Colesterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303
K6 Lipoprotenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 308

Seccin L Respiracin y energa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 311

L1 Ciclo del cido ctrico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 311
L2 Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 315
L3 Fotosntesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 326

Seccin M Metabolismo del nitrgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 335

M1 Fijacin y asimilacin del nitrgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 335
M2 Metabolismo de los aminocidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 338
M3 Ciclo de la urea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343
M4 Hemos y clorofilas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 348

Lecturas recomendadas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 352

Abreviaturas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 357
ndice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 360
Prefacio
Transcurrieron cinco aos desde que se public la tercera edicin de Notas instantneas de bio-
qumica. Muchos cambios se produjeron en el tema desde entonces, y realmente ha sido un periodo
emocionante para el descubrimiento en numerosas reas de esta materia. No es de extraar que, por
lo tanto, los autores enfrenten el mismo deseo experimentado por los escritores de libros de texto de
todo el mundo: poder describir a los estudiantes todo sobre los nuevos avances logrados. Sin embargo,
la razn por la que se redact la primera edicin, hace ya muchos aos, fue destacar la informacin
fundamental que un alumno de primer ingreso tiene que saber para contar con una base slida para
los aos de estudio por venir. Esta nueva edicin se mantiene fiel a ese objetivo original, pero a lo
largo del proceso se aprovech la oportunidad de actualizar el contenido de manera significativa.
La conviccin de los autores es que, como en ediciones anteriores, este libro proporcione a los lec-
tores una forma rpida de reconocer y comprender los principales hechos y conceptos que integran
la piedra angular de esta rama de la ciencia. Para aquellos que deseen conocer ms, la seccin de
Lecturas recomendadas proporciona informacin de algunos de los textos convencionales lderes
en bioqumica, que pueden llevar al alumno a la vanguardia de la materia, adems de revisiones ms
detalladas de temas especficos.
Como se hizo notar en el prefacio de la tercera edicin, si bien este libro est dirigido a apoyar a los
estudiantes sobre todo en los primeros aos de la carrera, los autores saben por su experiencia
personal como docentes que puede convertirse con rapidez en un compaero valioso y que, a largo
plazo, podr consultarse siempre que exista la necesidad de refrescar la memoria, lo que lo convierte
en un til apoyo para la revisin.
En la redaccin de sta, su cuarta edicin, se actualizaron todos los temas primordiales, con el obje-
tivo principal de elaborar un libro que tuviera aproximadamente la misma extensin que la edicin
previa, tomando en cuenta que gracias a la retroalimentacin de los estudiantes (y tambin del per-
sonal acadmico), los autores confirmaron que su formato y claridad de enfoque son una fortaleza
importante en comparacin con los grandes textos que estn disponibles en general.
Por ltimo, unas palabras dirigidas al alumno. Como cualquier tema que se estudia a un nivel avan-
zado, la bioqumica al principio puede parecer intimidante (aunque intelectualmente muy gratifi-
cante). Este libro est organizado de tal forma que no es necesario leerlo de principio a fin. Puede
echarse mano de l de acuerdo con el plan de estudios, en busca de comprensin y orientacin aqu y
all a medida que los cursos progresan, y conviene mantenerse en estrecho contacto con l conforme
se acercan los temidos exmenes, donde sin duda demostrar ser una herramienta rpida de revisar
y que permita tranquilidad al constatar que se conocen los aspectos fundamentales. Esperamos
que lo encuentren tan til como muchos estudiantes de cursos anteriores encontraron las ediciones
previas.
David Hames
Nigel Hooper
SECCIN A CLULAS

A1Clulas procariotas
Notas clave
Origen y evolucin
de las clulas
Procariotas
Estructura de la clula
procariota
Paredes de la clula
bacteriana
Flagelos bacterianos
En la Tierra, todos los organismos evolucionaron desde un ancestro comn. En
la era prebitica, las molculas orgnicas simples se formaron y polimerizaron
de manera espontnea en macromolculas. Despus, tales macromolculas
adquirieron la capacidad de autorreplicarse y catalizar otras reacciones, antes
de encerrarse dentro de una membrana para formar la primera clula. En el
presente, las clulas se dividen en tres grupos principales: bacterias, arqueas
y eucariotas.
Las procariotas son los organismos ms abundantes en la Tierra y se dividen
en dos grupos distintos, las bacterias (o eubacterias) y las arqueas (o arqueo-
bacterias). Una clula procariota no contiene un ncleo envuelto por una
membrana.
Cada clula procariota est rodeada por una membrana plasmtica. La clula ca-
rece de organelos subcelulares. El cido desoxirribonucleico (DNA) est conden-
sado dentro del citosol, donde forma el nucleoide.
El peptidoglucano (protena y oligosacrido) de la pared celular protege a la
clula procariota de la presin mecnica y osmtica. Algunos antibiticos
como la penicilina se dirigen contra enzimas que participan en la sntesis de la
pared celular. Las bacterias grampositivas tienen una pared gruesa que rodea
a la membrana plasmtica, mientras que las bacterias gramnegativas tienen
una pared celular ms delgada y una membrana externa, entre las cuales est
el espacio periplsmico.
Algunas procariotas tienen flagelos similares a colas. Por rotacin de tal flagelo,
las bacterias pueden moverse a travs del medio que las rodea en respuesta a
estmulos qumicos (quimiotaxis). Los flagelos bacterianos estn formados de
la protena flagelina, la cual forma un largo filamento cuya rotacin es dirigida
por un flujo de protones a travs de las protenas motoras flagelares.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (E2) Estructura de la membrana

(B1) Estructura de los aminocidos (F2) Genes y cromosomas
(B5) Motores moleculares (L2) Transporte electrnico y
(E1) Lpidos de la membrana fosforilacin oxidativa

Origen y evolucin de las clulas de las macromolculas de autorreplicarse como se ve

Pese a la gran variedad de sistemas vivos, todos los orga-
nismos de la Tierra son bastante uniformes a nivel mo-
lecular, lo que indica que todos ellos evolucionaron a par-
tir de un ancestro comn. La vida emergi por primera
vez hace cuando menos 3 800 millones de aos, aunque
cmo se origin la vida y cmo surgi la primera clula folpidos (seccin E1), por lo cual el interior de la clula
son asuntos que an se desconocen. Los experimentos
muestran que las molculas orgnicas simples pueden
formarse y polimerizarse de manera espontnea en ma-
cromolculas bajo las condiciones que se supone exis-
tan en la atmsfera de la Tierra primitiva, en la llamada
era prebitica. El siguiente paso crtico fue la capacidad
con los cidos nucleicos del presente y catalizar otras
reacciones, como se demuestra con el cido ribonu-
cleico (RNA) (seccin G1). Se supone que la primera
clula debe haberse originado por el cierre del RNA de
autorreplicacin en una membrana compuesta por fos-
se separ del ambiente externo. Las macromolculas
encapsuladas deberan haberse mantenido como una
unidad capaz de autorreproducirse y luego evolucionar
hasta dar origen a la gran variedad de formas de vida que
se encuentran en la Tierra hoy en da. El anlisis de las
secuencias de cido desoxirribonucleico (DNA) (seccin
2 SECCIN A CLULAS
F1) de diferentes organismos ha permitido visualizar
una posible va evolutiva a partir de una clula ancestral
comn hacia las clulas y organismos de la actualidad
(figura A1-1).
Por tanto, el mundo vivo tiene tres divisiones o domi-
nios principales: bacterias, arqueas y eucariotas (sec-
cin A2). Las bacterias son las procariotas ms comunes
en el suelo y el agua y viven en o sobre organismos ms
grandes; entre las mismas se incluyen Escherichia coli (E.
coli) y especies de Bacillus, as como las cianobacterias
(algas fotosintticas azul-verdes). Sobre todo las arqueas
habitan en ambientes inusuales como la salmuera, los
manantiales de aguas cidas y calientes y en la profun-
didad de los ocanos, e incluyen las bacterias azufradas y
metangenas, aunque otras se encuentran en ambientes
menos hostiles.
Procariotas
Las procariotas son los organismos ms numerosos y
dispersos en la Tierra y se clasifican as debido a que no
tienen un ncleo rodeado de membrana. Las procariotas
incluyen dos grupos relacionados pero separados: las
bacterias (o eubacterias) y las arqueas (o arqueobacte-
rias). Estos dos grupos de procariotas divergen tempra-
no en la historia de la vida en la Tierra (figura A1-1).
Estructura de la clula procariota
En general, las procariotas varan en tamao desde 0.1
a 10 m y tienen una de tres formas bsicas: esfrica
(cocos), tipo bastn (bacilos) o helicoidal (espirilos).
Como todas las clulas, una clula procariota est ro-
deada por una membrana plasmtica que encierra
por completo el citosol y separa a la clula de su ambien-
te externo (figura A1-2). La membrana plasmtica, la
cual es de alrededor de 8 nm de grosor, consiste en
una bicapa lipdica que contiene protenas (secciones
Procariotas
Bacterias Arqueas
Ancestro
comn
Figura A1-1. Evolucin de las clulas.
E1 y E2). Las procariotas carecen de los organelos sub-
celulares membranosos caractersticos de las eucario-
tas (seccin A2). El citosol acuoso contiene las macro-
molculas (enzimas, cido ribonucleico mensajero
(mRNA), RNA de transferencia (tRNA) y ribosomas], com-
puestos orgnicos y iones necesarios para el metabo-
lismo celular. Asimismo, el citosol contiene el cromo-
soma procaritico, que consiste en una molcula de DNA
circular, la cual est condensada para formar un cuerpo
conocido como el nucleoide (figura A1-2) (seccin F2).
Paredes de la clula bacteriana
Para proteger a las clulas de insultos mecnicos y de
la presin osmtica, la mayora de las procariotas est
rodeada de una pared celular rgida de 3 a 25 nm de
grosor (figura A1-2). La pared celular est compuesta
de peptidoglucanos, un complejo de oligosacridos
y protenas. El componente oligosacrido consiste en
cadenas lineales alternantes de N-acetilglucosamina
(GlcNAc) y cido N-acetilmurmico (NAM) con uniones
1-4 (seccin J1). Unido mediante un enlace amida al
grupo del cido lctico del NAM est un tetrapptido que
contiene un D-aminocido. Cadenas de peptidoglu-
canos paralelas adyacentes forman uniones covalentes
que se entrecruzan a travs de las cadenas laterales
del tetrapptido con otros pptidos cortos. El extenso
entrecruzamiento de los peptidoglucanos de la pared
celular les proporciona su fuerza y rigidez. La presencia
de D-aminocidos en los peptidoglucanos otorga la
resistencia de la pared celular a la accin de las proteasas,
las cuales actan sobre los L-aminocidos, que son ms
comunes (seccin F1), pero proporcionan un objetivo
exclusivo para la accin de ciertos antibiticos como
la penicilina. La penicilina acta al inhibir la enzima
que forma los entrecruzamientos covalentes de los
peptidoglucanos y en consecuencia debilita la pared
celular. Los enlaces glucosdicos 1-4 entre la GlcNAc
Eucariotas
Animales Hongos Vegetales

y el NAM es susceptible de hidrlisis por la enzima liso-
zima, la cual est presente en las lgrimas, moco y otras
secreciones corporales.
Las bacterias pueden clasificarse como grampositivas o
gramnegativas segn si se colorean o no con la tincin
de Gram. Las bacterias grampositivas (p. ej., Bacillus
polymyxa) tienen una pared celular gruesa (25 nm)
que rodea su membrana plasmtica, en tanto que las
bacterias gramnegativas (p. ej., E. coli) tienen una pared
celular ms delgada (3 nm) y una segunda membrana
externa (figura A1-3). En contraste con la membrana
plasmtica, esta membrana externa es muy permeable
al paso de molculas relativamente grandes (peso mo-
lecular > 1 000 Da) debido a las protenas porinas, las
cuales forman poros en la bicapa lipdica (seccin E3).
Entre la membrana externa y la pared celular est el
periplasma, un espacio ocupado por protenas que
secreta la clula.
Flagelos bacterianos
Muchas clulas bacterianas tienen uno o ms apndi-
ces semejantes a una cola conocidos como flagelos. Al
hacer rotar sus flagelos, las bacterias pueden moverse a
travs del medio extracelular hacia atrayentes y alejarse
Membrana Membrana plasmtica
externa
Citosol
Nucleoide
Figura A1-2. Estructura de la clula procariota.
a)
Membrana
plasmtica de peptidoglucano
Figura A1-3. Estructura de la pared celular de a) una bacteria grampositiva,
y b) una bacteria gramnegativa.
A1CLULAS PROCARIOTAS 3
de repelentes por la llamada quimiotaxis. Los flagelos
bacterianos son diferentes de los cilios y flagelos euca-
riticos por dos razones: 1, cada flagelo bacteriano est
elaborado con la protena flagelina (subunidad de 53
kDa) en oposicin a la tubulina (seccin B5) y 2, el fla-
gelo bacteriano rota en lugar de incurvarse. Una bacte-
ria E. coli tiene alrededor de seis flagelos que surgen de
posiciones aleatorias sobre la superficie de las clulas.
Los flagelos son filamentos helicoidales delgados, de
15 nm de dimetro y 10 m de largo. El microscopio
electrnico revela que el filamento flagelar contiene
11 subunidades en dos vueltas helicoidales, las cuales,
cuando se ven desde el extremo final, tienen el aspecto
de un propelente de 11 hojas con un hueco central. Los
flagelos crecen a travs de la adicin de nuevas sub-
unidades de flagelina en el extremo ms alejado de las
clulas, que se difunden a travs del hueco central. En su
base, situada en la membrana plasmtica, est el motor
flagelar, un ensamble intrincado de 40 o ms protenas.
La rotacin de los flagelos es dirigida por un flujo de pro-
tones a travs de ciertas protenas del motor flagelar. Un
motor similar dirigido por protones se encuentra en la
trifosfatasa de adenosina (ATP-asa) F0F1 que sintetiza el
trifosfato de adenosina (ATP) (seccin L2).
Pared celular
Membrana
plasmtica
Flagelo
DNA
b) Espacio Membrana
periplsmico externa
Pared celular Membrana
plasmtica
SECCIN A CLULAS

A2Clulas eucariotas
Notas clave
Eucariotas Las clulas eucariotas tienen un ncleo rodeado por una membrana y varios
organelos subcelulares (internos) rodeados de membrana, cada uno de los cua-
les desempea una funcin especfica.
Membrana plasmtica La membrana plasmtica rodea las clulas y las separa del ambiente externo. La
membrana plasmtica es una barrera con permeabilidad selectiva debido a
la presencia de protenas de transporte especficas y tiene tambin protenas
receptoras que se unen a ligandos especficos. Tambin se relaciona con los pro-
cesos de exocitosis y endocitosis.
Ncleo El ncleo almacena la informacin gentica de las clulas a travs del DNA en
los cromosomas. Est rodeado por una doble membrana, pero la existencia de
poros en sta permite que las molculas se muevan hacia dentro y hacia fuera
del ncleo. El nucleolo que se encuentra dentro del ncleo es el sitio donde se
sintetiza el RNA ribosmico.
Retculo endoplsmico Esta red de vesculas membranosas interconectadas se divide en dos partes dis-
tintas. El retculo endoplsmico rugoso (RER), el cual est tachonado con ribo-
somas, es el sitio de biosntesis de la membrana y de las protenas secretorias y
de su modificacin postraduccin. El retculo endoplsmico liso (SER) interviene
en la biosntesis de fosfolpidos y en la desintoxicacin de compuestos txicos.
Aparato de Golgi El aparato de Golgi es un sistema de sacos aplanados unidos a la membrana.
Recibe vesculas membranosas del RER, a las que les modifica las protenas que
contienen y a las que despus empaca en otras vesculas, las cuales acaban por
fusionarse con la membrana plasmtica u otros organelos subcelulares.
Mitocondrias Las mitocondrias tienen una membrana interna y una externa separadas por
el espacio intermembranoso. La membrana externa es ms permeable que la
membrana interna debido a la presencia de protenas porinas. La membrana
interna, la cual est plegada para formar crestas, es el sitio de la fosforilacin
oxidativa, la que produce ATP. La matriz central es el sitio de la degradacin de
los cidos grasos y del ciclo del cido ctrico.
Cloroplastos Los cloroplastos de las clulas vegetales estn rodeados por una membrana
doble y tienen un sistema de membranas interno de vesculas tilacoides que
estn apilados para formar granos. Las vesculas tilacoides contienen clorofila y
son el sitio de la fotosntesis. La fijacin del dixido de carbono (CO2) tiene lugar
en el estroma, la materia soluble que rodea las vesculas tilacoides.
Lisosomas En las clulas animales, los lisosomas estn rodeados por una membrana sim-
ple. Tienen un pH cido interno (pH 4 a 5), que mantienen protenas de la mem-
brana que bombean iones H+ hacia dentro. En el interior de los lisosomas hay
enzimas hidrolasas cidas que intervienen en la degradacin de las macromo-
lculas, entre otras aquellas que se internalizan mediante endocitosis.
Peroxisomas Los peroxisomas contienen enzimas que participan en la degradacin de los
aminocidos y los cidos grasos, un bioproducto de los cuales es el perxido de
hidrgeno. La enzima catalasa, que tambin se encuentra dentro de los peroxi-
somas, degrada con rapidez este compuesto txico.
Citosol El citosol es la parte soluble del citoplasma donde tiene lugar un gran nmero
de reacciones metablicas, por ejemplo gluclisis, gluconeognesis, sntesis de
cidos grasos. Dentro del citosol est el citoesqueleto.
 A2CLULAS EUCARIOTAS 5

Citoesqueleto El citoesqueleto es una estructura interna que controla la forma y movimiento de

Pared de la clula La pared celular que rodea a una clula vegetal est hecha del polisacrido celu-
vegetal
Vacuola de la clula La vacuola rodeada de membranas usada para almacenar nutrientes y produc-
vegetal
Temas relacionados
la clula y de los organelos internos. El citoesqueleto consiste en microfilamen-
tos, filamentos intermedios y microtbulos. Los microfilamentos son polmeros
helicoidales de 5 a 9 nm de dimetro de la protena actina que tienen una funcin
mecnica de soporte dentro de las clulas. Los filamentos intermedios son fibras
semejantes a cuerdas de 7 a 11 nm de dimetro elaborados a partir de una familia
de protenas filamentosas intermedias que proveen la fuerza mecnica y la resis-
tencia a la tensin de cizallamiento. Los microtbulos son cilindros huecos de
25 nm de dimetro elaborados de la protena tubulina. El huso mittico que
interviene en la separacin de los cromosomas durante la divisin celular est
hecho de microtbulos. La colchicina y la vimblastina inhiben la formacin de
microtbulos, mientras que el taxol los estabiliza. Al interferir con la mitosis,
algunos de estos compuestos se usan como frmacos anticancerosos.
losa. En la madera, el polmero fenlico denominado lignina da a la pared ce-
lular una fuerza y rigidez adicionales.
tos de desecho tiene un pH cido y, debido al influjo de agua, crea presin de
turgor dentro de la clula cuando sta se empuja contra la pared celular.
(A1) Clulas procariotas ((F2) Genes y cromosomas
(E4) Transporte de membrana: (H4) Protena de direccionamiento
macromolculas

Eucariotas Membrana plasmtica

Los eucariotas incluyen especies tan diversas como ani-
males, plantas, hongos y mohos del cieno. En todos los
eucariotas, la clula est rodeada por una membrana
plasmtica, tiene un ncleo rodeado por una mem-
brana y contiene diversos organelos subcelulares (figu-
ra A2-1). Estos organelos son estructuras rodeadas de
membranas, cada uno con una funcin exclusiva y
tambin con un complemento especfico de protenas
y otras molculas. Las diferencias clave entre las clu-
las eucariota y procariota (seccin A1) se listan en el
cuadro A2-1. Las clulas animal y vegetal tienen la misma
estructura bsica, aunque algunos organelos y estructu-
ras se encuentran en una y no en la otra (p. ej., cloro-
plastos, vacuolas y pared celular en las clulas vegeta-
les, lisosomas en las clulas animales).
La membrana plasmtica envuelve la clula, y de ese
modo la separa del ambiente externo al mismo tiempo
que mantiene la composicin inica y la presin osm-
tica correctas en el citosol. La membrana plasmtica,
como todas las membranas, goza de permeabilidad
selectiva para ciertas molculas debido a la presencia de
protenas especficas en ella (seccin E3). La membrana
plasmtica tambin participa en la comunicacin con
otras clulas, en particular a travs de la unin de ligan-
dos (molculas pequeas como las hormonas, neuro-
transmisores, etc.) a protenas receptoras sobre su
superficie (seccin E5). La membrana plasmtica tam-
bin interviene en la exocitosis (secrecin) y endocitosis
(internalizacin) de protenas y otras macromolculas
(seccin E4).

Cuadro A2-1. Diferencias clave entre clulas Ncleo

eucariotas y procariotas El ncleo est rodeado por dos membranas, las mem-
Caractersticas Procariota Eucariota branas nucleares interna y externa. Estas dos membra-
nas se fusionan en los poros nucleares, a travs de los
Dimetro Aprox. 1 m 10 a 100 m cuales las molculas (mRNA, protenas, ribosomas, etc.)
Ncleo Ausente Presente pueden moverse entre el ncleo y el citosol. Otras pro-
Organelos Ausentes Presentes tenas, por ejemplo las que participan en la regulacin
citoplsmicos de la expresin gentica, pueden pasar a travs de los
poros desde el citosol al ncleo. La membrana nuclear
Contenido de 1 106 a 5 106 1.5 107 a 5 109
externa es con frecuencia continua con el retculo endo-
DNA (pares
plsmico rugoso (RER). Dentro del ncleo, el DNA est
de bases)
fuertemente enrollado alrededor de protenas histonas
Cromosomas Una molcula de DNA Mltiples molculas y organizado en complejos denominados cromosomas
circular lineales de DNA (seccin F2). Visible bajo el microscopio de luz (seccin
A4) est el nucleolo, una subregin del ncleo que es el
6 SECCIN A CLULAS

a) Citosol Vesculas
Membrana plasmtica
secretorias

Ncleo
Golgi
Nucleolo

Mitocondria

Retculo
endoplsmico
rugoso
Cilio
Lisosomas
Retculo endoplsmico liso Peroxisoma

b) Pared celular Vacuola Retculo endoplsmico liso

Membrana
plasmtica

Cloroplasto Peroxisoma

Nucleolo Mitocondria

Ncleo
Retculo Golgi Citosol
endoplsmico rugoso

Figura A2-1. Estructura de la clula eucariota: a) estructura de una clula animal

tpica; b) estructura de una clula vegetal tpica.

sitio donde tiene lugar la sntesis del cido ribonucleico
ribosmico (rRNA).
Retculo endoplsmico
El retculo endoplsmico (ER) es una red de vesculas
membranosas interconectadas. El retculo endopls-
mico rugoso (RER) est poblado en su cara citoslica con
ribosomas, el sitio de la biosntesis de las protenas de
la membrana y secretorias (seccin H4). Dentro de la
luz del RER estn las enzimas que intervienen en la modi-
ficacin postraduccin (glucosilacin, protelisis, etc.)
de las protenas de la membrana y secretorias (seccin
H5). El retculo endoplsmico liso (SER), el cual carece
de ribosomas, es el sitio de la biosntesis de fosfolpi-
dos, y es donde tienen lugar numerosas reacciones de
desintoxicacin.
Aparato de Golgi
El aparato de Golgi es un sistema de sacos aplanados
rodeados de membrana. Las vesculas membrano-
sas procedentes del RER, que contienen protenas de la
membrana y secretorias, se fusionan con la fase cis del
aparato de Golgi y liberan su contenido en ste. Durante
el trnsito a travs del aparato de Golgi, suceden modi-
ficaciones postraduccin adicionales en estas prote-
nas y luego son clasificadas y empacadas en diferentes
vesculas (seccin H5). Tales vesculas emergen por la
cara trans del aparato de Golgi (tambin llamada la red
de Golgi) y son transportadas a travs del citosol, para
terminar por fusionarse con la membrana plasmtica y
liberar su contenido al espacio extracelular (un proceso
conocido como exocitosis; seccin E4) o a otros orga-
nelos internos (p. ej., lisosomas) (para mayores detalles
vase la seccin H4).
Mitocondrias
Una mitocondria tiene una membrana interna y una
externa y entre ambas se encuentra el espacio inter-
membranoso (figura A2-2a). La membrana externa
contiene protenas porinas, las cuales la hacen permea-
ble a molculas de hasta 10 kDa. La membrana interna,
que es considerablemente menos permeable, presenta
grandes pliegues denominados crestas, las cuales pro-
truyen en la matriz central. La membrana interna es el

a)
Membrana externa Espacio intermembranas
Membrana
interna
Matriz
Crestas
b)
Membrana interna
Membrana externa
Estroma
Granos Vescula tilacoide
Figura A2-2. Estructura de una a) mitocondria y un
b) cloroplasto.
sitio donde ocurre la fosforilacin oxidativa y el trans-
porte de electrones que participa en la produccin de
ATP (seccin L2). La matriz central es el lugar de numero-
sas reacciones metablicas, como la del ciclo del cido
ctrico (seccin L1) y la degradacin de los cidos grasos
(seccin K2). Tambin se encuentran dentro de la matriz
el DNA mitocondrial, encargado de codificar algunas de
las protenas mitocondriales.
Cloroplastos
Los cloroplastos, que son estructuras exclusivas de
las clulas vegetales, tambin presentan membranas
interna y externa. Adems, hay un extenso sistema de
membrana interno hecho de vesculas tilacoides (ve-
sculas aplanadas interconectadas que forman discos)
apiladas una contra la otra para formar granos (figura
A2-2b). Dentro de las vesculas tilacoides est el pig-
mento verde clorofila (seccin M4), junto a las enzimas
que atrapan la energa luminosa y la convierten en ener-
ga qumica bajo la forma de ATP (seccin L3). El estroma,
que es el espacio que rodea a las vesculas tilacoides, es
el sitio de fijacin del dixido de carbono (CO2 ) el de la
conversin del CO2 en compuestos orgnicos. Los clo-
roplastos, igual que las mitocondrias, contienen DNA, el
cual codifica algunas de las protenas de los cloroplastos.
Lisosomas
Los lisosomas, los cuales se encuentran slo en las clu-
las animales, tienen una membrana simple que los
rodea. El pH interno de estos organelos es levemente
cido (pH 4 a 5) y se mantiene debido a la accin de pro-
tenas integrales de la membrana que bombean iones de
hidrgeno en ellos (seccin E3). Los lisosomas contie-
nen un conjunto de hidrolasas que muestran actividad
ptima en este pH cido (y que en consecuencia se deno-
minan hidrolasas cidas), pero son inactivas en el pH
neutral del citosol y del lquido extracelular. Estas enzi-
mas participan en la degradacin de macromolculas
A2CLULAS EUCARIOTAS 7
del hospedador y externas en sus subunidades mono-
mricas; las proteasas degradan protenas, las lipasas
degradan lpidos, las fosfatasas eliminan grupos sul-
fato de los nucletidos y fosfolpidos y las nucleasas
degradan DNA y RNA. Los lisosomas intervienen en la de-
gradacin de macromolculas extracelulares que han
sido incluidas dentro de las clulas mediante endocito-
sis (seccin E4), as como en la degradacin y recicla-
miento de organelos celulares envejecidos normales, un
proceso que se denomina autofagia.
Peroxisomas
Estos organismos tienen una membrana de revesti-
miento nica y contienen enzimas que degradan los ci-
dos grasos y los aminocidos. Un bioproducto de estas
reacciones es el perxido de hidrgeno, el cual es txico
para las clulas. La presencia de grandes cantidades de
la enzima catalasa en los peroxisomas convierte con
rapidez el perxido de hidrgeno txico en las sustan-
cias inocuas H2O y O2:
Catalasa
2H2O2> 2H2O + O2
Citosol
El citosol es aquella parte del citoplasma no incluida
dentro de ninguno de los organelos subcelulares y es
el principal sitio del metabolismo celular, en el que se
demuestra la presencia de un gran nmero de diferen-
tes enzimas y otras protenas. Por ejemplo, en el citosol
tienen lugar la gluclisis (seccin J3), gluconeognesis
(seccin J4), la va de la pentosa fosfato (seccin J5) y
la sntesis de cidos grasos (seccin K3). El citosol no
es una sopa homognea, ya que contiene dentro de
s al citoesqueleto. Tambin se encuentran dentro del
citosol de muchas clulas los cuerpos de inclusin (gr-
nulos de material que no estn rodeados por una mem-
brana), como los grnulos de glucgeno en el hgado
y en las clulas musculares y las gotitas de triacilglicerol
en las clulas grasas del tejido adiposo.
Citoesqueleto
El citoesqueleto es una estructura interna importan-
te para el mantenimiento y alteracin de la forma celu-
lar, para permitir que clulas como los espermatozoides
y los leucocitos se muevan de un sitio a otro, en vesculas
del transporte intracelular y arrastrar los cromosomas
durante la mitosis y tambin cuando la clula se divi-
de en dos. Tres tipos de filamentos componen el cito-
esqueleto: microfilamentos, filamentos intermedios y
microtbulos, cada uno de ellos con diferentes propie-
dades mecnicas y dinmicas.
Microlamentos
Los microfilamentos (tambin conocidos como fila-
mentos de actina), con un dimetro de 5 a 9 nm, cumplen
8 SECCIN A CLULAS
una funcin de soporte mecnico, lo cual determina la
forma de la superficie celular y tambin participan en
el movimiento de todas las clulas. Los microfilamentos
son dos polmeros helicoidales de doble hebra de la pro-
tena actina, los cuales parecen ser estructuras flexibles
organizadas en una variedad de haces lineales y redes
ms extensas. A travs de su interaccin con la miosina,
los microfilamentos forman ensambles contrctiles que
participan en varios movimientos intracelulares como
el flujo citoplsmico y en la formacin de invaginacio-
nes de la membrana (seccin B5).
Filamentos intermedios
Los filamentos intermedios (7 a 11 nm de dimetro)
proveen fuerza mecnica y resistencia a la fuerza de
cizallamiento. Estn formados de protenas filamen-
tosas intermedias que constituyen una familia grande
y heterognea que forma fibras tipo cuerda. La piel de
los animales ms grandes contiene una extensa red
de filamentos intermedios elaborados con la protena
queratina, que tiene una estructura enrollada helicoidal
 de dos hebras, mientras que la lmina nuclear, una
red que est justo por debajo de la membrana nuclear
interna, est formada de otro tipo de filamentos in-
termedios.
Microtbulos
El tercer tipo de filamentos del citoesqueleto, los micro-
tbulos, determina la posicin de los organelos rodea-
dos de membranas y dirigen su transporte intracelular.
Por ejemplo, el huso mittico que interviene en la se-
paracin de los cromosomas replicados durante la mi-
tosis es un ensamble de microtbulos. Los microtbulos
son estructuras cilndricas huecas con un dimetro
externo de 25 nm que estn elaboradas con la protena
tubulina (figura A2-3). La pared rgida de un microt-
bulo est hecha de una disposicin helicoidal de sub-
unidades alternantes de tubulina  y , cada una de 50
kDa de tamao. Un corte transversal a travs del mi-
crotbulo revela que hay 13 subunidades de tubulina
por vuelta del filamento. Los microtbulos celulares
estn formados por la adicin de molculas de tubulina
y a filamentos preexistentes o centros de nucleacin.
Un extremo del microtbulo suele fijarse a un centro
organizador de microtbulos denominado centroso-
ma. Los frmacos colchicina y vimblastina inhiben la
polimerizacin de los microtbulos y por tanto blo-
quean procesos celulares como la divisin celular,
que depende del funcionamiento de los microtbulos.
Otro componente, taxol, estabiliza la tubulina en los
microtbulos y promueve la polimerizacin. Algunos
de estos compuestos, como la vimblastina y el taxol,
se estn utilizando como frmacos anticancerosos ya
a) d)
b) c)
Luz
Protolamento
Figura A2-3. Estructura de un microtbulo: a) la
tubulina consiste en las subunidades  y ; b) un
protolamento de tubulina consiste en muchas
subunidades adyacentes; c) el microtbulo se forma
a partir de 13 protolamentos alineados de manera
paralela; d) corte transversal del microtbulo hueco.
que bloquean la proliferacin de las clulas de divisin
rpida mediante la interferencia del huso mittico.
Pared de la clula vegetal
Rodeando la membrana plasmtica de una clula ve-
getal est la pared celular, la cual proporciona fuerza y
rigidez a la clula. Est construida de manera primaria
por celulosa, un polisacrido similar a un bastn de
unidades de glucosa a repeticin con uniones 1-4 (sec-
cin J2). Tales molculas de celulosa se ordenan juntas
en haces de fibras mediante puentes de hidrgeno y
las fibras a su vez son mantenidas juntas por otros
polisacridos que las entrecruzan. En la madera, otro
compuesto, la lignina, imparte fuerza y rigidez adicional
a la pared celular. La lignina es un complejo fenlico
polimerizado insoluble en agua.
Vacuola de la clula vegetal
Las clulas vegetales suelen contener una o ms vacuo-
las rodeadas por membranas. stas se usan para alma-
cenar nutrientes (p. ej., sucrosa), agua, iones y produc-
tos de desecho (en especial compuestos que contienen
nitrgeno en exceso). Como los lisosomas de las clulas
animales, las vacuolas tienen un pH cido que mantienen
bombas de hidrgeno de la membrana y contienen una
diversidad de enzimas degradativas. La entrada de agua
en la vacuola causa su expansin, lo cual crea presin
hidrosttica (turgor) dentro de la clula, que se balancea
mediante la resistencia mecnica de la pared celular.
SECCIN A CLULAS

A3Crecimiento celular
Notas clave
Cultivo celular:
descripcin
Cultivo y divisin de la
clula procariota
Cultivo de clulas
eucariotas
Ciclo de la clula
eucariota
Las clulas se pueden hacer crecer en cultivos bajo condiciones apropiadas, lo
que permite realizar estudios biolgicos celulares y manipulacin gentica.
Las clulas procariotas pueden crecer en un medio simple que contenga
sales inorgnicas y una fuente de energa. En el ciclo de la clula procariota la
replicacin del DNA sucede a medida que la clula crece, antes de la divisin en
dos clulas hijas por fisin binaria.
Las clulas animales y vegetales pueden crecer en cultivo pero, adems de sales
inorgnicas y glucosa, requieren varios aminocidos, vitaminas y factores de
crecimiento para sobrevivir. Los cultivos primarios se preparan de manera
directa a partir de tejidos y tienen una expectativa de vida finita. Las lneas
de clulas inmortales derivadas de clulas madre o clulas tumorales pueden
proliferar de manera indefinida en cultivos.
En clulas eucariotas, el ciclo celular consta de las fases M, G1, S y G2. En la fase
M, la cual dura alrededor de una hora, ocurren la mitosis y la divisin celular,
mientras que en la fase S el DNA cromosmico se replica. La mayor parte del ciclo
celular (95%) se destina a la interfase (fases G1, S y G2). Se dice que las clulas
quiescentes estn en la fase G0.

Temas relacionados (A1) Clulas procariotas (F3) Replicacin del DNA en bacterias
(A2) Clulas eucariotas (F4) Replicacin del DNA en eucariotas
(F2) Genes y cromosomas

Cultivo celular: descripcin conforme la clula crece. La clula entonces se divide

Tanto las clulas procariotas como las eucariotas pue-
den crecer y manipularse en cultivo. El cultivo celular
proporciona un gran nmero de clulas idnticas que
pueden utilizarse en una variedad de estudios biolgi-
cos y bioqumicos. Tales sistemas de cultivos celulares in
vitro permiten el crecimiento de las clulas a ser estudia-
das y las manipulaciones genticas llevan a la compren-
sin de la estructura gnica y la funcin que realizan.
Cultivo y divisin de clulas procariotas
Las procariotas como la E. coli pueden crecer en solucio-
nes con medios simples que contenga sales inorgnicas
y una fuente de energa, por ejemplo, glucosa. Algunos
procariotas pueden replicarse en alrededor de 20 minu-
tos bajo condiciones ideales (p. ej., la presencia de una
fuente de energa apropiada, crecimiento a la tempera-
tura ptima), lo cual significa que una sola clula puede
multiplicarse en muchos millones en unas pocas horas.
El ciclo de la clula procariota es relativamente simple
ya que la replicacin del DNA en el cromosoma circu-
lar nico (seccin A1) se produce de manera continua
por fisin binaria. En este proceso, se forman una nueva
membrana celular y pared celular alrededor del medio
de la clula, proceso que acaba por dividir la clula
parental en dos clulas hijas. Cada una de las clulas
hijas recibe una copia de DNA cromosmico.
Cultivo de clula eucariota
Aunque las levaduras pueden crecer con facilidad en
cultivos que usen medios mnimos como las clulas
bacterianas, otras clulas eucariotas (clulas animales
y vegetales) requieren medios de cultivo mucho ms
complejos que contengan, adems de sales y glucosa,
varios aminocidos y vitaminas, que la clula no puede
producir por s misma. Los medios para el crecimiento
de la clula animal tambin contienen suero, el cual
proporciona los diversos factores de crecimiento pro-
tenicos requeridos para la divisin celular.
Los cultivos de la clula animal se inician mediante la
dispersin (p. ej., mediante homogeneizacin suave,
seccin A5) de una pieza de tejido en una suspensin
de las clulas componentes. Las clulas aisladas cre-
cen entonces en un plato de cultivo plstico bajo
10 SECCIN A CLULAS

condiciones apropiadas con un medio de crecimiento
definido. Los cultivos preparados directamente a par-
tir de los tejidos de un organismo se refieren como
primarios. De manera habitual, tales cultivos primarios
pueden cultivarse hasta duplicarlos 50 a 100 veces, des-
pus de lo cual el crecimiento se detiene y mueren. En
contraste, las clulas derivadas de tumores y clulas
madre embrionarias con frecuencia proliferan en cul-
tivo de manera indefinida y se refieren como lneas
celulares permanentes o inmortales. Bajo condiciones
apropiadas, muchas clulas en cultivo conservan las
propiedades diferenciadas adecuadas a su origen. Por
ejemplo, los fibroblastos continan secretando colge-
na y las clulas nerviosas extienden axones. Las c-
lulas madre, que con frecuencia se cultivan a partir de
embriones tempranos, mantienen su capacidad pa-
ra diferenciarse en todos los tipos celulares de un orga-
nismo adulto.
Ciclo de la clula eucariota
La divisin de las clulas eucariotas debe regularse con
sumo cuidado tanto con crecimiento celular como con
replicacin del DNA y que ambos fenmenos reciban una
cuidadosa coordinacin que asegure la formacin de
clulas hijas que contengan el complemento comple-
to de cromosomas intactos (es decir, el genoma com-
pleto, seccin F2). La vida de una clula eucariota
puede definirse como un ciclo celular, el cual consiste
en cuatro procesos coordinados: crecimiento celular,
replicacin del DNA, distribucin de los cromosomas du-
plicados a las clulas hijas y divisin celular.
La mitosis (divisin nuclear), en la cual los cromosomas
hijos se separan y ocurre la divisin celular (citocinesis)
en la fase M, dura tan slo alrededor de una hora (figura
A3-1).
La parte restante del ciclo celular (alrededor de 95%)
se conserva en interfase (figura A3-1), el periodo entre
mitosis. Durante la interfase, los cromosomas se des-
condensan y distribuyen en los ncleos; a nivel mole-
cular, es el momento en que ambas clulas crecen y se
replica el DNA.
La mitosis es seguida por la fase G1 (figura A3-1), la cual
corresponde al intervalo entre mitosis y a la iniciacin de
la replicacin del DNA cuando la clula crece de manera
continua. Luego la clula ingresa en la fase S (S por snte-
sis), durante la cual el DNA cromosmico se replica, y por
ltimo en la fase G2, cuando el crecimiento celular con-
tina y las protenas se sintetizan en preparacin para
la mitosis. De manera tpica, las clulas eucariotas en
cultivo tienen un ciclo celular cuya duracin es de 16 a
24 horas, pero ste puede ser mucho ms extenso (> 100
das) para algunas clulas de un organismo multicelular.
La mayora de las variaciones en la duracin del ciclo
celular suceden por diferencias en la extensin de la fase
G1. Algunas clulas in vivo, como las neuronas, detienen
su divisin por completo y se dice que son quiescentes,
encerradas en una fase G0 (figura A3-1).

Interfase
G2

G1

G0 M

Figura A3-1. Ciclo de la clula eucariota. La fase S tiene una duracin tpica de
6-8 horas, la G2 es una fase en la cual la clula se prepara para la mitosis y dura
2-6 horas, la mitosis (M) en s misma es breve y toma slo alrededor de 1 hora.
La duracin de G1 es muy variable y depende del tipo celular. Las clulas pueden
ingresar en G0, una fase quiescente, en lugar de continuar con el ciclo celular.
SECCIN A CLULAS

A4Imgenes de las clulas

Notas clave
Microscopio de luz En el microscopio de luz, un rayo de luz se enfoca mediante lentes de vidrio
que producen una imagen agrandada del espcimen. En el microscopio de
campo claro, el espcimen se ilumina desde abajo, con el rayo de luz enfocado
sobre el mismo por la lente condensadora. La lente objetivo enfoca despus
la luz incidente que pasa a travs del espcimen sobre su plano focal, lo que
crea una imagen magnificada. Antes de observarlo, el espcimen se fija con
alcohol o formaldehdo y luego se tie con una sustancia qumica como la
hematoxilina o la eosina. El microscopio de contraste de fase y el ms com-
plejo microscopio de contraste de interferencia diferencial pueden utilizarse
para ver clulas vivas.

Microscopio de En el microscopio de fluorescencia, los compuestos fluorescentes (los cuales

uorescencia absorben luz ante una longitud de onda excitante y luego la emiten a la lon-
gitud de onda de emisin) se usan para visualizar un componente particular
de las clulas. En el microscopio confocal, un lser enfoca la luz de la longitud de
onda excitante sobre el espcimen de manera que slo una seccin delgada
del mismo se ilumina. El rayo lser se mueve a travs de la muestra, lo que pro-
duce una serie de imgenes, que son reensambladas por una computadora para
producir un cuadro tridimensional del espcimen. Los compuestos fluorescen-
tes como la rodamina y la fluorescena pueden acoplarse a anticuerpos que reco-
nocen las protenas de inters. La protena fluorescente verde que las medusas
producen de manera natural (GFP) puede emplearse para marcar otras protenas
y de esa manera visualizar la localizacin y movimiento de las protenas en
las clulas vivas. Las interacciones entre diferentes protenas pueden vigilarse
mediante transferencia de energa de resonancia fluorescente (FRET) al marcar
las dos protenas de inters con diferentes fluorocromos. El movimiento late-
ral de una protena marcada con fluorescencia puede monitorearse mediante
recuperacin de la fluorescencia despus del fotoblanqueo (FRAP).
Microscopia electrnica En la microscopia electrnica, un rayo de electrones se enfoca mediante
el auxilio de lentes electromagnticos. El espcimen se monta dentro de un
ambiente con vaco, de manera que los tomos que se encuentran en el aire no
absorban los electrones. En la microscopia electrnica de transmisin, el rayo
de electrones se pasa a travs de una seccin delgada del espcimen que ha
sido teido con metales pesados. Los metales densos en electrones dispersan
los electrones incidentes y con ello producen una imagen del espcimen. En el
microscopio electrnico de rastreo, la superficie de todo el espcimen es reves-
tida con una capa de metal pesado y slo despus el espcimen es rastreado
con un brazo electrnico que produce una imagen tridimensional de ste.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (C4) Inmunodeteccin

(B6) Anticuerpos (E2) Estructura de la membrana
12 SECCIN A CLULAS
Microscopio de luz
En la microscopia de luz se usan lentes de vidrio para
enfocar un rayo de luz sobre el espcimen en investiga-
cin. La luz que pasa a travs del espcimen se enfoca
mediante otra lente para producir una imagen magni-
ficada.
Numerosos tipos diferentes de microscopios de luz se
usan de manera rutinaria para estudiar distintos aspec-
tos de la estructura celular. El ms simple es el micros-
copio de campo claro, en el cual una lmpara que se
halla en la base del microscopio ilumina el espcimen
desde abajo (figura A4-1), con la luz enfocada en el
plano del espcimen gracias a una lente condensadora.
La luz incidente que atraviesa el espcimen es recogida
por la lente objetivo y enfocada en su plano focal, lo
que acaba por crear una imagen magnificada. Luego
esta imagen es magnificada por el ocular, con una mag-
nificacin total que es la suma de las magnificaciones
de cada lente. Con el fin de incrementar la resolucin
alcanzada por un microscopio compuesto, el espcimen
es con frecuencia recubierto con aceite de inmersin,
dentro del cual se coloca la lente objetivo. El lmite de
resolucin del microscopio de luz usando luz visible es
de alrededor de 0.2 m.
Fijacin y tincin de los especmenes
En el microscopio de campo claro, el espcimen a exa-
minar suele fijarse en primer lugar con una solucin
que contiene alcohol o formaldehdo. Estos compuestos
desnaturalizan las protenas y, en el caso del formalde-
hdo, introducen enlaces covalentes cruzados entre gru-
pos amino de molculas adyacentes, los cuales estabili-
zan las interacciones entre protenas y entre protenas y
cidos nucleicos. El espcimen fijado puede entonces
embeberse en parafina o una resina y cortarse en sec-
ciones delgadas (0.5 a 10 m de grosor) con la ayuda de
un micrtomo. Cada seccin se monta en un portaobje-
tos de vidrio y entonces se coloca en la plataforma mvil
Figura A4-1. Va ptica de un microscopio compuesto.
del microscopio para el espcimen (figura A4-1). Los
diferentes constituyentes subcelulares (ncleo, mito-
condrias, citosol, etc.) absorben casi el mismo grado
de luz visible, lo que los vuelve difcil de distinguir bajo
la luz del microscopio sin la tincin previa del espci-
men. Muchos colorantes qumicos se unen a las mol-
culas biolgicas; por ejemplo, la hematoxilina se une a
los aminocidos bsicos Arg y Lys de las protenas, y la
eosina se une a las molculas cidas (como el DNA y las
cadenas laterales de los aminocidos Asp y Glu). Otra
forma de visualizar estructuras especficas intracelu-
lares es la tincin citoqumica, en la cual una enzima
cataliza la produccin de muchas molculas de un pro-
ducto de una reaccin localizada y coloreada a partir de
un precursor incoloro. Entonces, el producto coloreado
puede verse en el microscopio de luz, donde la enzima
est presente. Por ejemplo, los peroxisomas pueden
visualizarse mediante el uso de una tincin citoqumica
para la catalasa (seccin A2).
Microscopio de contraste de fase
Cuando la luz atraviesa una clula viva, la fase de la onda
de luz se modifica de acuerdo con el ndice refractario
de la clula: la luz que pasa a travs de una parte de la
clula relativamente gruesa o densa, como el ncleo, es
retardada; en consecuencia, su fase es desplazada en
relacin con la luz que pasa a travs de una regin ms
delgada adyacente del citoplasma. Tanto el microscopio
de contraste de fase como, de una manera ms com-
pleja, el microscopio de contraste de interferencia di-
ferencial (o microscopia de interferencia de Nomarski)
aprovechan los efectos de interferencia producidos
cuando los dos grupos de ondas de luz se recombinan y
por tanto crean una imagen de las estructuras celulares.
Como estos tipos de microscopios no requieren que los
especmenes estn fijos o teidos, se usan para examinar
la estructura de los organelos ms grandes (ncleo,
mitocondrias, etc.) en las clulas vivas. El microscopio
de contraste de interferencia diferencial mejorado con
Lente ocular
Plano focal
Lente objetivo
Espcimen en la
plataforma mvil
Lente condensadora
Fuente de luz
 A4IMGENES DE LAS CLULAS 13

vdeo puede usarse para visualizar el movimiento de los
organelos dentro de las clulas, por ejemplo junto con
los microtbulos (seccin A2).
Microscopia de uorescencia
En la microscopia de fluorescencia, el microscopio de
luz es adaptado para detectar la luz que emite un com-
ponente fluorescente que se usa para teir en forma
selectiva determinados componentes intracelulares. Se
dice que una sustancia qumica es fluorescente si absor-
be la luz en una longitud de onda (la longitud de onda de
excitacin) y a continuacin emite luz a una longitud
de onda ms larga (longitud de onda de emisin). De
manera habitual, en la microscopia fluorescente se usan
dos compuestos que son la rodamina y el rojo de Texas,
los cuales emiten luz roja y la fluorescena, la cual emite
luz verde. Primero, se agrega un anticuerpo contra el
antgeno de inters (llamado el anticuerpo primario;
seccin B6) al espcimen. Un componente fluorescente se
acopla por medios qumicos a un anticuerpo secundario
que reconoce al anticuerpo primario. A continuacin,
el anticuerpo secundario marcado con fluorescencia se
aade a la seccin tisular o a la clula permeabilizada, y de
esa manera el espcimen se ilumina con luz a la longitud
de onda excitante (figura A4-2).Entonces se visualizan
las estructuras del espcimen al cual el anticuerpo est
unido.
La microscopia confocal es un refinamiento de la
microscopia de fluorescencia normal que produce im-
genes ms claras de toda la clula o de especmenes
de mayor tamao. En el microscopio de fluorescencia
normal, la luz fluorescente emitida por el compuesto
procede de molculas que estn por arriba y por debajo
del plano focal, lo que enturbia la imagen y dificulta
determinar el ordenamiento molecular tridimensional
real. Con el microscopio confocal, slo las molculas del
plano del foco fluorescen debido al uso de un rayo l-
ser enfocado en la longitud de onda excitante. El rayo
lser es movido a diferentes partes del espcimen, lo
que permite la produccin de una serie de imgenes
que se toman a diferentes profundidades a travs de la
muestra. A continuacin, una computadora combina las
imgenes para proporcionar la imagen tridimensional
completa. El microscopio de deconvolucin consigue
el mismo efecto de imagen afilada del microscopio
confocal pero a travs de un proceso diferente.
Protena uorescente verde
La visualizacin de protenas en las clulas vivas ha
sido revolucionada por el descubrimiento de una pro-
tena fluorescente de manera natural encontrada en la
medusa Aequorea victoria. En esta protena de 238 ami-
nocidos, llamada protena fluorescente verde (GFP),
ciertas cadenas laterales de los aminocidos se ciclizan
de manera espontnea para formar un cromforo que
fluoresce con color verde. Con la ayuda de tcnicas de
DNA recombinante (seccin I1), el DNA codificante de la
GFP puede ser adherido a las secuencias de DNA que codi-
fican otras protenas y de esta forma introducido dentro
de clulas vivas en cultivo o dentro de clulas especfi-
cas de un animal ntegro. Las clulas que contienen el
gen introducido pasan a producir la protena marcada
con la GFP, la cual florecer de color verde bajo el micros-
copio de fluorescencia. La localizacin y movimiento
de la protena marcada puede entonces estudiarse en
clulas vivas en tiempo real. Se han diseado mltiples
variaciones de la GFP, las cuales emiten luz a diferentes
longitudes de onda, por ejemplo protena fluorescente
azulosa (GFP) y la protena fluorescente amarilla (YFP), lo
que ofrece la oportunidad de visualizar varias protenas
en forma simultnea en la misma clula.
Transferencia de uorescencia por
energa de resonancia (FRET)
Las interacciones entre una protena y otra pueden
monitorearse mediante la transferencia de fluorescen-
cia por energa de resonancia (FRET). Las dos protenas
de inters son marcadas con un fluorocromo diferente
(marcadas con diferentes variantes de la GFP, vase
antes), elegidos de manera que el espectro de emisin

Anticuerpo secundario
Anticuerpo marcado con uorescencia Emisin
Antgeno primario
inmovilizado

Excitacin

Figura A4-2. Marcacin de una protena con un anticuerpo marcado con

uorescencia para el microscopio uorescente. El anticuerpo primario reconoce
el antgeno de inters y se une a l en el espcimen. Numerosas molculas del
anticuerpo secundario se unen al anticuerpo primario y proveen una amplicacin
de la seal. El anticuerpo secundario se acopla de manera covalente a un colorante
fosforescente, que emite luz cuando se ilumina a su longitud de onda excitante.
14 SECCIN A CLULAS

de un fluorocromo se superponga con el espectro de Microscopia electrnica

excitacin del otro (figura A4-3a). Si las dos protenas
se encuentran en una proximidad muy cercana (tanto
como 2 nm), la energa de la luz absorbida puede trans-
ferirse en forma directa desde un fluorocromo al otro
(figura 3c). En consecuencia, cuando la muestra es ilu-
minada bajo la longitud de onda de excitacin del pri-
mer fluorocromo, la luz es emitida con la longitud de
onda de emisin del segundo. Si las dos protenas no
se encuentran en proximidad cercana, no transfieren la
fluorescencia (figura A4-3b).
Recuperacin de la uorescencia
despus del fotoblanqueo (FRAP)
El movimiento lateral de las protenas en una mem-
brana puede visualizarse a travs del uso de la tcnica
de recuperacin de la fluorescencia despus del foto-
blanqueo (FRAP). En esta tcnica, una pequea regin de
inters de las clulas que expresa una protena marcada
con GFP es expuesta a un pulso de luz muy intensa de un
lser, que destruye (blanquea) las molculas fluorescen-
tes del rea. La fluorescencia de esta regin blanqueada
es revisada de manera subsecuente como una funcin
del tiempo, ya que otras protenas marcadas con fluo-
rescencia se mueven dentro de la regin blanqueada de
la membrana. La tasa de recuperacin de la fluorescen-
cia depende de la movilidad lateral de la protena mar-
cada con fluorescencia.
En contraste con la microscopia de luz, donde lentes
pticas enfocan un rayo de luz, en el microscopio elec-
trnico lentes electromagnticas enfocan un rayo de
electrones. Debido a que tomos del aire absorben los
electrones, el espcimen debe montarse en un ambiente
con vaco dentro de un tubo evacuado. La resolucin
del microscopio electrnico con materiales biolgicos
es a lo ms de 0.10 nm. En la microscopia electrnica
de transmisin, un rayo de electrones es dirigido a
travs del espcimen y las lentes electromagnticas se
usan para enfocar los electrones transmitidos para
producir una imagen en la pantalla de visualizacin o
en una pelcula fotogrfica (figura A4-4a). Como en la
microscopia de luz estndar, se ven cortes delgados del
espcimen. Sin embargo, para la microscopia electrni-
ca de transmisin los cortes deben ser mucho ms
delgados (50 a 100 nm de grosor). Como los electrones
pasan de manera uniforme a travs del material bio-
lgico, los especmenes sin teir proporcionan imgenes
muy pobres. Por consiguiente, el espcimen debe ser
teido en forma rutinaria con el fin de dispersar algunos
de los electrones incidentes, lo cuales no son enfocados
por las lentes electromagnticas y por tanto no forman
imagen. Metales pesados como el oro y el osmio se
usan con frecuencia para teir los materiales biolgicos.
En particular, el tetraxido de osmio tie de manera
preferencial ciertos componentes celulares como las

a)
Excitacin Excitacin
Emisin a Emisin
a 440 nm CFP a 490 nm YFP
490 nm a 527 nm
(azul) (amarilla)

Protena X Protena Y

b) c)

440 nm Azul a FRET

490 nm 440 nm Amarilla
a 527 nm

Figura A4-3. FRET. Para determinar si dos protenas interactan dentro de la clula,
las protenas primero se marcan con dos variantes diferentes de GFP. a) En este
ejemplo, la protena X se acopla a GFP, la cual se excita a 440 nm y emite luz azul
a 490 nm, mientras que la protena Y se acopla a YFP, la cual se excita a 490 nm y
emite luz amarilla a 527 nm. b) Si la protena X y Y no interactan, slo se produce
uorescencia a partir de CFP cuando la muestra se ilumina a 440 nm y uoresce a 490
nm. c) Cuando las protenas X y Y interactan, sucede FRET. Al iluminar la muestra a
440 nm se excita CFP, cuya emisin a su vez excita a YFP, que emite luz amarilla a 527
nm.

membranas, las cuales aparecen negras en la imagen.
El microscopio electrnico de transmisin cuenta con
suficiente poder de resolucin como para usarlo para
obtener informacin acerca de las formas de las prote-
nas purificadas, virus y organelos subcelulares. Pueden
obtenerse vistas tridimensionales de las estructuras con
resoluciones de 2 a 10 nm con el uso de la tcnica de
tomografa electrnica, la cual genera imgenes tridi-
mensionales mediante anlisis por computadora de
imgenes bidimensionales obtenidas en una gama
de vistas diferentes. La microscopia crioelectrnica, en
la cual la muestra se congela con rapidez a muy bajas
temperaturas, se usa para determinar las estructuras
tridimensionales de las protenas (seccin B2).
Los anticuerpos pueden ser marcados con partculas de
oro electrnicamente densas de una forma similar a la
que se marca con compuestos fluorescentes en la micros-
copia de fluorescencia y entonces unirse a protenas
especficas en secciones delgadas del espcimen. Cuando
a)
Fuente de electrones
Lente condensadora
Espcimen
Lente objetivo
Lente proyectora
Imagen en la pantalla
Figura A4-4. Principales caractersticas de un a) microscopio electrnico de
transmisin y un b) microscopio electrnico de barrido.
A4IMGENES DE LAS CLULAS 15
se ven en el microscopio electrnico, las manchas oscu-
ras y pequeas debidas a las partculas de oro se ven en la
imagen donde una molcula de anticuerpo se ha unido a
su antgeno (seccin C4) y de esa manera la tcnica puede
utilizarse para localizar protenas especficas.
En la microscopia electrnica de barrido, un espci-
men (ntegro) se fija y luego se reviste con una capa
delgada de un metal pesado como el platino. Entonces
un rayo electrnico recorre el espcimen y excita
molculas dentro de ste que liberan electrones
secundarios. Tales electrones secundarios se enfocan
sobre un detector y se muestra la imagen resultante
(figura A4-4b). El microscopio electrnico de barrido
produce una imagen tridimensional debido a que el
nmero de electrones secundarios producidos por
cualquier punto nico del espcimen depende del
ngulo del rayo electrnico en relacin con la superficie
del espcimen. La resolucin del microscopio electr-
nico de barrido es slo de alrededor de 10 nm.
b)
Lente
Deector del rayo
Lente
Imagen en el tubo
de rayos catdicos
Detector
Espcimen
SECCIN A CLULAS

A5Fraccionamiento celular
Notas clave
Aislamiento de las clulas Los tejidos animales y vegetales contienen una mezcla de tipos celulares y la
y sus partes: descripcin mayora de las clulas contiene mltiples organelos subcelulares. Con el fin de
estudiar clulas y organelos en aislamiento, es deseable tener una poblacin
homognea de clulas.

Citometra de ujo Las clulas individuales pueden identificarse mediante un citmetro de flujo.
Los anticuerpos, acoplados a compuestos fluorescentes que se unen a mol-
culas en la superficie de determinados tipos de clulas, pueden usarse para
separar clulas entre s en un clasificador de clulas activado por fluorescencia
(FACS).
Fraccionamiento El fraccionamiento subcelular consiste en producir aberturas en una clula
subcelular (p. ej., mediante homogeneizacin) y en la separacin de los diversos organe-
los entre s, de manera habitual, mediante centrifugacin. La centrifugacin
diferencial separa los organelos subcelulares con base en su tamao y
densidad. Se usa una ultracentrfuga para generar fuerzas poderosas que
separan los diversos organelos, los cuales sedimentan en el fondo del tubo de
centrifugacin. Con fuerzas menores, sedimentan el ncleo, las mitocondrias,
cloroplastos y lisosomas, mientras que se necesitan fuerzas mayores para
que sedimenten el retculo endoplsmico, el aparato de Golgi y la membrana
plasmtica. La centrifugacin con un gradiente de densidad de equilibrio usa
un gradiente de una solucin densa (p. ej., solucin de sucrosa) para separar
organelos subcelulares con base en su densidad.
Protenas marcadoras Una forma conveniente para determinar la pureza de una preparacin de
organelos es medir la actividad de una protena marcadora o enzima en las
diversas fracciones subcelulares. Una protena marcadora es aquella que se
encuentra slo dentro de un compartimiento particular de la clula.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (C4) Inmunodeteccin

(A4) Imgenes celulares (D1) Introduccin a las enzimas
(C2) Electroforesis en gel

Aislamiento de clulas y sus partes:
descripcin
La mayora de los tejidos animales y vegetales contiene
una mezcla de tipos celulares y casi todas las clulas
contienen mltiples organelos subcelulares (seccin
A2). Aunque las tcnicas microscpicas (seccin A4)
pueden usarse para visualizar organelos y grandes mol-
culas internas de las clulas, muchos estudios sobre la
estructura celular y su funcin requieren muestras de
tipos particulares clulas y de organelos o componen-
tes internos de las mismas. La mayora de los procedi-
mientos bioqumicos requiere la obtencin de grandes
nmeros de clulas y entonces se las rompe con recur-
sos fsicos para aislar sus componentes. Las muestras
tisulares proveen con frecuencia grandes cantidades
de material, pero contienen una mezcla heterognea de
clulas. Se han desarrollado tcnicas con las que pueden
aislarse poblaciones homogneas de clulas, hacerlas
crecer en cultivos para amplificarlas y en pasos subse-
cuentes estudiar y fraccionar sus partes constitutivas.
Citometra de ujo
Pueden identificarse diferentes clulas a travs de la
medicin de la luz o la fluorescencia que emiten, a
medida que traspasan un rayo lser de un citmetro
de flujo. En un clasificador de clulas activado por
fluorescencia o FACS (figura A5-1), un instrumento ba-
sado en la citometra de flujo, las clulas pueden iden-
tificarse y separarse entre ellas. Las clulas de inters
se marcan primero con un anticuerpo, el cual es espe-
 A5FRACCIONAMIENTO CELULAR 17

cfico para una particular molcula de la superficie ce-
lular. El anticuerpo es acoplado a un colorante fluo-
rescente (seccin A4), de manera que cuando las clulas
pasan un rayo lser en una fila y en una corriente es-
trecha, puede medirse la fluorescencia de cada clula. A
continuacin, una boquilla vibratoria forma pequeas
gotitas, cada una de las cuales contiene una sola clula,
a la que se le da una carga positiva o negativa, lo que
depende de si la clula que contiene es fluorescente.
Un campo elctrico fuerte separa las diferentes gotas
cargadas en contenedores separados, de manera que
cada contenedor termina por tener una poblacin ho-
mognea de clulas con respecto a la molcula de la
superficie celular marcada con un anticuerpo fluores-
cente. Estas poblaciones homogneas pueden entonces
usarse para efectuar anlisis bioqumicos o cultivos. El
contenido de DNA y RNA de una clula tambin puede
medirse mediante la citometra de flujo.
Fraccionamiento subcelular
Con el propsito de estudiar macromolculas y pro-
cesos metablicos internos de las clulas, el fraccio-
namiento subcelular suele ser de ayuda para aislar un
tipo de organelo subcelular (seccin A2) del resto de los
contenidos celulares. De manera inicial, la membrana
plasmtica (la pared celular, si est presente) debe rom-
perse. Para hacerlo, el tejido o la muestra de las clulas

Vibrador de boquilla ultrasnico

(forma gotitas)
Suspensin de clulas

Lquido de revestimiento

Lser
Detectores Analizador

Pequeos grupos
de gotas con carga

positiva debido a la
deteccin de una clula Pequeos grupos
+ de gotas con carga
no uorescente +
negativa debido a la
deteccin de clulas
2 000 V + +2 000 V uorescentes solas
+

+
+

Recolector de culas Recolector de culas

Matraz para las gotitas que no fueron desviadas

Figura A5-1. Clasicador de clula activado por uorescencia. Un anticuerpo

especco para una protena particular de la supercie celular se liga a una
molcula uorescente y luego se aade a una mezcla de clulas. Cuando cada
clula pasa a travs del rayo lser se le monitorea la uorescencia. A las gotas
que contienen clulas solas se les asigna una carga positiva o negativa, segn si
la clula lleva unido el anticuerpo marcado con uorescencia. Acto seguido, las
gotas que contienen una sola clula son desviadas por un campo elctrico en
tubos de recoleccin de acuerdo con su carga. La concentracin de clulas es
tal que la mayora de las gotas no contiene clulas y el ujo es desviado hacia
un contenedor de desecho junto con cualquier cmulo de clulas.
18 SECCIN A CLULAS
se suspenden en una solucin de sucrosa isotnica (0.25
a 0.32 M) amortiguada a un pH apropiado y se hacen
aberturas a las clulas por homogeneizacin en un
homogeneizador o mezclador, por sonicacin o some-
tindolas a altas presiones (presin francesa o bomba
de nitrgeno). La homogeneizacin inicial y el fraccio-
namiento subcelular suelen efectuarse a 4 C con el fin
de minimizar la degradacin enzimtica de los consti-
tuyentes celulares. La muestra de clulas rotas es con
frecuencia filtrada a travs de muselina o de otra gasa
fina para eliminar los cmulos ms grandes de material
antes de continuar el procedimiento.
Centrifugacin diferencial
En la centrifugacin diferencial, los diversos organe-
los subcelulares se separan uno de otro con base en
su tamao y densidad, por lo cual las estructuras ms
grandes y pesadas sedimentan con ms rapidez. Se
usa una centrfuga para generar fuerzas poderosas,
hasta de 100 000 veces la fuerza de la gravedad (g). La
muestra homogeneizada se coloca en un tubo de cen-
trfuga apropiado, el cual se carga en el rotor de la
centrfuga y se somete a centrifugacin (figura A5-2a).
En primer lugar se usan fuerzas g relativamente bajas
durante breves periodos, pero luego se usan fuer-
zas g cada vez ms altas por periodos ms prolonga-
dos. Por ejemplo, la centrifugacin a 600 g durante
3 minutos hace sedimentar el ncleo y los organe-
los ms grandes (figura A5-2b). El sobrenadante de
este paso se elimina hacia un tubo fresco y entonces
se centrifuga a 6 000 g durante 8 minutos para hacer
sedimentar las mitocondrias, peroxisomas y, si estn
presentes, lisosomas o cloroplastos. La centrifugacin
del siguiente sobrenadante a 40 000 g durante 30 mi-
nutos hace sedimentar la membrana plasmtica y
fragmentos del retculo endoplsmico y del aparato
a) Homogeneizado
600 g, 3 min
Ncleos Sobrenadante
sedimentados
6 000 g, 8 min
Mitocondrias,cloroplastos, Sobrenadante
lisosomas, peroxisomas
sedimentados 40 000 g, 30 min
Membrana plasmtica, Sobrenadante
fragmentos del aparato
de Golgi y RER 100 000 g, 90 min
sedimentados
Subunidades Citosol
ribosmicas sobrenadante
sedimentadas
Figura A5-2. Fraccionamiento celular por centrifugacin diferencial: a) esquema del
fraccionamiento celular de una muestra de tejido; b) aspecto de una muestra en el tubo
de la centrfuga antes y despus de la centrifugacin.
de Golgi. Una centrifugacin final a 100 000 g durante
90 minutos resultar en un sedimento ribosmico y
un sobrenadante que en esencia es libre de materias
particuladas y se considera que es la verdadera fraccin
citoslica soluble. Sin embargo, las fracciones aisladas
por centrifugacin diferencial no suelen encontrarse por
completo libres de otros organelos subcelulares y de esa
manera pueden necesitar una purificacin adicional.
Para separaciones a fuerzas g bajas, se usa una centrfuga
preparadora, la cual tiene un rotor que gira en el aire
a la presin ambiental. No obstante, se requiere una
ultracentrfuga para separaciones a fuerzas g ms altas,
en la cual la cmara se mantiene en un alto vaco para
reducir la friccin y el subsecuente calentamiento, que
podra ocurrir entre el rotor que gira y el aire.
Centrifugacin con gradiente
de densidad de equilibrio
La centrifugacin con gradiente de densidad de equili-
brio se usa con frecuencia para purificar adicionalmente
los organelos despus de su separacin parcial por
centrifugacin diferencial. En este procedimiento, los
organelos se separan con base en su densidad. La frac-
cin de organelos impura se carga hasta llenar el tubo de
la centrfuga que contiene un gradiente de una solucin
densa (p. ej., una solucin del sucrosa; figura A5-3). La
solucin de sucrosa est ms concentrada (densa) en la
parte inferior del tubo y su concentracin (y densidad)
disminuye a medida que se asciende en el tubo. Durante
la centrifugacin (p. ej., a 160 000 g durante 3 h), los
diferentes organelos se mueven hacia abajo del tubo
hacia una posicin de equilibrio, donde su densidad es
igual a la de la sucrosa en esa posicin. Las fuerzas de
sedimentacin tienden a mover los organelos un poco
ms hacia abajo del tubo pero, si hacen eso, los hacen
ingresar en una regin de densidad ms alta que la
b)
Centrifugacin
Sobrenadante
Sedimento

del organelo y de esa manera stos flotan y ascienden
hacia la posicin previa. Las mitocondrias, lisosomas y
peroxisomas difieren en densidad y por eso pueden ser
efectivamente separados uno del otro mediante una
centrifugacin por gradiente de densidad (figura A5-3).
De manera similar, el retculo endoplsmico rugoso,
el aparato de Golgi y la membrana plasmtica pueden
separarse usando un gradiente de densidad ms bajo. El
cloruro de cesio, que es ms denso, se usa para producir
el gradiente de densidad para la separacin de partculas
ms densas como el DNA, RNA y protenas mediante la
centrifugacin con gradiente de densidad de equilibrio.
Protenas marcadoras
Cuando la muestra celular ha sido fraccionada, la
pureza de las preparaciones con los diferentes orga-
nelos necesita valorarse. Una forma en la cual puede
hacerse esto es mediante la valoracin de la morfologa
Fraccin de
Densidad en incremento
organelos
de la sucrosa
Centrifugacin
Figura A5-3. Separacin de organelos mediante
centrifugacin con gradiente de densidad de equilibrio.
A5FRACCIONAMIENTO CELULAR 19
en el microscopio electrnico (seccin A4). Una alterna-
tiva disponible ms accesible consiste en medir la acti-
vidad de (un ensayo para valorar) una enzima particular
(seccin D1), la cual es caracterstica de un organelo y
que por consiguiente no se encuentra en cualquier sitio
de las clulas. Por ejemplo, la catalasa es una buena
enzima marcadora de peroxisomas, la deshidrogenasa
de succinato de la mitocondrias, la catepsina C o fosfa-
tasa cida de los lisosomas, y la fosfatasa alcalina de la
membrana plasmtica. Por tanto, la presencia de cata-
lasa en una fraccin de los lisosomas debera significar
su contaminacin con peroxisomas. Un buen indicador
para comprobar la pureza o grado de contaminacin
de una preparacin de organelos consiste en medir la
actividad de tales enzimas en las diferentes fracciones
aisladas. De manera alternativa, una protena marca-
dora puede detectarse si se recurre al SDS-PAGE (seccin
C2) y el Western blotting con un anticuerpo especfico
(seccin C4).
Lisosomas
Mitocondria
Peroxisomas
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B1Estructura de los aminocidos

Notas clave
Aminocidos Todas las protenas estn formadas por el mismo grupo de 20 aminocidos
estndar. Un aminocido tpico cuenta con un grupo amino primario, un
grupo carboxilo, un tomo de hidrgeno y una cadena lateral (grupo R) fija a
un tomo de carbono  central (C).
Enantimeros Los aminocidos con cuatro diferentes grupos dispuestos en tetraedro alre-
dedor del tomo C pueden existir en una configuracin D O L. Estos dos enan-
timeros no son imgenes en espejo superpuestas y pueden distinguirse con
base en sus diferentes planos de rotacin de la luz polarizada. En las protenas
se encuentra slo el enantimero L.
Los 20 aminocidos Las diferentes cadenas laterales de los grupos R presentan distintas propieda-
estndar des fisicoqumicas. Pueden ser polares, cidas, bsicas, aromticas, volumi-
nosas, con una conformacin inflexible, capaces de formar enlaces de hidr-
geno y enlaces cruzados, as como de presentar reactividad qumica. La glicina
(Gly, G) tiene un tomo de hidrgeno como su grupo R. La alanina (Ala, A),
valina (Val, V), leucina (Leu, L), isoleucina (Ile, I) y la metionina (Met, M) tie-
nen cadenas laterales alifticas de diferentes estructuras que son hidrfobas
e inertes desde el punto de vista qumico. Las cadenas laterales aromticas
de la fenilalanina (Phe, F), tirosina (Tyr, Y) y triptfano (Trp, W) tambin son de
naturaleza hidrfoba. La prolina (Pro, P), un aminocido de conformacin
rgida, tiene su cadena lateral aliftica unida otra vez al grupo amino, por lo
que en realidad es un iminocido. La cadena lateral azufrada e hidrfoba de la
cistena (Cys, C) es muy reactiva y puede formar un enlace disulfuro con otro
residuo cistena. Los aminocidos bsicos arginina (Arg, R) y lisina (Lys, K)
poseen cadenas laterales con carga positiva, en tanto que la cadena lateral de
la histidina (His, H) puede presentar carga positiva o neutra en un pH neutral.
Las cadenas laterales de los aminocidos cidos cido asprtico (Asp, D) y
cido glutmico (Glu, E) muestran carga negativa en un pH neutral. La cadena
lateral amida de la asparagina (Asn, N) y la glutamina (Gln, Q) y la cadena la-
teral hidroxilo de la serina (Ser, S) y la treonina (Thr, T) es polar y sin carga y
puede formar enlaces de hidrgeno.
cidos, bases y pH El pH es una medida de la concentracin de H+ en una solucin. Un cido es un
donador de protones; una base en un aceptor de protones y ambos juntos se
denominan par acidobsico conjugado, por ejemplo el cido actico (CH3COOH)
y el acetato (CH3COO). El pK de un cido es el pH al cual el cido se disocia a la
mitad. La ecuacin de Henderson-Hasselbalch expresa la interrelacin entre
pH, pK y el cociente entre cido y base.
Amortiguadores Un par conjugado acidobsico puede fungir como un amortiguador, es decir,
resistir los cambios del pH. En una curva de titulacin de un cido, el punto
de inflexin indica el valor del pK. La capacidad de amortiguamiento del par
acidobsico lo indica el pK 1 unidad de pH. En los lquidos biolgicos, los
iones fosfato y carbonato actan como amortiguadores. Aminocidos, prote-
nas, cidos nucleicos y lpidos tambin tienen alguna capacidad de amorti-
guamiento.
 B1ESTRUCTURA DE LOS AMINOCIDOS 21

Ionizacin de los Los grupos amino  y carboxilo  de los aminocidos actan como grupos
aminocidos acidobsicos, ya que donan o aceptan un protn conforme a la variacin del
pH. A pH bajo, ambos grupos se hallan protonados, pero a medida que el pH
se incrementa pierden un ion hidrgeno, primero el grupo carboxilo y des-
pus el amino. El pK de los 20 aminocidos estndar es de 1.82.9 para el
grupo carboxilo  y de 8.810.8 para el grupo amino . Los aminocidos con
una cadena lateral ionizable tienen un grupo acidobsico adicional con un pK
caracterstico.

Temas relacionados (B2) Estructura y funcin de (B3) Mioglobina y hemoglobina

las protenas (B4) Colgena

Aminocidos tiene la propiedad de la quiralidad (del griego cheir =

Los aminocidos son los ladrillos con los que se constru-
yen las protenas (seccin B2). Las protenas de todas las
especies, desde las bacterias a los seres humanos, estn
elaboradas de los mismos 20 aminocidos estndar.
Diecinueve de ellos son aminocidos con un grupo
amino primario (NH3+) y un grupo de cido carbox-
lico (carboxilo; COOH) fijo a un tomo de carbono cen-
tral, que se denomina tomo de carbono (C) porque
est adyacente al grupo carboxilo (figura B1-1a). Tam-
bin un tomo de hidrgeno est fijo al C y una cadena
lateral variable o grupo R. La nica excepcin a esta
estructura general la representa prolina, que tiene un
grupo amino secundario que la convierte en realidad
en un iminocido . Los nombres de los aminocidos
suelen escribirse en forma abreviada, en ocasiones por
medio de tres letras y en otras con una. As, por ejemplo,
la prolina se abrevia Pro o P (figura B1-2).
Enantimeros
Todos los aminocidos, excepto la glicina (Gly o G; figura
B1-2), tienen cuatro diferentes grupos ordenados como
un tetraedro alrededor del tomo C, el cual se conoce
entonces como un centro asimtrico o centro quiral y
mano) (figura B1-1b). Las dos imgenes en espejo que
no se superponen se denominan enantimeros. Los
enantimeros son indistinguibles con la mayor parte de
las tcnicas fsicas y qumicas, pero pueden distinguirse
con base en su diferente rotacin ptica del plano de la
luz polarizada. Las molculas se clasifican con dextro-
rrotatorias (D; del griego dextro = derecho) o levorrota-
torias (L; del griego levo = izquierdo) segn si rotan el
plano de la luz polarizada en el sentido de las agujas
del reloj o al contrario, respectivamente. Los aminoci-
dos D y L tambin pueden distinguirse por enzimas que
de manera habitual slo reconocen uno u otro de los
enantimeros. En las protenas slo se encuentran ami-
nocidos L. Los aminocidos D son excepcionales en la
naturaleza y slo se encuentran en paredes de las clu-
las bacterianas (seccin A1) y en ciertos antibiticos.
Los 20 aminocidos estndar
Los 20 aminocidos estndar difieren slo en la estruc-
tura de la cadena lateral o grupo R (figuras B1-2 y B1-3).
Pueden subdividirse en grupos ms pequeos con base
en la similitud de las propiedades de sus cadenas late-
rales. Presentan diferentes propiedades fisicoqumicas

Plano
a) b)
COO del espejo COO

_
COO
+ -tomo de + +
H3N C H carbono H3N C H H C NH3

R R
Aminocido L Aminocido D

Figura B1-1. a) Estructura bsica de un aminocido en que se muestran los

cuatro diferentes grupos que rodean al tomo de carbono  central; b) los dos
enantimeros de un aminocido.
22 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) COO COO COO COO

+ + + +
H3 N C H H3 N C H H3N C H H3 N C H
H CH3 CH CH2
H3C CH3 CH
H3C CH3
Glicina Alanina Valina Leucina
(Gly, G) (Ala, A) (Val, V) (Leu, L)

COO COO COO COO

+ + + +
H3 N C H H3N C H H2N C H H3N C H

H C CH3 CH2 H2C CH2

CH2
CH2 CH2 CH2 SH

CH3 S
CH3

Isoleucina Metionina Prolina Cistena

(Ile, I) (Met, M) (Pro, P) (Cys, C)
b)
COO COO COO
+ + +
H3N C H H3N C H H3 N C H

CH2 CH2 CH2

C CH
NH

OH

Fenilalanina Tirosina Triptfano

(Phe, F) (Tyr, Y) (Trp, W)

Figura B1-2. Los aminocidos estndar: a) grupos hidrfobos alifticos R; b)

grupos hidrfobos aromticos R. Los pesos moleculares de los aminocidos se
proporcionan en el Cuadro B1-1.

de acuerdo con la naturaleza de sus cadenas laterales.
Algunos son cidos y otros bsicos. Algunos presentan
pequeas cadenas laterales mientras que las de otros
son grandes y voluminosas. Ciertos aminocidos poseen
cadenas laterales hidrfobas (repelen el agua) en tanto
que otras son hidrfilas o polares (les atrae el agua).
Algunas confieren inflexibilidad conformacional y otras
pueden participar en enlaces de hidrgeno y enlaces
covalentes. Algunas presentan reactividad qumica.
Aminocidos hidrfobos, alifticos
La glicina (Gly, G) (figura B1-2a), el aminocido ms
pequeo y con la estructura ms simple, tiene un tomo
de hidrgeno en la posicin de la cadena lateral y por
consiguiente no existe como par de estereoismeros
puesto que tiene dos grupos idnticos (tomos de hidr-
geno) unidos al tomo C. Las cadenas laterales alifti-
cas de la alanina (Ala, A), valina (Val, V), leucina (Leu,
L), isoleucina (Ile, I) y metionina (Met, M) (figura 2a)
carecen de reactividad qumica y son hidrfobas por
naturaleza. La prolina (Pro, P) (figura B1-2a) tambin es
hidrfoba, con su cadena lateral aliftica unida otra vez
al grupo amino, lo que la vuelve rgida desde el punto
de vista conformacional. La cadena lateral azufrada de
la cistena (Cys, C) (figura B1-2a) tambin es hidrfoba
pero es muy reactiva y proclive a reaccionar con otra
cistena para formar un enlace disulfuro (seccin B2).
Aminocidos hidrfobos y aromticos
La fenilalanina (Phe, F), tirosina (Tyr, Y) y triptfano
(Trp, W) (figura B1-2b) son hidrfobos a raz de sus ani-
llos aromticos.
Aminocidos polares, con carga
Los restantes aminocidos son todos polares, con cade-
nas laterales hidrfilas, algunas de las cuales presentan
carga en un pH neutral. Los grupos amino de las cade-
nas laterales de los aminocidos bsicos arginina (Arg,
R) y lisina (Lys, K) (figura B1-3a) estn protonados y
por tanto tienen carga positiva en un pH neutral. La
cadena lateral de la histidina (His, H) (figura B1-3a)
puede tener carga positiva o no presentar carga en un
pH neutral. En contraste, en un pH neutral, los grupos
carboxilo de las cadenas laterales de los aminocidos
cido asprtico (aspartato; Asp, D) y cido glutmico
 B1ESTRUCTURA DE LOS AMINOCIDOS 23

a)
COO COO COO COO COO
+ + + + +
H3N C H H3 N C H H3 N C H H3 N C H H3N C H
CH2 CH2 CH2 CH2 CH2
CH2 CH2 C NH COO CH2
CH2 CH2 CH COO
HC N+
NH CH2 H
+ +
C NH2+ NH3+
NH2
Arginina Lisina Histidina Aspartato Glutamato
(Arg, R) (Lys, K) (His, H) (Asp, D) (Glu, E)
b)
COO COO COO COO
+ + + +
H3N C H H3 N C H H3 N C H H3 N C H
CH2OH H C OH CH2 CH2
CH3 C CH2
H2N O C
H2N O
Serina Treonina Asparagina Glutamina
(Ser, S) (Thr, T) (Asn, N) (Gln, Q)

Figura B1-3. Aminocidos estndar: a) polar, grupos R con carga; b) polar, grupos R sin
carga. Los pesos moleculares de los aminocidos se proporcionan en el cuadro B1-1.

(glutamato; Glu, E) (figura B1-3a), que como su nombre Por ejemplo:

lo dice son cidos, estn desprotonados y poseen carga CH3COOH H+ + CH3COO
negativa. cido actico Acetato
NH4+ H+ NH3
Aminocidos polares, sin carga Ion amonio Amoniaco
La cadena lateral de la asparagina (Asn, N) y la gluta-
La especie que se forma por la ionizacin de un cido es
mina (Gln, Q) (figura B1-3b), los derivados amdicos de
su base conjugada. Al contrario, la protonacin de una
Asp y Glu, respectivamente, carece de carga pero puede
base produce su cido conjugado. As, por ejemplo, el
participar en los enlaces de hidrgeno. La serina (Ser,
cido actico y el acetato representan un par acidob-
S) y la treonina (Thr, T) (figura B1-3b) son aminocidos
sico conjugado.
polares debido a su grupo hidroxilo reactivo en la cadena
lateral y tambin pueden participar en los enlaces de La ionizacin de un cido dbil se representa as:
hidrgeno (como puede hacerlo el grupo hidroxilo del
aminocido aromtico Tyr). HA H+ + A
La constante de equilibrio (K) aparente de esta ioniza-
cidos, bases y pH cin se define como:
+
El pH de una solucin es una medida de su concentra- K = [H ][A ]
cin de protones (H+) y pH se define como: [HA] (Ecuacin 1)
El pK de un cido se define como:
1
pH = log10 = log10 [H+] 1
H+ pK = logK = log
K
en la cual los corchetes denotan una concentracin El pK de un cido es el pH al cual se disocia a la mitad,
molar. es decir, cuando [A] = [HA].
Un cido puede definirse como un donador de protones La ecuacin de Henderson-Hasselbalch expresa la
y una base, como un receptor (aceptor) de protones. interrelacin entre pH y el cociente entre cido y base.
Se deriva como sigue. El reordenamiento de la ecuacin
cido H+1 + base
1 da:
24 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

1 1 [A] se refiere como pK 1, o la capacidad de amortigua-

+ =
[H ] K [HA] miento.
Si se aplica el logaritmo a ambos lados de la ecuacin Los lquidos biolgicos, como el citosol y lquidos extra-
se tiene: celulares como la sangre, son amortiguados. Por ejem-
1 1 [A] plo, en los individuos sanos, el pH de la sangre recibe
log + = log + log
[H ] K [HA] cuidadosa atencin para mantenerlo a un pH de 7.4.
Los principales componentes amortiguadores de la
Si se sustituye el pH por el log de 1/[H+] y el pK por el
mayor parte de los lquidos biolgicos son el ion fosfato
log de 1/K da:
(H2PO4, pK de 6.82) y el ion carbonato (HCO3, pK de
[A] 6.35) debido a que los mismos tienen valores de pK en
pH = pK + log
[HA] ese espectro. Pese a ello, muchas molculas biolgicas,
que es la ecuacin de Henderson-Hasselbalch. Esta entre las cuales se reconocen los aminocidos, prote-
ecuacin indica que el pK de un cido es numrica- nas, cidos nucleicos y lpidos, poseen numerosos gru-
mente igual al pH de la solucin cuando la concentra- pos acidobsicos que son efectivos para amortiguar en
cin molar del cido es igual a la de su base conjugada. el espectro del pH fisiolgico (pH 6 a 8).
El pH de una solucin puede calcularse a partir de la Cuando se trabaja con enzimas, protenas y otras mol-
ecuacin de Henderson-Hasselbalch si se conocen las culas biolgicas, es con frecuencia crucial amortiguar
concentraciones molares de A y HA y el pK de HA. De el pH de una solucin con el fin de evitar la desnatu-
manera similar, el pK de un cido puede calcularse si ralizacin (prdida de actividad) de los componentes
se conocen las concentraciones molares de A y HA y el de inters (seccin D3). En los laboratorios se recurre a
pH de la solucin. muchos amortiguadores para lograr este propsito. Uno
de los ms comunes es el tris(hidroximetil)aminoetano
Amortiguadores o Tris, que tiene un pK de 8.08.

Un par conjugado acidobsico como el del cido actico

y el acetato puede resistir cambios en el pH de una solu-
cin, es decir, puede actuar como un amortiguador. Al
aadir hidrxido (OH) a una solucin de cido actico
sucede lo siguiente:
CH3COOH + OH CH3COO + H2O
Una grfica sobre la dependencia del pH de esta solu-
cin de la cantidad de OH aadida se llama curva de
titulacin (figura B1-4). Existe un punto de inflexin de
la curva en el pH de 4.8, que es el pK del cido actico.
En la vecindad de tal pH, una cantidad relativamente
grande de OH (o H+) produce un cambio escaso en el pH
ya que el OH (o H+) agregado reacciona con el CH3OOH(o
CH3COO), respectivamente. Los cidos dbiles son ms
eficaces para amortiguar cambios del pH dentro de una
unidad de pH del pK (figura B1-4), lo que con frecuencia
Ionizacin de los aminocidos
Los 20 aminocidos estndar tienen dos grupos aci-
dobsicos: los grupos amino  y carboxilo  unidos al
tomo C. Los aminocidos con una cadena lateral ioni-
zable (Asp, Glu, Arg, Lys, His, Cys, Tyr) tienen un grupo
acidobsico adicional. La curva de titulacin de la Gly
se muestra en la figura B1-5a. A un pH bajo (esto es, una
concentracin alta de iones hidrgeno), tanto el grupo
amino como el grupo carboxilo estn protonados por
completo, de manera que el aminocido se encuentra
en la forma catinica H3N+CH2COOH (figura B1-5b). Como
el aminocido en solucin se titula con cantidades
crecientes de una base fuerte (p. ej., NaOH) pierde dos
protones, primero el del carboxilo, que tiene el valor
de pK ms bajo (pK = 2.3), y luego el del grupo amino,
que tiene el valor de pK ms alto (pK = 9.78). El valor al

1.0 pK1
Equivalentes de OH aadidos

pK = 4.8

0.5

0
0 3 4 5 6 7
pH

Figura B1-4. Curva de titulacin del cido actico.

 B1ESTRUCTURA DE LOS AMINOCIDOS 25

cual la Gly carece de carga neta se denomina su punto
isoelctrico, o pI. Los grupos carboxilo  de los 20 ami-
nocidos estndar tienen valores de pK en el espectro
de 1.8 a 2.5, en tanto que sus grupos amino  tienen
valores de pK en el espectro de 8.7 a 10.7 (cuadro B1-1).
Las cadenas laterales de los aminocidos cidos Asp y
Glu tienen valores de pK de 3.9 y 4.1, respectivamente,
en tanto que aqullos de los aminocidos bsicos Arg y
Lys tienen valores de pK de 12.5 y 10.5, respectivamente.
Slo la cadena lateral de la His, con un valor de pK de
6.0, est ionizada dentro del espectro del pH fisiolgico
(pH de 6 a 8). Debera recordarse que cuando los ami-
nocidos estn unidos en las protenas, slo los grupos
de las cadenas laterales y los grupos terminales amino 
y carboxilo  de la cadena polipeptdica estn libres para
ionizarse (seccin B2).

a) 2.0

3)
1.5
Equivalentes de OH

2)
aadidos

1.0

0.5

1) pK1 pI pK2
0
0 2 4 6 8 10 12 14
pH
b)
OH OH
H H H
+ +
H3N C COOH H3 N C COO H2 N C COO

H H H
1) 2) 3)

Figura B1-5. Ionizacin de la glicina: a) curva de titulacin de la glicina;

b) disociacin de la glicina. Los nmeros en negritas entre parntesis en
a) corresponden a las estructuras de b).

Cuadro B1-1. Valores de pK y pesos moleculares de los 20 aminocidos estndar.

Aminocido Peso molecular pK del -COOH pK del -NH3+ pK de la cadena lateral
Alanina 89.1 2.35 9.87
Arginina 174.2 1.82 8.99 12.48
Asparagina 132.1 2.14 8.72
cido asprtico 133.1 1.99 9.90 3.90
Cistena 121.2 1.92 10.70 8.37
cido glutmico 147.1 2.10 9.47 4.07
Glutamina 146.2 2.17 9.13
Glicina 75.1 2.35 9.78
Histidina 155.2 1.80 9.33 6.04
Isoleucina 131.2 2.32 9.76
Leucina 131.2 2.33 9.74
Lisina 146.2 2.16 9.06 10.54
Metionina 149.2 2.13 9.28
Fenilalanina 165.2 2.20 9.31
Prolina 115.1 1.95 10.64
Serina 105.1 2.19 9.21
Treonina 119.1 2.09 9.10
Triptfanon 204.2 2.46 9.41
Tirosina 181.2 2.20 9.21 10.46
Valina 117.1 2.29 9.74
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B2Estructura y funcin de las protenas

Notas clave
Protenas: descripcin Las protenas desarrollan una gran variedad de funciones, entre ellas, el trans-
porte y almacenamiento de otras molculas, soporte mecnico, generacin de
movimiento, proteccin inmunitaria, catalizadoras, participan en la sealiza-
cin celular y transmisin del impulso nervioso. Cada protena cuenta con una
secuencia de aminocidos especfica cuya determinacin es gentica.
Enlace peptdico Una protena es una secuencia lineal de aminocidos unidos entre s por
enlaces peptdicos. El enlace peptdico es una unin covalente entre el grupo
amino de un aminocido y el grupo carboxilo de otro aminocido. La confor-
macin raqudea de un polipptido es especificada por los ngulos de rotacin
del enlace CN (phi, ) y el enlace CC (psi,) de cada uno de sus residuos
de aminocidos. Los valores que pueden tener y  desde el punto de vista
estrico se pueden consultar en la grfica de Ramachandran.
Estructura primaria La secuencia lineal de los aminocidos unidos por los enlaces peptdicos se
llama estructura primaria de las protenas. La posicin de los enlaces disulfuro
covalentes entre los residuos de cistena tambin se incluye en la estructura
primaria.
Estructura secundaria La estructura secundaria de una protena se refiere al plegamiento regular de
regiones de la cadena polipeptdica. Los dos tipos ms comunes de estructuras
secundarias son la hlice y la hoja plegada . La hlice es una disposicin
helicoidal parecida a un bastn, cilndrica, de los aminocidos en la cadena
polipeptdica, que se mantiene por enlaces de hidrgeno paralelos al eje de la
hlice. En la hoja plegada , los enlaces de hidrgeno se forman entre seccio-
nes adyacentes de polipptidos que se disponen en la misma direccin (para-
lelos) o en direcciones opuestas (antiparalelos).
Estructura terciaria La estructura terciaria de una protena se refiere al ordenamiento tridimensio-
nal de todos los aminocidos en la cadena polipeptdica. Esta conformacin
nativa y activa desde el punto de vista biolgico se mantiene gracias a mlti-
ples enlaces no covalentes.
Estructura cuaternaria Si una protena est formada por ms de una cadena polipeptdica, se dice
que tiene estructura cuaternaria. sta se refiere a la disposicin espacial de
las subunidades polipeptdicas y a la naturaleza de las interacciones entre las
mismas.
Estabilidad de la protena Adems de los enlaces peptdicos entre los residuos de los aminocidos, la
estructura tridimensional de una protena se mantiene por una combinacin
de interacciones no covalentes (fuerzas electrostticas, fuerzas de van der
Waals, enlaces de hidrgeno, fuerzas hidrfobas) e interacciones covalentes
(enlaces disulfuro).
Determinacin de la La estructura tridimensional de una protena puede determinarse mediante
estructura de una tcnicas fsicas complejas como la cristalografa de rayos X, la espectroscopia
protena con resonancia magntica nuclear (NMR) y la microscopia crioelectrnica.
Plegamiento de las Las protenas se pliegan en forma espontnea en su conformacin nativa y
protenas la estructura primaria es la que dicta su estructura tridimensional. En primer
lugar, son las fuerzas hidrfobas las que dirigen de manera primaria el plega-
miento, que sigue un conjunto ordenado de vas. Protenas accesorias, como
las chaperonas moleculares, contribuyen a que las protenas se plieguen co-
rrectamente en la clula. Enfermedades como la de Alzheimer se deben a que
las protenas se pliegan mal.
 B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 27

Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos (B4) Colgena

(B3) Mioglobina y hemoglobina (B6) Anticuerpos

Protenas: descripcin enlace qumico covalente entre el grupo amino  de un

Las protenas son las macromolculas ms verstiles de
los organismos vivos, donde llevan a cabo una diversi-
dad de funciones. stas transportan y almacenan otras
molculas (p. ej., la hemoglobina y la mioglobina; sec-
cin B3), proporcionan soporte mecnico (p. ej., la co-
lgena; seccin B4), generan movimiento (p. ej., la
actina y la miosina; seccin B5), proveen proteccin
inmunitaria (p. ej., anticuerpos; seccin B6), actan
como catalizadores (enzimas; secciones D1 a D5), inter-
vienen en la sealizacin celular (seccin E5), y trans-
miten impulsos nerviosos (seccin E6). Cada protena
cuenta con una secuencia de aminocidos especfica
que determinan los genes (seccin H1). Casi todas las
protenas contienen entre 50 y 2 000 aminocidos uni-
dos por medio de enlaces peptdicos. Como el peso
molecular promedio de un aminocido es cercano a 110
(cuadro B1-1), los pesos moleculares de la mayora de
las protenas se hallan entre 5 500 y 220 000. Tambin
es posible referirse a la masa de una protena, la cual
se expresa en unidades de Dalton, donde un Dalton
(Da) es igual a una unidad de masa atmica. Por consi-
guiente, una protena con un peso molecular de 25 000
tiene una masa de 25 000 Da o 25 kDa.
Enlace peptdico
Las protenas son secuencias lineales de aminocidos
unidos por enlaces peptdicos. El enlace peptdico es un
aminocido y el grupo carboxilo de otro (figura B2-1a)
(seccin B1). Cuando dos aminocidos estn unidos por
medio de un enlace peptdico para formar un dipptido,
todava conservan un grupo amino libre en un extremo
y un grupo carboxilo libre en el otro extremo, los cua-
les pueden unirse a aminocidos adicionales. Por tanto,
cadenas largas sin ramificaciones de aminocidos pue-
den mantenerse unidas por enlaces peptdicos para for-
mar oligopptidos (hasta 25 residuos de aminocidos) y
polipptidos (> 25 residuos de aminocidos). Advirtase
que el polipptido todava conserva un grupo amino
libre en un extremo y un grupo carboxilo libre en el
otro. Por convencin, las cadenas peptdicas se escriben
hacia abajo, con el grupo amino libre a la izquierda y
el carboxilo libre a la derecha y un guin entre los ami-
nocidos para indicar los enlaces peptdicos. En conse-
cuencia, el tripptido +H3N serina-leucina-fenilalanina-
COO debe escribirse Ser-Leu-Phe (con el cdigo de tres
letras) o S-L-F (con el cdigo de una letra).
El enlace entre el carbono y el nitrgeno exhibe un
carcter parcial de enlace doble debido a la proximidad
del doble enlace entre el carbono y el oxgeno del grupo
carbonilo, lo que permite la existencia de las estructu-
ras de resonancia de la figura B2-1b. A causa de ello, la
longitud del enlace CN es tambin ms corta que la
de los enlaces simples CN habituales. La unidad pep-
tdica, la cual est constituida por los tomos CONH, es

a) H H H O H
+ O + O + O
H3 N C C + H3N C C H3N C C N C C + H2O
O O O
R1 R2 R1 H R2
Enlace
peptdico

Unidades peptdicas rgidas y planas

b) c)
O O H H O H O H O
+
C N C N N C C N C C N C C
H H R1 H R2 H R3

Rotacin libre alrededor de CN

y de los enlaces C C

Figura B2-1. a) Formacin de un enlace peptdico; b) estructuras de resonancia del

enlace peptdico; c) unidades peptdicas de un polipptido.
28 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS
C H
N
C
O
R
Figura B2-2. Un segmento de una cadena polipeptdica muestra los ngulos de
torsin alrededor de los enlaces CN () y CC ().
por tanto relativamente rgida y plana, no obstante lo
cual puede tener lugar la rotacin libre alrededor de los
enlaces CN y CC (los enlaces que se hallan a cada
lado del enlace peptdico), lo que permite que unidades
peptdicas adyacentes se encuentren en ngulos dife-
rentes (figura B2-1c). El hidrgeno del grupo amino est
casi siempre en el lado opuesto (trans) del enlace doble
del oxgeno del carbonilo y no en el mismo lado (cis).
La columna vertebral de una protena es una secuencia
unida de grupos peptdicos planos y rgidos. La con-
formacin raqudea de un polipptido depende de los
ngulos de rotacin o ngulos de torsin alrededor de
los enlaces CN (phi, ) y CC (psi, ) de cada uno de
sus residuos de aminocidos. Cuando la cadena poli-
peptdica est en su conformacin plana, extendida
180
(grados)
180
180
Figura B2-3. Grca de Ramachandran en la que se muestran los ngulos
permitidos para la poli-L-alanina (regiones oscuras). , Valores - que producen la
mano derecha de la hlice ; , la hoja plegada  antiparalela; , la hoja plegada 
paralela; C, la hlice de colgena.
O
C
C
C
N
H
por completo (toda-trans), los ngulos y se defi-
nen como de 180 y se incrementan para una rotacin
a favor de las agujas del reloj cuando se ven desde C
(figura B2-2). El espectro conformacional de los ngu-
los de torsin, y , de la columna vertebral de un
polipptido est restringido por impedimentos estri-
cos. Desde el punto de vista estrico, el valor permitido
de y puede determinarse si se calcula la distancia
entre los tomos de un tripptido a todos los valores
de y para la unidad peptdica central. Estos valo-
res se visualizan en un diagrama de contorno estrico,
conocido por otro lado como mapa de conformacin o
grfica de Ramachandran (figura B2-3). Si se observa la
figura B2-3, puede verse que la mayor parte de las reas
de la grfica de Ramachandran (en su mayora combi-
naciones de y ) son inaccesibles desde la perspectiva
C
0 180
(grados)
 B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 29

conformacional a una cadena polipeptdica. Slo tres
regiones pequeas del mapa de conformacin son fsi-
camente accesibles a una cadena polipeptdica y dentro
de tales regiones se encuentran los valores y que
producen la lateralizacin a la derecha de la hlice , las
hojas plegadas paralelas y antiparalelas y la hlice de
la colgena (vase ms adelante y la seccin B4).
La cadena polipeptdica se pliega para configurar la for-
ma especfica (conformacin) de la protena. Esta con-
formacin es la disposicin tridimensional de los to-
mos en la estructura y est determinada por la secuencia
de los aminocidos. La estructura de las protenas tiene
cuatro niveles: primario, secundario, terciario y a veces,
pero no siempre, cuaternario.
Estructura primaria
El nivel primario de la estructura de una protena es la
secuencia lineal de aminocidos como quedan unidos
por los enlaces peptdicos. Esta secuencia est determi-
nada a su vez por la secuencia de bases de los nucle-
tidos en la codificacin gentica de la protena (seccin
H1). Tambin se incluye en la estructura primaria la
localizacin de cualquier otro enlace covalente. De
manera primaria, stos son enlaces disulfuro entre resi-
duos de cistena que se hallan adyacentes en el espacio,
pero no en la secuencia lineal de aminocidos. Estos
entrecruzamientos covalentes entre cadenas polipept-
dicas separadas o entre partes diferentes de la misma
cadena se forman por la oxidacin de los grupos SH de
los residuos de cistena que se yuxtaponen en el espa-
cio (figura B2-4). El disulfuro resultante se llama residuo
de cistena. Los enlaces disulfuro son frecuentes en las
protenas extracelulares, pero rara vez se encuentran
en protenas intracelulares. Algunas protenas como la
colgena presentan entrecruzamientos covalentes entre
cadenas laterales de residuos de Lys (seccin B4).
Estructura secundaria
El nivel de estructura secundario de una protena es
el plegamiento regular de regiones de la cadena polipep-
tdica. Los dos tipos ms comunes de pliegues de las
protenas son la hlice  y la hoja plegada . En la hlice
similar a un bastn, los aminocidos se disponen en
una conformacin helicoidal regular (figura B2-5a). El
oxgeno del grupo carbonilo de cada enlace peptdico
est unido al hidrgeno del grupo amino del cuarto ami-
nocido situado ms all del enlace (figura B2-5b), con
el enlace de hidrgeno dispuesto casi en paralelo al eje
de la hlice. En una hlice hay 3.6 aminocidos por
vuelta de la hlice y cubren una distancia de 0.54 nm,
en tanto que cada residuo de aminocido representa un
avance de 0.15 nm a lo largo del eje de la hlice (figura
B2-5a). Todos los aminocidos de las cadenas laterales
se localizan a lo largo de la parte externa de la hlice
cilndrica (figura B2-5c). Ciertos aminocidos se hallan
con ms frecuencia en unas hlices que en otras. En
esta situacin se encuentra la Pro, que rara vez se reco-
noce en regiones helicoidales debido a que no puede
formar el patrn de enlace de hidrgeno correcto a raz
de que carece de un tomo de hidrgeno en su tomo de
nitrgeno. Por esta causa, la Pro se encuentra con ms
frecuencia al final de una hlice , donde altera la direc-
cin de la cadena polipeptdica y hace concluir la hlice.
Diferentes protenas muestran cantidades distintas de
cadenas polipeptdicas plegadas en hlices . Por ejem-
plo, la cadena polipeptdica nica de la mioglobina pre-
senta ocho hlices (seccin B3).
En la hoja plegada , se forman enlaces de hidrgeno
entre los enlaces peptdicos de diferentes cadenas poli-
peptdicas o de diferentes secciones de la misma cadena
polipeptdica (figura B2-6a). El carcter plano de los
enlaces peptdicos fuerza al polipptido a ser plegado
con las cadenas laterales de los aminocidos haciendo
protrusin hacia arriba y abajo de la hoja (figura B2-6b).
En las hojas plegadas , las cadenas polipeptdicas adya-
centes pueden ser paralelas o antiparalelas segn si
corren en la misma direccin o en la direccin opuesta,
respectivamente (figura B2-6c). La cadena polipeptdica
que se halla dentro de una hoja plegada est extendida
por completo, de manera que existe una distancia de
0.35 nm desde un tomo de C al siguiente. Las cadenas

H H
+ +
H3 N C COO H3N C COO
CH2 CH2
Oxidacin
SH S +
+ 2H
SH Reduccin S
CH2 CH2
+ +
H3N C COO H3N C COO
H H
Cistena (x2) Cistina

Figura B2-4. Formacin de un enlace disulfuro entre dos residuos de cistena,

de lo que resulta la formacin de un residuo de cistina.
30 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a)
tomos C de residuos de
aminocidos consecutivos

(3.6 residuos 0.15 nm (100 de rotacin

de aminocidos 0.54 nm por residuo
por vuelta)

Posicin de la cadena
polipeptdica, consiste en
tomos C y los de los enlaces
peptdicos C N
R
c) R R
b)
H H H O H H H O H
R
N C C N C C N C C N C C N C C R

H R1 O R2 H R3 O R4 H R5 O
R R
Enlaces de hidrgeno
R R

Figura B2-5. Plegamiento de la cadena polipeptdica en una hlice : a) modelo

de una hlice  con slo los tomos C a lo largo de la columna vertebral que se
muestra; b) en la hlice , el grupo CO del residuo n es hidrgeno ligado al grupo
NH del residuo (n+4); c) vista de un corte transversal de una hlice  en el que se
muestran las posiciones de las cadenas laterales (grupos R) de los aminocidos en
el lado externo de la hlice.

a)

Enlaces de
hidrgeno

b) c) Paralela

Antiparalela

Figura B2-6. Plegamiento de la cadena polipeptdica en una hoja plegada : a)

enlaces de hidrgeno entre dos secciones de una cadena polipeptdica donde forma
una hoja plegada ; b) vista lateral de una de las cadenas polipeptdicas en una hoja
plegada  donde se muestran las cadenas laterales (grupos R) jas a los tomos C
sobresaliendo por arriba y abajo de la hoja; c) debido a que la cadena polipeptdica
tiene polaridad, pueden formarse hojas plegadas  paralelas o antiparalelas.

plegadas presentan siempre un ligero encorvamiento
y, si participan numerosos polipptidos, la hoja puede
cerrarse para formar un tonel . Mltiples hojas plega-
das proporcionan fuerza y rigidez en muchas estruc-
turas protenicas, como la fibrona de la seda, la cual
consiste casi por completo en pilas de hojas plegadas 
antiparalelas.
Con el fin de plegarse de forma hermtica dentro de la
forma compacta de una protena globular, con frecuen-
 B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 31

cia la cadena polipeptdica invierte su direccin, para
lo cual hace una vuelta  (horquilla o vuelta invertida).
En estas vueltas , el oxgeno del grupo carbonilo de
un aminocido se une al hidrgeno del grupo amino
del cuarto aminocido (figura B2-7). Las vueltas se
encuentran con frecuencia donde se conectan los extre-
mos de las hojas plegadas antiparalelas. Se dice que las
regiones de la cadena polipeptdica que no estn en una
estructura secundaria regular tienen una conformacin
enrollada o en asa. Cerca de la mitad de las cadenas
polipeptdicas de una protena globular tpica se hallan
en esta conformacin.
Estructura terciaria
El tercer nivel estructural que se encuentra en las prote-
nas, la estructura terciaria, alude a la disposicin espacial
de los aminocidos que estn lejos en la secuencia lineal
as como a aquellos residuos que estn adyacentes. Otra
vez, es la secuencia de los aminocidos la que especi-
fica esta estructura tridimensional final (figuras B2-8 y
B2-9). En protenas globulares solubles en agua como
la mioglobina (seccin B3), la principal fuerza directriz
que subyace al plegamiento de la cadena polipeptdica
es el requerimiento energtico para sepultar los amino-
cidos apolares en el interior hidrfobo, lejos del medio
acuoso e hidrfilo circundante. La cadena polipeptdica
se pliega de manera espontnea y la mayor parte de
sus cadenas laterales hidrfobas resulta sepultada en el
interior, en tanto que sus cadenas laterales polares, con
carga, permanecen en su superficie. Cuando est ple-
gada, la conformacin tridimensional, la activa des-
de la perspectiva biolgica (nativa), de la protena se
mantiene no slo por interacciones hidrfobas sino
tambin por fuerzas electrostticas, enlaces de hidr-
geno y, si estn presentes, enlaces disulfuro. Las fuerzas
electrostticas incluyen puentes salinos entre grupos
con cargas opuestas y las mltiples interacciones dbi-
les de van der Waals entre las cadenas laterales alifticas
estrechamente empacadas del interior de las protenas.
En muchas protenas grandes, la cadena polipeptdica
se pliega en dos o ms regiones compactas y globula-
res llamadas dominios. La mayora de los dominios

Cadena
polipeptdica

Enlace de
hidrgeno

Figura B2-7. Plegamiento de una cadena polipeptdica en una vuelta .

a) ArgValGluLysMetValLouAlaGly

b)

c) d)

Figura B2-8. Los cuatro niveles de estructura de las protenas: a) estructura

primaria (secuencia de aminocidos); b) estructura secundaria (hlice );
c) estructura terciaria; d) estructura cuaternaria.
32 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) b)

c) d)

Figura B2-9. Varias representaciones grcas de la RND3/RHOE, una pequea

protena que une GTP formando un complejo con este nucletido (representacin
del trifosfato de guanosina desde diferentes perspectivas): a) la representacin de
barras y bolitas revela la localizacin de todos los tomos de la protena;
b) los indicios de la columna vertebral de C muestran cmo se pliega la cadena
polipeptdica; c) la representacin con cintas destaca cmo se organizan las hlices
 y las hebras  en la protena; d) un modelo de la supercie accesible al agua
revela los numerosos baches y grietas de la supercie de la protena.

consta de 30 a 400 aminocidos y en ellos la cadena
polipeptdica se pliega en estructuras especficas, con
regiones peptdicas que casi no se pliegan y que vincu-
lan a los dominios sin interrupciones. En consecuencia,
muchos dominios son unidades independientes, si se
los ve desde una perspectiva estructural, que tienen las
caractersticas de las protenas globulares pequeas.
En tanto, diversas protenas pueden tener dominios
en comn aunque sus estructuras terciarias completas
sean diferentes. Entre los ejemplos de dominios en las
protenas est el del pliegue de la inmunoglobulina que
se encuentra en anticuerpos y otras protenas del sis-
tema inmunitario (seccin B6) y la hlice-giro-hlice,
dedos de cinc y los dominios bsicos que se hallan en
las protenas que se unen con el DNA (seccin G6).
Estructura cuaternaria
Las protenas que contienen ms de una cadena poli-
peptdica, como la hemoglobina (seccin B3), exhiben
 B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 33

un cuarto nivel estructural de las protenas que se deno-
mina estructura cuaternaria (figura B2-8). Este nivel
estructural alude a la disposicin espacial de las subu-
nidades polipeptdicas y a la naturaleza de las interac-
ciones entre ellas. Tales interacciones pueden ser enla-
ces covalentes (p. ej., enlaces disulfuro) o interacciones
no covalentes (fuerzas electrostticas, enlaces de hidr-
geno, interacciones hidrfobas).
Estabilidad de las protenas
Un conjunto de interacciones no covalentes (fuerzas
electrostticas, enlaces de hidrgeno, fuerzas hidrfo-
bas) y de interacciones covalentes (enlaces disulfuro)
mantiene la conformacin tridimensional nativa de una
protena, adems de los enlaces peptdicos entre los
aminocidos.
z Fuerzas electrostticas: incluyen las interacciones
entre dos grupos inicos de carga opuesta, como el
caso del grupo amonio de la Lys y el grupo carboxilo
del Asp, con frecuencia referido como par inico o
puente salino. Adems, las asociaciones no covalen-
tes entre molculas elctricamente neutras, que en
conjunto se conocen como fuerzas de van der Waals,
originadas de interacciones electrostticas entre
dipolos permanentes o inducidos, como el del grupo
carbonilo de los enlaces peptdicos.
z Enlaces de hidrgeno: son interacciones predomi-
nantemente electrostticas entre un grupo donador
dbilmente cido y un tomo aceptor que es porta-
dor de un par de electrones solitarios y que en conse-
cuencia presenta una carga parcial negativa que atrae
al tomo de hidrgeno. En los sistemas biolgicos, el
grupo donador es un tomo de oxgeno o nitrgeno
que tiene un tomo de hidrgeno unido a l a travs
de un enlace covalente y el aceptor es el oxgeno o
el nitrgeno (figura B2-10). De manera habitual, los
enlaces de hidrgeno estn en el espectro de 0.27
a 0.31 nm y son muy direccionales, es decir que el
hidrgeno donador y los tomos aceptores son coli-
neales. Los enlaces de hidrgenos son ms fuertes
que las fuerzas de van der Waals pero mucho ms
dbiles que los enlaces covalentes. Los enlaces de
hidrgeno no slo desempean un rol importante
en la estructura de las protenas sino tambin en la
estructura de otras macromolculas biolgicas como
la hlice doble del DNA (seccin F1) y las bicapas lip-
dicas (seccin E1). Por ltimo, los enlaces de hidr-
geno son crticos para las propiedades del agua y para
su papel como solvente bioqumico.
z Fuerzas hidrfobas: efecto hidrfobo es el nom-
bre que se les da a aquellas fuerzas que causan las
molculas apolares para minimizar su contacto con
el agua. Lo anterior se ve con toda claridad con las
molculas anfipticas como los lpidos y los deter-
gentes que forman micelas en una solucin acuosa
(seccin E1). Asimismo, las protenas encuentran
una conformacin en la que sus cadenas laterales
apolares estn en gran medida fuera del alcance del
solvente acuoso y en consecuencia las fuerzas hidr-
fobas son un determinante de gran importancia en
la estructura, plegamiento y estabilidad de las pro-
tenas. En stas, los efectos de las fuerzas hidrfobas
suelen designarse enlazamiento hidrfobo, con lo
cual se pretende indicar la naturaleza especfica del
plegamiento de la protena bajo la influencia del efec-
to hidrfobo.
z Enlaces disulfuro: estos enlaces covalentes se for-
man entre residuos de Cys que estn muy cercanos
en la conformacin final de la protena (figura B2-4)
y funcionan como estabilizadores de la estructura tri-
dimensional. En realidad, los enlaces disulfuro slo
se forman en el ambiente oxidante del retculo endo-
plsmico (seccin A2) y por tanto se encuentran en
primer lugar en las protenas extracelulares y secre-
tadas.
Determinacin de la estructura
de las protenas
Con frecuencia puede predecirse la presencia de hli-
ces y hojas plegadas en las protenas a partir de la
secuencia de aminocidos primaria. En cambio, no es
posible predecir la estructura tridimensional precisa de
una protena de slo conocer su secuencia de aminoci-
dos, a menos que su secuencia sea muy similar a una
protena cuya estructura tridimensional ya se conoce.
Se requieren mtodos fsicos muy complejos y anlisis
muy elaborados de los datos experimentales para deter-
minar la conformacin de una protena. La estructura

Donador del Receptor del

enlace H enlace H
O H . . . .N
O H . . . .O
N H . . . .N
N H . . . .O

Figura B2-10. Ejemplos de enlaces de hidrgeno

(se muestran en lneas de punteadas).
34 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

tridimensional de una protena puede determinarse a
nivel atmico mediante tcnicas como la cristalografa
de rayos X, la espectroscopia con resonancia magntica
nuclear (NMR) y la microscopia crioelectrnica.
En la cristalografa de rayos X, el primer requerimiento
son los cristales de protenas muy purificadas. En el
cristal, millones de molculas de protenas estn pre-
cisamente alineadas unas con otras en una disposi-
cin rgida caracterstica de cada protena. Entonces,
los haces de rayos X se hacen pasar a travs del cris-
tal (figura B2-11). Las longitudes de onda de los rayos
X son de 0.1 a 0.2 nm, lo suficientemente cortos para
discriminar los tomos en el cristal de la protena. Los
tomos del cristal desvan los rayos X y al hacerlo pro-
ducen un patrn de difraccin de manchas discretas en
la pelcula fotogrfica. Las intensidades de la difraccin
mxima (la oscuridad de las manchas de la pelcula) se
usan entonces matemticamente para construir la ima-
gen tridimensional del cristal de protena.
La espectroscopia con resonancia magntica nuclear
(NMR) puede utilizarse para determinar las estructuras
tridimensionales de protenas pequeas (hasta de alre-
dedor de 30 kDa) en solucin acuosa. En esta tcnica,
una solucin de protena concentrada se coloca en un
campo magntico y se miden los efectos de diferentes
frecuencias de radio en el giro de diferentes tomos de
la protena. El comportamiento de cualquier tomo es
influido por los tomos cercanos de los residuos adya-
centes, pero donde los residuos ms cercanos causan
ms perturbaciones que los alejados. Con base en la
magnitud del efecto, puede calcularse la distancia entre
los residuos y emplearse para generar la estructura tri-
dimensional de la protena.
La microscopia crioelectrnica se usa con frecuencia
para determinar la estructura tridimensional de las
protenas, en particular de las protenas con multi-
subunidades, las cuales son difciles de cristalizar. En
esta tcnica, la muestra de la protena se congela con
rapidez en helio lquido para preservar su estructura.
A continuacin, la protena congelada e hidratada se
examina en un microscopio crioelectrnico que usa
una dosis baja de electrones para evitar cualquier dao
inducido por la radiacin en la estructura. Las imge-
nes resultantes se analizan por medio de programas de
computadora complejos, que sirven para reconstruir la
estructura tridimensional de la protena.
Plegamiento de las protenas
Bajo condiciones fisiolgicas apropiadas, las protenas
se pliegan de modo espontneo en su conformacin
nativa. Como no se necesitan plantillas externas, queda
implcito que la estructura primaria de la protena
determina su estructura tridimensional. A partir de
experimentos con la protena RNA-asa A, se ha observado
que son en primer lugar los residuos internos de la pro-
tena los que dirigen su plegamiento a la conformacin
nativa. Es menos probable que la alteracin de los resi-
duos superficiales por mutacin afecte el plegamiento
que los cambios en los residuos internos. Asimismo, ha
sido observado que el plegamiento de la protena es diri-
gido en primer lugar por las fuerzas hidrfobas. No ha
sido posible plegar protenas en su conformacin nativa
a travs de un conjunto de vas ordenadas en lugar de
recurrir a una exploracin al azar de todas las conforma-
ciones posibles hasta encontrar la correcta.
Aunque las protenas pueden plegarse in vitro (en el
laboratorio) sin la presencia de protenas accesorias,
este proceso puede tomar minutos a das. In vivo (en la
clula), este proceso requiere slo unos pocos minutos
porque las clulas contienen protenas accesorias, las

Fuente de rayos X

Haz de rayos X
Cristal de
protena

Rayos difractados

Detector (p. ej., una pelcula fotogrca)

Figura B2-11. Cristalografa de rayos X. Cuando un haz estrecho de rayos X

atraviesa un cristal, parte del mismo pasa siguiendo la misma direccin y otra
parte es desviada (difractada) en diversas direcciones. La intensidad de las ondas
difractadas se registra en una pelcula fotogrca o en un detector electrnico de
estado slido. La estructura tridimensional de la protena puede determinarse con
los datos de la difraccin.
 B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS
cuales ayudan al polipptido a plegarse en su confor-
macin nativa. Hay tres clases principales de protenas
accesorias para el plegamiento de las protenas:
z Las isomerasas de proteindisulfuro catalizan las
reacciones de intercambio de disulfuros y por consi-
guiente facilitan la bsqueda de los enlaces disulfuro
de una protena hasta encontrar el par correcto.
z Las cis-trans isomerasas de peptidilprolilo catalizan
por otro lado la lenta interconversin de los enlaces
peptdicos X-Pro entre sus conformaciones cis y trans
y de esta forma aceleran el plegamiento de los poli-
pptidos que contienen Pro. Una de las clases de cis-
trans isomerasas de peptidilprolilo es inhibida por el
frmaco inmunosupresor ciclosporina A.
z Chaperonas moleculares, las cuales incluyen pro-
tenas como las protenas de choque por calor 70
(hsc 70), las chaperoninas y las lectinas calnexina
35
y calreticulina. stas evitan el plegamiento inapro-
piado y la agregacin de las protenas, que por lado
pueden ocurrir debido a que las regiones hidrfobas
internas se exponen a otras similares.
Algunas enfermedades son consecuencia del plega-
miento errneo de las protenas. Por ejemplo, en la
neurodegenerativa y fatal enfermedad de Alzheimer,
los pequeos pliegues errneos del pptido amiloide
y los agregados en el cerebro matan las neuronas circun-
dantes. Por su parte, en las enfermedades infecciosas
por priones, como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob
(CID) en los seres humanos y la encefalopata espongi-
forme bovina (BSE o enfermedad de las vacas locas), la
forma celular normal de la protena prinica, la cual
tiene sobre todo una estructura secundaria helicoidal
, sufre una transicin conformacional hacia la forma
infecciosa de la protena, que presenta una estructura
predominante de hoja .
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B3Mioglobina y hemoglobina
Notas clave
Protenas que unen La hemoglobina y la mioglobina son las dos protenas que unen oxgeno pre-
oxgeno sentes en los organismos multicelulares grandes. La hemoglobina transporta
oxgeno en la sangre y se localiza en los eritrocitos; por su parte, la mioglobina
almacena el oxgeno en los msculos.
Mioglobina La mioglobina, cuya estructura tridimensional fue resuelta mediante la cristalo-
grafa de rayos X, es una protena globular elaborada con una sola cadena poli-
peptdica de 153 residuos de aminocidos, que estn plegados en ocho hlices
. El grupo prosttico hemo se localiza dentro de una hendidura hidrfoba de
la cadena polipeptdica plegada.
Hemoglobina La hemoglobina adulta (HbA) presenta estructura cuaternaria ya que est
formada por cuatro cadenas polipeptdicas, dos cadenas  y dos cadenas 
(2 y 2), cada una de ellas con un grupo prosttico hemo. Cada polipptido de la
hemoglobina presenta una estructura tridimensional casi idntica a la de la ca-
dena polipeptdica de la mioglobina.
Unin del oxgeno al hemo El grupo prosttico hemo consiste en un anillo de protoporfirina IX y un tomo
de Fe2+ central, el cual forma cuatro enlaces con el anillo de la porfirina. De
manera adicional, en un lado del anillo de la porfirina, el Fe2+ forma un enlace
con la histidina proximal (His F8), un residuo de ocho aminocidos a lo largo
de la hlice F de la hemoglobina. El sexto enlace del Fe2+ es con una molcula de
O2. Cerca de donde se une el O2 est la histidina distal (His E7), la encargada
de evitar que el monxido de carbono se una con ms eficiencia.
Alosteria La hemoglobina es una protena alostrica. La unin del O2 es cooperativa; la
unin del O2 a una subunidad aumenta la facilidad de unin de molculas de
O2 adicionales a las otras subunidades. La curva de disociacin del oxgeno
de la hemoglobina es sigmoidea, mientras que la de la mioglobina es hiperb-
lica. La mioglobina tiene una afinidad mayor por el oxgeno que la hemoglo-
bina. La oxihemoglobina y la desoxihemoglobina tienen diferentes estructuras
cuaternarias. A medida que el O2 se une al Fe2+ distorsiona el grupo hemo y
mueve la histidina proximal. Esto a su vez mueve la hlice F y altera las interac-
ciones entre las cuatro subunidades. El H+, el CO2 y el 2,3-bisfosfoglicerato (BPG)
son efectores alostricos que promueven la liberacin de O2 de la hemoglobina.
El BPG se une en la cavidad central situada entre las cuatro subunidades.
Hemoglobina fetal La hemoglobina F (HbF), la cual consiste en dos cadenas  y dos cadenas  (2
y 2), est presente en el feto. La HbF une BPG con menos firmeza que la HbA y
por consiguiente presenta una afinidad ms alta por el O2, que promueve la
transferencia del O2 desde la circulacin materna a la fetal.
Hemoglobinopatas Las hemoglobinopatas son enfermedades causadas por hemoglobinas anor-
males. La mejor caracterizada de stas es la que reconoce un mecanismo de
transmisin gentica, la enfermedad hemoltica anemia de clulas falciformes.
Es causada por la sustitucin no conservadora de una Glu por una Val, lo que
resulta en la aparicin de un parche pegajoso hidrfobo en la superficie de la
protena. Esto permite que se formen largos agregados de fibras de molcu-
las de hemoglobina, los cuales distorsionan la forma de los glbulos rojos. Los
heterocigotos que portan slo una copia del gen de la clula falciforme son ms
resistentes al paludismo que los homocigotos para el gen normal.

Temas relacionados (B2) Estructura y funcin de las
protenas
(D5) Regulacin de la actividad
enzimtica
Protenas que unen oxgeno
La hemoglobina es una de las dos protenas que unen
oxgeno que se encuentran en los vertebrados. La fun-
cin de la hemoglobina es transportar oxgeno en la san-
gre desde los pulmones hasta todos los tejidos restantes
del cuerpo, con el propsito de aportarles a las clulas
el O2 que necesitan para la fosforilacin oxidativa de los
productos alimenticios (seccin L2). La hemoglobina se
encuentra en la sangre dentro de los eritrocitos (gl-
bulos rojos). La funcin esencial de estas clulas, ade-
ms de otras, es fungir como un saco para transportar
hemoglobina, ya que los eritrocitos maduros carecen
de cualquier organelo interno (ncleo, mitocondrias,
etc.). La otra protena que une O2 es la mioglobina, la
que almacena el oxgeno en los tejidos del cuerpo donde
lo mantiene listo para cuando las clulas lo necesiten.
Las concentraciones ms altas de mioglobina se hallan
en los msculos esqueltico y cardiaco, que requieren
grandes cantidades de O2 debido a su gran necesidad de
O2 durante la contraccin (seccin B5).
Mioglobina
La mioglobina es una protena relativamente pequea
con una masa de 17.8 kDa elaborada con 153 aminoci-
dos dispuestos en una cadena polipeptdica nica. Fue
la primera protena en tener su estructura tridimensio-
nal determinada por cristalografa de rayos X (seccin
B2), logro llevado a cabo por John Kendrew en 1957. La
mioglobina es una tpica protena globular que tiene
una estructura compacta muy plegada, con la mayor
parte de los residuos de aminocidos hidrfobos orde-
nados en el interior y muchos de los residuos polares
dispuestos en la superficie. La cristalografa de rayos X
revel que la cadena polipeptdica nica de la mioglo-
bina consiste por completo en una estructura secunda-
ria helicoidal  (seccin B2). De hecho, hay ocho hli-
ces  en la mioglobina (designadas A-H) (figura B3-1a).
Dentro de una hendidura hidrfoba formada por el
plegamiento de la cadena polipeptdica est el grupo
prosttico hemo (figura B3-1a). Esta unidad no polipep-
tdica est unida en forma no covalente a la mioglobina
y resulta esencial para la actividad biolgica de la pro-
tena (es decir, la unin de O2).
Hemoglobina
La estructura tridimensional de la hemoglobina fue
resuelta por medio de la cristalografa de rayos X (sec-
cin B2), hecho que logr Max Perutz en 1959. sta
B3MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA 37
(M4) Hemos y clorofila
revel que la hemoglobina est elaborada de cuatro
cadenas polipeptdicas, cada una de las cuales presenta
una estructura tridimensional similar a la de la cadena
polipeptdica nica de la mioglobina (figura B3-1b), pese
a que sus secuencias de aminocidos difieren en 83% de
los residuos. Lo anterior destaca un tema relativamente
comn de la estructura de las protenas: que secuencias
primarias muy diferentes pueden especificar estructu-
ras tridimensionales muy similares. El tipo principal de
hemoglobina que se encuentra en adultos (HbA) est
elaborado con dos cadenas polipeptdicas diferentes: la
cadena , que consta de 141 residuos de aminocidos,
y la cadena , que consta de 146 residuos (22; figura
B3-1b). Cada cadena, como en la mioglobina, consta de
ocho hlices y cada una contiene un grupo prosttico
hemo (figura B3-1b). Por consiguiente, la hemoglobina
puede unir cuatro molculas de O2. Las cuatro cadenas
polipeptdicas se hallan empacadas de manera muy
estrecha una junto a la otra en una disposicin tetra-
drica para formar una molcula de forma casi esfrica,
cuya forma se mantiene por mltiples interacciones no
covalentes (seccin B2).
Unin del oxgeno al hemo
El grupo prosttico hemo de la mioglobina y la hemo-
globina est hecho de un anillo de protoporfirina IX
con un tomo de hierro en estado de oxidacin ferroso
(Fe2+) (seccin M4; figura B3-2). Este Fe2+ se une con cua-
tro tomos de nitrgeno en el centro del anillo de proto-
porfirina y adems forma dos uniones adicionales a
cada lado del plano del anillo de protoporfirina. Una de
stas es con un residuo de histidina, el cual se halla ocho
residuos ms all a lo largo de la hlice F de la hemo-
globina, la histidina proximal (His F8) (figura B3-2). El
sexto enlace es con uno de los tomos de oxgeno de
la molcula de O2 (figura B3-2). Cerca de donde el O2
se une con el grupo hemo, se encuentra otro residuo
de histidina, la histidina distal (His E7) (figura B3-2).
Esto sirve para dos funciones de mucha importancia.
Primero, evita que los grupos hemo de las molculas de
hemoglobina cercanas hagan contacto con otras y oxi-
den el hierro al estado Fe3+, en el cual no pueden unir
mucho O2. Segundo, evita que el monxido de carbono
(CO) se una con la configuracin ms favorable al Fe2+,
y disminuye de este modo la afinidad del hemo por el
CO. Este hecho es importante en virtud de que el CO con-
trae uniones irreversibles con el hemo y as la protena
no puede unir mucho O2 ms. En consecuencia, aun-
que el sitio de unin del oxgeno en la hemoglobina y
38 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) b)
2 1

Cadena
polipeptdica Grupo
prosttico
hemo 2 1

c) d)

Figura B3-1. Estructura de la a) mioglobina y de la b) hemoglobina, en la que se

muestran las cadenas polipeptdicas  y . Indicios de la columna vertebral de C en
c) la mioglobina humana y d) la hemoglobina humana en la que se ven las hlices 
y el grupo prosttico hemo en un modelo qumico molecular y cmo se mapea el
monmero de mioglobina en la estructura de la hemoglobina (crculo).

Hlice F
CONH CH CONH

CH2 CONH CH CONH

C NH CH2
His
Proximal HC CH C NH
(His F8) N
HC CH
2 + O2 N
Fe
2+
Fe
Vista lateral HN CH HN CH
del anillo de O
O2
protoporrina IX HC N HC N
O C
C His Distal
(His E7)
CH2 CH2

CONH CH CONH CONH CH CONH

Hlice E

Figura B3-2. Unin del O2 al hemo. El Fe2+ del anillo de la protoporrina est enlazado
a la His F8 pero no a la His E7, que est muy cerca. A medida que el Fe2+ une O2, la
hlice F se mueve ms cerca de la hlice E (vase el texto para mayores detalles).

la mioglobina es slo una pequea parte de la protena
total, la cadena polipeptdica modula la funcin del
grupo prosttico hemo.
Alosteria
La hemoglobina es una protena alostrica (consltese
la seccin D5 para una descripcin ms completa de la
alosteria). Esto significa que la unin del O2 a una de
las subunidades es afectada por sus interacciones con las
otras subunidades. De hecho, la unin del O2 a una
subunidad de la hemoglobina induce cambios confor-
macionales (vase ms adelante y la figura B3-2) que se
retransmiten a las otras subunidades, lo que aumenta
su capacidad de unir O2 al incrementar su afinidad por
esta molcula. Por ello, se dice que la unin del O2 a la
hemoglobina es cooperativa. En contraste, la unin del
O2 a la cadena polipeptdica nica de la mioglobina es
no cooperativa. Lo anterior se hace muy aparente en las
curvas de disociacin del oxgeno de las dos protenas:
la de la hemoglobina es sigmoidea, lo cual refleja que la
unin es cooperativa, en tanto que la de la mioglobina
es hiperblica (figura B3-3). A partir de la curva de diso-
ciacin de O2 tambin puede verse que para cualquier
presin de oxgeno especfica el grado de saturacin de
la mioglobina es ms alto que el de la hemoglobina. En
otras palabras, la mioglobina presenta una afinidad ms
alta por el O2 que la hemoglobina. Lo anterior significa
que en la sangre de los capilares musculares, por ejem-
plo, la hemoglobina habr de liberar su O2 a la mioglo-
bina para que lo almacene all.
Mecanismo del cambio alostrico
La cristalografa de rayos X revel que la oxihemoglo-
bina, la forma que tiene cuatro molculas de O2 uni-
das, difiere mucho en su estructura cuaternaria de la
desoxihemoglobina, la forma sin O2 unido. En ausencia
de O2 unido, el Fe2+ yace ligeramente hacia un lado del
anillo de porfirina, el cual es de por s algo curvo (figura
B3-2). A medida que la molcula de O2 se une al grupo
prosttico hemo atrae al Fe2+ hacia dentro del plano del
anillo de porfirina (figura B3-2), al mismo tiempo que
aplana dicho anillo. El movimiento del Fe2+ determina
1
Saturacin (y)
0.5
pO2 en los
capilares
0
0 20
Presin de O2 (pO2 en mmHg)
Figura B3-3. Curvas de disociacin del oxgeno de la hemoglobina y la mioglobina.
B3MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA 39
que la histidina proximal tambin se mueva. sta, a su
vez, cambia su posicin en la hlice F y en regiones de
la cadena polipeptdica a cualquiera de los extremos de la
hlice. Por consiguiente, el movimiento en el centro de
la subunidad se transmite a las superficies, donde causa
que las interacciones inicas que mantienen las cuatro
subunidades juntas se rompan y restablezcan en una
posicin diferente, que altera la estructura cuaternaria y
conduce a la unin cooperativa del O2 a la hemoglobina.
Efecto Bohr
La concentracin de iones H+ y CO2 en los tejidos cir-
cundantes afecta la unin del O2 a la hemoglobina, o
efecto Bohr. En tejidos con alta actividad metablica
como el msculo, la concentracin de estas dos sustan-
cias es relativamente alta. Esto causa un cambio en la
curva de disociacin de O2 de la hemoglobina hacia
la derecha, lo que promueve la liberacin del O2. Lo
anterior sucede debido a que hay sitios de unin de H+,
en primer lugar el His146 en la cadena , que tienen una
afinidad ms alta de unin del H+ en la desoxihemo-
globina que en la oxihemoglobina. Un aumento del CO2
determina un incremento de H+ debido a la accin de
la enzima anhidrasa carbnica, encargada de catalizar la
reaccin:
CO2 + H2O HCO3 + H+
De manera adicional, el CO2 puede reaccionar con los
grupos amino primarios de la cadena polipeptdica para
formar un carbamato con carga negativa. Otra vez, este
cambio de carga de positiva a negativa favorece la con-
formacin de la desoxihemoglobina. En su regreso en
la sangre hacia los pulmones, las concentraciones de
H+ y CO2 son relativamente ms bajas y la del O2 ms
alta, de manera que el proceso se invierte y el O2 se une
a la hemoglobina. De este modo, puede verse que la
hemoglobina no slo transporta O2 sino que tambin
lo hace con el CO2 en su regreso a los pulmones, donde
es eliminado.
El 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) es una molcula de fosfato
orgnico muy aninica (figura B3-4) que est presente
en los eritrocitos junto a la hemoglobina. Esta molcula
Mioglobina
Hemoglobina
pO2 en los
pulmones
40 60 80 100
40 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS
Figura B3-4. 2,3-bisfosfoglicerato.
promueve la liberacin de O2 de la hemoglobina al
reducir la afinidad de la protena por este gas. El BPG
se une en la pequea cavidad del centro de las cuatro
subunidades. En la oxihemoglobina, dicha cavidad es
demasiado pequea para alojar el BPG, en tanto que en la
desoxihemoglobina es lo suficientemente grande para
dar acomodo a una molcula de BPG. Cuando se une a
la cavidad central de la desoxihemoglobina forma enla-
ces inicos con las cadenas laterales de aminocidos
cargados positivamente de las subunidades , lo que
estabiliza la estructura cuaternaria. El H+, CO2 y BPG son
todos efectores alostricos (seccin D5) ya que favore-
cen la conformacin de la desoxihemoglobina y en con-
secuencia promueven la liberacin de O2. Como estas
tres molculas actan en sitios diferentes, sus efectos
se suman.
Hemoglobina fetal
En el feto hay una clase diferente de hemoglobina, la
hemoglobina F (HbF), la cual consta de dos cadenas 
y dos cadenas (22), en contraste con la hemoglobina
del adulto (HbA, 22). En condiciones fisiolgicas, la
HbF tiene una afinidad ms alta por el O2 que la HbA,
lo que optimiza la transferencia de oxgeno desde la
circulacin materna a la fetal a travs de la placenta.
La base molecular de esta diferencia en la afinidad por
el O2 radica en que la HbF se une al BPG con menos
fuerza que la HbA. Cerca del nacimiento, la sntesis de
la cadena  se detiene y comienza la de la cadena  (la
cual est presente en la HbA).
Hemoglobinopatas
La comparacin de las secuencias primarias de las
cadenas de la hemoglobina en ms de 60 especies
diferentes revela que slo nueve residuos de la cadena
polipeptdica son invariables (es decir los mismos) en
todas las especies. Estos nueve residuos incluyen a las
histidinas proximal y distal, que son imprescindibles
para el funcionamiento correcto de la protena. Muchos
de los restantes residuos son remplazados de una espe-
cie a otra por residuos con propiedades similares (p. ej.,
la Val hidrfoba es sustituida por la Ile hidrfoba, o la
Ser polar es remplazada por la Asn polar), las llamadas
sustituciones conservadoras. En contraste, slo unos po-
cos residuos han sido sustituidos entre especies por resi-
duos muy diferentes (p. ej., una Leu hidrfoba por una
Lys con carga positiva, o un Glu con carga negativa por
una Arg con carga positiva), las llamadas sustituciones
no conservadoras, ya que este tipo de cambio podra
tener un efecto mayor en la estructura y funcin de la
protena.
Se han caracterizado varios cientos de hemoglobinas
anormales, que han dado origen a las llamadas hemo-
globinopatas. Es probable que la hemoglobinopata
mejor caracterizada sea la anemia de clulas falcifor-
mes (hemoglobina de clulas falciformes; HbS). Esta
enfermedad se caracteriza porque los eritrocitos tienen
una forma caracterstica de hoz o de luna en cuarto cre-
ciente. La base molecular de esta enfermedad radica en
el cambio de un Glu por una Val en la posicin 6 de la
cadena , lo que resulta en la sustitucin de un residuo
polar por uno hidrfobo. Esta sustitucin no conserva-
dora de la Val por el Glu adjudica a la HbS un parche
hidrfobo pegajoso en el lado externo de sus cadenas
. En la esquina entre las hlices E y F de la cadena de
la desoxi-HbS hay un sitio hidrfobo complementario
del parche pegajoso (figura B3-5). Por consiguiente, el
sitio complementario en una molcula de desoxi-HbS
puede unirse al parche pegajoso de otra molcula de
desoxi-HbS y dar origen a la formacin de largas fibras
de molculas de hemoglobina que distorsionan el eri-
trocito. La microscopia electrnica (seccin A4) ha reve-
lado que las fibras tienen un dimetro de 21.5 nm y que
consisten en una hlice de 14 hebras. Adems de la in-
teraccin crtica entre los parches pegajosos, mltiples
interacciones polares estabilizan la fibra. En la HbS, el
sitio complementario est enmascarado, de manera que
la formacin de las fibras largas slo acontece cuando
se produce una concentracin alta de la forma desoxi-
genada de la HbS.
La anemia de clulas falciformes en una enfermedad
hemoltica de transmisin gentica. Las clulas falci-
formes son ms frgiles que los eritrocitos normales, se
lisan con ms facilidad y presentan una vida media ms
corta, lo que conduce a una anemia grave. Como la ane-
mia de clulas falciformes es de transmisin gentica,
los homocigotos tiene dos copias del gen anormal y los
 B3MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA 41

Oxi-HbA Oxi-HbS O2 Desoxi-HbS

Sustitucin
de Glu por Val
O2
Parche Sitio
hidrfobo pegagoso hidrfobo
xn

Figura B3-5. Bases moleculares de la agregacin de las molculas de

desoxihemoglobina en la anemia de clulas falciformes.

heterocigotos una copia normal y una anormal. Por lo
regular, los homocigotos tienen una esperanza de vida
reducida como resultado de infecciones, insuficiencia
renal, insuficiencia cardiaca o trombosis, todas ellas
debidas a que las clulas falciformes quedan atrapadas
en los vasos sanguneos pequeos, lo que condiciona
dao tisular. En contraste, los heterocigotos no suelen
padecer sntomas ya que slo alrededor de 1% de sus
eritrocitos es falciforme, comparado con cerca de 50%
de los heterocigotos. La frecuencia del gen falciforme es
relativamente alta en ciertas partes de frica y correla-
ciona con la incidencia de paludismo. La razn de esto
es que los heterocigotos estn protegidos contra la forma
ms letal del paludismo, mientras que los homocigo-
tos normales son ms vulnerables a esta enfermedad.
Ahora puede determinarse la herencia de la hemoglo-
bina anormal mediante tcnicas con DNA recombinante
(seccin I1).
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B4Colgena
Notas clave
Funcin y diversidad Colgena es el nombre asignado a una familia con relaciones estructurales
que forma fibras insolubles fuertes. Las colgenas consisten en tres cadenas
polipeptdicas, cuya identidad y distribucin vara entre los tipos de colgena.
Los diferentes tipos de colgena se encuentran en distintas localizaciones del
cuerpo.
Biosntesis: descripcin Los polipptidos de la colgena son modificados despus de su traduccin por
hidroxilacin y glucosilacin durante su transporte a travs del retculo endo-
plsmico rugoso y el aparato de Golgi. Los tres polipptidos forman la proco-
lgena trihelicoidal, que se secreta fuera de la clula. La extensin peptdica es
removida para dar lugar a la tropocolgena, la cual se agrega en una microfibri-
lla y se entrecruza de modo covalente para formar la fibra de colgena madura.
Composicin y Una tercera parte de los residuos de aminocidos de la colgena son de
modicaciones Gly, mientras que una cuarta parte es de Pro. Los aminocidos hidroxilados
postraduccin 4-hidroxiprolina (Hyp) y 5-hidroxilisina (Hyl) se forman despus de la traduc-
cin por la accin de la hidroxilasa de prolina y la hidroxilasa de lisina. Estas
enzimas que contienen Fe2+ requieren cido ascrbico (vitamina C) para su
actividad. En el escorbuto, una enfermedad por deficiencia de vitamina C, la
colgena no se forma de manera correcta debido a la incapacidad para hidroxi-
lar a la Pro y la Lys. Los residuos Hyl suelen modificarse con carbohidratos luego
de su traduccin.
Estructura La colgena contiene una secuencia tripeptdica repetida de Gly-X-Y, donde X
suele ser la Pro y Y suele ser la Hyp. Cada polipptido de la colgena se pliega
en una hlice de 3.3 residuos por vuelta. Las tres cadenas polipeptdicas se jun-
tan para formar un cable helicoidal triple cuyas cadenas se mantienen juntas
gracias a los puentes de hidrgeno que se forman entre las cadenas. Cada tres
residuos, uno pasa a travs del centro de la triple hlice, el cual est tan abarro-
tado que slo la Gly es lo suficientemente pequea para encajar.
Secrecin y agregacin Los pptidos de extensin en el N y C terminales de las cadenas polipeptdicas
dirigen la formacin del cable helicoidal triple y evitan la agregacin prematura
de las molculas de procolgena dentro de la clula. Despus de su secrecin
fuera de la clula, los pptidos de extensin son separados por peptidasas y
las resultantes molculas de tropocolgena se disponen juntas en un orden
alternado.
Enlaces cruzados Los enlaces cruzados covalentes entre y dentro de las molculas de tropocol-
gena confieren fuerza y rigidez a la fibra de colgena. Estos enlaces cruzados se
forman entre la Lys y su derivado aldehdo alisina. sta deriva de la accin de
la oxidasa de lisilo sobre la Lys. Esta enzima contiene cobre y necesita fosfato
de piridoxal para actuar.
Formacin de hueso La hidroxiapatita (fosfato de calcio) se deposita en sitios de nucleacin entre
los extremos de las molculas de tropocolgena, como el paso inicial en la for-
macin del hueso.
Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos (H4) Direccionamiento de las
(B2) Estructura y funcin de las protenas
protenas
 B4COLGENA 43

Funcin y diversidad y un polmero de fosfato de calcio. En los tendones,

La colgena, que est presente en todos los organis-
mos multicelulares, no es una protena sino una fami-
lia de protenas con relacin estructural. Es la protena
ms abundante de los mamferos y est presente en
casi todos los rganos corporales, donde sirve para
mantener a las clulas juntas en unidades discretas.
Es asimismo el principal elemento fibroso de la piel,
huesos, tendones, cartlagos, vasos sanguneos y dien-
tes. Las diferentes protenas de colgena desempe-
an muy diferentes funciones. La estructura dura en
extremo de los huesos y los dientes contiene colgena
la colgena forma fibras tipo cuerdas de alta fuerza
tensil, mientras que en la piel forma fibras de tejido
suelto que pueden expandirse en cualquier direccin.
Los distintos tipos de colgena se caracterizan por
diferentes composiciones de polipptidos (cuadro
B4-1). Cada colgena est compuesta por tres cadenas
de polipptidos, las cuales pueden ser idnticas (como
en los tipos II y III) o pueden ser de dos clases diferentes
(tipos I, IV y V). Una sola molcula de colgena de tipo I
tiene una masa molecular de 285 kDa, un ancho de 1.5
nm y una longitud de 300 nm.

Cuadro B4- 1. Tipos de colgena.

Tipo Composicin polipeptdica Distribucin
I [1(I)]2 2(I) Piel, hueso, tendn, crnea, vasos sanguneos
II [1(II)]3 Cartlago, disco intervertebral
III [1(III)]3 Piel fetal, vasos sanguneos
IV [1(IV)]2 2(IV) Membrana basal
V [1(V)]2 2(V) Placenta, piel

Biosntesis: descripcin antes de ser secretada. En ese transcurso sufre modifi-

Como otras protenas secretadas, los ribosomas sinteti- caciones postraduccin, como la hidroxilacin y con-
zan los polipptidos de la colgena en el retculo endo- jugacin con carbohidratos a las que se somete a Pro
plsmico rugoso (RER; seccin H4). Luego, la cadena y Lys (figura B4-1). Antes de su secrecin, tres cadenas
polipeptdica pasa a travs del RER y el aparato de Golgi de polipptidos se juntan para formar una estructura

Sntesis de polipptidos

Modicaciones
postraduccin
Dentro del RET y el aparato
de Golgi del broblasto
Cable helicoidal
triple de procolgena

Secrecin

Remocin de los
pptidos de extensin

Tropocolgena
Dentro del espacio extracelular
del tejido conectivo
Agregacin dentro
de la miobrilla

Enlazamiento cruzado

Fibra de colgena

Figura B4-1. Descripcin de la biosntesis de colgena.

44 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

helicoidal triple conocida como procolgena. En ese
momento, la procolgena es secretada al espacio extra-
celular del tejido conectivo, donde peptidasas remueven
cadenas de polipptidos de extensin a nivel de los N y C
terminales (pptidos de extensin) para formar tropo-
colgena (figura B4-1). Las molculas de tropocolgena
se agregan y forman numerosos enlaces entrecruzados
para producir fibras de colgena madura (figura B4-1).
Composicin y modicaciones
postraduccin
La composicin de aminocidos de la colgena es
muy caracterstica. Cerca de una tercera parte de sus
residuos son de Gly, mientras que otra cuarta parte es
de Pro, que son proporciones significativamente ms
altas que las que se encuentran en otras protenas. Los
aminocidos hidroxilados 4-hidroxiprolina (Hyp) y
5-hidroxilisina (Hyl) (figura B4-2) se encuentran slo
en la colgena. Estos aminocidos hidroxilados se for-
man por la accin de las enzimas hidroxilasa de pro-
lina e hidroxilasa de lisina, respectivamente, sobre los
aminocidos parentales (figura B4-2). Estas enzimas
cuentan con un ion Fe2+ en su sitio activo y requieren
cido ascrbico (vitamina C) para su actividad. El cido
ascrbico acta como un antioxidante, lo que le permite
mantener al ion Fe2+ en su estado reducido. La hidroxilasa
de prolina y la hidroxilasa de lisina son dioxigenasas que
usan una molcula de O2. El cetoglutarato , un interme-
diario del ciclo del cido ctrico (seccin L1), es un sus-
trato obligatorio que se convierte en succinato durante
la reaccin (figura B4-2). Ambas enzimas hidroxilan slo
los residuos de Pro y Lys que forman parte de la cadena
polipeptdica, y por tanto slo cuando el residuo est en
el lado N terminal de la Gly. La Hyp es importante para la
estabilizacin de la estructura de la colgena mediante
la formacin de enlaces de hidrgeno (vase ms ade-
lante). En caso de deficiencia de vitamina C, la Hyp (y
la Hyl) no se sintetiza, lo que ocasiona el debilitamiento
de las fibras de colgena. Esto conduce a lesiones de la
piel, vasos sanguneos frgiles y cicatrizacin deficiente
de las heridas, que son las caractersticas del escorbuto.
La otra modificacin postraduccin que le sucede a la
colgena es la glucosilacin. En este caso, los residuos
de azcar, que por lo general se limitan a la glucosa,
galactosa y sus disacridos, estn fijos al grupo hidroxilo
de los residuos Hyl de reciente formacin, ms que en
los residuos de Asn o de Ser/Thr, como ocurre con la
glucosilacin ms extendida ligada a N u O (seccin H5).
La cantidad de carbohidrato unido a la colgena vara
de 0.4% a 12% del peso, de acuerdo con el tejido en el
que se sintetice.
Estructura
La estructura primaria de cada polipptido de la col-
gena se caracteriza por una repeticin de la secuencia
tripeptdica de Gly-X-Y, donde X suele ser, pero no de
manera exclusiva, Pro y Y es con frecuencia Hyp. Cada
una de las tres cadenas polipeptdicas de la colgena
tiene alrededor de 1 000 residuos de largo y las tres se
pliegan en una hlice que slo tiene 3.3 residuos por
vuelta, en lugar de los 3.6 residuos por vuelta de la hlice
(seccin B2). Esta estructura secundaria es exclusiva de
la colgena y con frecuencia se refiere como hlice de la
colgena. Las tres cadenas polipeptdicas yacen parale-
las y se enrollan una alrededor de la otra con una ligera
inclinacin a la derecha, retorcidas como una cuerda
para formar un cable helicoidal triple (figura B4-3).
Cada tercer residuo de cada polipptido pasa a travs

COO COO
CH2 CH2
Hidroxilasa 2 1 + CH2 + CO2
N CH CO + CH2 + O2 N CH CO
de prolina
5 3
H 2C CH2 C O H 2C CH2 C O
CH2 COO 4
C O
H OH
Prolina Cetoglutarato HIdroxiprolina Succinato

2 1
NH CH CO NH CH CO
3
CH2 CH2
4
CH2 HIdroxilasa CH2
+ Cetoglutarato + O2 de lisina
+ Succinato + CO2
5
CH2 H C OH
6
CH2 CH2
NH + 3 NH3+
Lisina HIdroxilisina

Figura B4-2. Formacin de hidroxiprolina e hidroxilisina.


del centro de la hlice triple, el cual est tan atiborrado
que slo una cadena lateral pequea como la Gly puede
encajarse. Lo anterior explica la necesidad absoluta de
Gly cada tres residuos. Los residuos de las posiciones X y
Y se localizan en el lado externo del cable helicoidal tri-
ple, donde hay espacio para las cadenas laterales abul-
tadas como la Pro y otros residuos. Las tres cadenas de
polipptidos se hallan alternadas, de modo que el resi-
duo Gly de una cadena se alinea con el residuo X de la
segunda cadena y con el residuo Y de la tercera cadena.
La hlice triple se mantiene unida a raz de una extensa
red de enlaces de hidrgeno (seccin B2), en particular
entre el grupo amino primario de la Gly de una hlice
y el grupo carboxilo primario de la Pro en la posicin X
de una de las otras hlices. Adems, los grupos hidroxi-
lo de los residuos Hyp participan en la estabilizacin de
la estructura. La relativamente inflexible Pro y la Hyp,
confieren tambin rigidez a la estructura de la colgena.
La importancia de que la Gly se encuentre cada tercer
residuo se confirma cuando una mutacin en la codi-
ficacin del DNA de la colgena tipo I lleva a incorporar
un aminocido diferente en una sola posicin de una
cadena polipeptdica de 1 000 residuos. Por ejemplo, si
una mutacin lleva a la incorporacin de una Cys en
lugar de una Gly, la hlice triple es interrumpida ya que
la cadena lateral CH2-SH de la Cys es demasiado grande
para encajar en el interior de la hlice triple. Lo anterior
conduce a una estructura desplegada en forma parcial
que es susceptible a hidroxilacin y glucosilacin exce-
siva y a que los fibroblastos no la secreten con eficien-
cia. Esto, a su vez, resulta en una estructura de col-
gena defectuosa que puede originar huesos frgiles y
Tres cadenas polipeptdicas
plegadas juntas para formar
un cable helicoidal triple
Figura B4-3. Disposicin de las tres cadenas de polipptidos en la colgena.
B4COLGENA 45
deformidades esquelticas. Se conoce el espectro com-
pleto de tales mutaciones, que causan la produccin
de colgena defectuosa y resulta en una osteognesis
imperfecta (huesos frgiles).
Secrecin y agregacin
Cuando los polipptidos de colgena se sintetizan, tie-
nen residuos de aminocidos adicionales (100 a 300) en
sus N y C terminales que no estn en la fibra de colgena
madura (figura B4-4). Estos pptidos de extensin con-
tienen con frecuencia residuos de Cys que por lo general
no existen en la cadena polipeptdica restante. Los pp-
tidos de extensin contribuyen a alinear correctamente
los tres polipptidos ya que estn juntos en la hlice
triple, un proceso al que puede ayudar la formacin de
enlaces de disulfuro entre los pptidos de extensin y
las vecinas cadenas de polipptidos. Los pptidos de ex-
tensin tambin evitan la agregacin prematura de las
hlices triples de la procolgena dentro de la clula.
Cuando se secretan fuera del fibroblasto, la accin de
las peptidasas extracelulares elimina los pptidos de ex-
tensin (figura B4-4). Las molculas de tropocolgena
resultantes se agregan entonces juntas en una disposi-
cin alternada de cabeza a cola en la fibra de colgena
(figura B4-4).
Enlaces cruzados covalentes
Entre y dentro de las molculas de tropocolgena, los
enlaces cruzados covalentes imparten fuerza y rigidez
a las fibras de colgena. Como casi no hay residuos de
Cys en la colgena madura final, estos enlaces cruzados
Una cadena polipeptdica
plegada en una hlice con
3.3 residuos por vuelta
46 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

Polipptido
Pptidos de
Pptidos de extensin
extensin
Direccin del
plegamiento

Cable helicoidal
Peptidasas de triple de procolgena
secrecin

Tropocolgena

Sitios de nucleacin
para la formacin de hueso

Enlaces cruzados
Fibra de
colgena

Tropocolgena 67 nm 35 nm

Figura B4-4. Funcin de los pptidos de extensin en el plegamiento y secrecin

de la procolgena. Cuando son secretados fuera de la clula, los pptidos de
extensin son removidos y las molculas de tropocolgena resultantes agregadas y
entrecruzadas para formar una bra.

covalentes no son enlaces de disulfuro, como sucede por
lo regular en las protenas, sino que son enlaces cruza-
dos singulares que se forman entre la Lys y su derivado
aldehdo alisina. Los residuos de alisina se forman por
la accin de la monooxigenasa lisiloxidasa sobre la Lys
(figura B4-5). Para su actividad, esta enzima que con-
tiene cobre requiere la coenzima fosfato de piridoxal,
que es un derivado de la vitamina B6 (seccin M2). A
continuacin, el grupo aldehdo de la alisina reacciona
de manera espontnea con el grupo amino de la cadena
lateral de la Lys o con otro residuo de alisina de otra
cadena polipeptdica para formar enlaces covalentes
entre las cadenas.
La importancia de los enlaces cruzados en el funciona-
miento normal de la colgena lo demuestra la enferme-
dad latirismo. Esta enfermedad se presenta en seres
humanos y animales que ingieren semillas de chcharos
dulces (Lathyrus odoratus), las cuales contienen la sus-
tancia qumica aminopropionitrilo . Este compuesto
inhibe en forma irreversible a la lisiloxidasa y as evita
los enlaces cruzados de las molculas de tropocolgena,
de lo cual resultan anormalidades serias de los huesos,
articulaciones y grandes vasos sanguneos debidas a la
colgena frgil. Otra enfermedad por deficiencia de
la colgena, el sndrome de Ehlers-Danlos tipo V, se
debe a la deficiencia de lisiloxidasa y se manifiesta por
articulaciones hipermviles e hiperextensibilidad de
la piel.
Formacin de hueso
La disposicin alternada regular de los espacios entre
los extremos de las molculas de tropocolgena en una
fibra de colgena (figura B4-4) corresponde a los sitios
de nucleacin para el depsito de una forma del fosfa-
to de calcio, la hidroxiapatita, en la formacin del hue-
so. Se aade ms hidroxiapatita hasta que los sitios de
nucleacin crecen y se articulan con otros para formar
la estructura sea madura.

NH CH CO NH CH CO
Lisilo +
(CH2)4 + O2 (CH2)3 + NH4 + H 2O
+ oxidasa
NH2 C
Lisina O O
Alisina

Figura B4-5. Conversin de la lisina en alisina por la lisiloxidasa.

SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B5Motores moleculares
Notas clave
Motores moleculares Los motores moleculares o protenas motoras se unen a los filamentos del
citoesqueleto y usan energa derivada de la hidrlisis del ATP para moverse a lo
largo de ellos. La regin de la cabeza o dominio motor hidroliza el ATP y se une
a los filamentos, en tanto que la regin de la cola se une a la carga. Los tipos
principales de protenas motoras son las miosinas, las cinesinas y las dinenas.
Estructura del msculo Cada clula de los msculos estriados de los vertebrados contiene dentro de su
sarcoplasma muchas miofibrillas paralelas, las cuales estn elaboradas de
unidades de sarcmeros repetidos. Dentro de cada sarcmero, en forma alter-
nante, estn las bandas oscuras A y las bandas claras I, en medio de las cuales
estn la zona H y la lnea Z, respectivamente. Una miofibrilla contiene dos tipos
de filamentos: los gruesos, que son de miosina y los delgados, que son de actina,
tropomiosina y troponina. Cuando el msculo se contrae, los filamentos grue-
sos y delgados se deslizan unos sobre otros y acortan la longitud del sarcmero.
Miosina La protena miosina consiste en dos cadenas de polipptidos pesadas y en dos
pares de cadenas livianas ordenadas como una regin globular de cabeza doble
fija a una espiral enrollada helicoidal de hebra doble. Las molculas de miosina
se ensamblan en filamentos, hidrolizan el ATP y unen actina.
Actina El constituyente principal de los filamentos delgados es la actina, que puede
existir como un monmero globular de actina G o como un polmero fibroso
de actina F. Los filamentos de actina estn conectados a los filamentos gruesos
mediante puentes cruzados formados por las cabezas S1 de la miosina.
Generacin de la fuerza La formacin y disociacin cclicas de complejos entre los filamentos de actina
en el msculo y las cabezas S1 de la miosina lleva a la contraccin del msculo. Al unirse a la
actina, la miosina libera sus enlaces Pi y ADP. Esto provoca un cambio conforma-
cional en la protena, que mueve el filamento de actina a lo largo del filamento
grueso. En ese momento, el ATP se une a la miosina y desplaza a la actina. La
hidrlisis del ATP hace regresar la cabeza S1 a su conformacin original.
Troponina y tropomiosina La tropomiosina yace a lo largo del filamento delgado y evita la asociacin de
la miosina con la actina en el estado de reposo. En respuesta a la estimulacin
nerviosa, desde el retculo sarcoplsmico, se liberan iones de Ca2+ que se unen a
la subunidad TnC de la troponina y causan un cambio de conformacin en esta
protena. Mediante un mecanismo alostrico, este movimiento se transmite a
travs de las subunidades TnI y TnT de la troponina a la tropomiosina, lo que
determina que esta ltima se mueva de su sitio y permita la asociacin de la
actina con la miosina.
Cinesinas Las cinesinas se mueven a lo largo de los microtbulos y participan en el movi-
miento de las vesculas y organelos alrededor de la clula en la segregacin
de los cromosomas. Una molcula de cinesina tiene dos cabezas, ambas con
actividad de ATP-asa, las cuales se unen de manera alternativa al microtbulo y
mueven de ese modo a la cinesina y su carga a lo largo de ste.
48 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

Dinena Los cilios eucariticos son protrusiones similares a cabellos en la superficie

de las clulas que consisten de forma predominante en microtbulos. En un
cilio, las fibras de los microtbulos se mantienen unidas en una disposicin
caracterstica de 9 + 2 dentro del axonema. Las parejas de nueve microtbulos
ms externos se ven como una figura en ocho, con un crculo ms pequeo, la
subfibra A y un crculo ms grande, la subfibra B. La dinena es una protena
muy grande que forma puentes cruzados con las subfibras B y posee activi-
dad de ATP-asa. Dos brazos de la dinena se proyectan desde la subfibra A, la
cual, tras la hidrlisis del ATP, se mueve a lo largo de las subfibras B adyacentes.
Debido a que nexina extensible se une entre las parejas, este movimiento des-
lizante se convierte en una flexin local del cilio.
Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas

Motores moleculares la zona H, es menos densa que el resto de la banda. En

Los motores moleculares o protenas motoras se unen
a un filamento del citoesqueleto y utilizan la energa
derivada de ciclos repetidos de hidrlisis del ATP para
moverse a lo largo de ste; por tanto, convierten la ener-
ga qumica en movimiento. Existen muchos tipos dife-
rentes de protenas motoras en las clulas eucariotas que
difieren en el tipo de filamento al que se unen, la direc-
cin en la cual se mueven a lo largo del filamento y la
carga que transportan. Las protenas motoras se asocian
con los filamentos por medio de la regin de la cabeza
o dominio motor, que es el que se une e hidroliza el
ATP, mientras que la regin de la cola se une a la carga
que se transporta. Hay tres tipos de protenas motoras:
las miosinas, que se unen a los filamentos de actina e
intervienen en la contraccin muscular; las cinesinas,
que se unen a los microtbulos y participan en el movi-
miento de vesculas y organelos alrededor de la clula
y en la segregacin de los cromosomas y las dinenas,
que tambin se unen a los microtbulos y proveen la
energa para el movimiento de cilios y flagelos de las
clulas eucariotas.
Estructura del msculo
El proceso generador de fuerza que mejor se entiende en
los sistemas biolgicos es el de la contraccin del mscu-
lo estriado de los vertebrados, as llamado debido a que
se ve estriado (rayado) con el microscopio de contraste
de fase (seccin A4). Este msculo se compone de nume-
rosas clulas multinucleadas a las que rodea una mem-
brana plasmtica que se excita con estmulos elctricos.
Cada clula contiene dentro de su sarcoplasma (citosol)
muchas miofibrillas paralelas, cada una de un dimetro
aproximado de 1 nm. El sarcoplasma tambin es rico en
ATP, fosfato de creatina (seccin M3) y enzimas glucol-
ticas (seccin J3). La unidad funcional de la miofibrilla
es el sarcmero, el cual se repite cada 2.3 m a lo largo
del eje de la fibrilla (figura B5-1a). Una banda oscura A
y una banda clara I se alternan de manera regular a lo
largo de la miofibrilla. La regin central de la banda A,
medio de la banda I est la lnea Z, que es una zona muy
densa y estrecha. Un corte transversal de una miofibrilla
revela que hay dos tipos de filamentos que interactan.
Los filamentos gruesos, cuyo dimetro es cercano a 15
nm, se encuentran slo en la banda A (figura B5-1a) y
consisten de manera primaria en la protena miosina,
mientras que los filamentos delgados, cuyo dimetro
se acerca a los 9 nm, contienen actina, tropomiosina y
el complejo troponina.
Cuando el msculo se contrae, puede acortarse como
una tercera parte de su longitud original. Informacin
obtenida por cristalografa de rayos X (seccin B2) y
estudios microscpicos de luz y electrnicos (seccin
A4) llevan a la propuesta del modelo de filamento desli-
zante para explicar la contraccin muscular. Se observ
que los filamentos grueso y delgado no cambian de lon-
gitud durante la contraccin, pero en cambio se vio que
la longitud del sarcmero disminuye a medida que los
filamentos grueso y delgado se deslizan y pasan uno
sobre el otro (figura B5-1). Por consiguiente, conforme el
msculo se contrae, los tamaos de la zona H y la banda
I disminuyen. La fuerza de la contraccin es generada
por un proceso que mueve activamente un tipo de fila-
mento ms all del filamento ms cercano del otro tipo.
Miosina
La miosina es una protena grande (520 kDa) consistente
en seis cadenas de polipptidos: dos cadenas pesadas
(220 kDa cada una) y dos pares de cadenas livianas (20
kDa cada una). Esta gran protena desempea tres acti-
vidades biolgicas:
1. Las molculas de miosina se ensamblan de forma
espontnea en filamentos en soluciones de poten-
cia inica y pH fisiolgicos.
2. La miosina es una ATP-asa que hidroliza el ATP y pro-
duce ADP y Pi.
3. La miosina une la forma polimerizada de la actina.
 B5MOTORES MOLECULARES 49

a) Banda A Banda I Banda A

Zona H Zona H
Z Z Z

Sarcmero
Filamentos delgados Filamentos gruesos

b)

Sarcmero

Figura B5-1. Diagrama esquemtico donde se muestra el aspecto del msculo

estriado de los vertebrados como se lo ve con el microscopio de contraste de fase:
a) relajado; b) contrado.

La miosina consiste en una regin globular de doble
cabeza unida a un largo bastn. El bastn es una espi-
ral enrollada helicoidal  de doble hebra formada por
las dos cadenas pesadas, en tanto que las cabezas son
tambin parte de cada cadena pesada con las cadenas
livianas unidas (figura B5-2a). La protelisis limitada de
la miosina con la proteasa tripsina produce su disec-
cin en dos fragmentos: meromiosina ligera (LMM) y
meromiosina pesada (HMM) (figura B5-2b). Estudios
funcionales de estos dos fragmentos revelan que la LMM
puede todava formar filamentos pero pierde su activi-
dad de ATP-asa, mientras que la HMM es incapaz de for-
mar filamentos pero conserva su actividad de ATP-asa y
puede unirse a la actina. De manera adicional, la pro-
teasa papana (figura B5-2b) puede dividir la HMM en dos
subfragmentos globulares idnticos (S1) y un subfrag-
mento en forma de bastn (S2). El subfragmento S1,
cuya estructura se determin mediante cristalografa
de rayos X, contiene un sitio ATP-asa, un sitio de unin de
actina y dos sitios de unin de cadenas ligeras. La esci-
sin proteoltica de la miosina tiene lugar en regiones
bisagra flexibles de la protena que separan el dominio
globular S1 de los dominios tipo bastn S2 y LMM (figura
B5-2c). Estas regiones bisagra juegan un papel crucial en
la contraccin del msculo.
Actina
La actina, el constituyente principal de los filamentos
delgados, existe en dos formas. En soluciones de baja
potencia inica, existe como un monmero de 42 kDa
denominado actina G debido a su forma globular. A
medida que la potencia inica de la solucin aumenta
hasta alcanzar la del nivel fisiolgico, la actina G se poli-
meriza en una forma fibrosa, la actina F, que recuerda a
los filamentos delgados que se encuentran en el mscu-
lo. Aunque la actina, como la miosina, es una ATP-asa,
la hidrlisis del ATP no forma parte del ciclo de contrac-
cin-relajacin del msculo sino en el del ensamble y
desensamble del filamento de actina.
En los filamentos gruesos emergen puentes cruzados
desde el eje del filamento en una disposicin helicoidal
regular hacia cualquier extremo, donde hay una regin
desnuda en el medio que carece de puentes cruzados
(figura B5-3). En el msculo sin ATP, los puentes cruza-
dos de la miosina interactan con los filamentos de actina
circundantes. La direccin absoluta de las molculas de
actina y miosina invierte la mitad entre las lneas Z. Por
tanto, a medida que los dos filamentos delgados que se
unen a los puentes cruzados en cualquier extremo de
un filamento grueso se mueven uno hacia el otro desli-
zndose sobre el filamento grueso, la distancia entre las
lneas Z se acorta y el msculo se contrae (figura B5-3).
Generacin de fuerza en el msculo
La formacin y disociacin cclicas de puentes cruzados
entre la actina y las cabezas S1 de la miosina hace con-
traer el msculo por los cambios conformacionales que
50 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) Cadena pesada
Cadenas livianas
COO
COO

Espiral enrollada helicoidal

Regin de la
cabeza globular

b)
c) S1
COO

S1 S2
Tripsina

Bisagras LMM
COO
HMM LMM

Papana

S1
S2
S1
Figura B5-2. Estructura de la miosina donde se puede ver a) la asociacin de
las dos cadenas pesadas y los dos pares de cadenas ligeras; b) la fragmentacin
proteoltica de la miosina, y c) las regiones bisagra entre los dominios.

ocurren en la cabeza S1 de la miosina. En el msculo en
reposo, las cabezas S1 son incapaces de interactuar con
la actina en los filamentos delgados debido a la interfe-
rencia estrica de la protena reguladora tropomiosina
(figura B5-4a). La miosina tiene enlaces con el ADP y el Pi.
Cuando el msculo recibe un estmulo, la tropomiosina
se mueve hacia fuera y permite que las cabezas S1 se
proyecten fuera del filamento grueso para fijarse en la
actina en el filamento delgado (figura B5-4b). Cuando
se produce la unin de la miosina-ADP-Pi a la actina, pri-
mero se libera el Pi y despus el ADP. Ni bien el ADP se
libera, la cabeza S1 sufre un cambio conformacional en
la regin en bisagra situada entre los dominios S1 y S2
que modifica su orientacin relativa con la molcula de
actina en el filamento delgado (figura B5-4c). ste cons-
tituye el golpe de poder de la contraccin muscular y
resulta en el movimiento del filamento delgado en una
distancia de alrededor de 10 nm en relacin con el fila-
mento grueso, hacia el centro del sarcmero. Entonces
el ATP se une a la cabeza S1, lo que provoca la rpida
liberacin de la actina [es decir, la disociacin de los
ligamentos delgado y grueso (figura B5-4d)]. Luego el
ATP sufre una hidrlisis parcial por la cabeza S1 libre
que lo convierte en ADP y Pi y la cabeza S1 recupera su

Filamentos de actina Filamento de miosina

Lnea Z Grupos cabeza Lnea Z

de la miosina

Figura B5-3. Diagrama esquemtico para mostrar la interaccin de los lamentos

gruesos de miosina y los lamentos delgados de actina durante la contraccin del
msculo esqueltico.
 B5MOTORES MOLECULARES 51

conformacin original lista para otra ronda de fijacin
(figura B5-4e), cambio conformacional y liberacin.
Troponina y tropomiosina
La troponina y la tropomiosina median la regulacin de
la contraccin muscular en respuesta al Ca2+. Estas dos
protenas estn presentes en el filamento delgado, junto
a la actina y constituyen alrededor de una tercera parte
de la masa de ste. La tropomiosina es una protena
elongada de 70 kDa que forma un bastn helicoidal de
dos hebras, el cual yace casi paralelo al eje mayor del
filamento delgado. La troponina es un complejo de tres
cadenas de polipptidos: TnC (18 kDa), el cual se une
al Ca2+; TnI (24 kDa), el que se une a la actina y TnT
(37 kDa), el cual se une a la tropomiosina. Cuando un
estmulo nervioso estimula el msculo, el retculo sar-
coplsmico libera iones Ca2+ (una forma especializada
de ER que se encuentra en las clulas musculares; sec-
cin A2) en el citoplasma, lo que eleva la concentracin
citoplsmica del catin con respecto a la que muestra en
reposo, que es menor de 1 M a casi 10 M. El Ca2+ se
une a sitios del TnC, lo que provoca un cambio confor-
macional de este polipptido que se transmite a travs
de los otros componentes del complejo de la troponina
a la tropomiosina. A consecuencia de lo anterior, la tro-
pomiosina se mueve hacia fuera, lo que permite que la
cabeza S1 de la miosina interacte con la actina e ini-
cie un ciclo de contraccin. Por consiguiente, el Ca2+
controla la contraccin muscular por un mecanismo
alostrico (seccin D5) que implica a la troponina, la
tropomiosina, la actina y la miosina.
Cinesinas
Las cinesinas se mueven a lo largo de los microtbu-
los formados por la protena tubulina (seccin A2) y
estn relacionadas con el movimiento de las vesculas
y organelos alrededor de la clula y en la segregacin
de los cromosomas. Una molcula de cinesina tiene

Filamento delgado
a)
Pi
S1
S2 Miosina
ADP

Filamento grueso
La jacin
libera Pi
b)

Actina
Miosina
ADP

El golpe de poder
libera ADP
10 nm
c)

Miosinaactina

La unin del ATP

libera la actina
d)

MiosinaATP

Hidrlisis del ATP

e)
Pi
Miosina
ADP

Figura B5-4. Mecanismo de la generacin de fuerza en el msculo a medida que el

lamento grueso de miosina interacta con el lamento delgado de actina.
52 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS
dos cabezas, las cuales operan en tndem: una se une
al microtbulo y luego lo hace la otra. De este modo, la
molcula de cinesina camina a lo largo del microt-
bulo de una manera muy procesual. En contraste con la
miosina, en que la unin con el ATP promueve la diso-
ciacin de la actina, la adicin de ATP incrementa con
fuerza la afinidad de la cinesina por los microtbulos. El
ciclo comienza con ambas cabezas de una molcula de
cinesina en la forma enlazada al ADP. Una de las cabezas
se une al microtbulo y libera su ADP, que es rempla-
zado por ATP. La unin del ATP provoca un cambio con-
formacional que bloquea la cabeza en el microtbulo
y atrae el enlazador de las dos cabezas hacia adelante
y de esa manera lanza la segunda cabeza a lo largo del
microtbulo. La hidrlisis del ATP tiene lugar en la pri-
mera cabeza mientras la segunda cabeza interacta
con el microtbulo. El intercambio de ATP por ADP en la
segunda cabeza atrae la primera cabeza de la molcula
de cinesina hacia adelante, lo que la hace mover a lo
largo del microtbulo en una forma escalonada. Luego
el ciclo se repite para mover la molcula de cinesina y
su carga enlazada a lo largo del microtbulo.
Dinena
Las proyecciones similares a cabellos, o cilios, de la
superficie de ciertas clulas eucariotas, como las que
revisten las vas respiratorias, consisten sobre todo en
microtbulos (seccin A2). Los cilios intervienen en el
movimiento de las corrientes de lquidos sobre la super-
ficie de las clulas. Clulas libres como los protozoarios
y los espermatozoides de varias especies pueden ser
Subbra A
Subbra B
Nexina
Brazo de
dinena
interno
Pareja
externa de
microtbulos
Figura B5-5. Diagrama de un corte transversal de un cilio.
impulsados por cilios o un flagelo (seccin A1). En las
clulas eucariotas, los cilios difieren de los flagelos slo
en que son mucho ms largos. Todos los cilios y flage-
los eucariticos presentan el mismo diseo bsico: un
haz de fibras denominado axonema rodeado por una
membrana que es continua con la membrana plasm-
tica (figura B5-5). En un axonema, las fibras de microt-
bulos estn en una disposicin caracterstica de 9 + 2,
con un grupo perifrico de nueve pares de microtbulos
rodeando dos microtbulos simples (figura B5-5). Cada
una de las nueve parejas externas adquiere un aspecto
parecido a un 8, cuyo crculo ms pequeo se llama
subfibra A y el crculo mayor, subfibra B. La subfibra A
se une a una vaina central por medio de rayos radiales,
mientras las parejas de microtbulos vecinas se mantie-
nen juntas por enlaces de nexina. Dos brazos de dinena
emergen de cada subfibra A, con todos los brazos de un
cilio apuntando en la misma direccin (figura B5-5).
La dinena es una protena muy grande (1 000 a 2 000
kDa) que consiste en una, dos o tres cabezas segn cul
sea la fuente. Las cabezas de la dinena forman puen-
tes cruzados con las subfibras B y poseen actividad de
ATP-asa. La unin del ATP a la dinena determina que se
disocie de la subfibra B. Durante la hidrlisis del ATP y
su conversin en ADP y Pi, la dinena vuelve a unirse con
la subfibra B con la consecuente liberacin de Pi y ADP.
Este ciclo de la ATP-asa produce el movimiento del cilio
conforme las parejas externas del axonema se deslizan
una sobre la otra. Los puentes cruzados de la dinena
generan la fuerza entre las parejas adyacentes. Por con-
siguiente, los brazos de la dinena sobre la subfibra A de
Membrana
plasmtica
Rayo
radial
Vaina
central
Brazo de
dinena
externo
Microtbulo
solitario central

una pareja recorren a lo largo la subfibra B de la pareja
adyacente. A diferencia del msculo, donde los filamen-
tos de actina y miosina se deslizan unos sobre otros,
en un cilio, los rayos radiales resisten el movimiento
deslizante, el cual es convertido en una flexin local.
La muy extensible protena nexina mantiene las parejas
adyacentes juntas durante este proceso.
Un defecto o ausencia de cualquiera de las protenas
del axonema (p. ej., dinena, nexina) condiciona cilios
B5MOTORES MOLECULARES 53
inmviles, el llamado sndrome de cilios inmviles.
Los pacientes que sufren esta enfermedad tienen tras-
tornos pulmonares crnicos debido a que los cilios de
las vas respiratorias son incapaces de barrer las bacte-
rias y otras partculas extraas. De manera adicional, los
varones con este defecto gentico son infrtiles ya que
sus espermatozoides son incapaces de moverse debido
a la inactividad de los flagelos.
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B6Anticuerpos
Notas clave
Sistema inmunitario: El sistema inmunitario tiene dos funciones principales: reconocer los agentes
descripcin patgenos invasores y desencadenar respuestas que los destruyan. El sistema
inmunitario humoral recae en los linfocitos B, que producen anticuerpos que se
unen a los antgenos extraos. El sistema inmunitario celular utiliza linfocitos
T asesinos que reconocen y destruyen a las clulas invasoras de modo directo.
La respuesta inmunitaria primaria se produce durante el contacto inicial con
un antgeno extrao y resulta en la produccin de inmunoglobulina M (IgM) y,
a continuacin, de inmunoglobulina G (IgG). Si se vuelve a encontrar el mismo
antgeno, la memoria inmunolgica conduce a respuestas inmunitarias secun-
darias que producen un incremento mucho ms rpido y grande de la produc-
cin de IgG especfica.
Estructura del anticuerpo Cada molcula de IgG consiste en cuatro cadenas de polipptidos (dos cadenas
ligeras idnticas y dos cadenas pesadas idnticas unidas por enlaces disulfuro) y
tiene dos sitios de unin de antgenos (es decir que es divalente). Cada cadena
ligera y cada cadena pesada consta de una regin variable y una regin cons-
tante. Cada cadena ligera se pliega en dos dominios, uno para la regin varia-
ble y otro para la regin constante. Cada cadena pesada de la IgG se pliega en
cuatro dominios, uno para la regin variable y tres para la regin constante. La
papana digiere a la IgG y la convierte en dos fragmentos Fab (cada uno de los
cuales tiene un sitio de unin de antgeno, lo que significa que es monovalente)
y un fragmento Fc. La pepsina digiere a la IgG y libera un fragmento F(ab)2 que
cuenta con dos sitios de unin de antgeno.
Cinco clases de Las inmunoglobulinas humanas existentes son las clases IgA, IgD, IgE, IgG
inmunoglobulinas e IgM, las cuales contienen cadenas pesadas , , ,  y , respectivamente. La
IgM es un pentmero que se une a los microorganismos invasores y activa el
complemento para matar las clulas y fagocitarlas. La IgG es el principal anti-
cuerpo que se encuentra en la sangre despus de la estimulacin antignica
y tambin encierra la capacidad de cruzar la placenta. La IgA acta en par-
ticular en las secreciones corporales. La IgE provee inmunidad contra algunos
parsitos, pero es asimismo la causa de los sntomas clnicos de las reacciones
alrgicas. La funcin exacta de la IgD se desconoce.
Anticuerpos policonales Una preparacin de molculas de anticuerpos que se originan de numerosas
clonas de clulas diferentes se llama anticuerpo policlonal. Consiste en una
mezcla de molculas de anticuerpos que se unen a diferentes partes (eptopos)
del antgeno con diferentes afinidades de unin.
Anticuerpos El anticuerpo monoclonal es el anticuerpo producido por una sola clona de
monoconales clulas; todas las molculas de anticuerpos son idnticas y se unen al mismo
sitio antignico con idnticas afinidades de unin.
Sntesis de anticuerpos No existe un gen de anticuerpos completo en las clulas de la lnea germinal.
Los genes de las cadenas livianas y pesadas se ensamblan por recombinacin
somtica durante la maduracin del linfocito B. Un linfocito B puede cambiar
la clase de anticuerpo que expresa mientras mantiene la misma secuencia de
genes que codifica para la regin variable de la cadena pesada pero si la une a
un nuevo segmento del gen C. La nueva cadena pesada tiene una regin cons-
tante diferente, pero la misma especificidad de unin de antgeno de la cadena
pesada previa.

Temas relacionados
Sistema inmunitario: descripcin
Hay dos funciones vitales del sistema inmunitario:
reconocimiento de un agente patgeno invasor (bacte-
ria, hongos, protozoarios y virus causantes de enferme-
dad) como diferente de los componentes normales del
cuerpo (y en consecuencia tratado como extrao) y en
consecuencia el desencadenamiento de mecanismos
que lleven a la destruccin del invasor, como la activa-
cin del complemento (vase ms adelante) y de clulas
fagocitarias que engullan y digieran el microorganismo
invasor (seccin E4). Las clulas encargadas de la inmu-
nidad de los vertebrados son los glbulos blancos llama-
dos linfocitos, los cuales se originan en clulas precur-
soras (madre) de la mdula sea. El sistema inmunitario
tiene dos partes principales, las cuales interactan para
proporcionar proteccin total al animal:
z La respuesta inmunitaria humoral (humor es un tr-
mino anticuado que significa fluido) depende de la
produccin de protenas solubles llamadas anticuer-
pos (o inmunoglobulinas) por los linfocitos B (clu-
las B), as llamados porque las clulas maduran en la
mdula sea (del ingls bone, que significa hueso).
z La respuesta inmunitaria celular es mediada por los
linfocitos T (clulas T), as llamados porque su madu-
racin a partir de las clulas madre tiene lugar en el
timo. Los linfocitos T intactos son responsables del
reconocimiento y muerte de los invasores extraos.
Tanto en la inmunidad celular como en la humoral,
el reconocimiento de los invasores extraos depende
del reconocimiento de macromolculas extraas (pro-
Log10 del ttulo de anticuerpos
Figura B6-1. Respuestas inmunitarias primaria y secundaria a la inyeccin
de un antgeno.
B6ANTICUERPOS 55
(A4) Imgenes celulares (C1) Purificacin de las protenas
(B2) Estructura y funcin de las (C4) Inmunodeteccin
protenas
tenas, carbohidratos, cidos nucleicos); estos compo-
nentes extraos se denominan antgenos.
Respuestas inmunitarias primaria
y secundaria
La presencia de un antgeno extrao estimula la pro-
duccin de un anticuerpo especfico en la corriente san-
gunea, el cual reconocer y se unir estrechamente al
antgeno. Despus de la inyeccin de un antgeno, las
primeras molculas de anticuerpos que se producen son
de la clase de inmunoglobulinas M (molculas IgM). Sin
embargo, alrededor de diez das despus de la inyeccin
del antgeno, la cantidad de IgM en la corriente sangu-
nea declina (el ttulo de anticuerpos) y se produce el
aumento concurrente de otra clase de anticuerpos lla-
mada inmunoglobulina G (IgG) (figura B6-1). A sta se
le llama respuesta inmunitaria primaria.
Una de las caractersticas ms importantes del sistema
inmunitario es que, cuando un animal tropieza con un
agente patgeno en particular, el sistema le confiere
proteccin contra futuras infecciones por el mismo.
Esta memoria inmunitaria significa que, si el mismo
agente patgeno o antgeno se encuentra por segunda
vez, quiz incluso dcadas despus del primer encuen-
tro, el sistema reacciona mucho ms rpido y de manera
ms drstica y produce una gran cantidad de IgG espe-
cfica para contrarrestar al antgeno. sta es la respuesta
inmunitaria secundaria (figura B6-1), que es mediada
por clulas T de memoria y clulas B de memoria lon-
gevas.
Primera Segunda lgG
inyeccin inyeccin
de antgeno de antgeno
lgM
0 1 2 3 4 5 6 7
Semanas despus de la inyeccin inicial de antgeno
56 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

Estructura del anticuerpo de inmunoglobulina, las partes hipervariables de las

Cadenas ligera y pesada
Cada molcula de IgG tiene forma de Y y consiste en
cuatro cadenas de polipptidos unidas por enlaces
disulfuro, de las cuales dos copias idnticas son cade-
nas ligeras (L) (25 kDa) y otras dos copias idnticas son
cadenas pesadas (H) (50 kDa) (figura B6-2a). Los extre-
mos terminales N de una cadena pesada y su cadena
ligera vecina cooperan para formar un sitio de unin
de antgeno, de manera que la molcula de IgG tiene
dos sitios de unin de antgenos, es decir que es diva-
lente. Debido a ello, una sola molcula de anticuerpo
puede unir dos molculas de antgeno y as forma enla-
ces cruzados y hace precipitar a los antgenos fuera de
la solucin.
Regiones variable y constante
La comparacin de las secuencias de aminocidos de
muchos polipptidos de las inmunoglobulinas ha mos-
trado que cada cadena ligera tiene una regin variable
en su extremo N terminal y una regin invariable o
constante en su C terminal (figura B6-2b). De manera
similar, cada cadena pesada tiene una regin N terminal
variable y una regin C terminal constante. Como son
las partes terminales N de las cadenas pesadas y ligeras
las que forman el sitio de unin de antgenos, la varia-
bilidad de las secuencias de aminocidos de esas regio-
nes explica cmo pueden formarse diferentes sitios con
especificidades diferenciadas para la unin de antge-
nos. De hecho, la variabilidad de las regiones variables
de las cadenas ligeras y pesadas se localiza sobre todo
en tres regiones hipervariables de cada cadena (figura
B6-2b). En la estructura tridimensional de la molcula
cadenas liviana y pesada se conectan en asas para for-
mar el sitio de unin de antgenos. Las partes restan-
tes de cada regin variable conservan una secuencia
razonablemente constante, por lo general no estable-
cen contacto directo con el antgeno y se denominan
regiones marco.
Dominios de anticuerpos
Cada cadena ligera consiste en dos segmentos repeti-
dos de alrededor de 110 aminocidos que se pliegan
en dos dominios tridimensionales compactos, de los
cuales uno representa la regin variable de la cadena
ligera y el otro, la regin constante. Cada cadena pesada
tambin est elaborada de unidades repetidas de alre-
dedor de 110 aminocidos de largo. Como cada cadena
pesada de la IgG tiene alrededor de 440 aminocidos
de longitud, forma cuatro dominios un dominio para
la regin variable y tres dominios para la regin cons-
tante. La similitud de las secuencias de aminocidos
entre los diferentes dominios sugiere que se originaron
por la duplicacin de genes habida durante la evolucin.
Fragmentos Fab y Fc
La papana, que es una proteasa, corta la molcula de
IgG para liberar los dos brazos de la molcula en forma
de Y, cada uno de los cuales posee un sitio de unin de
antgeno que se llama fragmento Fab (del ingls Frag-
ment antigen binding) (figura B6-3). Debido a que los
fragmentos Fab slo tienen un sitio de unin de antgeno
(es decir que son monovalentes), no pueden entrecru-
zar antgenos. El tallo liberado de la molcula en forma
de Y (que consiste en las dos partes C terminales idn-
ticas de las dos cadenas H) se denomina fragmento Fc

a)
b)
Sitio de unin Sitio de unin Sitio de unin Sitio de unin
de antgeno de antgeno de antgeno de antgeno

N Cadena N
pesada
VH
N N
VL CH
S
S

SS Variable SS
S

CL
S
S

S
S

SS SS
Cadena C C
ligera Constante
Regiones
hipervariables
C C

Figura B6-2. Estructura de una molcula de anticuerpo: a) cada molcula de

anticuerpo consiste en dos cadenas ligeras idnticas y dos cadenas pesadas
idnticas la molcula tiene dos sitios de unin de antgeno, cada uno de ellos
formado por una cadena ligera y una cadena pesada; b) las regiones N-terminal
de las cadenas ligeras y pesadas son variables en sus secuencias de aminocidos
entre los anticuerpos (regiones variables; regiones V). Los trminos genricos de
estas regiones en la cadena ligera son VI y CLy en la cadena pesada, Vh y Ch.

(as llamado porque cristaliza en seguida). Los fragmen-
tos Fc son los portadores del sitio efector que produce
la destruccin del antgeno, por ejemplo, al activar el
sistema del complemento e inducir la fagocitosis de los
agentes patgenos por otros glbulos blancos. En con-
traste con la papana, la pepsina (otra proteasa) corta la
molcula de IgG para liberar los dos brazos de sta que
todava se mantienen juntos y en consecuencia es un
fragmento que posee dos sitios de unin de antgeno
(es decir que es divalente) y todava puede formar enla-
ces cruzados con los antgenos. Este fragmento se llama
F(ab)2 (figura B6-3).
Cinco clases de inmunoglobulinas
Los seres humanos tienen cinco clases diferentes de
molculas de anticuerpos que difieren tanto en su
estructura como en su funcin. Tales molculas se deno-
minan inmunoglobulina A (IgA), IgD, IgE, IgG e IgM y
cada una tiene su propio tipo de cadena pesada: , , ,
y , respectivamente. Por consiguiente, las molculas
de IgA tienen dos cadenas pesadas idnticas, las mol-
culas de IgD tienen dos cadenas pesadas idnticas y
as sucesivamente. La clase de anticuerpos humanos IgG
se subdivide en cuatro subclases de IgG: IgG1, IgG2, IgG3
e IgG4, cuyas cadenas pesadas son 1, 2, 3 y 4, respec-
tivamente.
Papana
S
SS
S
SS
Pepsina
Papana
Dos
fragmentos de Fab
SS SS
SS
SS
Un fragmento Fc
Figura B6-3. La digestin de una molcula de anticuerpo por la papana produjo
dos fragmentos Fab monovalentes y un fragmento Fc, en tanto que la digestin por
la pepsina produjo un fragmento F(ab)2 divalente.
B6ANTICUERPOS 57
Las diferentes cadenas pesadas confieren distintas pro-
piedades y funciones a cada una de las clases de inmu-
noglobulinas.
z La IgM tiene cadenas pesadas y existe como un
pentmero en combinacin con otro polipptido lla-
mado cadena J, el cual se encarga de iniciar la polime-
rizacin para formar la estructura pentamrica. Con
su gran nmero de sitios de unin de antgeno, cada
molcula de IgM se une de manera muy estrecha a
cualquier agente patgeno que tiene mltiples copias
del mismo antgeno en su superficie. La unin induce
a la regin Fc a activar la va del complemento, el cual
acaba por causar la muerte del agente patgeno. La
IgM tambin activa a los macrfagos para que fago-
citen a los agentes patgenos. No es de sorprender
en virtud de sus funciones, que la IgM sea el primer
anticuerpo producido cuando un animal responde a
un nuevo antgeno (figura B6-1).
z La IgG es la principal inmunoglobulina en la corriente
sangunea al final de la respuesta inmunitaria prima-
ria y en particular durante la respuesta inmunitaria
secundaria (figura B6-1). Como la IgM, puede activar
el complemento y desencadenar la respuesta de los
macrfagos, pero es el nico anticuerpo que puede
atravesar la placenta y de ese modo proporcionar
proteccin inmunitaria al feto. Tambin se secreta en
S
S
Pepsina
Pepsina
Fragmento
F(ab )2
S
S
SS
S
S
SS
Fragmentos
de Fc
digeridos
58 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS
la leche materna y es asimilada por el intestino del
animal recin nacido para enviarla a la circulacin
sangunea, con lo que provee proteccin continua
despus del nacimiento.
z La IgA es la principal clase de anticuerpos en secre-
ciones como las lgrimas, saliva y en secreciones de
los pulmones y el intestino. Representa la primera l-
nea de defensa inmunitaria contra la infeccin en
tales sitios.
z La IgE se produce en tejidos donde, despus de
enlazarse al antgeno, estimula a las clulas cebadas
(mastocitos) para que liberen una serie de factores.
A su vez, algunos de stos activan glbulos blancos
(llamados eosinfilos) para que maten varios tipos de
parsitos. No obstante, las clulas cebadas tambin
pueden liberar aminas con actividad biolgica, como
la histamina, que causan dilatacin e incrementan la
permeabilidad de los vasos sanguneos, que son los
causantes de los sntomas que se observan en reac-
ciones alrgicas como la fiebre del heno y el asma.
z La IgD se halla en la superficie de los linfocitos B
maduros y en indicios en varios lquidos corporales,
no obstante su funcin exacta se desconoce.
Tambin existen dos formas de cadenas ligeras. Las
molculas de anticuerpos en cualquiera de las clases
o subclases de anticuerpos pueden tener dos cadenas
ligeras o dos cadenas ligeras . Contra lo que sucede
con las diferentes cadenas pesadas antes descritas, no
se conocen diferencias de funcin biolgica entre las
cadenas ligeras y .
Anticuerpos policlonales
Si un antgeno se inyecta en un animal, varias clulas
productoras de anticuerpos unirn ese antgeno, aun-
que con diferentes grados de afinidad y de ese modo el
anticuerpo que aparezca en la corriente sangunea dar
origen a numerosos clones de clulas, es decir que ser
un anticuerpo policlonal. En una preparacin de anti-
cuerpo policlonal, diferentes molculas de anticuerpos
se unirn a diferentes partes de un antgeno macromo-
lecular, con diferentes afinidades de unin. La regin
de unin reconocida por cualquier molcula de anti-
cuerpo se llama eptopo. La mayora de los anticuerpos
reconoce estructuras superficiales especficas de una
protena ms que secuencias de aminocidos determi-
nadas (los eptopos se definen por la conformacin del
antgeno protenico). Una preparacin de anticuerpos
policlonales se unir a muchos eptopos del antgeno
protenico.
Anticuerpos monoclonales
Si puede aislarse un clon simple de clulas produc-
toras de anticuerpos, todos los anticuerpos que pro-
duzca dicho clon sern idnticos; asimismo, todas las
molculas de anticuerpos en una preparacin de anti-
cuerpo monoclonal se unirn al mismo eptopo del
antgeno.
El problema radica en que si se asla una clula indivi-
dual productora de anticuerpo y crece en cultivo, sus
descendientes tienen una esperanza de vida acotada,
que limita en gran medida su uso en las preparacio-
nes de rutina de anticuerpos monoclonales. En 1975,
Milstein y Khler descubrieron de qu forma pueden
producirse de manera indefinida y en grandes canti-
dades los anticuerpos monoclonales de casi cualquier
especificidad deseada. Su mtodo consisti en fusionar
un linfocito B productor de anticuerpos de la especi-
ficidad deseada con una clula derivada de un tumor
linfoctico canceroso, llamada clula de mieloma y que
es inmortal. La fusin de clulas se llama hibridoma,
que es inmortal y secreta el mismo anticuerpo espec-
fico original codificado por el linfocito B.
Los anticuerpos monoclonales que se producen por
intermedio de esta tecnologa son herramientas comu-
nes de la investigacin contempornea debido a su
muy alta especificidad. Por ejemplo, tales anticuerpos
pueden usarse para localizar determinadas molculas
intracelulares (seccin A4) o secuencias de aminocidos
particulares de las protenas (seccin C4). Si primero
se unen a una matriz insoluble, tambin resultan de
extrema utilidad para unirse y por tanto purificar una
molcula particular contenida en extractos o fracciones
celulares (seccin C1). Asimismo, se ha incrementado
su uso en la medicina, tanto como herramienta diag-
nstica como teraputica, por ejemplo para inactivar
toxinas bacterianas y tratar ciertas formas de cncer.
Sntesis de anticuerpos
Se cree que el genoma humano contiene tan pocos
como 105 genes y sin embargo un ser humano puede
producir cuando menos 1015 diferentes tipos de anti-
cuerpos, en trminos de especificidad de unin a un
antgeno. Para dar cuenta de la mayor parte de esta
diversidad de anticuerpos, los genes existen en seccio-
nes de codificacin separadas y se ensamblan durante la
maduracin del linfocito B por un proceso denominado
recombinacin somtica. Este proceso de ensamble
tiene lugar en cada linfocito B. Mediante el ensamble de
diferentes fragmentos de DNA, pueden crearse genes de in-
munoglobulinas completamente nuevos y de este modo
se cuenta con un reservorio potencial enorme de diver-
sidad de anticuerpos.
No existen genes de anticuerpos completos en las clulas
de la lnea germinal. Los genes para las cadenas ligeras
y pesadas se ensamblan por recombinacin somtica
durante la maduracin de los linfocitos B. En la lnea
germinal, cada gen de cadena ligera existe como mlti-
ples segmentos de los genes V y J corriente arriba de un
solo segmento del gen C. Durante la diferenciacin del

linfocito B, un segmento del gen V se une con un seg-
mento del gen J (unin VJ) para ensamblar el gen com-
pleto de la cadena ligera, lo que suele ocurrir por dele-
cin del DNA participante. Las secuencias de los genes V y
J codifican la regin variable, mientras que el segmento
del gen C codifica la regin constante del polipptido de
la cadena ligera (figura B6-4).
Las cadenas pesadas son codificadas por mltiples seg-
mentos de los genes V, J y D, los cuales yacen corriente
arriba de una copia simple de segmentos del gen C para
cada una de las regiones constantes de las cadenas ,
, , y . Durante la diferenciacin del linfocito B, un
segmento del gen D se une a un segmento J (unin DJ),
CADENA LIGERA
Variable Constante
V J C
CADENA PESADA
Variable
V D J
Figura B6-4. La regin variable de la cadena ligera es codicada por dos
segmentos gnicos separados, V y J. La regin variable de la cadena pesada es
codicada por tres segmentos gnicos, V, D y J.
B6ANTICUERPOS 59
y despus la unin DJ se une a un segmento del gen V
(unin VDJ); la secuencia gnica VDJ codifica la regin
variable del polipptido de la cadena pesada (figura
B6-4).
Un linfocito B puede cambiar la clase de anticuerpo
que se est expresando al mover un nuevo segmento
del gen C a la posicin que ocupaba el segmento VDJre-
combinado y para ello elimina el DNA que intervino. La
nueva cadena pesada presenta una regin constante
diferente, pero conserva la misma regin variable y de
esta manera, cuando se produce el cambio de clase y el
linfocito pasa a producir IgA en lugar de IgM, la especi-
ficidad del anticuerpo por el antgeno se mantiene.
Constante
C
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C1Purificacin de protenas
Notas clave
Principios de la El fin de la purificacin de protenas es aislar una protena particular del resto
puricacin de en el material inicial. Se usa una combinacin de tcnicas de fraccionamien-
protenas to que explotan la solubilidad, tamao, carga, hidrofobicidad y afinidad de
unin especfica de la protena de inters. El material inicial que se usa es una
fuente relativamente abundante de la protena de inters que sea fcil de obte-
ner. El uso de tcnicas de DNA recombinante implica que pueden obtenerse
grandes cantidades de protenas que de manera habitual son escasas median-
te la expresin de clulas bacterianas o eucariotas.
Homogeneizacin La protena debe obtenerse en solucin antes de su purificacin. La homo-
y solubilizacin geneizacin y la lisis osmtica son dos procesos usados para destruir tejidos
y clulas, que luego se someten a centrifugacin diferencial para aislar la
fraccin subcelular en la que se localiza la protena de inters. En el caso de
las protenas unidas a la membrana, la estructura membranosa debe solu-
bilizarse con un detergente para que libere la protena. Se deben tener pre-
cauciones para evitar que las protenas se desnaturalicen o inactiven durante
la purificacin debido a factores fsicos o biolgicos. Entre stos se incluyen
el amortiguamiento del pH de las soluciones, efectuar los procedimientos a
bajas temperaturas e incluir inhibidores de las proteasas para evitar protelisis
indeseables.
Ensayo de protenas Con el propsito de vigilar el progreso de la purificacin de una protena,
es necesario disponer de un ensayo para la misma. Segn sea la protena, el
ensayo puede incluir la medicin de su actividad enzimtica o propiedades
de unin de ligandos, o puede cuantificar la protena presente por medio de
anticuerpos contra la misma.
Precipitacin del sulfato La solubilidad de las protenas disminuye a medida que la concentracin de
de amonio sulfato de amonio en la solucin aumenta. La concentracin de sulfato de amo-
nio a la cual una protena determinada pierde su solubilidad y precipita suele
ser bastante diferente de la de otras protenas de la mezcla y til para efectuar
la separacin.
Cromatografa de La cromatografa de filtracin en gel separa protenas con base en su tamao
ltracin en gel y forma, para lo cual usa cuentas porosas encerradas en una columna. Las
protenas grandes o elongadas no pueden atravesar los poros de las cuen-
tas y eluyen desde el fondo de la primera columna, en tanto que las protenas
ms pequeas atraviesan las cuentas, disponen de un volumen lquido mayor
accesible a ellas y se mueven a travs de la columna con mayor lentitud, por lo
que eluyen ms tarde.
Cromatografa de En la cromatografa de intercambio de iones, las protenas se separan con base
intercambio de iones en su carga neta. En la cromatografa de intercambio de aniones se usa una
columna que contiene cuentas con carga positiva, mientras que en la cro-
matografa de intercambio de cationes se usan cuentas con carga negativa, a
las cuales se unen protenas con una carga positiva neta. A continuacin, las
protenas unidas se eluyen al aadirles una solucin de cloruro de sodio o al
modificarles el pH del amortiguador.
 C1PURIFICACIN DE PROTENAS 61

Cromatografa de La cromatografa de afinidad explota la unin especfica de determinada

anidad molcula a una protena, o su ligando (p. ej., un antgeno por su anticuerpo,
tambin conocida como cromatografa por inmunoafinidad). Un soporte inso-
luble inmoviliza el ligando y queda encerrado en una columna. Al agregar una
mezcla de protenas, slo la protena de inters se une al ligando. Las restan-
tes protenas atraviesan la columna con libertad. La protena unida se eluye
entonces desde el ligando inmovilizado en una forma muy purificada.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (B1) Estructura de los aminocidos

(A5) Fraccionamiento celular (C2) Electroforesis en gel

Principios de la puricacin Homogeneizacin y solubilizacin

de protenas
El fin fundamental de la purificacin de protenas es
aislar una protena determinada de otras protenas
contaminantes, de manera que sea posible estudiar su
estructura y otras propiedades. Cuando se identifica
una fuente celular apropiada de protenas, las prote-
nas se liberan en una solucin y luego se separan del
material contaminante mediante el uso secuencial de
una serie de diferentes tcnicas de fraccionamiento
o separacin. Estas tcnicas explotan una o ms de
las siguientes propiedades bsicas de las protenas:
solubilidad, tamao, carga, hidrofobicidad o sus afi-
nidades de unin especficas. Entre estas tcnicas de
separacin se reconocen las tcnicas cromatogrficas
como las de intercambio de iones, filtracin en gel
o cromatografa de afinidad, cromatografa por in-
teraccin hidrfoba, en la cual la protena se une a un
material hidrfobo, o tcnicas electroforticas como
la del enfoque isoelctrico (seccin C2). Otros proce-
dimientos electroforticos, en especial la electrofore-
sis en gel de poliacrilamida (PAGE) con dodecilsulfato
de sodio (SDS) (seccin C2), se usan para monitorear la
extensin de la purificacin y para determinar la masa
molecular y composicin en subunidades de la prote-
na purificada.
Una vez que se identifica una fuente apropiada, el si-
guiente paso es solubilizar la protena. En el caso de las
protenas de lquidos biolgicos, por ejemplo el suero
sanguneo o el medio de cultivos celulares, no hay nada
ms que hacer, pero en el de numerosas protenas,
es necesario desintegrar tejidos y clulas (lisarlos). La
homogeneizacin y subsecuente centrifugacin dife-
rencial de muestras biolgicas se detallan en la seccin
A5. Adems de los procedimientos que se describen all,
otra forma sencilla de desintegrar clulas que no tienen
una pared celular rgida para liberar su contenido cito-
slico es la lisis osmtica. Cuando las clulas animales
se colocan en una solucin hipotnica (como el agua
o una solucin amortiguada sin sucrosa), el agua de la
solucin circundante se difunde hacia el ms concen-
trado citosol, lo que provoca que la clula se hinche y
explote. A continuacin se recurre a la centrifugacin
diferencial para eliminar a los organelos subcelulares
contaminantes (seccin A5). Las protenas que estn
unidas a la membrana requieren un paso solubilizador
adicional. Despus de su aislamiento por centrifugacin
diferencial, la membrana apropiada recibe tratamiento
con un detergente como el Triton X-100 para romper
la bicapa lipdica y liberar las protenas integrales de la
membrana en una solucin (para mayores detalles, con-
sltese la seccin E2).

Seleccin de una fuente de protenas

Antes de intentar purificar una protena, lo primero es
considerar la fuente del material de inicio. Las prote-
nas difieren en su distribucin celular y tisular y por
tanto, si se sabe que una protena es abundante en deter-
minado tejido (p. ej., el renal), tiene sentido comenzar
la purificacin a partir de tal tejido. Asimismo, algu-
nas fuentes son ms accesibles que otras y ste es otro
aspecto que debe tenerse en cuenta. En el presente, con
el uso de las tcnicas de DNA recombinante (seccin I1),
incluso las protenas escasas pueden expresarse (sinte-
tizarse) en clulas bacterianas y eucariotas desarrolla-
das en cultivos (seccin A3) y de manera subsecuente
obtenerse cantidades relativamente grandes de una pro-
tena.
Estabilizacin de las protenas
A lo largo del proceso de purificacin, deben seguirse
determinados pasos para asegurar que la protena de
inters no se inactive o desnaturalice por factores fsi-
cos o biolgicos. El pH de las soluciones a usar necesita
amortiguarse con sumo cuidado (seccin B1) a un pH al
cual la protena sea estable, lo que por lo regular sucede
alrededor de un pH de 7. Con frecuencia, la tempera-
tura debe mantenerse por debajo de 25 C (en general,
cerca de 4 C) para evitar su desnaturalizacin trmica
y reducir al mnimo la actividad de las proteasas. Bajo
homogeneizacin, las proteasas del material fuente,
que de manera habitual se hallan en compartimientos
subcelulares diferentes, son liberadas en la solucin y se
62 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS
ponen en contacto con la protena de inters, a la que
pueden degradar. Por ejemplo, las hidrolasas cidas de
los lisosomas (seccin A2) podran ser liberadas en la
solucin y degradar con rapidez a la protena de inters.
Por consiguiente y del mismo modo como los procedi-
mientos se llevan a cabo a baja temperatura, es comn
incorporar inhibidores de las proteasas (seccin D4)
en los amortiguadores utilizados en las etapas iniciales
de los procedimientos de aislamiento con el propsito de
minimizar protelisis indeseadas.
Ensayos de protenas
Se debe contar con medios adecuados de deteccin
(ensayos) de la protena para vigilar los sucesos de ca-
da etapa del proceso de purificacin. Los ensayos ms
sencillos son aquellos que se verifican con las enzimas
que catalizan reacciones cuyos productos son fciles
de detectar (para mayores detalles sobre ensayos enzi-
mticos, vase la seccin D1). Las protenas que no
son enzimas pueden ensayarse (probarse) a travs de
la observacin de sus efectos biolgicos. Por ejemplo,
un receptor puede ensayarse midiendo su capacidad de
unir su ligando especfico. Las tcnicas inmunolgicas
suelen emplearse para ensayar a la protena de inters
mediante anticuerpos especficos que la reconocen (p.
ej., radioinmunoensayo, inmunoensayo ligado a enzi-
mas [ELISA] o el anlisis Western blot [seccin C4]).
Precipitacin del sulfato de amonio
Un primer paso de separacin empleado de manera
habitual es el de la precipitacin del sulfato de amonio.
Esta tcnica se basa en el hecho de que la solubilidad de
la mayor parte de las protenas est disminuida en altas
concentraciones salinas. A medida que la concentracin
de sal se eleva, se alcanza un punto en el cual la protena
pierde su solubilidad y precipita. La concentracin de
sal que se requiere para este efecto de desplazamiento
salino vara de protena a protena y por consiguiente
es til para usar en el fraccionamiento de una mezcla
de protenas. Por ejemplo, 0.8 M de sulfato de amonio
a)
Figura C1-1. Separacin de molculas por dilisis, con base en el tamao:
a) punto inicial; b) en equilibrio.
hacen precipitar la protena coagulante fibringeno
del suero sanguneo, en tanto que 2.4 M de sulfato de
amonio es la cantidad requerida para que la albmi-
na precipite. No obstante, muchas otras protenas tam-
bin precipitan a estas concentraciones de sulfato de
amonio. En consecuencia, es una tcnica de separacin
relativamente burda, aunque con frecuencia representa
un paso de concentracin conveniente. A veces, el des-
plazamiento se usa en las etapas finales de un proce-
dimiento de purificacin para concentrar una solucin
diluida de la protena y hacer que sta precipite y luego
pueda ser redisuelta en un volumen de amortiguador
ms pequeo.
Dilisis
Las protenas de molculas pequeas pueden separarse
por dilisis a travs de una membrana semipermeable
como el celofn (acetato de celulosa). Los poros de la
membrana permiten el paso de molculas de hasta al-
rededor de 10 kDa, al tiempo que las molculas ms
grandes son retenidas en la bolsa de dilisis (figura C1-1).
Como casi todas las protenas tienen masas molecula-
res mayores de 10 kDa, esta tcnica resulta inadecuada
para el fraccionamiento de protenas, pero se usa con
frecuencia para eliminar molculas pequeas como las
de sal y sulfato de amonio de una solucin de protenas.
Debe subrayarse que, en equilibrio, la concentracin
de molculas pequeas dentro de la bolsa de dilisis es
igual a la concentracin de afuera (figura C1-1b) y por
ello suele ser necesario efectuar numerosos cambios
en la solucin circundante para reducir lo suficiente la
concentracin de molculas pequeas en la solucin de
las protenas.
Cromatografa de ltracin en gel
En la cromatografa de filtracin en gel (cromatogra-
fa de exclusin de tamao o cromatografa de tamiz
molecular), las molculas se separan con base en su
tamao y forma. La muestra de protenas en un volu-
men pequeo se aplica en el extremo superior de una
b)
 C1PURIFICACIN DE PROTENAS 63

columna de cuentas porosas (dimetro de 0.1 mm), que
estn hechas de un polmero insoluble pero muy hidrata-
do como la poliacrilamida (Bio-Gel) o los carbohidratos
dextrano (Sephadex) o agarosa (Sefarosa) (figura C1-2a).
Las molculas pequeas pueden ingresar en los poros
de las cuentas, mientras que las molculas ms grandes
o elongadas no pueden hacerlo. Por consiguiente, las
molculas ms pequeas tienen un volumen de lquido
mayor accesible a ellas, tanto el del lquido que rodea a
las cuentas porosas como el que se halla en su interior.
En contraste, las molculas ms grandes slo disponen
del lquido que rodea a las cuentas y por tanto se mue-
ven a travs de la columna con ms rapidez, lo que las
lleva a ser las primeras que emergen del fondo (elucin)
(figuras C1-2a y C1-2b). Las molculas ms pequeas se
mueven con mayor lentitud a travs de la columna y elu-
yen ms tarde. Estn disponibles cuentas con diferentes
tamaos de poros, lo que permite separar protenas de
distintos tamaos de manera efectiva. La cromatografa
de filtracin en gel se usa con frecuencia para eliminar
la sal de una muestra protenica (p. ej., para remover el
sulfato de amonio despus de la precipitacin de ste),
ya que la sal ingresa en las cuentas porosas y es eluida
ms tarde, en tanto que las protenas no ingresan en las
cuentas y se eluyen antes. La cromatografa de filtracin
en gel tambin puede utilizarse para estimar la masa
molecular de una protena. Existe una interrelacin
lineal entre el volumen de elucin relativo de una pro-
tena (Ve/Vo donde Ve es el volumen de elucin de una
protena determinada y Vo es el volumen eliminado de
la columna, que es el volumen del espacio del solvente
que rodea las cuentas; figura C1-2b) y el logaritmo de su
masa molecular. Por tanto, la columna puede deter-
minar una curva estndar de Ve/Vo contra el log10 de la
masa molecular mediante el uso de protenas de masa
conocida. En consecuencia, el volumen de elucin de
cualquier muestra de protenas permite estimar su masa
molecular tomando como referencia su posicin en la
curva estndar (figura C1-2c).
Cromatografa de intercambio de iones
En la cromatografa de intercambio de iones, las prote-
nas se separan con base en su carga total (neta). Si una
protena tiene una carga neta negativa a pK 7, se une a
una columna que contiene cuentas con carga positiva,
mientras que una protena sin carga o con carga positiva
neta no se unir (figura C1-3a). Las protenas con carga

Amortiguador aadido
Mezcla de por la parte superior
a)
protenas

Cuentas Molculas Molculas

porosas grandes pequeas

Columna de
vidrio/plstico

Tubo para
recolectar
protenas

Molculas Molculas
b) grandes pequeas c)
Vo
Ve Ve
1 2
+
Catnidad de protenas

Vo Volumen vaco +
Ve Volumen de elucin Ve
+
de las protenas Vo
+

Volumen de eluyente Log10 de la masa molecular

Figura C1-2. Cromatografa por ltracin en gel: a) ilustracin esquemtica de la

cromatografa por ltracin en gel; b) diagrama de la elucin en el que se indica la
separacin; c) grca del volumen de elucin relativo contra el logaritmo de la masa
molecular de protenas conocidas, en el que se indica de qu forma la masa molecular de
una protena desconocida puede leerse cuando se conoce su volumen de elucin relativo.
64 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Mezcla de Amortiguador NaCl

a)
protenas

Protenas
Cuentas con carga
con carga negativa
positiva

Columna
de vidrio
Protenas Protenas
con carga con carga
positiva Tubo para
recolectar negativa
protenas

Baja densidad
de carga Alta densidad
negativa de carga
b) Protenas Gradiente
negativa
con carga de NaCl
positiva
Catnidad de
protenas

Volumen de eluyente

Figura C1-3. Cromatografa de un intercambio inico: a) esquema de la

cromatografa de intercambio inico; b) el diagrama muestra la separacin de una
protena con carga neta positiva que no se ha unido a las matrices con carga positiva
y, as, pasa de forma directa a travs de la columna, en tanto que otras dos protenas
con diferente carga negativa neta se unen a las matrices con carga positiva y son
eludidas, lo que aumenta la concentracin de NaCl en la columna. La protena con
menor densidad de carga negativa es eludida antes que aquella con carga negativa
de mayor densidad.

negativa unidas a tal columna pueden entonces eluirse
si la columna se lava con una solucin de cloruro de
sodio (de iones Cl y Na+) de gradiente cada vez mayor
(concentracin en incremento) al pH apropiado. Los
iones Cl compiten con la protena por los grupos con
carga positiva de la columna. Las protenas que tienen
una densidad o carga negativa menor eluyen primero,
seguidas por las que tienen una densidad o una carga
negativa mayor (figura C1-3b). Las columnas que con-
tienen grupos dietilaminoetilo (DEAE) con carga positiva
(como el DEAE-celulosa o el DEAE-Sephadex) se usan para
separar a las protenas con carga negativa (protenas
aninicas). Esta tcnica se denomina cromatografa
de intercambio aninico. Las columnas que contienen
grupos carboximetilo (CM) con carga negativa (como
el CM-celulosa o el CM-Sephadex) se usan para separar
las protenas con carga positiva (protenas catinicas).
Esta tcnica se denomina cromatografa de intercam-
bio catinico. Como una alternativa a la elucin con un
gradiente de NaCl, las protenas pueden ser eluidas de
las columnas de intercambio aninico al disminuir el
pH del amortiguador y de las columnas de intercambio
catinico al incrementar el pH del amortiguador, por-
que de ese modo se altera el estado de ionizacin de
las cadenas laterales de aminocidos (seccin B1) y por
consiguiente la carga neta de la protena.
Cromatografa de anidad
La cromatografa de afinidad explota la afinidad espe-
cfica y alta de la unin no covalente de una protena a
otra molcula, el ligando. Primero, el ligando se fija en
forma covalente a una matriz inerte y porosa (como la
Sefarosa). Luego la mezcla de protenas se hace pasar
por una columna que contiene el ligando inmovilizado.
La protena de inters se une al ligando mientras las
restantes protenas pasan a travs de la columna (figura
C1-4). Despus de un extenso lavado de la columna con
amortiguador para arrastrar a las protenas unidas ines-
pecficamente, la protena de inters enlazada se libera
 C1PURIFICACIN DE PROTENAS 65

del ligando inmovilizado agregando ligando soluble, que
compite con el ligando inmovilizado por la protena, o
alterando las propiedades del amortiguador (mediante
cambio del pH o de la concentracin de sal). Si se recurre
a ligando soluble para eluir la protena de la columna,
con frecuencia es necesario usar una dilisis extensa para
remover el pequeo ligando de la gran protena. Debido
a que esta tcnica utiliza las propiedades de unin espe-
cficas y con frecuencia exclusivas de la protena, suele
ser posible separar la protena de una mezcla de cientos
de otras protenas en un solo paso cromatogrfico.
La cromatografa de inmunoafinidad, en la cual se usa
un anticuerpo para purificar su antgeno, representa una
de las formas ms comunes de la cromatografa de afi-
nidad. En la cromatografa de inmunoafinidad, un anti-
cuerpo especfico a un antgeno protenico se acopla a
cuentas de una matriz inerte, las cuales se encierran en
una columna de vidrio o de plstico. Al aadir la solu-
cin impura de protenas en el extremo superior de la
columna, el antgeno protenico se unir al anticuerpo
en la matriz al tiempo que los otros componentes flu-
yen a travs de la columna. De este modo, el antgeno
protenico puede eluirse en un estado puro o casi puro
con slo cambiar el pH del amortiguador de manera
que se interrumpa la interaccin antgeno-anticuerpo;
de rutina, se logran ms de 1 000 purificaciones con este
paso solo. Si el antgeno protenico se expone de manera
habitual en la membrana plasmtica de un tipo celular
deseado, estas clulas pueden purificarse de una mez-
cla de clulas con slo hacer pasar la mezcla a travs
de la columna. Slo las clulas que porten el antgeno
en su superficie se unirn y podrn eluirse en un paso
posterior.
Otras combinaciones de empleo usual de un ligando
inmovilizado y una protena a purificar usadas por
los sistemas cromatogrficos de afinidad incluyen un
inhibidor para purificar una enzima (seccin D4), una
hormona (p. ej., la insulina) para purificar a su recep-
tor (seccin E5) y una lectina (p. ej., la concanavalina
A) para purificar una glucoprotena (secciones E2 y
H5). Los avances en la tecnologa del DNA recombinante
(seccin I1) implican que las protenas se pueden dise-
ar con secuencias de aminocidos especficas en el
extremo del C terminal, el llamado rabillo. La protena
recombinante con el rabillo puede entonces expresarse
en un sistema celular adecuado y la afinidad del rabillo
por un anticuerpo inmovilizado u otra molcula explo-
tarse para purificar la protena.

a) Mezcla de
diferentes Ligando
protenas Protena soluble
especca aadido
unida al
ligando

Ligando inmovilizado
en un soporte insoluble Las protenas
y encerrado en una inespeccas
Las protenas
columna de vidrio pasan a travs
especcas
de la columna
eluyen unidas
al ligando soluble
b) Protenas inespeccas
sin unirse

Agregado de
Cantidad de protena

ligando soluble

Protena
especca

Volumen de eluyente

Figura C1-4. Cromatografa de anidad: a) diagrama esquemtico de la

cromatografa de anidad; b) diagrama de la elucin en el que se indica que las
protenas inespeccas que no se unen al ligando inmovilizado pasan a travs de la
columna, en tanto que las protenas especcas se unen al ligando inmovilizado y se
eluyen de la columna slo al aadir ligando soluble.
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C2Electroforesis en gel
Notas clave
Electroforesis En la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), las protenas se aplican
contra un gel de poliacrilamida poroso y se separan en un campo elctrico con
base en su carga negativa neta y su tamao. Las protenas con mayor carga
negativa y ms pequeas migran ms a travs del gel que las protenas con
menos carga negativa y de tamao ms grande.
SDS-PAGE En el SDS-PAGE, la muestra de protenas se trata con un agente reductor para
romper los enlaces de disulfuro y luego con el agente detergente dodecilsulfa-
to de sodio (SDS), el cual desnaturaliza las protenas y las recubre por completo
con una carga negativa. A continuacin, la muestra se fracciona por electrofo-
resis a travs de un gel de poliacrilamida. Como todas las protenas tienen ya
una carga idntica en relacin con la masa, se separan con base en su masa.
Las protenas ms pequeas se mueven ms rpido. El SDS-PAGE puede utili-
zarse para determinar el grado de pureza de una muestra de protenas, esti-
mar la masa molecular de una protena y deducir el nmero de subunidades
polipeptdicas de una protena.
Enfoque isoelctrico En un enfoque isoelctrico, las protenas se separan por electroforesis en un
gel que contiene polianfolitos, los cuales producen un gradiente de pH. stos
separan con base en su contenido relativo de residuos con cargas positivas o
negativas. Cada protena migra a travs del gel hasta que alcanza un punto en
el que carece de una carga neta, que es su punto isoelctrico (pI).
Electroforesis en gel En la electroforesis en gel bidimensional, las protenas se someten en primer
bidimensional lugar al enfoque isoelctrico y luego, en la segunda direccin, al SDS-PAGE para
producir un patrn bidimensional de manchas separadas con base en la carga
y en la masa.
Esta tcnica puede emplearse para comparar el proteoma de clulas que
estn bajo diferentes condiciones.
Visualizacin de las Las protenas pueden visualizarse directamente en geles mediante su tincin
protenas en geles con el colorante azul brillante de Coomassie o con una tincin de plata. Las
protenas marcadas con radiactividad pueden detectarse mediante la super-
posicin de una pelcula de rayos X al gel, donde se buscan las reas ms
oscuras de la autorradiografa revelada que se corresponden con las protenas
radiomarcadas. Una protena determinada de inters puede detectarse por
inmunoblot (Western blot) si se sigue su transferencia desde el gel a la nitroce-
lulosa y se utiliza un anticuerpo que la reconozca de manera especfica. Luego
se detecta este anticuerpo primario con un anticuerpo secundario ligado a una
enzima o radiomarcado.
Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos (C3) Secuenciacin de protenas y
(B2) Estructura y funcin de las sntesis de pptidos
protenas (C4) Inmunodeteccin
(C1) Purificacin de protenas

Electroforesis
Cuando se colocan en un campo elctrico, las molcu-
las con una carga neta, como las protenas, se mueven
hacia un electrodo o hacia el otro, un fenmeno cono-
cido como electroforesis. Cuanto mayor sea la carga
elctrica, la molcula se mover ms rpido. En la elec-
troforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), la separa-
cin electrofortica tiene lugar en un gel, el cual sirve
de tamiz molecular. Las molculas pequeas se mueven
con facilidad a travs de los poros del gel, en tanto que
las molculas ms grandes se retrasan. Loa geles sue-
len elaborarse con poliacrilamida, una sustancia inerte
desde el punto de vista qumico que se forma con faci-
lidad por la polimerizacin de la acrilamida. El tamao
de los poros del gel puede controlarse mediante la elec-
cin apropiada de las concentraciones de acrilamida y
del reactivo de entrecruzamiento, la bisacrilamida de
metileno. Cuanto ms alta sea la concentracin de acri-
lamida usada, ms pequeos los tamaos de los poros
en el gel final. Por lo regular, el gel se coloca entre dos
placas de vidrio separadas por una distancia de 0.5 a
1.0 mm (figura C2-1). La muestra de protena se agrega
a las pequeas cavidades de la parte superior del gel,
las que se forman al colocar un molde de plstico en el
gel antes de que frage (figura C2-1). Un colorante azul
(azul de bromofenol) se mezcla con la muestra de pro-
tenas para ayudar a cargarla sobre el gel. Debido a que
el bromofenol es una molcula pequea, tambin migra
con celeridad a travs del gel durante la electroforesis y
de esa manera indica la progresin de la electroforesis.
SDS-PAGE
En el dodecilsulfato de sodio (SDS)-PAGE, las protenas
se desnaturalizan y recubren con una carga negativa
Cavidades para
la muestra
la electroforesis
Direccin de
Figura C2-1. PAGE. Las muestras de protenas se cargan dentro de pequeas
cavidades formadas en la parte superior del gel. Se aplica un campo elctrico a
travs del gel desde arriba hasta abajo y las protenas descienden por el gel. Las
protenas ms pequeas son las que migran ms.
C2ELECTROFORESIS EN GEL 67
completa (debida a los enlaces de las molculas de
SDS) y en consecuencia la base para su separacin es
slo su masa. En primer lugar, la mezcla de protenas
recibe un tratamiento con un agente reductor como el
2-mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los enlaces
disulfuro (figura C2-2) (seccin B2). Despus se agrega
el poderoso detergente aninico SDS, el cual destruye
casi todas las interacciones no covalentes de la protena,
al desplegar las cadenas polipeptdicas. Alrededor de
una molcula de SDS se une, por medio de su cadena
alquilo hidrfoba, a la columna vertebral polipept-
dica por cada dos residuos de aminocidos, lo que da
a la protena desnaturalizada una gran carga negativa
neta que es proporcional a su masa. En ese momento
se coloca la mezcla SDS/protena a las cavidades para la
muestra de la parte superior del gel de poliacrilamida
(figura C2-1). El amortiguador, que es el mismo tanto
en los reservorios superior e inferior y en el gel, tiene
un pH aproximado de 9, de manera que las protenas
presentan una carga negativa neta y migran hacia el
nodo del reservorio inferior. Una corriente elctrica (de
alrededor de 300 V) se aplica a travs del gel desde arriba
hasta abajo durante 30 a 90 minutos con el propsito de
mover las protenas a lo largo del gel (figura C2-1). Des-
pus de efectuar la electroforesis, el gel se remueve del
aparato y se visualizan las protenas (figura C2-3a). Las
protenas pequeas se mueven ms lejos a travs del gel,
mientras que las grandes se mueven ms lento a medida
que son contenidas por los enlaces cruzados con el gel.
Bajo estas condiciones, la movilidad de la mayora de las
cadenas polipeptdicas es linealmente proporcional al
logaritmo de su masa. Por consiguiente, si las protenas
de masa molecular conocida sufren la electroforesis a lo
largo de la muestra, la masa de las protenas desconoci-
das puede determinarse porque existe una interrelacin
Ctodo
Reservorio para
el amortiguador
superior
Muestra
Gel de poliacrilamida
encerrado entre dos
placas de vidrio
(sandwich)
nodo
Reservorio para
el amortiguador
inferior
68 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Protena de una Protena con dos subunidades, Y y Z,

sola subunidad unidas por un enlace disulfuro
X Y Z

s s

Se calientan con SDS

y 2-mercaptoetanol

SH

Molculas de SDS HS
con carga negativa

Electroforesis en gel
de poliacrilamida

Z
X

Gel de poliacrilamida

Figura C2-2. SDS-PAGE. La mezcla de protenas se calienta en presencia de

2-mercaptoetanol, que rompe cualquier enlace disulfuro, y SDS. Las cadenas
polipeptdicas desplegadas son recubiertas con molculas de SDS con carga
negativa, por lo cual migran hacia el nodo del PAGE. Los polipptidos ms
pequeos migran ms a travs del gel que los grandes.

lineal entre el log10 de la masa molecular y la distancia
migrada a travs del gel (figura C2-3b). Las protenas
que difieren en masa por alrededor de 2% (p. ej., 40 y 41
kDa; una diferencia de casi 10 residuos de aminocidos)
pueden distinguirse bajo condiciones adecuadas. El SDS-
PAGE es una tcnica rpida, sensible y de amplio uso que
puede emplearse para determinar el grado de pureza de
una muestra de protenas, para estimar la masa mole-
cular de una protena desconocida y para deducir el
nmero de subunidades de una protena.
Enfoque isoelctrico
El enfoque isoelctrico separa protenas por medios
electroforticos con base en su contenido relativo de
grupos con carga positiva o negativa. Cuando una pro-
tena se halla en su punto isoelctrico (pI) (seccin B1),
su carga neta es de cero y en consecuencia no se mover
en un campo elctrico. En el enfoque isoelctrico, se usa
un gel de poliacrilamida que presenta poros grandes (de
manera que no impide la migracin de las protenas) y
contiene una mezcla de polianfolitos (pequeos pol-
meros con mltiples cargas, que tienen varios valores
de pI). Si se aplica un campo elctrico al gel, los polian-
folitos migran y producen un gradiente de pH. Para
separar las protenas por medio del enfoque isoelc-
trico, se les somete a electroforesis a travs del gel. Cada
protena migra a travs del gel hasta que alcanza una
posicin a la cual el pH es igual a su pI (figura C2-4).
Si una protena difunde lejos de esta posicin, su carga
 C2ELECTROFORESIS EN GEL 69

a) b)
1 2 3 4
kDa

la electroforesis
Direccin de

Log10 de la masa
94
43
30
144

Distancia migrada

Figura C2-3. SDS-PAGE. a) Aspecto de las protenas despus de la electroforesis en

un gel de SDS-poliacrilamida. Lnea 1, protenas (marcadores) de masa molecular
conocida; lnea 2, mezcla de protenas sin puricar; lnea 3, protena parcialmente
puricada; lnea 4, protena puricada hasta homogeneidad/pureza aparente. b)
Determinacin de la masa molecular de una protena desconocida por comparacin
de su movilidad electrofortica (distancia migrada) con la de aquellas protenas
(marcadores) de masa molecular conocida.

neta cambiar a medida que se mueva dentro de una
regin de diferente pH y las fuerzas electroforticas
resultantes la movern de regreso a su posicin isoelc-
trica. De esta forma, cada protena es enfocada en una
banda estrecha (tan delgada como 0.01 de unidad de
pH) alrededor de su pI.
Electroforesis en gel bidimensional
El enfoque isoelctrico puede combinarse con el SDS-
PAGE para obtener separaciones de muy alta resolucin
en un procedimiento que se denomina electroforesis en
gel bidimensional. En primer lugar, la muestra de pro-
tena se somete a un enfoque isoelctrico en una tira
estrecha de gel que contiene polianfolitos (figura C2-4).
Esta tira de gel de enfoque isoelctrico se coloca a con-
tinuacin en la parte superior de un SDS-gel de polia-
crilamida y se somete a electroforesis para producir un
patrn bidimensional de manchas, en el cual las pro-
tenas han sido separadas en la direccin horizontal
con base en su pI, y en la direccin vertical con base
en su masa (figura C2-5). El resultado global es que las
protenas se separan con base en su tamao y su carga.
Por consiguiente, dos protenas que tienen un pI muy
similar o idntico y que producen una sola banda por
enfoque isoelctrico, si tienen diferentes masas produ-
cirn dos manchas por electroforesis en gel bidimensio-
nal (figura C2-5). De manera similar, las protenas con
masas moleculares similares o idnticas, las cuales pro-
duciran una sola banda por SDS-PAGE, tambin han de
producir dos manchas si tienen diferente pI debido a la
separacin inicial por enfoque isoelctrico. La separa-
cin de alta resolucin de las protenas de una mezcla
compleja que pueda alcanzarse por electroforesis en gel
bidimensional hace a esta tcnica de extrema utilidad
para comparar el proteoma (el complemento completo
de protenas de una clula u organismo) de clulas o
tejidos bajo condiciones diferentes, como es el caso de
las clulas diferenciadas contra las indiferenciadas, y
se utiliza con frecuencia antes del anlisis de manchas
de protenas individuales por espectrometra de masa
(seccin C3).

a) b)
Gradiente de PH estable

7.0 7.0

6.0 6.0

5.0 5.0

Figura C2-4. Enfoque isoelctrico: a) antes de aplicar una corriente elctrica;

b) despus de aplicar una corriente elctrica, las protenas migran a una posicin en
la cual su carga neta es cero (pl).
70 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS
Enfoque isoelctrico
pH 10
Manchas de protenas
Bandas de protenas
Figura C2-5. Electroforesis en gel bidimensional. Primero, la muestra de protena
se somete a un enfoque isoelctrico en una dimensin y luego a SDS-PAGE en la
segunda dimensin.
Visualizacin de protenas en geles
Como la mayora de las protenas en los geles no es
visible a la observacin directa para el ojo franco, se
debi desarrollar un mtodo para poder visualizar-
las despus de la electroforesis. La tincin de las prote-
nas de uso ms corriente se hace con el colorante azul
brillante de Coomassie. Despus de la electroforesis, el
gel que contiene las protenas separadas se sumerge en
una solucin alcohlica cida del colorante. sta desna-
turaliza las protenas, las fija en el gel de manera que no
sea posible su lavado y permite que el colorante se les
una. Despus de lavar el exceso de colorante, las pro-
tenas son visibles como discretas bandas azules (figura
C2-3a). Puede visualizarse tan poco como 0.1 a 1.0 g
de una protena en el gel si se usa el colorante azul bri-
llante de Coomasie. Una tincin de las protenas ms
sensible consiste en remojar el gel en una solucin de
sales de plata. Sin embargo, esta tcnica es ms difcil
de aplicar. Si la muestra de protenas es radiactiva, las
protenas pueden visualizarse indirectamente si al gel
se le superpone una hoja de pelcula de rayos X. Con
el tiempo (horas a semanas, de acuerdo con la radiac-
tividad de las protenas de la muestra), la radiacin
emitida oscurece la pelcula. Despus de revelar la pe-
lcula, la autorradiografa resultante muestra reas
oscurecidas correspondientes a las posiciones de las
protenas radiomarcadas.
pH 4
Electroforesis
en gel SDS
Otra forma de visualizar la protena de inters consiste
en usar un anticuerpo contra dicha protena en un
inmunoblot (Western blot) (consltese la seccin C4,
para mayores detalles). Para esta tcnica, las protenas
tienen que transferirse del gel a una hoja de nitroce-
lulosa o una membrana de nylon. Esto se consigue al
superponer el gel sobre la hoja de nitrocelulosa y man-
char sta con las protenas al aplicar corriente elctrica.
Acto seguido, la nitrocelulosa tiene una imagen exacta
del patrn de protenas que presentaba el gel. El exce-
so de sitios de unin sobre la nitrocelulosa se bloquea
con una solucin inespecfica de protenas como la leche
en polvo, antes de colocar la nitrocelulosa en una solu-
cin que contenga el anticuerpo que habr de reconocer
a la protena de inters (el anticuerpo primario). Des-
pus de remover el exceso de anticuerpo libre, el anti-
cuerpo primario que se encuentra unido de manera espe-
cfica a la protena de inters se detecta con un anticuerpo
radiomarcado y fluorescente o un anticuerpo acoplado
a una enzima, que en ambos casos se denomina anti-
cuerpo secundario. Como paso final, hay que detectar
el anticuerpo secundario, lo que se consigue al colocar la
nitrocelulosa contra una hoja de pelcula de rayos X
(si se utiliz un anticuerpo secundario radiomarcado),
mediante un detector de fluorescencia, o al agregar a la
nitrocelulosa una solucin que contenga un sustrato al
que la enzima que se acopl al anticuerpo secundario
convierta en un producto coloreado e insoluble.
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C3Secuenciacin de protenas
y sntesis de pptidos
Notas clave
Anlisis de la El nmero de cada tipo de aminocido en una protena puede determinarse por
composicin de hidrlisis cida y separacin de los aminocidos individuales por cromatografa
aminocidos de intercambio de iones. Los aminocidos se detectan por una reaccin colori-
mtrica con, por ejemplo, nihidrina o fluorescamina.
Degradacin de Edman El aminocido N terminal de una protena puede determinarse si la protena
se hace reaccionar con cloruro de dansilo o fluorodinitrobenceno antes de la
hidrlisis cida. La degradacin de Edman puede determinar la secuencia de
aminocidos de una protena y consiste en la remocin secuencial de un resi-
duo por vez del extremo N terminal.
Estrategia de Con el fin de secuenciar una protena completa, la cadena polipeptdica debe
secuenciacin romperse en fragmentos ms pequeos mediante el uso de sustancias qumi-
cas (p. ej., bromuro de ciangeno) o enzimas (p. ej., tripsina). Los fragmentos
ms pequeos resultantes se secuencian entonces mediante la degradacin de
Edman. La secuencia completa se ensambla por medio del anlisis de los frag-
mentos superpuestos generados por la escisin del polipptido con diferentes
reactivos.
Espectrometra de masa La espectrometra con tiempo de vuelo de la ionizacin por desorcin con lser
asistida con matriz (MALDI-TOF) se usa para determinar la masa precisa de los
pptidos. Los pptidos se inmovilizan en una matriz orgnica y entonces se
someten a un lser, el cual determina que sean eliminados bajo la forma de
un gas ionizado. Los pptidos ionizados en el gas se aceleran en un campo
elctrico y se separan. La espectrometra de masa en tndem (MS-MS) utiliza dos
espectrmetros de masa en tndem para fragmentar ms los pptidos. El mapa
peptdico resultante es diagnstico de la protena y se refiere como la huella
digital de las protenas.
Protemica La protemica es la rama de la ciencia que estudia el complemento completo
de las protenas, o proteoma, en una clula del organismo.
Tecnologa de DNA La secuencia de una protena puede determinarse si se recurre a la tecnologa
recombinante del DNA recombinante para identificar y secuenciar la parte del DNA que codi-
fica la protena. La secuencia de aminocidos de la protena puede deducirse a
partir de su secuencia de DNA usando el cdigo gentico.
Informacin derivada La secuencia de aminocidos de una protena no slo revela la estructura pri-
de la secuencia de las maria de la protena sino que tambin informa sobre las posibles familias o gru-
protenas pos de protenas y sus interrelaciones evolutivas, las potenciales duplicaciones
de genes y las posibles modificaciones postraduccin. De manera adicional, el
conocimiento de la secuencia de aminocidos puede utilizarse para producir
anticuerpos especficos.
Sntesis de pptidos En la sntesis de pptidos en fase slida, los polipptidos se sintetizan por
medios qumicos, que consisten en agregar aminocidos libres a un pptido
amarrado. Para prevenir reacciones indeseadas, el grupo amino  y los grupos
reactivos de las cadenas laterales de los aminocidos libres se protegen (blo-
quean) con recursos qumicos y luego se desprotegen (desbloquean) con los
mismos recursos cuando el aminocido se fija a la cadena polipeptdica en
desarrollo.
72 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS
Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos
(B2) Estructura y funcin de las
protenas
Anlisis de la composicin
de aminocidos
Puede determinarse el nmero de cada tipo de amino-
cido en una muestra de protenas mediante el anlisis
de la composicin de aminocidos. La muestra de la pro-
tena purificada se hidroliza en sus aminocidos consti-
tutivos mediante calor en 6 M de HCl a 110 C durante
24 horas, dentro de un tubo vaco y sellado. La mezcla
resultante (el hidrolizado) de aminocidos se somete
a cromatografa de intercambio de iones (seccin C1)
en una columna de poliestireno sulfatado donde se
separan los 20 aminocidos estndar (seccin B1). A
continuacin, los aminocidos separados se detectan y
cuantifican al hacerlos reaccionar con ninhidrina. Los
aminocidos  producen un color azul, mientras que el
iminocido Pro genera un color amarillo. La cantidad de
cada aminocido en una muestra desconocida pue-
de determinarse al comparar la absorbancia ptica con
una cantidad conocida de cada uno de los aminoci-
dos en una muestra estndar. Con la ninhidrina, puede
detectarse tan poco como 10 nmol de cada aminocido.
Un sistema de deteccin ms sensible (detecta menos
de 10 nmol de un aminocido) usa fluorescamina para
reaccionar con el grupo amino  y formar un producto
fluorescente. El anlisis de la composicin de aminoci-
dos indica el nmero de cada residuo de aminocido en
un pptido, pero no informa nada acerca de la secuen-
cia de aminocidos. Por ejemplo, la composicin de
aminocidos del oligopptido:
Val-Phe-Asp-Lys-Gly-Phe-Val-Glu-Arg
debera ser:
(Arg, Asp, Glu, Gly, Lys, Phe2, Val2)
donde los parntesis y las comas entre cada aminocido
denotan que sta es la composicin de aminocidos, no
la secuencia.
Degradacin de Edman
El residuo amino terminal (N terminal) de una protena
puede identificarse si se hace reaccionar la protena con
un compuesto que forme un enlace covalente estable
con el grupo amino  libre, antes de su hidrlisis con 6
M de NaCl. El aminocido con el N terminal marcado
puede identificarse al comparar sus propiedades cro-
matogrficas con las de derivados de los aminocidos
estndar. Los reactivos usados de manera usual para el
anlisis del N terminal son el fluorodinitrobenceno y
el cloruro de dansilo. Si esta tcnica se aplicara al oligo-
pptido del ejemplo anterior, el residuo del N terminal
(C1) Purificacin de protenas
(C2) Electroforesis en gel
se identificara como Val, pero la secuencia restante per-
manecera ignorada. La reaccin adicional con cloruro
de dansilo no revelara el siguiente residuo de la secuen-
cia ya que el pptido se degrada totalmente en el paso
de la hidrlisis cida.
Pehr Edman super este problema cuando ide un
mtodo para marcar el residuo del N terminal y luego
lo escindi del resto del pptido sin afectar los enlaces
peptdicos entre los otros aminocidos. En la degrada-
cin llamada de Edman se remueve un residuo por vez
de manera secuencial desde el extremo N terminal de
un pptido o protena y se identifica. El grupo amino N
terminal sin carga de la protena se hace reaccionar con
fenilisotiocianato para formar un derivado feniltiocar-
bamoilo, el cual se libera del resto de la protena como
un aminocido de fenilhidantona cclico (PTH), bajo
condiciones cidas leves (figura C3-1). Esta reaccin de
separacin ms suave deja a la parte restante del pp-
tido intacta, disponible para otra ronda de marcacin y
liberacin. El aminocido PTH liberado se identifica por
cromatografa lquida de alto desempeo (HPLC). Esta
tcnica de secuenciacin ha sido automatizada y refi-
nada de manera que pueden secuenciarse ms de 50
residuos desde el N terminal de una protena a partir de
picomoles de material.
Estrategia de secuenciacin
Una protena promedio de 50 kDa debera conte-
ner alrededor de 500 aminocidos. Por consiguiente,
incluso con grandes cantidades de material muy purifi-
cado, slo pude secuenciarse alrededor de una dcima
del N terminal de una protena por la degradacin de
Edman. Con el propsito de secuenciar una protena
ms grande, el primer paso es escindirla en fragmen-
tos ms pequeos de 20 a 100 residuos, los cuales luego
se separan y secuencian. Una escisin especfica puede
alcanzarse por mtodos qumicos o enzimticos. Por
ejemplo, la sustancia qumica bromuro de ciangeno
(CNBr) corta las cadenas de polipptidos en el lado del
C terminal de los residuos Met, mientras que las enzi-
mas tripsina y quimotripsina escinden en el lado del
C terminal de los residuos bsicos (Arg, Lys) y aro-
mticos (Phe, Trp, Tyr), respectivamente. En el caso
de la digestin por la tripsina, una protena con seis
Lys y cinco Arg producira 12 pptidos trpticos, cada
uno de los cuales terminara en una Arg o Lys, adems
del pptido del C terminal. Los fragmentos peptdicos
que se obtienen por separacin especfica qumica o
enzimtica se separan luego por cromatografa (p. ej.,
 C3SECUENCIACIN DE PROTENAS Y SNTESIS DE PPTIDOS 73

Fenilisotiocianato R1 O R2 O R3 O
N=C=S + H2 N C C N C C N C C
H H H H H
Marcado

H S H R1 O R2 O R3 O
N C N C C N C C N C C
H H H H H

Liberacin

S R2 O R3 O
N C
H2 N C C N C C
C N H
H H H
O C
H R1
Derivado PTH

Figura C3-1. Degradacin de Edman. El aminocido N terminal es marcado con

fenilisotiocianato. Bajo hidrlisis cida dbil, este residuo es liberado como un
derivado PTH y el pptido se acorta un residuo, listo para otra ronda de marcado y
liberacin.

cromatografa por intercambio de iones; seccin C1) y a
su vez la degradacin de Edman determina la secuencia
de cada uno.
Aunque ahora se conoce la secuencia de cada fragmento
peptdico, no se sabe cul es el orden de estos fragmen-
tos en la cadena polipeptdica. La siguiente etapa es la
de generar fragmentos superpuestos por escisin de
otra muestra de la cadena polipeptdica original con una
sustancia qumica o enzima diferentes (p. ej., quimo-
tripsina), separar los fragmentos y luego secuenciarlos.
Estos pptidos quimotrpticos se superponen con uno
o ms de los pptidos trpticos, lo que permite esta-
blecer el orden de los fragmentos (figura C3-2). De esta
forma, es posible secuenciar la extensin completa de la
cadena polipeptdica.
Para secuenciar los polipptidos en una protena con
mltiples subunidades, primero deben disociarse las
cadenas polipeptdicas, lo que se hace por destruccin
de las interacciones no covalentes con agentes desna-
turalizantes como la urea o el clorhidrato de guani-
dina. Tambin deben romperse los enlaces disulfuro de
la protena, lo que se logra por reduccin con 2-mer-
captoetanol o ditiotreitol. Para evitar la recombinacin
de los residuos de cistena, se aade yodoacetato para
formar derivados estables de S-carboximetilo. Des-
pus, debe separarse cada cadena polipeptdica, por
ejemplo, por cromatografa de intercambio de iones
(seccin C1), antes de secuenciarlas. En la actualidad,
tan poco como cantidades de picomoles de protenas
pueden secuenciarse si para ello se recurre al SDS-PAGE,
ya sea con un gel de poliacrilamida que contenga la
protena o haciendo su transferencia a nitrocelulosa
(seccin C2).
Para resumir los pasos clave en la secuenciacin qu-
mica de una protena:
1. Purificar la protena.
2. Reducir cualquier enlace disulfuro y bloquear su
reoxidacin con yodoacetato.
3. Escindir la protena con bromuro de ciangeno o
una proteasa (p. ej., tripsina).
4. Separar los fragmentos y secuenciarlos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 usando un reactivo qumico o
proteasa diferentes con el fin de producir fragmen-
tos superpuestos y luego revisar las superposiciones
entre los dos conjuntos de secuencias con el prop-
sito de construir la secuencia completa.
Espectrometra de masa
La masa precisa de las protenas y pptidos intactos deri-
vados de ellas puede determinarse por espectrometra
de masa. sta es una tcnica muy sensible que requiere
slo pequeas cantidades de material. El mtodo de
espectrometra de masa que se usa ms se llama espec-
trometra con tiempo de vuelo de la ionizacin por
desorcin con lser asistida con matriz (MALDI-TOF).
En este mtodo, primero los pptidos se mezclan con
un cido orgnico y luego se secan en una laminilla
74 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Pptidos trpticos Pptidos quimotrpticos

Gly Phe Val Glu Arg Asp Lys Gly Phe

Val Phe Asp Lys Val Phe

Val Glu Arg

Pptidos trpticos

Val Phe Asp Lys Gly Phe Val Glu Arg

Pptidos quimotrpticos

Figura C3-2. Uso de fragmentos superpuestos para determinar la secuencia de un

pptido. Primero, la protena se somete a la digestin de la tripsina y los pptidos
que resultan se separan y secuencian. La protena se hace digerir por separado
con quimotripsina y, otra vez, los pptidos resultantes se separan y secuencian.
Es posible determinar el orden de los fragmentos peptdicos en la protena por
comparacin de las secuencias obtenidas.

de cermica o metal. Luego, la muestra es sometida a La secuenciacin de protenas por espectrometra de

un rayo lser, tras lo cual los pptidos abandonan la
laminilla bajo la forma de un gas ionizado, en el cual
cada molcula es portadora de una o ms cargas posi-
tivas (figura C3-3a). Despus, los pptidos ionizados
se aceleran en un campo elctrico y vuelan hacia un
detector. El tiempo que les toma alcanzar el detector de-
pende de su masa y su carga; los pptidos ms gran-
des se mueven con mayor lentitud y los que estn ms
cargados lo hacen con mayor celeridad. La masa pre-
cisa se determina a travs del anlisis de los pptidos
que presentan una carga simple. Las masas del pptido
resultante, o huellas dactilares, pueden utilizarse en
la bsqueda de bases de datos de secuencias prote-
nicas para compararlas con las masas tericas calcula-
das a partir de todos los pptidos divididos en teora de
todas las protenas de un genoma secuenciado (figura
C3-3b). De este modo, la identidad de la protena ori-
ginal y su secuencia pueden determinarse con facilidad
mediante una combinacin de espectrometra de masa
y de bsqueda de secuencias protenicas en las bases
de datos.
Puede usarse una variacin de este mtodo para deter-
minar de manera directa las secuencias de cada pp-
tido. Despus de la digestin por la tripsina de la pro-
tena purificada y de la determinacin de sus masas
por medio de la espectrometra de masa como se acaba
de explicar, cada pptido se fragmenta an ms en sus
enlaces peptdicos y las masas de los fragmentos resul-
tantes se miden en un segundo espectrmetro de masa
acoplado. Resulta as la denominada espectrometra
de masa en tndem (MS-MS). Las diferencias de masas
entre los fragmentos pueden usarse para construir una
secuencia de aminocidos parcial la cual, a su vez,
puede utilizarse para buscar secuencias de protenas en
las bases de datos o para proporcionar los medios para
la clonacin de genes.
masa presenta numerosas ventajas sobre la secuencia-
cin qumica de Edman tradicional.

Se requieren cantidades de material mucho menores.

La secuencia del pptido puede obtenerse en slo
unos pocos minutos comparada con la hora que
demanda tan slo realizar un ciclo de la degradacin
de Edman.

La espectrometra de masa puede utilizarse para
secuenciar numerosos polipptidos de una mezcla
en lugar de necesitar la purificacin completa de la
mezcla antes de realizar el anlisis.

La espectrometra de masa puede usarse para deter-
minar la secuencia de los pptidos que presentan
los grupos N terminales bloqueados como el piro-
glutamato, un derivado del Glu en el que el grupo
carboxilo de la cadena lateral forma un enlace amida
con su grupo amino primario (una modificacin
eucariota postraduccin comn que obstaculiza la
reaccin de Edman) y para caracterizar otras modi-
ficaciones postraduccin como la glucosilacin y la
fosforilacin.
Protemica
El proteoma es el complemento de protenas completo
de una clula u organismo. La protemica representa
un esfuerzo a gran escala para identificar y caracterizar
todas las protenas que codifica el genoma de un orga-
nismo, incluidas las modificaciones postraduccin de
stas. Cada vez con mayor frecuencia, en el campo de la
protemica, las protenas resueltas por electroforesis
en gel bidimensional (seccin C2) se someten a diges-
tin por tripsina y las masas moleculares en extremo
exactas de los pptidos producidas por la espectrome-
tra de masa se utilizan como huellas dactilares para
 C3SECUENCIACIN DE PROTENAS Y SNTESIS DE PPTIDOS 75

identificar la protena al compararla con las que figuran
en las bases de datos de los tamaos peptdicos trpticos
reales o predichos (figura C3-3).
Tecnologa de DNA recombinante
Aunque la degradacin de Edman y la espectrometra
de masa han servido para secuenciar numerosas pro-
tenas, la determinacin de las secuencias completas de
las grandes protenas por estos mtodos es un proceso
demandante y consumidor de tiempo. La tecnologa del
DNA recombinante (seccin I1) ha permitido secuenciar
incluso protenas muy grandes o protenas que resultan
muy difciles de purificar para ser determinadas por la
primera secuenciacin del tramo de DNA que las codifi-
ca y por tanto usando el cdigo gentico para descifrar
la secuencia de la protena (seccin H1). Incluso as, con
frecuencia se requieren algunos datos de las secuencias
de las protenas para confirmar que la secuencia obte-
nida de la protena es la correcta y para identificar cual-
quier modificacin postraduccin en la protena. Por
consiguiente, las tcnicas de secuenciacin del DNA y de
las protenas se usan juntas con mucha frecuencia para
determinar la secuencia completa de una protena.

Lser

a)

+ + +
Deteccin en un
2 analizador de masa
Laminilla
de metal

Muestra

b)
N C
Protena digerida con tripsina.
Las masas de los pptidos
resultantes se miden con la
espectrometra de masa MALDI-TOF
Abundancia

0 1500
m/z (cociente masa/carga)

Secuencia de la protena buscada

en las bases de datos

Figura C3-3. Espectrometra de masa para determinar la secuencia de una protena.

a) En un espectrmetro de masa MALDI-TOF, los pulsos de luz de un lser ionizan una
mezcla de pptidos que se absorbe en una laminilla de metal . Un campo elctrico
acelera las molculas de la muestra hacia el detector . El tiempo que tardan en
llegar al detector es inversamente proporcional a la masa de la protena. b) Uso de
la espectrometra de masa para identicar protenas. Se utiliza la tripsina para que
digiera la protena de inters y los fragmentos peptdicos resultantes se cargan en
el espectrmetro de masa, donde se miden sus masas. A continuacin se buscan las
bases de datos de secuencias para identicar la protena, cuyo perl trptico digerido
se calcula y compara con los datos determinados de manera experimental.
76 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS
Informacin derivada de las
secuencias de las protenas
La secuencia de aminocidos puede proveer informa-
cin acerca de la estructura primaria de las protenas
y ms.
1. La secuencia de inters puede compararse con otras
secuencias conocidas para ver sus similitudes. Por
ejemplo, las secuencias de la hemoglobina y la mio-
globina indican que pertenecen al grupo o familia de
las protenas globina (seccin B3).
2. La comparacin de las secuencias de la misma pro-
tena de diferentes especies puede proporcionar in-
formacin acerca de sus interrelaciones evolutivas.
3. La presencia de segmentos de secuencia repetidos
de la misma protena en diferentes especies indicara
que la protena pudo haberse originado por duplica-
cin de genes (p. ej., en las molculas de anticuerpos;
seccin B6).
4. Dentro de la secuencia de aminocidos puede haber
secuencias especficas que actan como seales para
el procesamiento postraduccin de la protena (por
el ejemplo, los procesos de glucosilacin o proteol-
tico; seccin H5).
5. Los datos de la secuencia de aminocidos puede uti-
lizarse para preparar anticuerpos especficos para la
protena de inters que pueden usarse para estudiar
su estructura y funcin (seccin C4).
6. Los datos de la secuencia de aminocidos pueden
emplearse para disear sondas de DNA que son espe-
cficas para la codificacin gentica de la protena
(secciones I3 e I4).
Sntesis de pptidos
Los polipptidos pueden sintetizarse por medios qu-
micos al crear enlaces covalentes entre los aminoci-
dos y el extremo de una cadena polipeptdica en cre-
cimiento. En la sntesis de pptidos en fase slida,
la cadena polipeptdica en crecimiento se fija de forma
covalente desde su C terminal a un soporte insoluble co-
mo las cuentas de poliestireno. El siguiente aminocido
de la secuencia debe reaccionar con el grupo amino del
pptido fijo, pero debe contar con un grupo amino libre
que tambin puede reaccionar. Para resolver este pro-
blema, el aminocido libre debe tener su grupo amino
 qumicamente protegido (bloqueado) de manera que
no reaccione con otras molculas. Cuando el nuevo
aminocido se acopla, su grupo amino , ahora N ter-
minal, se libera (desbloquea) para que sea posible el
siguiente enlace peptdico. En consecuencia, cada ciclo
de adicin de un nuevo aminocido requiere un paso de
acoplamiento y un paso de desacoplamiento. De ma-
nera adicional, los grupos reactivos de las cadenas late-
rales deben bloquearse para evitar que se produzcan
reacciones indeseables.
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C4Inmunodeteccin
Notas clave
Mtodos de A raz de la alta especificidad de una anticuerpo por su eptopo, un anticuerpo
inmunodeteccin generado contra un antgeno protenico particular puede emplearse para deter-
minar la localizacin de tal antgeno en una clula (inmunocitoqumica) para
detectar y cuantificar el antgeno en una mezcla compleja (ELISA) o para detectar
protenas despus de un SDS-PAGE (Western blotting).
Inmunocitoqumica El anticuerpo contra el antgeno de inters se marca con fluorescencia para
permitir la localizacin del antgeno en una clula a visualizar por inmunofluo-
rescencia o microscopia inmunoelectrnica.
ELISA Puede emplearse un sndwich ELISA para detectar y cuantificar la cantidad de
un antgeno protenico especfico en una muestra. El anticuerpo se une a un
polmero de soporte inerte y luego se expone a la muestra. La protena libre
se lava y se aade un segundo anticuerpo que reacciona con el antgeno en
un eptopo distinto. Este segundo anticuerpo se marca con un colorante fluo-
rescente o lleva unida una enzima que convierte un sustrato incoloro en un
producto con color. La cantidad unida del segundo anticuerpo y por tanto la
cantidad del antgeno protenico presente en la muestra original, se determina
por cuantificacin de la intensidad del color o de la fluorescencia que se pro-
duce. Puede emplearse una prueba de ELISA indirecta, en la cual el antgeno
se une a un polmero inerte, para detectar la presencia en una muestra de un
anticuerpo contra el antgeno.
Inmuno (Western) Las muestras de protenas se separan por SDS-PAGE y las protenas resultantes
blotting se transfieren a una hoja de nitrocelulosa o nylon. stas se incuban con anti-
cuerpo especfico contra una protena y el anticuerpo sobrante se lava. En el
gel que une el anticuerpo, estas protenas se detectan por autorradiografa (si
el anticuerpo especfico fue radiomarcado) o mediante un segundo anticuerpo
marcado que se une al anticuerpo primario.
Temas relacionados ((A4) Imgenes celulares (C2) Electroforesis en gel
(C1) Purificacin de protenas (B6) Anticuerpos

Mtodos de inmunodeteccin Inmunocitoqumica

La disponibilidad de un anticuerpo (inmunoglobulina)
contra un antgeno especfico (seccin B6) ofrece la
oportunidad de utilizar dicho anticuerpo en un amplio
espectro de mtodos de deteccin inmunolgica. El
sitio del antgeno que un anticuerpo reconoce se deno-
mina determinante antignico o eptopo. Tanto los
anticuerpos monoclonales como los policlonales (sec-
cin B6) pueden usarse para inmunodeteccin del ant-
geno deseado. La alta especificidad de un anticuerpo
por su eptopo permite usarlo como un reactivo para
determinar la localizacin del antgeno en una clula
(inmunocitoqumica), para detectar y cuantificar un
antgeno en una mezcla compleja (ELISA) y para detec-
tar protenas tras su separacin por SDS-PAGE (Western
blotting).
En la inmunocitoqumica, una marca fluorescente (p.
ej., fluorescena, la cual emite luz verde) se acopla a un
anticuerpo, el que a continuacin se aade a una clula
fija. Entonces puede visualizarse la unin del anticuerpo
a su antgeno al detectar su fluorescencia por microsco-
pia de luz inmunofluorescente (para mayores detalles,
consltese la seccin A4). Incluso puede alcanzarse un
grado de resolucin mayor si se recurre a anticuerpos a
los que se hayan acoplado partculas electrnicas den-
sas, como el oro coloidal, que luego pueden visualizarse
con la ayuda de la microscopia electrnica (seccin A4).
En efecto, la microscopia inmunoelectrnica puede
mapear la posicin de los antgenos protenicos dentro
de las clulas y dentro de complejos de macromolculas
como los ribosomas.
78 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

ELISA que reconoce la protena pero en un eptopo diferente

Los anticuerpos especficos pueden usarse para detec-
tar y cuantificar la cantidad de antgeno correspon-
diente en una muestra biolgica. Existen varios tipos de
ensayos inmunolgicos. Una versin popular la repre-
senta el inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA), el cual
puede detectar y cuantificar con facilidad menos de un
nanogramo de una protena antignica especfica. El
sndwich ELISA permite la deteccin y cuantificacin del
antgeno. Este mtodo emplea una bandeja de plsti-
co que tiene cavidades moldeadas (bandeja de micro-
titulacin) donde el anticuerpo ha sido acoplado al
plstico que forma las cavidades (figura C4-1). Las mues-
tras que contienen al antgeno a ensayar se agregan a
las pequeas cavidades. Si el antgeno est presente y el
anticuerpo lo reconoce, se le une (figura C4-1). A conti-
nuacin, las cavidades se lavan para eliminar las prote-
nas libres y luego se incuban con un segundo anticuerpo
al del primer anticuerpo (figura C4-1). El segundo anti-
cuerpo se fija a un grupo fluorescente o una enzima que
puede catalizar la conversin de un sustrato incoloro en
uno coloreado. La intensidad del color o la fluorescen-
cia producidas por cada muestra se mide para determi-
nar la cantidad de antgeno presente en cada muestra.
Existen numerosas mquinas disponibles para explorar
las cavidades de la placa de microtitulacin despus de
una ELISA, donde miden la absorbancia o fluorescencia
y cuantifican la cantidad de antgeno unido en cada
cavidad.
Un formato alternativo, la ELISA indirecta, puede em-
plearse para detectar la presencia de anticuerpo con-
tra un antgeno particular en una muestra biolgica. El
antgeno por s mismo est unido en las cavidades de la
bandeja de microtitulacin, a las cuales se aade la mez-
cla que contiene el anticuerpo que reconoce al antgeno.

Primer anticuerpo jo
a un soporte slido

Agregado de la muestra
que contiene antgeno
Incubacin
Lavado para eliminar las
molculas que no se unieron

Aadidura del
segundo anticuerpo
con la enzima unida

Sustrato
Lavado para remover incoloro
el segundo anticuerpo Producto
que no se uni. coloreado
Incubacin con el
sustrato de la enzima

Figura C4-1. Prueba ELISA realizada con un segundo anticuerpo, al que se le

uni (conjug) una enzima que convierte los sustratos incoloros en productos
coloreados.
 C4INMUNODETECCIN 79

La presencia del anticuerpo de unin puede detectar-
se si se aade un anticuerpo fluorescente secundario
que en este caso reconozca al primer anticuerpo (vase
ms adelante). Esta tcnica es la base de la prueba para
detectar la infeccin por el virus de inmunodeficiencia
humana (VIH), en la que una protena viral es inmovi-
lizada y puede medirse la presencia de un anticuerpo
contra sta en una muestra de sangre.
Inmuno (Western) blotting
Esta tcnica puede utilizarse para la deteccin de una o
ms protenas en una mezcla. La muestra se somete a
electroforesis en un SDS-gel de poliacrilamida (SDS-PAGE;
seccin C2) que separa las protenas con base en su
tamao, de lo cual resulta una serie de bandas de prote-
nas debajo del gel (figura C4-2). Debido a que la matriz
de gel no permite que protenas grandes como los anti-
cuerpos ingresen con facilidad, como paso previo las
protenas de la muestra deben transferirse a un medio
ms accesible.
Este proceso se llama blotting (manchar). El gel se
coloca cerca de una hoja de nitrocelulosa o nylon y
luego se le aplica un campo elctrico de modo que las
protenas migren desde el gel a la hoja, donde quedan
unidas. La hoja de nitrocelulosa se incuba con una
protena como la albmina srica bovina para que se
una a sitios de unin de protenas inespecficos, para
de esa manera evitar uniones espurias de molculas de
anticuerpos en etapas subsecuentes. Se dice que este
paso consiste en bloquear sitios de unin inespec-
ficos. A continuacin, la hoja de nitrocelulosa se hace
reaccionar con anticuerpos marcados, los anticuerpos
que no reaccionan se eliminan por lavado y las bandas
protenicas que se unieron al anticuerpo se vuelven
visibles y pueden identificarse (figura C4-2). El mtodo
para visualizarlas depende del mtodo que se utiliz
para marcar el anticuerpo. Si la marcacin consisti en

Cavidades para la muestra

a)

Gel de SDS-pliacrilamida
Direccin
de la
electroforesis
Bandas de los polipptidos
separados

Transferencia (blot) de las

b)
protenas a la hoja del
polmero

Incubacin con anticuerpo

c) radiomarcado. Lavado para
remover el anticuerpo que
no se uni. Realizar la
autorradiografa
Bandas de polipptidos que
] se unen al anticuerpo
especco

Figura C4-2. Inmuno (Western) blotting con un anticuerpo radiomarcado: a)

electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida, de la que resultan
polipptidos separados en bandas discretas; b) membrana de nitrocelulosa o nylon,
sobre la que se gracaron las bandas de las protenas (es decir, un Western blot);
c) autorradiografa despus de incubar el Western blot con anticuerpo
radiomarcado, de lavar el anticuerpo que no se uni y de colocar la membrana
contra una pelcula de rayos X.
80 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS
la incorporacin de una marca radiactiva (p. ej., 125I),
se lleva a cabo una autorradiografa para detectar las
bandas de protenas radiactivas (figura C4-2). En forma
alternativa, el anticuerpo puede detectarse incubando
la hoja con un segundo anticuerpo que reconoce al pri-
mer anticuerpo (p. ej., si el primer anticuerpo se des-
arroll en conejos, el segundo anticuerpo podra ser un
anticuerpo anticonejo de cabra). El segundo anticuerpo
podra ser radiomarcado y su unin detectarse por
autorradiografa o se le podra conjugar una enzima que
origine un producto coloreado como en la prueba ELISA
(figura C4-1). Se usa una tcnica similar para manchar
el DNA (Southern blotting; seccin I3) o el RNA (Northern
blotting; seccin I3).
SECCIN D ENZIMAS

D1Introduccin
Notas clave
Las enzimas como Las enzimas son catalizadores que cambian la velocidad de reaccin sin que
catalizadores cambien ellas mismas. Presentan una especificidad muy alta y su actividad
puede ser regulada. Virtualmente, todas las enzimas son protenas, aunque se
han identificado algunos RNA con actividad cataltica.
Sitio activo El sitio activo es la regin de la enzima que se une al sustrato para formar un
complejo enzima-sustrato y transformarlo en un producto. El sitio activo es
una entidad tridimensional, que suele ser una hendidura o grieta en la super-
ficie de la protena, en el cual el sustrato se une por mltiples interacciones
dbiles. Se han propuesto dos modelos para explicar de qu forma las enzimas
se unen a sus sustratos: el modelo de llave y cerradura y el modelo de ajuste
inducido.
Especicidad por el La especificidad de una enzima por el sustrato la determinan las propiedades
sustrato y ordenamiento espacial de los residuos de aminocidos del sitio activo.
Clasicacin de las Las enzimas se clasifican en seis grupos principales con base en el tipo de reac-
enzimas cin que catalizan. Cada enzima tiene un nmero de clasificacin exclusivo.
Ensayos enzimticos Un ensayo enzimtico mide la conversin de un sustrato en un producto, bajo
condiciones de cofactores, pH y temperatura a las cuales las enzimas alcanzan
su actividad ptima. Se usan concentraciones altas de sustratos, de manera
que la velocidad de reaccin inicial sea proporcional a la concentracin de la
enzima. Se mide ya sea la velocidad de aparicin del producto o la velocidad
de desaparicin del sustrato y para ello suele recurrirse al cambio en la absor-
bancia que detecta un espectrofotmetro.
Ensayos de enzimas Si el sustrato o el producto de una reaccin catalizada por una enzima son
ligadas incapaces de absorber la luz a una determinada longitud de onda, puede ensa-
yarse la enzima y para ello se la liga a otra reaccin catalizada por una enzima
que no incluye un cambio en la absorbancia. La segunda enzima debe estar
en exceso, de manera que el paso limitante de la velocidad en el ensayo ligado
es la accin de la primera enzima.
Coenzimas y grupos Algunas enzimas requieren la presencia de cofactores, que son unidades no
prostticos protenicas pequeas, para funcionar. Los cofactores pueden ser iones inorg-
nicos o molculas orgnicas complejas llamadas coenzimas. Un cofactor que
est unido en forma covalente a la enzima se denomina grupo prosttico. Una
holoenzima es la forma catalticamente activa de la enzima con su cofactor,
mientras que una apoenzima es la parte protenica sola. Muchas coenzimas
derivan de precursores de las vitaminas dietticas y sus deficiencias propician
ciertas enfermedades.
Isozimas Las isozimas son formas diferentes de una enzima que catalizan la misma
reaccin pero que exhiben diferentes propiedades fsicas o cinticas. Las iso-
zimas de la deshidrogenasa de lactato (LDH) pueden separarse por medio de
la electroforesis y usarse en el contexto clnico para diagnosticar una infarto
del miocardio.
Temas relacionados (A4) Imgenes celulares (D3) Cintica de las enzimas
(B2) Estructura y funcin de las (D4) Inhibicin enzimtica
protenas (D5) Regulacin de la actividad
(D2) Termodinmica enzimtica
82 SECCIN D ENZIMAS
Las enzimas como catalizadores
Las enzimas son catalizadores que incrementan la
velocidad de una reaccin qumica sin que ellas mis-
mas cambien en el proceso. En ausencia de una enzima,
la reaccin casi no puede acontecer, en tanto que en
su presencia la velocidad puede incrementarse hasta
1017 veces. Por lo regular, las reacciones catalizadas por
enzimas tienen lugar bajo condiciones relativamente
leves (temperaturas muy por debajo de 100 C, a la pre-
sin atmosfrica y pH neutral) si se las compara con
las reacciones qumicas correspondientes. Las enzimas
presentan tambin una especificidad muy alta por los
sustratos sobre los que actan y los productos que for-
man. Adems, la actividad enzimtica puede regularse,
y vara en respuesta a la concentracin de sustratos u
otras molculas (seccin D5). Casi todas las enzimas
son protenas, aunque se han identificado unas pocas
molculas de RNA (ribozimas) con actividad cataltica.
Sitio activo
El sitio activo de una enzima es la regin que une el
sustrato y lo convierte en producto. Suele ser una parte
relativamente pequea de la molcula completa de la
enzima y es una entidad tridimensional formada por
residuos de aminocidos que pueden yacer alejados
de la cadena polipeptdica lineal (seccin B2). Por lo
general, el sitio activo es una hendidura o grieta de la
superficie enzimtica que forma un ambiente predo-
minantemente apolar, que mejora la unin del sus-
trato. El sustrato se une al sitio activo por mltiples
fuerzas dbiles (interacciones electrostticas, enlaces
de hidrgeno, fuerzas de van der Waals, interacciones
hidrfobas; vase la seccin B2) y en algunos casos por
enlaces covalentes reversibles. Una vez que la molcula
de sustrato est unida y se form un complejo enzima-
sustrato, los residuos con actividad cataltica del sitio ac-
tivo de la enzima actan sobre la molcula de sustrato
para transformarla, primero, en el complejo del esta-
do de transicin (seccin D2) y luego en el producto, el
cual se libera a la solucin. Acto seguido, la enzima est
lista para volverse a unir a otra molcula de sustrato y
comenzar su ciclo cataltico otra vez.
De manera original, se propusieron dos modelos para
explicar de qu manera la enzima se une a su sustrato.
a)
+ +
Enzima Sustrato Complejo enzima-
sustrato
Figura D1-1. Unin de un sustrato a una enzima: a) modelo de llave y cerradura;
b) modelo de ajuste inducido.
En el modelo de cerradura y llave propuesto por Emil
Fischer en 1894, se pensaba que la forma del sustrato y
del sitio activo de la enzima encajaban como una llave
en su cerradura (figura D1-1a). Se consideraba que las
dos formas eran rgidas y fijas y que se complementa-
ban de forma perfecta una con la otra cuando se reunan
en la alineacin correcta (tambin referida como com-
plementariedad geomtrica). En el modelo de ajuste
inducido propuesto por Daniel E. Koshland Jr. en 1958,
la unin del sustrato induce un cambio conformacional
en el sitio activo de la enzima (figura D1-1b). De manera
adicional, la enzima puede distorsionar el sustrato y for-
zarlo a que adquiera una conformacin similar a la del
estado de transicin (seccin D2). Por ejemplo, la unin
de glucosa a la hexocinasa induce un cambio confor-
macional en la estructura de la enzima en la que el sitio
activo asume una forma que se complementa con la
del sustrato (glucosa) slo despus de que ste se une a
la enzima. Lo real es que diferentes enzimas muestran
caractersticas de ambos modelos, con alguna comple-
mentariedad y algn cambio conformacional.
Especicidad del sustrato
Las propiedades y el ordenamiento espacial de los resi-
duos de los aminocidos que forman el sitio activo de
una enzima determinan qu molculas pueden unirse y
ser sustratos de la enzima. Por lo regular, son los cam-
bios en relativamente unos pocos aminocidos en el
sitio activo los que determinan la especificidad por
el sustrato. Lo anterior se ve con toda claridad en las
tres enzimas digestivas tripsina, quimotripsina y elas-
tasa (seccin D5). Estas tres enzimas pertenecen a una
familia de enzimas denominada proteasas de serina
serina porque tienen un residuo serina en el sitio
activo que desempea un papel crtico en la catlisis y
proteasas porque catalizan la hidrlisis de los enlaces
peptdicos de las protenas. Las tres enzimas dividen
enlaces peptdicos en sustratos protenicos en el lado
del carboxilo de ciertos residuos de aminocidos.
La tripsina divide en el lado del carboxilo de residuos
de Lys o Arg con carga positiva, la quimotripsina divide
en el lado del carboxilo de residuos de aminocidos aro-
mticos e hidrfobos voluminosos y la elastasa divide
en el lado del carboxilo de residuos de aminocidos con
b)
Enzima Sustrato Complejo enzima-
sustrato
 D1INTRODUCCIN 83

cadenas laterales pequeas y sin carga. La naturaleza de
los distintos grupos de aminocidos en el sitio de unin
del sustrato determina sus diferentes especificidades,
sitios que son complementarios de los del sustrato sobre
el que actan. En consecuencia, la tripsina presenta un
residuo Asp con carga negativa en su sitio de unin del
sustrato que interacta con la carga positiva de las cade-
nas laterales de la Lys y la Arg del sustrato (figura D1-2a).
En su sitio de unin del sustrato, la quimotripsina tiene
residuos de aminocidos con cadenas laterales peque-
as como la Gly y la Ser que le dan acceso a la cadena
lateral voluminosa del sustrato (figura D1-2b). En con-
traste, la elastasa tiene las cadenas laterales sin carga
relativamente grandes de dos residuos de los aminoci-
dos Val que sobresalen en el sitio de unin del sustrato
y que evitan el acceso de todas las cadenas laterales
pequeas de la Gly y la Ala (figura D1-2c).
Clasicacin de las enzimas
Muchas enzimas se nombran aadiendo el sufijo -asa
al nombre de su sustrato. Por consiguiente, ureasa es
el nombre de la enzima que cataliza la hidrlisis de la
urea y la fructosa-1,6-bisfosfatasa hidroliza la fructosa-
1,6-bisfosfato. Pese a ello, otras enzimas como la tripsina
y la quimotripsina tienen nombres que no denotan su
sustrato. Algunas enzimas tiene varios nombres alterna-
tivos. Para racionalizar los nombres de las enzimas, se
acord un sistema internacional de nomenclatura de
enzimas. Este sistema coloca a las enzimas en una
de seis clases principales basadas en el tipo de reaccin
que catalizan (cuadro D1-1). De este modo, cada enzima
se identifica de manera exclusiva con un nmero de
clasificacin de cuatro partes. As, la tripsina tiene el
nmero de la Comisin de Enzimas (EC) 3.4.21.4, en
el que el primer nmero (3) significa que es una hidro-
lasa, el segundo nmero (4) denota que es una protea-
sa que hidroliza enlaces peptdicos, el tercer nmero
(21), que es una proteasa de serina con un residuo de
serina crtico en el sitio activo y el cuarto nmero (4)
indica que fue la cuarta enzima asignada a esta clase.
En comparacin, la quimotripsina tiene el nmero EC
3.4.21.1, y la elastasa el 3.4.21.36.
Ensayos enzimticos
La cantidad de protena enzimtica presente puede
determinarse (ensayarse) en trminos del efecto cata-
ltico que produce, es decir, la conversin de sustrato
en producto. Con el fin de ensayar (determinar la acti-

Cuadro D1-1. Clasicacin internacional de las enzimas

Clase Nombre Tipo de reaccin catalizada Ejemplo
1 Oxidorreductasas Transferencia de electrones A +BA+B

Deshidrogenasa
alcohlica
2 Transferasas Transferencia de grupos AB + C A + BC Hexocinasa
funcionales
3 Hidrolasas Reacciones de hidrlisis AB + H2O AH + Tripsina
BOH
4 Liasas Adicin o remocin de un AB A=B + XY Descarboxilasa
grupo para formar un enlace de piruvato
doble X Y
5 Isomerasas Transferencia de grupos AB AB Isomerasa de
dentro de la misma molcula malato
X Y Y X
6 Ligasas Formacin de enlaces A + B AB Carboxilasa de
(o sintasas) acoplada a la hidrlisis de piruvato
ATP
ATP, trifosfato de adenosina.

a) b) c)

O O Val Val
C Sitio de unin
del sustrato
Asp

Figura D1-2. Representacin esquemtica de los sitios de unin de sustrato en las

proteasas de serina: a) tripsina; b) quimotripsina; c) elastasa.
84 SECCIN D ENZIMAS
vidad) una enzima, debe conocerse la ecuacin total de
la reaccin catalizada y debe estar disponible un pro-
cedimiento analtico para determinar la desaparicin
del sustrato o la aparicin del producto. Adems, se de-
be tomar en cuenta si la enzima requiere cualquier
cofactor y el pH y la temperatura a los cuales la enzima
alcanza su actividad ptima (seccin D3). En las enzimas
de los mamferos, la temperatura suele situarse den-
tro del rango de 25 a 37 C. Para finalizar, es esencial que
la velocidad de la reaccin que se ensaye sea una medida
de la actividad enzimtica presente y que un insuficiente
aporte de sustrato no la limite. Por tanto, suelen reque-
rirse muy altas concentraciones de sustrato, de manera
que la velocidad de la reaccin inicial, la cual se deter-
mina por medios experimentales, sea proporcional a la
concentracin de la enzima (seccin D3).
Se logra un ensayo ms conveniente de una enzima si se
mide la velocidad de aparicin del producto o la velo-
cidad de desaparicin del sustrato. Si el sustrato (o
producto) absorbe luz a una determinada longitud de
onda, pueden medirse los cambios en la concentracin
de tales molculas si se siguen los cambios en la absor-
bancia de esta longitud de onda mediante un espectro-
fotmetro. Si el sustrato (o producto) fluoresce (seccin
A4), los cambios en la concentracin pueden medirse si
se siguen los cambios en la fluorescencia con la ayuda
de un fluormetro. Como la absorbancia (o fluorescen-
cia) es proporcional a la concentracin, la tasa de cam-
bio en la absorbancia (o fluorescencia) es proporcional
a la tasa de actividad de la enzima en moles de sustrato
usados (o producto formado) por unidad de tiempo.
Dos molculas usuales usadas en la medicin de la
absorbancia en los ensayos enzimticos son las coenzi-
mas dinucletido de adenina y nicotinamida reducido
(NADH) y dinucletido de adenina y nicotinamida redu-
cido fosfato (NADPH) (abajo), las cuales se absorben en
la regin ultravioleta (UV) a 340 nm. Por consiguiente, si
durante el transcurso de la reaccin se producen NADHo
NADPH, habr un incremento relativo de la absorbancia a
340 nm, mientras que si la reaccin incluye la oxidacin
de NADH o NADPH a NAD+ o NADP+, respectivamente, habr
una disminucin correspondiente de la absorbancia, ya
que estas formas oxidadas no absorben a 340 nm. Un
ejemplo lo representa la deshidrogenasa de lactato, cuya
actividad con el lactato como sustrato puede ensayarse
Glucosa + O2 + H2O
Oxidasa de glucosa
cido glucnico + H2O2
Compuesto incoloro
Peroxidasa
Compuesto coloreado oxidado
H2 O
Figura D1-3. Un ensayo de enzima ligada con la oxidasa de glucosa y la peroxidasa
puede usarse para medir la cantidad de glucosa de una muestra de sangre.
si se sigue el incremento de la absorbancia a 340 nm, de
acuerdo con la siguiente ecuacin:
CH3CH(OH)COO + NAD+ CH3COCOO + NADH + H+
lactato piruvato
Ensayos de enzimas ligadas
Numerosas reacciones no incluyen sustratos o produc-
tos que absorben la luz a una longitud de onda adecuada.
En estos casos, es con frecuencia posible ensayar la
enzima que cataliza dicha reaccin si se la liga (o acopla)
a una segunda reaccin enzimtica que no incluye un
cambio de la absorbancia caracterstico. Por ejemplo, la
accin de la enzima oxidasa de glucosa, la cual se utili-
za con frecuencia para medir la concentracin de glucosa
en la sangre de los pacientes diabticos, no resulta en un
cambio de la absorbancia despus de la conversin de
los sustratos en productos (figura D1-3). Sin embargo, el
perxido de hidrgeno que se produce en esa reaccin
puede ser activado por una segunda enzima, la peroxi-
dasa, la cual convierte de manera simultnea un com-
puesto incoloro en uno coloreado (cromgeno), cuya
absorbancia puede medirse con facilidad (figura D1-3).
Si la actividad de la primera enzima (oxidasa de glucosa)
se pretende medir con exactitud, la segunda enzima
(peroxidasa) y sus cosustratos o coenzimas (abajo) de-
ben estar en exceso para no convertirse en el paso que
limite la velocidad del ensayo ligado. Ello asegura que la
tasa de produccin del cromgeno coloreado es propor-
cional a la tasa de produccin de H2O2, cuya produccin
a su vez es proporcional a la actividad de la oxidasa de
glucosa.
Coenzimas y grupos prostticos
Muchas enzimas requieren la presencia de pequeas
unidades no protenicas o cofactores para llevar a
cabo su reaccin particular. Los cofactores pueden ser
uno o ms iones inorgnicos, como el Zn2+ o el Fe2+,
o una molcula orgnica compleja llamada coenzima.
Un metal o coenzima que se mantenga unido en forma
covalente a la enzima se denomina grupo prosttico
(consultar el hemo de la hemoglobina; vase seccin B3).
Una enzima activa y completa desde el punto de vista
cataltico junto a su coenzima o ion metlico se llama
 D1INTRODUCCIN 85

holoenzima. La parte protenica sola de la enzima sin
su cofactor se denomina apoenzima. Algunas coenzi-
mas, como el NAD+, estn unidas y se liberan de la enzima
durante su ciclo cataltico y en efecto funcionan como
cosustratos. Muchas coenzimas derivan de precursores
de las vitaminas (cuadro D1-2), los cuales suelen ser
constituyentes esenciales de la dieta del organismo y en
consecuencia dan origen a enfermedades por deficien-
cia cuando se produce un aporte inadecuado.
Las coenzimas dinucletido de adenina y nicotina-
mida (NAD+) y dinucletido de adenina y nicotinamida
fosfato (NADP+) se basan en una estructura comn que
consiste en la base adenina, dos ribosas ligadas por gru-
pos fosfato y un anillo de nicotinamida (figura D1-4).
La NADP+ difiere de la NAD+ en que tiene un grupo fosfato
adicional fijo a una de las ribosas (figura D1-4). Estas
dos coenzimas comparten una funcin comn ya que
ambas actan como transportadoras de electrones y
participan en las reacciones de oxidorreduccin. La NAD+
es de empleo ms comn en las reacciones catablicas
(degradativas), mientras que la NADP+ interviene ms en
las reacciones anablicas (biosintticas). La parte reac-
tiva de ambas molculas es el anillo de nicotinamida,
el cual existe en un estado oxidado o reducido y debido
a ello acta como aceptor o donador de electrones en
una reaccin enzimtica. La reaccin tambin incluye la
transferencia de protones, de acuerdo con la ecuacin:
NAD+ + H+ + 2e NADH

Cuadro D1- 2. Algunas coenzimas comunes, sus vitaminas precursoras y las

enfermedades que produce su deciencia
Coenzima Precursor Enfermedad que provoca su
deficiencia
Coenzima A cido pantotnico Hipertensin
FAD, FMN Riboflavina (vitamina B2) Dermatitis
+ +
NAD , NADP Niacina (cido nicotnico) Pelagra (dermatitis, depresin, diarrea)
Pirofosfato de tiamina Tiamina (vitamina B1) Beriberi (prdida de peso, trastornos
cardiacos, disfuncin neurolgica)
Tetrahidrofolato cido flico Anemia, defectos del tubo neural en
desarrollo
Desoxiadenosilcobalamina Cobalamina (vitamina B12) Anemia perniciosa
Vitamina C (cido ascrbico) Escorbuto (encas tumefactas y
sangrantes, hemorragias subdrmicas)
Fosfato de piridoxal Piridoxina (vitamina B6) Depresin, confusin, convulsiones
FAD,dinucletido de adenina y flavina; FMN, mononucletido de flavina; NAD+, dinucletido de adenina y nicotina-
mida; NADP+, dinucletido de adenina y nicotinamida fosfato.

Figura D1-4. Estructuras de las coenzimas NAD+ y NADP+.

86 SECCIN D ENZIMAS
El dinucletido de adenina y flavina (FAD) y el mononu-
cletido de flavina (FMN) son asimismo transportadores
de electrones y presentan estructuras qumicas relacio-
nadas (figura D1-5). Ambas coenzimas constan de una
unidad de mononucletido de flavina, que es la que
contiene el sitio activo. La FAD tiene un azcar adicional
y una base adenina, que completan su estructura. La FAD y
la FMN reaccionan con dos protones, as como con dos
electrones, en alternancia entre el estado reducido y el
oxidado:
FAD + 2H+ + 2e FADH2
Isozimas
Las isozimas (isoenzimas) son formas diferentes de una
enzima que catalizan la misma reaccin, pero que exhi-
ben diferentes propiedades fsicas o cinticas, como el
punto isoelctrico, el pH ptimo, la afinidad por el sus-
trato o el efecto de los inhibidores. Diferentes formas
de isozimas de una determinada enzima derivan por lo
general de genes distintos y suelen encontrarse en dife-
rentes tejidos del cuerpo.
Un ejemplo de una enzima que presenta diferentes
formas de isozimas es la deshidrogenasa de lactato
(LDH), que cataliza la conversin reversible de lactato en
piruvato en presencia de la coenzima NADPH (vase
antes). La LDH es un tetrmero de dos tipos distintos
de subunidades, llamadas H y M, las cuales exhiben
Figura D1-5. Estructuras de las coenzimas FAD y FMN.
pequeas diferencias en la secuencia de aminocidos.
Las dos subunidades pueden combinarse al azar entre
ellas y formar cinco isozimas que tienen las composi-
ciones H4, H3M, H2M2, HM3 y M4. Las cinco isozimas se pue-
den resolver por medio de la electroforesis (seccin
C2). Las subunidades M predominan en el msculo
esqueltico y el hgado, en tanto que las subunida-
des H predominan en el corazn. Las subunidades H4
y H3M son predominantes en el corazn y los glbulos
rojos, H2M2 se encuentra sobre todo en el cerebro, mien-
tras que HM3 y M4 son ms frecuentes en el hgado y el
msculo esqueltico. Lo anterior deja ver que el patrn
de isozimas es caracterstico de un tejido en particu-
lar, un factor de una inmensa importancia diagnstica
para la medicina. El infarto del miocardio, la hepatitis
infecciosa y las enfermedades musculares incluyen
la muerte celular en el tejido afectado, con liberacin
del contenido celular a la sangre. Como la LDH es una
protena citoslica soluble, se libera con facilidad en
las afecciones anteriores. En circunstancias normales,
hay poca LDH en sangre. Por tanto, el patrn de isozimas
LDH en la sangre es indicativo del tejido que las liber y
de esta manera puede utilizarse para diagnosticar una
afeccin y para vigilar el progreso del tratamiento. Para
el diagnstico clnico del infarto del miocardio, adems
del patrn de isozimas LDH, se miden de rutina otras en-
zimas, como la cinasa de creatina y la aminotrans-
ferasa de aspartato, junto con un electrocardiograma
(ECG).
SECCIN D ENZIMAS

D2Termodinmica
Notas clave
Termodinmica
Energa de activacin y
estado de transicin
G). Una enzima estabiliza el estado de
G) y de ese modo incrementa la velocidad a la que
Cambio de energa libre
G). Una
G negativa indica que la
G positiva indica que la reaccin
Equilibrios qumicos
Temas relacionados
El conocimiento de la termodinmica, que describe la interrelacin entre las
diversas formas de energa y de qu manera sta afecta la materia, permite
determinar si un proceso fsico es posible. La primera y segunda leyes de la
termodinmica estn combinadas en la funcin de la termodinmica, la ener-
ga libre (G). La unidad de energa es el Julio (J) o la calora (cal).
Para que una reaccin qumica tenga lugar, debe superarse la barrera de ener-
ga necesaria para transformar las molculas del sustrato a su estado de transi-
cin. El estado de transicin tiene la energa libre ms alta de una reaccin. La
diferencia en energa libre entre el sustrato y el estado de transicin se llama
energa libre de activacin de Gibbs (
transicin y reduce la (
sucede la reaccin.
La diferencia en el nivel de energa entre los sustratos y los productos se deno-
mina cambio en la energa libre de Gibbs (
reaccin es favorable desde la perspectiva termodinmica de la direccin ms
conveniente de la misma, mientras que una
es desfavorable desde la perspectiva termodinmica y requiere un aporte de
energa para que evolucione en la direccin conveniente. Una reaccin des-
favorable desde el punto de vista energtico obedece con frecuencia a que
la misma se liga a una reaccin favorable desde el punto de vista energtico,
como la de la hidrlisis del trifosfato de adenosina (ATP).
De manera habitual, una reaccin qumica existe en estado de equilibrio din-
mico. La constante de equilibrio (K) define la relacin de las concentraciones de
sustrato y de producto en equilibrio. Las enzimas no modifican la posicin
de equilibrio, pero aceleran la consecucin de la posicin de equilibrio al ace-
lerar las reacciones hacia delante y hacia atrs.
(D1) Introduccin a las enzimas (D4) Inhibicin enzimtica
(D3) Cintica de las enzimas (D5) Regulacin de la actividad
enzimtica

Termodinmica denomina el entorno. La primera ley de la termodin-

El conocimiento de la termodinmica permite deter- mica, una declaracin matemtica de la ley de conser-
minar si un proceso fsico es posible y se requiere para vacin de la energa, establece que la energa total de un
comprender por qu las protenas se pliegan en su con- sistema y su entorno es una constante:
formacin nativa, por qu algunas reacciones catalizadas
por enzimas requieren un aporte de energa, cmo los E = EB EA = Q W
msculos generan la fuerza mecnica, entre tantas ms.
en la cual EA es la energa del sistema al comienzo del
La termodinmica (de las palabras griegas therme, calor y
proceso y EB, al final del proceso. Por su parte, Q es
dynamis, poder) es la descripcin de la interrelacin entre
el calor absorbido por el sistema y W es el trabajo efec-
las diferentes formas de energa y de qu forma la energa
tuado por el sistema. El cambio en la energa de un sis-
afecta la materia a nivel macroscpico. Como se aplica a
tema depende slo de los estados inicial y final y no de
la bioqumica, la termodinmica se interesa con frecuen-
la forma en que se alcanza dicho estado. Los procesos
cia en describir las condiciones bajo las cuales los proce-
en los cuales el sistema libera calor (es decir que tiene
sos se producen de manera espontnea (por s mismos).
una Q negativa) se conocen como procesos exotrmicos
En la termodinamia, un sistema es la materia dentro de y aqullos en los que el sistema gana calor (es decir que
una regin definida. La materia del resto del universo se tienen una Q positiva) se conocen como endotrmicos.
88 SECCIN D ENZIMAS

La unidad de energa del SI es el Julio (J), aunque la calo- cambio de la energa libre G de una reaccin es un cri-
ra (cal) todava se usa con frecuencia (1 kcal = 4.184 kJ). terio valioso para saber si esa reaccin puede ocurrir de
manera espontnea:
La primera ley de la termodinmica no puede usarse para
predecir si una reaccin puede suceder de manera espon-
Una reaccin puede suceder de manera espontnea
tnea ya que algunas reacciones espontneas tienen una slo si G es negativa
E positiva. Por tanto, se requiere una funcin de E dife-

Un sistema est en equilibrio si la G es cero
rente. Una de tales funciones es la entropa (S), la cual es
una medida del grado de imprevisibilidad o desorden de
Una reaccin no se puede producir de manera espon-
un sistema. La entropa de un sistema se incrementa ( S) es tnea si la G es positiva. Se necesita un aporte de
positiva cuando el sistema se desordena ms. La segunda energa para impulsar una reaccin
ley de la termodinmica establece que un proceso puede

La G de una reaccin es independiente de la va de
producirse de forma espontnea slo si la suma de las
la transformacin
entropas del sistema y de su entorno aumenta (o que
el universo tiende al desorden mximo), esto es:
La G no proporciona informacin acerca de la velo-
cidad de una reaccin
(Ssistema+Sentorno)>0 para un proceso espontneo.
Sin embargo, usar la entropa como criterio para saber si Energa de activacin y estado
un proceso bioqumico puede ocurrir en forma espont- de transicin
nea es difcil porque los cambios entrpicos de las reac-
Los cambios de energa que tienen lugar durante el
ciones qumicas no son fciles de medir y debe cono-
curso de una reaccin bioqumica particular se mues-
cerse el cambio entrpico del sistema y de su entorno.
tran en la figura D2-1. En todas las reacciones, existe una
Estas dificultades se resuelven al usar una funcin ter-
barrera de energa que debe superarse para que la reac-
modinmica diferente, la energa libre (G), propuesta
cin tenga lugar. sta es la energa necesaria para trans-
por Josiah Willard Gibbs, la cual combina la primera y la
formar las molculas del sustrato y llevarlas al estado
segunda leyes de la termodinmica:
de transicin una forma qumica parcialmente ines-
G = H T S table entre los sustratos y los productos. El estado de
transicin ostenta la energa libre ms alta de cualquier
en la cual G es la energa libre de un sistema que sufre componente de la reaccin. La energa de activacin
una transformacin a una presin (P) y una temperatura libre de Gibbs ( G) es igual a la diferencia en energa li-
(T) constantes, H es el cambio en la entalpa (conte- bre entre el estado de transicin y el sustrato (figura
nido de calor) del sistema, y S es el cambio en la entro- D2-1). Una enzima trabaja mediante la estabilizacin
pa del sistema. El cambio de entalpa est dado por: del estado de transicin de una reaccin qumica y por
reduccin de la G (figura D2-1). La enzima no altera
H = E + P V. los niveles de energa de los sustratos o los productos.
El cambio de volumen ( V) es escaso en casi todas las Por consiguiente, una enzima incrementa la velocidad
reacciones bioqumicas y por ello H es casi igual a E. a la cual sucede la reaccin, pero carece de efecto en el
Por consiguiente: cambio total de energa de la reaccin.

G = E T S. Cambio de energa libre

As, la G de una reaccin depende del cambio de ener- El cambio en la energa libre de Gibbs ( G) determina
ga interno y del cambio de la entropa del sistema. El si una reaccin ser favorable o no desde el punto de

Reaccin no catalizada
por una enzima Estado de transicin

S = sustratos
P = productos
+
Energa libre

G+
Reaccin catalizada
por una enzima
S

G
P

Progreso de la reaccin

Figura D2-1. Los cambios energticos tienen lugar durante el curso de una
reaccin bioqumica.
 D2TERMODINMICA 89

vista energtico. La figura D2-1 muestra un ejemplo en
el que el cambio en la energa total de la reaccin la hace
favorable desde el punto de vista energtico (esto es, los
productos estn en un nivel de energa ms bajo que
los sustratos y la
G es negativa). Es necesario destacar
que la
G no guarda relacin con la
G. La
G de una 104 s1
reaccin es independiente de la va de la reaccin y no
suministra informacin sobre la velocidad de la reaccin
ya que sta depende de
G. Una
G negativa indica que
la reaccin es favorable desde la perspectiva termodin-
mica y en que va en la direccin indicada (es decir, es
probable que ocurra sin un aporte de energa), mientras
que una G positiva indica que la reaccin es desfavora-
ble desde la perspectiva termodinmica y requiere un
aporte de energa para proseguir en la direccin indi-
cada. En los sistemas bioqumicos, este aporte de energa
se logra con frecuencia al acoplar una reaccin energ-
ticamente desfavorable con otra ms favorable desde el
punto de vista energtico (reacciones acopladas).
Suele resultar conveniente referirse a la
G bajo un con- donde los corchetes indican concentracin. La cons-
junto estndar de condiciones, definidas como cuando
los sustratos y productos de una reaccin estn presen-
tes a concentraciones de 1.0 M y la reaccin tiene lugar
a un pH constante de 7.0. Bajo estas condiciones, se
encuentra un valor ligeramente favorable de
G que K = k = 6 = 100
se denomina
G. Un ejemplo de una reaccin favo-
rable desde el punto de vista energtico, que tiene una
gran
G negativa y se usa de manera habitual para
dirigir reacciones menos favorables desde el punto de
vista energtico, es la hidrlisis del trifosfato de adeno-
sina (ATP; figura D2-2) para formar difosfato de adenosi-
na (ADP) y fosfato inorgnico libre (Pi):
ATP + H2O ADP + Pi
G 0 = 30.5 kJ mol1 consecucin de la posicin de equilibrio, pero no des-
7.3 kcal mol1
Equilibrios qumicos
De manera habitual, una reaccin qumica existe en
un estado de equilibrio dinmico, donde a pesar de
que nuevas molculas de sustrato y producto se estn
transformando y formando de manera continua, el
cociente entre sustrato y producto se conserva en un
valor constante.
Considrese la reaccin:
A B
106 s1
donde la velocidad de reaccin hacia delante es de 104
por segundo (s1) y la velocidad de reaccin hacia atrs
es de 106 s1. En equilibrio, el cociente de las concen-
traciones del sustrato y el producto da un valor cons-
tante, conocido como constante de equilibrio (K). La
constante de equilibrio para una reaccin determinada
se define como:
[productos]eq [B]eq
K= =
[reactantes]eq [A]eq
tante de equilibrio tambin es dada por el cociente entre
la velocidad de reaccin hacia delante (kf) y la velocidad
de reaccin hacia atrs (kb):
kf 104
b 10
Por consiguiente, para las reacciones en equilibrio de
arriba, hay 100 veces ms de producto B que de sus-
trato A, con prescindencia de que haya enzima presente
o no. Lo anterior se debe a que las enzimas no alteran la
posicin de equilibrio de una reaccin, porque aceleran
las reacciones hacia delante y hacia atrs en la misma
extensin. En otras palabras, las enzimas aceleran la
van su posicin. En el caso de la reaccin hipottica que
se muestra arriba, en ausencia de la enzima aadida,
la reaccin puede tomar ms de una hora para alcan-
zar la posicin de equilibrio, mientras que en presencia
de la enzima la posicin de equilibrio puede lograrse en
menos de un segundo.

NH2

C N
N C
CH
O O O HC C
N N
O P O P O P OCH2 O

O O O H H
H H

HO HO
Adenosina
AMP
ADP
ATP

Figura D2-2. Estructura del ATP, ADP, AMP y la adenosina.

SECCIN D ENZIMAS

D3Cintica enzimtica
Notas clave
Velocidad enzimtica De manera habitual, la actividad enzimtica se expresa por la velocidad inicial
(V0) de la reaccin que est catalizando. Las unidades de V0 son mol min1, las
cuales tambin pueden representarse por la unidad (U) de la enzima, donde 1
mol min1 = 1 U. El trmino actividad (o actividad total) se refiere a las unida-
des totales de enzima en una muestra, en tanto que la actividad especfica es el
nmero de unidades por miligramo de protena (unidades mg-1).
Sustrato y concentracin A concentraciones de sustrato ([S]) bajas, una duplicacin de [S] conduce a
de la enzima duplicar V0, mientras que a [S] ms altas la enzima se satura y no se producen
incrementos adicionales de V0. Una grfica de V0 contra [S] da una curva hiper-
blica. Cuando [S] est saturada, una duplicacin de la concentracin de la
enzima lleva a una duplicacin de V0.
Temperatura La temperatura afecta la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima
al aumentar la energa trmica de las molculas de sustrato. Esto incrementa
la proporcin de molculas con energa suficiente para superar la barrera de
activacin y por consiguiente incrementa la velocidad de la reaccin. Adems,
la energa trmica de las molculas que componen la enzima aumenta, lo que
conduce a una velocidad mayor de desnaturalizacin de la protena enzimtica
debido a la rotura de las interacciones no covalentes que mantienen la estruc-
tura unida.
pH Cada enzima tiene un pH ptimo al cual la velocidad de la reaccin que cataliza
se encuentra al mximo. Pequeas desviaciones del pH desde el ptimo llevan
a una disminucin de la velocidad de la reaccin. Mayores desviaciones del pH
conducen a la desnaturalizacin de la enzima debido a cambios en la ionizacin
de los residuos de aminocidos y a la rotura de las interacciones no covalentes.
Modelo de El modelo de Michaelis-Menten usa el siguiente concepto de catlisis enzim-
Michaelis-Menten tica:
k1 k3
E+S ES E + P
k2

donde las constantes de velocidad k1, k2 y k3 describen las velocidades que

corresponden a cada paso del proceso cataltico. A una [S] baja, V0 es directa-
mente proporcional a [S], mientras que a una [S] alta la velocidad tiende a la
velocidad mxima (Vmx). La ecuacin de Michaelis-Menten:

Vmx [S]
V0 = Km + [S]

describe estas observaciones y predice una curva hiperblica de V0 contra [S].

La constante de Michaelis, Km, es igual a la suma de las velocidades de rotura del
complejo enzima-sustrato sobre su velocidad de formacin y es una medida
de la afinidad de una enzima por su sustrato.
Grca de Lineweaver- Vmx y Km pueden determinarse por medios experimentales si se mide V0 a dife-
Burk rentes concentraciones del sustrato y luego se grafica 1/V0 contra 1/[S] en una
doble grfica recproca de Lineweaver-Burk. La interseccin del eje y es igual
a 1/Vmx, la interseccin del eje x es igual a 1/Km y la inclinacin de la lnea es
igual a Km/Vmx.

Temas relacionados (B2) Estructura y funcin de las
protenas
(D1) Introduccin a las enzimas
(D2) Termodinmica
Velocidad enzimtica
La tasa de una reaccin catalizada por una enzima se
denomina con frecuencia su velocidad. Las velocidades
de las enzimas se reportan de manera habitual como
valores en tiempo cero (velocidad inicial, smbolo V0;
mol min1), ya que la velocidad se acelera en el punto
donde todava no hay producto presente. Esto es as
debido a que la concentracin de sustrato es mayor
antes de que cualquier sustrato se haya transformado en
producto, porque las enzimas pueden ser sujeto de inhi-
bicin por retroalimentacin por sus propios produc-
tos, porque con una reaccin reversible los productos
impulsarn la reaccin hacia atrs, o ambas cosas. De
manera experimental, V0 se mide antes de que alrededor
de 10% del sustrato se haya convertido en el producto
con el fin de minimizar tales factores de complicacin.
Una grfica de producto formado contra tiempo tpica
de una reaccin catalizada por una enzima muestra un
periodo inicial de formacin rpida del producto, la cual
da la porcin lineal de la grfica (figura D3-1). Esto es
seguido por una inclinacin hacia abajo de la velocidad
de la enzima a medida que el sustrato se usa o que la
enzima pierde actividad o ambas. La V0 se obtiene al
dibujar una lnea recta a travs de la parte lineal de la
curva que comience en el punto temporal cero (figura
D3-1). La inclinacin de esta lnea recta es igual a V0.
Unidades enzimticas
La actividad enzimtica puede expresarse en varias for-
mas. La ms comn es por la velocidad inicial (V0) de
la reaccin que est catalizando (es decir, mol de sus-
trato transformado por minuto; mol min1). Tambin
hay una unidad estndar de actividad enzimtica, la
unidad enzima (U). Una unidad enzima es la cantidad
de enzima que cataliza la transformacin de 1 mol de
sustrato por minuto a 25 C bajo condiciones ptimas
para la enzima (es decir, 1 mol min1 = 1 U). El trmino
V0
Cantidad formada de
producto (mol)
Figura D3-1. Interrelacin entre la formacin del producto y el tiempo para una
reaccin catalizada por una enzima.
D3CINTICA ENZIMTICA 91
(D4) Inhibicin enzimtica
(D5) Regulacin de la actividad
enzimtica
actividad (o actividad total) se refiere a las unidades
totales por miligramo de protena (unidades mg1). La
actividad especfica es una medida de la pureza de una
enzima; durante la purificacin de la enzima, su acti-
vidad especfica se incrementa y se vuelve mxima y
constante cuando la enzima es pura.
Sustrato y concentracin enzimtica
El patrn normal de dependencia de la velocidad de la
enzima de la concentracin de sustrato [S] es tal que,
a concentraciones bajas de sustrato, la duplicacin de
[S] conduce a la duplicacin de la velocidad inicial (V0).
Sin embargo, a concentraciones ms altas del sustrato
la enzima se satura y los incrementos adicionales de [S]
llevan a cambios escasos en la V0. Lo anterior sucede
debido a que, a concentraciones saturantes de sustrato,
todas las molculas de la enzima estn efectivamente
unidas al sustrato. Ahora, la velocidad global de la
enzima depende de la velocidad a la cual el producto
puede disociarse de la enzima y la aadidura adicio-
nal de sustrato no la modificar. La forma de la grfica
resultante cuando V0 se representa contra [S] se llama
curva hiperblica (figura D3-2).
En situaciones en las que concentracin de sustrato
es saturante (es decir, cuando todas las molculas de
enzima estn unidas al sustrato), una duplicacin de la
concentracin de la enzima conduce a duplicar la V0.
Esto produce una grfica de lnea recta, cuando V0 se
representa contra la concentracin de la enzima.
Temperatura
La temperatura afecta la velocidad de las reacciones ca-
talizadas por enzimas de dos formas. Primero, un au-
mento de la temperatura incrementa la energa trmica
de las molculas del sustrato. Ello aumenta la propor-
cin de molculas del sustrato con energa suficiente
Tiempo (min)
92 SECCIN D ENZIMAS
Figura D3-2. Interrelacin entre [S] y V0.
para superar la energa libre de Gibbs de activacin
(
G) (seccin D2) y as incrementar la velocidad de la
reaccin. No obstante, un segundo elemento entra en
juego a temperaturas ms altas. El aumento de la ener-
ga trmica de las molculas que forman la estructura
protenica de la enzima en s mismo eleva las posibi-
lidades de romper las mltiples interacciones dbiles
y no covalentes (enlaces de hidrgeno, fuerzas de van
der Waals, etc.), las cuales mantienen la estructura tri-
dimensional de la enzima junta (seccin B2). En ltima
instancia, lo anterior lleva a la desnaturalizacin (des-
plegamiento) de la enzima, pero incluso pequeos cam-
bios en la forma tridimensional de la enzima pueden
alterar el sitio activo y conducir a una disminucin de
la actividad cataltica. El efecto total de un aumento en la
temperatura en la velocidad de la reaccin de la enzima
es un balance entre estos dos efectos opuestos. Una gr-
fica de la temperatura trazada contra la V0 mostrar en
consecuencia una curva, con una bien definida tem-
peratura ptima (figura D3-3a). Para muchas enzimas
de los mamferos, sta ronda los 37 C, pero hay algu-
nos organismos que tienen enzimas adaptadas que tra-
bajan a temperaturas considerablemente ms altas o
ms bajas. Por ejemplo, la polimerasa Taq, que se usa
en la reaccin en cadena de la polimerasa (seccin I6),
se encuentra en una bacteria que vive a altas tempera-
turas en aguas termales y por tanto est adaptada para
trabajar de manera ptima a altas temperaturas.
pH
Cada enzima tiene su pH ptimo al cual la velocidad
de la reaccin que cataliza se encuentra al mximo.
a)
V0
4 37 50
Temperatura (C)
Figura D3-3. Efecto de la a) temperatura y b) el pH sobre la actividad enzimtica.
Pequeas desviaciones del pH desde el valor ptimo lle-
van a que la actividad disminuya debido a cambios en
la ionizacin de los grupos del sitio activo de la enzima.
Grandes desviaciones del pH conducen a la desnatura-
lizacin de la protena de la enzima en s misma debido
a la interferencia con los numerosos enlaces dbiles no
covalentes que mantienen su estructura tridimensional.
Una grfica de V0 trazada contra el pH muestra por lo
general una curva en forma de campana (figura D3-3b).
Muchas enzimas tienen un pH ptimo de alrededor de
6.8, pero existe una gran diversidad en el pH ptimo
de las enzimas debido a los diferentes ambientes a los
que se adaptan para trabajar. Por ejemplo, la enzima
digestiva pepsina est adaptada a trabajar en el pH
cido del estmago (alrededor de pH 2.0).
Modelo de Michaelis-Menten
El modelo de Michaelis-Menten usa el siguiente con-
cepto de catlisis enzimtica:
k1 k3
E+S ES E + P
k2
La enzima (E) se combina con su sustrato (S) para for-
mar el complejo enzima-sustrato (ES). El complejo ES
puede disociarse para dar origen otra vez a E+S o pue-
de proceder de forma qumica para formar E y el produc-
to P. Las constantes de velocidad k1, k2 y k3 describen las
velocidades inherentes a cada paso del proceso catal-
tico. Se asume que no existe velocidad significativa para
que la reaccin hacia atrs de enzima y producto (E+P)
b)
V0 Enzima 2
Enzima 1
4 5 6 7 8 9
pH

los convierta en el complejo ES. El [ES] permanece aproxi-
madamente constante hasta que se consume casi todo el
sustrato, por lo que la tasa de sntesis de ES se equipara
con su tasa de consumo durante la mayor parte del curso
de la reaccin, es decir que [ES] se mantiene en un estado
estable. A partir de la observacin de las propiedades de
muchas enzimas se supo que la velocidad inicial (V0) a
bajas concentraciones de sustrato es directamente pro-
porcional a [S], en tanto que a concentraciones altas de
sustrato la velocidad tiene a alcanzar su valor mximo,
que es la velocidad que se vuelve independiente de [S]
(figura D3-4a). Esta velocidad mxima se llama Vmx
(unidades de mol min1). La velocidad inicial (V0) es
la velocidad medida de manera experimental antes de
que ms de alrededor de 10% del sustrato se convierta
en producto con el fin de minimizar factores que com-
plican, como los efectos de las reacciones reversibles, la
inhibicin de la enzima por el producto y la inactivacin
progresiva de la enzima (vase antes).
Michaelis y Menten elaboraron una ecuacin que des-
cribe estas observaciones, la ecuacin de Michaelis-
Menten:
Vmx [S]
V0 = K + [S]
m
La ecuacin describe una curva hiperblica del tipo de la
que se muestra para los datos experimentales en la figura
D3-1. Mientras resolvan la ecuacin, Michaelis y Men-
ten definieron una nueva constante, Km, la constante de
Michaelis [unidad: Molar (es decir, por mol), M]:
k2 + k3
Km =
k1
La Km es una medida de la estabilidad del complejo ES,
que es igual a la suma de las velocidades de rotura del ES
sobre su velocidad de formacin. Para muchas enzimas,
k2 es mucho mayor que k3. Bajo esas circunstancias, Km
se convierte en una medida de la afinidad de una
enzima por su sustrato ya que su valor depende de los
valores relativos de k1 y k2 para la formacin y disocia-
cin de ES, respectivamente. Una Km alta significa unin
a)
V0 Vmx
Vmx/2
Interseccin = 1/Km
Km
[S]
Figura D3-4. Interrelacin entre [S] y V0: a) grca directa; b) grca doble
recproca de Lineweaver-Burk.
D3CINTICA ENZIMTICA 93
al sustrato dbil (k2 predomina sobre k1), una Km baja
significa unin al sustrato fuerte (k1 predomina sobre
k2). En la mayora de las enzimas, Km se ubica entre 101
y 107 M. La Km puede determinarse de forma experi-
mental por el hecho de que su valor equivale a la con-
centracin del sustrato a la cual la velocidad es igual a
la mitad de la Vmx.
Grca de Lineweaver-Burk
Debido a que la Vmx se alcanza a infinitas concentra-
ciones de sustrato, es imposible estimarla (y en con-
secuencia la Km) si se parte de una grfica hiperblica,
como se muestra en la figura D3-4a. Pese a ello, la Vmx
y la Km pueden determinarse de manera experimental si
se mide la V0 a diferentes concentraciones del sustrato
(figura D3-1). Por consiguiente, se hace una grfica rec-
proca doble o grfica de Lineweaver-Burk de 1/V0 con-
tra 1/[S] (figura D3-4b). De manera alternativa, puede
utilizarse un programa de computadora apropiado de
ajuste de curvas con los datos de la figura D3-4a. La gr-
fica de Lineweaver-Burk es una derivacin de la ecua-
cin de Michaelis-Menten:
1 1 Km 1
.
V0 = Vmx + Vmx
[S]
la cual da una lnea recta, con la interseccin en el eje
de la y igual a 1/Vmx, y la interseccin en el eje de la x
igual a 1/Km. La inclinacin de la lnea es igual a Km/
Vmx (figura D3-4b). La grfica de Lineweaver-Burk es
tambin una forma til de determinar de qu manera
un inhibidor se une a una enzima (seccin D4). La Km y
la Vmx tambin pueden determinarse por medio de una
grfica de Eadie-Hofstee de V0/[S] contra V0, donde la
interseccin en el eje de la x es igual a Vmx y la inclina-
cin de la lnea es igual a 1/Km.
Aunque el modelo de Michaelis-Menten proporciona
un muy buen modelo de los datos experimentales de
muchas enzimas, unas pocas enzimas no satisfacen la
cintica de Michaelis-Menten. Estas enzimas, como
la transcarbamoilasa de aspartato, se llaman enzimas
alostricas (seccin D5).
b)
1/V0
Inclinacin = Km/Vmx
Interseccin = 1/Vmx
1/[S]
SECCIN D ENZIMAS

D4Inhibicin enzimtica
Notas clave
Inhibicin enzimtica Las molculas inhibidoras pueden reducir la velocidad cataltica de una enzima.
Existen muchos inhibidores, como los metabolitos normales del cuerpo, frma-
cos y toxinas externas. La inhibicin enzimtica puede ser de dos tipos princi-
pales: irreversible o reversible. La inhibicin reversible se puede subdividir en
competitiva y no competitiva.
Inhibicin irreversible Un inhibidor irreversible se une de forma estrecha, con frecuencia mediante
enlaces covalentes, a los residuos de aminocidos del sitio activo de la enzima,
y al hacerlo inactiva de modo permanente a la enzima. Son ejemplos de inhi-
bidores irreversibles el diisopropilfosfofluoridato (DIPF), la yodoacetamida, la
aspirina y la penicilina.
Inhibicin competitiva Un inhibidor competitivo le disputa el sitio activo de la enzima a las molcu-
reversible las de sustrato. A concentraciones altas del sustrato, puede superarse el efecto
de un inhibidor competitivo. En la grfica de Lineweaver-Burk, se puede ver
que un inhibidor competitivo incrementa la Km, pero deja la Vmx sin cambio.
Inhibicin no competitiva Un inhibidor no competitivo se une a la enzima en un sitio diferente al sitio
reversible activo, y no obstante disminuye su velocidad cataltica porque modifica la con-
formacin tridimensional de la enzima. El efecto de un inhibidor no competi-
tivo no puede superarse ni con altas concentraciones del sustrato. En la grfica
de Lineweaver-Burk, se puede ver que un inhibidor no competitivo disminuye
la Vmx, pero deja la Km sin cambio.
Temas relacionados (D1) Introduccin a las enzimas (D5) Regulacin de la actividad
(D3) Cintica enzimtica enzimtica

Inhibicin enzimtica con un residuo aminocido reactivo situado en el sitio

Existen muchos tipos de molculas que son capaces
de interferir con la actividad de una enzima. Cualquier
molcula que acte en forma directa sobre una enzima
y disminuya la velocidad de su actividad cataltica se
denomina inhibidor. Algunos inhibidores enzimticos
son metabolitos normales del cuerpo que inhiben una
enzima particular como parte del control metablico
normal de una va. Otros inhibidores pueden ser sustan-
cias externas como los frmacos o las toxinas, de donde
el efecto del inhibidor enzimtico puede ser terapu-
tico o, en el otro extremo, letal. La inhibicin enzimtica
puede ser de dos tipos principales: irreversible o rever-
sible. La variedad reversible puede a su vez subdividirse
en inhibicin competitiva e inhibicin no competitiva.
La inhibicin reversible puede superarse si se remueve
al inhibidor de la enzima por dilisis, por ejemplo (sec-
cin C1), pero es imposible hacerlo en la inhibicin irre-
versible, por definicin.
Inhibicin irreversible
Los inhibidores que se unen de modo irreversible a una
enzima forman con frecuencia un enlace covalente
activo o cerca de ste, e inactivan en forma permanente
la enzima. Los residuos de aminocidos susceptibles
incluyen a los residuos de la Ser y la Cys, los cuales tie-
nen grupos reactivos OH y SH, respectivamente. El
compuesto diisopropilfosfofluoridato (DIPF) y la sarina,
un compuesto de estructura similar y componente
como el anterior de los gases nerviosos, reaccionan
con un residuo de Ser en el sitio activo de la enzima
acetilcolinesterasa y la inhiben de manera irreversible
y de esa manera impiden la transmisin de los impul-
sos nerviosos (figura D4-1a) (seccin E6). La yodoace-
tamida modifica los residuos Cys y por consiguiente
puede emplearse como herramienta diagnstica para
determinar si se requieren uno o ms residuos de Cys
para la actividad enzimtica (figura D4-1b). La aspirina
acta al modificar de forma covalente a la enzima sin-
tasa de prostaglandina H2, con lo cual reduce la snte-
sis de seales inflamatorias (seccin K1). El antibitico
penicilina inhibe de manera irreversible a la transpep-
tidasa de glucopptido, enzima que forma enlaces cru-
zados en la pared de la clula bacteriana, al fijarse por
enlaces covalentes a un residuo de Ser del sitio activo
de la enzima (seccin A1). La penicilina accede al sitio
 D4INHIBICIN ENZIMTICA 95

a) H H
H3C C CH3 H3C C CH3
O O
Enzima CH2OH + F P O Enzima CH2 O P O + HF
O O
H3 C C CH3 H3C C CH3
H H
DIPF
b) O O

Enzima CH2SH + ICH2 C NH2 Enzima CH2 S CH2 C NH2 + HI

Yodoacetamida

Figura D4-1. Estructura y mecanismo de accin de: a) DIPF; b) yodoacetamida.

activo de la enzima debido a que imita a una parte de la
D-Ala-D-Ala del sustrato normal. En estas circunstancias,
la transpeptidasa une a la penicilina en forma covalente
a su residuo de Ser del sitio activo. Por tanto, la penici-
lina acta como un inhibidor suicida.
Inhibicin competitiva reversible
De manera tpica, un inhibidor competitivo presenta
similitudes estructurales cercanas a las del sustrato
normal de la enzima. En consecuencia, compite con las
molculas del sustrato para unirse al sitio activo (figura
D4-2a). La enzima puede unirse a la molcula del sus-
trato o a la molcula del inhibidor, pero no a las dos al
mismo tiempo (figura D4-2a). El inhibidor competitivo
se une en forma reversible al sitio activo. A concentra-
ciones del sustrato altas, la accin del inhibidor com-
petitivo es superada debido a que la concentracin lo
suficientemente alta de sustrato elimina con xito a la
molcula del inhibidor del sitio activo. Por tanto, no hay
cambio en la Vmx de la enzima, pero la aparente afini-
dad de la enzima por su sustrato decrece en presencia
del inhibidor competitivo y por consiguiente la Km se
incrementa.
La deshidrogenasa de succinato representa un buen
ejemplo de inhibicin competitiva. El succinato es el
sustrato de la enzima, pero el malonato lo inhibe por
competencia y difiere del succinato por la presencia de
un grupo metileno en lugar de dos (figura D4-3).
Muchos frmacos actan porque su estructura se
parece mucho a la del sustrato de la enzima objetivo,
y por tanto actan como inhibidores competitivos de
la enzima. Por ejemplo, el metotrexato, un anlogo
estructural de la coenzima tetrahidrofolato (seccin
D1), a la cual requiere la enzima reductasa de dihidro-
folato en la sntesis de purinas y pirimidinas, se usa en
el tratamiento del cncer. Los inhibidores de la enzima
convertidora de angiotensina, como el captoprilo, se
usan en el tratamiento de la hipertensin (presin arte-
rial alta). Muchos de los frmacos usados para tratar el
virus de inmunodeficiencia humana (HIV), el causante
del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), son
inhibidores competitivos de la transcriptasa inversa
(p. ej., AZT o cidovudina) o de la proteasa del VIH (p. ej.,
saquinavir, ritonavir).
La inhibicin competitiva es el principio que se encuen-
tra detrs del uso del etanol para tratar el envenenamien-

a) b) c)
Sustrato
Inhibidor
competitivo + Inhibidor competitivo

Sin inhibidor
Sitio
activo Enzima

Figura D4-2. Caractersticas de la inhibicin competitiva: a) un inhibidor competitivo

compite con el sustrato por la unin al sitio activo de la enzima; b) la enzima puede unir al
sustrato o al inhibidor competitivo pero no a los dos; c) grca de Lineweaver-Burk en la que
se muestra el efecto de un inhibidor competitivo sobre la Km y la Vmx.
96 SECCIN D ENZIMAS
COO COO
CH2 + FAD Deshidrogenasa CH + FADH2
CH2 de succinato CH
COO COO
Succinato Fumarato
Figura D4-3. Inhibicin de la deshidrogenasa de succinato por el malonato.
to con metanol. Aunque el metanol es en s mismo slo
ligeramente txico, la enzima heptica deshidroge-
nasa alcohlica lo convierte en el producto altamente
txico formaldehdo, que incluso en pequeas cantida-
des causa ceguera y la muerte. El etanol compite con
el metanol por unirse al sitio activo de la deshidroge-
nasa alcohlica y de esa forma lentifica la conversin
del metanol en formaldehdo (el etanol se convierte
en acetaldehdo, un producto fcil de metabolizar).
En consecuencia, una gran proporcin de metanol es
excretada del cuerpo en la orina sin que cause dao tras
la administracin de etanol. El mismo principio subyace
al uso de etanol para tratar el envenenamiento por anti-
congelante (etilenglicol).
La inhibicin competitiva puede reconocerse si se re-
curre al uso de la grfica de Lineweaver-Burk. La V0 se
mide a diferentes concentraciones del sustrato en pre-
sencia de una concentracin fija de un inhibidor. Un
inhibidor competitivo incrementa la inclinacin de la
lnea en la grfica de Lineweaver-Burk y altera la inter-
seccin en el eje de la x (ya que la Km se incrementa), pero
conserva la interseccin sobre el eje de la y sin modificar
(ya que la Vmx permanece constante; figura D4-2c).
a) b)
Inhibidor no
Sustrato
competitivo
Enzima
Figura D4-4. Caractersticas de la inhibicin no competitiva: a) un inhibidor no competitivo
se une a un sitio diferente al sitio activo; b) la enzima puede unir el sustrato, el inhibidor no
competitivo o ambos; c) grca de Lineweaver-Burk en la que se muestra el efecto de un
inhibidor no competitivo sobre la Km y la Vmx.
COO
CH2 Deshidrogenasa
No hay
COO de succinato reaccin
Malonato
Inhibicin no competitiva reversible
Un inhibidor no competitivo se une en forma reversi-
ble a un sitio diferente al sitio activo (figura D4-4a) y
causa un cambio en la forma tridimensional total de la
enzima que lleva a reducir la actividad cataltica. Como
el inhibidor se une a un sitio diferente al del sustrato,
la enzima puede unir el inhibidor, el sustrato o ambos
juntos (figura D4-4b). Los efectos de un inhibidor no
competitivo no pueden superarse mediante el aumento
de la concentracin de sustrato, de manera que se pro-
duce una disminucin de la Vmx. En la inhibicin no
competitiva, la afinidad de la enzima por el sustrato per-
manece sin cambios y por ello Km se mantiene igual. Un
ejemplo de inhibicin no competitiva es la accin de la
pepstatina sobre la enzima renina.
La inhibicin no competitiva puede reconocerse en una
grfica de Lineweaver-Burk ya que incrementa la incli-
nacin de la lnea experimental y altera la interseccin
del eje de la y (ya que la Vmx disminuye), pero conserva
la interseccin en el eje de la x sin cambio (ya que la Km
permanece constante; figura D4-4c).
c)
+ Inhibidor no competitivo
Sin inhibidor
SECCIN D ENZIMAS

D5Regulacin de la actividad
enzimtica
Notas clave
Regulacin por Los activadores e inhibidores, conocidos en conjunto como molculas efecto-
retroalimentacin ras, alteran la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas en los sis-
temas biolgicos. En las vas metablicas, el producto final suele inhibir por
retroalimentacin el paso anterior de la misma va para evitar la acumulacin
de productos intermedios y el uso innecesario de metabolitos y energa. En
las vas metablicas con ramas, suele funcionar un proceso de inhibicin por
retroalimentacin secuencial.
Enzimas alostricas Una grfica de V0 contra [S] para una enzima alostrica da una curva de forma
sigmoidea. Por lo regular, las enzimas alostricas son protenas de mltiples
subunidades con un sitio activo en cada subunidad, las cuales unen de forma
cooperativa molculas de sustrato, lo que implica que la unin de sustrato a un
sitio activo provoca un cambio conformacional en la enzima, que modifica la
afinidad de los restantes sitios activos por el sustrato. Se han propuesto dos
modelos para explicar el comportamiento alostrico de las enzimas, el modelo
concertado o simtrico y el modelo secuencial. Las molculas efectoras (activa-
dores o inhibidores) pueden controlar las enzimas alostricas al unirse a sitios
diferentes al sitio activo y alterar la velocidad de la actividad enzimtica. La
transcarbamoilasa de aspartato es una enzima alostrica que cataliza el paso
forzoso en la biosntesis de pirimidinas. La enzima consiste en seis subunida-
des reguladoras a las que se unen los efectores alostricos trifosfato de citosina
(CTP) y ATP. El producto final, CTP, de la va de la transcarbamoilasa la inhibe por
retroalimentacin y acta como un inhibidor alostrico. En contraste, el ATP, un
intermediario inicial de la va, acta como un activador alostrico.
Modicacin covalente El establecimiento y destruccin de un enlace covalente entre la enzima y un
reversible pequeo grupo no protenico altera la actividad de muchas enzimas. La ms
comn de tales modificaciones es la adicin y remocin de un grupo fosfato;
la fosforilacin y la desfosforilacin, respectivamente. Las cinasas de protena
catalizan la fosforilacin y con frecuencia recurren al ATP como el donador de
fosfatos, en tanto que las fosfatasas de protena se encargan de catalizar la
desfosforilacin. Un 30% de las protenas humanas es fosforilado.
Activacin proteoltica Algunas enzimas se sintetizan como grandes precursores inactivos llamados
proenzimas o cimgenos. La hidrlisis irreversible de uno o ms enlaces pep-
tdicos los activa. Las proteasas pancreticas tripsina, quimotripsina y elastasa
derivan todas de cimgenos precursores (tripsingeno, quimotripsingeno y
proelastasa, respectivamente) por activacin proteoltica. La activacin pre-
matura de estos cimgenos provoca pancreatitis aguda. En la cascada de la
coagulacin sangunea y en la apoptosis (muerte celular programada) tambin
participa una serie de activaciones de cimgenos que produce una gran ampli-
ficacin de la seal original.
Regulacin de la La cantidad de enzima presente representa un equilibrio entre las tasas de su
sntesis y destruccin sntesis y su degradacin. El grado de induccin o represin de la codificacin
de las enzimas gentica de la enzima y la tasa de degradacin de su mRNA modifican la tasa de
sntesis de la protena enzimtica. Cuando la protena enzimtica est sinteti-
zada, la tasa de su destruccin (vida media) tambin puede modificarse como
un medio de regular la actividad enzimtica.
98 SECCIN D ENZIMAS
Temas relacionados (B3) Mioglobina y hemoglobina
(D1) Introduccin a las enzimas
(D3) Cintica enzimtica
Regulacin por retroalimentacin
En los sistemas biolgicos, la velocidad de muchas enzi-
mas se altera por la presencia de otras molculas como
los activadores e inhibidores (conocidos en conjunto
como los efectores). Un tema comn en el control de las
vas metablicas es cuando una enzima resulta inhibida
al principio de la va metablica por un producto final
de la misma va en la que participa. Esto se llama inhi-
bicin por retroalimentacin y suele tener lugar en el
paso forzoso de la va (conversin de A en B en la figura
D5-1a). El paso forzoso es el primer paso en producir un
intermediario que es exclusivo para la va en cuestin y
por consiguiente, en general, obliga al metabolito a un
metabolismo adicional a lo largo de la va. El control de
la enzima que lleva a cabo el paso forzoso de una va
metablica conserva el aporte de energa metablica del
organismo y evita la acumulacin de grandes cantidades
indeseables de intermediarios metablicos adicionales a
lo largo de la va. Una inhibicin por retroalimentacin
de este tipo se ve, por ejemplo, en la va de la biosnte-
sis de los aminocidos (seccin M2).
Como muchas vas metablicas tienen ramas, la inhibi-
cin por retroalimentacin debe permitir la sntesis de
un producto de una va ramificada para avanzar incluso
cuando otro producto est presente en exceso. Aqu, un
proceso de inhibicin por retroalimentacin secuencial
puede operar donde el producto final de una rama de
una va inhibir a la primer enzima despus del punto
de ramificacin (la conversin de C en D o de C en E,
en la figura D5-1b). Cuando este punto de ramificacin
acumule intermediarios, stos a su vez inhibirn el pri-
mer paso forzoso de la va completa (conversin de A
en B en la figura D5-1b ). Como es poco probable que el
producto final de una va metablica que incluye ml-
tiples reacciones metablicas se asemeje estructural-
mente al compuesto inicial, el producto final se unir a
a)
E1 inhibido por el producto Z
Figura D5-1. Inhibicin por retroalimentacin a) e inhibicin por retroalimentacin
secuencial b) en las vas metablicas.
(D4) Inhibicin enzimtica
(J7) Control del metabolismo del
glucgeno
la enzima en el punto de control en un sitio diferente al
sitio activo. Tales enzimas son por lo regular enzimas
alostricas.
Enzimas alostricas
Una grfica de V0 contra [S] de una enzima alostrica da
una curva sigmoidea en lugar del trazado hiperblico
predicho por la ecuacin de Michaelis-Menten (como
se ve en la unin del O2 a la hemoglobina; seccin B3,
figura B3-3). La curva tiene una seccin empinada en el
medio del espectro de concentracin de sustrato, lo que
refleja el incremento rpido en la velocidad de la enzima
que ocurre durante un rango estrecho de concentracio-
nes del sustrato. Esto permite a las enzimas alostricas
ser particularmente sensibles a pequeos cambios en la
concentracin de sustrato en el rango fisiolgico. En las
enzimas alostricas, la unin de una molcula de sus-
trato a un sitio activo afecta la unin de las molculas
de sustrato a otros sitios activos de la enzima; se dice
que los distintos sitos activos se comportan de manera
cooperativa en la unin y accin sobre las molculas
de sustrato (confrntese con la unin del O2 a las cua-
tro subunidades de la hemoglobina; seccin B3). Las
enzimas alostricas suelen ser protenas con varias sub-
unidades (es decir, oligomricas), con uno o ms sitios
activos en cada subunidad. La unin de un sustrato a
un sitio activo induce un cambio conformacional en
la protena que se transmite a los otros sitios activos, a
los que altera su afinidad por las molculas del sustrato.
Se han propuesto dos modelos para explicar los efec-
tos alostricos que se observan en las protenas. En el
modelo simtrico o concertado, propuesto primero por
Jacques Monod, Jeffries Wyman y Jean-Pierre Changeaux
(a veces referido como el modelo de Monod-Wyman-
Changeaux (MWC]), las subunidades de una enzima alos-
trica pueden existir en uno de slo dos estados, T y R
b)
E3* inhibido por el producto Y
E1 inhibido por C
E3 inhibido por el producto Z
 D5REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA 99

(figura D5-2a). Las subunidades del estado T se hallan
en un estado tenso que es compacto y relativamente
inactivo, mientras que las subunidades del estado R se
encuentran en un estado relajado, expandido y activo
con una afinidad ms alta por el sustrato; no se permi-
ten los estados intermedios. En ausencia de un sustrato
unido, el equilibrio favorece el estado T. A medida que el
sustrato se une a cada sitio activo del estado T, el equi-
librio se desva hacia el estado R. Todas las subunidades
cambian de conformacin de una manera concertada,
lo cual implica que la conformacin de cada subunidad es
constreida por su asociacin con las otras subunidades;
en otras palabras, hay formas oligomricas de la enzima
que contienen subunidades en estado R y T de manera
simultnea y la simetra molecular de la protena se con-
serva durante el cambio conformacional (figura D5-2a).
En el modelo secuencial alternativo, propuesto pri-
mero por Daniel Koshland, en una enzima oligomrica,
los cambios secuenciales en la estructura tienen lugar
a medida que se ocupan los sitios activos individuales
(figura D5-2b). La unin de sustrato a un sitio influye en
la afinidad por el sustrato de los sitios activos vecinos,
sin que por fuerza induzca una transicin que abarque
a la enzima completa, de tal manera que la simetra
molecular de la enzima completa no se conserva for-
zosamente (figura D5-2b). El modelo secuencial se basa
en la hiptesis del ajuste inducido de la interaccin
enzima-sustrato, mientras que el modelo concertado
asume de forma implcita el modelo de llave y cerradura
de la unin del sustrato al sitio activo de la enzima (sec-
cin D1). En el modelo secuencial, la unin del sustrato
induce un cambio conformacional en una subunidad
y las interacciones cooperativas surgen merced a la
influencia que tales cambios conformacionales tienen
en las subunidades vecinas. La fuerza de estas interac-
ciones depende del grado de acoplamiento mecnico
entre las subunidades. En el modelo secuencial, la afi-
nidad de la unin entre enzima y sustrato vara con el
nmero de molculas de sustrato enlazadas, en tanto
que en el modelo concertado esta afinidad depende slo
del estado cuaternario de la enzima. Los resultados de
los estudios en varias protenas alostricas sugieren que
la mayora se comporta de acuerdo con una combina-
cin de los modelos concertado y secuencial.
Las molculas efectoras (activadores e inhibidores)
pueden controlar a las enzimas alostricas, a las cua-
les se unen en sitios diferentes al sitio activo (sea en
la misma subunidad o en otra) y al hacerlo provocan
un cambio conformacional de tal sitio, lo que termina
por alterar la tasa de actividad de la enzima (confrn-
tese con la unin del CO2, H+ y 2,3-bisfosfoglicerato a la
hemoglobina; vase la seccin B3). Un activador alos-
trico incrementa la tasa de actividad enzimtica, en
tanto que un inhibidor alostrico la reduce.
Transcarbamoilasa de aspartato
La transcarbamoilasa de aspartato (carbamoiltransfe-
rasa de aspartato; ATC-asa), una enzima clave en la sn-
tesis de pirimidina (seccin F1), proporciona un buen
ejemplo de regulacin alostrica. La ATC-asa cataliza la
formacin de N-carbamoilaspartato a partir de aspar-
tato y de carbamoilfosfato, que representa el paso for-
zoso en la biosntesis de pirimidinas (figura D5-3). La
unin de los sustratos aspartato y carbamoilfosfato es

a) Modelo concertado

Subunidades S S S S S S S S S S S
de estado T S S S

Subunidades S S S S S S S S S S S
de estado R
S S S

b) Modelo secuencial

S S S S S S S S S S S
S S S

Figura D5-2. Modelos de alosterismo: a) el modelo concertado o de simetra;

los cuadrados y los crculos representan los estados T y R, respectivamente; b)
el modelo secuencial; la unin del sustrato induce los cambios conformacionales
progresivos en las subunidades.
100 SECCIN D ENZIMAS

cooperativa, como lo muestra la curva sigmoidea de V0
contra la concentracin de sustrato (figura D5-4).
La ATC-asa consiste en seis subunidades catalticas y
seis subunidades reguladoras. El producto final de la
va, el trifosfato de citosina (CTP; seccin F1), inhibe
a la enzima por retroalimentacin, por lo que el CTP
acta como un inhibidor alostrico (figura D5-3). Esta
molcula se une a las subunidades reguladoras y cau-
sa una disminucin en la actividad cataltica de la ATC-
asa al reducir la afinidad de las subunidades catalticas
por el sustrato. En contraste, el ATP, uno de los productos
intermedios iniciales de la va, acta como un activa-
dor alostrico, lo que hace al mejorar la afinidad de la
ATC-asa por sus sustratos que la lleva a incrementar su
actividad (figura D5-3). El ATP y el CTP compiten por el
mismo sitio de unin en la subunidad reguladora. Altos
niveles de ATP le indican a la clula que hay energa dis-
ponible para la replicacin del DNA, por lo que la ATC-asa
se activa, lo que resulta en la sntesis de los nucletidos
de pirimidina requeridos. Cuando la pirimidina abunda,
los altos niveles de CTP inhiben a la ATC-asa, lo que evita
la sntesis innecesaria de N-carbamoilaspartato y de los
intermediarios subsecuentes de la va.

CO2 + glutamina + ATP

NH2 Activacin

C
COO O OPO32
CH2 Carbamoilfosfato
+
H3N CH COO
Aspartato ATC-asa

H2PO 4

COO
NH2 CH2
C CH COO
O N
H
N-carbamoilaspartato Inhibicin

CTP

Figura D5-3. La formacin de N-carbamoilaspartato por la ATC-asa es el paso

forzoso en la biosntesis de pirimidina y en un punto de control clave.

Efectores
no alostricos

Aspartato (mM)

Figura D5-4. Grca de velocidad inicial (V0) contra concentracin de sustrato de la

enzima alostrica transcarbamoilasa de aspartato.
 D5REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Modicacin covalente reversible
La modificacin covalente reversible consiste en la ela-
boracin y degradacin de un enlace covalente entre un
grupo no protenico y una molcula enzimtica. Aun-
que un buen nmero de grupos no protenicos puede
unirse en forma reversible a enzimas que afectan su
actividad, la modificacin ms comn es la adicin y
remocin de un grupo fosfato (fosforilacin y desfos-
forilacin, respectivamente). Las cinasas de protena
se encargan de catalizar la fosforilacin y suelen usar
ATP como donador de los grupos fosfato, mientras que
las fosfatasas de protena catalizan la desfosforilacin
(figura D5-5). La adicin y remocin de un grupo fosfato
provoca cambios en la estructura terciaria de la enzima
que alteran su actividad cataltica. Una clase de cinasas
de protena transfiere el grupo fosfato de manera espe-
cfica al grupo hidroxilo de los residuos de Ser o Thr de
la enzima de inters (proteincinasas de serina/treonina,
tipificadas por ser cinasas de protena dependientes del
3,5-monofosfato de adenosina cclico [cAMP]), mien-
tras que una segunda clase transfiere el grupo fosfato al
grupo hidroxilo del residuo de Tyr (cinasas de tirosina).
Las fosfatasas de protena catalizan la hidrlisis de los
grupos fosfato de las protenas para regenerar el grupo
hidroxilo del aminocido y liberar Pi (figura D5-5).
Una enzima fosforilada puede ser ms o menos activa
que su forma desfosforilada. La fosforilacin/desfosfori-
lacin pueden usarse para una desviacin rpida y rever-
sible con el fin de activar o desactivar una va metablica
segn las necesidades de la clula. Por ejemplo, la fosfo-
rilasa de glucgeno, que participa en la degradacin del
glucgeno, es activa en su forma fosforilada y la sintasa
de glucgeno, que interviene en la sntesis de glucgeno,
es ms activa en su forma desfosforilada (seccin J7).
Otros tipos de modificaciones covalentes reversibles
que se usan para regular la actividad de ciertas enzimas
incluyen la adenilacin (la transferencia de adenilato
desde el ATP, como se ve en la sintetasa de glutamina) y
la ribosilacin del ADP (la transferencia de una parte de
ribosilo al ADP desde el NAD+, como se ve en la polimerasa
de RNA).
Activacin proteoltica
Numerosas enzimas se sintetizan como grandes precur-
sores inactivos llamados proenzimas o cimgenos. La
Protena
Fosfatasa
de protena
Protena
Figura D5-5. La fosforilacin y desfosforilacin reversibles de una enzima.
101
activacin de los cimgenos implica la hidrlisis irre-
versible de uno o ms enlaces peptdicos.
Proteasas pancreticas
Las enzimas digestivas tripsina, quimotripsina y elas-
tasa (seccin D1) se producen como cimgenos en el
pncreas. Son transportadas al intestino delgado en su
forma de cimgeno y all se activan por la divisin de
enlaces peptdicos especficos. De manera inicial, la
tripsina se sintetiza bajo la forma del cimgeno trip-
singeno. El cimgeno es dividido (y en consecuencia
activado) en el intestino por la enzima enteropepti-
dasa, la cual slo se produce en el intestino. Una vez
activada, la tripsina puede dividir y activar ms mo-
lculas de tripsingeno as como otros cimgenos,
como el quimotripsingeno y la proelastasa (figura
D5-6).
A medida que los cimgenos se sintetizan y secretan, el
pncreas tambin sintetiza una pequea (6 kDa) pro-
tena inhibidora de la tripsina (inhibidor pancretico
de la tripsina). Esta protena inhibidora se une en forma
muy estrecha al sitio activo de la tripsina, lo que evita
que el pncreas vaya a resultar destruido por la acti-
vacin prematura de las molculas de tripsina. Si este
mecanismo de seguridad falla, por ejemplo, debido a un
bloqueo del conducto pancretico, los cimgenos pue-
den activarse y digerir al pncreas, una afeccin cono-
cida como pancreatitis aguda.
Cascada de la coagulacin sangunea
Otro ejemplo de la existencia de cimgenos inactivos lo
representan las enzimas que participan en la cascada de
la coagulacin sangunea. En sta, el proceso completo
de coagulacin de la sangre lo lleva a cabo una serie de
activaciones de cimgenos.
Apoptosis
Un grupo de proteasas denominado caspasas lleva a
cabo la apoptosis, o muerte celular programada. En
respuesta a seales proapoptsicas especficas, las pro-
caspasas inactivas se activan a travs de su protelisis a
su forma activa. A continuacin, estas caspasas activas
actan sobre otras procaspasas as como sobre otras
protenas celulares para ocasionar la muerte celular.
La activacin de cimgenos puede producir una gran
amplificacin de la seal inicial ya que una sola enzima
Cinasa de
protena
102 SECCIN D ENZIMAS

activada puede actuar sobre muchos cientos de mol-
culas de sustrato para que tenga lugar una activacin
adicional. Como la activacin proteoltica no requiere
ATP, la escisin del cimgeno es un mecanismo muy
apropiado para la activacin de protenas fuera de las
clulas. Sin embargo, a diferencia de la modificacin
covalente de una enzima (vase antes), la activacin de
un cimgeno no es reversible. Una vez activada, la
enzima permanece activa.
Regulacin de la sntesis y destruccin
de las enzimas
La cantidad de una enzima determinada presente en
una clula o tejido cambia de acuerdo con sus tasas de
sntesis y degradacin.
Entre los factores que afectan la tasa de sntesis est el
grado de induccin o represin del gen que codifica la
enzima (secciones G3 y G4) y tambin la tasa de degra-
dacin del mRNA producido por ese gen. Muchas enzi-
mas clave de los puntos de control de las vas metabli-
cas tienen mRNA de vida extremadamente corta y la tasa
de sntesis de la enzima es en consecuencia controlada
con facilidad por factores que afectan la tasa de trans-
cripcin gentica.
La vida media refleja la tasa de destruccin de una
enzima (la vida media es el tiempo que tarda en de-
gradarse 50% de la protena). La mayor parte de las
enzimas importantes en la regulacin metablica pre-
sentan vidas medias cortas y se les denomina enzimas
lbiles.

Tripsingeno

Enteropeptidasa

Tripsina

Quimotripsingeno Proelastasa

Quimotripsina Elastasa

Figura D5-6. Papel central de la tripsina en la activacin de los cimgenos

pancreticos.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E1Lpidos de la membrana
Notas clave
Membranas Las membranas forman estructuras limitantes alrededor de la clula y alre-
dedor de los diferentes compartimientos subcelulares. Actan como barre-
ras selectivamente permeables y participan en los procesos de sealizacin.
Todas las membranas contienen cantidades variables de lpidos y protenas y
algunas contienen pequeas cantidades de carbohidratos.
Lpidos membranales En las membranas, las tres clases principales de lpidos son los glicerofosfol-
pidos, los esfingolpidos y los esteroles. Los glicerofosfolpidos tienen una co-
lumna vertebral de glicerol que une a dos cadenas hidrocarbonadas de cidos
grasos y a un grupo-cabeza fosforilado; incluyen a la fosfatidilcolina, fosfati-
diletanolamina y fosfatidilserina. Los esfingolpidos se forman a partir de la
esfingosina, a la cual est unida una cadena de cido graso simple y un grupo-
cabeza fosforilado (como en la esfingomielina) o uno o ms residuos de azcar
(cerebrsidos y ganglisidos, los glucoesfingolpidos). El principal esterol de la
membrana plasmtica animal es el colesterol, mientras que el estigmasterol y
el sitosterol , que guardan relacin estructural con el anterior, se encuentran
en plantas.
Cadenas de cidos Las cadenas de cidos grasos de los glicerofosfolpidos y los esfingolpidos con-
grasos sisten en cadenas largas de tomos de carbono, las cuales usualmente no estn
ramificadas y tienen un nmero par de tomos de carbono (p. ej., palmitato
C16, estearato C18). Las cadenas estn completamente saturadas con tomos
de hidrgeno o tienen uno o ms dobles enlaces insaturados que estn en
configuracin cis (p. ej., oleato C18:1 con un doble enlace).
Bicapa lipdica Los lpidos membranales son anfipticos, ya que contienen regiones hidrfilas
e hidrfobas. En los glicerofosfolpidos y los esfingolpidos, las cadenas hidro-
carbonadas de cidos grasos son hidrfobas, mientras que los grupos-cabeza
polares son hidrfilos. En solucin acuosa, los lpidos anfipticos se ordenan a
s mismos en hojas bimoleculares extensas (bicapas). La estructura de las bica-
pas se mantiene por mltiples interacciones no covalentes entre las cadenas
de cidos grasos vecinas y entre los grupos-cabeza polares de los lpidos. En
las membranas biolgicas, hay una distribucin asimtrica de lpidos entre las
monocapas interna y externa de la bicapa.
Fluidez membranal Los lpidos son relativamente libres para moverse dentro del plano de la bicapa
por movimiento rotatorio o lateral, pero no les resulta fcil atravesar de un
lado de la bicapa al otro (movimiento transversal). El incremento en la longi-
tud de las cadenas de cidos grasos o la disminucin en el nmero de enlaces
dobles insaturados en las cadenas de cidos grasos lleva a una disminucin en
la fluidez de la membrana. En las membranas animales, el incremento en la
cantidad de colesterol tambin disminuye la fluidez de la membrana.
Temas relacionados (A1) Clulas procariotas ((E5) Transduccin de seales
(A2) Clulas eucariotas (E6) Funcin nerviosa
(E2) Estructura de la membrana (K1) Estructura y funcin de los
(E3) Transporte de la membrana: cidos grasos
molculas pequeas (K5) Colesterol
104 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES
Membranas
Las membranas forman los lmites alrededor de las
clulas (la membrana plasmtica) y alrededor de los
diferentes compartimientos subcelulares (p. ej., ncleo,
mitocondrias, lisosomas, etc.) (secciones A1 y A2).
Actan como barreras selectivamente permeables y
permiten que el ambiente interno de la clula u orga-
nelo se diferencie del lado externo (seccin E3). Las
membranas participan en los procesos de sealizacin;
contienen receptores especficos para los estmulos
externos e intervienen en la generacin de seales qu-
micas y elctricas (secciones E5 y E6). Todas las mem-
branas contienen dos componentes bsicos: lpidos y
protenas. Algunas membranas tambin contienen car-
bohidratos. La composicin de lpidos, protenas y car-
bohidratos vara de una membrana a otra. Por ejemplo,
la membrana mitocondrial interna tiene una cantidad
mayor de protena que de lpidos debido a la presencia
de numerosos complejos proteicos que intervienen en
la fosforilacin oxidativa y en la transferencia de electro-
nes (seccin L2), mientras que la membrana de la vaina
de mielina de las clulas nerviosas, la cual sirve para
aislar a la clula elctricamente, tiene una proporcin
mayor de lpidos (seccin E6).
Lpidos membranales
De manera original, los lpidos se clasificaron como
sustancias biolgicas insolubles en agua pero solubles
en solventes orgnicos como el cloroformo y el meta-
nol. De manera adicional, por tratarse de componen-
tes estructurales de las membranas, los lpidos tienen
varias funciones biolgicas. Sirven como molculas
de combustible (seccin K2), como almacenes de ener-
ga concentrada (p. ej., triacilglicerol, seccin K4) y como
molculas de sealizacin (seccin E5). Dentro de las
membranas, hay tres tipos principales de lpidos: los
glicerofosfolpidos, los esfingolpidos y los esteroles.
Glicerofosfolpidos
Los glicerofosfolpidos estn formados por tres com-
ponentes: un grupo cabeza fosforilado, una columna
vertebral de glicerol de tres carbonos y dos cadenas hi-
drocarbonadas de cidos grasos (figura E1-1). El grupo-
cabeza fosforilado est unido al carbono 3 de la columna
vertebral de glicerol, mientras que las dos cadenas de ci-
dos grasos estn unidas a los otros dos tomos de car-
bono. El ms simple de los glicerofosfolpidos es el fos-
fatidato (diacilglicerol 3-fosfato), el cual tiene slo un
grupo de cido fosfrico esterificado al carbono 3 del
glicerol. Aunque el fosfatidato como tal est presente en
pequeas cantidades en las membranas, los glicerofos-
folpidos principales derivan del mismo. En esos otros
lpidos el fosfato est esterificado de manera adicional al
grupo hidroxilo de uno de numerosos alcoholes (colina,
etanolamina, glicerol, inositol o serina). Los principales
glicerofosfolpidos que se encuentran en las membranas
son la fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidil-
glicerol, fosfatidilinositol y fosfatidilserina (figura E1-1).
El difosfatidilglicerol (o cardiolipina) (figura E1-1) se
encuentra de manera predominante en la membrana
mitocondrial interna.
Esngolpidos
Las esfingomielinas, los esfingolpidos ms comunes,
tienen una columna vertebral de esfingosina (figura
E1-2a) en lugar de la de glicerol de los glicerofosfolpidos.
Como los glicerofosfolpidos, stas tienen un grupo ca-
beza fosforilado (de colina o etanolamina) y dos cade-
nas hidrocarbonadas (figura E1-2a). Una de las cadenas
hidrocarbonadas proviene de la molcula de esfingosina,
la otra es un cido graso como los que se encuentran en
los glicerofosfolpidos, excepto que est unida mediante
un enlace amida a los esfingolpidos. Las esfingomieli-
nas estn presentes en la membrana plasmtica de la
mayora de las clulas y son particularmente abundan-
tes en la vaina de mielina que rodea a las clulas ner-
viosas. Los glucoesfingolpidos, como los cerebrsidos
y los ganglisidos, tambin se derivan de la esfingosina,
pero en lugar de un grupo cabeza fosforilado tienen uno
o ms residuos de azcar. Los galactocerebrsidos tie-
nen un residuo de galactosa simple (figura E1-2a) y se
encuentran predominantemente en las membranas de
las clulas neuronales del cerebro. Los ganglisidos GM1,
GM2 y GM3 tienen numerosos residuos de azcar y cuando
menos un residuo de cido silico (cido N-acetilneu-
ramnico), adems de que son un constituyente funda-
mental de la mayora de las membranas plasmticas de
los mamferos y en particular son abundantes en las
clulas del encfalo.
Esteroles
El esterol colesterol (figura E1-2b) es un constituyente
principal de las membranas plasmticas animales pero
est ausente en los procariotas. El sistema de anillos
fusionados del colesterol implica que es ms rgido que
otros lpidos de la membrana. As como es un impor-
tante componente de las membranas, el colesterol es
un precursor metablico de las hormonas esteroideas
(seccin K5). Las plantas contienen poco colesterol,
pero tienen en su lugar varios esteroles diferentes, sobre
todo estigmasterol y sitosterol, los cuales difieren del
colesterol slo en sus cadenas laterales alifticas.
Cadenas de cidos grasos
Las dos cadenas de cidos grasos de los glicerofosfol-
pidos y la cadena de cidos grasos simple de los esfin-
golpidos consisten en una larga cadena de tomos de
carbono. De manera habitual, esas cadenas tienen un
nmero par de tomos de carbono (p. ej., palmitato,
C16; estearato, C18) y carecen de ramificaciones. Las
cadenas estn completamente saturadas con tomos de
hidrgeno o son insaturadas y tienen uno o ms enlaces
 E1LPIDOS DE LA MEMBRANA 105

O O

R1 C O CH2 R1 C O CH2
R2 C O CH O R2 C O CH O H
+
O H2 C O P O O H2C O P O CH2 C NH3

O O COO
Fosfatidato Fosfatidilserina

O R1 C O CH2
R2 C O CH O
R1 C O CH2 OH OH

R2 C O CH O O H2C O P O H
H HH
+
H2 C O P O CH2 CH2 NH3 O H OH
O
H OH
O OH H
Fosfatidiletanolamina Fosfatidilinositol
O O

R1 C O CH2 R1 C O CH2
R2 C O CH O CH3 R2 C O CH O OH
+
O H2C O P O CH2 CH2 N CH33 O H2C O P O CH2 C CH2OH

O CH3 O H
Fosfatidiletanola Fosfatidiglicerol

O O

R1 C O CH2 H2C O C R3
R2 C O CH O H O HC O C R4

O H2 C O P O CH2 C CH2 O P O CH2 O

O OH O
Difosfatidiliglicerol

Figura E1-1. Estructuras de los glicerofosfolpidos de la membrana. R1 y R2 representan

cadenas hidrocarbonadas de cidos grasos. La columna vertebral de glicerol est
sombreada.

dobles, que estn por lo general en la configuracin cis
(p. ej., oleato C18:1, el cual tiene dieciocho tomos de
carbono y un doble enlace; cido araquidnico C20:4, el
cual tiene veinte tomos de carbono y cuatro enlaces do-
bles (para mayores detalles vase la seccin K1). Las dos
cadenas de cidos grasos de un glicerofosfolpido no
suelen ser idnticas (p. ej., 1-estearoil-2-oleoil-3-fosfa-
tidilcolina [figura E1-3]). En los esfingolpidos, la cadena
hidrocarbonada sin ramas de la esfingosina tambin
consiste en 18 tomos de carbono, pero tiene un doble
enlace en la configuracin trans (figura E1-2a).
Bicapa lipdica
Las molculas anfipticas (o anffilas) contienen regiones
hidrfilas (amantes del agua) e hidrfobas (que recha-
zan el agua). Los lpidos de la membrana son molcu-
las anfipticas que estn hechas de cadenas de cidos
grasos hidrfobas y de un grupo-cabeza polar hidrfilo.
En los glicerofosfolpidos, las dos cadenas hidrocarbo-
nadas son hidrfobas, mientras que la columna verte-
bral de glicerol y el grupo-cabeza fosforilado son hidr-
filos. En los esfingolpidos, la cadena de cido graso y la
cadena hidrocarbonada de la esfingosina son hidrfo-
bas, mientras que el grupo cabeza fosforilado o el az-
car son hidrfilos. En el caso del colesterol, la molcula
completa, exceptuando al grupo hidroxilo en el carbono
3, es de naturaleza hidrfoba.
En solucin acuosa, las molculas anfipticas se orien-
tan a s mismas para evitar que sus regiones hidrfobas
hagan contacto con las molculas de agua. En el caso
de los lpidos que contienen slo una cadena hidrocar-
bonada (como el palmitato de sodio, un constituyente
del jabn), las molculas forman una estructura micelar
esfrica (cuyo dimetro usual es > 20 nm), en la cual las
106 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

a)
H H H O CH3
H3C (CH2)12 C C C C CH2 O P O CH2 CH2 N+ CH3

Esngosina H OH N H O CH3
O C
R1 H H H
Esfingomielina H3 C (CH2)12 C C C C CH2 O Galactosa

Esngosina H OH N H
O C
R1
b) Galactocerebrsido
CH3 CH3
H C CH2 CH2 CH2 C CH3
CH3
CH3 CH3

3
HO Colesterol

Figura E1-2. Estructuras de a) los esngolpidos esngomielina y galactocerebrsido;

b) colesterol. R1 representa la cadena hidrocarbonada de los cidos grasos.

cadenas hidrfobas de los cidos grasos estn ocultas
dentro de la micela y sus grupos-cabeza hidrfilos inte-
ractan con las molculas de agua circundantes (figura
E1-4a). Debido a que las dos cadenas de cidos grasos
de los fosfolpidos son demasiado voluminosas para
caber en el interior de la micela, la estructura que resulta
favorecida por la mayora de los fosfolpidos en solucin
acuosa es una hoja bimolecular bidimensional o bicapa
de lpidos (figura E1-4b). Tales bicapas de lpidos, en las
cuales las molculas de fosfolpidos se orientan con sus ca-
denas hidrfobas en el interior de la estructura y sus
grupos-cabeza hidrfilos se exponen en las dos super-
ficies, pueden ser estructuras relativamente grandes
de hasta alrededor de 1 mm de rea, pero son slo
dos molculas gruesas (6 a 10 nm). Las dos capas de
lpidos en la bicapa se denominan como la mono-
capa interna y la monocapa externa. En las membra-
nas biolgicas, las especies de lpidos individuales
se distribuyen de manera asimtrica entre las dos
monocapas. Por ejemplo, en la membrana plasmtica de
los eritrocitos, la esfingomielina y la fosfatidilcolina se lo-
calizan de preferencia en la capa externa, mientras que
la fosfatidiletanolamina y la fosfatidilserina estn sobre
todo en la capa interna.
Las bicapas de lpidos se autoensamblan de forma
espontnea en solucin acuosa. La fuerza directriz prin-
cipal detrs de esto es el efecto hidrfobo, por el que las
cadenas de cidos grasos hidrfobas sean excluidas por
las molculas de agua. Una vez formada, la estructura
de bicapa se mantiene por mltiples interacciones no
covalentes que incluyen las interacciones hidrfobas y
las fuerzas de van der Waals entre las cadenas hidrocar-
bonadas, las interacciones por cargas elctricas y puen-
tes de hidrgeno entre los grupos-cabeza polares y entre
los grupos-cabeza y las molculas de agua circundantes
(vase la seccin B2 para una descripcin ms completa
de estas interacciones no covalentes).

H3C (CH2)16 C O CH2

H3C (CH2)7 C C (CH2)7 C O CH O CH3

+
H H O H2C O P O CH2 CH2 N CH3

O CH3

Figura E1-3. Estructura de la 1-estearoil-2-oleoil-3-fosfatidilcolina en la que se

muestran las cadenas hidrocarbonadas del estearolo saturado (C18:0) y el oleolo
monoinsaturado (C18:1). Los tomos de hidrgeno que rodean el enlace C=C estn
en la conguracin cis.

a) b)
Figura E1-4. Estructura de a) una micela y b) una bicapa lipdica.
Fluidez de la membrana
Debido a que no hay enlaces covalentes entre los lpidos
que forman la bicapa, la membrana no es una estructura
esttica sino fluida. Por lo general, los lpidos son libres
de moverse dentro del plano de la monocapa interna o
externa o de la bicapa ya sea por movimientos rotato-
rios o colaterales (figura E1-5). Sin embargo, las mol-
culas de lpido no pueden cambiarse con facilidad de
una monocapa de la bicapa a la otra, el llamado movi-
miento transversal, debido a la energa desfavorable
que interviene en el movimiento de un grupo cabeza
hidrfilo a travs del interior hidrfobo de la bicapa.
La fluidez de la bicapa puede alterarse de numerosas
formas. Tras el calentamiento por arriba de una tem-
peratura de transicin caracterstica, la bicapa lip-
dica cambiar de una consistencia similar al gel a una
consistencia de tipo ms lquido. Esta temperatura de
transicin depende de la longitud de las cadenas de ci-
Rotacin
Hojuela
externa
Hojuela
interna
Movimiento lateral
Figura E1-5. Movimiento de los lpidos en las membranas.
E1LPIDOS DE LA MEMBRANA 107
Grupos-cabeza
polares hidrlos
Cadenas hidrocarbonadas
hidrfobas
dos grasos y de su grado de insaturacin. Si la longi-
tud de las cadenas de cidos grasos se incrementa,
la fluidez de la bicapa disminuye debido a la mayor
propensin de interacciones no covalentes entre las
cadenas hidrocarbonadas. En contraste, si el grado de
insaturacin en las cadenas de cidos grasos se incre-
menta, la fluidez de la bicapa tambin lo hace. Esto
se debe a que los dobles enlaces con una configura-
cin cis doblan la cadena hidrocarbonada y rompen
el empacamiento fuertemente ordenado de las cade-
nas de cidos grasos y por tanto reducen el nmero de
interacciones entre los lpidos vecinos. Un importante
regulador de la fluidez de la membrana en los sistemas
de los mamferos es el colesterol. A temperatura fisio-
lgica (37 C), incrementar la cantidad de colesterol en
la bicapa llevar a una disminucin en la fluidez de la
membrana ya que los sistemas de anillos esteroideos
rgidos interfieren con el movimiento lateral de las ca-
denas de cidos grasos.
Movimiento
3.5 a 4.0 nm
transversal
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E2Estructura de la membrana
Notas clave
Protenas integrales Las protenas integrales de la membrana se insertan en la regin hidrfoba
de la membrana de la bicapa lipdica. La mayora de las protenas integrales de la membrana
tienen una (p. ej., la glicoforina) o ms (p. ej., la bacteriorodopsina) regiones de
la cadena polipeptdica que atraviesan la bicapa lipdica. Estas regiones trans-
membranales contienen sobre todo aminocidos con cadenas laterales hidr-
fobas que forman una hlice  e interactan de manera no covalente con los
lpidos circundantes. Unas pocas protenas transmembranales atraviesan la
membrana con una estructura formada por hebras . Algunas protenas inte-
grales de la membrana no atraviesan la membrana, pero estn asociadas a
ella mediante un enlace covalente a un lpido de la membrana. Las protenas
integrales de la membrana se distribuyen de manera asimtrica a travs de la
bicapa y estn en general libres para moverse en el plano de la bicapa, pero
no para atravesar de un lado al otro de la membrana.
Protenas perifricas Ninguna parte de una protena perifrica de la membrana interacta con el
de la membrana interior hidrfobo de la bicapa. En su lugar, las protenas perifricas de la
membrana estn asociadas a la superficie de sta por enlaces inicos no cova-
lentes y puentes de hidrgeno y pueden removerse por lavado de la membrana
con una solucin de fuerza inica alta o de pH extremo. El citoesqueleto que
cubre la superficie citoslica de la membrana plasmtica est formado por
varias protenas perifricas y es importante en el mantenimiento y alteracin
de la forma de las clulas.
Modelo de mosaico El modelo de mosaico fluido describe la estructura de las membranas biolgi-
uido de la estructura cas, en el cual las membranas se consideran como soluciones bidimensiona-
de la membrana les de lpidos y protenas globulares orientados. Muchas protenas son libres
de moverse lateralmente en el plano de la bicapa y este movimiento puede
rastrearse usando la tcnica de recuperacin de la fluorescencia despus de
fotoblanqueo (FRAP).
Dominios lipdicos Dentro de las membranas biolgicas, lpidos y protenas se pueden agrupar
juntos en dominios discretos. Las balsas de lpidos son dominios de la mem-
brana plasmtica que estn enriquecidos con colesterol, esfingomielina y glu-
coesfingolpidos, as como con protenas modificadas por lpidos.
Puricacin y El primer paso en la purificacin de las protenas integrales de la membrana
reconstitucin de es la perturbacin de la estructura de la membrana mediante su solubilizacin
las protenas con un detergente (p. ej., Triton X-100). Una vez solubilizada, la regin hidr-
de la membrana foba de la protena es recubierta con una capa de molculas anfipticas del
detergente, lo que permite que la protena permanezca en solucin acuosa y
sea purificada, como sucede en una protena globular soluble. Una vez purifi-
cadas, las protenas integrales de la membrana pueden reconstituirse dentro
de vesculas artificiales de lpidos (liposomas) con el fin de estudiar su funcin.
Carbohidratos de la Los residuos de azcar se encuentran slo en el lado extracelular de las mem-
membrana branas biolgicas, fijos a los lpidos para formar glucolpidos o a las protenas
para formar glucoprotenas. Los carbohidratos forman una cubierta protec-
tora sobre la superficie externa de la clula y estn comprometidos en el reco-
nocimiento intercelular.
Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (C1) Purificacin de las protenas
(A4) Imgenes celulares (E1) Lpidos de la membrana
(B2) Estructura y funcin de (E5) Transduccin de seales
la protena (H5) Glucosilacin de protenas

Protenas integrales de la membrana
Las protenas de membrana se clasifican en perifricas
(extrnsecas) o integrales (intrnsecas) dependiendo de
su grado de asociacin a la membrana. Las protenas
integrales de la membrana estn estrechamente uni-
das a la misma a travs de interacciones con el centro
hidrfobo de la bicapa (vase la figura E2-4) y pueden
extraerse de ella slo mediante el uso de agentes que
destruyan la estructura de la membrana, como los sol-
ventes orgnicos (p. ej., cloroformo) o los detergentes
(vase ms adelante). La mayor parte de las protenas
integrales de la membrana tiene una o ms regiones de
la cadena polipeptdica que atraviesan la bicapa lip-
dica e interactan de forma no covalente con las cadenas
hidrfobas de cidos grasos. No obstante, algunas pro-
tenas estn fijas en la membrana por una unin cova-
lente a una cadena de un cido graso o a una cadena
hidrocarbonada (vase ms adelante). Como los lpidos,
las protenas integrales de la membrana son anfipticas,
tienen regiones hidrfobas e hidrfilas y se distribuyen
de manera asimtrica a travs de la bicapa (seccin E1).
Glucoforina, una protena transmembranal
Debido a que los eritrocitos (glbulos rojos) no contie-
nen ningn organelo intracelular (en esencia, son un
saco membranoso para transportar hemoglobina; sec-
cin B3), su membrana plasmtica es un sistema modelo
conveniente para realizar estudios de la estructura de
+
a) NH3
Dominio
hidrlo
extracelular
+ +
Bicapa
lipdica
+ +
Dominio
hidrlo
citoslico
+
NH3
b)
Bicapa
lipdica
Figura E2-1. Protenas integrales de la membrana: a) regin donde la protena
atraviesa por nica vez la membrana (p. ej., glucoforina); b) mltiples regiones
donde la protena atraviesa la membrana (p. ej., la bacteriorrodopsina).
E2ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA 109
la membrana ya que puede aislarse con facilidad de
otras membranas y componentes intracelulares. Una
de las principales protenas de la membrana plasmti-
ca de los eritrocitos es la glicoforina A, una protena de
131 aminocidos que fue la primera protena integral
de la membrana en secuenciarse (seccin C3). sta
revel que la cadena polipeptdica de la glicoforina
consta de tres dominios:
1. Una regin N terminal en el lado extracelular de la
membrana rica en residuos polares y cargados que
contienen todos los sitios de glucosilacin ligados
a N y O (seccin H5).
2. Una regin central rica en residuos apolares que
est oculta en el centro hidrfobo de la bicapa.
3. Una regin C terminal rica en residuos polares y
cargados que est expuesta en el lado citoslico de
la membrana (figura E2-1a).
Como en la mayora de las protenas transmembranales,
la regin hidrfoba que atraviesa la membrana consiste
sobre todo en residuos de aminocidos con cadenas
laterales hidrfobas que estn plegadas en una configu-
racin de hlice  (seccin B2). Ya que cada residuo de
aminocidos agrega 0.15 nm a la longitud de una hlice
, una hlice de 25 residuos debera tener una lon-
gitud de 3.75 nm, slo lo suficiente para atravesar el cen-
tro hidrfobo de la bicapa. Las cadenas laterales hidr-
fobas de los residuos de la hlice protruyen hacia fuera
Oligosacridos ligados al O
+
+ Oligosacrido ligado a N
Hlice hidrfoba
central
+
COO
Asas hidrlas
EXTRACELULAR
Hlices
hidrfobas
CITOSOL
COO
110 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

desde el eje de la hlice para interactuar mediante inte-
racciones hidrfobas con las cadenas de cidos grasos.
En cualquier lado de esta hlice  hidrfoba hay grupos
de aminocidos con cadenas laterales cargadas que in-
teractan de manera no covalente con las cargas opues-
tas de los principales grupos polares de los lpidos de la
membrana.
Protenas que atraviesan la membrana
muchas veces
Algunas protenas transmembranales tienen hlices 
que atraviesan la membrana muchas veces. La bacterio-
rodopsina, una protena encontrada en una bacteria
fotosinttica, capta energa de la luz y la usa para bom-
bear protones a travs de la membrana bacteriana.
Como numerosas protenas integrales, como las de los
receptores acoplados a la protena G (seccin E5), la
cadena polipeptdica de las asas de la bacteriorrodop-
sina cruzan de regreso y de salida la bicapa lipdica siete
veces (figura E2-1). Cada una de las siete hlices  trans-
membranales est unida a la siguiente por una breve
regin hidrfila de la cadena polipeptdica que est
expuesta sobre el lado extracelular o el citoslico de la
membrana. Otras protenas que atraviesan la mem-
brana por mltiples trechos tienen de dos hasta 14 hli-
ces transmembranales. Por ejemplo, la protena de la
banda 3 del intercambiador aninico de la membrana
plasmtica del eritrocito que transporta cloro y bicarbo-
nato a travs de las asas de la membrana, cruza la bicapa
lipdica de regreso y de salida hasta 14 veces.
Unas pocas protenas transmembranales, por ejemplo
la protena porina de la membrana externa de la bacte-
ria E. coli, no contienen hlices  y en su lugar atraviesa
la membrana con una estructura formada de hebras .
Cada hebra  est unida al hidrgeno de la hebra vecina
en una disposicin antiparalela que forma una hoja 
simple (seccin B2). La hoja  se enrolla para formar un
cilindro hueco que funciona como un canal a travs de
la bicapa.
Protenas ancladas a lpidos
Un nmero significativo de protenas integrales de
la membrana en los eucariotas carece de regiones trans-
membranales, pero estn ancladas a una u otra mono-
capa de la bicapa a travs de uniones covalentes entre
la protena y una cadena lipdica hidrocarbonada. Varias
protenas, incluida la protena prinica (el agente cau-
sal de la enfermedad de las vacas locas), estn fijas de
manera estable a la superficie celular a travs de un enla-
ce covalente de su aminocido del C terminal al grupo
cabeza de un fosfatidilinositol mediante un puente de
etanolamina-fosfato-trimanosa, las llamadas prote-
nas ancladas al glucosilfosfatidilinositol (GPI) (figura
E2-2a). Esta estructura compleja est construida por la
adicin secuencial de residuos individuales de azcar y
fosfato de etanolamina al fosfatidilinositol. Un pptido
con seal hidrfoba en el C terminal es eliminado de
la protena en la luz del RER y la GPI preformada fija se
aade al nuevamente expuesto aminocido del C termi-
nal (vase la seccin H4 para mayores detalles).

a) Cadena polipeptdica b)
EXTRACELULAR
M EtP Bicapa
M lipdica
N Gly CITOSOL
M
G I Miristato
EXTRACELULAR
C
Bicapa
lipdica
CITOSOL

c) d)

EXTRACELULAR EXTRACELULAR
Bicapa Bicapa
lipdica lipdica
Cys CITOSOL CITOSOL
Farnesilo -Hlice
C
N Palmitato

Figura E2-2. Protenas modicadas por lpidos: a) una protena ja al glucosilfosfatidilinositol

(I, inositol; G, glucosamina; M, manosa; EtP, fosfato de etanolamina); b) una protena
miristoilada; c) una protena prenilada; d) una protena palmitoilada.

Otras protenas se anclan de manera transitoria a la cara
citoslica de la membrana mediante ligaduras amida o
por medio de una molcula de miristato (C14:0) a un
residuo Gly N terminal (protenas miristoiladas; figura
E2-2b), o mediante un enlace tioter de un farnesilo de
15 carbonos o de un hidrocarburo poliinsaturado gera-
nilgeranilo de 20 carbonos a un residuo Cys C termi-
nal (protenas preniladas; figura E2-2c). El farnesilo y
el geranilgeranilo son sintetizados a partir de pirofos-
fato de isopentenilo, el precursor del colesterol (sec-
cin K5). Algunas protenas tambin son modificadas
en los residuos Cys con palmitato fijo de manera cova-
lente (C16:0) (protenas palmitoiladas). stas incluyen
algunas con polipptidos que atraviesan la membrana
(figura E2-2d), algunas protenas preniladas y algunas
protenas miristoiladas. Muchas de las protenas que
intervienen en la sealizacin celular, como las prote-
nas G y la familia de protenas Ras, son modificadas por
los lpidos (seccin E5).
Protenas perifricas de la membrana
Las protenas perifricas de la membrana estn uni-
das menos estrechamente a la bicapa lipdica que las
protenas integrales y pueden removerse con facilidad
mediante lavado de las membranas con una solucin de
alta fuerza inica (p. ej., NaCl 1 M) o de pH extremo.
Estos procedimientos dejan a la bicapa lipdica intacta,
pero destruyen las interacciones inicas y los puentes
de hidrgeno que mantienen a las protenas perifricas
en la superficie de la membrana. Ninguna parte de una
protena perifrica de la membrana interacta con el
centro hidrfobo de la bicapa. Las protenas perifricas
de la membrana pueden encontrarse en la superficie
externa o interna de la bicapa y pueden relacionarse con
la membrana a travs de interacciones no covalentes
con el grupo lipdico principal, con otras protenas de la
membrana o con ambos (vase la figura E2-4). Una vez
removidas de la membrana, las protenas perifricas se
comportan como protenas globulares solubles en agua
y pueden ser purificadas como tales (seccin C1).
Banda 3
EXTRACELULAR
CITOSOL
Anquirina
Banda 4.1
Figura E2-3. Citoesqueleto del eritrocito.
E2ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA 111
Citoesqueleto
La superficie citoslica de la membrana plasmtica eri-
troctica est cubierta por una red de protenas perif-
ricas de la membrana que constituyen el citoesqueleto
(figura E2-3) (seccin A2). El componente principal de
tal citoesqueleto es la espectrina, la cual se pliega en
una espiral enrollada helicoidal  de triple hebra para
formar cadenas largas. Las cadenas de espectrina se fijan
a la membrana plasmtica a travs de interacciones con
dos protenas perifricas, la anquirina y la protena de
banda 4.1. La anquirina forma un enlace cruzado entre
la espectrina y el dominio citoslico del intercambia-
dor de aniones integral, la protena de banda 3, mientras
que la banda 4.1 promueve la unin de los filamentos
de actina (seccin A2) a las cadenas de espectrina que
la ligan con el dominio citoslico de la glicoforina. El
citoesqueleto otorga a la membrana plasmtica del eri-
trocito mayor fuerza y flexibilidad y es importante en
el mantenimiento y alteracin de la forma de la clula.
En otras clulas de los mamferos, el citoesqueleto tiene
una funcin similar pero consiste en otras numerosas
protenas que se entrecruzan a travs del citoplasma
(seccin A2).
Modelo de mosaico uido de la
estructura de la membrana
En 1972, S. Jonathan Singer y Garth Nicholson propu-
sieron el modelo del mosaico fluido para la estructura
completa de las membranas biolgicas, en la cual las
membranas pueden verse como soluciones bidimensio-
nales de lpidos y protenas globulares orientados (figura
E2-4). Las protenas integrales de la membrana pueden
considerarse como icebergs que flotan en un mar
lipdico bidimensional. Ellos propusieron que la orga-
nizacin en bicapa de los lpidos podra actuar como
un solvente para las protenas integrales de la mem-
brana anfipticas y como una barrera de permeabi-
lidad. Tambin propusieron que algunos lpidos pue-
den interactuar con ciertas protenas de la membrana,
Glicoforina
Bicapa lipdica
Espectrina
Actin
Actina
112 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES
Protena
perifrica
Glucoprotena
Centro
hidrfobo
Protenas
integrales
Figura E2-4. Modelo de mosaico lquido de la estructura membranosa.
que dichas interacciones podran ser esenciales para el
funcionamiento normal de la protena y que las pro-
tenas de la membrana podan ser libres de difundirse
en direccin lateral en el plano de la bicapa, a menos
que estuvieran restringidas de alguna forma, pero que
no seran capaces de atravesar de un lado al otro de la
bicapa. Ahora este modelo cuenta con el soporte de una
amplia variedad de observaciones experimentales.
Movimiento y distribucin de la protena
integral de la membrana
Muchas protenas son libres de moverse hacia los lados
en el plano de la bicapa. Un experimento usado para
mostrar esto incluy la fusin de clulas de ratn cul-
tivadas con clulas humanas cultivadas bajo condicio-
nes apropiadas para formar una clula hbrida conocida
como heterocarin (figura E2-5a). Las clulas de ratn
fueron marcadas con anticuerpos especficos contra pro-
tenas de ratn a las cuales se fij el colorante fluorescen-
te verde fluorescena de manera covalente, mientras que
las clulas humanas fueron marcadas con el coloran-
te fluorescente rojo rodamina (seccin A4). Tras la fusin
celular, al observarlas con el microscopio de fluorescen-
cia (seccin A4), las protenas de ratn y humana fueron
segregadas en las dos mitades del heterocarin (figura
E2-5a). Despus de 40 minutos a 37 C, sin embargo, las
protenas de ratn y humanas estaban completamente
entremezcladas. La reduccin de la temperatura por
abajo de 15 C inhibi este proceso, lo que indic que
las protenas son libres para difundirse lateralmente
en la membrana y que este movimiento se lentifica a
medida que la temperatura se reduce. Debe hacerse
notar, sin embargo, que algunas protenas integrales de
la membrana no son libres de moverse lateralmente en
Oligosacridos Glucolpidos
Hojuela externa
Hojuela interna
Cadenas de cidos
grasos hidrfobas
Cabeza polar hidrla
Protena perifrica
la membrana debido a que interactan con el citoesque-
leto del interior de las clulas (vase ms adelante).
El movimiento lateral de las protenas en una mem-
brana tambin puede visualizarse por microscopia de
fluorescencia (seccin A4) a travs del uso de la tcnica
de recuperacin de la fluorescencia despus del foto-
blanqueamiento (FRAP). Primero, la protena de la mem-
brana se marca de manera especfica con un compuesto
fluorescente (seccin A4) y luego, mientras se visualiza
la superficie celular a travs de un microscopio de fluo-
rescencia, las molculas fluorescentes de una pequea
regin son destruidas (blanqueadas) mediante un pulso
intenso de luz de un lser. La fluorescencia de esta regin
blanqueada se inspecciona en funcin del tiempo en una
etapa posterior en funcin del tiempo, a medida que otras
protenas marcadas con fluorescencia se mueven hacia
dentro de la regin blanqueada de la membrana. La tasa
de recuperacin de la fluorescencia depende de la movi-
lidad lateral de las protenas marcadas con fluorescencia.
La distribucin de las protenas en las membranas puede
revelarse por microscopia electrnica mediante la tc-
nica de criofractura (figura E2-5b). En esta tcnica, un
espcimen de membrana se congela con rapidez a la
temperatura del nitrgeno lquido (196 C) y luego se
fractura mediante un impacto fuerte. La bicapa se divide
con frecuencia en las dos monocapas, lo que revela el
interior. La superficie expuesta se recubre entonces
con una pelcula de carbono y se sombrea con pla-
tino con el fin de que sea visualizada en el microscopio
electrnico (seccin A4). La superficie fracturada de la
membrana ha revelado la presencia de numerosas pro-
tuberancias distribuidas al azar que corresponden a las
protenas integrales transmembranales.
 E2ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA 113

Protenas de ratn Protena humana

a) b)
Protena integral
de la membrana

Clula de ratn Clula humana

Fusin

Heterocarin

37 C 15 C

Direccin de
la fractura

Figura E2-5. a) Movimiento y b) distribucin (como se muestra por microscopia

electrnica de criofractura) de las protenas integrales de la membrana.

Dominios lipdicos suele conseguirse al aadir un detergente, que solubi-

Las membranas biolgicas no son slo una mezcla
homognea de lpidos y protenas. Dentro de ellas hay
dominios acotados en los cuales ciertos lpidos y pro-
tenas se agrupan juntos para formar unidades estruc-
turales y funcionales. Por ejemplo, el agrupamiento
conjunto de colesterol, esfingomielina y glucoesfingo-
lpidos en la cara externa de la bicapa, ms otros lpidos
de la cara opuesta interior, da origen a las balsas lipdi-
cas. Varias protenas modificadas por lpidos, como las
protenas de la monocapa externa ancladas al GPI y las
protenas miristoiladas y palmitoiladas de la monocapa
interna, se asocian con balsas de lpidos mismas que
han sido implicadas en varios procesos celulares como
la sealizacin celular (seccin E5) y el transporte de
protenas y lpidos desde el aparato de Golgi a la mem-
brana plasmtica.
Puricacin y reconstitucin de las
protenas membranales
El primer paso en la purificacin de una protena inte-
gral de la membrana es destruir sus interacciones con
otras protenas y lpidos de la membrana. Lo anterior
liza la membrana. Con el fin de solubilizar la membrana
pero sin desnaturalizar las protenas, se usan deter-
gentes suaves como el Triton X-100 o el octilglucsido
(figura E2-6), en lugar de detergentes ms fuertes como
el SDS. Como las molculas del detergente son en s mis-
mas anfipticas, se intercalan con facilidad dentro de la
bicapa lipdica y rompen las interacciones hidrfobas.
Una vez que se solubiliza, la regin hidrfoba de la pro-
tena integral es revestida por una capa de molculas
del detergente, las cuales le permiten a la protena per-
manecer en solucin (figura E2-7a). La protena solubi-
lizada est entonces en condiciones de ser purificada
como una protena globular soluble en agua (seccin
C1), en tanto el detergente se mantenga en el amortigua-
dor para evitar la agregacin y la prdida de la protena.
Una vez purificada, una protena integral de membrana
puede reincorporarse (reconstituirse) dentro de vescu-
las artificiales de lpidos (liposomas) con el propsito
de estudiar su funcin (figura E2-7b). Si se aaden fos-
folpidos a la protena en la solucin con detergente y el
detergente se dializa hacia afuera, se forman de manera
espontnea vesculas de fosfolpidos que contienen a la
protena. A partir de stas, puede estudiarse la funcin de

a) b)
CH3 CH3 CH2OH
H3C C CH2 C O (CH2 CH2 O)10 H H O O (CH2) 7 CH3
H H
CH3 CH3 OH H
HO H
H OH

Figura E2-6. Estructuras del a) Triton X-100 y b) del octilglucsido.

114 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

Protena integral
a)

Bicapa Detergente
lipdica

Protena integral solubilizada

por el detergente

ATP

Ca2+

b) ADP
+Pi

Dilisis
+
Ca2+

Protena de Fosfolpidos
transporte
solubilizada
por el detergente

ATP-asa de Ca2+ funcional reconstituida

dentro de la vescula articial de lpidos

Figura E2-7. a) Solubilizacin con detergente y b) reconstitucin de una protena

integral de membrana dentro de vesculas articiales de lpidos.

la protena. Por ejemplo, si se reconstituye la ATP-asa de
Ca2+ dentro de las vesculas lipdicas, su funcin (esto
es, el transporte de calcio durante la hidrlisis del ATP)
puede estudiarse si se mide el calcio del interior de la
vescula al agregar calcio y ATP por fuera de ella (figura
E2-7b).
Carbohidratos de la membrana
La superficie extracelular de la membrana plasmtica
est cubierta con frecuencia con una capa protectora
de carbohidratos. Los residuos de azcar de tal reves-
timiento de carbohidratos pueden encontrarse unidos a
ciertos lpidos como los glucoesfingolpidos (seccin E1)
o a las cadenas polipeptdicas de las protenas perifricas
o integrales de la membrana. Estos glucolpidos y gluco-
protenas son abundantes en la membrana plasmtica de
las clulas eucariotas, pero estn prcticamente ausentes
de la mayora de las membranas intracelulares, en particu-
lar de la membrana mitocondrial interna y de las lmi-
nas del cloroplasto. En las glucoprotenas, los residuos
de azcar pueden fijarse a la cadena polipeptdica a tra-
vs del grupo hidroxilo de la cadera lateral de residuos
de Ser o Thr como oligosacridos unidos al oxgeno, o
a travs de un grupo amida de la cadena lateral del Asn
como oligosacridos ligados al nitrgeno (seccin H5).
El carbohidrato de la cara extracelular de la membrana
no slo desempea un papel protector sino que tam-
bin interviene en el reconocimiento intercelular y en
el mantenimiento de la asimetra de la membrana.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E3Transporte de membrana:
molculas pequeas
Notas clave
Permeabilidad de la La membrana plasmtica es una barrera selectivamente permeable. Algunas
membrana molculas pequeas, lipfilas pueden pasar directamente a travs de la bicapa
sin ayuda (transporte no-mediado), mientras que las molculas hidrfilas/car-
gadas requieren la presencia de protenas de transporte integrales de la mem-
brana (transporte mediado).
Transporte pasivo El movimiento de las molculas a travs de una membrana por transporte
pasivo no requiere ningn aporte de energa metablica. Las molculas se mue-
ven desde una concentracin alta a una concentracin ms baja.
Difusin simple El transporte pasivo por difusin simple (es decir, de agua, gases, urea, hormo-
nas esteroideas) no requiere la presencia de protenas integrales de la mem-
brana y la velocidad del movimiento es directamente proporcional al gradiente
de concentracin de las molculas a travs de la membrana.
Difusin facilitada El transporte pasivo por difusin facilitada requiere la presencia de protenas
integrales de la membrana especficas (canales, transportadores) para facilitar el
movimiento de la molcula (p. ej., glucosa, otros azcares, aminocidos) a travs
de la membrana. La protena transportadora (p. ej., el transportador de glucosa
del eritrocito) es una molcula especfica para una molcula particular. En algu-
nas clulas, el agua pasa a travs de protenas con canales llamadas acuaporinas.
Transporte activo El transporte activo de una molcula contra su gradiente de concentracin a
travs de una membrana requiere el aporte de energa metablica.

Transporte activo En el caso del transporte activo impulsado por el ATP, la energa requerida para
impulsado por el ATP el transporte de la molcula o ion (Na+, K+, Ca2+ o H+) a travs de la membrana se
(transporte activo deriva de la hidrlisis acoplada del ATP (p. ej., ATP-asa de Na+/K+, un ejemplo de
primario) una ATP-asa de tipo P). Los glucsidos cardiacos digitalina y ouabana, los cuales
se usan ampliamente en el tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva,
inhiben a la ATP-asa de Na+/K+.
Transporte activo En el transporte activo impulsado por iones, el movimiento de la molcula a
impulsado por iones transportar a travs de la membrana se acopla al movimiento de un ion (p. ej.,
(transporte activo Na+, H+) a favor del gradiente de concentracin. Si la molcula a transportar y
secundario) el ion se mueven en la misma direccin a travs de la membrana, el proceso se
llama simporte (p. ej., el transportador de Na+/glucosa); si la molcula y el ion
se mueven en direcciones opuestas, se llama antiporte (p. ej., el intercambiador
de Na+/Ca2+).
Transporte de glucosa El transporte de glucosa a travs de las clulas del revestimiento del epitelio
dentro de las clulas polarizados del intestino incluye su transporte a travs de la membrana api-
epiteliales intestinales cal por el simportador de Na+/glucosa; la energa para el movimiento de la glu-
cosa procede del movimiento del sodio a favor de su gradiente de concentra-
cin. La concentracin de los iones Na+ en el interior de la clula se mantiene a
un nivel bajo por la accin de la ATP-asa de Na+/K+ de la membrana basolateral.
Entonces, la glucosa abandona la clula a travs de la membrana basolateral
por difusin facilitada con la mediacin del transportador de glucosa. El movi-
miento del Na+ y la glucosa a travs de la clula establece una diferencia de
presin osmtica que causa su seguimiento por parte del agua por difusin
simple, lo cual constituye la base de la terapia de rehidratacin oral.
116 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES
Temas relacionados (E1) Lpidos de la membrana
(E2) Estructura de la membrana
Permeabilidad de la membrana
Una capa pura de fosfolpidos, con sus grupos hidrfo-
bos internos (seccin E1), es permeable al agua, gases
(O2, CO2, N2), pequeas molculas polares sin carga (p. ej.,
urea, etanol) y grandes molculas lipfilas (p. ej., hor-
monas esteroideas). Sin embargo, es impermeable a
las grandes molculas polares sin carga (p. ej., glucosa),
iones (Na+, K+, Cl, Ca2+) y a molculas polares con carga
(p. ej., aminocidos, ATP, glucosa 6-fosfato). El primer
grupo de molculas puede cruzar una membrana bio-
lgica sin ayuda y sin aporte de energa (transporte sin
mediacin), mientras que el ltimo grupo requiere la
presencia de protenas de transporte integrales de la
membrana y, en algunos casos, un aporte de energa
para viajar a travs de la barrera de otro modo imper-
meable de la membrana (transporte mediado). Por
tanto, la membrana plasmtica y las membranas de los
organelos internos son barreras selectivamente per-
meables, que mantienen un ambiente interno diferente.
Transporte pasivo
El transporte pasivo de molculas a travs de la mem-
brana no requiere un aporte de energa metablica. La
velocidad de transporte (difusin) es proporcional al
gradiente de concentracin de la molcula a travs de
la membrana. Hay dos tipos de transporte pasivo: difu-
sin simple y difusin facilitada.
Difusin simple
Slo las molculas pequeas sin carga o hidrfobas (H2O,
O2, CO2, otros gases, urea y etanol) o las molculas lipfi-
las ms grandes (p. ej., hormonas esteroideas, las cuales
derivan del colesterol; seccin K5) cruzan la bicapa lip-
dica por difusin simple, sin intervencin de protenas
de membrana, de manera que no hay especificidad. La
molcula en solucin acuosa en un lado de la mem-
brana se disuelve dentro de la bicapa lipdica, la cruza y
a)
Tasa de captacin
DIfusin
simple
Concentracin externa de O2
Figura E3-1. Cinticas de la difusin a) simple y b) facilitada.
(E6) Funcin nerviosa
luego se disuelve dentro de la solucin acuosa del lado
opuesto. La velocidad de difusin es directamente pro-
porcional al gradiente de concentracin de la molcula
a travs de la membrana y el proceso no es saturable
(figura E3-1a).
Difusin facilitada
A diferencia de la difusin simple, la difusin facilitada
(o mediada por transportador) de una molcula a travs
de una membrana biolgica depende de las protenas
especficas integrales de las membranas (seccin E2),
que se denominan indistintamente canales, acarrea-
dores, permeasas y transportadores. La molcula a
transportar se une a la protena integral en un lado de la
membrana; la protena entonces sufre un cambio con-
formacional, transporta la molcula travs de la mem-
brana y luego la libera en el otro lado. Las molculas
as transportadas a travs de las membranas pueden ser
hidrfilas como la glucosa, otros azcares y aminoci-
dos. Las protenas transportadoras son especficas para
una molcula o un grupo particular de molculas con
similitudes estructurales. Las protenas de transporte
pueden saturarse, muestran la cintica de unin tipo
Michaelis-Menten (Km y Vmx) (figura E3-1b) y son influi-
das por la temperatura, el pH y molculas inhibidoras
de una forma similar a lo que le sucede a las enzimas
(secciones D1 y D3).
Un ejemplo de difusin facilitada es la captacin de la
glucosa en los eritrocitos por el transportador de glu-
cosa. El transportador de glucosa de eritrocitos o uni-
portador (GLUT1) es una protena integral de la mem-
brana de 45 kDa de masa que est orientada de manera
asimtrica en la membrana plasmtica. Esta protena
uniportadora tiene una estructura que atraviesa la
membrana con 12 hlices  (seccin E2), la cual forma
un poro central a travs del cual pasa la molcula de
glucosa tras los cambios conformacionales de la pro-
tena (figura E3-2). Todos los pasos en el transporte de
b) Vmx
Tasa de captacin (V)
Difusin facilitada
Vmx
Km
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Concentracin externa de glucosa (mM)
 E3TRANSPORTE DE MEMBRANA: MOLCULAS PEQUEAS
Glucosa
LADO
EXTERNO
MEMBRANA
PLASMTICA
CITOSOL
Unidad de
Transportador glucosa
de glucosa
Figura E3-2. Difusin facilitada de la glucosa en los eritrocitos.
la glucosa hacia dentro de la clula son completamente
reversibles y la direccin del movimiento de la glucosa
depende de las concentraciones relativas de la gluco-
sa a ambos lados de la membrana. Con el fin de mantener
el gradiente de concentracin a travs de la membrana,
la hexocinasa fosforila con rapidez a la glucosa dentro
de la clula para convertirla en glucosa 6-fosfato (sec-
cin J3), la cual no es un sustrato demasiado grande
para el transportador de glucosa. El transportador de la
glucosa de eritrocitos es altamente especfico para la D-glu-
cosa (Km = 1.5 mM), mientras que el L-ismero no biol-
gico es transportado a una velocidad apenas medible. La
D-manosa y la D-galactosa, las cuales difieren de la D-glu-
cosa en la configuracin en el tomo de carbono 1 (sec-
cin J1), son transportadas a velocidades intermedias.
En consecuencia, el transportador tiene una afinidad
ms alta por la glucosa que por los otros azcares.
Aunque el agua atraviesa con facilidad las membranas
debido a su pequeo tamao, su alta concentracin y
la falta de una carga elctrica formal, muchas clulas,
como los eritrocitos y las del rin, contienen protenas
con canales para el agua, las acuaporinas, que aceleran
el flujo osmtico del agua. Cada protena acuaporina es
un tetrmero de subunidades idnticas de 28 kDa, con
seis hlices  transmembranales en cada subunidad. Las
molculas de agua se mueven a travs del poro central
de cada subunidad. Las acuaporinas permiten que las
clulas muevan grandes cantidades de agua con rapidez
a travs de su membrana plasmtica.
Transporte activo
El transporte activo, en el cual una molcula es transpor-
tada desde una concentracin baja a una alta, requiere
LADO
EXTERNO
MEMBRANA
PLASMTICA
CITOSOL ATP
2 K+
Figura E3-3. ATP-asa
117
El transportador La glucosa
El transportador
sufre un cambio difunde hacia
recupera su
conformacional el citosol
conformacin original
el aporte de energa metablica. sta puede derivarse
desde el acoplamiento directo a la hidrlisis del ATP o
mediante el acoplamiento al movimiento de un ion a
favor de su gradiente de concentracin.
Transporte activo impulsado por el ATP
(transporte activo primario)
En este caso, la energa requerida para el transporte de la
molcula a travs de la membrana deriva de la hidrlisis
acoplada del ATP. Se han identificado numerosas fami-
lias de transportadores dependientes del ATP, como las
ATP-asas de tipo P y los transportadores ABC. Un ejemplo
de un buen estudio de ATP-asa de tipo P es el de la ATP-
asa de Na+/K+ que interviene en el movimiento de los
iones de Na+ y de K+ a travs de la membrana plasmtica
de los eucariotas. Todas las clulas mantienen una con-
centracin interna alta de K+ y una concentracin interna
baja de Na+. El gradiente de Na+/K+ resultante a travs
de la membrana plasmtica es importante para el trans-
porte activo de ciertas molculas y el mantenimiento
del potencial elctrico de la membrana (seccin E6). El
regulador de la conductancia transmembranal en la
fibrosis qustica (CFTR) es un ejemplo de un transporta-
dor ABC. Esta protena, que es defectuosa en individuos
con la fibrosis qustica hereditaria, transporta Cl fuera
de la clula. El movimiento a travs de la membrana de
Na+, K+, Ca2+ e H+, as como de varias otras molculas, se
acopla directamente a la hidrlisis del ATP.
Estructura y accin de la ATP-asa de Na+/K+
La ATP-asa de Na+/K+ es una protena integral de la mem-
brana que consiste en una subunidad  de 110 kDa que
contiene los sitios de unin de iones y una subunidad 
3 Na
+
K+ bajo
Na+ alto
ADP+Pi K+ alto
Na+ bajo
de Na+/K+.
118 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

de 55 kDa de funcin desconocida, que forma un hete-
rotetrmero ()2 (figura E3-3). Despus de la hidrlisis
de una molcula de ATP a ADP y Pi (el Pi se une de mane-
ra transitoria a un residuo aspartilo en la protena), la
protena sufre un cambio conformacional y se bombean
tres iones Na+ fuera de la clula a travs de la membra-
na plasmtica y dos iones K+ en la direccin opuesta,
hacia dentro de la clula. Ambos iones se mueven en
contra de sus gradientes de concentracin a travs de
la membrana; por consiguiente, requieren de un aporte
de energa. No se produce transporte a menos que el ATP
se hidrolice y ste no se hidroliza si no hay Na+ y K+ para
transportar (es decir, se trata de un sistema acoplado).
Los glucsidos cardiacos o los esteroides cardiotnicos,
digitalina (encontrado en extractos de hojas de digital
prpura) y ouabana, inhiben a la ATP-asa de Na+/K+. La
resultante disminucin del gradiente de sodio inhibe al
intercambiador de Na+-Ca2+ (vase ms adelante), lo que
resulta en un incremento del calcio intracelular, el cual
mejora la contractilidad del msculo cardiaco. Estos fr-
macos se usan en forma amplia en el tratamiento de la
insuficiencia cardiaca congestiva.
Transporte activo impulsado por iones
(transporte activo secundario)
En este caso, el movimiento de la molcula a transportar
a travs de la membrana se acopla al movimiento de un
ion, en general Na+ o H+. La energa para el movimiento
de la molcula en contra de su gradiente de concentra-
cin a travs de la membrana procede del movimiento
del ion a favor de su gradiente de concentracin (elec-
troqumico). Si la molcula y el ion se mueven en la
misma direccin, se denomina simporte y la protena
participante en el proceso se denomina un simportador
(p. ej., el transportador de Na+/glucosa; figura E3-4a); si
la molcula y el ion se mueven en direcciones opuestas,
se denomina antiporte y la protena participante en el
proceso se llama antiportador (p. ej., el intercambiador
de Na+-Ca2+; figura E3-4b).
Transporte de glucosa en las clulas
epiteliales intestinales
Las clulas que revisten la luz del intestino estn pola-
rizadas, lo que significa que tienen dos lados o domi-
nios diferentes que tienen asimismo composiciones
distintas en lpidos y protenas. La membrana apical o
el borde en cepillo que mira hacia la luz est altamente
plegado en microvellosidades que incrementan el rea
de superficie disponible para la absorcin de nutrientes.
El resto de la membrana plasmtica, la superficie baso-
lateral, est en contacto con las clulas vecinas y con los
capilares sanguneos (figura E3-5). El movimiento entre
las clulas epiteliales adyacentes se evita mediante la
formacin de uniones estrechas alrededor de las clu-
las cerca del dominio apical. En consecuencia, cualquier
molcula de nutriente que se encuentra en la luz del
intestino tiene que pasar a travs del citosol de la clula
epitelial para que pueda ingresar a la sangre.
La glucosa (o los otros azcares y aminocidos) se trans-
porta a travs de la membrana apical desde una concen-
tracin relativamente baja en la luz del intestino a una
concentracin relativamente alta en el citosol de la clula
epitelial por medio de un simportador de Na+/glucosa
(figura E3-5). Esto es una forma de transporte activo
impulsado por un ion (secundario); la energa para el
movimiento de la glucosa en contra de su gradiente de
concentracin procede del movimiento del sodio a favor
de su gradiente de concentracin. El flujo sanguneo a
travs de los capilares en el lado basolateral de la clula
epitelial mantiene un gradiente de concentracin de la
glucosa a travs de esta membrana, lo que permite que
la glucosa se mueva fuera de la clula por difusin faci-
litada a travs de un transportador de glucosa (un uni-
portador), el cual es similar al transportador de la glu-
cosa de eritrocitos (vase antes). La relativamente baja
concentracin del Na+ dentro de las clulas epiteliales se
mantiene gracias a una ATP-asa de Na+/K+ (vase antes)
en la membrana basolateral, un ejemplo de transporte
activo impulsado por ATP (primario) (figura E3-5).

2+
a) b) Ca
LADO
EXTERNO
MEMBRANA
PLASMTICA
CiTOSOL
Na
+
Glucosa 3Na+

Figura E3-4. Mecanismos de cotransporte impulsados por iones.

a) Proceso de simporte que incluye un simportador (p. ej., el
transportador de Na+/glucosa; b) proceso de antiporte que incluye
un antiportador (p. ej., el intercambiador de Na+-Ca2+).
 E3TRANSPORTE DE MEMBRANA: MOLCULAS PEQUEAS 119

LUZ CLULA EPITELIAL SANGRE

INTESTINAL + +
Na baja Na alta
+ +
+
Na alta K alta K baja

Transportador
de glucosa
Glucosa Glucosa Glucosa
ATP
+ +
Na Na+ Na+ Na

+
Transportador K+ K
+
de Na /glucosa
ADP+Pi ATP-asa de Na+/K+
H 2O
H2O H 2O
Unin
estrecha
Membrana Membrana
apical basolateral

Figura E3-5. Transporte de glucosa, Na+ y agua a travs de las clulas del epitelio
intestinal.

Terapia de rehidratacin oral
En la terapia de rehidratacin oral (ORT), se administra
una solucin de glucosa y sal (NaCl) al paciente para
remediar su deshidratacin. ste es un importante tra-
tamiento que adems es simple, no caro, pero de suma
importancia, el cual ha salvado la vida de muchos lac-
tantes en los pases en desarrollo, quienes por otra parte
hubieran muerto bajo los efectos de la deshidratacin,
por lo regular asociada a diarrea. La glucosa mejora
la captacin del Na+ a travs del simportador de Na+/
glucosa, el cual a su vez mejora el movimiento del agua
por smosis a travs de las clulas del epitelio intestinal
hacia la sangre. Tomar slo agua es ineficaz ya que el in-
testino grueso usualmente secreta en vez de absorber
agua y iones Na+, los cuales despus son reabsorbidos.
Sin embargo, en sujetos con diarrea, el lquido secre-
tado dentro del intestino pasa a travs del intestino
grueso tan rpido que se reabsorbe muy poco Na+, lo
que conduce a niveles muy bajos de este catin en el
cuerpo.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E4Transporte de membrana:
macromolculas
Notas clave
Exocitosis La exocitosis es el movimiento de macromolculas (protenas, hormonas, neu-
rotransmisores) fuera de la clula, a travs de la membrana plasmtica, hacia
el espacio extracelular. Todas las clulas secretan protenas en forma continua
mediante vas secretorias constitutivas, aunque muchas clulas (p. ej., las del
pncreas y las clulas nerviosas) tambin secretan protenas a travs de una va
secretoria regulada en respuesta a ciertos estmulos. Las protenas destinadas a
secretarse se sintetizan en los ribosomas unidos a la membrana del RER y luego
son transportadas en vesculas unidas a la membrana hasta el aparato de Golgi,
donde son distribuidas y empacadas en vesculas secretorias. Las vesculas
recubiertas transportan material por toda la clula, siendo los revestimientos
de protenas como clatrina, COPI o COPII. Las protenas SNARE median la fusin de
las vesculas con sus membranas blanco.
Endocitosis La endocitosis es la captacin de macromolculas desde el espacio extracelu-
lar hacia la clula a travs de la membrana plasmtica, mediante la formacin
de una vescula intracelular que se pellizca y se proyecta desde la membrana
plasmtica.
Fagocitosis La fagocitosis es la captacin de partculas grandes (p. ej., bacterias y dese-
chos celulares). Las partculas se unen a la superficie de las clulas fagocticas y
la membrana plasmtica, que entonces las ingiere mediante la formacin de
una gran vescula endoctica, el fagosoma. La mayora de los protozoarios utiliza
la fagocitosis como una forma de alimentacin, mientras que en los organismos
multicelulares slo unas pocas clulas especializadas (p. ej., macrfagos y neu-
trfilos) pueden realizar fagocitosis.
Endocitosis mediada por La endocitosis mediada por receptores, una forma de pinocitosis, es la cap-
receptores tacin selectiva de macromolculas extracelulares a travs de su unin a
receptores especficos de la superficie celular. Luego, el complejo receptor-
macromolcula se acumula en pequeas cavidades revestidas de clatrina, que
son endocitadas mediante una vescula revestida por clatrina. Los polippti-
dos de clatrina forman una estructura de tres patas conocida como triesque-
lin, el cual se ensambla dentro de un marco convexo similar a un cesto que
causa que la membrana se imagine en ese punto, y que acabe por pellizcarla
para formar una vescula (endosoma). Estas vesculas revestidas de clatri-
na migran dentro de la clula, donde la clatrina del revestimiento se pierde para
formar endosomas iniciales. A medida que los endosomas maduran y acaban
por fusionarse con los lisosomas, su contenido se acidifica y los receptores de
la superficie celular son reciclados hacia la membrana plasmtica. El colesterol,
en la forma de lipoprotenas de baja densidad, es captado dentro de las clulas
de los mamferos por endocitosis mediada por receptor.
Temas relacionados (E2) Estructura de la membrana (H4) Direccionamiento de protenas
(E5) Transduccin de seales (K6) Lipoprotenas
(E6) Funcin nerviosa
 E4TRANSPORTE DE MEMBRANA: MACROMOLCULAS
Exocitosis
Con frecuencia, una clula necesita secretar molculas
ms grandes que las que pueden acomodarse en los sis-
temas de transporte que se estudiaron en la seccin E3.
Exocitosis se refiere al movimiento de macromolculas
como las protenas, hormonas, neurotransmisores, etc.,
a travs de la membrana plasmtica, hacia el espacio
extracelular. Las vesculas unidas a las membranas que
contienen la molcula a secretarse se fusionan con la
membrana plasmtica para liberar su contenido en el
espacio extracelular. En la va secretoria constitutiva
(figura E4-1), las vesculas destinadas a la membrana
plasmtica abandonan el aparato de Golgi en un flujo
constante. Las protenas y lpidos de la membrana de
estas vesculas proveen nuevo material para la mem-
brana plasmtica, mientras que las protenas solubles,
neurotransmisores, etc., dentro de las vesculas se secre-
tan hacia el espacio extracelular. Todas las clulas tie-
nen esta va constitutiva secretora.
Las protenas destinadas a secretarse por la clula se
traducen en ribosomas fijos al RER (seccin H4). Las
vesculas que contienen estas protenas geman desde el
RER, migran a travs del citosol y se fusionan con la mem-
brana del aparato de Golgi (figura E4-1). Otras vesculas
geman y mueven las protenas a travs de los diferentes
compartimientos del aparato de Golgi, donde se efec-
tan varias modificaciones postraduccionales en las
protenas, como la glucosilacin O-ligada (seccin H5).
Las protenas se empacan dentro de vesculas discretas
vesculas que geman de la red trans-Golgi y entonces
son dirigidas a las partes apropiadas de la clula (seccin
H4). Por ejemplo, las vesculas que contienen protenas
ESPACIO
EXTRACELULAR
Secrecin Estmulo
regulada
Vesculas
secretorias
Golgi
Ribosomas
Figura E4-1. Exocitosis de protenas por las vas secretorias constitutiva
y regulada.
121
de secrecin son dirigidas hacia la membrana plasm-
tica, y aquellas que contienen protenas lisosmicas se
dirigen hacia los lisosomas.
Pese a todo lo anterior, en ciertas clulas existe una va
secretoria adicional, la va secretoria regulada (figura
E4-1). Esta va se encuentra en particular en clulas
que se especializan en secretar rpidamente produc-
tos en respuesta a la demanda de un estmulo parti-
cular. Por ejemplo, la hormona insulina y las enzimas
digestivas son secretadas por el pncreas, en tanto que
los neurotransmisores son secretados por las neuronas
(seccin E6). En tales clulas secretorias, las sustancias
secretadas se almacenan de forma inicial en vesculas
secretorias, las cuales se forman por brotes emitidos
por la red trans-Golgi.
Vesculas revestidas y protenas
de revestimiento
Las vesculas que transportan materiales alrededor de
la clula se conocen como vesculas revestidas debido
a que tienen protenas especficas que cubren su super-
ficie externa (citoslica). Estas protenas de revesti-
miento actan como andamios flexibles y promueven
la formacin de vesculas. Los tres tipos conocidos de
vesculas revestidas se caracterizan por sus revestimien-
tos protenicos:
1. La clatrina forma un marco polidrico alrededor
de las vesculas que transportan material desde el
aparato de Golgi hacia la membrana plasmtica, as
como desde la membrana plasmtica hacia dentro
de la clula (vase ms adelante).
Membrana plasmtica
Secrecin
constitutiva
Lisosoma
ER rugoso
122 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES
2. La COPI reviste vesculas que participan en el trans-
porte hacia delante (antergrado) y hacia atrs
(retrgrado) entre compartimientos sucesivos del
aparato de Golgi.
3. La COPII reviste vesculas que se mueven desde el RER
hacia el aparato de Golgi.
Fusin de vesculas mediada por protenas
Cuando arriban a sus membranas de destino, las vescu-
las se fusionan con ellas y liberan sus contenidos en el
lado opuesto de la membrana blanco (figura E4-1). Este
proceso de fusin es mediado por protenas integrales de
la membrana o ligadas a lpidos conocidas como SNARE.
La R-SNARE o v-SNARE (la cual contiene residuos conserva-
dos de Arg e incluye a la sintaxina) suele asociarse con
la membrana de la vescula, mientras que la Q-SNARE o
t-SNARE (la cual contiene residuos de Gln conservados e
incluye a la sinaptobrevina y a la SNAP-25), se asocian
con sus membranas blanco. Diferentes SNARE Son escin-
didas protedticamente por las toxinas tetnica y botu-
lnica, que son las causantes de las fatales enfermedades
infecciosas ttanos y botulismo, respectivamente.
Endocitosis
La endocitosis es la captacin de macromolculas extra-
celulares a travs de la membrana plasmtica hacia el
interior de la clula. Una pequea porcin de la mem-
brana plasmtica encierra progresivamente el material
que se capta, la cual primero se invagina y luego se des-
prende para formar una vescula intracelular que con-
tiene a la molcula ingerida.
Bacteria
Lisosoma
Figura E4-2. Fagocitosis.
Fagocitosis
La fagocitosis es la endocitosis de grandes partculas
como las bacterias, desechos celulares o incluso clulas
intactas a travs de grandes vesculas endocticas deno-
minadas fagosomas. Para que sea posible ingerirla, pri-
mero la partcula debe unirse a la superficie del fagocito,
por lo general a travs de receptores especializados de la
superficie celular. Una vez que se une a la superficie celu-
lar, el fagocito es estimulado para que comience a ingerir
la partcula con su membrana plasmtica, encerrndola
dentro del fagosoma (figura E4-2). Despus, el fagosoma
se fusiona con un lisosoma (seccin A2) y la partcula
ingerida es degradada. El material utilizable ser trans-
portado por el citosol, mientras que las sustancias indi-
geribles permanecern en los lisosomas, donde forman
cuerpos residuales. En los protozoarios, la fagocitosis es
una forma de alimentacin, donde el material ingerido
es destruido en los lisosomas y utilizado como alimento.
En los organismos multicelulares, slo unas pocas clu-
las especializadas son capaces de realizar fagocitosis. Los
macrfagos y los neutrfilos (glbulos blancos) usan la
fagocitosis para proteger al organismo contra la infeccin
por ingestin de microorganismos invasores. Los macr-
fagos tambin intervienen en la eliminacin de las clulas
muertas y daadas y de los desechos celulares.
Endocitosis mediada por receptores
La endocitosis mediada por receptores, una forma de
pinocitosis (ingesta lquida de la clula), es la captacin
selectiva de macromolculas desde el lquido extracelu-
lar, la cual requiere receptores de superficie especficos
Membrana
plasmtica
Fagosoma
 E4TRANSPORTE DE MEMBRANA: MACROMOLCULAS
de la clula y por lo regular incluye cavidades y vesculas
revestidas de clatrina. Este proceso, que tiene lugar en la
mayora de las clulas animales, incluye la unin espe-
cfica de macromolculas a un receptor de la superficie
celular (en general, una protena integral de membrana;
Secciones E2 y E5). Cuando se une al receptor, el com-
plejo receptor-macromolculas se acumula dentro una
cavidad revestida de clatrina. Con la colaboracin de
la protena de unin de GTP asociada a la membrana, la
dinamina, estas cavidades brotan desde la membrana
para formar pequeas vesculas revestidas de clatrina
que contienen a los receptores y sus macromolculas
unidas (ligandos) (figura E4-3).
La endocitosis mediada por receptores proporciona una
forma de concentrar de manera selectiva macromo-
lculas particulares que estn a bajas concentraciones
en el lquido extracelular y de ese modo incrementa
la eficiencia de su captacin sin tener que incorporar
grandes cantidades de lquido extracelular. Uno de los
procesos endocticos mediados por receptores mejor
estudiados y comprendidos es la captacin de coleste-
rol en la forma de partculas de lipoprotenas de baja
densidad (LDL) por el receptor de LDL (seccin K6) de las
clulas de los mamferos.
Muchos virus y otras toxinas ingresan a las clulas ani-
males mediante endocitosis mediada por receptores.
Aunque las clulas no tienen receptores de la superficie
celular que reconozcan a la partcula viral de manera
deliberada, los virus evolucionaron hasta expresar una
protena de superficie que imita al ligando correcto que
reconoce el receptor Fc y que por tanto les permite a los
virus unirse y ser internalizados.
Receptores Ligando
Clatrina
CITOSOL
Reciclamiento
de receptores
Endosoma tardo
Lisosoma
Figura E4-3. Endocitosis mediada por receptor que incluye cavidades y vesculas
revestidas de clatrina.
123
Cavidades y vesculas revestidas de clatrina
La microscopia electrnica (seccin A4) ha revelado
que las pozas revestidas de clatrina son invaginacio-
nes de la membrana plasmtica que estn recubiertas
en su superficie citoslica con un material densamente
empacado elaborado predominantemente con la pro-
tena clatrina (figura E4-3). Esta protena, que ha sido
altamente conservada a travs de la evolucin, consiste
en tres cadenas polipeptdicas grandes y tres pequeas
que se juntan para formar una estructura de tres pa-
tas llamada trisquelin. Los trisqueliones de clatrina
se ensamblan formando un revestimiento a manera de
marco convexo similar a un cesto de hexgonos y pen-
tgonos para formar cavidades as revestidas. Se piensa
que el ensamblaje del revestimiento de clatrina impulsa
a la membrana a invaginarse en ese punto. A medida que
se aaden ms trisqueliones de clatrina a la estructura,
forman una caja completa que pellizca una regin de la
membrana y forma una vescula revestida de clatrina.
En la endocitosis, esas vesculas migran hacia el interior
de la clula y esparcen su revestimiento de clatrina para
formar endosomas iniciales, los cuales a su vez maduran
y se convierten en endosomas tardos (figura E4-3). El pH
del interior de los endosomas disminuye debido a bom-
bas de protones situadas en su membrana, mismas que
acidifican la luz de la vescula. Este cambio en el pH pro-
mueve con frecuencia la disociacin de la molcula (el
ligando) del receptor, lo que permite que los receptores
sean reciclados hacia la membrana plasmtica. Luego,
los endosomas se fusionan con los lisosomas, donde el
contenido es degradado y las partes componentes, como
aminocidos y azcares, pueden ser tomadas por el cito-
sol para ser usadas por la clula.
ESPACIO EXTRACELULAR
Membrana plasmtica
Cavidad revestida
Vescula revestida
Trisqueliones
de clatrina
Endosoma inicial
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E5Transduccin de seales
Notas clave
Sealizacin de las En los organismos multicelulares, las clulas se comunican unas con otras a
clulas travs de molculas u hormonas de sealizacin extracelular. La hormona es
secretada por la clula sealizante y se une a un receptor en la clula blanco,
con lo cual se inicia una respuesta en esta clula. En la sealizacin endocrina,
la hormona acta en un sitio distante del sitio del cual es producida, en la sea-
lizacin paracrina la hormona acta sobre clulas cercanas y en la sealizacin
autocrina la hormona acta en la misma clula que la secret.
Molculas de Algunas hormonas lipfilas (p. ej., las hormonas esteroideas) se difunden a tra-
sealizacin con vs de la membrana plasmtica e interactan con receptores intracelulares de
receptores intracelulares la familia del receptor nuclear en el citosol o en el ncleo. El gas xido ntrico
(NO) es una molcula de sealizacin que atraviesa la membrana plasmtica y
estimula a la enzima intracelular guanililciclasa para que produzca monofos-
fato cclico de guanosina (cGMP).
Molculas de Otras hormonas lipfilas (p. ej., las prostaglandinas) e hidrfilas (p. ej., las
sealizacin con hormonas peptdicas insulina y glucagon y las aminas biognicas adrenalina
receptores en la e histamina) se unen a receptores de la superficie celular. stas son protenas
supercie celular integrales de la membrana que se localizan en la membrana plasmtica y que
unen la hormona (ligando) con alta afinidad y especificidad. En la unin del
ligando, el receptor puede someterse a un cambio conformacional o dimeri-
zarse y transmitir la informacin a la clula (transduccin de la seal).
Receptores ligados Los receptores ligados a enzimas (p. ej., el receptor de insulina) tienen actividad
a enzimas intrnseca enzimtica. La unin del ligando causa autofosforilacin de los resi-
duos de tirosina en el dominio citoplsmico de los receptores de las cinasas de
tirosina. Estas tirosinas modificadas son entonces reconocidas por otras prote-
nas del citosol. Otros receptores tienen actividad de cinasa de serina/treonina,
mientras que algunos carecen de la actividad intrnseca de cinasa y se asocian
con las cinasas de tirosina citoplsmicas (p. ej., las cinasas de la familia Src).
Muchos receptores ligados a enzimas interactan a travs de pequeos domi-
nios de unin (p. ej. SH2) con protenas de andamiaje dentro de las clulas, las
cuales organizan grupos de protenas en complejos de sealizacin.
Receptores ligados El cambio en la conformacin de los receptores ligados a canales inicos per-
a canales inicos mite a los iones fluir a travs de la membrana y en esa medida alterar el poten-
cial de membrana.

Receptores acoplados Los receptores acoplados a la protena G (GPCR) contienen siete hlices alfa
a la protena G transmembranales y activan a las protenas trimricas G [unin-trifosfato de
guanosina (GTP)], que a su vez llevan a la produccin de un segundo mensajero
intracelular. Las protenas trimricas G contienen tres subunidades: ,  y .
Diferentes GPCR interactan con diferentes protenas trimricas G que condu-
cen a diferentes acontecimientos de sealizacin intracelular. Hay dos clases
principales de protenas que encienden a la GTP-asa: la subunidad G  de las
protenas trimricas G y las protenas monomricas G (p. ej., Ras). Se encuen-
tran ancladas a la superficie citoslica de la membrana plasmtica por un lpido
unido en forma covalente y hacen un ciclo a travs de una forma inactiva enla-
zada al GDP y una forma activa enlazada al GTP.
 E5TRANSDUCCIN DE SEALES 125

Segundos mensajeros Las molculas de sealizacin intracelular (segundos mensajeros) se producen

en respuesta a la activacin de varios receptores de la superficie celular. La
adenilciclasa y la guanililciclasa producen los segundos mensajeros cAMP y cGMP,
respectivamente. La activacin de la fosfolipasa C conduce a la produccin
de los segundos mensajeros 1,4,5-trisfosfato de inositol (IP3) y 1,2-diacilglicerol,
los cuales a su vez causan la liberacin de Ca2+ de los almacenes intracelulares
y activan a la cinasa C de protenas, respectivamente.
Iones calcio Muchas seales extracelulares inducen un incremento en el nivel de los iones
calcio en el citosol. Cuando se activan los canales de calcio, como los canales
de calcio dependientes de voltaje en la membrana plasmtica, los canales de cal-
cio con compuertas de IP3 y los receptores de la rianodina en el ER y en el retcu-
lo sarcoplsmico, los iones calcio fluyen hacia el citosol. El aumento del calcio
citoslico resulta en la alteracin de eventos celulares a travs de protenas que
unen calcio, como la troponina C en el msculo y la calmodulina.
Protelisis regulada Algunos receptores de la superficie celular sufren protelisis intramembranosa
regulada por la unin del ligando, liberando el dominio citoplsmico, el cual
se transloca hacia el ncleo.

Temas relacionados (E2) Estructura de la membrana (J7) Control del metabolismo del
(E6) Funcin del nervio glucgeno

Sealizacin de las clulas la sealizacin endocrina, la molcula de sealizacin

En los organismos multicelulares, hay necesidad por
parte de las clulas de comunicarse unas con otras con
el fin de coordinar su crecimiento y metabolismo. La
principal forma por la cual las clulas se comunican
con las otras es por medio de las molculas de seali-
zacin extracelular llamadas hormonas. Las clulas de
sealizacin sintetizan y secretan estas molculas, que
producen una respuesta especfica en las clulas blanco
(o destino) que tienen receptores especficos para la
molcula de sealizacin. Diferentes clulas pueden res-
ponder de modo distinto a la misma molcula de seali-
zacin segn el tipo de receptor y la reaccin intracelu-
lar iniciada (vase ms adelante). La sealizacin celular
puede clasificarse en tres tipos diferentes basados en la
distancia a la cual acta la molcula de sealizacin. En
(p. ej., insulina) acta sobre clulas blanco distantes del
sitio de su sntesis en clulas de un rgano endocrino
(p. ej., el pncreas; figura E5-1a). Las clulas endocrinas
secretan la molcula de sealizacin a la corriente san-
gunea (si es un animal) o a la savia (si es una planta),
la cual transporta la sustancia a las clulas blanco, que
se hallan en otro sitio del organismo. En la sealizacin
paracrina, la molcula de sealizacin slo afecta clu-
las blanco cercanas a la clula desde la cual la molcula
es secretada (figura E5-1b). La comunicacin desde una
clula nerviosa a otra mediante neurotransmisores qu-
micos es un ejemplo de sealizacin paracrina (seccin
E6). El tercer tipo de sealizacin celular es la sealiza-
cin autocrina, donde una clula responde a la molcula
que ha sido producida por ella misma (figura E5-1c).

a) Clula endocrina Molculas de sealizacin

Vaso sanguneo
Receptor

Clulas blanco distantes

b) c)

Clula secretoria Clula blanco cercana Receptores objetivo en la misma clula

Figura E5-1. Sealizacin celular: a) endocrina; b) paracrina; c) autocrina.

126 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES
Molculas de sealizacin con receptores
intracelulares
Pequeas hormonas lipfilas (solubles en lpidos)
difunden a travs de la membrana plasmtica y luego
interactan con receptores intracelulares en el citosol
o el ncleo. Todos los receptores guardan relaciones
estructurales y son parte de la superfamilia de recep-
tores nucleares. El complejo hormona-receptor resul-
tante se une con frecuencia a regiones del DNA y afecta
la transcripcin de ciertos genes (seccin G6). Entre las
pequeas hormonas lipfilas con receptores intracelu-
lares estn las hormonas esteroideas, las cuales se sin-
tetizan a partir del colesterol (seccin K5) (p. ej., las hor-
monas sexuales femeninas estrgeno y progesterona), la
tiroxina, la cual es producida por las clulas tiroideas
y es el principal compuesto yodado de los animales, el
cido retinoico, que deriva de la vitamina A y la vita-
mina D, la cual se sintetiza en la piel en respuesta a la
luz solar (seccin K5).
Un ejemplo importante y destacable de una pequea
molcula de sealizacin que atraviesa con facilidad la
membrana plasmtica de la clula objetivo es el gas xido
ntrico (NO). ste se usa en los animales y en las plantas.
El NO es sintetizado por desaminacin de la arginina,
catalizada por la enzima sintasa de NO (seccin M3).
El NO difunde con rapidez fuera de la clula que lo pro-
duce e ingresa en las clulas cercanas. Este gas slo
acta en forma local ya que tiene una vida media corta,
de alrededor de 5 a 10 segundos. En muchas clulas
blanco, el NO se une al sitio activo de la guanililciclasa
y la estimula para que produzca el pequeo mediador
intracelular cGMP (vase ms adelante). La nitroglice-
rina, la cual se usa para tratar a pacientes con angina de
pecho (dolor que resulta de un flujo sanguneo inade-
cuado hacia el msculo cardiaco), es convertida en NO,
el cual relaja los vasos sanguneos y por tanto reduce la
carga de trabajo del corazn. El monxido de carbono
(CO) es otro gas que se usa como una molcula de sea-
lizacin, lo que hace al estimular la guanililciclasa.
Molculas de sealizacin con receptores
en la supercie celular
Las molculas hidrfilas (solubles en agua) (las cuales
no pueden difundirse a travs del interior de la bicapa
lipdica hidrfoba) se unen a receptores de la superfi-
cie celular. stos incluyen a las hormonas peptdicas,
como la insulina y el glucagon y a pequeas molculas
cargadas, con frecuencia aminas biognicas, como la
adrenalina (adrenalina) y la histamina, que se derivan
de aminocidos y funcionan como hormonas y neuro-
transmisores (seccin E6). Algunas hormonas lipfilas
(solubles en lpidos) tambin se unen a receptores de
la superficie celular. Entre stas se incluyen las prosta-
glandinas, una familia de compuestos con similitudes
estructurales que se encuentran en los vertebrados y en
los invertebrados. Las prostaglandinas se sintetizan a
partir del cido araquidnico (un cido graso de 20 car-
bonos con cuatro dobles enlaces insaturados) (seccin
K1) y actan como molculas de sealizacin paracrina.
La aspirina y otros agentes antiinflamatorios inhiben
la sntesis de las prostaglandinas (seccin K1).
Los receptores de la superficie celular son protenas
integrales de la membrana situados en la membrana
plasmtica (seccin E2) que unen la molcula de sea-
lizacin (ligando) con alta afinidad. El ligando se une a
un sitio especfico del receptor de una forma similar
a como un sustrato se une a una enzima (seccin
D1). La unin del ligando al receptor puede causar un
cambio conformacional en ste o promover la dime-
rizacin de dos receptores, que desencadenan una
secuencia de reacciones (con frecuencia referida como
transduccin de la seal), en la clula blanco, lo cual
conduce a un cambio en la funcin celular. La distribu-
cin de los receptores vara entre las diferentes clulas
y hay con frecuencia ms de un tipo de receptor para
un ligando en especial, lo que permite que diferentes
clulas blanco respondan de manera distinta a la misma
molcula de sealizacin. Los receptores de la superfi-
cie celular pueden clasificarse en tres clases principales
segn cmo transfieren la informacin desde el ligando
al interior de la clula: receptores ligados a enzimas,
receptores ligados a canales inicos y receptores aco-
plados a la protena G.
Receptores ligados a enzimas
Numerosos receptores tienen actividad enzimtica
intrnseca o estrechamente asociada. Tras la unin del
ligando a su cara extracelular, tales receptores sufren un
cambio conformacional y ponen en marcha una activi-
dad enzimtica. En el caso del receptor de la insulina,
el cual es un complejo de dos subunidades  y dos subu-
nidades que se mantienen juntas por enlaces disulfuro,
la hormona polipeptdica insulina (el ligando o seal) se
une a la cara extracelular de las subunidades  (figura
E5-2). Acto seguido, el receptor sufre un cambio confor-
macional que lo lleva a la autofosforilacin del domi-
nio citoslico de la subunidad . De manera especfica,
se fosforilan los grupos hidroxilo de las cadenas latera-
les de ciertos residuos de tirosina, donde el ATP funge
como el donador de fosfato. El receptor fosforilado es
reconocido por otras protenas del citosol, que a su vez
modulan diversos eventos celulares, lo que permite a
la clula responder a la hormona de manera apropiada
(seccin J7). En adicin, la subunidad puede fosforilar
de manera directa otras protenas objetivo dentro de la
clula.
El receptor de insulina es un ejemplo de un receptor
de cinasa de tirosina, mientras que el factor de creci-
miento transformador (TGF-) pertenece a una familia
de receptores que tienen actividad de cinasa de serina/
treonina en su dominio citoslico. Otros receptores con
actividad enzimtica estrechamente asociada incluyen
 E5TRANSDUCCIN DE SEALES 127

Insulina
I
I I

EXTRACELULAR

MEMBRANA

CITOSOL ATP ATP

ADP P P ADP
P P

Figura E5-2. Transduccin de la seal a travs de un receptor ligado a una enzima

como el receptor de insulina.

a varios receptores de citocinas que unen interfero-
nes, hormona del crecimiento, algunas interleucinas y
otras citocinas. En el caso de muchos receptores liga-
dos a enzimas, la unin del ligando induce la oligome-
rizacin (formacin de dmeros o de oligmeros ms
grandes), y es este rearreglo de los dominios citosli-
cos el que permite a los dominios vecinos de cinasa de
las cadenas del receptor la fosforilacin cruzada entre
ellos en el proceso de autofosforilacin.
Algunos receptores ligados a enzimas, as como otros
receptores, interactan con protenas de andamiaje
dentro de la clula, los cuales organizan grupos de pro-
tenas en complejos de sealizacin (figura E5-3).
Las protenas del interior de estos complejos de sea-
lizacin se ensamblan a travs de las interacciones de
una variedad de dominios de unin pequeos y con-
servados, como los dominios con homologa 2 Src (SH2)
y los dominios de unin de fosfotirosina (PTB), que se
unen a residuos de tirosina fosforilados, los dominios
con homologa 3 Src (SH3), que se unen a secuencias de
aminocidos cortas ricas en prolina y los dominios
de homologa con la pleckstrina (PH), que se unen a los
grupos-cabeza de los fosfolpidos de inositol que han
sido fosforilados de manera adicional por la cinasa-3
de fosfatidilinositol (PI 3-cinasa). Algunas protenas de
andamiaje contienen mltiples dominios PDZ, cada uno
de los cuales se une a un motivo especfico en un recep-
tor o protena de sealizacin. La unin de estas prote-
nas al receptor activado puede ayudar a liberar la seal
hacia delante o puede disminuir el proceso de seali-
zacin, lo que implica una retroalimentacin negativa.

Protena Ligando
receptora
EXTRACELULAR

MEMBRANA

Y CITOSOL
SH2 P
SH3

PPP Protena
adaptadora

Seal corriente
abajo

Figura E5-3. Un complejo de sealizacin hipottico. La unin del ligando a la

cara extracelular del receptor de la supercie celular resulta en la fosforilacin de
un residuo de tirosina en su dominio citoslico. El residuo de tirosina fosforilado
es reconocido por un dominio SH2 en la protena adaptadora. Por otro lado, en
la protena adaptadora, es un dominio SH3 el que se une a una secuencia rica
en prolina (PTP) de otra protena de sealizacin, de manera tal que la seal se
retransmite dentro de la clula.
128 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES
EXTRACELULAR
Ligando
MEMBRANA
CITOSOL
Figura E5-4. Transduccin de la seal a travs de un receptor asociado a un canal
inico.
Algunos receptores de la superficie celular requieren de
la fosforilacin de la tirosina para su actividad, pero care-
cen de un dominio de cinasa de tirosina. Estos recepto-
res actan a travs de cinasas de tirosina citoplsmicas
(o cinasas de tirosina sin receptor), las cuales se asocian
con el receptor y fosforilan varias protenas blanco. La
familia ms grande de cinasas de tirosina citoplsmicas
es la familia Src, entre las cuales se incluyen la Src, Yes,
Fyn y Lck, que en todos los casos contienen dominios
SH2 y SH3, y se localizan sobre la superficie citoplsmica
de la membrana plasmtica.
Receptores ligados a canales inicos
Los receptores ligados a canales inicos (canales inicos
con compuertas transmisoras o receptores ionotrficos)
intervienen en la sealizacin sinptica rpida entre
clulas que se excitan en forma elctrica. Aqu, la unin
del ligando causa un cambio conformacional tal en la
protena que se abre un canal inico especfico (figura
E5-4). Esto permite que un determinado ion fluya a su
travs y que subsecuentemente altere el potencial elc-
trico transmembranal. Por ejemplo, en la unin neu-
romuscular, el neurotransmisor acetilcolina se une a
receptores especficos, que permiten que los iones Na+
fluyan hacia dentro y los iones K+ fluyan hacia fuera de la
clula blanco (vase la seccin E6, para mayores detalles).
Receptores acoplados a la protena G
Los receptores acoplados a la protena G (GPCR) forman
un grupo muy grande de receptores de la superficie celu-
lar que estn acoplados a protenas trimricas G trans-
ductoras de seal. Todos los GPCR contienen siete regio-
nes helicoidales  que atraviesan la membrana con
H3 N+
EXTRACELULAR
MEMBRANA
CITOSOL
Figura E5-5. Los GPCR contienen siete regiones de hlice transmembranales
(cilindros 1-7), con su N terminal en el lado extracelular de la membrana y su C
terminal en el citosol.
Ion
sus N terminales hacia la cara extracelular de la mem-
brana plasmtica y sus C terminales hacia la cara cito-
plsmica de la membrana (figura E5-5). La familia GPCR
incluye receptores para numerosas hormonas y neuro-
transmisores, receptores activados por la luz (rodopsi-
nas) del ojo y miles de receptores odorantes en la nariz
de los mamferos. Al unirse su ligando, los GPCR activan a
las protenas G trimricas transductoras de seal [pro-
tenas de unin-trifosfato de guanosina (GTP)], las cua-
les a su vez activan o inhiben a una protena efectora.
Las protenas trimricas G constan de tres subunidades:
,  y . La subunidad G es la protena interruptora de
la GTP-asa que se alterna entre un estado activo (encen-
dido) y un estado inactivo (apagado) (vase ms ade-
lante). En el genoma humano hay mltiples copias de
cada una de las subunidades ,  y , que proveen diver-
sidad en la sealizacin a travs de los GPCR.
Las subunidades G y G estn asociadas a la superfi-
cie citoslica de la membrana plasmtica por medio de
lpidos de anclaje a los que se unen de manera cova-
lente (seccin E2). En el estado de reposo, cuando no
hay ligandos unidos a los GPCR, la subunidad G est
unida al GDP y en complejos con G (figura E5-6).
La unin del ligando a los GPCR cambia su conforma-
cin, lo que determina que se unan a la subunidad G
y de esta forma que el GDP sea desplazado y remplazado
por el GTP. De inmediato, la subunidad G se disocia
de G, pero ambas permanecen fijas a la membrana.
La subunidad G con el GTP unido interacta y activa a
una protena efectora asociada, como la adenilciclasa,
o en algunos casos regula la abertura de un canal inico
que causa cambios en el potencial de membrana. Sin
embargo, esta activacin es de vida corta, ya que el GTP
1 2 3 4 5 6 7
COO
 E5TRANSDUCCIN DE SEALES 129

Ligando
EXTRACELULAR

MEMBRANA

Receptor G Adenilil-
G ciclasa
CITOSOL GDP
GTP
GDP

GTP

cAMP
ATP
Pi GTP +PPi

GDP

Figura E5-6. Transduccin de seal a travs de un receptor acoplado a una

protena G (vase texto para mayores detalles).

es rpidamente hidrolizado, en segundos, a GDP por la
actividad de la GTP-asa intrnseca de la subunidad G
(vase ms adelante). La subunidad G, ahora con GDP
unido, se disocia de la protena efectora, la desactiva, y
se reintegra con G, lista para otra ronda de activacin
y de intercambio de nucletidos (figura E5-6).
La hormona adrenalina se une a numerosos GPCR dife-
rentes. Cuando se une a receptores adrenrgicos 
localizados sobre la superficie de las clulas hepti-
cas y adiposas, promueve la glucogenlisis y la lipli-
sis, respectivamente (secciones J7 y K4). En las clulas
del msculo liso que revisten los vasos sanguneos del
intestino, la piel y los riones, la adrenalina se une al
receptor adrenrgico 2 y determina que las arterias se
contraigan. Los receptores adrenrgicos  estn aco-
plados a una protena G estimulante (Gs) que activa a
la adenilciclasa unida a la membrana, mientras que el
receptor adrenrgico 2 est acoplado a una protena
G inhibidora (Gi) que inhibe a la adenililciclasa. Por lo
tanto, a travs de la unin a diferentes receptores y a la
activacin de diferentes protenas G, un ligando puede
desencadenar una variedad de diferentes acciones en
distintas clulas blanco.
Protenas GTP-asa interruptoras
La familia GTP-asa de protenas es un grupo de prote-
nas interruptoras intracelulares (o de botones molecu-
lares de encendido y apagado), de las cuales hay dos
clases principales: la subunidad G de las protenas tri-
mricas G (vase antes) y las protenas monomricas
G, como las familias Ras, Rho y Rab. Las protenas Ras,
Rho y Rab, que se acoplan al receptor activado a travs
de protenas adaptadoras de andamiaje (vase antes),
actan como transductores y en la bifurcacin de la
sealizacin por protenas, ya que cambian la natura-
leza de la seal y la envan a lo largo de mltiples vas
corriente abajo. En el caso de Ras, se activa una cascada
de fosforilacin de serina/treonina corriente abajo, que
incluye a las cinasas de protena activadas por mitge-
nos (MAP-cinasa). Como las subunidades G, las prote-
nas Ras estn fijas a la cara citoslica de la membrana
plasmtica mediante un enlace covalente con un grupo li-
pdico (seccin E2). Cuando la GTP-asa tiene difosfato de
guanosina (GDP) unido, se encuentra en el estado apa-
gado. La activacin, a travs de un receptor de la super-
ficie celular o factor de intercambio del nucletido gua-
nina (GEF), lleva a que el GDP sea intercambiado por GTP,
lo que conduce a la GTP-asa al estado encendido (figura
E5-7). La GTP-asa activada con su GTP unido se disocia del
receptor y se une y activa una enzima efectora (p. ej., la
adenilciclasa), la cual a su vez cataliza la formacin de
un segundo mensajero (p. ej., cAMP). La GTP-asa hidro-
liza el GTP unido y causa su reversin al estado apagado
(figura E5-7). La toxina del clera acta por inhibicin
de la actividad intrnseca de GTP-asa (figura E5-7), lo que
130 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES
Activacin
GTP
Forma
inactiva
GDP
Pi
La actividad intrnseca de GTP-asa
hidroliza al GTP a GDP y Pi
Figura E5-7. La ciclizacin de la GTP-asa modica a las protenas entre las formas
activa e inactiva.
resulta en que, una vez activada al estado de GTP-unido,
la GTP-asa no puede apagarse otra vez.
Segundos mensajeros
La unin de ligandos a la mayora de los receptores lleva
a un incremento de vida corta en la concentracin de
ciertas molculas de sealizacin intracelulares deno-
minadas segundos mensajeros. (La hormona/ligando
puede considerarse como el primer mensajero.) Los
principales segundos mensajeros son el 3,5-AMPcclico
(cAMP), 3,5-GMP cclico (cGMP), 1,4,5-trisfosfato de ino-
sitol (IP3), 1,2-diaciglicerol (DAG) y el Ca2+. La elevacin
en el nivel de uno u otro de estos segundos mensajeros
lleva a una rpida alteracin de la funcin celular.
El cAMP y el cGMP derivan del ATP y el GTP por las acciones
de la adenilciclasa y la guanililciclasa, respectivamente.
Por ejemplo, la accin de la adrenalina y el glucagon en
el metabolismo del glucgeno es mediada a travs del
segundo mensajero cAMP, el cual a su vez activa a la pro-
tena cinasa dependiente de cAMP y a la protena cinasa
A (figura J7-3 en la seccin J7). El cAMP y el cGMP son de
vida corta, ya que resultan rpidamente degradados por
las fosfodiesterasas.
El IP3 y el DAG derivan del lpido 4,5-bisfosfato de fosfa-
tidilinositol de la membrana, que es un lpido, (el cual
es un derivado fosforilado del fosfatidilinositol; seccin
E1) por la accin de la fosfolipasa C, la cual tambin
se localiza en la membrana plasmtica y, como la ade-
nilciclasa, es activada a travs de las protenas G por los
GPCR (figura E5-8). Una de las principales acciones del IP3
polar es difundirse a travs del citosol e interactuar con
los canales de Ca2+ de la membrana del ER (figura E5-8), lo
que causa la liberacin de los iones Ca2+ almacena
dos, los cuales a su vez median varias respuestas celula-
res. El DAG producido por la hidrlisis del 4,5-bisfosfato
de fosfatidilinositol, junto con los iones calcio liberados
desde el ER, activa a la protena cinasa C, una cinasa
de protenas de serina/treonina unida a la membrana,
que fosforila varias protenas blanco, y otra vez conduce
GDP
Forma
activa
GTP
Toxina
del clera
a alteraciones de una diversidad de procesos celulares
(figura E5-8).
Iones calcio
Numerosas seales extracelulares inducen un incre-
mento en el nivel de los iones Ca2+ en el citosol. Por
ejemplo, en las clulas musculares, el Ca2+ desencadena
la contraccin. De manera habitual, la concentracin
del Ca2+ en el citosol se mantiene en valores muy bajos
(alrededor de 0.1 M), en tanto que su concentracin
en el lquido extracelular y en la luz del ER es alta (cer-
cana a 1 mM). Por consiguiente, hay un gradiente de los
iones de Ca2+ a travs de la membrana plasmtica y de
la membrana del ER, de manera que cuando los canales
de Ca2+ en estas membranas reciben estmulos para que
se abran, los iones de Ca2+ fluyen con celeridad hacia el
citosol, donde su concentracin aumenta hasta en 10 a
20 veces y activa protenas de respuesta al Ca2+ dentro
de la clula. Existen tres tipos principales de canales de
calcio: canales de calcio dependientes de voltaje en la
membrana plasmtica, que se abren en respuesta a la
despolarizacin de la membrana, por ejemplo en las c-
lulas nerviosas (seccin E6); canales de calcio con com-
puertas de IP3 en el ER (vase antes), y receptores de la
rianodina (as llamados debido a que el alcaloide vege-
tal rianodina los inhibe), que liberan Ca2+ desde el re-
tculo sarcoplsmico de las clulas musculares (seccin
B5) o desde el ER de otras clulas. Bombas de Ca2+, como la
ATP-asa de Ca2+, en el ER y la membrana plasmtica ayu-
dan a mantener la concentracin baja de los iones de
Ca2+ en el citosol de las clulas en reposo. Las protenas
que unen Ca2+ sirven como transductoras de la seal del
Ca2+ citoslico. Estas protenas que unen Ca2+ incluyen
a la troponina C del msculo esqueltico (seccin B5) y a
la calmodulina, una protena ubicua que se encuentra
en las clulas eucariotas. La calmodulina funciona como
un receptor intracelular de Ca2+ para mltiples propsi-
tos, en la mediacin de muchos procesos regulados por
el Ca2+, y sufre un cambio conformacional tras la unin
al Ca2+. Una vez que sucede esto, la calmodulina puede
 E5TRANSDUCCIN DE SEALES 131

Fosfolipasa C Protena cinasa C

Ligando

EXTRACELULAR

MEMBRANA

CITOSOL
Protena
Receptor ligado a
la protena G Protena G IP3

P -Protena

Retculo
endoplasmtico Respuesta
celular

4,5-Bisfosfato de
fosfatidilinositol Canal del Iones Ca2+
Ca2+

Figura E5-8. Generacin de los segundos mensajeros intracelulares IP3, DAG y Ca2+.

unirse a varias protenas blanco diferentes, como la
familia de las protenas cinasas dependientes de Ca2+/
calmodulina (CaM cinasas), las cuales son entonces
capaces de fosforilar serinas o treoninas de otras pro-
tenas.
Protelisis regulada
Existen varias vas de sealizacin inusuales para el
relevo de seales que parten desde los receptores de la
superficie celular hasta el interior de la clula que invo-
lucran la protelisis regulada. Entre estas vas est la
mediada por la protena receptora Notch y la va acti-
vada por las protenas secretadas Hedgehog, que han
sido altamente conservadas a lo largo de la evolucin
y desempean papeles cruciales en el desarrollo ani-
mal. En el caso del receptor transmembranal Notch, la
unin a su ligando Delta en la cara extracelular lleva
primero a un corte proteoltico en la regin adyacente
de la membrana y luego a un segundo corte dentro de
la regin transmembranal hidrfoba (figura E5-9). El
dominio citoplsmico liberado migra despus hacia el
ncleo, donde activa la transcripcin de varios genes
blanco (figura E5-9). El rompimiento proteoltico den-
tro de la regin transmembranal hidrfoba es inusual,
pero se han identificado ms y ms protenas que son
sujeto de esta protelisis intramembranal regulada
(RIP). En este proceso, a medida que los enlaces pept-
dicos de la protena receptora son cortados, el receptor
no puede ser reutilizado.

Ligando

Receptor

1 EXTRACELULAR

2 MEMBRANA

CITOSOL

Forma complejos y
activa la transcripcin
gentica

Figura E5-9. Sealizacin de la clula a travs del receptor Notch. La unin del
ligando resulta en el corte proteoltico del receptor 1) en la cara extracelular de
la membrana. El segmento unido a la membrana resultante es entonces cortado
dentro del dominio transmembranal 2), donde libera la cola citoslica, la cual forma
un complejo con otras protenas y activan la transcripcin de genes en el ncleo.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E6Funcin nerviosa
Notas clave
Clulas nerviosas Las clulas nerviosas o neuronas consisten en un cuerpo celular a partir del
El potencial de accin Existe un potencial de membrana elctrico a travs de la membrana plasmtica
Neurotransmisores
Temas relacionados
cual se extienden las dendritas y el axn. Las dendritas reciben informacin de
otras clulas; el axn pasa su informacin a otra clula, la clula postsinptica.
El axn est cubierto por una vaina membranosa de mielina excepto en los
nodos de Ranvier. El axn acaba en la terminal nerviosa, donde se almacenan
neurotransmisores qumicos en vesculas sinpticas para ser liberados en la
hendidura sinptica.
debido a la distribucin desigual de iones Na+ y K+, el cual es generado por la
ATP-asa de Na+/K+. Despus de la estimulacin, las neuronas despolarizan su
potencial de membrana desde el estado de reposo (60 mV) a +40 mV, lo que
genera un potencial de accin. El potencial de accin es causado por iones Na+
que fluyen hacia el interior de la clula a travs de canales de Na+ sensibles al
voltaje. Los iones K+ que fluyen hacia fuera de la clula a travs de canales de
K+ sensibles al voltaje restauran el potencial de membrana en reposo. El veneno
tetradotoxina acta por bloqueo del canal de sodio.
Los neurotransmisores, la acetilcolina, las aminas biognicas y los pptidos
pequeos se almacenan en la terminal nerviosa presinptica, dentro de las ve-
sculas sinpticas. Cuando el potencial de accin alcanza la terminal nervio-
sa, determina que las vesculas sinpticas se fusionen con la membrana plas-
mtica de una manera dependiente del Ca2+ y que liberen su contenido por
exocitosis. A continuacin, el neurotransmisor fluye a travs de la hendidura
sinptica, se une a receptores especficos de la membrana celular postsinptica
y se inicia una respuesta en esa clula.
(E2) Estructura de la membrana (E4) Transporte de membrana:
(E3) Transporte de membrana: macromolculas
molculas pequeas (E5) Transduccin de seales

Clulas nerviosas de 1 m, en los animales ms grandes. Cada milmetro

En los eucariotas, probablemente la sealizacin ms
rpida y compleja es mediada por los impulsos nervio-
sos. Las clulas nerviosas (neuronas) constan de un
cuerpo celular con numerosas proyecciones de la mem-
brana plasmtica denominadas dendritas (figura E6-1).
stas interactan con otras clulas y reciben informa-
cin de ellas bajo la forma de impulsos nerviosos. Enton-
ces, el cuerpo celular asimila la informacin derivada de
varios contactos dendrticos y pasa la informacin como
otro impulso nervioso hacia el gran axn (figura E6-1).
El axn termina en la sinapsis, donde hace contacto
con la clula postsinptica (clula objetivo o destino).
El axn es mantenido en su lugar por la vaina membra-
nosa de mielina, compuesta principalmente del lpido
esfingomielina (seccin E1), la cual acta como un ais-
lante elctrico y permite que los impulsos nerviosos se
transmitan por largas distancias, en ocasiones mayores
o ms a lo largo del axn, la vaina de mielina es in-
terrumpida por regiones desmielinizadas denominadas
nodos de Ranvier (figura E6-1). El extremo del axn, la
terminal nerviosa, est lleno de vesculas sinpticas que
almacenan a los neurotransmisores qumicos, como la
acetilcolina. Cuando un impulso nervioso alcanza la
terminal nerviosa, las vesculas sinpticas liberan su
contenido en la hendidura sinptica, el espacio entre
las clulas presinptica y postsinptica. Acto seguido, el
neurotransmisor fluye a travs del espacio e interacta
con receptores de la superficie de la clula postsinp-
tica, donde origina una seal que ser transducida por
esa clula.
El potencial de accin
Existe un potencial de accin elctrico (el potencial de
membrana) a travs de la membrana plasmtica de
 E6FUNCIN NERVIOSA 133

Dendritas

Ncleo Cuerpo celular

Montculo
del axn

Sinapsis
Vaina de
mielina Clula
postsinptica

Nodos de
Ranvier
Receptores
Axn
postsinpticos
Vesculas
sinpticas

Figura E6-1. Diagrama esquemtico de una clula nerviosa tpica.

todas las clulas. La mayor parte de las clulas son inac-
tivas desde el punto de vista elctrico, ya que su poten-
cial de membrana no vara con el tiempo. No obstante,
las neuronas y las clulas musculares son elctrica-
mente activas ya que su potencial de membrana puede
variar con el tiempo. En todas las clulas, el potencial
de membrana se genera a travs de la accin de la ATP-
asa de Na+/K+ (seccin E3), con una alta concentracin
de K+ dentro de la clula y una alta concentracin de
Na+ fuera de ella. Las neuronas varan su potencial elc-
trico por cambios controlados en la permeabilidad de
la membrana plasmtica a los iones Na+ y K+. Durante
la estimulacin, el potencial de membrana de una neu-
rona aumenta con rapidez desde el potencial de reposo
de 60 mV (milivoltios) a cerca de +40 mV (figura E6-2a);
en este punto, se dice que la membrana se despolariza y
que se genera un potencial de accin. Con el fin de que
lo anterior suceda, el potencial de membrana se despo-
lariza ms all de un nivel umbral crtico (aproximada-
mente 40 mV). Con el tiempo, el potencial de mem-
brana recupera el potencial de reposo. El potencial de
accin se propaga a lo largo del axn, comenzando en
el montculo axnico (figura E6-1).
El potencial de accin se origina por cambios transito-
rios pero grandes en la permeabilidad de la membrana
plasmtica de la neurona a los iones Na+ y K+. Estn pre-
sentes dos tipos de canales inicos sensibles al voltaje
en la membrana: uno presenta permeabilidad selectiva
a los iones Na+ y el otro a los iones K+ (figura E6-3a). Estas
protenas integrales de membrana (seccin E2) son
sensibles al potencial de membrana y sufren cambios

a) b)
+40
de membrana (mV)

Potencial de accin
Permeabilidades
Potencial

0 40
Na+
30
inicas

40 20 K+
Potencial 10
80 de reposo
1 2 3 4 0 1 2 3 4
Tiempo (ms) Tiempo (ms)
Estmulo

Figura E6-2. El potencial de accin: a) despolarizacin del potencial

de membrana; b) cambios en la permeabilidad de la membrana plasmtica
al Na+ y el K+.
134 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

a) [Na+] alto
EXTRACELULAR [K+] bajo
+ve

MEMBRANA Estado de
reposo
ve
Canal de Na+ Canal de K+
CITOSOL
[Na+] bajo
[K+] alto

b)
ve

Despolarizacin

+ve
Na+

K+
c)
+ve
Retorno al estado
de reposo
ve

Figura E6-3. Mecanismo de despolarizacin de la membrana nerviosa por la

abertura y cierre de los canales inicos selectivos al Na+ y al K+.

conformacionales a medida que los potenciales se alte-
ran. Primero, cambia la conductancia de la mem-
brana al Na+. La despolarizacin de la membrana ms
all del nivel umbral causa un cambio conformacio-
nal en el canal de Na+, lo que permite que los iones
Na+ fluyan a favor de su gradiente de concentracin
desde el exterior al interior de la clula (figura E6-3b).
La entrada de sodio despolariza an ms la membrana,
lo que causa la abertura de ms canales de Na+, de lo
que resulta un influjo rpido de Na+ y un cambio en
el potencial de la membrana de 60 mV a +40 mV en
un milisegundo. Entonces los canales de Na+ se cierran
de manera espontnea y los canales de K+ se abren,
lo que permite que los iones de potasio salgan de la
clula y restauren el potencial de reposo negativo en
unos pocos milisegundos (figura E6-3c). La onda de
despolarizacin se propaga a lo largo del axn por la
abertura de los canales de Na+ en el lado de la termi-
nal nerviosa de la regin despolarizada inicial (figura
E6-4). El potencial de accin slo puede moverse en
una direccin, ya que los canales de Na+ tienen un
periodo refractario durante el cual son insensibles a

Estado de reposo
+ + +++++++++ + Membrana
Fin del Axn
cuerpo
celular + + +++++++++ + Interior
+ + + + + + + + +
+ + + Extremo
+ + + terminal
Regin de
+ + + + + + + + + del nervio
despolarizacin
+ + + + + + + + +
+ + +
+ + +
+ + + + + + + + + Direccin en
que se mueve
+ + + +++ +++
el impulso
+++
+++
+ + + +++ +++
Estado de reposo
restablecido

Figura E6-4. Propagacin del potencial de accin a lo largo de un axn.


cualquier estimulacin adicional. Slo alrededor de
uno en un milln de iones de Na+ y K+ de una neurona
fluyen a travs de la membrana plasmtica durante el
potencial de accin. Por tanto, sta es una forma muy
eficiente de sealizacin para distancias largas. Puede
medirse la actividad de un solo canal por medio de la
tcnica del parche fijo, en la cual una pipeta de vidrio
limpio con un dimetro en su punta de alrededor de 1
m es presionada contra una clula intacta para formar
un sello.
La neurotoxina tetrodotoxina, un veneno muy potente
extrado del pez globo, bloquea la conduccin de los
impulsos nerviosos a lo largo de los axones y de esa
manera produce una parlisis respiratoria al unirse
de manera muy estrecha al canal de sodio y bloquear
su accin.
Neurotransmisores
Cuando el potencial de accin alcanza la terminal
nerviosa, causa la liberacin de un neurotransmisor
qumico desde las vesculas sinpticas. El sistema ner-
vioso de los mamferos emplea numerosas sustancias
como neurotransmisores. Entre stas se incluyen los
Potencial de accin
Terminal
presinptica
del nervio
Sinapsis K+
Na+
Clula
Potencial de accin
postsinptica
Figura E6-5. Liberacin de un neurotransmisor en la hendidura sinptica.
E6FUNCIN NERVIOSA 135
aminocidos glutamato y glicina, acetilcolina, aminas
biognicas como la adrenalina y la dopamina y una
variedad de pptidos pequeos como las encefalinas.
Por ejemplo, la acetilcolina es almacenada en vesculas
sinpticas, una forma especializada de vescula secreto-
ria y es liberada en la hendidura sinptica por exocito-
sis (seccin E4) a travs de un mecanismo dependiente
del Ca2+ (figura E6-5). Luego las molculas de acetilco-
lina difunden a travs de la membrana plasmtica de la
clula postsinptica, donde se unen a receptores espe-
cficos. El receptor de acetilcolina es un complejo de
250 kDa de cuatro cadenas polipeptdicas que forman
canales con compuerta a travs de la membrana (sec-
cin E5). Cuando se produce la unin de dos molculas
de acetilcolina, el canal se abre y permite que los iones
Na+ y K+ fluyan hacia dentro y fuera de la clula, res-
pectivamente. La despolarizacin resultante de la mem-
brana postsinptica inicia un nuevo potencial de accin
en la clula. La enzima acetilcolinesterasa degrada con
rapidez a la acetilcolina de la hendidura sinptica, por
lo cual es el objetivo de compuestos como el diisopro-
pilfosfofluoridato (vase la seccin D4 para revisar su
estructura y el mecanismo de accin), usado como un
componente de algunos gases nerviosos.
Vesculas sinpticas
Acetilcolina
K+
Receptor de acetilcolina
Na+
SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F1Introduccin al DNA
Notas clave
Bases En el DNA hay cuatro bases: adenina (se abrevia A), guanina (G), timina (T)
y citosina (C). La adenina y la guanina son purinas; la timina y citosina son
pirimidinas.
Nuclesidos Un nuclesido es una molcula formada por una base pirimidnica o prica
unida en forma covalente a un azcar. En el DNA, el azcar es desoxirribosa y
por eso es un desoxirribonuclesido. Hay cuatro tipos de desoxirribonucle-
sidos en el DNA: desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxitimidina y desoxi-
citidina.
Nucletidos Un nucletido est compuesto por una base, ms un azcar, ms un fosfato,
unidos todos de manera covalente. En el DNA, donde el azcar es desoxirribosa,
esta unidad es un desoxirribonucletido.
Enlaces 3'5' fosfodister En el DNA, los nucletidos estn unidos de manera covalente por enlaces 35
fosfodister para formar una cadena repetitiva de azcar-fosfato, que es el
esqueleto a la cual se fijan las bases.
Secuencia del DNA La secuencia del DNA es la secuencia de A, C, G y T a lo largo de la molcula del
DNA, la cual es portadora de la informacin gentica.

La doble hlice del DNA
Temas relacionados
En una hlice doble de DNA, las dos cadenas de DNA estn enrolladas una alre-
dedor de la otra con las bases en el interior y el esqueleto de azcar-fosfato
expuesto hacia el exterior. Las dos cadenas de DNA se mantienen juntas por
puentes de hidrgeno entre pares de bases; la adenina (A) siempre se parea
con la timina (T), y la guanina (G) siempre se parea con la citosina (C).
(F3) Replicacin del DNA en las bacterias (G2) Trascripcin en
(F4) Replicacin del DNA en los procariotas
eucariotas (G4) Transcripcin en
(G1) Introduccin al RNA eucariotas: descripcin

Bases es desoxirribosa (figura F1-1b) (es decir, el grupo 2OH

Las bases del DNA tienen estructuras de anillo forma-
dos por tomos de carbono y nitrgeno; debido a los
tomos de nitrgeno, se llaman bases nitrogenadas.
Hay dos tipos de estructuras anulares. La adenina y
la guanina son purinas (figura F1-1a), cada una de las
cuales tiene dos anillos de carbono y nitrgeno fusio-
nados pero con diferentes sustituyentes. La timina y la
citosina son pirimidinas (figura F1-1a); cada una tiene
slo un anillo de carbono y nitrgeno y adems difieren
en sus sustituyentes.
de la ribosa es reemplazado por un tomo de hidrgeno;
por eso desoxi) y de esta manera los nuclesidos son
desoxirribonuclesidos. En el DNA, stos son desoxiade-
nosina, desoxiguanosina, desoxitimidina y desoxici-
tidina. En cada caso, el C-1 del azcar est unido a la
base por medio de uno de sus tomos de nitrgeno. Si
la base es una pirimidina, el nitrgeno de la posicin
1 (es decir, N-1) participa en la unin del azcar. Si la
base es una purina, la unin es con la posicin N-9 de
la base (figura F1-1b).

Nuclesidos Nucletidos
En el RNA, el azcar de los nuclesidos es la ribosa (seccin Un nucletido es un ster fosfato de un nuclesido.
G1) y por eso son ribonuclesidos. En el DNA, el azcar Consiste en un grupo fosfato unido a un nuclesido en
 F1INTRODUCCIN AL DNA 137

a) NH2 O NH2 O

6 N H 6 N 4
HN 4 CH3
N1 5 7 N1 5 7 N3 5 3 5
8 8
2 4 2 4 2 6 2 6
9 9
3 3 1 1
N N H2 N N N O N O N
H H H H
Adenina (A) Guanina (G) Citosina (C) Timina (T)

NH2 NH2

N N N
b)
1 9
5' O N 5' N
5' N
HOCH2 HOCH2
HOCH2 O OH O O
4 4 4
4' 1' 1' 1'
4' 4'
H H H H H H
H H H 3' 2' H H 3' 2' H
3' 2'

HO H HO H HO H
Desoxirribosa Desoxicitidina Desoxiadenosina

NH2

c) N N

O O O

5' N N
O P O P O P O CH2
O
O O O 4
4' 1'
H H
H 3' 2' H

HO H
Desoxiadenosina 5'-trifosfato; dATP

Figura F1-1. a) Las purinas, adenina y guanina, y las pirimidinas, timina y citosina;
b) desoxirribosa y dos desoxirribonuclesidos, desoxicitidina y desoxiadenosina;
c) un desoxirribonucletido, desoxiadenosina 5 trifosfato (dATP).

el grupo hidroxilo del C-5 del azcar, que es lo que lo con- Enlaces 35 fosfodister
vierte en un nuclesido 5-fosfato o un 5-nucletido. El
nmero prima () denota el tomo del azcar al cual est En una molcula de DNA, los diferentes nucletidos
unido el fosfato. En el DNA, los nucletidos tienen desoxi- estn unidos mediante enlaces covalentes entre los
rribosa como su azcar y por eso se denominan deso- fosfatos y los azcares para formar un polmero largo.
xirribonucletidos. Los desoxirribonucletidos pueden En cada uno de los nucletidos, el fosfato enlazado
tener un grupo fosfato (desoxirribonuclesido 5-mono- al grupo hidroxilo en la posicin 5 del azcar est
fosfato, dNMP), dos grupos fosfato (desoxirribonucle- unido a su vez al hidroxilo del carbono 3 del azcar
sido 5-difosfato, dNDP) o tres grupos fosfato (desoxi- del siguiente nucletido. Como cada enlace fosfato-
rribonuclesido 5-trifosfato, dNTP). Estos ltimos son hidroxilo es un enlace ster, la ligadura entre los dos
los precursores para la sntesis de DNA. stos son la desoxirribonucletidos es un enlace 35 fosfodister
desoxiadenosina 5-trifosfato (dATP) (figura 1c), desoxi- (figura F1-2). Por consiguiente, en una cadena de DNA,
guanosina 5-trifosfato (dGTP), desoxicitidina 5-trifos- todos los grupos hidroxilo 3 y 5 participan en los
fato (dCTP) y desoxitimidina 5-trifosfato (dTTP). En cada enlaces fosfodister, excepto el primero y el ltimo
caso, la d en la abreviatura (p. ej., el dATP) indica que el ribonucletido de la cadena. El primer nucletido
azcar del nucletido es desoxirribosa. Durante la snte- tiene un fosfato libre en la posicin 5, que no se une
sis del DNA (secciones F3 y F4) se separan dos de los fos- a ningn otro nucletido, y el ltimo nucletido tiene
fatos de cada desoxirribonucletido (como pirofosfato) un hidroxilo libre en la posicin 3. Por lo tanto, cada
de manera que slo un fosfato (el fosfato ) se incorpora cadena de DNA tiene polaridad, puesto que tiene un
al DNA. extremo 5 y un extremo 3.
138 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

O P O
O
H2C 5' O Base
4
1'

H H H H
3'
O H

O P O

O
5'
H2 C O Base

H H H H

3'
O H

O P O

O
5'
H2C O Base

H H H H

O H

Figura F1-2. Enlaces 35 fosfodister formados entre nucletidos en una molcula

de DNA.

Secuencia del DNA dedujeron que el DNA est arreglado como dos cadenas
Cada nucletido puede considerarse como una letra que giran una en torno a la otra para formar una doble
de un alfabeto que slo tiene cuatro letras, A, G, C y T. hlice, con las bases en el lado interno y el esqueleto
Diferentes genes tienen distintas secuencias de estos de azcar-fosfato en el lado externo. En la doble hlice
cuatro nucletidos y de esa manera codifican mensajes (figura F1-3), las dos cadenas de DNA estn organizadas en
biolgicos especficos. Como los desoxirribonucletidos
del DNA difieren slo en las bases que contienen, esta 5 3
secuencia de desoxirribonucletidos puede registrarse A T
simplemente como una secuencia de bases. Por ejem-
plo, ACTTTCAGACC es parte de la secuencia de bases de Par de bases
C G
un gen y codifica parte de una protena, en tanto que A T
TGGAACCGTCA es parte de la secuencia de bases de un gen G C
diferente que codifica una protena distinta. Por con- T A
Surco Surco
vencin, la secuencia de bases se escribe en un orden menor mayor
que parte del extremo 5 de la cadena de DNA al extremo
C G
3, es decir, se escribe en la direccin 5 3. Dado que A T
hay cuatro tipos de nucletidos, el nmero de diferentes C G
G C
secuencias posibles (o mensajes) en una cadena de DNA Esqueleto de
Puentes de
de n nucletidos de largo es 4n. De manera tpica, las mo- hidrgeno azcar-fosfato
lculas de DNA son de muchos miles de nucletidos de C G
A T
largo, de manera que el nmero de mensajes posibles
T A
es enorme.
C G

La doble hlice del DNA C G

En 1953, Watson y Crick resolvieron la estructura tri- A T
3 5
dimensional del DNA a partir de fotografas de difrac- G C

cin con rayos X obtenidas por Franklin y Wilkins. Ellos Figura F1-3. La doble hlice del DNA.
 F1INTRODUCCIN AL DNA 139

una disposicin antiparalela (es decir, las dos cadenas
corren en direcciones opuestas, una est orientada en la
direccin 5 3 y la otra est orientada en la direccin
3 5). Las bases de las dos cadenas forman puentes
de hidrgeno una con la otra; la A se parea con T, y G se
parea con C. Esto se llama complementaridad de bases
(figura F1-4). En consecuencia, dos grandes anillos de
una purina se parean con un anillo ms pequeo de una
pirimidina y las dos bases se acomodan en el espacio
que separa a las dos cadenas de azcar-fosfato y mantie-
nen la distancia correcta. Este espacio resulta pequeo
para que dos purinas voluminosas puedan parearse, y
demasiado grande para una pareja de pirimidinas pues
se mantendran demasiado alejadas para interactuar. El
pareamiento de bases G:C y A:T tambin maximiza el
nmero de puentes de hidrgeno efectivos que pueden
formarse entre las bases; hay tres puentes de hidrgeno
entre cada par de bases G:C y dos puentes de hidrge-
no entre cada par de bases A:T. Por lo tanto, los pares
de bases A:T y G:C dan lugar a la conformacin ms
estable tanto desde cuestiones estricas como desde
el hecho de maximizar la formacin de puentes de hi-
drgeno.

H
CH3
N
H O H
H O
N
N N N
N N
H H
N dR
N dR
O N N O
N
N H
N N
dR
dR
H

Adenina : timina Guanina : citosina

Figura F1-4. Los pares de bases del DNA. Los puentes de hidrgeno se muestran
como lneas entrecortadas. dR, desoxirribosa.
SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F2Genes y cromosomas
Notas clave
Concepto de gen
Cromosomas procariotas
Cromosomas eucariotas
Nucleosomas
La bra de 30 nm Los nucleosomas estn organizados en una fibra de 30 nanmetros (nm). El
Estructuras de orden
ms elevados sentan sobre todo como fibras de 30 nm. Durante la divisin celular, los cro-
Genomas de los
organelos
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA
El concepto original de un gen fue el de una regin del DNA que codifica un poli-
pptido (o RNA). Sin embargo, ahora se sabe que los mecanismos postranscrip-
cionales de los eucariotas pueden generar mltiples polipptidos (relacionados
en secuencia) a partir de un solo transcrito de RNA, de manera que esta definicin
necesita actualizarse.
El DNA en una bacteria es una molcula circular de doble cadena, superenro-
llada, que est empacada en la regin del nucleoide de la clula. El DNA est
superenrollado de manera negativa, forma complejos con numerosas protenas
tipo histonas (sobre todo protenas HU, HLP-1 y H-NS) y est organizado en alre-
dedor de 50 dominios unidos a un andamio de protenas.
Las clulas eucariotas contienen mucho ms DNA que las procariotas. En el
ncleo, el DNA est empacado en cromosomas, que consisten sobre todo en DNA
y protenas llamadas histonas, aunque tambin estn presentes otras protenas
que no son histonas (NHP). Cada cromosoma contiene una molcula de DNA de
cadena doble lineal.
El DNA cromosomal forma complejos con cinco tipos de histonas (H1, H2A, H2B, H3
y H4). stas son protenas muy bsicas, ricas en arginina y lisina. Las secuencias
de aminocidos de las histonas estn muy conservadas a lo largo de la evolu-
cin. El DNA est enrollado alrededor de un octmero de histonas (dos molculas
de cada una de H2A, H2B, H3 y H4) para formar un nucleosoma. El DNA situado
entre nucleosomas vecinos (DNA conector) se une a la histona H1. El cociente
de empacamiento de los nucleosomas es cercano a 7.
ordenamiento exacto de los nucleosomas en la fibra de 30 nm es poco claro; las
posibilidades son de una hlice muy ordenada (denominada solenoide) o una
disposicin en zigzag. El cociente de empacamiento total es de alrededor de 40.
Durante la interfase, los cromosomas estn dispersos y se supone que se pre-
mosomas se compactan y condensan mucho, pero se sabe poco acerca de cmo
sucede esto. Sin embargo, una estructura de orden ms elevado es que la fibra
de 30 nm est fija a un andamio protenico central en cada cromosoma en una
serie de asas radiales.
La mayora de los genomas mitocondriales y de los cloroplastos son molcu-
las de DNA circulares de doble cadena, pero el genoma puede distribuirse en va-
rias molculas circulares en lugar de una sola molcula. En algunos eucariotas
unicelulares, el genoma mitocondrial es lineal, mientras que en otros eucario-
tas el genoma del organelo tiene forma circular y lineal. Los organelos tambin
pueden tener mltiples copias del genoma.
(F4) Replicacin del DNA en los eucariotas

Concepto de gen existencia de operones en los procariotas (seccin G3)

Para 1960, el gen se defini con claridad como la regin
del DNA que da origen a un polipptido (o a un RNA, en
el caso de los genes cuyo producto final es RNA y no
una protena, p. ej., los genes del RNA ribosomal). La
no pone en duda este concepto ya que, aunque numero-
sos genes agrupados producen un mRNA policistrnico,
se pueden todava identificar regiones individuales del
DNA como genes basados en los diferentes polipptidos
que codifican. Este concepto de gen incluye tambin

el descubrimiento de que muchos genes que codifican
protenas en los eucariotas contienen regiones codi-
ficantes (exones) separadas por secuencias no codifi-
cantes (intrones; vase la seccin G5) ya que, otra vez,
slo un polipptido resulta de esa regin del DNA. No
obstante, en tiempos ms recientes, se han descubierto
otros mecanismos en las clulas eucariotas, como el
de que una sola secuencia de DNA puede producir una
variedad de polipptidos diferentes; por ejemplo, el
empalme alternativo del RNA, los sitios de poliadeni-
lacin alternativos y la edicin del RNA (seccin G7).
Pese a esto, en cada uno de los casos mencionados, los
productos protenicos se tienen secuencias similares y
todos derivan de la misma regin individual del DNA. Por
lo tanto, la definicin original quiz necesite enmen-
darse para indicar que un gen codificador de protena es
una regin del DNA que codifica un solo polipptido o un
conjunto de polipptidos similares, pero por otro lado
la definicin se mantiene intacta. El escenario alterna-
tivo a considerar que una secuencia de DNA da origen,
por ejemplo, a 10 polipptidos que guardan una rela-
cin cercana por el procesamiento postranscripcional
como representativos de 10 genes no parece razonable.
El genoma de un organismo incluye a todos los genes de
ese organismo. Incluso en una clula bacteriana como
Escherichia coli (E. coli), la cantidad de DNA requerido es
sustancial (4.6 millones de pares de bases) y por eso
es que el DNA debe estar empacado. En una clula euca-
riota, el problema es mayor. Una clula humana tpica,
por ejemplo, contiene cerca de mil veces ms DNA que
una clula de E. coli. El resto de esta seccin describe
cmo se empaca el DNA en clulas procariotas y euca-
riotas.
Cromosomas procariotas
El concepto clsico, basado en estudios de Escherichia
coli, es que el DNA bacteriano es una molcula circular de
cadena doble (con frecuencia referido como el cromo-
soma bacteriano). Si fuera un crculo abierto, medira
alrededor de 1.6 mm de circunferencia, pero en realidad
a) b)
Figura F2-1. a) Una molcula de DNA de doble cadena circular; b) DNA
superenrollado; c) asociacin de DNA bacteriano circular con un complejo protenico.
F2GENES Y CROMOSOMAS 141
est superenrollado negativamente, esto es, se retuerce
sobre s mismo (figura F2-1b). El DNA superenrollado es
ms compacto que el DNA circular abierto, de manera
que el superenrollamiento es un buen recurso para el
empacamiento del cromosoma bacteriano dentro de
una clula bacteriana pequea, la cual tiene slo 1 2
m de tamao.
El DNA superenrollado se localiza en una regin de la
clula denominada nucleoide (seccin A1), donde est
organizado en 50 o ms asas o dominios unidos a un
centro o andamio protenico central, fijo a la mem-
brana celular. La figura F2-1c ilustra esta organizacin,
aunque slo se muestran seis asas para mayor claridad.
Dentro de esta estructura, el DNA forma complejos con
cuando menos cuatro protenas de unin del DNA, que
desempean un papel en su empacamiento, y entre las
cuales estn las protenas HU, HLP-1 y H-NS. La ms abun-
dante de stas es la HU. Su estructura es muy diferente de
las histonas (las cuales intervienen en el empacamiento
del DNA eucariota; vase despus) pero empacan al DNA
bacteriano de una forma similar ya que forman un tetr-
mero alrededor del cual se enrollan aproximadamente
60 pares de bases (bp) de DNA.
En aos recientes se ha descubierto que no todos los
procariotas tienen un DNA organizado a la manera cl-
sica de E. coli.

Un segundo grupo de procariotas, denominado ar-
quea, no contiene la protena HU, pero tiene protenas
con mayor similitud a las histonas, las cuales forman
un tetrmero alrededor del cual se enrollan cerca de
80 bp de DNA.

La mayora de los genomas bacterianos y arqueos
son molculas de DNA circulares como el de E. coli
descrito antes, pero algunas bacterias con genomas
lineales tambin se conocen en la actualidad, como
los de Streptomyces coelicolor, Agrobacterium tume-
faciens y Borrelia burgdorferi.

Algunos procariotas tienen genomas que estn divi-
didos en varias molculas, es decir, tienen genomas
Complejo
c) protenico
Asa o
dominio
142 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA
multipartitas. Por ejemplo, el genoma de Vibrio cho-
lerae, la bacteria que causa el clera, tiene sus genes
esenciales distribuidos en dos molculas circulares
de DNA.
Cromosomas eucariotas
La gran cantidad de DNA genmico en una clula eucariota
se halla estrechamente empacado en cromosomas den-
tro de un organelo especializado, el ncleo. Con excep-
cin de los cromosomas sexuales, los organismos euca-
riotas diploides como los seres humanos tienen dos
copias de cada cromosoma, uno heredado del padre y
otro de la madre.
Los cromosomas contienen DNA y protena. Si se toma
como base el peso, la mayor parte de la protena es
de histonas, pero tambin hay muchos miles de otras
protenas que son mucho menos abundantes y que se
denominan de manera colectiva protenas no histonas
(NHP). Este complejo nuclear de DNA-protena se deno-
mina cromatina.
En el ncleo, cada cromosoma contiene una molcu-
la de DNA de doble cadena lineal. La longitud de la molcula
de DNA empacada vara. En los seres humanos, la mo-
lcula de DNA ms corta de un cromosoma es de alrede-
dor de 1.6 cm y la ms larga es cercana a 8.4 cm. Durante
la metafase de la mitosis, cuando los cromosomas se
alinean en el huso mittico listos para la segregacin,
estn en su estado ms condensado y su tamao es de
slo 1.3 m a 10 m de largo. Por lo tanto, el cociente
de empacamiento, que es la relacin de la longitud de
la molcula lineal de DNA con la longitud del cromosoma
en metafase, es de alrededor de 104. En el lapso temporal
entre el final de una mitosis y el comienzo de la siguiente
(es decir, la interfase), la cromatina est ms dispersa.
Aqu, la relacin de empacamiento est entre valores
de 102 y 103. En total, el empacamiento ms extenso del
DNA en los cromosomas resulta de tres niveles de plega-
miento que incluyen a los nucleosomas, a los filamentos
de 30 nm y a las asas radiales.
Nucleosomas
El primer nivel de empacamiento incluye la unin del
DNA cromosmico a las histonas. En general, en los cro-
mosomas, la relacin entre DNA e histonas con base en el
peso es de alrededor de 1:1. Hay cinco tipos principales
de histonas denominados H1, H2A, H2B, H3 y H4. Las
histonas son protenas muy bsicas; alrededor de 25%
de sus aminocidos son lisina o arginina, de manera que
las histonas tienen un nmero muy alto de aminocidos
cuyas cadenas laterales tienen carga positiva. En conse-
cuencia, estos grupos con carga positiva se unen a los
grupos fosfato con carga negativa del DNA. No es de sor-
prenderse, dada su importancia en el empacamiento del
DNA, que las secuencias de aminocidos de las histonas
muestren un grado tan alto de conservacin durante la
evolucin. Las ms conservadas son las histonas H3 y
H4; por ejemplo, la H3 y la H4 de los chcharos y las
vacas difieren slo en cuatro y dos aminocidos, res-
pectivamente. La histona H1 es la menos conservada
de todas, lo cual refleja de alguna forma un papel dife-
rente en el empacamiento del DNA comparada con las
otras histonas (vase ms adelante). En las cabezas de
los espermatozoides, el DNA est particularmente muy
condensado y aqu pequeas protenas bsicas denomi-
nadas protaminas reemplazan a las histonas.
Cuando los cromosomas se descondensan de manera
discreta y se observan bajo el microscopio electrnico,
tienen el aspecto de cuentas en un collar (figura F2-2).
Las cuentas se denominan nucleosomas y consisten
en complejos de DNA con histonas. El collar es DNA
lineal de doble cadena entre nucleosomas adyacentes
y se denomina DNA conector (figura F2-2). La distan-
cia entre los nucleosomas, que es la longitud del DNA
conector, vara de alrededor de 50 a 70 pares de bases
(bp) entre los diferentes organismos. Incluso en un solo
ncleo, la distancia entre los nucleosomas adyacentes
vara en relacin con, por ejemplo, la presencia de otras
protenas de unin de DNA con secuencias especficas.
Si una preparacin de cromatina se incuba con nucleasa
de Micrococcus sp., una enzima que degrada el DNA, el
DNA conector se destruye y quedan partculas centra-
les del nucleosoma en las cuales las histonas protegen
al DNA asociado de la digestin. Cada partcula central
del nucleosoma contiene un fragmento de DNA de doble
cadena de 140 a 150 bp de longitud (segn la especie)
unido a un complejo de ocho histonas, el octmero de
histonas, que consiste en dos molculas de cada una
de las histonas H2A, H2B, H3 y H4 (figura F2-3). El DNA
se enrolla alrededor del octmero de histonas en cerca
de 1.65 vuelta, en un superserpentn con giro hacia la
izquierda. Los contactos entre el DNA y las histonas se
DNA conector Nucleosoma
Digestin por la nucleasa
del DNA conector
Nucleosomas liberados
(partculas centrales)
Figura F2-2. Estructura de la cromatina
similar a cuentas en un collar.
 F2GENES Y CROMOSOMAS 143

DNA central Sin embargo, algunos datos experimentales sugieren que

Histona
Octmero H1
de histonas
(2A, 2B,3,4)
11 nm
DNA
conector
Figura F2-3. Diagrama esquemtico de un
nucleosoma, que consiste en la doble hlice de DNA
enrollada alrededor de un octmero de histonas (dos
molculas de cada una de las histonas H2A, H2B, H3
y H4).
producen a lo largo de la cara interna de esta superh-
lice. En total, la relacin de empacamiento es cercana
a 7, que significa que la longitud del DNA se acorta alre-
dedor de siete veces por el enrollamiento alrededor del
nucleosoma.
La histona H1 se denomina histona conectora. Hay una
histona conectora fija a cada nucleosoma, pero su posi-
cin exacta no se conoce. Se pens que se une al lado
externo del octmero de histona, en la regin del DNA co-
nector, y que su funcin consiste en mantener el DNA
enrollado en el nucleosoma (figura F2-3), quiz inclu-
so en mantener a los nucleosomas adyacentes juntos.
la histona conectora puede localizarse entre el octmero
de histona y el DNA y no sobre la superficie.
La bra de 30 nm
Si los ncleos se lisan con delicadeza, se observa que la
cromatina existe como una fibra de 30 nm de dimetro.
El dimetro es mucho mayor que el de un nucleosoma
aislado (el cual es de alrededor de 11 nm) y sugiere que
los nucleosomas forman parte de una estructura supe-
rior. Se desconoce la manera exacta en cmo los nucleo-
somas se organizan para formar la fibra de 30 nm; una
posibilidad es que los nucleosomas se enrollen en una h-
lice muy ordenada de seis nucleosomas por vuelta y for-
men un solenoide (figura F2-4). Esto generara una fibra
de tres nucleosomas de ancho, lo que corresponde al
dimetro observado. En un solenoide de estas caracte-
rsticas, la longitud lineal del DNA ha sido reducida por
un factor adicional de 6 (equivalente a seis nucleoso-
mas por vuelta del solenoide). Acoplado a la relacin de
empaque de 7 para el nucleosoma en s (vase antes),
esto da una relacin de empacamiento para el sole-
noide de aproximadamente 6 7 (es decir, cercana a 40).
Un modelo alternativo es el modelo en zigzag (figura
F2-4b). Tambin existen otros modelos, incluido uno
llamado listn helicoidal.
Es importante entender que no toda la protena del
octmero de histona est contenida dentro del cuerpo
del nucleosoma. Cada molcula de histona tiene una
cola N terminal flexible que se extiende fuera del oct-
mero. Estas colas desempean un papel importante
en el control del gen, de modo que, cuando se modi-
fican qumicamente, la fibra de 30 nm puede volverse

a) b)

30 nm

30 nm

Figura F2-4. a) Modelo de solenoide propuesto de la estructura de la cromatina

para producir una bra de 30 nm. La estructura consta de seis nucleosomas por
vuelta de la hlice y por lo tanto tendra tres nucleosomas de ancho. En el diagrama
slo son visibles tres nucleosomas de cada vuelta; los otros tres nucleosomas que
le corresponderan a cada vuelta quedan atrs. b) Modelo del zigzag. En cada
nucleosoma, el DNA se enrolla alrededor del lado externo (1.65 vueltas de una
espiral dirigida a la izquierda). Sin embargo, en este diagrama simple, debido a la
orientacin de algunos nucleosomas, no se muestra todo el DNA superenrollado.
144 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

ms accesible para la transcripcin de los genes en los
nucleosomas asociados.
Estructuras de orden ms elevado
Durante la interfase (es decir, entre las divisiones nu-
cleares), los cromosomas estn dispersos en el ncleo
y presumiblemente como fibras de 30 nm. A pesar de
ello, durante la mitosis o meiosis, los cromosomas se
condensan mucho. Poco se sabe acerca de cmo ocurre
esta condensacin. Cuando los cromosomas se disocian
de las histonas, se observa que tienen un andamio pro-
tenico fibroso central (o matriz nuclear) al cual el DNA
se fija en asas (figura F2-5). Por consiguiente, in vivo se
ve que el siguiente orden de empacamiento incluye la
fijacin de la fibra de 30 nm a mltiples localizaciones
de este andamio protenico central en una serie de asas
radiales.
Genomas de los organelos
Las mitocondrias y los cloroplastos de las clulas euca-
riotas tambin contienen DNA pero, a diferencia del DNA
nuclear, la mayora de los genomas mitocondriales y
cloroplsticos son molculas de DNA circular de doble
cadena que se parecen a los cromosomas bacterianos.
Sin embargo, la situacin es ms compleja que esto.

El genoma del cloroplasto puede distribuirse en varias
molculas de DNA circular; en los dinoflagelados (algas
marinas), el genoma del cloroplasto est presente en
crculos mltiples, cada uno conteniendo aparente-
mente slo un gen.

Los genomas mitocondriales de Paramecium, Chla-
mydomonas y algunas levaduras (es decir, todos los
eucariotas unicelulares) son molculas lineales.

En algunos eucariotas hay versiones lineales del
genoma de los organelos que coexisten con formas
circulares.
Adems de esta complejidad est el hecho de que los
genomas de los organelos pueden contener mltiples
copias del genoma; por ejemplo, las mitocondrias hu-
manas contienen cerca de 10 copias idnticas.

~1 m

300 nm
Telmero

Centrmero

Andamio protenico
(matriz nuclear)
en el centro del
cromosoma
Fibra de 30 nm plegada dentro de las asas

Figure F2-5. Fijacin de la bra de 30 nm al andamio protenico central con las

asas dispuestas en forma radial alrededor del andamio. El diagrama de la derecha
muestra la representacin de un corte transversal de un cromosoma.
SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F3Replicacin del DNA en

las bacterias
Notas clave
Polimerasa de DNA
Horquillas de replicacin
Fragmentos de Okazaki
Cebadores del RNA
Protenas accesorias
La polimerasa I de DNA de E. coli requiere los cuatro desoxirribonuclesidos
5-trifosfato (dNTP) como precursores, Mg2+, una plantilla de DNA y un ceba-
dor con un extremo terminal 3OH. La sntesis del DNA ocurre en la direccin
5 3. La polimerasa I de DNA tambin tiene una actividad de exonucleasa
3 5 (correccin de errores) y una actividad de exonucleasa 5 3. Las poli-
merasas de DNA II y III de E. coli carecen de la actividad de exonucleasa 5 3.
La polimerasa III de DNA de E. coli es la principal enzima que sintetiza DNA durante
la replicacin, mientras que la polimerasa I de DNA llena el espacio vaco entre
los segmentos de DNA generados por la polimerasa III de DNA. La polimerasa II
de DNA interviene sobre todo en la reparacin del DNA.
La replicacin comienza en un solo sitio, es bidireccional y semiconservativa.
Cada burbuja (u ojo) de replicacin consiste en dos horquillas de replicacin.
La sntesis del DNA avanza en una direccin 5 3 en cada cadena del DNA
parental. En la cadena con la orientacin 3 5 (la cadena adelantada), el
nuevo DNA se sintetiza de manera continua. En la cadena que tiene la orienta-
cin 5 3 (la cadena retrasada), el DNA se sintetiza en forma discontinua como
una serie de pequeos fragmentos de Okazaki, que luego son unidos.
La replicacin del DNA requiere un cebador de RNA que sintetiza una polimerasa
de RNA denominada primasa. Este cebador es extendido por la polimerasa III de
DNA, la cual produce el DNA para ambas cadenas: la adelantada y la retrasada. La
polimerasa I de DNA degrada el cebador y lo reemplaza con DNA. A continuacin,
la ligasa de DNA junta los extremos del DNA.
Una helicasa desenrolla la doble hlice de DNA y la protena de unin al DNAmo-
nocatenario (SSB) estabiliza las regiones de cadena sencilla durante la replica-
cin. La topoisomerasa I de DNA permite que la hlice se desenrolle sin causar
una rotacin extensa del cromosoma. La topoisomerasa II de DNA separa las dos
molculas circulares de DNA, productos de la replicacin.

Temas relacionados (F1) Replicacin del DNA en bacterias

(F4) Replicacin del DNA en eucariotas

Polimerasas de DNA
Un cebador con un 3OH libre que la enzima pueda

La polimerasa I de DNA de E. coli cataliza la adicin por
pasos de desoxirribonucletidos al extremo 3OH de
una cadena de DNA:
(DNA)residuos n + dNTP (DNA)n+1 + PPi
La enzima presenta los siguientes requerimientos:

Los cuatro dNTPs (dATP, dGTP, dTTP y dCTP) deben estar
presentes para ser usados como precursores; tam-
bin se requiere ms Mg2+.

Es esencial una plantilla de DNA para que la polime-
rasa de DNA la copie.
extender.
La polimerasa I de DNA es una enzima dirigida por la plan-
tilla que reconoce al siguiente nucletido de la planti-
lla de DNA y aade un nucletido complementario al
3 OH del cebador, con lo que forma un enlace 3 5 fos-
fodister y libera un pirofosfato. La reaccin se mues-
tra en la figura F3-1. sta incluye el ataque nuclefilo
del 3 OH del cebador en el grupo fosfato del nucle-
tido siguiente. El cebador se extiende en la direccin
5 3 .
La polimerasa I del DNA tambin corrige errores en el
DNA al eliminar los nucletidos equivocados (es decir,
146 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

5' 5'
3' 3'
Cadena plantilla Cadena plantilla
O de DNA O de DNA

H 2C O G C H2C O G C
4 4

H H H H
H H H H
PPi
O O HO
.. O H O H


O P O P O P O P O

O

O
O O
O
H2C T A H2C O T A
O

H H H H H H H H

HO H 5' HO H 5'

Figura F3-1. Sntesis del DNA. En este diagrama esquemtico se muestran los puentes de
hidrgeno y un enlace 35 fosfodister que se est formando entre la dTTP con la adenina de
la cadena de la plantilla de DNA, con liberacin de un pirofosfato.

tiene una actividad de correccin de errores). Por con-
siguiente, durante la polimerizacin, si el nucletido
que acaba de incorporarse es incorrecto (equivocado),
es removido mediante la actividad de una exonucleasa
3 5. Esto incrementa la fidelidad y se reduce la tasa
de error a menos de 10-8 por par de bases. La polimerasa
I de DNA tambin exhibe una actividad de exonucleasa
5 3, es decir que puede hidrolizar un cido nucleico
comenzando desde el extremo 5 de la cadena. Esta
actividad desempea un rol clave en la remocin del
cebador de RNA usado al inicio de la replicacin (vase
despus). Por lo tanto, en general, la polimerasa I de DNA
tiene tres sitios activos diferentes en su cadena polipep-
tdica: polimerasa 5 3, exonucleasa 3 5 y exonu-
cleasa 5 3.
E. coli tambin contiene otras dos polimerasas de DNA,
la polimerasa II de DNA y la polimerasa III de DNA. Como
sucede con la polimerasa I de DNA, estas enzimas catali-
zan asimismo la sntesis de DNA dirigida por una plantilla
desde desoxirribonucleotidil 5trifosfato, necesitan un
cebador con un grupo 3OH libre, sintetizan DNA en la
direccin 5 3 y presentan actividad de exonucleasas
3 5. Ninguna enzima tiene actividad de exonucleasa
5 3.
Aunque la polimerasa I de DNA fue la primera polimera-
sa de DNA bacteriana aislada (en 1957, por Arthur Korn-
berg), de hecho es la polimerasa III de DNA (aislada en
1972) la principal enzima replicativa responsable de
copiar la mayor parte de la plantilla del DNA. Sin embargo,
la polimerasa I de DNA desempea una funcin impor-
tante en la replicacin; como se describe despus, llena
el espacio entre las regiones del DNA sintetizado por la
polimerasa III de DNA. La polimerasa II de DNA participa
sobre todo en la reparacin del DNA, no en la replicacin
del genoma.
Horquillas de replicacin
Cuando el cromosoma circular bacteriano se replica,
la replicacin se inicia en un origen nico. En E. coli,
ste se llama locus oriC y contiene cinco copias de
una secuencia de DNA que acta como un sitio de unin
para la protena de reconocimiento del origen DnaA.
Esta interaccin facilita la unin de otras protenas,
como DnaB, una helicasa de DNA. Las regiones locales
del oriC se desenrollan y quedan listas para que ambas
cadenas sirvan de plantillas en la sntesis del nuevo DNA.
Luego, la sntesis del DNA avanza en ambas direcciones
desde el origen nico (es decir, es bidireccional; figura
F3-2). Los productos de la reaccin son dos molculas
de DNA de cadena doble hijas, cada una de las cuales
tiene una cadena de la plantilla original y una cadena
del DNA que acaba de sintetizarse. En consecuencia, la
replicacin es semiconservativa. La regin de replica-
cin del DNA asociada con el origen nico se denomina
burbuja de replicacin y consiste en dos horquillas
de replicacin que se mueven en direcciones opuestas
alrededor del crculo de DNA (figura F3-2).
Fragmentos de Okazaki
La doble cadena del DNA es antiparalela (seccin F1);
una cadena corre en direccin 5 3 y la cadena
complementaria lo hace en direccin 3 5 . Como la
 F3REPLICACIN DEL DNA EN LAS BACTERIAS 147

a) Burbuja de replicacin b) Horquillas de la replicacin

Figura F3-2. Replicacin del cromosoma circular bacteriano. La replicacin inicia

en un origen nico y avanza en dos direcciones, a) movindose alrededor del
cromosoma en el transcurso del tiempo. b). Las dos horquillas de replicacin
acaban por encontrarse y unirse. Cada una de las dos molculas hijas de DNA
circular producidas tiene una cadena del DNA plantilla original (lnea delgada) y una
nueva cadena (lnea gruesa).

doble cadena original del DNA se abre en una horquilla
de replicacin, el nuevo DNA se sintetiza contra cada
cadena plantilla. De manera superficial, por tanto, se
puede esperar que el nuevo DNA sea 5 3 para una
cadena hija y 3 5 para la otra cadena hija. Pese a
ello, todas las polimerasas de DNA slo producen DNA
en la direccin 5 3 y nunca en la direccin 3 5 .
En realidad lo que sucede es que en la cadena plantilla
con orientacin 3 5 , el nuevo DNA se hace en un
fragmento continuo en la direccin correcta 5 3 .
Este DNA nuevo se denomina la cadena adelantada
(figura F3-3). En la otra cadena plantilla (que tiene
orientacin 5 3 ), la polimerasa III de DNA sinte-
tiza piezas cortas de nuevo DNA (de alrededor de 1 000
a 2 000 nucletidos de largo) en la direccin 5 3
(figura F3-3) que luego son unidos. Estos fragmentos
pequeos se llaman fragmentos de Okazaki en honor
a su descubridor. La nueva cadena de DNA, la cual se
elabora mediante este mtodo discontinuo, se llama
cadena retrasada.
Cebador de RNA
La polimerasa de DNA no puede iniciar la sntesis del DNA
sin un cebador. Incluso en la cadena retrasada, cada
fragmento de Okazaki requiere un cebador de RNA antes
de que se pueda iniciar la sntesis del DNA. El cebador
usado en cada caso es un fragmento corto de RNA [alre-
dedor de 4-15 nucletidos (nt) de longitud] y los sintetiza
una polimerasa de RNA llamada primasa (figura F3-4a).
La primasa puede sintetizar RNA directamente usando
como plantilla DNA monocatenario debido a que, como
todas las polimerasas de RNA, no requiere un cebador
para comenzar la sntesis. El cebador de RNA produci-
do por la primasa (figura F3 4b) es extendido luego por
la polimerasa III de DNA (figura F3-4c). La polimerasa III
de DNA sintetiza DNA para las cadenas adelantada y retra-
sada (figura F3-4d). Despus de la sntesis del DNA por la
polimerasa III de DNA, la polimerasa I de DNA, a travs de
su actividad de exonucleasa 5 3 hidroliza el cebador
de RNA y sintetiza DNA para rellenar el espacio que qued

3
5 Cadena adelantada

5
Fragmentos de Okazaki
3

3 Cadena retrasada
5

Figura F3-3. Sntesis de DNA en una horquilla de replicacin. A medida que el

DNA parental (lnea delgada) se abre, cada una de las dos cadenas parentales
acta como una plantilla para la sntesis de nuevo DNA (lneas gruesas). La cadena
adelantada se sintetiza en forma continua, pero la cadena retrasada se sintetiza
bajo la forma de pequeos fragmentos de DNA (Okazaki), que luego se unen.
148 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

3 Plantilla de DNA parental 5

a)

Primasa

b)
5 3
Cebador de RNA Sntesis de nuevo DNA
para la polimerasa III
de DNA
c)
5 3

d)
Cebador de RNA removido
y espacio vaco llenado con
DNA por intermedio de la
polimerasa I de DNA
e)

f)
Fragmentos de DNA
unidos por la
ligasa de DNA
g)

Figura F3-4. Detalles de la replicacin del DNA: a) la primasa se une a la cadena

plantilla de DNA (lnea delgada) y b) sintetiza un cebador corto de RNA (lnea
entrecortada); c) la polimerasa III de DNA extiende el cebador de RNA mediante la
sntesis de nuevo DNA (lnea gruesa); d) durante la sntesis de la cadena retrasada,
los fragmentos de Okazaki adyacentes son separados por los cebadores de RNA; e)
a su vez, los cebadores de RNA son removidos y los espacios vacos llenados con DNA
mediante la polimerasa I de DNA f ), lo que genera fragmentos de DNA adyacentes a
que son unidos por la ligasa de DNA g).

(figuras F3-4e y F3-4f). La polimerasa III de DNA no puede
llevar a cabo esta actividad debido a que carece de la
actividad de exonucleasa 5 3 de la polimerasa I de
DNA. Para finalizar, la ligasa de DNA une los extremos
de los fragmentos de DNA (figura F3-4g).
Protenas accesorias
Las polimerasas I y III de DNA, la primasa y la ligasa de
DNA no son las nicas protenas necesarias para la repli-
cacin del cromosoma bacteriano. La plantilla de DNA es
una doble hlice con cada cadena enrollada de manera
estrecha alrededor de la otra y por lo tanto las dos cade-
nas deben desenrollarse durante la replicacin. Cmo
es que se resuelve el problema del desenrrollamiento?
La helicasa DnaB se usa para desenrollar la doble hlice
en un evento que requiere ATP como fuente de energa
y la protena SSB (de unin a una cadena de DNA) evita
que las bases de una regin de una cadena se pareen
otra vez, de manera que cada una de las dos cadenas
de DNA sea accesible para la replicacin. En principio,
para que una horquilla de replicacin se mueva a lo
largo de una regin de DNA, la hlice de DNA necesitara
desenrollarse en la misma direccin, lo que determina
que el DNA rote con rapidez. No obstante, como el cro-
mosoma bacteriano es circular carece de extremos que
roten libremente. La solucin al problema consiste en
que una enzima denominada topoisomerasa I rompa
un enlace fosfodister en una de las cadenas del DNA
(ruptura de una cadena) una pequea distancia por
delante de la horquilla, lo que permite que el DNA rote
con libertad (giratoria) alrededor de la otra cadena (la
intacta). Luego, la topoisomerasa reconstituye el enlace
fosfodister.
Despus que el DNA circular bacteriano ha sido repli-
cado, el resultado es de dos molculas de DNA circular
de cadena doble que estn entrelazadas. La topoiso-
merasa II las separa como sigue. Esta enzima trabaja de
una manera similar a la topoisomerasa I, pero causa una
 F3REPLICACIN DEL DNA EN LAS BACTERIAS 149

Dos molculas de DNA

hijas entrelazadas

Unin de la topoisomerasa II

La topoisomerasa causa la ruptura

de las dobles cadenas, lo que permite
que el otro crculo de DNA pase a travs de
la ruptura; luego se unen las cadenas
de DNA para regenerar el crculo de 6

Figura F3-5. La topoisomerasa II separando las molculas circulares hijas de DNA.

ruptura transitoria en cada cadena (ruptura de las dos en las dos cadenas que acta como una abertura a tra-
cadenas) de una molcula de DNA de cadena doble. Por vs de la cual puede pasar el otro crculo de DNA (figura
consiguiente, la topoisomerasa II se une a un crculo de F3-5). A continuacin, la misma topoisomerasa II repara
DNA de cadena doble y determina una ruptura transitoria las cadenas rotas.
SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F4Replicacin del DNA en los

eucariotas
Notas clave
Replicones mltiples
Cuando menos, nueve
polimerasas de DNA
La replicacin del DNA slo ocurre en la fase S. Sucede en muchos orgenes
cromosmicos, es bidireccional y semiconservativa. Conjuntos de 20 a 80
replicones actan como unidades de replicacin que se activan en secuencia.
A diferencia de los orgenes de la replicacin bacteriana, la de los mamferos
est menos bien definida.
La polimerasa de DNA es la principal enzima responsable de la replicacin del
DNA cromosmico. La polimerasa de DNA sintetiza el cebador en el proceso.
Las polimerasas y de DNA reparan el DNA, y la polimerasa de DNA replica el
DNA mitocondrial.

Cadena adelantada y
retrasada
Replicacin del telmero Las regiones que se encuentran en los extremos de los cromosomas (telme-
Replicacin de la
cromatina
Las polimerasas de DNA y sintetizan la cadena retrasada a travs de los
fragmentos de Okazaki. La polimerasa de DNA sintetiza los cebadores de RNA
pues tiene una subunidad primasa. La polimerasa de DNA es la principal poli-
merasa de replicacin y sintetiza DNA usando el cebador de RNA producido por
la polimerasa de DNA.
ros) contienen mltiples copias de un hexanucletido rico en G. La telomerasa
se encarga de replicar el DNA del telmero. Es una transcriptasa reversa con una
subunidad de RNA que contiene una secuencia que es el complemento inver-
tido de la repeticin del telmero. Extiende el extremo del telmero copiando
la plantilla de RNA en mltiples rondas de sntesis y luego de translocacin.
Los nucleosomas no se disocian del DNA durante la replicacin de ste. En su
lugar, deben abrirse para permitir que el aparato de replicacin pase. Ambas
molculas de DNA hijas tienen histonas unidas a ellas, pero tambin deben sin-
tetizarse nuevas histonas para permitir que todo el DNA se empaque en forma
correcta en los nucleosomas.

Temas relacionados (A3) Crecimiento celular (F3) Replicacin del DNA en las bacterias
(F1) Introduccin al DNA

Replicones mltiples una clula diploide humana debe copiar alrededor de 6

En los eucariotas, la replicacin del DNA cromosmico
slo ocurre en la fase S del ciclo celular (seccin A3).
Como en el caso de DNA bacteriano (seccin F3), el DNA
eucariota se replica en forma semiconservativa. La
replicacin de cada molcula de DNA lineal en un cro-
mosoma comienza en muchos orgenes, uno cada 30 a
300 kilobases (kb) de DNA segn la especie y el tejido, y
avanza en ambas direcciones desde cada origen.
El uso de mltiples orgenes es esencial con el fin de ase-
gurar que la gran cantidad de DNA cromosmico de una
clula eucariota se replique dentro del lapso necesario;
billones de pares de bases comparado con slo los alre-
dedor de 4.6 millones de pares de bases que necesita E.
coli para replicarse. No es de sorprenderse que cada cro-
mosoma en una clula humana tenga varios cientos de
orgenes de replicacin. A diferencia de E. coli, los or-
genes de la replicacin en los mamferos no parecen
tener secuencias claramente definidas de protenas de
unin que inician la replicacin, pero se forman regio-
nes ms generales ricas en AT en las cuales se forman los
complejos de replicacin (ORC). Cada ORC contiene seis
protenas diferentes, cada una de las cuales es hom-
loga a la protena DnaA de E. coli.
 F4REPLICACIN DEL DNA EN LOS EUCARIOTAS 151

Figura F4-1. Replicacin del DNA cromosmico eucariota. La replicacin comienza

en muchos orgenes y avanza en ambas direcciones en cada localizacin. Al nal,
las burbujas de replicacin conuyen para producir dos molculas hijas de DNA,
cada una de las cuales consiste en una cadena de DNA parental (lnea delgada) y una
cadena del DNA que acaba de sintetizarse (lnea gruesa).

En cada origen, se forma una burbuja de replicacin
que consiste en dos horquillas de replicacin que se
mueven en direcciones opuestas. El DNA replicado bajo
el control de un solo origen se llama un replicn. La
sntesis del DNA avanza hasta que las burbujas de repli-
cacin confluyen (figura F4-1).
No todas las regiones de un cromosoma se replican
en forma simultnea. En una parte del cromosoma se
pueden encontrar muchas burbujas de replicacin y
ninguna en otra seccin. Por lo tanto, los orgenes de
replicacin se activan en grupos, denominados unida-
des de replicacin, que consisten en 20 a 80 orgenes.
Durante la fase S, las diferentes unidades de replica-
cin se activan en un orden establecido hasta que al
final se replica todo el cromosoma. El DNA activo para
la transcripcin parece replicarse al principio de la fase
S, mientras que la cromatina que est condensada y
no es activa para la transcripcin se replica ms tarde.
Cuando menos, nueve polimerasas
de DNA
Las clulas eucariotas contienen cuando menos nueve
polimerasas de DNA diferentes, que se denotan por las
letras griegas , , , , , etc. La principal enzima que
participa en la replicacin del DNA cromosmico es la
polimerasa de DNA. La polimerasa de DNA tambin
desempea un papel importante en la replicacin dado
que ceba el proceso (vase ms adelante).
La polimerasa de DNA es codificada por un gen nuclear,
pero la enzima es dirigida a la mitocondria, donde
replica el DNA mitocondrial.
Las polimerasas y de DNA intervienen sobre todo en
la reparacin del DNA, como lo son otras polimerasas de
DNA que no se consideran aqu.
Cadenas adelantada
y retrasada
El esquema bsico de la replicacin de las dos cadenas
del DNA cromosmico en los eucariotas es similar al de
la replicacin del DNA bacteriano (seccin F3); se sinte-
tizan una cadena adelantada y una retrasada, la ltima
bajo la forma de una sntesis discontinua a travs de los
fragmentos de Okazaki. La polimerasa de DNA sinte-
tiza los cebadores de RNA (8 a 12 nt de longitud) que se
requieren, la cual cuenta con una subunidad primasa.
La polimerasa de DNA inicia la sntesis de la cadena
retrasada, para lo cual primero elabora el cebador de
RNA y luego lo extiende con una regin corta de DNA. A
continuacin, la polimerasa de DNA sintetiza la parte
restante del fragmento de Okazaki. De manera similar,
la polimerasa de DNA sintetiza la cadena adelantada. La
enzima presenta actividad de exonucleasa 3 5 y de
esta manera puede corregir errores del DNA elaborado,
algo que la polimerasa de DNA est impedida de hacer
porque carece de esa actividad.
152 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

Replicacin del telmero telmero mediante puentes de hidrgeno. Por lo tanto, al

La replicacin de una molcula de DNA lineal en un cro-
mosoma eucariota genera un problema que no existe con
la replicacin de las molculas de DNA circular bacteriano.
El mecanismo normal de la sntesis de DNA (vase antes)
implica que el extremo 3 de la cadena retrasada no se
replica. Esto genera una brecha en el extremo del cromo-
soma y por lo tanto un acortamiento de la porcin repli-
cada de la doble cadena. El efecto sera que el DNA cro-
mosmico debera hacerse ms corto cada vez despus
de cada replicacin. Varios mecanismos evolucionaron
para resolver este problema. En muchos organismos, la
solucin es usar una enzima llamada telomerasa para
replicar los extremos (telmeros) del cromosoma.
Cada telmero contiene muchas copias de una secuen-
cia de hexanucletido repetida rica en G; en los huma-
nos, sta es 5 -TTAGGG-3 . La telomerasa contiene una
protena y, como parte integral de su estructura, una mo-
lcula de RNA de alrededor de 450 nt de longitud. Cerca
del extremo 5 de este RNA est la secuencia 5 -CUAACC-
CUAAC3 , que es el complemento inverso del telmero
humano repetido (5 -TTAGGG-3 ).
El mecanismo de accin de la telomerasa se muestra en la
figura F4-2. El RNA de la telomerasa se une al extremo del
usar el RNA como una plantilla, la telomerasa (que es una
transcriptasa reversa; seccin I4) copia la plantilla de RNA
y agrega desoxirribonucletidos al extremo del telmero
de DNA. Por consiguiente, la telomerasa se transloca a lo
largo de la cadena hacia el nuevo extremo del telmero y
repite el proceso de extensin. Esto puede hacerse ciento
de veces antes de finalizarlo a travs de su disociacin.
Este mecanismo de accin de la telomerasa se confirma
al encontrar que en otras especies el telmero repetido
difiere en secuencia del de los humanos (por ejemplo, en
Tetrahymena, es 5-TTGGGG-3), pero la correspondiente
telomerasa siempre contiene una secuencia de RNA que
es el complemento invertido del de la secuencia repetida
de cada especie.
Todava no est claro cmo se extiende la otra cadena
(la cadena rica en C) en el extremo del telmero, pero
posiblemente se debe a que la cadena de DNA que acaba
de extenderse acta como una plantilla para la replica-
cin normal del DNA (sntesis de la cadena retrasada por
la polimerasa de DNA) para formar DNA cromosmico
de cadena doble.
En los mamferos, la telomerasa es activa en las etapas
tempranas del desarrollo embrionario, pero despus del

Telmero
5 TTAGG GT T AGGG 3
3 5 CAAUCCC AAUC
RNA de la Telomerasa
3 5
Sntesis de DNA por
la telomerasa
copiando la plantilla de RNA
5 TTAGGG T T A GGG T T AG 3
3 5 CAAUC C CAA UC

3 5
Translocacin

5 TTAGGGTTAGGGTTA G 3
3 5 CAAUCCCA AUC

3 5
Sntesis de DNA por
la telomerasa
copiando la plantilla de RNA
5 TTAGGGTTA GGG TTA GGG TTA G 3
3 5 CAAUCCCAAUC

3 5

Figura F4-2. Replicacin del DNA telomrico. La telomerasa es una transcriptasa

reversa con una molcula de RNA integral que usa como plantilla para dirigir la
sntesis del DNA y en esa medida extender los extremos del DNA cromosmico.
 F4REPLICACIN DEL DNA EN LOS EUCARIOTAS
nacimiento es activa slo en las clulas madre y en las
clulas reproductivas, de manera que en las otras clu-
las de los mamferos el DNA cromosmico se acorta cada
vez que la clula se divide.
Replicacin de la cromatina
Cuando un cromosoma se replica, la maquinaria de
replicacin pasa a travs de los nucleosomas sin remo-
ver las histonas del DNA. La manera como esto ocurre
153
todava no se comprende del todo. Las dos molcu-
las de DNA hijas que resultan de la replicacin tienen
histonas viejas unidas al mismo, pero en total, ya que
la cantidad de DNA result duplicada, se necesitan ms
histonas para empacar al DNA correctamente dentro de
los nucleosomas. No debe sorprender, por lo tanto,
que la fase S del ciclo celular es tambin el momen
to en el cual se sintetizan grandes cantidades de his-
tonas.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G1Introduccin al RNA
Notas clave
Estructura covalente
Estructura secundaria
del RNA
Temas relacionados
El RNA es una cadena polimrica de ribonucletidos unidos por enlaces 35
fosfodister. La estructura covalente es muy similar a la del DNA, excepto que
el uracilo reemplaza a la timina y la ribosa reemplaza a la desoxirribosa.
Las molculas de RNA son en gran medida de una sola cadena, pero hay regio-
nes de complementariedad donde la cadena de RNA forma regiones internas
de doble cadena.
(F1) Introduccin al DNA (G5) Transcripcin de genes
(G2) Transcripcin en procariotas codificantes de protenas en
(G3) Operones eucariotas
(G4) Transcripcin en eucariotas: (G6) Regulacin de la transcripcin de
descripcin la polimerasa II de RNA

Estructura covalente
El azcar del RNA es la ribosa, en sustitucin de la des-

Como el DNA (seccin F1), el RNA es un largo polmero
que consiste en nucletidos unidos por enlaces 35
fosfodister. Sin embargo, hay entre ellos algunas dife-
rencias.

Las bases del RNA son adenina (se abrevia A), guanina
(G), uracilo (U) y citosina (C). Por lo tanto, la timi-
na del DNA es reemplazada por el uracilo en el RNA,
una pirimidina diferente (figura G1-1a). No obstante,
como la timina (seccin F1), el uracilo puede formar
pares de bases con la adenina.
oxirribosa del DNA (figura G1-1b).
Los ribonuclesidos correspondientes son adenosina,
guanosina, citidina y uridina. Los ribonucletidos corres-
pondientes son adenosina 5-trisfosfato (ATP), guanosi-
na 5-trifosfato (GTP), citidina 5-trifosfato (CTP) y uridina
5-trifosfato (UTP).
Como en el DNA, la secuencia de nucletidos del RNA
tambin se escribe como una secuencia de bases en la
direccin 5 3. Por consiguiente, GUCAAGCCGGAC
es la secuencia de una molcula corta de RNA.

a) b)
O
HOCH2 O OH

HN 4
3 5 H H
2 6 H H
1
O N
HO OH
H
Uracilo (U) Ribosa

Figura G1-1. a) Uracilo; b) ribosa.

 G1INTRODUCCIN AL RNA 155

Estructura secundaria del RNA
La mayor parte de las molculas de RNA son cadenas sim-
ples, pero una molcula de RNA puede contener regiones
que forman pares de bases complementarias donde la
cadena de RNA forma asas sobre s misma (figura G1-2).
De esta manera, el RNA tendr algunas regiones de doble
cadena. El RNA ribosmico (rRNA) y el RNA de transferencia
(tRNA) (secciones G8 y G9, respectivamente) exhiben
estructura secundaria sustancial, como lo hacen algunos
RNA mensajeros (mRNA).

U
C A
G G
G C
G C
U A
A U
C G
C
U A
G C
G C
A U
G G
G G
C A
G U

Figura G1-2. Un ejemplo de autocomplementariedad en el RNA, con la formacin

de una regin interna de doble cadena; los puentes de hidrgeno entre las bases
TF
NVFTUSBO
DPO
FM
TNCPMP
t
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G2Transcripcin en procariotas
Notas clave
Tres fases de la La transcripcin por la polimerasa de RNA de E. coli sucede en tres fases: inicia-
transcripcin cin, elongacin y terminacin. La iniciacin incluye la unin de la enzima a
un promotor corriente arriba del gen. Durante la elongacin, la cadena de DNA
antisentido se usa como la plantilla, de manera que el RNA se hace con la misma
secuencia de bases que la cadena con sentido (codificacin), excepto que U
reemplaza a T. Al final, se encuentra una seal de terminacin que detiene la
sntesis y causa la liberacin del RNA completo.
Promotores e iniciacin La holoenzima polimerasa de RNA (que contiene las subunidades 2)
inicia la transcripcin mediante la unin a una regin de 40-60 pb que con-
tiene dos elementos promotores conservados, la secuencia 10 (caja de Pri-
bnow) con el consenso TATAAT, y la secuencia 35 con el consenso TTGACA. El
factor es esencial para la iniciacin. No se requiere cebador. Los promotores
varan hasta en 1 000 veces en su eficiencia de iniciacin, la cual depende de la
secuencia exacta de los elementos del promotor clave as como de secuencias
de los flancos. Algunos genes que se expresan mucho cuentan tambin con
un elemento que se localiza 40 a 60 nucletidos (nt) corriente arriba del sitio
donde se inicia la transcripcin que incrementa la eficiencia de la iniciacin
al actuar como un sitio de unin adicional de la polimerasa de RNA.
Elongacin Despus de la iniciacin, la subunidad se disocia de la polimerasa de RNA
para dejar al centro enzimtico (2) que contine la sntesis de RNA en la
direccin 5 3 usando los cuatro ribonuclesidos 5-trifosfato como precur-
sores. La doble hlice del DNA est desenrollada para la transcripcin, y forma
una burbuja de transcripcin, y luego vuelve a enrollarse despus que pasa el
complejo de transcripcin.
Terminacin Una seal de terminacin comn es una estructura en horquilla formada por
una regin palindrmica rica en GC, seguida por una secuencia rica en AT. Tam-
bin se usan otras seales, que requieren la asistencia de la protena rho ()
para que exista una terminacin efectiva.
Procesamiento del RNA En los procariotas, los transcritos de RNA mensajero de genes que codifican pro-
tenas requieren pequeas modificaciones antes de la traduccin o ninguna.
El RNA ribosmico (rRNA) y el RNA de transferencia (tRNA) se sintetizan como
molculas precursoras que requieren el procesamiento por parte de ribonu-
cleasas especficas para que liberen las molculas de RNA maduras.
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-MRNA
(G1) Introduccin al RNA eucariota
(G3) Operones (G8) Transcripcin y procesamiento
(G4) Transcripcin en eucariotas: del RNA ribosmico
descripcin (G9) Transcripcin y procesamien-
(G5) Transcripcin de genes codificantes to del RNA de transferencia
de protenas en eucariotas
(G6) Regulacin de la transcripcin de la
polimerasa II de RNA

Tres fases de la transcripcin
La transcripcin gnica por la polimerasa de RNA de E.
coli tiene lugar en tres fases: iniciacin, elongacin
y terminacin. Durante la iniciacin, la polimerasa
de RNA reconoce un sitio especfico del DNA, corriente
arriba del gen que ser transcrito, denominado sitio
promotor, al cual se une. Este complejo de polimerasa
de RNA unida al promotor de cadena doble se denomina
complejo promotor cerrado. A continuacin, el DNA se
desenrolla en forma local y crea un complejo promo-
tor abierto, al mismo tiempo que la polimerasa de RNA
comienza la transcripcin de la cadena simple planti-
lla de DNA. Durante la elongacin, la polimerasa de RNA
usa la cadena antisentido () del DNA como plantilla y
sintetiza una molcula de RNA complementaria a travs
de ribonuclesidos 5-trifosfato como precursores. El
RNA producido tiene la misma secuencia de la cadena
que no funge como plantilla, denominada cadena con
sentido (+) (o cadena de codificacin), excepto que el
RNA contiene U en lugar de T. En diferentes localiza-
ciones del cromosoma bacteriano, a veces una cadena
se usa como plantilla y en otras ocasiones la otra, lo
que depende de cul cadena es la codificadora del gen
en cuestin. La polimerasa de RNA identifica la cadena
correcta a usar como plantilla debido a la presencia
del sitio promotor. Para terminar, la polimerasa de RNA
encuentra una seal de terminacin y concluye la trans-
cripcin, con liberacin del RNA transcrito y su disocia-
cin del DNA.
Promotores e iniciacin
En E. coli, una polimerasa de RNA grande y nica se
encarga de transcribir todos los genes con la subunidad
de estructura 2. Esta enzima completa, llamada
holoenzima, se necesita para iniciar la transcripcin
ya que el factor es esencial para el reconocimiento
del promotor; este factor disminuye la afinidad de la
enzima central por los sitios inespecficos de unin al
DNA e incrementa su afinidad por el promotor.
La holoenzima se une a una regin promotora de alre-
dedor de 40 a 60 bp de tamao y despus inicia la
transcripcin a una corta distancia corriente abajo (es
decir, de 3 al promotor). Dentro del promotor hay dos
16 a 18 bp
T TG A C A
35 secuencia
Figura G2-1. Se muestran la secuencia 10 y 35 del promotor procariota. Por
convencin, el primer nucletido de la plantilla de DNA que se transcribe dentro del
RNA se denota como +1, el sitio de inicio de la transcripcin.
G2TRANSCRIPCIN EN PROCARIOTAS 157
secuencias comunes de 6 bp que encierran una particu-
lar importancia para la funcin promotora y por lo cual
han sido muy conservadas en las especies. Si se usa la
convencin de llamar +1 al primer nucletido de una
secuencia transcrita, sus dos elementos promotores se
encuentran en las posiciones 10 y 35, que estn alrede-
dor de 10 y 35 bp, respectivamente, corriente arriba
de donde debe iniciar la transcripcin (figura G2-1).

La secuencia 10 tiene la secuencia de consenso (es
decir, la secuencia promedio de muchos promotores)
TATAAT. Debido a que este elemento fue descubierto
por Pribnow, ahora tambin se la conoce como caja
de Pribnow. Representa un sitio de reconocimiento
importante que interacta con el factor de la poli-
merasa de RNA.

La secuencia 35 tiene la secuencia de consenso
TTGACA y es importante en el desenrollamiento del DNA
durante la iniciacin transcripcional.
La secuencia entre la secuencia 10 y la secuencia 35
no se conserva (es decir que vara de promotor en pro-
motor), pero la distancia entre estos dos sitios es de
extrema importancia para el funcionamiento correcto
del promotor debido a que coloca a los dos elementos
en el mismo lado de la doble hlice, donde son accesi-
bles para unirse con la polimerasa de RNA.
Los promotores difieren hasta en 1 000 veces en su efi-
ciencia de iniciacin de la transcripcin, de manera
que los genes con promotores fuertes son transcritos
con mucha ms frecuencia que los genes con promoto-
res dbiles. Las secuencias 10 y 35 de los promotores
fuertes corresponden muy bien a las secuencias de con-
senso que se muestran en la figura G2-1, mientras que
los promotores dbiles tienden a diferir de las secuen-
cias de consenso en numerosos nucletidos. La natura-
leza de las secuencias vecinas al sitio de iniciacin de la
transcripcin tambin puede influir en la eficiencia de
la iniciacin.
Es comn que los procariotas tengan varios factores
que reconocen diferentes tipos de promotores. En E.
coli, el factor ms comn es 70 (as llamado debido
a que tiene una masa de 70 kDa), el cual reconoce las
secuencias de consenso promotoras descritas antes.
+1
5 a 8 bp
TATA A T
10 secuencia Sitio de inicio
(caja de Pribnow) de la transcripcin
158 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Pese a ello, bajo otras condiciones ambientales, como Elongacin

el agotamiento del nitrgeno o temperaturas elevadas
(choque por calor), se expresan otros factores , los cua-
les se unen a los promotores con diferentes secuencias
de consenso. Esto conduce a la transcripcin preferen-
cial de aquellos genes que portan a los diferentes pro-
motores de consenso. En consecuencia, el factor juega
un papel importante en el direccionamiento con el cual
la polimerasa de RNA transcribe los genes.
De la misma manera que el promotor central, algunos
genes de E. coli que se expresan mucho tambin tie-
nen otra secuencia (llamada elemento UP del elemento
corriente arriba) localizada 40 a 60 nucletidos (nt)
corriente arriba del sitio de iniciacin transcripcional.
ste incrementa la eficiencia de la iniciacin al actuar
como un sitio de unin adicional de la polimerasa de
RNA, para lo cual se une la subunidad de la polimerasa
de RNA.
Cuando la polimerasa de RNA se une a un promotor, no
necesita cebador para comenzar la transcripcin (con-
frntese con las polimerasas de DNA, secciones F3 y F4);
la polimerasa de RNA comienza la transcripcin direc-
tamente.
Despus de iniciarse la transcripcin, el factor es libe-
rado del complejo de transcripcin y deja a la enzima
central (2 ), la cual contina la elongacin del
transcrito de RNA. Por consiguiente, la enzima central
contiene el sitio cataltico para la polimerizacin. El
primer nucletido del transcrito de RNA suele ser pppG
o pppA. Despus, la polimerasa de RNA sintetiza RNA
en la direccin 5 3, y para ello utiliza los cuatro
ribonuclesidos 5-trifosfato (ATP, CTP, GTP, UTP) como
precursores. El 3OH del final de la cadena de RNA
en crecimiento ataca al grupo fosfato del siguiente
ribonuclesido 5-trifosfato entrante para formar un
enlace 35 fosfodister (figura G2-2). La regin del DNA
desenrollado que se est transcribiendo se denomina
burbuja de transcripcin (figura G2-3). El transcrito de
RNA forma una hlice hbrida transitoria de RNA-DNA con
su cadena plantilla, pero luego se desprende del DNA
a medida que la transcripcin avanza. El DNA se des-
enrolla hacia delante de la burbuja de transcripcin y
despus que el complejo de transcripcin pasa vuelve
a enrollarse.

5 5
3 3
O Cadena O Cadena
plantilla plantilla
H2C O C G de DNA H2C O C G de DNA

H H H H
H H H H
PPi
O O HO
.. OH O OH
O
-O P O
P O P O P
O-
O- O- O O

H2C O U A H2C O U A

H H H H
H H 5 H H 5

HO OH HO OH

Figura G2-2. Transcripcin por la polimerasa de RNA. En cada paso, el

ribonucletido entrante seleccionado es el que puede formar un par de bases
con la base siguiente de la cadena plantilla del DNA. En el diagrama, el nucletido
entrante es rUTP para parearlo con el residuo A del DNA plantilla. Se form un
enlace 35 fosfodister, que extendi la cadena del RNA en un nucletido, al tiempo
que se liber un pirofosfato. En general, la molcula de RNA crece en la direccin 5
a 3.
 G2TRANSCRIPCIN EN PROCARIOTAS 159

Cadena con sentido

Polimerasa de RNA Direccin de la
transcripcin
Reenrollamiento
3 Desenrollamiento 5

5 3 3

Transcripcin con
elongacin
5ppp
Cadena de RNA Cadena
que acaba de antisentido
sintetizarse

Figura G2-3. Burbuja de transcripcin. La doble hlice de DNA es desenrollada

y entonces la polimerasa de RNA sintetiza una copia de RNA a partir de la cadena
plantilla de DNA. De manera transitoria, el RNA naciente forma una hlice hbrida de
RNA-DNA, pero luego se separa del DNA, el cual de manera subsecuente se vuelve a
enrollar en una hlice otra vez.

Terminacin quieren una protena adicional, denominada rho (),

La transcripcin contina hasta que se alcanza una
secuencia de terminacin. En ese punto, la transcrip-
cin cesa, el transcrito de RNA y la polimerasa de RNA se
disocian del DNA y la regin de una cadena de DNA vuelve
a enrollarse y as reintegra la hlice doble.
La seal de terminacin ms comn es una regin rica
en GC que es un palndromo, seguida por una secuencia
rica en AT. El RNA elaborado a partir del palndromo de
DNA es asimismo autocomplementario y de esa manera
los pares de bases forman hacia el interior una estruc-
tura en horquilla rica en pares de bases GC seguida por
cuatro o ms residuos U (figura G2-4). Sin embargo, no
todos los sitios de terminacin tienen esta estructura
en horquilla. Aquellos que carecen de esa estructura re-
que ayude a reconocer el sitio de terminacin y detenga
la transcripcin.
Procesamiento del RNA
En los procariotas, el RNA transcrito de genes codifica-
dores de protenas (RNA mensajero, mRNA) requiere
pocas modificaciones o ninguna modificacin antes de
la traduccin. De hecho, muchas molculas de mRNA
comienzan a traducirse incluso antes que la sntesis
de RNA haya terminado. No obstante, el RNA ribosmico
(rRNA) y el RNA de transferencia (tRNA) se sintetizan
como molculas precursoras que requieren procesa-
miento postranscripcional (secciones G8 y G9, respecti-
vamente).

C
U G
U G
G C
A U
C G
C G
G C
C G
C G
G C
5 A U U U U U U U U OH 3

Figura G2-4. Estructura tpica en horquilla formada por el extremo 3 de una

molcula de RNA durante la terminacin de la transcripcin.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G3Operones
Notas clave
Descripcin general Los operones son grupos de genes estructurales bajo el control de un sitio ope-
rador y un gen regulador, los cuales aseguran que la expresin de los genes
estructurales se controle en forma coordinada.
El opern lac El opern lac contiene los genes lacZ, lacY y lacA que codifican a la galactosidasa
beta, a la permeasa de galactsido y a la transacetilasa de tiogalactsido, respec-
tivamente, precedido por un sitio operador (Olac) y un sitio promotor (Plac). La
polimerasa de RNA transcribe el opern y produce un mRNA policistrnico que
es traducido para generar las cuatro enzimas. Cuando la lactosa est presente,
el nivel restante de galactosidasa beta convierte parte de la lactosa en alolac-
tosa, la cual induce la transcripcin del opern lac. El isopropiltiogalactsido
(IPTG) tambin puede actuar como un inductor. La transcripcin del opern es
controlada por la protena represora lac codificada por el gen lacI.
El represor lac En ausencia de un inductor, la polimerasa de RNA se une al promotor del gen lacI
(PlacI) y transcribe el gen, lo que produce la protena represora lac, que se une
al sitio operador lac, Olac, y evita la transcripcin del opern lac. En presencia
de un inductor (por ejemplo, alolactosa o IPTG), el inductor se une al represor y
cambia su conformacin, con lo cual reduce su afinidad por el operador lac. El
represor se disocia y permite que la polimerasa de RNA transcriba al opern lac.
CRP/CAP Cuando hay glucosa presente, la transcripcin del opern lac es inhibida (repre-
sin por catabolito). La protena activadora de catabolitos, CAP (tambin deno-
minada protena de respuesta al cAMP, CRP), es requerida para la transcripcin
de alto nivel del opern lac. sta se asocia con 3,5-cAMP para formar el complejo
CRP-cAMP que se une al promotor lac e incrementa la unin de la polimerasa de
RNA, que a su vez estimula la transcripcin del opern lac. Cuando la glucosa est
presente, el nivel intracelular de cAMP cae, la CRP sola no puede unirse al pro-
motor lac y el opern lac apenas se transcribe. Cuando la glucosa est ausente,
el nivel del cAMP intracelular asciende, se forma el complejo CRP-cAMP y se es-
timula la transcripcin del opern lac, lo que permite que la lactosa se use como
una fuente de carbono alternativa.
Regulacin positiva En la regulacin negativa de la expresin gnica procariota, la unin de repre-
y negativa sores evita la transcripcin de los genes estructurales. En la regulacin positiva
de la expresin gnica, un activador se une al DNA e incrementa la tasa de trans-
cripcin. El opern lac es sujeto de control negativo y positivo.
El opern trp El opern trp contiene cinco genes estructurales que codifican enzimas para la
biosntesis de triptfano, un promotor trp (Ptrp) y una secuencia del operador
trp (Otrp). El opern se transcribe slo cuando el triptfano escasea.
El represor trp Cuando falta triptfano, se sintetiza la protena represora trp (codificada por el
opern trp), pero no puede unirse al operador trp y de esta manera se transcribe
el opern trp para producir la enzima sinttica del triptfano. Cuando el tript-
fano est presente, se une al represor y lo activa, de manera que el represor se
une al operador trp y detiene la transcripcin del opern trp.
 G3OPERONES 161

Atenuacin Una secuencia adelantada en el mRNA policistrnico transcrito a partir del ope-
rn trp puede formar varias estructuras secundarias posibles tallo-asa, una de
las cuales puede actuar como un terminador de la transcripcin. Un tallo-asa
diferente puede actuar como un antiterminador. En presencia de triptfano, los
ribosomas se unen al mRNA policistrnico trp que est siendo transcrito, para lo
cual se instalan en la proximidad de la polimerasa de RNA y comienzan a traducir
la secuencia adelantada. La posicin de los ribosomas unidos evita la formacin
del tallo-asa antiterminadora, pero permite que se forme el asa terminadora,
la que de esta forma inhibe de manera adicional la transcripcin del opern
trp. Si el triptfano es escaso, el ribosoma se detiene cuando intenta traducir
los dos codones trp de la secuencia adelantada, la cual lleva a que la secuencia
adelantada disponible forme el tallo-asa antiterminadora y la transcripcin del
opern trp contine.
Atenuacin contra El opern trp es regulado por represin (la cual determina si habr transcrip-
represin cin o no) y por atenuacin (la cual adecua la transcripcin). La represin y la
atenuacin o slo la atenuacin regulan otros operones de las vas biosintticas
de aminocidos.
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-mRNA
(G1) Introduccin al RNA eucariota
(G2) Transcripcin en procariotas (G8) Transcripcin y procesamiento
(G4) Transcripcin en eucariotas: del RNA ribosmico
descripcin (G9) Transcripcin y procesamiento
(G5) Transcripcin de genes del RNA de transferencia
codificantes de protenas en eucariotas
(G6) Regulacin de la transcripcin de
la polimerasa II de RNA

Descripcin general lactosa est disponible provoca un incremento grande y

Muchos genes codificadores de protenas de las bac-
terias estn agrupados juntos en operones, los cuales
sirven como unidades de transcripcin que estn regu-
ladas de manera coordinada. Fueron Jacob y Monod, en
el ao 1961, quienes propusieron el modelo de opern
para la regulacin de la transcripcin. El modelo de ope-
rn propone tres elementos:

Un conjunto de genes estructurales (es decir, genes
codificadores de las protenas a regular)

Un sitio operador, el cual es una secuencia de DNA
que regula la transcripcin de los genes estructurales
coordinado de la cantidad de cada una de las enzimas a
sintetizarse. Por consiguiente, cada enzima es inducible
y el proceso se denomina induccin. El mecanismo
consiste en que las pocas molculas de galactosidasa
de las clulas antes de la induccin convierten la lactosa
en alolactosa, la cual a su vez activa la transcripcin de
estos tres genes en el opern lac. En consecuencia, la
alolactosa es un inductor. Otro inductor del opern
lac es el isopropiltiogalactsido (IPTG). A diferencia de
la alolactosa, E. coli no metaboliza este inductor, que
de esta manera es til en estudios experimentales de
induccin.

Un gen regulador, el cual codifica una protena que
reconoce la secuencia operadora
El opern lac
Uno de los operones ms estudiados es el opern lac de
E. coli. ste codifica enzimas clave que intervienen en
el metabolismo de la lactosa: permeasa de galactsido
(tambin conocida como permeasa de lactosa, trans-
porta galactosa hacia el interior de las clulas a travs de la
membrana celular) y la galactosidasa  (la cual hidroliza
la lactosa a glucosa y galactosa). Tambin codifica una
tercera enzima, la transacetilasa de tiogalactsido. De
manera habitual, las clulas E. coli producen muy pocas
de cualquiera de estas tres protenas, pero cuando la
En el opern lac (figura G3-1), los genes estructurales
son los genes lacZ, lacY y lacA, que codifican la galac-
tosidasa , la permeasa y la transacetilasa, respectiva-
mente. Son transcritos para que produzcan un mRNA
policistrnico, que a su vez es traducido para produ-
cir las tres enzimas (figura G3-1). La existencia de un
mRNA policistrnico asegura que las cantidades de
los productos de los tres genes se regulan de manera
coordinada. La transcripcin se produce a partir de un
promotor (Plac) situado cadena arriba de estos genes
estructurales (figura G3-1) que une a la polimerasa de
RNA (seccin G2). Sin embargo, entre los genes promo-
tor y estructurales, tambin estn presentes un sitio
operador (Olac) y el gen lacI, que codifica la protena
represora lac.
162 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

PlacI Plac Olac

lacI lacZ lacY lacA

lacI lacZ lacY lacA mRNA

mRNA

Galactosidasa Permeasa Transacetilasa

Monmero Tetrmero
represor lac represor lac

Figura G3-1. Estructura del opern lac.

El represor lac el cual puede unirse estrechamente al sitio operador lac,

El gen lacI tiene su propio promotor (PlacI), que une a
la polimerasa de RNA y la conduce a la transcripcin del
mRNA represor lac y as a la produccin de monmeros
de la protena represora lac. Cuatro monmeros represo-
res idnticos se renen para formar un tetrmero activo,
Olac. La secuencia Olac es palindrmica, lo que significa
que tiene la misma secuencia de DNA cuando una cade-
na se lee en direccin 5 a 3 y la cadena complementaria
tambin se lee en direccin 5 a 3. Esta simetra del sitio
operador es compartida por la simetra del tetrmero
represor.

Polimerasa
PlacI de RNA Olac

lacI Plac lacZ lacY lacA

lacI No hay transcripcin de

mRNA
genes estructurales

Monmero Tetrmero
represor lac represor lac
(activo)

Figura G3-2. Represin de la transcripcin por parte del represor lac en ausencia
del inductor.

Polimerasa
PlacI Olac de RNA
lacI Plac lacZ lacY lacA

lacI lacZ lacY lacA

mRNA Tetrmero mRNA
represor lac
inactivo
Galactosidasa Permeasa Transacetilasa
Monmero
represor lac
Inductor
(por ejemplo, alolactosa
IPTG)

Figura G3-3. El inductor inactiva al represor lac y de esta manera permite la

transcripcin de los genes estructurales.

En ausencia de un inductor como la alolactosa o el IPTG,
el gen lacI es transcrito y la protena represora resultante
se une al sitio operador del opern lac, Olac, lo que evita la
transcripcin de los genes lacZ, lacY y lacA (figura G3-2).
Durante la induccin, el inductor se une al represor. Esto
causa un cambio en la conformacin del represor que
reduce en gran medida su afinidad por el sitio opera-
dor lac. El represor lac se disocia a continuacin del
sitio operador y permite que la polimerasa de RNA (que
ya estaba en el sitio promotor adyacente) comience la
transcripcin de los genes lacZ, lacY y lacA (figura G3-3).
Esto produce muchas copias del mRNA policistrnico y,
despus de la traduccin, grandes cantidades de las tres
enzimas.
Si el inductor se remueve, el represor lac se une con
prontitud al sitio operador lac y la transcripcin se
inhibe casi de inmediato. El transcrito de RNA, lacZYA,
es muy inestable y por eso se degrada con rapidez, de
manera que la sntesis adicional de galactosidasa , per-
measa y transacetilasa cesa.
CRP/CAP
Cuando E. coli crece con glucosa, no tiene necesidad
de las enzimas que se requieren para metabolizar otros
azcares como la lactosa. En efecto, sintetizar tales enzi-
mas bajo estas condiciones constituira un dispendio
energtico. De esta manera, cuando la glucosa est pre-
sente, la transcripcin del opern lac est inhibida, un
fenmeno que se denomina represin por catabolito.
De qu forma los catabolitos reprimen el trabajo? La
transcripcin de niveles altos del opern lac requiere
la presencia de una protena activadora especfica lla-
mada protena activadora de catabolito (CAP), tambin
conocida como protena de respuesta al cAMP (CRP).
Esta protena, que es un dmero, no puede unirse al
DNA a menos que forme un complejo con el 3,5-cAMP
(cAMP). El complejo CRP-cAMP se une al promotor lac
justo corriente arriba del sitio de unin de la polime-
rasa de RNA. Esto incrementa la unin de la polimerasa
de RNA y de esta manera estimula la transcripcin del
opern lac.
La glucosa inhibe a la ciclasa de adenilato, la enzima
que sintetiza cAMP a partir del ATP. En consecuencia,
en presencia de glucosa, el nivel intracelular de cAMP
desciende, de manera que la CRP no puede unirse al
promotor lac, y el opern lac es slo dbilmente activo
(incluso en presencia de lactosa). Cuando la glucosa
est ausente, la ciclasa de adenilato no es inhibida, el
nivel de cAMP intracelular aumenta y se une a la CRP.
Cuando la glucosa est ausente pero la lactosa est pre-
sente, el complejo CRP-cAMP estimula la transcripcin
del opern lac y permite que la lactosa se utilice como
una fuente alternativa de carbono. En ausencia de lac-
tosa, desde luego, el represor lac asegura que el opern
lac permanezca inactivo. Estos controles combinados
aseguran que los genes lacZ, lacY y lacA se transcriban
G3OPERONES 163
con fuerza slo si la glucosa est ausente y la lactosa
est presente.
Regulacin positiva y negativa
El opern lac es un buen ejemplo de control negativo
(regulacin negativa) de la expresin gnica en que la
unin del represor evita la transcripcin de los genes
estructurales. El control positivo (regulacin positiva)
de la expresin gnica se presenta cuando la protena
reguladora se une al DNA e incrementa la tasa de trans-
cripcin. En este caso, la protena reguladora se deno-
mina activador. El CAP/CRP que interviene en la regula-
cin del opern lac representa un buen ejemplo de un
activador. En consecuencia, el opern lac es sujeto tanto
de control negativo como positivo.
El opern trp
El opern del triptfano (trp) (figura G3-4) contiene
cinco genes estructurales que codifican enzimas para la
biosntesis del triptfano con un promotor trp corriente
arriba (Ptrp) y una secuencia operadora trp (Otrp). La
regin operadora trp se superpone parcialmente con el
promotor trp. La regulacin del opern est diseada
para que la transcripcin se produzca cuando la exis-
tencia de triptfano en la clula sea baja.
El represor trp
En ausencia de triptfano (figura G3-4a), se sintetiza una
protena represora trp en un opern diferenciado, trpR,
que codifica y forma un dmero. Sin embargo, es inac-
tivo y de esta manera es incapaz de unirse al operador
trp y los genes estructurales del opern trp continan
siendo transcritos. Cuando el triptfano est presente
(figura G3-4b), las enzimas para la biosntesis del tript-
fano no son necesarias y de esta manera la expresin de
estos genes se detiene. Esto se logra mediante la unin
del triptfano al represor para activarlo, de manera que
ste se una al operador para que detenga la transcrip-
cin de los genes estructurales. En esta forma, se dice
que el triptfano es un correpresor. ste es un con-
trol negativo debido a que la unin al represor evita la
transcripcin, pero ntese que el opern lac y el opern
trp muestran dos formas a travs de las cuales puede
lograrse el control negativo; esto es (como en el opern
lac) al tener un represor unido activo que es inactivado
por un ligando unido (el inductor) o (como en el opern
trp) al tener un represor que suele ser inactivo pero que
se activa por la unin del ligando. Como en el caso del
operador lac, el sitio de unin central para el represor
trp en el operador trp es palindrmico.
Atenuacin
Un segundo mecanismo, llamado atenuacin, tambin
se usa para controlar la expresin del opern trp. El
extremo final 5 del mRNA policistrnico transcrito por
164 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA
a)
P O
Opern trpR trp trp Lder
Dmero
represor de
trp (inactivo)
b)
P O
Opern trpR trp trp Lder
Represor trp
activo
Dmero represor
de trp
Triptfano
Figura G3-4. Regulacin del opern trp: a) transcripcin en ausencia de
triptfano; b) no hay transcripcin en presencia de triptfano.
el opern trp tiene una secuencia adelantada corriente
arriba de la regin codificadora del gen estructural trpE
(figura G3-4). Esta secuencia adelantada codifica un
pptido adelantado de 14 aminocidos que contiene
dos residuos triptfano. La funcin de la secuencia lder
es ajustar la expresin del opern trp basada en la dispo-
nibilidad de triptfano dentro de las clulas. Esto sucede
como se menciona a continuacin.
La secuencia adelantada contiene cuatro regiones (figu-
ra G3-5, nombradas 1-4) que pueden formar una varie-
dad de estructuras secundarias tallo-asa (horquilla)
de bases pareadas. Considrense las dos situaciones
extremas: la presencia o ausencia de triptfano. La
atenuacin depende del hecho de que, en las bacterias,
los ribosomas se fijan al mRNA a medida que se sintetiza
y de esa manera la traduccin comienza incluso antes de
que la transcripcin del mRNA se complete. Cuando el
triptfano es abundante (figura G3-5a), los ribosomas se
unen al mRNA policistrnico trp que se est transcribiendo
y comienzan a producir la secuencia adelantada. Acto
seguido, los dos codones trp para el pptido adelantado
yacen dentro de la secuencia 1 y el codn de detencin de
la traduccin (seccin H1) se sita entre las secuencias
1 y 2.
Durante la traduccin, los ribosomas permanecen muy
cerca de la polimerasa de RNA y sintetizan el pptido
adelantado, con la detencin de la traduccin final
entre las secuencias 1 y 2. En este punto, la posicin
Atenuador
trpE trpD trpC trpB trpA
trpE trpD trpC trpB trpA
mRNA
Enzimas para la
sntesis del triptfano
Atenuador
trpE trpD trpC trpB trpA
No hay transcripcin
de genes estructurales
del ribosoma evita que la secuencia 2 interacte con
la secuencia 3. En su lugar, los pares de bases de la
secuencia 3 con la secuencia 4 forman un tallo-asa 3:4,
que acta como un terminador de la transcripcin. Por
lo tanto, cuando el triptfano est presente, se evita la
transcripcin adicional del opern trp.
Si, en cambio, hay poca cantidad de triptfano (figura
G3-5b), el ribosoma se detiene en los dos codones trp
contenidos dentro de la secuencia 1, lo que deja a la
secuencia 2 sin unirse al ribosoma y por lo tanto libre
para que el par de bases forme con la secuencia 3 una
estructura 2:3 (tambin denominada antiterminador).
Debido a que se forma el tallo-asa 2:3, la secuencia 3
no est disponible para la formacin del tallo-asa 3:4
y la transcripcin contina hasta el final del opern
trp. As, la disponibilidad del triptfano controla si
la transcripcin del opern se detendr temprano
(atenuacin) o continuar sintetizando un mRNA poli-
cistrnico completo.
Desde el punto de vista histrico, la atenuacin fue
descubierta cuando se advirti que la delecin de una
secuencia corta de DNA entre el operador y el primer
gen estructural, trpE, incrementaba el nivel de trans-
cripcin. Esta regin se denomin el atenuador (figura
G3-4) y corresponde al DNA que codifica la parte de la
secuencia adelantada que forma el tallo-asa terminador
de la transcripcin.
 G3OPERONES 165

a) Triptfano abundante Terminador de

1 la transcripcin
3 4
Ribosoma

2
Transcripcin
detenida

b) Triptfano escaso 4
1

2 3
Antiterminador

La transcripcin
contina

Figura G3-5. Atenuacin del opern trp: a) cuando la cantidad de triptfano es

satisfactoria, los pares de bases de las secuencias 3 y 4 forman una estructura 3:4
que detiene la transcripcin; b) cuando la cantidad de triptfano es insuciente, el
ribosoma se sita en la secuencia 1 de los codones trp, lo que deja a la secuencia 2
disponible para interactuar con la secuencia 3. Por lo tanto, no puede formarse una
estructura terminadora de la transcripcin 3:4 y la transcripcin contina.

Atenuacin contra represin
En general, para el opern trp, la represin a travs del
represor trp determina si la transcripcin suceder o no y
si la atenuacin ajustar la transcripcin. La atenuacin
se produce en cuando menos seis operones diferentes
que codifican enzimas para las vas biosintticas de
aminocidos. En algunos casos, como el del opern
trp, la represin y la atenuacin regulan la expresin.
En contraste, en algunos otros operones, como el his, thr
y leu, slo la atenuacin regula la transcripcin.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G4Transcripcin en eucariotas:
descripcin
Notas clave
Tres polimerasas de RNA
Sntesis de RNA
Subunidades de la
polimerasa de RNA
Organelos
Temas relacionados
En eucariotas, tres polimerasas de RNA se encargan de sintetizar este cido: la
polimerasa I de RNA es una enzima nucleolar que transcribe rRNA; la polime-
rasa II de RNA se localiza en el nucleoplasma y transcribe mRNA, la mayora del
snRNA, snoRNA y miRNA; la polimerasa III de RNA es tambin nucleoplsmica
y transcribe tRNA, 5S rRNA, U6 snRNA, y el 7S RNA de la partcula de reconoci-
miento de seal (SRP).
Cada polimerasa de RNA transcribe slo una cadena, la cadena antisentido (),
de una plantilla de DNA de cadena doble, dirigida por un promotor. La sntesis
ocurre en la direccin 5 3 y no requiere un cebador.
Cada una de las tres polimerasas de RNA contiene 12 o ms subunidades, algunas
de las cuales son similares a las de la polimerasa de RNA de E. coli. Sin embargo,
cuatro de las siete subunidades de cada enzima son exclusivas de una enzima.
Los cloroplastos y las mitocondrias contienen cada uno un tipo de polimerasa
de RNA. La enzima del cloroplasto es similar a la polimerasa de RNA bacteriana,
mientras que la enzima mitocondrial tiene similitudes con algunas polimerasas
de RNA del bacterifago.
(F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-mRNA
(G1) Introduccin al RNA eucariota
(G2) Transcripcin en los procariotas (G8) Transcripcin y procesamiento del
(G3) Operones RNA ribosmico
(G5) Transcripcin de los genes que (G9) Transcripcin y procesamiento
codifican protenas en los eucariotas del RNA de transferencia
(G6) Regulacin de la transcripcin
por la polimerasa II de RNA

Tres polimerasas de RNA
A diferencia de los procariotas, en los que todo el RNA es
sintetizado por una sola polimerasa de RNA, el ncleo de
la clula eucariota tiene tres polimerasas de RNA respon-
sables de la transcripcin de los diferentes tipos de RNA.

La polimerasa I de RNA (RNA Pol I) se localiza en el
nucleolo y transcribe los genes rRNA 28S, 18S y 5.8S.

La polimerasa II de RNA (RNA Pol II) se localiza en el
nucleoplasma y transcribe a los genes que codifican
protenas para producir pre-mRNA y genes de los
RNA nucleares pequeos (snRNA) que participan en
el procesamiento del mRNA (seccin G7) (excepto
en el snRNA U6). Tambin sintetiza el RNA nucleo-
lar pequeo (snoRNA) que interviene en el pro-
cesamiento del rRNA (seccin G8), y el microRNA
(miRNA) (seccin G7).

La polimerasa III de RNA (RNA Pol III) se localiza asi-
mismo en el nucleoplasma. Transcribe a los genes
de tRNA, rRNA 5S, y snRNA U6 y al RNA 7S asociado
con la partcula de reconocimiento de seal (SRP),
que interviene en la translocacin de protenas a
travs de la membrana del retculo endoplsmico
(seccin H4).
Sntesis del RNA
El mecanismo bsico de la sntesis del RNA por parte
de las tres polimerasas de RNA eucariotas es el mismo
que el de la enzima procariota (seccin G2), que consis-
te en:

La iniciacin de la sntesis del RNA por la polimerasa
de RNA es dirigida por la presencia de un sitio promo-
tor en el lado 5 del sitio de inicio de la transcripcin
 G4TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS: DESCRIPCIN

La polimerasa de RNA transcribe una cadena, la cadena
antisentido (), de la plantilla de DNA

La sntesis del RNA no requiere un cebador

La sntesis del RNA ocurre en la direccin 5 3,
cuando la polimerasa de RNA cataliza un ataque
nuclefilo por parte del 3-OH de la cadena de RNA en
crecimiento sobre el tomo de fsforo del nuclesido
de 5-trifosfato entrante
Subunidades de la polimerasa de RNA
Cada una de las tres polimerasas de RNA eucariotas con-
tienen 12 o ms subunidades y por eso son grandes
complejos enzimticos. Los genes de codificacin de
algunas de las subunidades de cada una de las enzimas
eucariotas muestran similitudes en la secuencia del DNA
con los genes que codifican las subunidades de la enzi-
ma central (2) de la polimerasa de RNA de E. coli (sec-
cin G2). Sin embargo, cuatro de las siete subunidades
167
de cada polimerasa de RNA eucariota son exclusivas y no
muestran ninguna similitud con las subunidades de la
polimerasa de RNA bacteriana ni con las subunidades de
las otras polimerasas de RNA eucariotas.
Organelos
En general, se acepta que las mitocondrias y los cloro-
plastos fueron bacterias de manera original, por lo cual,
durante la evolucin inicial, formaron una interrelacin
simbitica con una clula eucariota primitiva (la teora
endosimbitica). En apoyo de ello, en estos organe-
los, muchas de las caractersticas de la organizacin y
expresin gnica son similares a lo que sucede en las
bacterias. Por ejemplo, los cloroplastos contienen un
solo tipo de polimerasa de RNA similar en estructura al
de la polimerasa de RNA bacteriana. Las mitocondrias
tambin contienen un solo tipo de polimerasa de RNA,
la cual tiene similitudes con algunas polimerasas de RNA
del bacterifago.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G5Transcripcin de los genes que

codifican protenas en los eucariotas
Notas clave
Organizacin genrica La mayora de los genes que codifican protenas en los eucariotas consiste en
secuencias de codificacin llamadas exones interrumpidas por secuencias no
codificantes llamadas intrones. El nmero de intrones y sus tamaos varan de
gen en gen. El transcrito primario (pre-mRNA) se somete a reacciones de pro-
cesamiento que producen mRNA maduros, los cuales tienen de manera tpica
un casquete o caperuza 5 y una cola poli(A) 3, con una regin de codificacin
central flanqueada por una regin no traducida 5 (UTR) y una 3.
Promotores de la polime- La transcripcin de los genes de codificacin de protenas eucariotas est con-
rasa II de RNA trolada por una combinacin de elementos de secuencia en el promotor cen-
tral, cerca del sitio de inicio de la transcripcin, y por elementos de control
corriente arriba. Las dos principales secuencias de consenso en el promotor cen-
tral son la caja TATA y la secuencia iniciadora (Inr). Los genes transcritos por la
polimerasa II de RNA pueden tener ambos elementos, slo uno o ninguno. Los
genes que carecen de una caja TATA tienen con frecuencia un elemento promotor
corriente abajo (DPE). Los genes que carecen de una caja TATA y de un elemento
Inr tienden a ser transcritos a tasas bajas y no en un sitio de inicio transcripcio-
nal definido.
Iniciacin de la La unin de la polimerasa de RNA al promotor requiere la formacin de un
transcripcin complejo de iniciacin de la transcripcin que incluye numerosos factores
de transcripcin generales (basales), los cuales se ensamblan en un orden
estricto. En los genes que tienen una caja TATA en su promotor central, el evento
inicial clave es la unin del complejo de protenas del factor de transcripcin
IID (TFIID) a la caja TATA.

Elongacin y terminacin Despus que el TFIIH fosforila el dominio C terminal (CTD) de la polimerasa II de
RNA, esta enzima comienza a moverse a lo largo de la plantilla de DNA, al tiempo
que sintetiza RNA. La elongacin contina hasta que la transcripcin llega a su
fin despus que se sintetiza una secuencia con la seal poli(A).

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-mRNA

(G1) Introduccin al RNA
(G2) Transcripcin en los
procariotas
(G3) Operones
(G4) Transcripcin en los eucario-
tas: descripcin
(G6) Regulacin de la transcrip-
cin por la polimerasa II de RNA
eucariota
(G8) Transcripcin y procesamiento
del RNA ribosmico
(G9) Transcripcin y procesamiento
del RNA de transferencia

Organizacin gnica Secciones no codificantes del DNA (llamadas intrones;

En marcado contraste con los genes procariotas, donde figura G5-1) interrumpen las secciones codificantes del
las protenas son codificadas por una secuencia conti- gen (denominadas exones). No obstante, los codones
nua de codones tripletes, la vasta mayora de los genes tripletes dentro de los exones y el orden de los exones
que codifican protenas en los eucariotas es discontinua. en s mismo en el gen son todava colineales con la
 G5TRANSCRIPCIN DE LOS GENES QUE CODIFICAN PROTENAS EN LOS EUCARIOTAS 169

secuencia de aminocidos del polipptido codificado. el correspondiente polipptido del gen. Las regiones
El nmero de intrones en un gen que codifica protenas situadas entre el casquete o caperuza 5 y la regin
vara y sus lmites oscilan entre alrededor de 80 bp a codificante y entre la regin codificante y la cola poli(A)
ms de 10 000 bp. 3 no se traducen y de esta manera se denominan regin
no traducida 5 (5 UTR) y regin no traducida 3 (3 UTR),
El transcrito primario de un gen eucariota que codifica
respectivamente (figura G5-1).
protenas es una molcula pre-mRNA que debe proce-
sarse para producir mRNA maduros listos para la tra-
duccin; el pre-mRNA recibe un casquete o caperuza 5 Promotores de la polimerasa II de RNA
(en general pero no siempre) y una cola poli(A) de alre-
La transcripcin de los genes eucariotas que codifican
dedor de 200 residuos de AA, en tanto que las secuencias
protenas es controlada por una variedad de elemen-
intrnicas son removidas por el corte y empalme del
tos de secuencia. Algunos de stos son cercanos al sitio
RNA. Estas reacciones de procesamiento del RNA se des-
de inicio transcripcional y tienen secuencias conser-
criben en detalle en la seccin G7, pero se debe destacar
vadas; se llaman el promotor central. Sin embargo, si
que las mismas estn ligadas de manera muy cercana
actan solos, carecen de la eficiencia necesaria y por
al proceso de transcripcin. Por ejemplo, la adicin de
ello requieren interactuar con elementos de control
un casquete o caperuza sucede muy pronto despus
corriente arriba para dirigir la iniciacin eficiente de la
que el extremo 5 del pre-mRNA ha sido sintetizado y
transcripcin. Por lo tanto, para estos genes, el promo-
mientras la elongacin de la transcripcin contina. Del
tor es una combinacin de secuencias cercanas al sitio
mismo modo, la poliadenilacin es una parte integral
de inicio de la transcripcin y de secuencias localizadas
del proceso de terminacin de la transcripcin para la
ms corriente arriba.
mayora de los genes que codifican protenas.
En el promotor central se encuentran dos secuencias de
De manera tpica, la molcula de mRNA maduro tiene
consenso principales (figura G5-2).
un casquete o caperuza 5 y una cola poli(A) 3 con los
diferentes exones (es decir, exones 1, 2 y 3 de la figura
La mayor parte de los sitios promotores de la polime-
G5-1) unidos para formar una regin codificante rasa II de RNA incluye una secuencia muy conservada
central. Durante la sntesis de las protenas (seccin que se localiza alrededor de 25-35 bp corriente arriba
H3), la regin codificante es traducida para producir (es decir, en el lado 5) del sitio de iniciacin (aunque

Exn 1 Exn 2 Exn 3

Sitio de inicio Regin donde

de la Intrn 1 Intrn 2 termina la
transcripcin transcripcin
Transcripcin por
la RNA Pol II

Transcrito 5 ppp
primario de
RNA
Separacin por
la endonucleasa
Casquete 5 y adicin de una
aadido poli (A) cola poli (A)
3 aadida

5 AAAAA200 3

5 cap Cola poli (A)

Corte y empalme
del RNA

5 UTR Exn 1 Exn 2 Exn 3 3 UTR

mRNA AAAAA200

Transporte al citoplasma a
travs de un poro nuclear

Figura G5-1. Estructura y expresin de un gen que codica protenas en un

eucariota.
170 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA
Elementos control corriente arriba
Elementos control corriente arriba
Figura G5-2. Ejemplo de promotores centrales de la polimerasa II de RNA. Cuando
se presenta, la caja TATA se localiza alrededor de 25 a 35 bp corriente arriba del sitio
de inicio de la transcripcin (que se denota como +1), mientras que las secuencias
Inr se dispersan en el sitio de inicio de la transcripcin debido a que se localiza
entre 3 y +5. El DPE se localiza corriente abajo del sitio de inicio, en la regin +28 a
+32.
tambin puede ocurrir tan lejos corriente arriba
como en 100). Esta secuencia tiene el consenso
5-TATA (A/T)AA(A/G)-3 y se llama caja TATA (figura
G5-2). Como el sitio de iniciacin se denota como la
posicin +1, se dice que la posicin de la caja TATA se
localiza en alrededor de 25 a 35. La secuencia de
la caja TATA recuerda a la secuencia 10 (seccin G2)
de los procariotas (TATAAT), pero se localiza ms lejos
corriente arriba. Ambos elementos tienen en esencia
la misma funcin, designada reconocimiento por la
polimerasa de RNA, con el fin de posicionar la enzima
en la localizacin correcta para iniciar la transcrip-
cin. La secuencia alrededor de la caja TATA tambin
es importante porque influye en la eficiencia de la
iniciacin.

Una secuencia iniciadora (Inr) se encuentra con fre-
cuencia en el sitio de inicio de la transcripcin en la
regin 3 a +5. sta tiene el consenso (en genes de
mamferos) de 5-YCANTYY-3, donde N es cualquiera
de los cuatro nucletidos estndar y Y representa a
C o T.
Los genes transcritos por la polimerasa II de RNA suelen
tener una caja TATA y una secuencia Inr, pero otros slo
tienen un elemento, no los dos.
Los genes que carecen de una caja TATA con frecuencia
tienen una tercera secuencia denominada elemento
promotor corriente abajo (DPE), localizado corriente
abajo del sitio de inicio de la transcripcin, en la regin
+28 a +32 (figura G5-2). El DPE no tiene una secuencia de
consenso definida (es decir, su secuencia vara), pero se
sabe que interviene en la iniciacin de la transcripcin
al unirse a TFIID, una de las protenas clave que participa
(vase ms adelante).
Algunos genes transcritos por la polimerasa II de RNA
carecen de una caja TATA y del elemento Inr; estos genes
tienden a ser transcritos a tasas bajas e inician la trans-
cripcin en algn lugar dentro de una regin amplia del
+1
Caja TATA Inr
+1
Inr DPE
DNA (alrededor de 200 bp o ms) en lugar de hacerlo en
un sitio de inicio definido de la transcripcin.
Como se menciona antes, la transcripcin tambin es
regulada por elementos de control corriente arriba;
stos se describen en la seccin G6.
Iniciacin de la transcripcin
Con el fin de iniciar la transcripcin, la polimerasa II
de RNA requiere la asistencia de varias otras protenas o
complejos protenicos denominados factores de trans-
cripcin general (o basal), los cuales deben ensamblarse
dentro de un complejo en el promotor con el fin de que
la polimerasa de RNA se una e inicie la transcripcin
(figura G5-3). Todas stas tienen el nombre genrico de
TFII (factor de transcripcin de la polimerasa II de RNA).
En los genes que tienen una caja TATA, el primer evento
en la iniciacin es la unin del complejo protenico del
factor de transcripcin IID (TFIID) a la caja TATA a travs de
una de sus subunidades llamada TBP (protena de unin
de la caja TATA). Tan pronto como el complejo TFIID se
une, TFIIA se une y estabiliza la interaccin TFIID-caja
TATA. A continuacin, TFIIB se une a TFIID. Sin embargo,
TFIIB tambin se puede unir a la polimerasa II de RNA y
de esa manera actuar como una protena de conexin.
En consecuencia, la polimerasa II de RNA, la cual ya ha
formado un complejo con TFIIF, est lista para unirse.
A esto le sigue la unin de TFIIE y TFIIH. Este complejo
protenico final contiene cuando menos 40 polipptidos
y se llama complejo de iniciacin de la transcripcin.
Elongacin y terminacin
El TFIIH tiene dos funciones. Es una helicasa, lo que significa
que puede utilizar ATP para desenrollar la hlice de DNA y
convertir el complejo promotor cerrado en un complejo
promotor abierto, lo que permite que la transcripcin
comience. Adems, fosforila a la polimerasa II de RNA, lo
que determina que la enzima cambie su conformacin y
 G5TRANSCRIPCIN DE LOS GENES QUE CODIFICAN PROTENAS EN LOS EUCARIOTAS 171

se disocie de otras protenas del complejo de iniciacin.
A partir de entonces, la polimerasa II de RNA comienza
a moverse a lo largo de la plantilla de DNA, mientras
sintetiza RNA, esto es, que el proceso ingresa en la fase
de elongacin. La fosforilacin clave sucede en una cola
C terminal larga denominada dominio C terminal (CTD)
de la molcula de la polimerasa II de RNA. ste representa
un hecho sustancial; el CTD de los mamferos consta
de 52 repeticiones de la secuencia Tyr-Ser-Pro-Thr-
Ser-Pro-Ser y dos de las tres serinas de cada repeticin
pueden ser fosforiladas. Como hecho de inters, slo
la polimerasa II de RNA que tiene un CTD no fosforilado
puede iniciar la transcripcin, pero slo una polime-
rasa II de RNA con un CTD fosforilado puede elongar el RNA.
La elongacin de la cadena de RNA contina hasta que
se produce la terminacin. La mayor parte del mRNA
eucariota tiene una cola poli(A) en su extremo 3, es
decir hasta de 250 residuos A. Este tramo de residuos
A no es codificado por el DNA pero es adicionado al
RNA por una enzima llamada polimerasa de poli(A) en
un proceso denominado poliadenilacin. La polia-
denilacin requiere la existencia de una secuencia
seal de poliadenilacin cercana al extremo 3 del pre-
mRNA. Hasta recientemente, la poliadenilacin fue
considerada como un evento que se esperaba despus
que la transicin hubiera terminado, es decir, un evento
postranscripcional. Sin embargo, ahora no es tan cla-
ro que la transcripcin se detenga tan pronto despus
que la secuencia seal poli(A) se haya sintetizado y que
la poliadenilacin es una parte clave del proceso de
terminacin de la transcripcin. Todo esto se describe
con ms detalle en la seccin G7.

Caja TATA

TFIID

TB P
D

TFIIA

TFIIB B

D B

TFIIF F
RNA Pol II

F
D B

TFIIE E

TFIIH H

E Transcripcin
F
H
D B

Figura G5-3. Inicio de la transcripcin por la polimerasa II de RNA. El TFIID se une a

la caja TATA seguido en el siguiente orden por la unin del TFIIA, TFIIB y el complejo
preformado de TFIIF-polimerasa II de RNA. En el paso siguiente, TFIIE y TFIIH se unen en
ese orden y entonces comienza la transcripcin alrededor de 25 bp corriente abajo
desde la caja TATA. Ntese que la colocacin de varios factores en este diagrama es
arbitraria; sus posiciones exactas en el complejo son desconocidas.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G6Regulacin de la transcripcin por

la polimerasa II de RNA
Notas clave
Mecanismo de regulacin Muchos genes son activos en todas las clulas, pero algunos se transcriben slo
en tipos celulares especficos, en momentos especficos y slo en respuesta
a estmulos externos especficos. La regulacin de la transcripcin ocurre a
travs de factores de transcripcin que se unen a elementos de control cortos
asociados con los genes objetivo y entonces interactan unos con otros y con
el complejo de iniciacin de la transcripcin para aumentar o disminuir la tasa
de transcripcin del gen objetivo.
Elementos reguladores Muchos factores de transcripcin se unen a los elementos de control localizados
corriente arriba dentro de unos pocos cientos de pares de bases del gen co-
dificador de protenas. Algunos elementos reguladores (por ejemplo, la caja GC y
la caja CAAT) se hallan corriente arriba de la mayora de los genes que codifican
protenas, pero otros elementos se relacionan con slo unos pocos genes y
son responsables de la regulacin transcripcional de genes especficos (por
ejemplo, elemento de respuesta al AMP, elementos de respuesta a hormonas).
Potenciadores Los potenciadores son elementos de control transcripcional positivos, de
manera tpica de 100 a 200 bp de largo que pueden localizarse corriente
arriba o corriente abajo del gen objetivo, son activos en cualquier orientacin
y pueden activar la transcripcin del gen objetivo incluso cuando se localizan
a una gran distancia del mismo (en ocasiones, de 10 a 50 kb). Los factores de
transcripcin unidos a estos elementos distantes interactan con el complejo
de iniciacin de la transcripcin mediante la formacin de asas de DNA.
Los factores de trans- Los factores de transcripcin que incrementan la tasa de transcripcin suelen
cripcin tienen mltiples tener como mnimo dos dominios de estructura protenica, un dominio de
dominios unin al DNA que reconoce el elemento de control del DNA para unirse a l, y un
dominio de activacin que interacta con los otros factores de transcripcin o
con la polimerasa de RNA. Muchos factores de transcripcin que operan como
dmeros (homodmeros o heterodmeros) se mantienen juntos a travs de
dominios de dimerizacin. Algunos factores de transcripcin interactan con
ligandos pequeos por medio de un dominio de unin de ligandos.
Dominios de unin de Los dominios de unin de DNA contienen motivos de protenas caractersticos.
DNA El motivo hlice-giro-hlice (HTH) contiene dos hlices separadas por una
vuelta corta. Cuando el factor de transcripcin se une al DNA, la hlice de
reconocimiento se halla en el surco mayor de la hlice doble de DNA. El motivo
dedo de cinc consiste en un asa peptdica con dos cistenas y dos histidinas (el
dedo C2H2) o cuatro cistenas (el dedo C4) en la base del asa que coordina por
medio de una configuracin tetradrica un ion de cinc. La estructura secun-
daria del dedo de cinc es de dos cadenas y una hlice . Con frecuencia,
los factores de transcripcin contienen varios dedos de cinc; en cada caso, la
hlice alfa se une al surco mayor de la hlice doble de DNA. Algunos factores
de transcripcin (por ejemplo, las protenas bZIP y las protenas bsicas HLH)
contienen dominios bsicos que interactan con el DNA objetivo.
 G6 REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN POR LA POLIMERASA II DE RNA 173

Dominios de Una cremallera de leucina tiene una leucina cada siete aminocidos y forma una
dimerizacin hlice con las leucinas que se presentan en el mismo lado de la hlice cada
dos giros, lo que proporciona una superficie hidrfoba. Dos monmeros del
factor de transcripcin pueden interactuar a travs de las caras hidrfobas
de sus motivos cremallera de leucina para formar un dmero. El motivo hlice-
asa-hlice (HLH) contiene dos hlices separadas por un asa no helicoidal. La
hlice C terminal tiene una cara hidrfoba; dos monmeros del factor de
transcripcin, cada uno con un motivo HLH, pueden dimerizarse por interaccin
entre las caras hidrfobas de las dos hlices C terminales.
Dominios de activacin No se conocen motivos estructurales comunes de los dominios de activacin de
los factores de transcripcin. Han sido reportados dominios de activacin que
son ricos en aminocidos cidos, glutaminas o prolinas.
Represores Las protenas represoras que inhiben la transcripcin de genes especficos en
eucariotas pueden unirse a elementos control cercanos al gen objetivo o a silen-
ciadores que pueden localizarse a una gran distancia. El represor puede inhibir
la transcripcin del gen objetivo de manera directa o puede hacerlo mediante la
interferencia con la funcin de una protena activadora que se requiere para
la transcripcin eficiente del gen.

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-mRNA

(G1) Introduccin al RNA
(G2) Transcripcin en procariotas
(G3) Operones
(G4) Transcripcin en eucariotas:
descripcin
(G5) Transcripcin de genes que
codifican protenas en eucariotas
eucariota
(G8) Transcripcin y procesamiento
del RNA ribosmico
(G9) Transcripcin y procesamiento
del RNA de transferencia

Mecanismo de regulacin accin cis (o simplemente elementos cis) ya que estn

en la misma molcula de DNA en la que el gen se con-
Varios genes que codifican protenas son activos en todas
trola (en latn, cis significa en este lado). Los factores
las clulas y se requieren para las llamadas funciones de
de transcripcin de protenas que se unen a estos ele-
mantenimiento domsticas, como las enzimas de la
mentos tambin se conocen como factores de accin
gluclisis (seccin J3), las del ciclo del cido ctrico (sec-
trans (o simplemente factores trans) porque los genes
cin L1) y las protenas de la cadena de transporte de
que los codifican pueden estar en diferentes molculas
electrones (seccin L2). Pese a ello, algunos genes slo
de DNA (es decir, en diferentes cromosomas). Los fac-
son activos en determinados tipos celulares y son respon-
tores de transcripcin que regulan la transcripcin de
sables de la definicin de las caractersticas y funciones
genes especficos lo hacen mediante la interaccin con
especficas de tales clulas; por ejemplo, los genes de las
las protenas del complejo de iniciacin de la transcrip-
inmunoglobulinas en los linfocitos y de la miosina en
cin y pueden incrementar (activar) o disminuir (repri-
las clulas musculares. Adems, las protenas expresadas
mir) la tasa de transcripcin del gen objetivo.
por cualquier clula pueden cambiar en el transcurso
del tiempo (p. ej., durante el desarrollo temprano) o en De manera tpica, cada gen que codifica protenas en
respuesta a estmulos externos como las hormonas. Las una clula eucariota tiene varios elementos de control
clulas eucariotas pueden regular la expresin de los en su promotor (figura G6-1) y por lo tanto est bajo
genes que codifican protenas en varios niveles, pero un el control de numerosos factores de transcripcin, los
sitio principal de regulacin es en la transcripcin. cuales interactan con los otros y con el complejo de
iniciacin de la transcripcin mediante la interaccin
La regulacin transcripcional en una clula eucariota (es
entre protenas para determinar la tasa de transcripcin
decir, qu genes se transcriben y a qu tasa) es mediada
del gen.
por factores de transcripcin (diferentes de los facto-
res de transcripcin generales; seccin G5), los cuales
reconocen y se unen a secuencias reguladoras cortas Elementos reguladores
de DNA (elementos de control) relacionadas con el gen. Se regulan muchos factores de transcripcin que se unen
Estas secuencias tambin se denominan elementos de a las secuencias de control (elementos reguladores)
174 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Factores de Complejo de
transcripcin iniciacin de la
transcripcin Factor de
transcripcin

Gen

Potenciador 200 Caja +1 Potenciador

10 a 50 kb TATA +10 a +50 kb
25
Elementos
reguladores
corriente arriba

Figura G6-1. Regiones de control que regulan la transcripcin de un gen eucariota

tpico que codica protenas. Aunque se muestran como entidades diferentes en
este ejemplo para mayor claridad, in vivo, las diferentes protenas reguladoras se
unen a los elementos control y potenciadores distantes e interactan con cada
uno y con los factores de transcripcin general del complejo de iniciacin de la
transcripcin para modular la tasa de iniciacin de la transcripcin.

dentro de unos pocos cientos de pares de bases de genes
que codifican protenas. Los elementos de control posi-
tivo que se sitan corriente arriba del gen, por lo regu-
lar dentro de 200 bp del sitio de inicio transcripcional
(figura G6-1), incrementan la actividad de transcripcin
del gen bastante ms que el promotor basal.
Algunos de estos elementos, por ejemplo la caja GC y la
caja TATA, se encuentran en los promotores de muchos de
los genes eucariotas que codifican protenas; en efecto,
los genes con frecuencia tienen numerosas copias de
uno o ambos elementos. La caja CAAT tiene la secuencia
de consenso 5-GGCCAATCT-3 y une los factores de
transcripcin NF-1 y NF-Y, mientras que la caja GC
tiene la secuencia de consenso 5-GGGCGG-3 y une el
factor de transcripcin SP1, el cual luego interacta con
el factor de transcripcin general TFIID (seccin G5).
En contraste, algunos elementos reguladores corriente
arriba se asocian slo con unos pocos genes especficos
y son responsables de limitar la transcripcin de tales
genes para ciertos tejidos o en respuesta a ciertos est-
mulos. Por ejemplo:

El elemento de respuesta (CRE) al AMP cclico (cAMP)
presenta la secuencia de consenso 5-WCGTCA-3
(donde W es A o T) y participa en la modulacin del
cAMP de la transcripcin gnica al unirse al factor
de transcripcin CREB, el cual activa la transcripcin.

El elemento de la clula hipofisaria (secuencia de
consenso 5-ATATTCAT-3) se une al factor de trans-
cripcin Pit-1 y activa la transcripcin de genes espe-
cficos en las clulas hipofisarias.

Las hormonas esteroideas tambin controlan la
transcripcin gnica. Ingresan en la clula objetivo
y se unen a receptores de hormonas esteroideas
especficos en el citoplasma. La unin de la hor-
mona libera al receptor de una protena inhibidora
que, de manera habitual, mantiene al receptor en el
citoplasma. El complejo hormona-receptor, ahora
libre del inhibidor, se dimeriza y transita hasta
el ncleo, donde se une a un elemento de control
transcripcional, denominado elemento de respuesta
a la hormona, en los promotores de los genes obje-
tivo. Luego, como otros factores de transcripcin, el
complejo hormona-receptor unido interacta con
el complejo de iniciacin de la transcripcin para
aumentar la tasa de transcripcin del gen. El resul-
tado es la transcripcin especfica hormonal de un
subgrupo de genes en las clulas objetivo que contie-
nen el receptor de la hormona esteroidea apropiado.
Aqu, el receptor hormonal es en s mismo un fac-
tor de transcripcin que se activa por la unin del
ligando hormonal.
Los mltiples elementos reguladores asociados con los
genes eucariotas significan que mltiples factores de
transcripcin se unen e interactan entre s y con el
complejo de iniciacin de la transcripcin para activar
o reprimir la transcripcin. De esta manera, la actividad
transcripcional de estos genes depende de la combina-
cin de factores que se unen a ellos en un determinado
momento.
Potenciadores
Aunque muchos elementos de control positivo se ubi-
can cerca del gen que regulan, otros pueden localizarse
a largas distancias (a veces 10 a 50 kb), ya sea corriente
arriba o corriente abajo del gen (figura G6-1). Una
secuencia de control positivo de larga distancia de este
tipo se llama un potenciador si el factor de transcrip-
cin que se le une incrementa la tasa de transcripcin.
De manera tpica, un potenciador tiene 100 a 200 bp
de largo y contiene varios elementos de secuencia que
actan juntos para producir la actividad potenciadora
total. Los potenciadores tienen las siguientes caracte-
rsticas:
 G6 REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN POR LA POLIMERASA II DE RNA

Pueden activar la transcripcin a largas distancias.

Pueden localizarse corriente arriba o corriente abajo
del gen que controlan.

Son activos en cualquier orientacin con respecto al
gen.
En potenciadores localizados a largas distancias del gen
que controlan, la interaccin entre los factores de trans-
cripcin unidos al potenciador y a los elementos pro-
motores cercanos al gen puede suscitarse mediante la
formacin de asas externas de DNA entre los dos grupos
de elementos (figura G6-2).
Los factores de transcripcin tienen
mltiples dominios
En la mayora de los casos, en eucariotas, los factores de
transcripcin que se unen a secuencias potenciadoras
o promotoras son protenas activadoras que inducen
la transcripcin. Por lo regular, estas protenas tienen
cuando menos dos dominios diferentes de estructura
protenica, un dominio de unin al DNA que reconoce
la secuencia de DNA especfica a la que se une, y un
dominio de activacin responsable de lograr la activa-
cin transcripcional por interacciones con otros facto-
res de transcripcin, la molcula de polimerasa de RNA o
ambos. Muchos factores de transcripcin operan como
dmeros, ya sea homodmeros (subunidades idn-
ticas) o heterodmeros (subunidades dismiles), y las
unidades se mantienen juntas mediante dominios de
dimerizacin. Los dominios de unin del DNA y los domi-
nios de dimerizacin contienen estructuras protenicas
caractersticas (motivos) que se describen despus. Por
fin, algunos factores de transcripcin (p. ej., los recep-
tores de hormonas esteroideas) responden a molculas
pequeas especficas (ligando) que regulan la actividad
del factor de transcripcin. En tales casos, el ligando se
une a un dominio de unin del ligando.
Dominios de unin del DNA
Se conocen numerosos dominios de unin del DNA, pero
no sern cubiertos aqu. Algunos de los ms destacados
son los que se indican a continuacin.
Figura G6-2. Formacin de un asa externa de DNA que permite la interaccin del
factor potenciador de enlaces con el complejo de iniciacin de la transcripcin.
175
Hlice-giro-hlice (motivo HTH)
El motivo HTH consiste en dos hlices separadas por
una secuencia peptdica corta (cuatro aminocidos)
que forma un giro  (figura G6-3a). Cuando el factor de
transcripcin se une al DNA, una de las hlices, llamada
la hlice de reconocimiento, se sita en el surco mayor
de la hlice doble de DNA (figura G6-3b). De manera
original, el motivo HTH en eucariotas se descubri en
ciertos factores de transcripcin que desempean
funciones principales en el desarrollo temprano de la
Drosophila. Cada una de estas protenas contiene una
regin de unin de DNA de 60 aminocidos denominada
un homeodominio (codificada por una secuencia de
DNA llamada homeocaja). El homeodominio tiene cuatro
hlices , en las hlices II y III son el clsico motivo
HTH. Desde el descubrimiento original, el motivo HTH
ha sido encontrado en un amplio espectro de factores
de transcripcin eucariotas, entre los que se incluyen
muchos que no tienen un papel en el desarrollo. Lo
anterior tambin se encuentra en muchas protenas
reguladoras procariotas, como el represor lac que con-
trola el opern lac (seccin G3).
Dedo de cinc
Cuando menos se han reportado seis tipos de dedos de
cinc, dos de los cuales son el dedo C2H2 y el dedo C4. El
dedo de cinc C2H2 es un asa de 12 o menos aminoci-
dos con dos cistenas y dos histidinas en la base del asa
que coordina tetradricamente un ion de cinc (figura
G6-4a). ste forma una estructura compacta de dos cade-
nas y una hlice (figura G6-4b). La hlice contiene
varios aminocidos bsicos conservados e interacta de
manera directa con el DNA, con el que se une en el surco
mayor de la doble hlice. Los factores de transcripcin
que contienen dedos de cinc con frecuencia contienen
varios motivos de stos, ordenados como la hlice de
cada contacto con el DNA. En efecto, el factor de trans-
cripcin A de la polimerasa III de RNA (TFIIIA; seccin G8)
contiene nueve dedos de cinc! El factor de transcripcin
SP1, el cual se une a la caja GC, tiene tres dedos de cinc.
El dedo de cinc C4 tambin se encuentra en varios fac-
tores de transcripcin, como las protenas receptoras de
hormonas esteroideas. Este motivo forma una estructura
Potenciador
E
F
H
D B
Caja TATA
176 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

a) b)

Giro

Hlice de
reconocimiento N
C
N

Figura G6-3. a) Un motivo hlice-giro-hlice (HTH) de una protena de unin del

DNA; b) unin del motivo HTH al DNA objetivo en la que se muestra que la hlice de
reconocimiento se localiza en el surco mayor del DNA.

similar a la de un dedo de cinc C2H2, pero tiene cuatro
cistenas coordinadas con el ion de cinc en lugar de
dos cistenas y dos histidinas (figura G6-4c).
Dominios bsicos
Los dominios de unin de DNA llamados dominios
bsicos (una hlice rica en aminocidos bsicos)
se presentan a veces en los factores de transcripcin
en combinacin con los dominios de dimerizacin
cremallera de leucina o hlice-asa-hlice (HLH) (vase
ms adelante). La combinacin de dominios bsicos
y dominios de dimerizacin da a estas protenas sus
nombres de protenas en cremallera de leucina bsicas
(bZIP) o protenas HLH bsicas, respectivamente. En
cada caso, la dimerizacin significa que dos dominios
bsicos (uno de cada monmero) interactan con el DNA
objetivo.

a) Dedo C2H2 b) Estructura secundaria del dedo C2H2

N
Unin del
DNA

C H
Zn

C H
Cys
N C
His
Zn
c) Dedo C4 His
Cys

Unin del
DNA

C C C
Zn

C C
N C

Figura G6-4. a) Un dedo de cinc C2H2; b) estructura secundaria del dedo de cinc
C2H2. Adaptado de Travers, A. (1993), DNA-Protein Interactions, Chapman & Hall; c)
un dedo de cinc C4.
 G6 REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN POR LA POLIMERASA II DE RNA 177

Dominios de dimerizacin Hlice-asa-hlice (motivo HLH)

Cremallera de leucina El dominio de dimerizacin HLH es muy diferente
del motivo HTH descrito antes (el cual interviene en
El motivo de la cremallera de leucina contiene una leu-
la unin al DNA sin dimerizacin) y no debe confun-
cina cada siete aminocidos en la secuencia primaria y
dirse con l. El dominio HLH consiste en dos hlices
forma una hlice con las leucinas que se presentan en
separadas por un asa no helicoidal. El C terminal de la
el mismo lado de la hlice cada dos giros, lo que pro-
hlice tiene aminocidos hidrfobos en una de sus
porciona una superficie hidrfoba. El dmero del factor
caras. Por consiguiente, dos factores de transcripcin
de transcripcin se forma por los dos monmeros que
monomricos, cada uno con un motivo HLH, pueden
interactan a travs de las caras hidrfobas de sus moti-
dimerizarse por interaccin entre las caras hidrfobas
vos cremallera de leucina (figura G6-5a). En el caso de
de los dos C terminales de las hlices alfa. Como la
las protenas bZIP, cada monmero tambin tiene un
cremallera de leucina (vase antes), el motivo HLH se
dominio bsico de unin del DNA localizado en el N ter-
encuentra con frecuencia en factores de transcripcin
minal de la cremallera de leucina. Por lo tanto, el dmero
que contienen dominios bsicos de unin al DNA. Otra
de la protena bZIP tiene dos dominios bsicos. En rea-
vez, como la cremallera de leucina, el motivo HLH puede
lidad, tales dominios se hallan en direcciones opues-
dimerizar monmeros de factores de transcripcin y
tas, lo cual les permite unirse a las secuencias de DNA
formar homodmeros o heterodmeros. Esta capacidad
que tienen simetra invertida. Ellos se unen en el surco
para formar heterodmeros aumenta en gran medida la
mayor del DNA objetivo (figura G6-5b). El dominio cre-
variedad de factores de transcripcin activos posibles y
mallera de leucina tambin acta como el dominio de
de esa manera eleva el potencial de la regulacin gnica.
dimerizacin en factores de transcripcin que utilizan
dominios de unin al DNA diferentes al dominio bsico.
Por ejemplo, algunas protenas con homeodominio, que Dominios de activacin
contienen el motivo HTH para la unin del DNA, tienen A diferencia de los dominios de unin de DNA y de
dominios de dimerizacin en cremallera de leucina. los dominios de dimerizacin, se han identificado
En todos los casos, los dmeros que forman pueden ser motivos estructurales excepcionales en los dominios de
homodmeros o heterodmeros. activacin de diversos factores de transcripcin. Algunos
tipos de dominios de activacin son los siguientes:

a) b)

Leu Leu
Cremallera de
Leu Leu leucina
Leu Leu

Leu Leu

Leu Leu
Hlice Hlice
Leu Leu

Leu Leu

Dominios
bsicos

Figura G6-5. a) Un dmero de protena bZIP donde se muestra el dominio de

dimerizacin de la cremallera de leucina y los dos dominios bsicos; b) estructura
plegada de una protena bZIP donde se muestra la unin de los dominios bsicos
en el surco mayor del DNA objetivo. Adaptado de Travers A. (1993) DNA-Protein
Interactions, Chapman & Hall.
178 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Los dominios de activacin cidos son ricos en ami-
nocidos cidos (cidos asprtico y glutmico). Por trol de la regin promotora cercana al gen o en sitios
ejemplo, las protenas receptoras de glucocorticoi-
des de mamferos contienen este tipo de dominios
de activacin.

Dominios ricos en glutamina (p. ej., como en el fac-
tor de transcripcin SP1).

Dominios ricos en prolina (p. ej., como en el factor
de transcripcin c-jun).
Represores
Las protenas represoras de genes que inhiben la trans-
cripcin de genes especficos en eucariotas tambin
existen. Pueden actuar al unirse a los elementos de con-
localizados a larga distancia del gen, denominados silen-
ciadores. La protena represora puede inhibir la trans-
cripcin directamente. Un ejemplo es el receptor de
hormona tiroidea de mamferos, el cual, en ausencia
de hormona tiroidea, reprime la transcripcin de los
genes objetivo. Sin embargo, otros represores inhiben la
transcripcin mediante el bloqueo de la activacin. sta
puede alcanzarse en una de diferentes formas: mediante
el bloqueo de los sitios de unin al DNA de una prote-
na activadora, unin y enmascaramiento del dominio de
activacin del factor de activacin, o al formar un com-
plejo que no se une al DNA con la protena activadora. Se
conocen numerosos ejemplos de cada modo de accin.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G7Procesamiento del pre-mRNA

eucariota
Notas clave

Descripcin Una serie de reacciones de procesamiento del transcrito del RNA primario de
un gen que codifica protenas en una clula eucariota lo modifican con el
fin de volver funcional el mRNA. El extremo 5 se modifica con una estruc-
tura en casquete o caperuza 5. La mayora de los pre-mRNA se escinde cerca
del extremo 3 y se le aade una cola poli(A). Las secuencias de intrones se
remueven mediante el empalme del RNA. La transcripcin por la polimerasa II
de RNA y el procesamiento del pre-mRNA guardan un acoplamiento estrecho;
los componentes decisivos que intervienen en los pasos del procesamiento
se relacionan con el dominio C terminal (CTD) de la polimerasa II de RNA
y se transfieren a la molcula de RNA en crecimiento para que lleve a cabo los
pasos del proceso.
Procesamiento 5': Inmediatamente despus de la transcripcin, el 5fosfato es removido, la gua-
formacin del casquete nililtransferasa agrega un residuo G ligado a travs de un enlace covalente 5 y
o caperuza 5, y es metilado para formar un casquete o caperuza 7-metilguanosina (m7G).
Los residuos de ribosa del nucletido adyacente o de los dos nucletidos adya-
centes tambin pueden metilarse. El casquete o caperuza protege el extremo
5 del mRNA contra la degradacin de la ribonucleasa y tambin funciona en
la iniciacin de la sntesis de protenas.
Corte y empalme del RNA Las secuencias de intrones son removidas por el corte y empalme del RNA que
divide al RNA en los lmites entre exones e intrones y une los extremos de las
secuencias de exones. Los sitios de divisin estn marcados por secuencias de
consenso conservadas; en la mayor parte de los casos el intrn comienza con
GU y termina con AG, un tramo de polipirimidina que yace corriente arriba del
AG, y una secuencia de punto de ramificacin conservada se localizada alre-
dedor de 20 a 50 nt corriente arriba del sitio de corte y empalme 3. La reac-
cin de empalme incluye dos pasos de transesterificacin, los cuales liberan
el intrn como una estructura en lazo ramificada que contiene un enlace 25,
con un residuo A conservado en la secuencia del punto de ramificacin. Las
reacciones de empalme del RNA requieren snRNP y protenas accesorias que se
ensamblen dentro de un espliceosoma. Los componentes de RNA de la snRNP
son complementarios de las secuencias conservadas y por lo tanto pueden
formar pares de bases con ellas. Los intrones AT-AC comienzan con AU y termi-
nan con AC, en lugar de GU y AG, respectivamente, y sus empalmes requieren
un conjunto diferente de snRNP que las usadas para el corte y empalme de la
forma principal del intrn, excepto que ambos usan snRNP U5. Unos pocos
organismos pueden empalmar exones juntos desde dos molculas de RNA dife-
rentes: trans-corte y empalme. Algunos intrones son autoempalmantes; las
secuencias de RNA del intrn catalizan su propia escisin sin la participacin
de un espliceosoma.
180 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Procesamiento 3': La mayora de los transcritos del pre-mRNA es dividida cerca del extremo 3
escisin y poliadeni- entre una secuencia de la seal de poliadenilacin (5-AAUAAA-3) y una secuen-
lacin cia corriente abajo rica en GU (o rica en U). Protenas especficas se unen a estas
secuencias para formar un complejo. Una de las protenas que se unen, la poli-
merasa de poli(A), agrega una cola poli(A) de alrededor de 200 a 250 residuos A
al nuevo extremo 3 de la molcula de RNA y molculas de las protenas de unin
poli(A) se unen a ella. La terminacin de la transcripcin por la polimerasa II de
RNA est acoplada a la poliadenilacin; la transcripcin se detiene muy pronto
despus que la polimerasa II de RNA sintetiza la secuencia de la seal de polia-
denilacin. La funcin exacta de la cola de poli(A) no es clara pero puede servir
para proteger el extremo 3 del mRNA final contra la degradacin de la nucleasa
y as incrementar la eficiencia de la traduccin del mRNA. Algunos pre-mRNA (p.
ej., el pre-mRNA de la histona) son escindidos cerca del extremo 3 pero no se les
agrega una cola poli(A).
Procesamiento Algunos pre-mRNA contienen ms de un grupo de sitios para la escisin y polia-
alternativo denilacin del extremo 3. El uso de sitios alternativos puede conducir a mRNA
que contienen diferentes regiones 3 no codificadoras o que tienen diferentes
capacidades de codificacin. Algunas vas de corte y empalme alternativas afec-
tan los exones que sern retenidos en el mRNA final, lo que permite que se sin-
teticen varias protenas diferentes a partir de un mismo gen.
Edicin del RNA La edicin del RNA puede cambiar la secuencia de una molcula de mRNA des-
pus de la sntesis y el procesamiento; los nucletidos pueden ser sustituidos,
agregados o eliminados. En el hgado humano, el pre-mRNA de la apolipopro-
tena B no sufre edicin y la traduccin produce la apolipoprotena B100. En el
intestino delgado, la edicin del RNA convierte un residuo C del pre-mRNA de la
apolipoprotena B en U, por lo que cambia un codn de la glutamina (CAA) a un
codn de terminacin (UAA). La traduccin del mRNA editado produce una pro-
tena ms corta, la apolipoprotena B48, que carece de un dominio protenico
para la unin del receptor. Se producen muchos otros ejemplos de edicin, como
el del mRNA mitocondrial del tripanosoma, donde ms de la mitad de las uridinas
del mRNA final se adquieren a travs del proceso de edicin.
Silenciamiento del Los microRNA (miRNA) pueden inhibir la traduccin de mRNA especficos, un
mRNA proceso denominado silenciamiento del mRNA. La polimerasa II de RNA trans-
cribe la mayora de los miRNA y la polimerasa III de RNA unos pocos ms. El
miRNA deriva del procesamiento de un precursor grande de RNA transcrito a par-
tir de un gen de miRNA o mediante el procesamiento de un intrn que contiene
una secuencia de miRNA dentro de un gen que codifica protenas. El miRNA
maduro forma un complejo miRNP con protenas (denominado el miRISC) y se
une a secuencias complementarias (por lo general, en la UTR 3) del mRNA obje-
tivo, con lo cual inhibe la traduccin.

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G6) Regulacin de la transcripcin por

(G1) Introduccin al RNA
(G2) Transcripcin en procariotas
(G3) Operones
(G4) Transcripcin en eucariotas:
descripcin
(G5) Transcripcin de genes que
codifican protenas en eucariotas
la polimerasa II de RNA
(G8) Transcripcin y procesamiento
del RNA ribosmico
(G9) Transcripcin y procesamiento del
RNA de transferencia

Descripcin
En eucariotas, el producto de la transcripcin de un
gen codificante de protenas es el transcrito primario
del RNA, el pre-mRNA (seccin G5), el cual requiere
procesamiento para generar mRNA funcional. Como
se describe antes (seccin G5), la transcripcin y el
procesamiento del RNA en eucariotas son eventos
estrechamente acoplados. Varias de las enzimas que
intervienen en los pasos del procesamiento se relacionan
con el dominio C terminal (CTD) de la polimerasa II de
RNA y se transfieren a la molcula del RNA en crecimiento
conforme se requieren para los pasos del procesamiento.
Suceden numerosas reacciones del procesamiento.
Inmediatamente despus que la polimerasa II de RNA
lo sintetiza, el extremo 5 terminal del pre-mRNA es
modificado por la adicin de un casquete o caperuza 5
(un proceso conocido como formacin del casquete o
caperuza). El transcrito de RNA primario incluye regiones
de codificacin (exn) y no codificantes (intrn) (sec-
cin G5, figura G5-1). La ltima necesita removerse y
las secuencias de exones unirse por corte y empalme
del RNA (seccin G5, figura G5-1) para generar una
secuencia de codificacin del RNA continua lista para
la traduccin. Las reacciones de corte y empalme del
RNA son catabolizadas por un gran complejo de RNA con
protenas llamado espliceosoma (vase ms adelante),
que ensambla el transcrito primario del RNA a medida que
se va sintetizando, de manera que el corte y empalme
del RNA ocurre muy pronto despus de la sntesis del RNA
relevante. Los extremos 3 de la mayora (pero no de
todos) de los pre-mRNA son tambin modificados por
divisin y adicin de alrededor de 200 a 250 residuos
A para formar una cola poli(A). Esta reaccin de po-
liadenilacin se produce durante la terminacin de la
5
pppNpNp
ppNpNp
GTP
PP
5 5
G ppp NpNp
CH3
GpppNpNp
CH3
GpppNpNp
CH3 CH3
Figura G7-1. Pasos participantes en la formacin del casquete 5.
G7PROCESAMIENTO DEL PRE-MRNA EUCARIOTA 181
transcripcin. Las secciones siguientes describen cada
reaccin del procesamiento del RNA con mayor detalle.
Procesamiento 5: formacin del
casquete o caperuza
La formacin del casquete o caperuza del pre-mRNA
ocurre muy pronto despus de la sntesis del extremo
5 de la molcula y suele ocurrir antes de que este RNA
sea mayor de 30 nt de longitud. Incluye la adicin de
7-metilguanosina (m7G) al extremo 5 (figura G7-1). Para
lograrlo, en primer lugar, la fosfatasa remueve el 5
fosfato terminal. Luego, la guanililtransferasa cataliza
una reaccin donde el extremo 5 difosfato resultante
ataca al tomo de fsforo de una molcula de GTP para
agregarle un residuo G en un enlace inusual de 55 tri-
fosfato (figura G7-1). Acto seguido, la metiltransferasa
de guanina metila el residuo G, lo que logra al agregar
un metilo en la posicin N-7 del anillo de guanina, y
para ello usa la S-adenosilmetionina como donadora
del grupo metilo. Esta estructura, con el grupo m7G en
posicin, se denomina estructura en casquete o cape-
ruza 0. La ribosa del nucletido adyacente (nucletido
2 en la cadena del RNA) o las ribosas de los nucletidos 2
y 3 tambin pueden ser metiladas para dar estructuras
en casquete o caperuza 1 o 2, respectivamente. En estos
casos, los grupos metilo se aaden a los grupos 2-OH de
las ribosas (figura G7-1).
El casquete o caperuza protege el extremo 5 del trans-
crito primario contra el ataque de las ribonucleasas, que
tienen especificidad por los enlaces 35 fosfodister y
por eso no pueden hidrolizar el enlace 55 en la estruc-
tura del casquete o caperuza. Adems, el casquete o
caperuza desempea un papel en el paso inicial de la
Remocin del fosfato terminal
por la fosfatasa
Formacin del enlace 55 trifosfato
durante la adicin de un residuo G
terminal
Adicin de un grupo metilo a G, a partir de
la S-adenosilmetionina, para formar un
casquete 0
Pueden agregarse grupos metilo a la ribosa del
primer nucletido despus que G forma el casquete
1 o a las ribosas de los dos nucletidos despus que
G forma el casquete 2
182 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Intrn

Sitio del corte y

Sitio del corte empalme 3
y empalme 5
20 a 50 nt

Exn 1 GU CURAY U/C11 AG Exn 2

Secuencia del punto Segmento de

de ramicacin polipirimidina

Figura G7-2. Secuencias conservadas por el corte y empalme del RNA. Los residuos
marcados con A en la secuencia del punto de ramicacin son el sitio de formacin
de la ramicacin 25.

sntesis de protenas en los eucariotas. Slo los trans-
critos de RNA de genes eucariotas que codifican prote-
nas se someten al revestimiento con el casquete o cape-
ruza; el mRNA procariota y el rRNA y tRNA eucariotas no
son revestidos con un casquete o caperuza.
Corte y empalme del RNA
Un paso clave en el procesamiento del RNA es la remo-
cin precisa de las secuencias de intrones y la unin de
los extremos de los exones vecinos para producir una
molcula de mRNA funcional, un proceso denominado
corte y empalme del RNA. Los lmites entre exones e
intrones estn marcados por secuencias especficas
(figura G7-2). En la mayora de los casos, en el lmite
5 entre exn e intrn (el sitio de corte y empalme 5),
el intrn comienza con la secuencia GU y en el lmite
entre exn e intrn 3 (el sitio de corte y empalme 3) el
intrn termina con la secuencia AG. Cada una de estas
dos secuencias forma parte de una secuencia de con-
senso ms grande. Por ejemplo, en los vertebrados, la
secuencia de consenso del sitio de corte y empalme 5es
5-AGGUAAGU-3 (el invariable GU est subrayado). Un
segmento de polipirimidinas (un tramo observado de
alrededor de 11 pirimidinas) se encuentra corriente
arriba del AG en el sitio de corte y empalme 3 (figura
G7-2).
Una secuencia seal clave es la secuencia del punto de
ramificacin, la cual se localiza alrededor de 20 a 50 nt
corriente arriba del sitio de corte y empalme 3. En los
vertebrados, esta secuencia es 5-CURAY-3, donde la R
representa una purina y la Y una pirimidina (en las leva-
duras esta secuencia es 5-UACUAAC-3).
El corte y empalme del RNA ocurre en dos pasos (figura
G7-3). En el primer paso, el 2-OH del residuo A en el sitio
de ramificacin (indicado como A en la figura G7-2) ataca
el enlace 35fosfodister en el sitio de corte y empalme
5, lo que determina la rotura del extremo 5 del intrn y
que forme un asa alrededor y un enlace inusual 25 con
el residuo A en la secuencia del punto de ramificacin.
Debido a que este residuo A ya tiene enlaces 35 con sus
vecinos en la cadena del RNA, el intrn se ramifica en este
punto para formar lo que se conoce como soga inter-
media (nombrada como tal ya que recuerda al lazo de
un vaquero). El nuevo extremo 3-OH del exn 1 ataca a
continuacin el enlace fosfodister en el sitio de corte y
empalme 3, con lo cual provoca que los exones se unan
y liberen el intrn, todava como una reata. En cada una
de las dos reacciones de corte y empalme, un enlace de
fosfato-ster se intercambia por otro (es decir, stas son
reacciones de transesterificacin). Como el nmero de
enlaces fosfato-ster no cambia, no se consume energa
(ATP).

Sitio de ramicacin

Intrn 2OH
Exn 1 GU A AG Exn 2

Formacin de
la soga

U 5
G

2
Exn 1 3OH A AG Exn 2
Separacin en el sitio de
de corte y empalme 3 y
unin de exones
U
G

Exn 1 Exn 2 A AG 3OH

Figura G7-3. Los dos pasos del corte y empalme del RNA.
 G7PROCESAMIENTO DEL PRE-MRNA EUCARIOTA
El corte y empalme del RNA requiere la participacin
de varios RNA nucleares pequeos (snRNA), cada uno de
los cuales se relaciona con diversas protenas para formar
una pequea partcula de ribonucleoprotena nuclear o
snRNP. Debido a que los snRNA son ricos en residuos
U, se denominan U1, U2, etc. Los componentes de RNA
de las snRNP tienen regiones que son complementarias
con las secuencias de los sitios de corte y empalme 5 y 3
y con otras secuencias conservadas en el intrn y por lo
tanto pueden formar pares de bases con ellas. La snRNP
U1 se une al sitio de corte y empalme 5 y la snRNP U2
se une a la secuencia del punto de ramificacin (figu-
ra G7-4). Un complejo de tres snRP de U4, U5 y U6
se une, como lo hacen otras protenas accesorias, de
manera que se forma un complejo de mltiples compo-
nentes (denominado espliceosoma) en el intrn a remo-
verse y que determina que el intrn se convierta en un
asa sobresaliente (figura G7-4). Por lo tanto, a travs
de interacciones entre los snRNA y el pre-mRNA, el es-
pliceosoma toma los exones corriente arriba y corriente
abajo y los deja listos para el corte y empalme. A con-
tinuacin, el espliceosoma cataliza la reaccin de corte
y empalme de dos pasos para remover el intrn y ligar
los dos exones vecinos. Acto seguido, el espliceosoma se
disocia y las snRNP liberadas pueden tomar parte en reac-
Exn 1 GU
Intrn
U1
Exn 1 GU
U1 AG
Exn 1 GU
U2 A U5
U4
U6
Espliceosoma
Figura G7-4. Formacin del espliceosoma.
Intrn
Exn GU
Intrn
Exn AU
Figura G7-5. Comparacin de las secuencias conservadas del sitio de corte y
ramicacin de la mayora de los intrones (parte superior del diagrama) con las de
los intrones AT-AC (parte inferior del diagrama).
183
ciones de corte y empalme adicionales en otros sitios del
pre-mRNA. Ntese que as como las snRNP, cientos de
otras protenas denominadas factores de corte y empalme
tambin intervienen en un espliceosoma y las funciones
de la mayora de stas sigue pendiente de determinarse.
Aunque la vasta mayora de los intrones de pre-mRNA
comienza con GU en el sitio de corte y empalme 5 y
termina con AG en el sitio de corte y empalme 3, algu-
nos intrones (quiz alrededor de 1%) tienen diferentes
secuencias de consenso del sitio de corte y empalme. En
estos casos, el intrn comienza con AU y termina con AC
en lugar de hacerlo con GU y AG, respectivamente (figura
G7-5). Como el corte y empalme del RNA incluye el reco-
nocimiento de las secuencias de consenso del sitio de
corte y empalme por snRNP clave (vase antes) y dado
que estas secuencias son diferentes en la clase de intro-
nes menores, snRNP U1, 2, 4 y 6 no toman parte en estos
cortes y empalmes llamados intrones AT-AC (AT-AC se
refiere, por supuesto, a la secuencia correspondiente del
DNA). En su lugar, intervienen snRNP U11, U12, U4atac
y U6atac, que reemplazan las funciones de U1, U2, U4 y
U6, respectivamente, y se ensamblan para formar el
espliceosoma AT-AC. La snRNP U5 se requiere para
el corte y empalme de ambas clases de intrones.
Sitio de ramicacin
A AG Exn 2
snRNPs U1, U2
U2
A AG Exn 2
Complejo tri-snRNP U4-U5-U6
Exn 2
AG Exn
AC Exn Intrn AT-AC
184 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Unos pocos organismos, como los nematodos y el tripa-
nosoma, son capaces de empalmar exones a partir de dos
molculas diferentes de RNA, un proceso denominado
trans-empalme. En este contexto, el corte y empalme
ms usual de dos exones de la misma molcula de RNA
es el cis-empalme.
Tambin se conocen algunos autoempalmes de intro-
nes, por ejemplo, el rRNA de Tetrahymena (seccin
G8) y algunos mRNA de mitocondrias y cloroplastos.
En estos casos, la secuencia de RNA del intrn cataliza
su propia divisin del RNA precursor sin necesidad de
un espliceosoma. Tales molculas de RNA cataltico se
denominan ribozimas (un nombre que se relaciona con
claridad con las enzimas, es decir, protenas catalticas).
La similitud qumica de algunas de estas reacciones de
autocorte y empalme con las reacciones que se presentan
durante el corte y empalme mediado por espliceosomas
han llevado a la comprensin de la catlisis del RNA en
esta ltima. El corte y empalme mediado por espli-
ceosoma tal vez representa la evolucin sufrida por
entidades de autocorte y empalme, en las que las
snRNP no slo desempean roles en el reconocimiento
de los sitios de corte y empalme sino tambin en las
reacciones catalticas de corte y empalme mediadas por
espliceosoma. En particular, la estructura formada
por el snRNA U2 pareado con el snRNA U6 probable-
mente forma el centro cataltico del espliceosoma.
Procesamiento 3: escisin y
poliadenilacin
La mayora de los pre-mRNA eucariotas sufre polia-
denilacin, la cual incluye la separacin del RNA en su
extremo 3 y la adicin de alrededor de 200-250 residuos
A para formar las colas poli(A). Las reacciones de esci-
sin y poliadenilacin requieren la existencia de una
secuencia seal de poliadenilacin (5-AAUAAA-3)
localizada cerca del extremo 3 del pre-mRNA seguida
de una secuencia 5-YA-3 (donde Y = una pirimidina),
con frecuencia 5-CA-3, en las siguientes 11-20 nt (figura
G7-6). Una secuencia rica en GU (o secuencia rica en U)
tambin suele estar presente adicionalmente corriente
abajo. Despus que estos elementos de la secuencia del
RNA han sido sintetizados, dos protenas de mltiples
subunidades llamadas CPSF (factor de especificidad de
separacin y poliadenilacin) y CstF (factor F de esti-
mulacin de la separacin) se transfieren del CTD de la

Pre-mRNA 5 AAUAAA (~20 nt) CA UUGUGUGUUG 3

Seal de poliadenilacin Regin rica en GU

Formacin del
complejo de
poliadenilacin

Polimerasa de
poli(A)

CPSF CstF
CFI/II

5 AAUAAA CA UUGUGUGUUG 3

Sitio de
escisin
Separacin y
poliadenilacin

5 AAUAAA CAAAAAAAAAAAAA

Figura G7-6. Poliadenilacin del pre-mRNA. Los detalles completos del complejo
de poliadenilacin no se conocen, pero incluyen a las protenas CPSF y CstF, que
se unen a las secuencias de consenso indicadas, ms la polimerasa de poli(A),
y cuando menos dos factores de escisin adicionales (CFI y CFII). Despus de la
separacin, el extremo 3 de la molcula de RNA que contiene la regin rica en GU
se pierde y el nuevo extremo 3 del pre-mRNA (que termina en CA) se extiende por
la adicin de 200 a 250 residuos A que se encarga de agregar la polimerasa poli(A)
para formar una cola poli(A).
 G7PROCESAMIENTO DEL PRE-MRNA EUCARIOTA
polimerasa II de RNA a la molcula del RNA y se unen a
los elementos de la secuencia. Se forma un complejo
de protenas que incluye cuando menos dos factores de
separacin adicionales (CFI y CFII) y una enzima llamada
polimerasa de poli(A) (PAP). Este complejo separa el
RNA entre las secuencias AAUAAA y la secuencia rica en GU
(figura G7-6). Entonces, la polimerasa de poli(A) agrega
alrededor de 200 a 250 residuos A al nuevo extremo 3
de la molcula de RNA y para ello usa ATP como precursor.
Una vez que est formada, la cola poli(A) une de inme-
diato mltiples copias de una protena de unin poli(A).
Es esencial una seal de poliadenilacin intacta para
que concluya la transcripcin de los genes que codifican
protenas en, por ejemplo, las clulas humanas, y de esta
forma se sabe que la conclusin de la transcripcin y la
poliadenilacin estn ligadas.
El CPSF se une al TFIID y de esa manera queda incorpo-
rado dentro del complejo de iniciacin de la trans-
cripcin durante su iniciacin (seccin G5). ste
permanece asociado con la polimerasa II de RNA durante
la elongacin y as est listo para unirse a la secuencia
de la seal de poliadenilacin tan pronto como sea
sintetizado. La transcripcin se detiene de inmediato
despus que la secuencia de la seal de poli(A) ha sido
sintetizada. No se entiende por completo cmo es que
ocurre esto. Se han propuesto dos modelos y parece
probable que el proceso real sea una combinacin de
ambos modelos. El primer modelo (modelo alostrico o
modelo antiterminador) propone que la transcripcin
a travs de la secuencia de seal de poli(A) (la cual
por supuesto es seguida con rapidez por la formacin
del complejo de poliadenilacin) causa un cambio
conformacional en el complejo de elongacin de la
polimerasa II de RNA que desencadena la terminacin
en lugar de producir la elongacin adicional. En este
contexto, es notable que tanto el CPSF como el CstF
pueden interactuar con el CTD de la polimerasa II de
RNA. El segundo modelo (modelo torpedo) propone
que despus de la separacin en el sitio de poli(A),
una exonucleasa 5 a 3 se une al nuevo extremo 5
creado y degrada con rapidez el RNA, se empareja con
la polimerasa II de RNA y promueve su liberacin de la
plantilla de DNA.
El papel exacto de la cola poli(A) todava no se comprende
del todo. Se ha sugerido que protege el extremo 3 del
mRNA final contra la digestin de la ribonucleasa y que
Poli(A)
Exn 1 Exn 2
Pre-mRNA
Figura G7-7. Uso de sitios de poliadenilacin alternativos.
185
en esa medida estabiliza el mRNA. Tambin incrementa
la eficiencia de la traduccin del mRNA. Sin embargo,
algunos mRNA, de manera notable el pre-mRNA de las
histonas, carecen de una cola poli(A). (El pre-mRNA de
las histonas tambin se somete a un procesamiento
de 3. Es escindido cerca del extremo 3 por un complejo
protenico que reconoce seales especficas, una de
las cuales es una estructura tallo-asa, para generar el
extremo 3 de la molcula de mRNA maduro.)
Procesamiento alternativo
Sitios de poliadenilacin alternativos
Ciertos pre-mRNA contienen ms de un conjunto de
secuencias seal para la separacin y poliadenilacin
del extremo 3. En algunos casos, la localizacin de los
sitios de poliadenilacin alternativos es tal que, segn
el sitio elegido, pueden perderse o retenerse exones
particulares en las reacciones de corte y empalme
subsecuentes (figura G7-7). Aqu el efecto es cambiar
la capacidad de codificacin del mRNA final de mane-
ra que sea posible producir diferentes protenas de
acuerdo con el sitio de poliadenilacin usado. En
otros casos, los sitios alternativos se sitan dentro de
la regin no codificadora 3 del pre-mRNA, de modo
que se incluyan las mismas secuencias de codificacin
en el mRNA final sin relacin con el sitio que se use,
pero la regin no codificadora 3 puede variar. Como
la secuencia no codificadora 3 puede contener seales
para controlar la estabilidad del mRNA, la eleccin del
sitio de poliadenilacin en esta situacin puede afectar
la vida del mRNA resultante.
Corte y empalme alternativo
Ahora se conocen muchos casos en los que diferentes
tejidos cortan y empalman el transcrito primario del RNA
de un solo gen en formas alternativas, donde los exones
que se pierden y los que se retienen en el mRNA final
dependen de la va elegida (figura G7-8). Es presumi-
ble que algunos tejidos contengan protenas regulado-
ras que promueven o suprimen el uso de ciertos sitios de
corte y empalme para dirigir la va de corte y empalme
seleccionada. Estas vas de corte y empalme alterna-
tivas son muy importantes ya que permiten que las
clulas sinteticen una diversidad de protenas con fun-
cionalidades diferentes a partir del transcrito primario
de un gen.
1 2
Exn 3 Corte y
empalme
del RNA
1 3
Poli(A)
186 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

1 2 3

Exn 1 Exn 2 Exn 3

Corte y empalme
del RNA
Pre-mRNA 1 3

Figura G7-8. Vas alternativas para el corte y empalme del RNA. En el ejemplo
simple que se muestra, el transcrito puede ser cortado y empalmado por vas
alternas que conducen a dos mRNA con diferentes capacidades de codicacin, es
decir, los exones 1, 2 y 3 o slo los exones 1 y 3. En genes que contienen muchos
exones, puede existir un nmero sustancial de vas de corte y empalme alternativas,
las cuales son capaces de generar muchos mRNA posibles desde un solo gen.

Edicin del RNA glutamina (CAA) por un codn de terminacin (UAA). La

ste es el nombre que se le da a diversas reacciones por
medio de las cuales la secuencia de nucletidos de una
molcula de mRNA puede ser cambiada por mecanis-
mos diferentes al del corte y empalme del RNA. Dentro
del mRNA, pueden cambiarse nucletidos individuales
por otros nucletidos, eliminarlos por completo o inser-
tar nucletidos adicionales. El efecto de la edicin del
RNA es cambiar la capacidad de codificacin del mRNA
de manera que codifique un polipptido diferente del
que de manera original codifica el gen. Un ejemplo
de edicin del RNA en humanos es el del mRNA de la
apolipoprotena B. En el hgado, el mRNA no es edi-
tado y la protena producida despus de la traduccin
se denomina apolipoprotena B100 (figura G7-9a). En
clulas del intestino delgado, la edicin del RNA (figura
G7-9b) causa la conversin de un residuo C en el mRNA
por uno U y, si se hace esto, cambia un codn para la
traduccin subsecuente del mRNA editado produce
la apolipoprotena B48, mucho ms corta (48% del
tamao de la apolipoprotena B100). Esto no representa
un cambio trivial; la apolipoprotena B48 carece de un
dominio protenico necesario para la unin al recep-
tor, que la apolipoprotena B100 s posee, y por lo tanto
las actividades funcionales de las dos protenas son
diferentes. Se conocen muchos otros casos de edicin
del RNA. Los mRNA mitocondriales del tripanosoma, por
ejemplo, sufren edicin extensa del RNA, la cual resulta
en que ms de la mitad de las uridinas en el mRNA final
se adquieren a travs del proceso de edicin.
Silenciamiento del mRNA
Los micro-RNA (miRNA) son una clase de RNA que slo se
encuentra en eucariotas y que apenas tienen alrededor
de 21 nt de largo. El primer miRNA se descubri en

a) b)
mRNA de la apolipoprotena B mRNA de la apolipoprotena B
5 CAA 39 5 CAA 3
mRNA sin editar
Edicin por
NH4+ desaminacin
del RNA

Traduccin 5 UAA 3
mRNA editado

Traduccin

1 4536 1 2152
Apo B-100 Apo B-48

Ensamble de Unin al Ensamble de

lipoprotenas receptor de LDL lipoprotenas

Figura G7-9. Edicin del RNA: a) el mRNA de la apolipoprotena B sin editar es

traducido para producir apoB-100, un polipptido de 4 536 aminocidos de largo
con dominios estructurales para el ensamble de lipoprotenas y funciones de unin
del receptor; b) la traduccin del mRNA editado produce la apoB-48 ms corta,
que carece del dominio de unin del receptor.
 G7PROCESAMIENTO DEL PRE-MRNA EUCARIOTA 187

1993, pero desde el ao 2000 se han identificado mu- Sntesis de miRNA

chos ms (se han reportado ms de 5 000) y se los ha
reconocido como una nueva clase importante de mo-
lculas reguladoras del RNA. Se ha predicho que en los
mamferos los miRNA regulan hasta 50% de todos los ge-
nes que codifican protenas. stos desempean su
funcin al inhibir la traduccin del mRNA objetivo, es
decir, causan el silenciamiento del mRNA.
La polimerasa II de RNA transcribe la mayora de los
miRNA con unos pocos ms que son transcritos por la
polimerasa III de RNA. La polimerasa II de RNA (figura
G7-10) sintetiza el miRNA a travs de dos vas. En la
primera, un gen de RNA con su propio promotor es
transcrito para producir un largo transcrito prima-
rio denominado primiRNA, que contiene hasta seis

a) RNA Pol II b) RNA Pol II

Gen de miRNA Gen codicador de protena

Transcripcin Transcripcin

Drosha y
Pasha en el
complejo microprocesador

Casquete 5 AAAAA Casquete 5 Exn 1 Exn 2 AAAAA

Pri-miRNA

Desramicacin Corte y empalme

5cap Exn 1 Exn 2 AAAAA

mRNA maduro

Pre-miRNA

Membrana Exportacin al
nuclear citoplasma

Pre-miRNA

Dicer

miRNA /miRNA* doble

Degradacin de la cadena intil

miRISC
(miRNP complejo)

Figura G7-10. Sntesis de los miRNA: a) la polimerasa II de RNA transcribe un gen de miRNA para producir un
primRNA. Luego, ste es escindido por el complejo microprocesador para formar pre-miRNA, seguido por su
exportacin al citoplasma y la separacin por Dicer para producir un miRNA/miRNA* doble. b) Transcripcin
de un gen que codica protenas, un intrn del cual contiene una secuencia miRNA. El corte y empalme
genera el mRNA maduro y libera el intrn, el cual produce primiRNA, que es procesado como en a) para dar
un miRNA/miRNA* doble. Finalmente, se forma un complejo miRISC que contiene la cadena de RNA simple y
protenas asociadas.
188 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA
secuencias de miRNA. El pre-miRNA sufre reacciones
de procesamiento que agregan una caperuza 5 y una
cola poli(A)3. Dentro de esta molcula, las secuencias
de miRNA forman tpicas asas internas en horquilla,
cada una de las cuales contiene alrededor de 70 nt.
Una protena denominada Pasha (tambin conocida
como DGCR8) se une a una protena llamada Drosha
para formar un complejo microprocesador que reor-
ganiza estos RNA con pliegues invertidos en el ncleo.
La Drosha corta las regiones en horquilla individuales
del primiRNA para formar precursores de miRNA deno-
minados pre-miRNA (figura G7-10). Los pre-miRNA se
exportan al citoplasma, donde una ribonucleasa deno-
minada Dicer corta las asas y recorta los extremos pa-
ra dejar una molcula de miRNA de doble cadena de
alrededor de 21 nt de largo. Las dos cadenas no pre-
sentan de manera habitual un apareamiento de bases
perfecto (es decir, en algunas regiones, las dos secuen-
cias no son complementarias) y de esa manera se tiene
un RNA doble imperfecto. Una cadena del RNA doble
es miRNA y la otra se llama miRNA* (tambin llamada
cadena intil).
La segunda va para la sntesis de miRNA depende del
hecho de que, aunque resulte increble, algunos miRNA
son codificados por secuencias que residen en los intro-
nes de los genes que codifican protenas (figura G7-10)
conocidos como mirtrones. El asa del intrn elimi-
nado por corte y empalme externo es removida por una
UTR 5
Casquete 5 Regin codicadora
Figura G7-11. Silenciamiento del mRNA. El complejo miRISC se une de manera
habitual a la regin no traducida 3 (3UTR) del mRNA objetivo mediante la
formacin de pares de bases entre el miRNA y una secuencia complementaria en
el mRNA. El apareamiento de bases puede ser perfectamente armnico o, como
se muestra aqu, puede contener una o ms regiones donde las dos secuencias
dieren y no se forman pares de bases.
enzima que degrada las ramificaciones y que libera el
pre-miRNA.
Mecanismo de accin del miRNA
Un miRNA maduro existe como un complejo de miRNP
(microrribonucleoprotena), que slo contiene la cade-
na de miRNA del RNA doble; el miRNA* (intil) es
degradado. El complejo miRNP tambin contiene varias
protenas como la Argonauta que son importantes para
la funcin del miRNP. Debido a que la funcin del com-
plejo miRNP es inhibir la traduccin de los mRNA, con
frecuencia se lo denomina miRISC (complejo silencia-
dor inducido por el miRNA).
El miRNA del miRISC es complementario de una secuen-
cia en uno o ms mRNA. En los animales (figura G7-11),
la mayor parte del miRISC se une a secuencias de la
regin no traducida 3 (UTR 3 ; seccin G5); en efecto,
mltiples miRNA pueden unirse a diferentes sitios de
esta regin de una molcula de mRNA. Tambin se ha
reportado que algunos miRNA se unen a regiones codi-
ficantes del mRNA o a secuencias de la UTR 5 (seccin
G5). La unin del miRISC al mRNA determina la inhibi-
cin de la traduccin, es decir, resulta en el silencia-
miento del mRNA. El mecanismo exacto permanece
oscuro, pero en algunos casos incluye la separacin del
mRNA en la regin de las bases pareadas, y en otros
casos en una desadenilacin, es decir, en la remocin
de los residuos A de la cola poli(A).
miRISC con
bases pareadas, con el miRNA
en las secuencias
complementarias en 3UTR
AAAAA
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G8Transcripcin y procesamiento
del RNA ribosmico
Notas clave
Ribosomas Un ribosoma procariota de 70S abarca dos subunidades (50S y 30S). La subu-
nidad de 50S forma un complejo de rRNA de 23S y 5S y 34 polipptidos, mien-
tras que la subunidad de 30S contiene un rRNA de 16S y 21 polipptidos. Un
ribosoma eucariota de 80S abarca dos subunidades (60S y 40S). La subunidad
de 60S tiene rRNA de 28S, 5.8S y 5S formando un complejo con alrededor de
49 polipptidos, mientras que la subunidad de 40S contiene un rRNA de 18S y
cerca de 33 polipptidos. La estructura tridimensional de los ribosomas bacte-
rianos muestra que depende de los rRNA que se pliegan y forman pares de bases
con los otros para formar la estructura total del ribosoma, con las protenas que
se localizan en la periferia. De manera adicional, los sitios A, P y E, e incluso el
sitio cataltico para la formacin de enlaces peptdicos, estn formados por rRNA,
el cual por lo tanto tiene una funcin cataltica as como una funcin estructural.
Transcripcin y procesa- E. coli tiene siete unidades de transcripcin de rRNA, cada una con una copia
miento del rRNA de los genes del rRNA de 23S, 16S y 5S, as como uno a cuatro genes tRNA. La
transcripcin produce un transcrito de pre-rRNA de 30S. ste se pliega para for-
mar estructuras tallo-asa, se une a protenas ribosmicas y varios nucletidos
son metilados. El transcrito modificado de pre-rRNA es entonces escindido en
sitios especficos por la RN-asa III y los extremos son recortados por las ribo-
nucleasas M5, M6 y M23 para liberar los rRNA maduros.
Sntesis del rRNA Los genes de rRNA de 28S, 18S y 5.8S estn presentes como copias mltiples
eucariota de 28S, 18S agrupadas juntas como repeticiones en tndem. Estas unidades de transcrip-
y 5.8S cin de rRNA son transcritas en el nucleolo por la polimerasa I de RNA. El pro-
motor contiene un elemento central que se extiende hacia ambos lados del sitio
de inicio de la transcripcin y un elemento de control corriente arriba (UCE) de
alrededor de 50 a 80 bp de tamao localizado alrededor de 100 bp corrien-
te arriba. Cuatro complejos protenicos, uno de los cuales contiene la protena
de unin TATA (TBP) como un componente, interactan entre s y con la polime-
rasa I de RNA para formar un complejo de iniciacin de la transcripcin unido
a los elementos promotores. La transcripcin produce un pre-rRNA de 45S, el
cual tiene espaciadores transcritos externos (ETS) en los extremos 5 y 3 y espa-
ciadores transcritos internos (ITS) que separan en forma interna las secuencias
del rRNA. Los pre-rRNA se pliegan para formar una estructura secundaria defi-
nida con tallos-asas, protenas ribosmicas unidas a secuencias seleccionadas
y se producen mltiples reacciones de metilacin e isomerizacin (de uridina
a seudouridina) en sitios especficos, guiadas por la interaccin del pre-rRNA
con el snoRNA (como snoRNP). En ese momento, se escinde la molcula de
pre-rRNA de 45S, y libera precursores de rRNA de 32S y 20S que se procesan
de manera adicional para generar rRNA maduros de 28S, 18S y 5.8S.
190 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Ribosimas En las Tetrahymena, la molcula de pre-rRNA contiene un intrn que se remueve

Sntesis de rRNA euca-
riota de 5S
Temas relacionados
por autocorte y empalme (en presencia de guanosina, GMP, GDP o GTP), sin nece-
sidad de incluir alguna protena. sta fue la primera ribozima descubierta, pero
desde entonces se han reportado varias ms.
Las clulas eucariotas contienen mltiples copias del gen de rRNA de 5S. A dife-
rencia de otros genes de rRNA eucariotas, los genes de rRNA de 5S son trans-
critos por la polimerasa III de RNA. Dos elementos de control, una caja A y una
caja C, se encuentran corriente abajo del sitio de inicio de la transcripcin.
La caja C se une al TFIIIA, el cual entonces recluta al TFIIIC. A continuacin, el
TFIIIB se une e interacta con la polimerasa III de RNA para formar el complejo de
iniciacin de la transcripcin. La transcripcin produce un rRNA maduro de 5S
que no requiere procesamiento.
(F1) Introduccin al DNA (G6) Regulacin de la transcripcin de la
(G1) Introduccin al RNA polimerasa II de RNA
(G2) Transcripcin en procariotas (G7) Procesamiento del pre-mRNA euca-
(G3) Operones riota
(G4) Transcripcin en eucariotas: (G9) Transcripcin y procesamiento del
descripcin RNA de transferencia
(G5) Transcripcin de genes que
codifican protenas en eucariotas

Ribosomas polipptidos (figura G8-1). En los eucariotas, los ribo-

Cada ribosoma consiste en dos subunidades, una subu-
nidad pequea y una grande, cada una de las cuales es un
complejo de mltiples componentes de RNA ribosmico
(rRNA) y protenas ribosmicas (figura G8-1). Una forma
de distinguir entre partculas como ribosomas y subu-
nidades ribosmicas es colocar la muestra en un tubo
dentro de un rotor centrfugo y hacerla girar a gran velo-
cidad. Esto provoca que las partculas sedimenten en el
fondo del tubo. Las partculas que difieren en masa,
forma y densidad sedimentan a diferentes velocidades
(velocidades de sedimentacin). Por eso, una partcula
con una masa que duplica a la de otra siempre sedi-
mentar ms rpido en tanto ambas partculas tengan
la misma forma y densidad. La velocidad de sedimen-
tacin de una partcula dada es tambin directamente
proporcional a las fuerzas gravitacionales (el campo
centrfugo) que experimentan durante la centrifuga-
cin, la cual puede incrementarse simplemente al hacer
girar el rotor a una velocidad ms alta. Sin embargo, es
posible definir un coeficiente de sedimentacin que
depende exclusivamente del tamao, forma y densi-
dad de la partcula y que es independiente del campo
centrfugo. Los coeficientes de sedimentacin se miden
de manera habitual en unidades Svedberg (S). Un ribo-
soma procariota tiene un coeficiente de sedimentacin
de 70S, mientras que las subunidades grandes y peque-
as tienen coeficientes de sedimentacin de 50S y 30S,
respectivamente (ntese que los valores S no son adicio-
nables). La subunidad de 50S contiene dos rRNA (23S y
5S) que forman complejos con 34 polipptidos, en tanto
que la subunidad de 30S contiene un rRNA de 16S y 21
somas son ms grandes y ms complejos; el monmero
de ribosoma es de 80S y consiste en las subunidades de
60S y 40S. La subunidad de 60S contiene tres rRNA (28S,
5.8S y 5S) y alrededor de 49 polipptidos, en tanto que
la subunidad de 40S tiene un rRNA de 18S y cerca de 33
polipptidos (figura G8-1). Pese a ello, no obstante esta
complejidad extra, la estructura y funcin generales de
los ribosomas eucariotas son muy similares a las de las
bacterias. En cada caso, alrededor de dos terceras partes
de la estructura es de rRNA y un tercio es de protenas.
Una amplia gama de estudios ha construido un cua-
dro detallado de la estructura fina de los ribosomas, y
mapeado la localizacin de varios RNA y componentes
protenicos as como sus interacciones. La forma gene-
ral de un ribosoma de 70S, obtenida a travs de estu-
dios de microscopia electrnica, se muestra en la figura
G8-2. La estructura tridimensional de las subunida-
des ribosmicas bacterianas, determinada hace pocos
aos, muestra que los diferentes rRNA estn plegados
en forma estrecha y forman pares de bases extensos con
los otros para constituir el centro de las subunidades
ribosmicas, con las protenas restringidas en la super-
ficie y cerrando brechas entre los pliegues de RNA. Los
rRNA son los principales responsables de la estructura
general del ribosoma procariota y tambin forman los
tres principales sitios de unin (los sitios A, P y E) que
intervienen en la sntesis de las protenas (seccin H2).
Adems, el rRNA de 23S, ms que una protena, forma el
sitio cataltico donde se construyen los enlaces peptdi-
cos (seccin H2). Por lo tanto, la sntesis de las protenas
incluye rRNA que actan como ribozimas.
 G8TRANSCRIPCIN Y PROCESAMIENTO DEL RNA RIBOSMICO 191

Procariotas

rRNA de 23S rRNA de 5S

34 protenas
Subunidad de
50S

Ribosoma de
70S rRNA de 16S

Subunidad de 21 protenas
30S

Eucariotas

rRNA de 28S rRNA de 5S rRNA de 5.8S

~49 protenas
Subunidad de
60S

Ribosoma de
80S rRNA de 18S

Subunidad de ~33 protenas

40S

Figura G8-1. Composicin de los ribosomas en las clulas procariotas y eucariotas.

Transcripcin y procesamiento del rRNA
procariota
En E. coli hay siete unidades de transcripcin de rRNA
dispersas a travs del genoma, cada una de las cuales
contiene una copia de los genes de rRNA de 23S, 16S y
5S y una a cuatro copias de varios genes de tRNA (figura
G8-3). Este ensamblado de genes es transcrito por la
polimerasa de RNA procariota para producir un trans-
crito de pre-rRNA de 30S (cerca de 6 000 nt de tamao).
Este ordenamiento asegura que cantidades estequiom-
tricas de varios rRNA sean sintetizadas por el ensamble
del ribosoma. Despus de la transcripcin, la molcula
de pre-rRNA de 30S forma regiones de bases pareadas
hacia dentro para dar origen a una serie de estructuras
tallo-asa y protenas ribosmicas unidas para formar un
complejo de ribonucleoprotenas (RNP). Varios nucle-
tidos de la molcula de pre-rRNA plegada son enton-
ces metilados, en el componente ribosa, para lo cual se
sirven de la S-adenosilmetionina como el donador de
metilos. A continuacin, la RN-asa III escinde la mol-
cula de pre-rRNA en sitios especficos para liberar los
precursores de los rRNA de 23S, 16S y 5S.
Los precursores son entonces recortados en sus ex-
tremos 5 y 3 por las ribonucleasas M5, M16 y M23 (las
cuales actan sobre los precursores de rRNA 5S, 16S
y 23S, respectivamente) para generar los rRNA ma-
duros.
Sntesis de los rRNA de 28S, 18S y 5.8S
eucariotas
En eucariotas, los genes para el rRNA de 28S, 18S y 5.8S
estn agrupados de manera tpica en forma estrecha
y repetidos en tndem, en los que existe una copia de
cada uno de los genes de 18S, 5.8S y 28S, seguidos por
un espaciador de DNA no transcrito, tras el cual hay otro
grupo de genes de 18S, 5.8S y 28S, etc. (figura G8-4a). En
los seres humanos hay cerca de 200 copias de esta unidad
de transcripcin de rRNA ordenada bajo la forma de
cinco grupos de alrededor de 40 copias en cromosomas
separados. Estas unidades de transcripcin de rRNA
son transcritas por la polimerasa I de RNA (RNA Pol I) en
una regin del ncleo conocida como nucleolo (seccin
A2). El nucleolo contiene asas de DNA que se extienden
desde cada uno de los grupos de genes de rRNA en
192 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Subunidad de
50S

Subunidad de
30S

Figura G8-2. El ribosoma procariota de 70S.

los diferentes cromosomas y por tanto cada grupo se
denomina organizador nucleolar.
El promotor de rRNA consiste en un elemento central,
el cual se dispersa en el sitio de inicio de la transcripcin
(designado como posicin +1) y est localizado entre los
residuos 45 a +20, adems de un elemento de control
corriente arriba (UCE) de alrededor de 50 a 80 bp de
tamao y que se localiza cerca de 100 bp corriente arriba
(figura G8-4b). Un factor de transcripcin denominado
factor de unin corriente arriba (UBF) se une al UCE as
como a la regin vecina y se superpone con el elemento
central.
Como hecho de inters, la protena de unin a la caja
TATA (TBP; seccin G5) tambin se une al promotor del
rRNA (de hecho, el TBP se requiere para la iniciacin de
las tres polimerasas de RNA eucariotas).
En total, cuatro complejos protenicos interactan con
la polimerasa I de RNA para iniciar la transcripcin del
gen ribosmico. El primer complejo multiprotenico
(llamado SL1 en humanos) contiene TBP, el segundo
complejo es UBF y los otros dos complejos protenicos
incluidos son TIFIA y TIFIC. Los cuatro complejos interac-
tan entre s y con la polimerasa I de RNA para formar
un complejo de iniciacin de la transcripcin unido
al promotor del rRNA. Despus, la polimerasa I de RNA
transcribe la unidad de transcripcin completa de los
genes de 28S, 18S y 5.8S para sintetizar una molcula
grande de pre-rRNA (figura G8-4b).

Gen de Gen de Gen de Gen de Gen de

Promotor 16S rRNA tRNA 23S rRNA 5S rRNA tRNA
5 3 DNA

Transcripcin

5 3 Pre-rRNA (30S)

Procesamiento por la RNase III

Precursor rRNAs

Recorte por las RN-asas M5, M16, M23

rRNA maduro

rRNA rRNA de rRNA de

de16S 23S 5S

Figura G8-3. Transcripcin y procesamiento del rRNA procariota.

 G8TRANSCRIPCIN Y PROCESAMIENTO DEL RNA RIBOSMICO 193
a) DNA espaciador sin transcribir

5 3
Disposicin en tndem
n

Unidad de transcripcin nica

5 3
18S 5.8S 28S

b)
Promotor
Gen de Gen de 5.8S Gen de 28S
18S rRNA rRNA rRNA
5 3 DNA

UCE Centro

Transcripcin (RNA Pol I)

UBF, SL1
TIFIA, TIFIC
RNA Pol I
ETS ITS ITS ETS
5 3 Pre-rRNA

Procesamiento del RNA

(divisin y recorte)

rRNA maduro
rRNA de 18S rRNA de 5.8S rRNA de 28S

Figura G8-4. a) Unidades de transcripcin del rRNA; b) transcripcin de una

unidad de transcripcin nica por la polimerasa I de RNA y procesamiento
del pre-rRNA.

En los seres humanos, el producto de la transcripcin
es un pre-rRNA de 45S, el cual tiene espaciadores
de transcritos externos que no son rRNA (ETS) en los
extremos 5 y 3 y espaciadores de transcritos internos
que no son rRNA (ITS) que separan internamente las
secuencias de rRNA (figura G8-4b). Esta molcula de
45S se pliega hasta formar una estructura secundaria
definida con tallos-asas, las protenas ribosmicas se
unen a secuencias seleccionadas, se produce la meti-
lacin del constituyente ribosa (en ms de 100 sitios de
nucletidos) y alrededor de 95 residuos de uridina son
modificados a seudouridina (), un proceso de isome-
rizacin denominado seudouridilacin. La molcula de
pre-rRNA de 45S es dividida en ese momento, primero
en los ETS y luego en los ITS, para liberar los rRNA pre-
cursores, los cuales son divididos de manera adicional
y recortados para liberar los RNA maduros de 28S, 18S y
5.8S (figura G8-4b).
En los eucariotas, la seleccin de los sitios del pre-rRNA
que sern metilados depende de los RNA pequeos (70
a 100 nt de longitud) encontrados en el nucleolo y lla-
mados RNA nucleolares pequeos (snoRNA), que exis-
ten en complejos de ribonucleoprotenas llamados
snoRNP. Los snoRNA contienen largas regiones (10 a
21 nt) que son complementarias de regiones especficas
de la molcula de pre-rRNA con las que forman pares
de bases y luego guan dnde se debe producir la meti-
lacin de residuos ribosmicos especficos (metilacin
2O) y la isomerizacin de la uridina a seudouridina.
Hay dos familias diferentes de snoRNA llamadas snoRNA
caja C/D y snoRNA caja H/ACA antisentido. El nombra-
miento de estos snoRNA se basa en las secuencias con-
servadas que contienen; los snoRNA caja C/D contienen
dos secuencias conservadas pequeas, C (UCAUGA) y D
(CUGA), y de modo similar los snoRNA caja H/ACA con-
tienen otras secuencias conservadas denominadas caja
H y caja ACA. En general, las snoRNP caja C/D dirigen la
metilacin y las snoRNP caja H/ACA dirigen la seudou-
ridilacin. Cuando la snoRNP se une al rRNA, se cree
que los componentes protenicos de la snoRNP llevan a
cabo la modificacin qumica requerida.
Ribozimas
En cuando menos un eucariota, Tetrahymena, la mol-
cula de pre-rRNA contiene un intrn. La remocin
del intrn durante el procesamiento del pre-rRNA no
requiere la asistencia de ninguna protena! En su lugar,
en presencia de guanosina, GMP, GDP o GTP, el intrn se
escinde a s mismo, un fenmeno conocido como auto-
corte y empalme. sta fue la primera demostracin de
las ribozimas, es decir, de molculas de RNA cataltico
194 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

que catalizan reacciones especficas. El autocorte y
empalme de los intrones tambin se ha descubierto en
algunos mRNA eucariotas e incluso la peptidiltransfe-
rasa, una enzima cuya actividad es clave en la sntesis
de las protenas, es ahora conocida como una ribozima
(seccin H2).
Sntesis de rRNA de 5S eucariota
En eucariotas, el gen del rRNA de 5S tambin est pre-
sente en mltiples copias (2 000 copias en las clulas
humanas, todos agrupados juntos en un sitio cromos-
mico). A diferencia de otros genes del rRNA eucariotas,
los genes del rRNA de 5S son transcritos por la polime-
rasa III de RNA (RNA Pol III), la misma enzima que trans-
cribe los genes del tRNA.
Los promotores de la polimerasa III de RNA varan en
estructura segn el gen que ser transcrito. Los pro-
motores de los genes del tRNA contienen elementos de
control llamados la caja A y la caja B, que se localizan
corriente abajo del sitio de inicio de la transcripcin
(seccin G9). El promotor de los genes del rRNA de 5S
tambin tienen dos elementos de control que se locali-
zan corriente abajo del sitio de inicio de la transcripcin,
pero stos son una caja A y una caja C (figura G8-5). La
caja C une el factor de transcripcin IIIA (TFIIIA), el cual
a su vez interacta con el TFIIIC para causar su unin,
un proceso que probablemente tambin incluye el reco-
nocimiento de la caja A. Cuando el TFIIIC se ha unido, el
TFIIIB se une e interacta con la polimerasa III de RNA, por
lo cual su unin contribuye a formar el complejo de ini-
ciacin de la transcripcin. Una de las tres subunidades
del TFIIIB es TBP (seccin G5), el factor de transcripcin
que se requiere para la transcripcin de las tres polime-
rasas de RNA eucariotas. Despus de la transcripcin, el
transcrito del rRNA de 5S no requiere procesamiento.
ste migra hacia el nucleolo y es reclutado durante el
ensamble del ribosoma.

Gen de rRNA de 5S

Caja A Caja C

TFIIIA

TFIIIC

TFIIIB

RNA Pol III

RNA Pol III

TFIIIB TFIIIC TFIIIA

Transcripcin

Figura G8-5. Iniciacin de la transcripcin de un gen de rRNA de 5S por la

polimerasa III de RNA.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G9Transcripcin y procesamiento
del RNA de transferencia
Notas clave
Estructura del tRNA Cada tRNA tiene una estructura secundaria en forma de trbol que contiene
un brazo anticodn, un brazo D (o DHU), un brazo T o TC, y un tallo acep-
tor de aminocidos en el cual los aminocidos relevantes establecen enlaces
covalentes en el grupo 3-OH. Algunos tRNA tambin tienen un brazo variable
(u opcional). La estructura tridimensional es ms compleja debido a las inte-
racciones adicionales entre los nucletidos.
Transcripcin y proce- E. coli contiene grupos de hasta siete genes de tRNA separados por regiones
samiento del rRNA en espaciadoras, as como genes de tRNA dentro de las unidades de transcripcin
procariotas del RNA ribosmico. Despus de la transcripcin, el transcrito primario de RNA
se pliega en estructuras tallo-asa especficas y apenas entonces es procesado
por las ribonucleasas D, E, F y P en una serie de reacciones ordenadas para
liberar las molculas individuales de tRNA.
Transcripcin y proce- En eucariotas, los genes del tRNA estn presentes en mltiples copias y son
samiento del rRNA en transcritos por la polimerasa III de RNA. Pueden transcribirse varios genes del
eucariotas tRNA para producir un pre-tRNA nico, que luego se procesa para que libere
los tRNA individuales. El promotor de tRNA incluye dos elementos de control
llamados la caja A y la caja B, que se localizan dentro del gen del tRNA en s y
por lo tanto corriente abajo del sitio de inicio de la transcripcin. El inicio de
la transcripcin requiere el factor de transcripcin IIIC (TFIIIC), el cual se une a
las cajas A y B, y el TFIIIB, que se une corriente arriba de la caja A. El transcrito
primario del tRNA se pliega en estructuras tallo-asa y no se remueve ninguna
secuencia que no sea tRNA por accin de las ribonucleasas. A diferencia de los
procariotas, en los eucariotas la secuencia CCA del extremo 3 del tRNA se aade
despus de las reacciones de recorte (por la nucleotidiltransferasa de tRNA). A
diferencia de los procariotas, las molculas de pre-tRNA de eucariotas tambin
pueden contener un intrn corto en el asa del brazo anticodn. El intrn es eli-
minado por reacciones de corte y empalme del tRNA, que incluyen la escisin
por la endonucleasa de ambos extremos del intrn y la ligadura de los extremos
cortados del tRNA.
Modicacin del tRNA Despus de la sntesis, los nucletidos de la molcula de tRNA pueden sufrir
modificacin para crear nucletidos inusuales como la 1-metilguanosina (m1G),
seudouridina (), dihidrouridina (D), inosina (I) y 4-tiouridina (S4U).
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G6) Regulacin de la transcripcin de la
(G1) Introduccin al RNA polimerasa II de RNA
(G2) Transcripcin en procariotas (G7) Procesamiento del pre-mRNA
(G3) Operones eucariota
(G4) Transcripcin en eucariotas: (G8) Transcripcin y procesamiento del
descripcin RNA ribosmico
(G5) Transcripcin de genes que
codifican protenas en eucariotas
196 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA
Estructura del tRNA
Las molculas del RNA de transferencia (tRNA) desempe-
an una funcin importante en la sntesis de protenas
(secciones H2 y H3). Cada tRNA adquiere enlaces cova-
lentes con un aminocido especfico, con el cual forma
aminoacil-tRNA, el cual reconoce el codn correspon-
diente en el mRNA y asegura que se aada el amino-
cido correcto a la cadena polipeptdica en crecimiento.
Los tRNA son pequeas molculas, de slo 74 a 95 nt
de longitud, las cuales forman estructuras secundarias
en forma de trbol caractersticas (figura G9-1A) por el
apareamiento interno de bases. Los tallo-asas de la hoja
de trbol se conocen como brazos:

El brazo anticodn contiene en sus asas los tres
nucletidos del anticodn, el cual formar pares
de bases con el codn complementario del mRNA
durante la traduccin.

El brazo D o DHU (con su asa D) contiene dihidroura-
cilo, una pirimidina inusual.

El brazo T o TC (con su asa T) contiene otra base
inusual, seudouracilo (que se denota con ) en la
secuencia TC.

Algunos tRNA tambin tienen un brazo variable
(brazo opcional), que tiene 3 a 21 nt de tamao.
La otra caracterstica notable es el tallo aceptor de ami-
nocidos. ste es aqul donde el aminocido se fija, en
el grupo 3-OH de la secuencia 3CCA.
La estructura tridimensional del tRNA (figura G9-1b) es
incluso ms compleja debido a las interacciones adicio-
nales entre las diversas unidades de la estructura secun-
daria.
a) 3OH
I
A
C
C Asa TC
Tallo aceptor
5 aceptor de
de aminocidos
Asa T
Asa D
Brazo
variable
Asa
anticodn
Anticodn
Figura G9-1. a) Estructura secundaria del tRNA en forma de trbol; b) estructura terciaria
del tRNA. Adaptado de Freifelder, D. (1986), Molecular Biology, 2a. ed., Jones and Bartlett.
Transcripcin y procesamiento del tRNA
en procariotas
Las unidades de transcripcin del rRNA en E. coli con-
tienen algunos genes del tRNA que son transcritos
y procesados en el momento de la transcripcin del
rRNA (seccin G8). Otros genes del tRNA se presentan
en grupos de hasta siete secuencias de tRNA separa-
das por regiones espaciadoras. Despus de la transcrip-
cin por la polimerasa de RNA procariota nica, el transcrito
primario de tRNA se pliega en estructuras caractersticas
tallo-asa (figura G9-2) y en ese momento es procesado en
una serie ordenada de escisiones por parte de las ribonu-
cleasas (RN-asas), las cuales liberan y recortan los tRNA
hasta sus longitudes finales. Las reacciones de divisin
y recorte en los extremos 5 y 3 de los tRNA precursores
incluyen a las RN-asas D, E, F y P. Las RN-asas E, F y P
son endonucleasas, o sea que cortan internamente el RNA,
en tanto que la RN-asa D es una exonucleasa, o sea que
recorta los extremos de las molculas de tRNA.
Transcripcin y procesamiento del tRNA
en eucariotas
En eucariotas, los genes del tRNA existen en mltiples
copias y son transcritos por la polimerasa III de RNA
(RNA Pol III). Como los procariotas, varios tRNA pue-
den ser transcritos al mismo tiempo para producir una
sola molcula de pre-tRNA, que luego se procesa para
liberar los diferentes tRNA. Los promotores de los genes
del tRNA eucariotas son inusuales por el hecho de que
los elementos de control transcripcional se localizan
corriente abajo (es decir, en el lado 3) del sitio de ini-
cio de la transcripcin (en la posicin +1). De hecho, se
localizan dentro del gen en s mismo. Se han identificado
b) Brazo TC
5
3
Tallo
aminocidos
Asa DHU
Brazo opcional
Brazo DHU
Brazo anticodn
Anticodn
Asa anticodn
 G9 TRANSCRIPCIN Y PROCESAMIENTO DEL RNA DE TRANSFERENCIA 197

Promotor Gen de tRNA Gen de tRNA

5 3 DNA

Transcripcin

5 3 Pre-tRNA

Plegamiento del RNA

Procesamiento del
RNA (escisin y
recorte por RN-asas)

tRNA tRNA

Figura G9-2. Transcripcin y procesamiento del tRNA en procariotas.

dos de tales elementos que se denominan caja A y caja B
(figura G9-3). La transcripcin de los genes del tRNA por
la polimerasa III de RNA requiere la presencia del factor
de transcripcin IIIC (TFIIIC) as como del TFIIIB. El TFIIIC se
une a las cajas A y B, mientras que el TFIIIB se une corriente
arriba de la caja A. El TFIIIB contiene tres subunidades, una
de las cuales es TBP, el polipptido requerido por las tres
polimerasas de RNA eucariotas.
Despus de la sntesis, la molcula de pre-tRNA se pliega
en estructuras tallo-asa caractersticas (figura G9-1) y la
secuencia que no es tRNA es separada de los extremos 5
y 3 por las ribonucleasas. En los procariotas, la secuen-
cia CCA del extremo 3 del tRNA (que es el sitio unin
de los aminocidos), es codificado por el gen del tRNA,
pero no sucede as en los eucariotas. En sustitucin, el
CCA es aadido al extremo 3 por la nucleotidiltransfe-
rasa de tRNA despus de las reacciones de recorte.

Gen de tRNA

Caja A Caja B

TFIIIC

TFIIIB

RNA Pol III

RNA Pol III

TFIIIB TFIIIC

Transcripcin

Figura G9-3. Iniciacin de la transcripcin de un gen de tRNA por la polimerasa III

de RNA.
198 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Otra diferencia entre procariotas y eucariotas es que las
molculas de pre-tRNA eucariotas contienen con fre-
cuencia un intrn corto en el asa del brazo del anticodn
(figura G9-4). Este intrn debe ser removido con el fin
de crear una molcula de tRNA funcional. Su remocin
se produce por divisin mediante una endonucleasa de
corte y empalme de tRNA en cada extremo del intrn
y luego la ligasa de tRNA une los extremos del tRNA.
Esta va de corte y empalme del tRNA por remocin de
intrones es totalmente diferente de la que participa en
la remocin de intrones de las molculas de pre-mRNA
en eucariotas (seccin G7) y debe haber evolucionado
de manera independiente.
Modicacin del tRNA
Las molculas de RNA de transferencia son notables por
contener nucletidos inusuales (figura G9-5), como la
1-metilguanosina (m1G), seudouridina (), dihidrou-
ridina (D), inosina (I) y 4-tiouridina (S4U). stas fueron
creadas por modificacin de la guanosina y la uridina
despus de la sntesis de tRNA. Por ejemplo, la inosina
se genera por la desaminacin de la guanosina.

OH 3

A
C
Secuencia 5 Secuencia 3 C
extra extra
5 Tallo aceptor de
3OH
5 p aminocidos

Recorte de los extremos 5 y 3 Asa T

Remocin del intrn Asa D

Brazo
variable

Asa
anticodn
Intrn
Anticodn

Pre-tRNA tRNA

Figura G9-4. Procesamiento de una molcula tpica de pre-tRNA eucariota.

S O O O

H C H H C H H C CH3 H C H
N C N N N C N C
H
H
C C C C C C C C
O N H O C H O N H O N H

Ribosa Ribosa Ribosa Ribosa

4-Tiouridina (S4U) Seudouridina () Ribotimidina ( T ) Dihidrouridina (D)

CH3
O O NH CH2 CH C
CH3
CH3 C H C C
N C N N C N N C N
C H C H C H
H C C C C C C
N N N H N N H N N

H Ribosa Ribosa Ribosa

1-Metilguanosina (m1G) Inosina (l) N6-isopenteniladenosina (i6A)

Figura G9-5. Algunos nuclesidos modicados encontrados en las molculas de tRNA.

SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

H1El cdigo gentico

Notas clave
El cdigo gentico es un El cdigo gentico es la regla que especifica en qu forma se traduce la secuencia
cdigo de tripletes de nucletidos de un mRNA en la secuencia de aminocidos de un polipptido.
La secuencia de nucletidos se lee como tripletes llamados codones. Los
codones UAG, UGA y UAA no especifican aminocidos y se denominan codones
de terminacin o codones de detencin. El AUG codifica la metionina y tambin
acta como un codn de iniciacin (comienzo).
Los codones son A medida que el ribosoma lee el mRNA, una molcula de tRNA especfica lleva
reconocidos por los el aminocido correcto de un codn al ribosoma, la cual se une al codn a
anticodones y por las travs de un apareamiento de bases entre codn y anticodn. Los aminocidos
molculas de tRNA se unen en forma covalente al extremo 3 del tRNA, con el que forman una
molcula de aminoacil-tRNA. El pareo de bases del codn con el anticodn se
produce en un ordenamiento antiparalelo. Por lo tanto, la molcula de tRNA
acta como un adaptador, ya que funge como un mediador entre la secuencia
de nucletidos del mRNA y la secuencia de aminocidos del polipptido que
se est sintetizando.
El cdigo gentico es La mayora de los aminocidos de las protenas es especificada por ms de
degenerado un codn (es decir, el cdigo gentico es degenerado). Con frecuencia, el
reconocimiento de tales codones ocurre a travs de diferentes tRNA (con los
anticodones correspondientes para dichos codones), que se unen con el mismo
aminocido (isoaceptacin de tRNA). Adems, los codones que especifican
el mismo aminocido (sinnimos) suelen diferir slo en la tercera base, la
posicin tambaleante, donde el apareamiento de bases con el anticodn
puede ser menos estricta que con las primeras dos posiciones del codn, lo
que permite que un tRNA reconozca ms de un codn.
Universalidad del cdigo El cdigo gentico no es universal pero es el mismo en la mayor parte de
gentico los organismos. Se encuentran excepciones en los genomas mitocondriales,
donde algunos codones especifican aminocidos diferentes a los que los genes
nucleares codifican de manera habitual. En las mitocondrias, el codn UGA no
especifica la terminacin de la traduccin sino que codifica al triptfano. De
manera similar, en ciertos protozoarios, UAA y UAG codifican cido glutmico en
lugar de actuar como codones de terminacin. La presencia de una secuencia
de insercin de selenocistena (elemento SECIS) en el mRNA tambin puede
determinar que un codn de UGA particular conduzca a la incorporacin de
selenocistena (Se-Cys) en lugar de actuar como un codn de detencin.
Marcos de lectura La secuencia del mRNA puede ser leda por el ribosoma en tres marcos de
lectura posibles. Por lo regular, un marco de lectura slo codifica para una
protena funcional ya que los otros dos marcos de lectura contienen mltiples
codones de terminacin. En algunos genomas de bacterifagos, se produce la
superposicin de genes, la cual usa diferentes marcos de lectura.
Marcos de lectura Un marco de lectura abierto (ORF) es un conjunto de codones que comienza
abiertos con ATG y termina con un codn de terminacin, TGA, TAA o TAG. Las regiones de
codificacin de los genes contienen ORF relativamente largos, a diferencia del
DNA que no codifica, donde los ORF son comparativamente cortos. La presencia
de un marco de lectura abierto largo en una secuencia de DNA puede indicar, por
lo tanto, la presencia de una regin de codificacin. El anlisis computarizado
del ORF puede usarse para deducir la secuencia de la protena codificada.
200 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

Temas relacionados (G1) Introduccin al RNA (H2) Traduccin en procariotas

(G8) Transcripcin y procesamiento
(H3) Traduccin en eucariotas
del RNA ribosmico
(G9) Transcripcin y procesamiento
del RNA de transferencia

El cdigo gentico es un cdigo se lee en grupos de tres nucletidos llamados codones,

de tripletes
Durante la traduccin, la secuencia de una molcula
de mRNA es leda desde su extremo 5 por los ribo-
somas, los cuales entonces sintetizan un polipptido
apropiado. Tanto en procariotas como en eucariotas,
la secuencia de DNA de un solo gen es colineal con la
secuencia de aminocidos del polipptido que codi-
fica. En otras palabras, la secuencia de nucletidos de
la cadena codificante del DNA, 5 a 3, especifica exacta-
mente en el mismo orden la secuencia de aminocidos
del polipptido codificado, del N terminal al C terminal.
La interrelacin entre la secuencia de nucletidos del
mRNA y la secuencia de aminocidos del polipptido
se denomina cdigo gentico. La secuencia del mRNA
donde cada codn especifica un aminocido particular
(figura H1-1). Sin embargo, tres codones particulares,
UAG, UGA y UAA, no codifican un aminocido. Siempre que
un ribosoma encuentra uno de estos codones, significa
que debe terminar la sntesis de la protena. Por con-
siguiente, estos tres codones se denominan codones
de terminacin o codones de detencin. El codn AUG
codifica la metionina. Aunque la metionina se encuen-
tra en posiciones internas en las cadenas polipeptdicas,
todos los polipptidos eucariotas comienzan con metio-
nina (seccin H3) y todos los polipptidos procariotas
comienzan con una metionina modificada (N-formil-
metionina; seccin H2). En consecuencia, el primer
codn AUG que el ribosoma lee en un mRNA se llama
codn de iniciacin o codn de comienzo.

Secuencia de codn

1a. base 2a. base 3a. base

(Extremo 5) (Extremo 3)
U C A G

Phe Ser Tyr Cys U

Phe Ser Tyr Cys C
U Leu Ser Detencin Detencin A
Leu Ser Detencin Trp G
Leu Pro His Arg U
Leu Pro His Arg C
C Leu Pro Gln Arg A
Leu Pro Gln Arg G
Ile Thr Asn Ser U
Ile Thr Asn Ser C
A Ile Thr Lys Arg A
Met Thr Lys Arg G
Val Ala Asp Gly U
Val Ala Asp Gly C
G Val Ala Glu Gly A
Val Ala Glu Gly G

Figura H1-1. El cdigo gentico.

 H1EL CDIGO GENTICO 201

Los codones son reconocidos por los
anticodones de las molculas de tRNA
Durante la traduccin, a medida que los ribosomas se
mueven a lo largo del mRNA, leen un codn por vez.
Una molcula de tRNA lleva al ribosoma el amino-
cido correcto que corresponde al codn. La molcula
de tRNA con su aminocido unido de manera covalente
se llama aminoacil-tRNA. Como ya se estudi (seccin
G9), cada molcula de tRNA tiene una estructura secun-
daria en forma de hoja de trbol. El aminocido se une
de manera covalente al residuo A de la secuencia CCA del
extremo 3 del tRNA (figura H1-2a).
La nomenclatura correcta es, por ejemplo, tRNAGly para
el tRNA que aceptar la glicina, mientras que el corres-
pondiente aminoacil-tRNA es Gly-tRNAGly, que es el
aminoacil-tRNA que se muestra en la figura H1-2a.
Cada codn de una molcula de mRNA que est leyendo
un ribosoma durante la traduccin se une al aminoa-
cil-tRNA correcto debido a que el codn es reconocido
por un triplete de bases llamado anticodn integrado
en una molcula especfica de tRNA (figura H1-2a).
De esta forma, el tRNA funciona como una molcula
adaptadora, ya que traduce la secuencia de nucletidos
del mRNA en una secuencia de polipptidos compuesta
por la secuencia correcta de aminocidos.
Cada base del codn se parea con la base complemen-
taria del anticodn. Ntese que la interaccin del co-
dn con el anticodn es un enlace de hidrgeno del
codn de la molcula de mRNA en una orientacin de
5 a 3 con el anticodn del tRNA en una orientacin
de 3 a 5 (figura H1-2b). Este ordenamiento antipara-
lelo significa que la primera base del codn se parea
con la tercera base del anticodn, las segundas bases
se corresponden mediante un enlace de hidrgeno y
la tercera base del codn establece un enlace de hidr-
geno con la primera base del anticodn.
El cdigo gentico es degenerado
Como el RNA est compuesto por cuatro tipos de nucle-
tidos, hay 43 = 64 codones posibles, que representan 64
tripletes de nucletidos posibles con diferentes secuen-
cias. Sin embargo, slo se encuentran de manera habi-
tual 20 aminocidos en las protenas (seccin B1), de
manera que, en la mayora de los casos, un solo amino-
cido es codificado por varios codones diferentes (figura

a) NH2 b) NH2
I Aminocido I Aminocido
CH2 CH2
I I
C=O C=O
I I
O O
I I
A A
C C
C C
3
3
5
5

Pareo de bases
39 C C U 59 codn-anticodn
UCC
59 39
GGA
Anticodn mRNA
Codn

Figura H1-2. a) Estructura de un aminoacil-tRNA, Gly-tRNAGly. b) Pareo de bases entre

codn y anticodn; en la molcula de mRNA (5 a 3), el codn est unido por enlaces
de hidrgeno que se establecen entre las bases pareadas complementarias con el
anticodn del tRNA en una orientacin 3 a 5.
202 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS
H1-1). Se dice, por lo tanto, que el cdigo gentico est
degenerado. En los hechos, slo la metionina y el trip-
tfano estn representados por un solo codn. Los dife-
rentes codones que especifican el mismo aminocido se
llaman sinnimos.
Como resultado de la degeneracin del cdigo gentico,
una mutacin que cambie un solo nucletido en el DNA
(mutacin puntual), y que por lo tanto cambie slo un
nucletido en el correspondiente mRNA, suele carecer
de efecto en la secuencia de aminocidos del polipp-
tido codificado.
De los 64 codones posibles con un cdigo de tripletes
(vase antes), hay tres codones de terminacin o deten-
cin, y los otros 61 codones se destinan a la codificacin
de aminocidos (los llamados codones con sentido).
Las bacterias tienen alrededor de 30 a 45 tRNA diferen-
tes y las clulas eucariotas tienen hasta 50 tRNA. Varios
de estos tRNA tienen anticodones distin-tos y por lo
tanto reconocen codones diferentes, pero se unen al
mismo aminocido; stos se conocen como tRNA de
isoaceptacin. Por ejemplo, existen cuatro tRNA de iso-
aceptacin para la arginina en E. coli y stos se indican
usando nmeros en superndices, por ejemplo, tRNAArg1,
tRNAArg2, etctera.
No obstante, no hay suficientes tRNA de isoaceptacin
para representar a todos los codones con sentido. Otro
aspecto es tambin importante en este punto. El aparea-
miento de la tercera base de un codn es menos estricto
que el de las primeras dos bases (es decir, hay algunos
pareos de bases tambaleantes), de manera que en
algunos casos un solo tRNA puede parear bases con ms
de un codn. Por ejemplo, el tRNALeu3 en E. coli tiene
el anticodn 3-GAG-5 y reconoce los codones 5-CUU-
3 y 5-CUC-3 (es decir, ya sea que est U o C como la
tercera base del codn puede formar el pareo de bases
con G, la primera base del anticodn). La tercera posi-
cin del codn es, por consiguiente, llamada la posicin
tambaleante.
Juntos, la existencia de tRNA de isoaceptacin y el pareo
tambaleante permiten a los 61 codones con sentido ser
ledos correctamente, es decir, E. coli tiene cuatro tRNA
isoaceptores de tRNAArg para la lectura de seis codones
CGN de arginina (donde N significa cualquiera de los cua-
tro posibles nucletidos) y AGA/G.
Universalidad del cdigo gentico
z Por muchos aos, se pens que el cdigo gentico era
universal, esto es, que todos los organismos vivos
usaban el mismo cdigo. Ahora se sabe que el cdigo
gentico es casi el mismo en todos los organismos,
pero que existen algunas diferencias.
z Las mitocondrias contienen DNA de doble cadena cir-
cular que codifica alrededor de 10 a 20 protenas. De
manera sorprendente, en los mRNA mitocondriales,
algunos codones tienen diferentes significados que
sus contrapartes del mRNA citoslico. A continua-
cin, se presentan unos pocos ejemplos (N denota
a cualquiera de los cuatro nucletidos A, G, C o U):
mitocondrias de los mamferos
AUA = Met no a Ile
UGA = Trp no a Detencin
AGA y AGG = Detencin no a Arg
mitocondrias de las levaduras (Saccharomyces cere-
visiae)
AUA = Met no a Ile
UGA = Trp no a Detencin
CUN = Thr no a Leu
z Tambin se sabe que algunos organismos unicelula-
res usan un cdigo gentico diferente. Por ejemplo:
algunos protozoarios UAA y UAG = Glu no a
ciliados Detencin
z En procariotas y eucariotas se producen algunas
otras variaciones porque diversas enzimas clave
contienen selenocistena (Se-Cys), en las cuales un
tomo de selenio reemplaza al tomo de azufre de
la cistena. Estas protenas se llaman selenoprotenas
(p. ej., las peroxidasas de glutatin, las reductasas de
glicina). No hay un codn que codifique slo Se-Cys.
En su lugar, el mRNA contiene una secuencia llamada
secuencia de insercin de selenocistena (elemento
SECIS), que determina que un codn UGA particular
incorpore Se-Cys en lugar de actuar como un codn
de detencin.
Marcos de lectura
Como la secuencia de una molcula de mRNA es
leda en grupos de tres nucletidos (codones) desde
el extremo 5, puede leerse en tres posibles marcos de
lectura, lo que depende de qu nucletido se use como
la primera base del primer codn (figura H1-3). Por lo
regular, slo un marco de lectura (marco de lectura 3 en
la figura H1-3) produce una protena funcional, dado
que los otros dos marcos de lectura incluyen varios
codones de terminacin (Detencin). In vivo, el ribo-
soma selecciona el marco de lectura correcto al recono-
cer el codn de iniciacin, AUG, al inicio de la secuencia
de codificacin.
De manera usual, una secuencia de bases codifica una
sola protena. Pese a ello, en algunos DNA de los bacte-
rifagos, se superponen numerosos genes, y cada uno
de los genes est en un marco de lectura diferente.
Esta organizacin de genes superpuestos sucede por lo
general cuando el tamao del genoma es ms pequeo
que el que puede albergar los genes necesarios para la
estructura y ensamble del fago usando slo un marco
de lectura.
 H1EL CDIGO GENTICO 203

5 3
U U A U G A G C G C U A A A U
Marco de lectura 1
Leu Detencin Ala Leu Asn

U U A U G A G C G C U A A A U
Marco de lectura 2
Tyr Glu Arg Detencin

U U A U G A G C G C U A A A U
Marco de lectura 3
Met Ser Ala Lys

Figura H1-3. Tres marcos de lectura potenciales

de cualquier secuencia de mRNA, dependiendo del
nucletido que se lea primero.

Marcos de lectura abiertos con frecuencia ORF comparativamente largos, mientras

En muchos casos en estos das, la protena codificada
por un gen particular se deduce por clonacin (seccin
I4) y despus por la secuenciacin del DNA correspon-
diente. A continuacin, se explora la secuencia del DNA
mediante un programa de computadora para identifi-
car los conjuntos de codones que comienzan con ATG y
terminan con TGA, TAA o TAG. Estos conjuntos de codones
se llaman marcos de lectura abiertos (ORF) e identifican
regiones de codificacin potenciales.
Debido a que los genes desarrollan importantes fun-
ciones celulares, la secuencia del DNA codificante (y de
importantes secuencias reguladoras) se conserv con
ms firmeza en la evolucin que los DNA no codifican-
tes. En particular, las mutaciones pueden conducir a la
creacin de codones de terminacin dentro de la regin
codificante y por lo tanto la terminacin prematura
durante la traduccin se selecciona por contraste. Esto
significa que las regiones de genes codificantes contienen
que en los DNA no codificantes los tripletes correspon-
dientes a los codones de terminacin no se seleccionan
por contraste y los ORF son comparativamente cortos. Por
consiguiente, cuando se analizan los ORF desplegados
por un particular DNA clonado, suele ser cierto que un
ORF largo tiene ms probabilidades de ser un DNA que
codifica, mientras que es probable que los ORF cortos
no lo sean. No obstante, se puede estar seguro de que
algunos exones pueden ser cortos y de esta manera algu-
nos ORF cortos pueden ser tambin de DNA codificante. El
anlisis por computadora puede detectar esto mediante
la deteccin de las secuencias conservadas en los lmi-
tes entre el exn y el intrn y la secuencia en el punto
de ramificacin de corte y empalme (seccin G7). Para
finalizar, al referirse al cdigo gentico, el anlisis por
computadora puede predecir la secuencia de protenas
codificada por cada ORF. Esto se denomina secuencia de
protenas deducida.
SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

H2Traduccin en procariotas
Notas clave
Descripcin Durante la traduccin, el mRNA es ledo en direccin 5 a 3 y las protenas se
sintetizan en una direccin N terminal a C terminal. La transcripcin se basa
en los aminoacil-tRNA que transportan a aminocidos especficos y reconocen
los codones correspondientes en el mRNA por el apareamiento de bases entre
el anticodn y el codn. La traduccin tiene lugar en tres fases: iniciacin,
elongacin y terminacin.
Sntesis de aminoacil- Cada molcula de tRNA tiene una estructura secundaria en forma de hoja
tRNA de trbol que consiste en tres tallos-asas, uno de los cuales es portador del
anticodn en su extremo. Los aminocidos se unen de manera covalente al
grupo 2-OH o al 3-OH en el extremo 3 por una aminoacilsintetasa clase I o
clase II, respectivamente, para formar aminoacil-tRNA. La reaccin, llamada
activacin del aminocido, sucede en dos pasos y requiere ATP para formar un
intermediario, el aminoaciladenilato.
Iniciacin de la sntesis Cada ribosoma procariota tiene tres sitios de unin del tRNA; un sitio A donde el
de protenas aminoacil-tRNA entrante se une, un sitio P donde est unido el tRNA enlazado a
la cadena polipeptdica en crecimiento, y el sitio E, donde el tRNA se une antes
de ser liberado del ribosoma. La traduccin en los procariotas comienza por la
formacin de un complejo de iniciacin de 30S entre la subunidad ribosmica
de 30S, mRNA, factores de iniciacin y fMet-tRNAfMet. La subunidad de 30S se
une a la secuencia de Shine-Dalgarno, la cual se encuentra a 5 del codn de
inicio AUG y es complementaria del rRNA de 16S de la subunidad ribosmica
pequea. Luego el ribosoma se mueve en direccin 3 a lo largo del mRNA hasta
que encuentra el codn AUG. La subunidad ribosmica de 50S se une entonces
al complejo de iniciacin de 30S para formar el complejo de iniciacin de 70S.
En este complejo, el anticodn del fMet-tRNAfMet parea sus bases con el codn
de iniciacin AUG (codn de inicio) en el sitio P.
Elongacin El ciclo de elongacin consta de tres pasos: unin de aminoacil-tRNA, formacin
del enlace peptdico y translocacin. En el primer paso, el aminoacil-tRNA
correspondiente al segundo codn se une al sitio A del ribosoma como un
complejo de aminoacil-tRNA/EF-Tu/GTP. Despus del correcto apareamiento
de bases entre el anticodn del tRNA y el codn del mRNA, el GTP se hidroliza y
se libera EF-Tu/GBP. El EF-Tu se regenera a travs del ciclo de intercambio EF-
Tu/EF-Ts. La peptidiltransferasa cataliza la formacin de enlaces peptdicos
entre el C terminal del residuo aminoacil en el sitio P y el grupo amino del
aminoacil-tRNA en el sitio A. En el paso final (translocacin), el EF-G/GTP se
une al ribosoma, el desacilado tRNA se mueve del sitio P al sitio E, el dipeptidil-
tRNA que est en el sitio A se mueve hacia el sitio P y el ribosoma se mueve
a lo largo del mRNA para colocar el siguiente codn en el sitio A. El GTP es
hidrolizado a GDP y fosfato inorgnico. Cuando el siguiente aminoacil-tRNA
se une al sitio A en la ronda de elongacin subsecuente, el tRNA desacilado se
libera del sitio E.
Terminacin La aparicin de un codn de terminacin (detencin) UAA o UAG en un sitio A
causa la liberacin del factor RF-1, que se une donde RF-2 reconoce UGA. El RF-3
ayuda a RF-1 y RF-2. Los factores liberados provocan que la peptidiltransferasa
transfiera el polipptido a una molcula de agua en lugar de hacerlo al
aminoacil-tRNA. El polipptido, el mRNA y el tRNA libre abandonan el
ribosoma, que se disocia en sus subunidades listo para comenzar una nueva
ronda de traduccin.

Temas relacionados (G1) Introduccin al RNA
(G2) Transcripcin en procariotas
(G3) Operones
(G4) Transcripcin en eucariotas:
descripcin
(G5) Transcripcin de genes que
codifican protenas en eucariotas
(G6) Regulacin de la transcripcin
por la polimerasa II de RNA
Descripcin
De manera habitual, los ribosomas existen en subuni-
dades separadas que se juntan para formar un ribosoma
cuando se unen a un mRNA cerca de su extremo 5. El
ribosoma lee la secuencia de nucletidos en la direc-
cin 5 a 3, tras lo cual sintetiza la correspondiente
protena a partir de los aminocidos en la direccin N
terminal (amino terminal) a C terminal (carboxilo ter-
minal). Los aminocidos que se utilizan estn unidos
de manera covalente a las molculas del tRNA (RNA de
transferencia) para formar aminoacil-tRNA. Cada ami-
noacil-tRNA transporta un triplete de bases llamado
anticodn. El ribosoma lee cada triplete de un codn
de mRNA por vez y una molcula de aminoacil-tRNA
con un anticodn que es complementario del codn se
une a ste mediante enlaces de hidrgeno. A continua-
cin se forma un enlace peptdico entre el aminocido
entrante y el extremo en crecimiento de la cadena de
polipptido.
En general, la sntesis de protenas (o traduccin) tiene
lugar en tres etapas: iniciacin, elongacin y termi-
nacin. Durante la iniciacin se forma el complejo
mRNA-ribosoma y el primer codn (siempre AUG) se une
al primer aminoacil-tRNA (llamado tRNA iniciador).
Durante la fase de elongacin, los otros codones se leen
en forma secuencial y el polipptido crece por la adicin
de aminocidos a su extremo C terminal. Este proceso
contina hasta que se llega a un codn de terminacin
(codn de detencin), el cual carece del aminoacil-tRNA
correspondiente con el cual parearse. En este punto,
la sntesis de protenas cesa (fase de terminacin) y el
polipptido concluido se libera del ribosoma. Por lo
regular, en cualquier momento, muchos ribosomas se
hallan traduciendo un mRNA de manera simultnea, lo
que forma una estructura denominada polirribosoma
o polisoma.
R R
O
+ +
H3 N C C 1 ATP H3N C C
2
O
H H
Aminoacil-adenilato
(aminoacil-AMP)
H2TRADUCCIN EN PROCARIOTAS 205
(G7) Procesamiento del pre-mRNA
en eucariotas
(G8) Transcripcin y procesamiento
del RNA ribosmico
(G9) Trascripcin y procesamiento
del RNA de transferencia
(H1) El cdigo gentico
(H3) Traduccin en eucariotas
Sntesis de aminoacil-tRNA
La sntesis de aminoacil-tRNA tiene importancia crucial
por dos razones. Primero, cada aminocido debe unirse
en forma covalente a una molcula de tRNA con el fin de
tomar parte en la sntesis de protenas, la cual depen-
de de la funcin adaptadora del tRNA para asegurar
que se incorporan los aminocidos correctos. Segundo,
el enlace covalente que se forma entre el aminocido y el
tRNA es un enlace de alta energa que permite que el ami-
nocido reaccione con el extremo final de la cadena po-
lipeptdica en crecimiento para formar un nuevo enlace
peptdico. Por esta razn, la sntesis de aminoacil-tRNA
tambin se refiere como una activacin de aminoci-
dos. Los aminocidos que no se unen al tRNA no pue-
den agregarse al polipptido en crecimiento.
La funcin de un aminoacil-tRNA es catalizada por una
enzima denominada sintetasa de aminoacil-tRNA.
Existe una sintetasa de aminoacil-tRNA exclusiva para
cada aminocido, por lo que hay 20 sintetasas en total.
La reaccin de sntesis se produce en dos pasos.
1. El primer paso es la reaccin de un aminocido y un
ATP para formar un aminoacil-adenilato (tambin
conocido como aminoacil-AMP) (vase la reaccin al
final de la pgina).
2. En el segundo paso, sin abandonar la enzima, el
grupo aminoacil del aminoacil-AMP se transfiere a la
adenosina terminal del extremo 3 de la molcula de
tRNA para formar aminoacil-tRNA:
Aminoacil-AMP + tRNA Aminoacil-tRNA + AMP
Esto sucede mediante la formacin de un enlace ster
entre el grupo -COOH del aminocido y el 2-OH o
3-OH de la ribosa de la adenosina. Si se usa el 2-OH
o el 3-OH depende del tipo de sintetasa de aminoacil-
tRNA que interviene en la reaccin; las sintetasas de
O O
O P O Ribosa Adenina + PPi
O
206 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS
aminoacil-tRNA clase I fijan el aminocido en el grupo
2-OH y las sintetasas de aminoacil-tRNA clase II usan
el grupo 3-OH.
La suma de estas dos reacciones es:
Aminocido + ATP + tRNA Aminoacil-tRNA +
AMP + PPi
La reaccin contina hasta completarse (es decir, la sn-
tesis de aminoacil-tRNA) por la hidrlisis subsecuente
del pirofosfato (PPi) a fosfato inorgnico (Pi):
PPi + H2O 2Pi
La reaccin general es como sigue:
Aminocido + ATP + tRNA + H2O Aminoacil-tRNA +
AMP + 2Pi
Iniciacin de la sntesis de protenas
Cada ribosoma procariota, se muestra de manera es-
quemtica en la figura H2-1 (vase la seccin G8 para
mayores detalles de la estructura del ribosoma), tiene
tres sitios de unin de los tRNA. El sitio de unin del
aminoacil-tRNA (o sitio A) es donde, durante la elon-
gacin, se une el aminoacil-tRNA entrante. El sitio de
unin del peptidil-tRNA (o sitio P) es donde se une el
tRNA enlazado a la cadena polipeptdica en crecimiento.
El sitio de salida (o sitio E) es el sitio de unin para el
tRNA despus de su papel en la traduccin y antes de su
liberacin del ribosoma.
Los tres sitios (A, P y E) estn formados por molculas
de rRNA del ribosoma (seccin G8) y unen las subuni-
dades ribosmicas grandes y pequeas; la interaccin
entre anticodn y codn se relaciona con la subunidad
pequea, en tanto que la parte aminoacil del tRNA se
vincula con la subunidad grande.
Ntese que el sitio E es nico para los ribosomas pro-
cariotas. Los ribosomas eucariotas no tienen un sitio de
salida; el tRNA se limita a disociarse del ribosoma des-
pus de ser usado.
El primer codn traducido en todos los mRNA es AUG,
el cual codifica la metionina. El AUG se llama codn de
E P A
Figura H2-1. Esquema de un ribosoma procariota
de 70S en el que se muestra el sitio peptidil-tRNA
(sitio P), el sitio aminoacil-tRNA (sitio A) y el sitio de
salida (sitio E).
inicio o codn de iniciacin. De manera natural, tam-
bin pueden presentarse otros codones AUG en la parte
interna del mRNA, donde codifican residuos de metio-
nina internos de las protenas. Participan dos tRNA dife-
rentes en estos dos tipos de codones AUG; el tRNAfMet se
usa para el codn de iniciacin y se llama tRNA inicia-
dor, mientras que el tRNAmMet se utiliza para los codones
AUG internos. En procariotas, el primer aminocido de
una nueva protena es N-formilmetionina (abreviado,
fMet). Por consiguiente, el aminoacil-tRNA usado en la
iniciacin es fMet-tRNAfMet, el cual se abrevia fMet-tRNAf.
El uso de N-formilmetionina, que tiene un grupo for-
milo (COH) fijo a su grupo amino, evita que el grupo
amino participe en la formacin de un enlace peptdico.
De esta manera, slo el grupo carboxilo de la N-formil-
metionina puede formar un enlace peptdico, y esto ase-
gura que la sntesis polipeptdica ocurra en la direccin
N a C (seccin H1).
Resulta esencial que se use el AUG correcto como el
codn de iniciacin, dado que ste coloca el marco de
lectura correcto para la traduccin (seccin H1). Una
corta secuencia rica en purinas (5-AGGAGGU-3), lla-
mada secuencia de Shine-Delgarno, se ubica en 5 del
codn de iniciacin AUG (figura H2-2) y es complemen-
taria con parte del rRNA de 16S en la subunidad ribo-
smica pequea, denominada secuencia anti-SD. La
subunidad ribosmica de 30S se une a la secuencia de
Shine-Delgarno y migra en direccin 3 a lo largo del
mRNA hasta que encuentra el codn de inicio AUG. Por
lo tanto, la secuencia de Shine-Delgarno libera la subu-
nidad ribosmica hacia el AUG correcto para iniciar la
traduccin.
La iniciacin de la sntesis de protenas requiere prote-
nas llamadas factores de iniciacin (IF). En procario-
tas, son esenciales tres factores de iniciacin (IF-1, IF-2
e IF-3). Debido a la complejidad del proceso, el orden
exacto de unin de los componentes, y en particular de
IF-1, todava no se conoce. Un modelo actual se muestra
en la figura H2-3 y se describe ms adelante.
z La iniciacin comienza con la unin de IF-1 e IF-3 a la
subunidad ribosmica pequea (de 30S). La unin de
IF-3 detiene la unin de la subunidad de 30S a la subu-
nidad de 50S en ausencia de mRNA y de fMet-tRNAfMet,
lo cual podra resultar en un ribosoma afuncional.
z En ese momento, la subunidad pequea se une al
mRNA a travs de la secuencia de Shine-Delgarno y
se mueve 3 a lo largo del mRNA hasta que localiza al
codn de iniciacin AUG.
z Luego se une el iniciador de tRNA cargado con
N-formilmetionina en un complejo con IF-2 y GTP
(fMet-tRNAfMet/IF-2/GTP).
z Este complejo de mRNA, fMet-tRNAfMet, IF-1, IF-2,
IF-3 y la subunidad ribosmica de 30S se llama com-
plejo de iniciacin 30S.
 H2TRADUCCIN EN PROCARIOTAS 207
Secuencia de Shine-Delgarno
(sitio de unin del ribosoma) Codn de iniciacin

5 A G G A G G U A U G 3

3 a 10 nt

Figura H2-2. La secuencia de Shine-Delgarno en el mRNA

procariota.

z IF-1 e IF-3 son liberados. Elongacin

z A continuacin se une la subunidad ribosmica Al comienzo de la primera ronda de elongacin (figura
grande (50S). El GTP unido a IF-2 es hidrolizado a GDP H2-4), el codn de iniciacin (AUG) se posiciona en el
y Pi, y desencadena la liberacin de IF-2. La estructura sitio P con fMet-tRNAfMet unido al mismo a travs del
resultante es un complejo de iniciacin 70S. pareo de bases entre codn y anticodn. El siguiente
codn del mRNA se posiciona en el sitio A. La elonga-
Otro aspecto importante a destacar es que, a diferen- cin de la cadena polipeptdica se produce en tres pasos
cia de todas las otras molculas de aminoacil-tRNA (las llamados el ciclo de elongacin, es decir, la unin de
cuales se unen al sitio A; vase ms adelante), la unin aminoacil-tRNA, la formacin del enlace peptdico y
de fMet-tRNAfMet se produce directamente en el sitio P. la translocacin:
1. Unin de aminoacil-tRNA: es el primer paso, el corres-
pondiente aminoacil-tRNA para el segundo codn se
Subunidad ribosmica de 30S une al sitio A a travs de la interaccin entre codn
Factores de iniciacin IF-1, IF-3 y anticodn (figura H2-4). Pero la unin del ami-
mRNA
noacil-tRNA no es un proceso pasivo, se requiere el
factor de elongacin EF-Tu (el cual es una GTP-asa)
y GTP. stos se unen al aminoacil-tRNA para formar
un complejo de aminoacil-tRNA/EF-Tu/GTP, el cual
5 3 mRNA
AUG
libera el aminoacil-tRNA al sitio A. Si el anticodn del
aminoacil-tRNA forma pares de bases correctos con
fMet-tRNA fMet/IF-2/GTP el codn, el GTP es hidrolizado a GDP, el aminoacil-
tRNA es transferido al ribosoma y el EF-Tu es libe-
rado como EF-Tu/GBP (figura H2-4). Sin embargo, si
fMet el anticodn y el codn no parean bases de manera
correcta, no se produce la hidrlisis del GTP y el ami-
UAC noacil-tRNA no se transfiere al ribosoma.
5 AUG 3
Antes de que la molcula de EF-Tu pueda catalizar
Complejo de iniciacin de 30S la unin de otro tRNA cargado al ribosoma, debe
regenerarse en un proceso que incluye otro factor de
IF-1, IF-3 elongacin, EF-Ts. Esta regeneracin se denomina
Subunidad ribosmica de 50S ciclo de intercambio EF-Tu-EF-Ts (figura H2-5).
Primero, el EF-Ts se une a EF-Tu y desplaza al GDP.
IF-2, GDP Luego, el GTP se une al EF-Tu y desplaza al EF-Ts. El
EF-Tu/GTP se encuentra listo en ese momento para
tomar parte en otra ronda de elongacin.
Ntese que el EF-Tu no se une a fMet-tRNAfMet, lo que
fMet
evita que el tRNA iniciador se una al sitio A y detenga
la unin de los codones AUG internos al tRNA iniciador.
UAC
5 AUG 3
En contraste, el IF-2 se une al fMet-tRNAfMet pero no
a Met-tRNAmMet (o a cualquier otro aminoacil-tRNA),
Sitio E Sitio P Sitio A lo que significa que, de todos los tRNA disponibles,
Complejo de iniciacin de 70S slo tiene lugar la colocacin del tRNA iniciador en
el sitio P en respuesta a un codn de iniciacin AUG.

Figura H2-3. Iniciacin de la sntesis de protenas en 2. Formacin del enlace peptdico: el segundo paso, la
las clulas procariotas. formacin del enlace peptdico, es catalizado por
208 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

EF-Ts GTP

EF-Tu/GDP EF-Tu/EF-Ts EF-Tu/GTP

fMet
GDP EF-Ts
UAC
AGA AUG UCC GAGC C AGC A
Figura H2-5. Ciclo de intercambio EF-Tu-EF-Ts.

Ser-tRNASer/EF-Tu/GTP
Paso 1: unin del GTP(es decir EF-G/GTP) se une al ribosoma. En este
aminoacil-tRNA al sitio A momento se producen tres movimientos concerta-
EF-Tu/GDP
dos, que de manera colectiva se llama translocacin:
z El tRNA desacilado se mueve desde el sitio P al sitio E
fMet Ser z El dipeptidil-tRNA del sitio A se mueve hacia el sitio P
z El ribosoma se mueve a lo largo del mRNA (5 a 3)
AGA
UAC
AUG
AGG
UCC GAGC C AGC A
por tres nucletidos para colocar el siguiente codn
en el sitio A
Sitio E Sitio P Sitio A
Durante los sucesos de la translocacin, el GTP es hidro-
Paso 2: formacin del enlace lizado a GDP y un fosfato inorgnico, y EF-G es liberado
peptdico
listo para unirse a ms GTP en una nueva ronda de elon-
gacin.
fMet
Ser
Despus de la translocacin, el sitio A est vaco y listo
para recibir el siguiente aminoacil-tRNA. El sitio A y el
sitio E no pueden ser ocupados de manera simultnea.
UAC AGG
AGA AUG UCC GAGC C AGC A
Por consiguiente, el tRNA desacilado debe ser liberado
del sitio E antes de que el siguiente aminoacil-tRNA se
EF-G/GTP una al sitio A para iniciar una nueva ronda de elonga-
Paso 3: translocacin cin.
EF-G, GDP + Pi La elongacin contina mediante la aadidura de un
aminocido al extremo C terminal del polipptido en
crecimiento por cada codn ledo, con el peptidil-tRNA
fMet en un movimiento continuo de ida y vuelta desde el sitio
Ser
P al sitio A a medida que crece.
UAC AGG
AGA AUG UCC GAG C C AGC A Terminacin
Al final, uno de los tres codones de terminacin (tam-
Sitio E Sitio P Sitio A
bin llamados codones de detencin) se posiciona en
Figura H2-4. Fase de elongacin de la sntesis de el sitio A (figura H2-6). stos son UAG, UAA y UGA. A dife-
protenas en los procariotas. rencia de otros codones, las clulas procariotas no con-
tienen aminoacil-tRNA complementarios para codones
de detencin. En su lugar, uno de los dos factores de
la peptidiltransferasa. En esta reaccin, el extremo
liberacin (RF-1 y RF-2) se une en su reemplazo. El
carboxilo del aminocido unido al tRNA en el sitio
RF-1 reconoce UAA y UAG, mientras que el RF-2 reconoce
P es desacoplado del tRNA y se une por un enlace
UAA y UGA. Un tercer factor de liberacin, RF-3, tambin
peptdico al grupo amino del aminocido ligado al
es necesario para asistir a RF-1 o RF-2 en su interaccin
tRNA en el sitio A (figura H2-4). Nunca se ha ais-
con el ribosoma. Por lo tanto, ya sea RF-1 + RF-3 o RF-2
lado una protena con actividad de peptidiltransfe-
+ RF-3, la unin depende del codn de terminacin
rasa. Ahora, esta razn est clara; en E. coli, cuando
exacto en el sitio A. El RF-1 (o RF-2) se une en el sitio A
menos, la actividad de peptidiltransferasa se asocia
o cerca del mismo, mientras que el RF-3/GTP se une en
con parte del rRNA de 23S de la unidad ribosmica
cualquier sitio del ribosoma. Los factores de liberacin
grande. En otras palabras, la peptidiltransferasa es
determinan que la actividad de la peptidiltransferasa se
una ribozima, una actividad cataltica que radica
transfiera del polipptido a una molcula de agua en
en una molcula de RNA (seccin G8).
lugar de hacerlo a un aminoacil-tRNA, y separan efec-
3. Translocacin: en el tercer paso, un complejo de factor tivamente el enlace entre el polipptido y el tRNA en el
de elongacin EF-G (tambin llamado translocasa) y sitio P.
 H2TRADUCCIN EN PROCARIOTAS 209

Asn Ser
NH2 Arg

GCU
AAC UCG CGA UAG GUG

GTP

RF-1 Liberacin de factores unidos

(RF-1 + RF-3 o RF-2 + RF-3 segn
RF-3
el codn de terminacin especco)

GTP

Asn Ser
NH2 Arg

GCU
AAC UCG CGA UAG G UG

H2O La peptidiltransferasa transere

el polipptido a una molcula
de agua
GDP + Pi

COOH
Ser Arg
Asn
NH2
GCU
AAC UCG CGA UAG G UG

Disociacin del ribosoma en

subunidades con liberacin
de mRNA y tRNA

AACUCGCGAUAGGUG

Figura H2-6. Terminacin de la sntesis de protenas

en clulas procariotas.

Para comprender esto, es importante advertir que, de
manera normal, el ribosoma excluye al agua del centro
de reaccin porque de otro modo sta podra hidrolizar
el enlace ster peptidil-tRNA y provocar la liberacin
prematura del polipptido. Los factores de liberacin pa-
recen trabajar para permitir que una molcula de agua
acceda al centro de reaccin de la peptidiltransferasa,
de manera que se produzca la hidrlisis. El polippti-
do libre deja al ribosoma, seguido por el mRNA y el tRNA
libre, y el ribosoma se disocia en sus subunidades 30S y
50S listo para comenzar la traduccin otra vez.
SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

H3Traduccin en eucariotas
Notas clave
Iniciacin por Los ribosomas eucariotas son ms grandes (80S) y ms complejos que los
exploracin ribosomas procariotas (70S). La iniciacin es bsicamente similar en procariotas
y eucariotas, excepto que en estos ltimos se han identificado cuando menos
13 factores de iniciacin (tres factores en los procariotas), el aminocido de
iniciacin es metionina (N-formilmetionina en procariotas) y que la mayor par-
te de los mRNA eucariotas no contienen sitios de unin internos del ribosoma, de
manera que el codn de iniciacin AUG se detecta por exploracin del ribosoma
desde el extremo 5 en reemplazo de lo anterior. En los eucariotas, la inicia-
cin mediante exploracin incluye la formacin de un complejo de preiniciacin
entre la subunidad ribosmica 40S, un complejo ternario de metionina-tRNAiMet/
factor de iniciacin eucariota (eIF)-2/GTP y eIF-1, eIF-1A y eIF-3. El complejo
de preiniciacin se fija al extremo 5 del mRNA al interactuar con el eIF-4, que
se une al casquete 5. Este complejo unido al extremo 5 se llama complejo de
iniciacin. A continuacin, este complejo explora a lo largo del mRNA para
localizar el codn de iniciacin AUG (con frecuencia contenido en una secuencia
corta denominada consenso Kozak). La subunidad ribosmica de 60S se une
ahora para formar el complejo de iniciacin de 80S.
Iniciacin sin Algunos mRNA derivados de genes que codifican protenas eucariotas, as como
exploracin el RNA del picornavirus, contienen sitios internos para entrada del ribosoma
(IRES) y la iniciacin de la sntesis de las protenas puede suceder sin ninguna
exploracin.
Elongacin La elongacin en eucariotas requiere tres factores de iniciacin eucariotas que
tienen funciones similares a las de las protenas procariotas correspondientes.
Terminacin Un factor de liberacin eucariota, eRF-1, reconoce los tres codones de termi-
nacin, pero necesita asistencia por parte del eRF-3.

Temas relacionados (G1) Introduccin al RNA (G7) Procesamiento del premRNA

(G2) Transcripcin en procariotas
(G3) Operones
(G4) Trascripcin en eucariotas:
descripcin
(G5) Transcripcin de genes que
codifican protenas en eucariotas
(G6) Regulacin de la transcripcin
de la polimerasa II de RNA
eucariota
(G8) Transcripcin y procesamiento
del RNA ribosmico
(G9) Transcripcin y procesamiento
del RNA de transferencia
(H1) El cdigo gentico
(H2) Traduccin en procariotas

Iniciacin por exploracin unidades de 30S y 50S, un ribosoma eucariota tiene

El mecanismo general de la sntesis de protenas en
eucariotas es bsicamente el mismo que en los proca-
riotas, con tres fases definidas como iniciacin, elonga-
cin y terminacin. Sin embargo, hay algunas diferen-
cias significativas, en particular durante la iniciacin.
z En tanto que un ribosoma procariota tiene un coefi-
ciente de sedimentacin (seccin G8) de 70S y sub-
un coeficiente de sedimentacin de 80S con subuni-
dades de 40S y 60S (G8). La composicin de las subu-
nidades ribosmicas eucariotas tambin es ms com-
pleja que las subunidades procariotas (seccin G8),
pero la funcin de cada subunidad es en esencia la
misma que en los procariotas.
z En casi todos los casos, cada mRNA eucariota tiene
slo un sitio de iniciacin y por consiguiente codifica

una sola protena. En los procariotas, muchos mRNA
son policistrnicos, esto es, que codifican numero-
sas protenas. Cada secuencia de codificacin en un
mRNA procariota tiene sus propios codones de ini-
ciacin y terminacin.
z La iniciacin de la sntesis de protenas en eucario-
tas incluye muchos ms factores de iniciacin que
en los procariotas; cuando menos, se han reportado
13 diferentes factores de iniciacin eucariotas (eIF)
(cuadro H3-1) comparados con los tres factores de
iniciacin (IF) de los procariotas (seccin H2).
z En los eucariotas, el aminocido de iniciacin es
metionina, no N-formilmetionina como en los pro-
cariotas.
z Como los procariotas, se requiere un iniciador espe-
cial de tRNA para la iniciacin y es distinto del tRNA
que reconoce y se une a los codones de la metionina
en posiciones internas del mRNA. Cuando est car-
gado con metionina y listo para comenzar la inicia-
cin, esto se conoce como Met-tRNAiMet (donde i
significa iniciacin).
z La principal diferencia entre iniciacin de la traduc-
cin en procariotas y eucariotas es que en las bacte-
rias una secuencia de Shine-Dalgarno (seccin H2)
se sita a 5 del codn de iniciacin AUG y es el sitio
de unin de la subunidad ribosmica 30S, lo que
marca a este AUG como el nico que se puede usar en
la iniciacin, en lugar de cualquier otro AUG interno
del mRNA. El complejo de iniciacin se ensambla
directamente sobre este codn de iniciacin. En
contraste, la mayor parte de los mRNA eucariotas
carecen de sitios de unin internos para el ribosoma.
En su lugar, una unidad ribosmica de 40S se fija al
extremo 5 del mRNA y se mueve corriente abajo (es
decir en la direccin 5 a 3) hasta que encuentra el
codn de iniciacin AUG. Este proceso se denomina
exploracin.
Cuadro H3-1. Comparacin de factores para la sntesis de protenas en procariotas y eucariotas.
Procariotas Eucariotas
Factores de iniciacin
IF-1, IF-2, IF-3 Cuando menos, 13 factores de iniciacin;
identificados hasta ahora: eIF-1, eIF-1A,
eIF-2, eIF-2B, eIF-3, eIF-4A, eIF-4B, eIF-4E, y eucariotas (consltese el texto)
eIF-4F, eIF-4G, eIF-4H, eIF-5, eIF-6
Factores de elongacin
EF-Tu eEF-1
EF-Ts eEF-1
EF-G eEF-2
Factores de terminacin
RF-1, RF-2, RF-3 eRF-1, eRF-3
H3TRADUCCIN EN EUCARIOTAS 211
Los detalles completos de la iniciacin en eucariotas
todava no se conocen por completo, pero en forma
amplia el proceso sucede como sigue.
1. El primer paso es la formacin de un complejo de
preiniciacin, que consiste en la subunidad ribo-
smica pequea de 40S, un llamado complejo ter-
nario de Met-tRNAiMet, eIF-2 y GTP, y los factores de
iniciacin eIF-1, eIF-2 y eIF-3.
2. El complejo de preiniciacin se une luego al extremo
5 del mRNA eucariota. Esta unin requiere eIF-4 (un
complejo de eIF-4A, eIF-4E y eIF-4G), tambin lla-
mado complejo de unin del casquete. El complejo
de unin del casquete se une al casquete 5 del mRNA
y de esta manera fija al complejo de preiniciacin en
el extremo 5 del mRNA. Una vez unido al extremo 5,
este complejo pasa a llamarse complejo de iniciacin.
La cola poli(A) presente en el extremo 3 de la mayora
de los mRNA eucariotas tambin puede influir en la
iniciacin. Parece ser que esto se logra por la interac-
cin entre eIF-4 y la protena de unin de poli(A), la
cual se fija a la cola poli(A), lo que por supuesto impli-
ca que el mRNA se dobla hacia atrs sobre s mismo
para formar una molcula circular que permite que
esta interaccin se produzca. El papel de esta interac-
cin no est suficientemente claro, pero la existencia
de una cola poli(A) y por lo tanto de un extremo 3 del
mRNA intacto puede facilitar la iniciacin.
3. El complejo de iniciacin se mueve a continuacin
a lo largo del mRNA en direccin 5 a 3 hasta que
localiza el codn de iniciacin AUG (es decir, explo-
racin). El codn de iniciacin suele ser reconocible
debido a que con frecuencia (pero no siempre) con-
tiene una secuencia corta denominada consenso de
Kozack (5-ACCAUGG-3). Las regiones sin traducir 5 de
los mRNA eucariotas varan en longitud, pero pueden
ser de varios cientos de nucletidos de largo y pue-
den contener estructuras secundarias como las asas
Funcin
Los factores individuales tienen
funciones que difieren entre procariotas
Liberacin de aminoacil-tRNA hacia el
ribosoma
Reciclamiento de EF-Tu o EF-1
Translocacin
Liberacin de la cadena polipeptdica
212 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS
en horquilla. El eIF-4A, y tal vez tambin el eIF-4B, es
una helicasa de RNA dependiente de ATP que desenro-
lla cualquier estructura secundaria, lo que permite al
complejo de inicio pasar a lo largo del mRNA.
4. Cuando el complejo se posiciona sobre el codn de
iniciacin, la subunidad ribosmica grande de 60S se
une para formar un complejo de iniciacin de 80S,
un paso que requiere la hidrlisis de GTP y lleva a la
liberacin de varios factores de iniciacin.
Iniciacin sin exploracin
Un grupo de virus llamado picornavirus (que incluye al
virus del resfriado comn [rinovirus]) que infecta clu-
las eucariotas tiene genomas de RNA sin casquetes. Estos
genomas de RNA se traducen como mRNA y usan un
sitio interno de entrada para el ribosoma (IRES, inter-
nal ribosome entry site). Las secuencias IRES de diferen-
tes picornavirus son ms variables que las secuencias
Shine-Dalgarno en procariotas, pero funcionan de una
manera similar, ya que permiten que la iniciacin se
produzca en la parte interna del mRNA.
Ahora tambin se sabe que algunos mRNA derivados de
genes eucariotas que codifican protenas contienen IRES,
por ejemplo, la protena de unin de la cadena pesada de
las inmunoglobulinas de mamferos. En estos casos, en
consecuencia, la iniciacin puede producirse sin explo-
racin.
Elongacin
La etapa de elongacin de la traduccin en eucariotas
requiere tres factores de elongacin, eEF-1, eEF-1 y
eEF-2, los cuales tienen funciones similares a los de sus
contrapartes procariotas EF-Tu, EF-Ts y EF-G (cuadro
H3-1).
Durante la elongacin en las bacterias, el tRNA desaci-
lado en el sitio P se mueve hacia el sitio E antes de aban-
donar el ribosoma (seccin H2). En contraste, los ribo-
somas eucariotas parecen no tener un sitio E y el tRNA
desacilado se expulsa directamente desde el ribosoma.
Terminacin
Los eucariotas tienen slo un factor de liberacin (eRF-1)
que reconoce los tres codones de terminacin (UAA, UAG
y UGA). Un segundo factor de liberacin, eRF-3, puede
contribuir con eRF-1 para que concluya la traduccin
(cuadro H3-1).
SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

H4Direccionamiento de protenas
Notas clave
Descripcin Tanto en procariotas como en eucariotas, las protenas de reciente sntesis
deben liberarse en una localizacin celular especfica o secretarse desde las
clulas para su correcta actividad. Este fenmeno se llama direccionamiento
de la protena.
Protenas secretoras Las protenas secretoras tienen un pptido seal N terminal, el cual determina
que la protena se sintetice en el RER. El pptido seal es reconocido por el SRP, el
cual dirige al complejo mRNA-ribosoma hacia el receptor SRP situado sobre la
membrana del RER. El SRP se disocia y es reciclado, lo que permite que la cadena
polipeptdica en crecimiento sea translocada a travs de la membrana por medio
de un translocn por la llamada translocacin cotraduccional. Las vesculas que
brotan del RER llevan la protena al complejo de Golgi. Otras vesculas la llevan
hacia la membrana plasmtica. La fusin de estas vesculas de transporte con la
membrana plasmtica libera la protena al exterior de las clulas.
Protenas de la Las protenas de la membrana plasmtica tambin se sintetizan en el RER, pero
membrana plasmtica primero se insertan en la membrana del RER (y acaban en la membrana plas-
mtica). stas pueden ser protenas que atraviesan una sola vez la membrana
(protenas integrales de la membrana tipo I y tipo II) o protenas que atraviesan
mltiples veces la membrana (protena integral de la membrana tipo IV).
Secuencias topgenas de la cadena polipeptdica determinan la orientacin de
la protena en la membrana. Las protenas de tipo I tienen una secuencia seal
N terminal y una secuencia de detencin-transferencia hidrfoba, las de tipo II
tienen una secuencia seal no escindida en el N terminal que funciona como
la secuencia de fijacin en la membrana, y la de tipo IV tiene mltiples secuencias
seal y secuencias de detencin-transferencia. Las protenas destinadas a fi-
jarse a la membrana por una estructura GPI tienen una secuencia seal N
terminal escindida y una secuencia hidrfoba C terminal que dirige la adicin
del GPI fijador preformado.
Protenas del retculo Las protenas destinadas al RER tienen un pptido seal N terminal y son
endoplsmico translocadas mientras se cotraducen a la luz del RER o insertadas en la
membrana del RER. Las secuencias de aminocidos C terminal (KDEL en las
protenas solubles de la luz del RER, KKXX o KXKXX en las protenas integrales de
la membrana tipo I) son reconocidas por protenas receptoras especficas y
retienen las protenas en el ER.
Protenas lisosmicas Las protenas lisosmicas son dirigidas hacia los lisosomas por medio de la
adicin de una seal de manosa 6-fosfato que se agrega en el compartimiento
cis del aparato de Golgi y que resulta reconocida por una protena receptora del
compartimiento trans de este mismo aparato. Luego, vesculas especializadas
que maduran dentro del lisosoma se encargan de transportar la protena.
El receptor de manosa 6-fosfato se recicla hacia el aparato de Golgi para su
reutilizacin.
Protenas mitocondriales La mayora de las protenas mitocondriales y del cloroplasto se elabora en
y del cloroplasto ribosomas citoslicos, se libera en el citosol y luego es tomada por los orga-
nelos. La captacin dentro de la matriz mitocondrial requiere una secuencia
direccionada por la matriz y sucede en sitios donde las membranas mito-
condriales externa e interna entra en contacto. Las protenas hsc70 y hsc60
median el proceso y requieren la hidrlisis de ATP y un gradiente electroqumico
a travs de la membrana mitocondrial interna.
214 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

Protenas nucleares
Las protenas destinadas a la importacin dentro del ncleo requieren de
manera tpica una seal de localizacin nuclear de cuatro a ocho aminocidos
de largo, donde adems imperen los aminocidos con carga positiva, localizada
en el interior de la protena. La captacin se produce a travs de los poros
nucleares y requiere la hidrlisis de ATP.

Temas relacionados (A1) Clulas procariotas (E2) Estructura de la membrana

(A2) Clulas eucariotas (E4) Transporte de membrana:
(B2) Estructura y funcin de las macromolculas
protenas (H5) Glucosilacin de protenas

Descripcin Protenas secretoras

Las clulas deben asegurarse de que cada protena de
reciente sntesis es destinada a su localizacin correcta,
donde puede efectuar la funcin apropiada. Este pro-
ceso se llama direccionamiento de la protena. En
una clula eucariota, la protena puede destinarse para
que permanezca en el citosol, por ejemplo una enzi-
ma que interviene en la gluclisis (seccin J3). De mane-
ra alternativa, puede ser necesario dirigirla a un orga-
nelo (como una mitocondria, lisosoma, peroxisoma,
cloroplasto o el ncleo) o a ser insertada dentro de la
membrana plasmtica o liberada fuera de la clula (sec-
cin A2). En bacterias como E. coli, la protena puede
permanecer en el citosol, ser insertada en la membrana
plasmtica o en la membrana externa, ser enviada al
espacio entre estas dos membranas (espacio citopls-
mico) o ser exportada fuera de la clula (seccin A1).
Tanto en procariotas como en eucariotas, si la protena
se destina al citosol, se elabora en los ribosomas del cito-
sol y se libera directamente en ste. Si se destina a otras
localizaciones finales, intervienen mecanismos espec-
ficos de direccionamiento de protenas.
Ribosomas unidos al RER sintetizan las protenas desti-
nadas a secretarse desde la clula eucariota. A medida
que la protena se sintetiza, es translocada a travs de la
membrana del RER hacia la luz de ste, donde se pliega
a su conformacin final. El ER emite entonces vesculas
que llevan la protena hacia el aparato de Golgi (figura
H4-1) (seccin A2). El aparato de Golgi tiene una cara cis
(por donde ingresan las vesculas) y una cara trans (por
donde las vesculas salen). Por lo tanto, las vesculas del
RER se fusionan con el compartimiento cis del aparato
de Golgi, en cuya luz liberan la protena. Despus la
protena se mueve a travs del complejo de Golgi hasta
el compartimiento trans, donde es modificada en ruta
por la adicin de residuos de carbohidratos (glucosila-
cin; seccin H5). Para finalizar, brotan vesculas desde
el compartimiento trans y transportan a las protenas
secretoras glucosiladas hacia la membrana plasmtica,
donde las vesculas se fusionan, al tiempo que liberan
su contenido hacia el exterior de la clula. Esta fusin y
liberacin extracelular de protenas se llama exocitosis
(vase la seccin E4 para mayores detalles).

Fusin de la
Brote vescula con
vesicular la membrana
plasmtica

Vescula
Vescula

Ribosoma
Golgi
RER

Figura H4-1. Sntesis y exocitosis de protenas secretoras (vase el texto para mayores detalles). Los
ribosomas jos al RER se muestran como crculos macizos, en tanto que los crculos huecos en la luz del RER,
vesculas y complejo de Golgi representan molculas de protenas secretoras.
 H4DIRECCIONAMIENTO DE PROTENAS 215

Translocacin a travs con el polipptido naciente pasando a travs de un poro

de la membrana del ER acuoso de la membrana creado por el translocn. El
translocn es un complejo protenico, cuyo poro trans-
Una protena secretora tpica difiere de una protena membrana est hecho a partir de la protena Sec61, en
citoslica por tener una secuencia de alrededor de 13 mamferos, y de la SecY, en procariotas. A medida que
a 35 aminocidos de largo en su extremo N terminal pasa a travs del translocn, una peptidasa de seal
llamada secuencia seal o pptido seal. Los pptidos separa al pptido seal de la cara luminal del RER (figura
seal de diferentes protenas secretoras son distintos H4-2) y lo degrada, en tanto el resto de la protena es
en sus secuencias de aminocidos, pero tienen algunas translocado a travs de la membrana del RER hacia su
caractersticas comunes: el centro de la secuencia suele luz. Dado que el transporte a travs de la membrana del
consistir en 10 a 15 aminocidos hidrfobos flanquea- RER se produce durante la sntesis de protenas, el pro-
dos por varios residuos relativamente hidrfilos entre ceso se llama translocacin cotraduccional. Despus,
los que se incluyen uno o ms residuos con carga posi- la protena es transportada a travs del aparato de Golgi
tiva (Arg, Lys), cerca del N terminal. El pptido seal hacia el exterior de la clula, como ya fue descrito. El
dirige la protena secretora hacia la membrana del RER y SRP liberado se recicla y queda listo para unirse a otro
acto seguido la dirige para que cruce hasta la luz del RER pptido seal (el ciclo SRP) (figura H4-2).
y acabe por ser secretada. Una versin simplificada del
mecanismo se muestra en la figura H4-2. Protenas de la membrana plasmtica
El mRNA de las protenas secretoras se une a un ribosoma Las protenas integrales de la membrana plasmtica
citoplsmico libre y comienza la sntesis de la protena. tambin son sintetizadas por ribosomas en el RER, pero
La primera parte de la protena elaborada es el pptido son insertadas en la membrana del RER en lugar de trans-
seal N terminal. Un SRP, el cual es un largo complejo de portarse a la luz de ste. Durante el transporte hacia
un RNA de 7S y seis protenas, se une al pptido seal y el aparato de Golgi y luego hacia la superficie celular,
detiene la sntesis adicional de protena. Esto evita que estas protenas permanecen fijas en la membrana, y las
la protena secretora se libere en forma prematura hacia vesculas finales que se fusionan con la membrana plas-
el citosol. El complejo ribosoma-mRNA-SRP se une mtica se convierten en nueva membrana plasmtica
luego a un receptor SRP, una protena de la superficie (figura H4-3). Ntese que, despus de la insercin en
del RER para formar el complejo ribosoma-translocn. la membrana del RER, una parte de las protenas mira
En una serie concertada de reacciones, el SRP es liberado hacia la luz de ste, pero en la superficie celular acaban
del pptido seal y la traduccin contina una vez ms, por mirar hacia fuera. sta es la parte de la protena que

5'

SRP

Receptor SRP

CITOSOL
Complejo protena-translocn 3'

mRNA

Ciclo
SRP

Membrana del RER

LUZ DEL
RER
Peptidasa
Pptido seal de seal

Figura H4-2. Versin simplicada de la hiptesis de la seal (vase el texto para mayores detalles).
216 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS
Brote
vesicular
Vescula
Golgi
Figura H4-3. Sntesis de protenas de la membrana plasmtica (vase el texto para mayores detalles).
Los ribosomas jos al RER se muestran como crculos macizos, en tanto que las protenas de la
membrana plasmtica que acaban de sintetizarse se muestran como crculos huecos con un cabo.
recibe al carbohidrato durante la glucosilacin en el RER
y en el complejo de Golgi, de manera que el carbohi-
drato es expuesto sobre la superficie celular (seccin
H5).
La translocacin de la protena de la membrana plasm-
tica a travs de la membrana del RER se produce durante
su sntesis por el mismo mecanismo que las prote-
nas secretoras. Sin embargo, por definicin, la pro-
tena est destinada a permanecer fija en la mem-
brana y a no ingresar por completo en la luz del RER.
Existen formas diversas para alcanzar el logro anterior
y depende del tipo de protena de membrana. Algunas
protenas integrales de la membrana son protenas que
atraviesan la membrana una sola vez, es decir, que la
cadena polipeptdica cruza la membrana slo una vez,
mientras que en otros casos la protena es una protena
que atraviesa la membrana numerosas veces (seccin
E2). La orientacin de la protena en la membrana y el
nmero de veces que atraviesa la bicapa lipdica depen-
den de secuencias topgenas especficas del interior
de la cadena polipeptdica. Estas secuencias topge-
nas son regiones donde predominan los aminocidos
hidrfobos y pertenecen a tres tipos: secuencias seal
N terminal, secuencias seal internas y secuencias de
detencin-transferencia.
En las protenas integrales de la membrana tipo I que
atraviesan una sola vez la membrana (figura H4-4a),
adems de hacia la secuencia seal N terminal, la cual es
separada de la protena por la peptidasa de seal como
las protenas secretoras, hay una segunda secuencia
hidrfoba localizada en el interior de la protenas. Por
lo tanto, la protena comienza a cruzar la membrana del
RER durante su sntesis de la misma forma que una pro-
tena secretora, pero luego esta transferencia es dete-
nida antes de que la protena completa sea translocada
y as la protena permanece insertada en la membrana
mediante la interaccin de la secuencia hidrfoba de
detencin-transferencia con el translocn y con el inte-
rior hidrfobo de la bicapa. En las protenas integrales
de la membrana tipo II que atraviesan la membrana
una sola vez (figura H4-4b), hay slo una secuencia
Fusin de la vescula
con la membrana
plasmtica
Vescula
seal N terminal, como en las protenas secretoras. No
obstante, en este caso la secuencia seal no es sepa-
rada de la protena de membrana por una peptidasa
de seal y funciona como el fijador de membrana. Las
protenas de la membrana que la atraviesan en mlti-
ples ocasiones (referidas como protenas integrales de
la membrana tipo IV) (figura H4-4c), las cuales cruzan
varias veces la membrana, tienen mltiples secuencias
de seal interna alternativas y secuencias de detencin-
transferencia para organizar este ordenamiento durante
la translocacin. La orientacin final del N terminal y
el C terminal depende de si la secuencia seal N ter-
minal es separada y de si la secuencia topgena final
es una secuencia de seal interna o una secuencia de
detencin-transferencia, respectivamente.
Aquellas protenas que estn fijas en la membrana
a travs de una estructura GPI fijada de manera cova-
lente en el C terminal (seccin E2, figura E2-4d) poseen
una secuencia seal N terminal para dirigirla hacia la
membrana del RER y una segunda secuencia hidrfoba
en el mismo C terminal. La secuencia seal N terminal
es separada por la peptidasa de seal, mientras que la
secuencia C terminal dirige la adicin de una estructura
GPI preformada a un residuo aminocido interno cerca
del C terminal una vez que la protena ha sido translo-
cada a travs de la membrana del RER. La estructura GPI
se construye mediante la adicin secuencial de azca-
res (glucosamina y manosa) y fosfato de etanolamina al
fosfatidilinositol (seccin E2) de la membrana del RER.
Una enzima transamidasa separa entonces la secuencia
seal C terminal y de manera concomitante la agrega en
el fijador GPI completo.
Protenas del retculo endoplsmico
El RER contiene las protenas llamadas chaperonas
(seccin B2), las cuales desempean el papel de asis-
tir a las protenas nacientes para que se plieguen de
manera correcta en su conformacin nativa. Las pro-
tenas residentes en el RER se elaboran en ste y luego
pasan a la luz (como las protenas secretoras) o se fijan
en la membrana (como las protenas integrales de la
 H4DIRECCIONAMIENTO DE PROTENAS 217
a)
N
Peptidasa de seal

LUZ
N C
Pptido Secuencias de
seal detencin-transferencia MEMBRANA ER

C CITOPLASMA

b)

N
C C LUZ
Pptido
seal
MEMBRANA ER

N
CITOPLASMA

c)
Secuencias de detencin-transferencia LUZ

N C MEMBRANA ER
Pptido Pptido
seal seal N
C CITOPLASMA
interno

d) Peptidasa
de seal Transamidasa
N

N C
Pptido Secuencia de GPI
LUZ
seal adicin de GPI
MEMBRANA ER

CITOPLASMA

Figura H4-4. Insercin de las protenas integrales de la membrana en la membrana del RER durante la
sntesis: a) protena integral de la membrana de tipo I, con una secuencia seal N terminal separable;
b) protena integral de membrana de tipo II, con una secuencia seal N terminal unida; c) protena
integral de la membrana de tipo IV, con mltiples secuencias seal y de detencin-transferencia;
d) protena de membrana ja al GPI, con una secuencia seal N terminal separable y una secuencia C
terminal agregada de jacin al GPI.

membrana tipo I). No obstante, estas protenas con-
tienen una seal de retencin en el C terminal que
reconocen protenas receptoras especficas, las cuales
retienen a estas protenas en el RER y de ese modo evitan
que se muevan a lo largo de la va secretora hacia el
aparato de Golgi. En el caso de las protenas solubles
que estn en la luz del RER, la seal de retencin es Lys-
Asp-Glu-Leu (o KDEL si se usa el cdigo de aminocidos
de una sola letra) en el C terminal. En el caso de las
protenas integrales de la membrana tipo I en la mem-
brana del RER, la seal de retencin es KKXX o KXKXX en el
C terminal citoslico.
Protenas lisosmicas
Las enzimas lisosmicas y las protenas de la membrana
lisosmica se sintetizan en el RER y son transportadas
hasta el compartimiento cis del complejo de Golgi. Una
vez en ruta, son N-glucosiladas y luego se les aade un
residuo fosfato a uno o ms residuos de manosa para
formar manosa 6-fosfato en el compartimiento cis del
complejo de Golgi. La manosa 6-fosfato es la seal que
dirige a la protena lisosmica a su destino correcto. All
es reconocida por las protenas receptoras de manosa
6-fosfato en el compartimiento trans del complejo de
Golgi, el cual se une a la protena lisosmica y la empaca
en vesculas de transporte que brotan del aparato de
Golgi (figura H4-5). Acto seguido, las vesculas de trans-
porte se fusionan con las vesculas de distribucin, cuyo
contenido es cido. El pH bajo causa la disociacin de
la protena lisosmica de su receptor y una fosfatasa
remueve el fosfato de la manosa 6-fosfato, con lo que
evita que se vuelva a unir al receptor. Brotan vesculas
de las vesculas de distribucin para regresar el recep-
tor al aparato de Golgi para reutilizarlo (reciclamiento
del receptor) y la protena lisosmica es liberada hacia
218 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS
el lisosoma por la fusin de la vescula con ste (figura
H4-5). En la enfermedad de la clula I, este direcciona-
miento selectivo de las protenas hacia el lisosoma fra-
casa debido a la deficiencia de la enzima requerida en la
fosforilacin de los residuos de manosa en el complejo
de Golgi cis.
No todas las protenas lisosmicas siguen la ruta nor-
mal del direccionamiento protenico; las clulas termi-
nan por exportar algunas y deben recuperarse. Esta va
de desecho trabaja como sigue. La glucoprotena liso-
smica se une a los receptores de la manosa 6-fosfato
en la membrana plasmtica y vuelve a internalizarse
por endocitosis (figura H4-5). Este proceso, denomina-
do endocitosis mediada por el receptor, crea una ve-
scula endoctica (o endosoma) que libera la protena
lisosmica hacia el lisosoma por fusin (seccin E4).
Protenas mitocondriales
y de los cloroplastos
Las mitocondrias y los cloroplastos contienen su pro-
pio DNA, ribosomas, mRNA, etc., y realizan sntesis de
protenas, pero muy pocas protenas mitocondriales
o de los cloroplastos se elaboran de esta forma. En su
lugar, la gran mayora de las protenas mitocondriales y
de los cloroplastos es codificada por el genoma nuclear,
los ribosomas las sintetizan en el citosol, se liberan des-
pus de su sntesis y luego se translocan a travs de la
membrana del organelo. Por consiguiente, este pro-
ceso se refiere como translocacin postraduccional.
La protena puede necesitar ser dirigida a cualquiera
de varias localizaciones; en el caso de la mitocondria,
sta podra ser la membrana mitocondrial externa,
la membrana interna, el espacio intramembranoso
o la matriz mitocondrial. Los cloroplastos tienen los
Membrana
plasmtica
Golgi
RER
Ribosomas
p
p Lisosoma
Protena Manosa Receptor
lisosmica 6-fosfato de manosa
6-fosfato
Figura H4-5. Sntesis y direccionamiento de protenas lisosmicas.
mismos subcompartimientos ms otros dos destinos
potenciales: la membrana y el espacio tilacoide (sec-
ciones A2 y L3).
Las protenas son dirigidas a la matriz mitocondrial por
una secuencia de direccionamiento hacia la matriz N
terminal. De manera tpica, esta secuencia tiene 25 a
50 aminocidos de longitud y es rica en aminocidos
hidrfobos, los aminocidos hidroxilados Ser y Thr, y de
los aminocidos con carga positiva Arg y Lys. Es pro-
bable que estas secuencias de direccionamiento hacia
la matriz asuman una conformacin helicoidal , en la
que los aminocidos con carga positiva se sitan en
un lado de la hlice y los aminocidos hidrfobos en el
otro, de manera que estas secuencias son anfipticas.
Despus de la sntesis por los ribosomas citoslicos, la
protena es liberada al citosol pero se mantiene en un
estado desplegado por protenas chaperonas de la fami-
lia de protenas hsc70, las cuales se unen a ella durante
la sntesis (seccin B2). Esto es necesario porque las
mitocondrias no pueden importar las protenas plega-
das. Luego, las hsc70 transfieren la protena desplegada
a un receptor importador localizado en la membrana
mitocondrial externa que se cree se desliza a lo largo de
la membrana hasta que alcanza un sitio donde la mem-
brana interna y la membrana externa estn en con-
tacto (sitio de contacto). En este punto, la protena
pasa hacia la matriz a travs de una protena translocn
formada por los componentes de ambas membranas
(figura H4-6). Las protenas de la membrana mitocon-
drial externa que intervienen en el direccionamiento y
la importacin se designan protenas Tom para el trans-
locn de la membrana externa, mientras que aqullas
de la membrana interna se designan protenas Tim. A
medida que pasan a travs del poro, se libera la protena
citoplsmica hsc70, el pptido seal es separado por la
Receptor
de manosa
6-fosfato Endocitosis mediada
por receptor
p
p
Reciclamiento
del receptor
p p
Vescula de Vescula de
transporte distribucin
(cida)
 H4DIRECCIONAMIENTO DE PROTENAS 219
Seal de direccionamiento hacia la matriz

hsc70

CITOSOL

Cruce de una protena acanalada

(translocn) a travs de las dos
membranas en un sitio de
MEMBRANA contacto entre ambas
MITOCONDRIAL
EXTERNA
Protena
receptora

hsc70
MEMBRANA
mitocondrial
MITOCONDRIAL
INTERNA Una proteasa separa la seal
de direccionamiento hacia la matriz

MATRIZ

Figura H4-6. Captacin de protenas en la matriz mitocondrial (vase el texto

para mayores detalles).

peptidasa de seal y la protena es unida en la matriz
por la chaperona mitocondrial hsc70. Luego la hsc70
es reemplazada por la chaperona mitocondrial hsc60,
la cual colabora con la protena para que se pliegue
de manera correcta a su estado final. La importacin de
protenas hacia la mitocondria requiere energa del gra-
diente electroqumico a travs de la membrana interna
(seccin L2) as como hidrlisis del ATP. La importacin
de protenas dentro de la membrana interna mitocon-
drial y en el espacio intramembranoso necesita dos
seales; en primer lugar, la protena es importada hacia
la matriz como se describe antes y luego una segunda
secuencia seal dirige la protena de regreso hacia la
membrana interna o a travs del espacio intramembra-
noso.
La importacin de protenas por los cloroplastos sigue
mecanismos similares a los de la mitocondria, pero las
seales usadas son diferentes ya que mitocondrias y
cloroplastos estn juntos en algunas clulas vegetales
y producen protenas que son dirigidas hacia el destino
correcto.
Protenas nucleares
El ncleo tiene una membrana interna y una membrana
externa (seccin A2) y est perforado por 3 000 a 4 000
poros nucleares. Cada poro consta de un complejo
del poro nuclear de ms de 100 protenas diferentes
organizadas en una disposicin hexagonal. Aunque las
molculas pequeas pueden pasar a travs del poro por
difusin libre, las protenas grandes que ingresan en el
ncleo requieren una seal de localizacin nuclear.
sta es de cuatro a ocho aminocidos de largo y a la
vez rica en aminocidos con carga positiva como la Lys
y la Arg, as como de manera usual contiene Pro, y se
localizan en la parte interna de la cadena polipeptdica.
La protena es llevada a travs del poro en un paso que
requiere ATP e ingresa en el ncleo sin separarse de la
seal de localizacin.
SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

H5Glucosilacin de protenas
Notas clave
Glucosilacin de Muchas protenas sintetizadas por los ribosomas del RER contienen cadenas
protenas: descripcin cortas de carbohidratos (oligosacridos) y son llamadas glucoprotenas. Los
oligosacridos pertenecen a dos tipos principales: enlazados a O (con el OH de
la cadena lateral de la Ser o Thr) y enlazados a N (con el NH2 de la cadena lateral
del Asn). Para ser modificados por los glucanos enlazados a N, los residuos
Asn deben estar en la secuencia de consenso Asn-X-Ser o Asn-X-Thr.
Sntesis de Los oligosacridos enlazados al O son sintetizados por la adicin secuencial
oligosacridos de monosacridos a la protena a medida que sta pasa a travs del complejo de
enlazados al O Golgi. De manera habitual, estos oligosacridos consisten en slo cuatro a cinco
residuos de azcar.
Sntesis de De manera inicial, los oligosacridos enlazados al N se sintetizan en un trans-
oligosacridos portador de dolicolfosfato que est fijo a la membrana del RER. La enzima
enlazados al N transferasa de oligosacridos transfiere luego a la protena la estructura precursora
completa con la composicin (Glc)3(Man)9(GlcNAc)2. Antes de abandonar el RER,
los tres residuos de glucosa terminal son removidos. El tipo de oligosacrido
resultante alto en manosa puede ser recortado a un centro de pentasacrido con
la composicin (Man)3(GlcNAc)2 y a monosacridos adicionales aadidos en el
aparato de Golgi para producir un tipo complejo de oligosacrido.

Temas relacionados (H4) Direccionamiento de protenas (J1) Monosacridos y disacridos

Glucosilacin de protenas: descripcin X-Ser o Asn-X-Thr, y en la cual X es cualquier ami-

La mayora de las protenas elaboradas por los riboso-
mas en el RER (seccin H4) son glucoprotenas, es decir,
que contienen cadenas cortas de carbohidratos (oligo-
sacridos) unidos en forma covalente a ellas durante el
paso a travs del RER y el complejo de Golgi. Existen dos
tipos principales de enlaces en los oligosacridos:
nocido excepto Pro. Pese a ello, no todas las pre-
sentaciones de Asn en tales secuencias estn gluco-
siladas; los sitios que son glucosilados dependen del
tipo de clula que sintetiza la protena. Si el Asn est
N glucosilado en el residuo Ser o Thr, este motivo no
pertenece a los glucosilados O.

z Los oligosacridos enlazados al O suelen fijarse a la Sntesis de oligosacridos enlazados al O

protena a travs de enlaces glucosdicos O con los
La sntesis de oligosacridos enlazados al O se produce
grupos OH de las cadenas laterales de la Ser o Thr
por la adicin secuencial de unidades de monosacri-
(figura H5-1a). Con frecuencia, los residuos que se
dos a la protena recientemente sintetizada a medida
modifican estn en una regin de la cadena peptdica
que sta pasa a travs del complejo de Golgi. Primero,
que es rica en residuos de Ser/Thr. En glucoprotenas
la transferasa de GalNAc transfiere la N-acetilgalacto-
vegetales, los grupos OH de los residuos de hidroxi-
samina (GalNAc) al residuo relevante de Ser o Thr de
prolina (Hyp) pueden ser glucosilados, mientras que
la protena, una enzima que usa UDPGalNac como
los residuos de hidroxilisina (Hyl) en la protena col-
precursor (figura H5-2). A continuacin se aaden
gena de los mamferos pueden ser glucosilados en el
otros monosacridos [galactosa, N-acetilglucosamina
O (seccin B4).
(GlcNAc), cido silico, fucosa)] (seccin J1) usando
z Los oligosacridos enlazados a N estn unidos a la el azcar de los nucletidos correspondientes como
protena a travs de enlaces glucosdicos N a los gru- precursores. El tipo y nmero exacto (por lo general, slo
pos NH2 de las cadenas laterales del Asn (figura H5- cuatro o cinco) de monosacridos aadido depende de
1b), donde el Asn se presenta en la secuencia Asn- la protena que se est modificando.
 H5GLUCOSILACIN DE PROTENAS 221

a) Cadena b) Cadena
polipeptdica polipeptdica
CH2OH

OH O H
H CH2OH O NH
OH H H NH
H O C CH H O N C CH2 CH
H H
H NH OH H C O
H C O
C O (CH3) OH H
H NH
CH3 Ser (Thr) Asn
C O
GalNAc
CH3

GIcNAc

Figura H5-1. Estructuras de enlace de los oligosacridos: a) enlace

glucosdico de unin al O entre GalNAc y un residuo de Ser (o Thr);
b) enlace glucosdico de unin al N entre GlcNAc y un residuo de
Asn.

Sntesis de oligosacridos enlazados a N
En contraste con los oligosacridos enlazados a O, los
cuales se elaboran en forma secuencial en la protena,
los oligosacridos enlazados a N se sintetizan como una
estructura precursora larga, ramificada, que luego se
aade en bloque al residuo aceptor Asn. El oligosac-
rido se produce sobre un transportador de lpidos deno-
minado dolicolfosfato. ste consiste en 22 unidades de
isopreno (C5) (seccin K5) con un grupo fosfato termi-
nal y se localiza en la membrana del RER.
La sntesis del oligosacrido comienza con la acepta-
cin de monosacridos por parte del dolicolfosfato en
la cara citoslica de la membrana del RER (figura H5-3),
pero cuanto se ha formado el producto intermedio
(Man)5(GlcNAc)2-dolicolfosfato, que cambia de orien-
tacin y pasa a aceptar monosacridos adicionales
del lado luminal de la membrana del RER (figura H5-3).
Todos stos se transfieren de manera subsecuente de
monosacridos enlazados al dolicolfosfato que se ela-
boran en el lado citoplsmico de la membrana del RER,
luego de invertir su orientacin a travs de la membrana
para actuar como donadores. El oligosacrido final, con
la composicin (Glc)3(Man)9(GlcNAc)2, est unido al
dolicol mediante un enlace pirofosfato de alta energa
(figura H5-3). ste proporciona la energa para la trans-
ferencia del oligosacrido a la protena, una reaccin
catalizada por una enzima transferasa de oligosacrido
unida a la membrana, que de manera esencial ocurre en
la luz del RER tan pronto como la cadena de polipptido
en crecimiento aparece a travs del translocn (figura
H5-4).
Mientras la protena se halla todava en el RER, los tres
residuos de glucosa son removidos (figuras H5-4 y
H5-5). Como hecho de inters, los residuos de glucosa
se vuelven a aadir a la protena, si sta se encuentra
desplegada o ligeramente plegada. Por lo tanto, slo
cuando la protena est correctamente plegada, todos
los residuos de glucosa acaban por removerse y la pro-
tena puede continuar a lo largo de la va secretora. La
glucoprotena plegada con sus oligosacridos del tipo
de la alta manosa (seccin J2, figura J2-3) se transporta
a continuacin hacia el complejo de Golgi a travs de

Gal
GalNAc GalNAc
Ser Ser Ser

UDP-GalNAc UDP UDP-Gal UDP

Figura H5-2. Sntesis de un oligosacrido unido a O. El ejemplo

muestra un oligosacrido enlazado al O en la inmunoglobulina
A (IgA) humana.
222 SECCIN H SNTESIS DE PROTENAS

CITOSOL MEMBRANA DEL RER LUZ

P Dolicol
UDP-GlcNAc

UMP

UDP-GlcNAc P P Dolicol

UDP-GlcNAc

UDP

(GlcNAc)2 P P Dolicol
5GDP-Man

5GDP

(Man)5(GlcNAc)2 P P Dolicol

Inversin de la orientacin
a travs de la membrana del RER

Dolicol P P (GlcNAc)2 (Man)5

4Man P dolicol
3Glc P dolicol
7P dolicol

Dolicol P P (GlcNAc)2(Man)9(Glc)3

Figura H5-3. Sntesis de oligosacridos unidos al N en un

transportador de dolicolfosfato de la membrana del RER.

Ribosoma
Dolicolfosfato

5' 3' 5' 3'

Citosol
ER ER
Luz
P P
Translocn Asn Asn
P Transferasa de P
oligosacridos
GlcNAc GlcNAc

+ +
NH3 GlcNAc NH3 GlcNAc

Man Man
Man Man Man Man

Man Man Man Man Man Man

Man Man Man Man Man Man

Glc Glc

Glc Glc

Glc Glc

Figura H5-4. La transferasa de oligosacridos transere un oligosacrido enlazado

al N desde el transportador de dolicolfosfato a un residuo de Asn aceptor en una
cadena polipeptdica en crecimiento. Se indican los tres residuos de glucosa terminal
y los seis residuos de manosa que se remueven durante el recorte del oligosacrido.
 H5GLUCOSILACIN DE PROTENAS 223

vesculas (seccin H4). A medida que se mueve a travs
del complejo de Golgi, el oligosacrido es recortado
o procesado con frecuencia, con los seis residuos de
manosa terminales, que se remueven para dejar el cen-
tro de pentasacrido (figuras H5-4 y H5-5). Entonces,
en el complejo de Golgi, pueden aadirse residuos adi-
cionales de manosa y otros monosacridos al oligosa-
crido para generar el tipo complejo de oligosacridos
(figura H5-5; seccin J2, figura J2-3).

a)
Oligosacrido P P Dol

PROTENA Oligosacrido - Centro de pentasacrido -

PROTENA PROTENA

P P Dol 3Glu 6Man

UDPGlcNAc
UDP-Gal
cido silico CMP

UDP + CMP

Complejo de
oligosacrido-protena
del tipo con enlace
tipo N

Sucede en el RER Sucede en el aparato de Golgi

(glucosilacin central) (glucosilacin terminal)

b)

Man
Asn GIcNAc GIcNAc Man
Man
X

Ser (Thr)

Figura H5-5. a) Transferencia del oligosacrido enlazado al N a una protena y su

procesamiento ulterior en el RER y el aparato de Golgi (vase el texto para mayores
detalles); b) estructura del centro de pentasacrido de los oligosacridos enlazados
al N.
SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

I1El poder de los mtodos

de DNA recombinante
Notas clave

Genmica La genmica se refiere a los estudios del genoma de un organismo. El anlisis

de la funcin gnica (genmica funcional) descansa en un espectro de tcni-
cas que incluyen la gentica inversa y la interferencia del RNA (RNAi).

Transcriptmica y La transcriptmica es el estudio del transcriptoma (el RNA expresado), en tan-

protemica to que la protemica es el estudio del proteoma (las protenas que se sinte-
tizan).

Metabolmica La metabolmica es el estudio de los componentes moleculares pequeos

de una clula, es decir, el metaboloma.
Organismos transgnicos Los organismos transgnicos son aquellos que han sido modificados por la
insercin de un(unos) gen(es) clonado(s).

Temas relacionados (C3) Secuenciacin de protenas y sn- (I4) Clonacin del DNA
tesis de pptidos (I5) Secuenciacin del DNA
(I2) Enzimas de restriccin (I6) Reaccin en cadena de la polime-
(I3) Hibridacin de cidos nucleicos rasa

Genmica es asombrosa; tom 10 aos secuenciar un genoma y

En la actualidad se vive en una era de descubrimien-
tos biolgicos sin precedentes, as como de aplicacin
del conocimiento biolgico. El primer genoma secuen-
ciado, en 1977, fue el de un pequeo virus bacteriano
(bacterifago) denominado X174 con slo 11 genes
y alrededor de 5 000 pares de bases de DNA, es decir, A
pareada con T, y G pareada con C. En contraste, el
genoma humano consiste en alrededor de 3.2 miles
de millones de pares de bases! El Proyecto del genoma
humano diseado para secuenciar el genoma hu-
mano comenz de manera oficial en 1990. Los avances
en la secuenciacin automatizada del DNA permitieron el
anuncio del primer borrador del genoma humano (alre-
dedor de 90%) el 26 de junio del ao 2000. Para 2003, la
secuencia estaba esencialmente completa.
En junio de 2010, slo 10 aos despus que se anunci
el primer borrador del genoma humano, el Wellcome
Trust, en Reino Unido, puso en marcha un proyecto para
secuenciar 10 000 genomas humanos en los siguientes
tres aos! Este proyecto, apodado UK10K, intentar
identificar variables genticas raras que son importan-
tes en la enfermedad gentica humana al enfocarse en
las regiones que contienen genes de estos genomas (lla-
madas exomas). La evolucin del cambio tecnolgico
tomar slo tres aos secuenciar 10 mil.
Esta vasta riqueza de datos de la secuencia del DNA en
constante crecimiento es un activo importante de la
genmica, el estudio del genoma de un organismo.
Uno de los objetivos clave es entender las funciones de
grandes nmeros de los nuevos genes previstos por la
secuenciacin del genoma, un campo conocido como
genmica funcional. Un planteamiento para revelar
la funcin de un gen se denomina gentica inversa,
por la cual puede crearse una mutacin en un gen clo-
nado y el gen modificado puede introducirse dentro de
una clula hospedadora para estudiar los efectos de la
mutacin. El mtodo se llama gentica inversa ya que
se comienza con un gen y luego con la creacin de un
mutante, lo que representa la ruta inversa de la gen-
tica tradicional, en la cual los mutantes se usaron para
identificar genes. Otro mtodo til es la interferencia
del RNA (RNAi), donde en las clulas se introduce un RNA
de doble cadena (dsRNA) que se corresponde con las
cadenas con sentido y antisentido del gen bajo inves-
tigacin. El dsRNA es degradado in vivo, y determina
que los fragmentos resultantes de los pares de bases
de mRNA del gen objetivo se degraden tambin, lo que
significa que se anula la expresin del gen. El estudio
 I1EL PODER DE LOS MTODOS DE DNA RECOMBINANTE
de los efectos celulares de esta prdida de la funcin
proporciona evidencia del papel del gen in vivo.
Transcriptmica y protemica
Por analoga con el trmino genoma, el transcrip-
toma es toda la secuencia del RNA transcrita del genoma
de una clula y el proteoma son todas las protenas
expresadas de esa clula. Mientras todas las clulas de
un organismo como el humano contienen en esencia
el mismo genoma, el transcriptoma y el proteoma de
diferentes tipos de clulas varan de acuerdo con los
genes que se expresan. Por ejemplo, el transcriptoma
y el proteoma de una clula heptica son diferentes de
los de una neurona.
La transcriptmica se refiere a estudios del transcrip-
toma e incluye, por ejemplo, el uso de microordena-
mientos de DNA (seccin I3) para determinar los perfiles
de expresin. La protemica es el estudio del proteoma.
La metodologa usada para estudiar un proteoma se
llama perfilamiento de protenas o protemica de
expresin.
El perfilamiento de protenas depende en gran medida
del uso de la electroforesis bidimensional en gel (sec-
cin C2) para separar las protenas expresadas por una
clula o tejido, seguida por la espectrometra de masa
para producir las huellas digitales de las masas de
pptidos de cada protena (seccin C3). Las protenas
expresadas pueden entonces identificarse por compa-
racin de estas huellas digitales con las bases de datos
de las huellas digitales, incluidas aquellas previstas a
partir de los datos de la secuencia del DNA. En vista de la
extensa escala de tales tcnicas, muchos de estos proce-
dimientos estn automatizados por necesidad.
Metabolmica
Juntas, la genmica, transcriptmica y protemica son
mtodos poderosos para incrementar el conocimiento
no slo de cmo funcionan las clulas normales sino
tambin sobre cules son los cambios clave en la enfer-
medad. As, estas tcnicas encontrarn un uso cada vez
mayor en el diagnstico de enfermedades especficas y
en la identificacin y valoracin de nuevos agentes qui-
mioterpicos.
La metabolmica representa quiz el ms nuevo de
estos campos de estudio y se relaciona con el estudio
de los componentes moleculares pequeos de las clu-
las. La coleccin completa de metabolitos de una clula
o tejido bajo condiciones especficas se denomina el
metaboloma. Por anlisis de los metabolitos de una
clula, se puede generar un perfil metablico que indica
la actividad metablica de la clula; la informacin que
puede proveer es til para una diversidad de aplicacio-
nes, como el diagnstico clnico y el descubrimiento de
frmacos.
225
El estudio del metaboloma depende de los mtodos
para separar las diversas clases de molculas pequeas
(como la cromatografa lquida y de gases, la croma-
tografa lquida de alto desempeo y la electroforesis
capilar) y de mtodos poderosos para la identificacin
y cuantificacin de metabolitos (p. ej., la espectrome-
tra de masa, la espectroscopia infrarroja, la resonancia
magntica nuclear).
Cuando esta informacin se combina con informacin
acerca de las tasas de reaccin de los diferentes pasos
de las vas metablicas, es posible construir modelos del
flujo metablico, es decir, del flujo de metabolitos a lo
largo de diferentes vas. De manera ideal, se podra decir
que se es capaz de conocer el flujo metablico de los
tejidos sanos y compararlo con el de varios estados de
enfermedad. Esta informacin puede conducir al diseo
de frmacos para invertir o superar la actividad meta-
blica indeseable relacionada con los estados de enfer-
medad. Ahora mismo, estos mtodos para estudiar las
clulas eucariotas estn en sus albores, con una gran
parte del trabajo centrado en organismos simples como
las levaduras. Pero si pueden idearse tcnicas para el
anlisis metabolmico a gran escala junto a las lneas de
las tcnicas que se emplean en la genmica, protemica
y transcriptmica, pueden esperarse progresos futuros
rpidos.
Organismos transgnicos
Como se estn conociendo las funciones de los genes
individuales, el poder de esta nueva biologa puede uti-
lizarse para modificar organismos de manera predeci-
ble y deseable. Los organismos que han sido modifica-
dos por la insercin de un gen clonado se denominan
organismos transgnicos; las plantas transgnicas y
los animales transgnicos son posibles. Tales mto-
dos no son slo de importancia acadmica sino que
estn aumentando el descubrimiento de aplicaciones
comerciales. Por ejemplo, las plantas modificadas con
resistencia aumentada a las plagas o resistencia a los
virus encierran obvios atractivos para la agricultura. Sin
embargo, hay consideraciones ticas importantes que
deben aplicarse para usar esta nueva tecnologa tanto
en plantas como, incluso ms controversiales, en ani-
males (incluidos los seres humanos).
Esta riqueza de conocimiento acerca del genoma y su
expresin, y la aplicacin de este conocimiento, depen-
den de una amplia gama de herramientas y tcnicas
con el DNA recombinante. Muchos de los mtodos expe-
rimentales actuales son complejos en extremo y estn
ms all de la perspectiva de este texto introductorio.
Pese a ello, las secciones siguientes proporcionan infor-
macin de parte de la metodologa central: la capacidad
de cortar el DNA en sitios especficos mediante el uso de
endonucleasas de restriccin (enzimas de restriccin;
seccin I2), procedimientos que permiten la deteccin
226 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE
de secuencias especficas de DNA (y RNA) con gran pre-
cisin (hibridacin de cidos nucleicos; seccin I3),
mtodos para la preparacin de secuencias especficas
de DNA en grandes cantidades en forma pura (clonacin
del DNA; seccin I4) y secuenciacin rpida del DNA (sec-
cin I5). Ms recientemente, el desarrollo de la reaccin
en cadena de la polimerasa (PCR) (seccin I6) revolu-
cion el campo de la biologa molecular y de aplicacio-
nes clave como en la medicina forense. Para terminar,
esta seccin pone en evidencia la capacidad actual para
modificar las secuencias del DNA a voluntad mediante la
mutagnesis dirigida al sitio (seccin I7), lo que per-
mite disear nuevas protenas.
Dado que este libro se enfoca en el asunto central de la
bioqumica, hay muchos aspectos excitantes en la tec-
nologa del DNA recombinante que no pueden incluirse
debido a la falta de espacio. Para una descripcin ms
extensa, se recomienda al lector consultar BIOS Notas
instantneas de biologa molecular.
SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

I2Enzimas de restriccin
Notas clave
Digestin de la enzima Las enzimas de restriccin identifican secuencias de reconocimiento especfi-
de restriccin cas y cortan el DNA, al que dejan extremos coherentes o desprolijos. Las enzimas
de restriccin tienen un nombre de tres letras basado en el gnero y nombre de
la especie de la bacteria a partir de la cual fue aislada, junto con un numeral
romano diseado para indicar la identidad de la enzima en casos en los que la
bacteria contiene varias enzimas de restriccin diferentes. De los tres tipos de
enzimas de restriccin (tipos I, II y III), las enzimas de tipo II son las de mayor
uso en el trabajo con el DNA recombinante debido a que siempre lo cortan en el
mismo sitio en relacin con la secuencia de reconocimiento. Los extremos de
las molculas de DNA restringidas pueden unirse para crear nuevas molculas
de DNA recombinante.

Electroforesis en gel Los fragmentos de DNA en un digerido de restriccin pueden separarse por ta-
mao mediante electroforesis en gel de poliacrilamida o agarosa. El gel de po-
liacrilamida se usa para separar las molculas de DNA ms pequeas, mientras
que el gel de agarosa tiene poros de tamao ms grande y de esa manera pue-
de separar fragmentos de DNA de mayor tamao. El espectro de tamao exacto de
los fragmentos de DNA que pueden separarse en un gel determinado depen-
de de la concentracin de gel usada, ya que el tamao de los poros del gel dis-
minuye a medida que la concentracin de gel se incrementa.

Mapas de restriccin Un mapa que muestra la posicin de los sitios de corte de una diversidad de
enzimas de restriccin se denomina mapa de restriccin para esa molcula
de DNA. Los mapas de restriccin son tiles en los experimentos con DNA recom-
binante para la planeacin del sitio y la manera de cortar molculas especficas
de DNA y a veces tambin para estudiar el progreso de un experimento.

Polimorsmos de Un polimorfismo de longitud del fragmento de restriccin (RFLP) es una diferen-

longitud del fragmento cia comn entre los DNA de individuos de una poblacin (es decir, un polimor-
de restriccin fismo) que afecta el tamao de los fragmentos producidos por una enzima de
restriccin especfica. Si los RFLP se hallan cerca de un gen, cuyas mutaciones
pueden causar una enfermedad gentica humana, pueden ser usados como
un marcador para tal gen. En el pasado, los RFLP han demostrado valor para
detectar pacientes con un defecto gentico y tambin en estudios dirigidos a
la clonacin de un gen. Sin embargo, los RFLP se usan cada vez menos en tales
trabajos ya que los genes en s se han identificado. La reaccin en cadena de
la polimerasa (PCR) es el mtodo de eleccin cada vez ms extendido para la
deteccin.

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA

(I3) Hibridacin de cidos nucleicos
(I4) Clonacin del DNA

Digestin de la enzima de restriccin en el DNA de cadena doble, las cuales suelen ser de cua-
Las enzimas de restriccin reconocen secuencias de tro, cinco o seis nucletidos de longitud, y por lo tanto
nucletidos especficas (secuencias de reconocimiento) cortan ambas cadenas del DNA en sitios especficos.
228 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

BamH l Pvu II Kpn l

GGATCC CAGCTG GGTACC

CCTAGG GTCGAC CCATGG

5'
G3' GATCC C A G 3' 5'
CTG G G T A C 3' 5'
C
3'
C C T A G5' G G T C 5' 3'
GAC C 5' 3'
CATGG
5 sobresaliente Extremo romo 3 sobresaliente

Figura I2-1. Los tres tipos de escisiones de la enzima de restriccin

de uso ms amplio.

Hay tres tipos de enzimas de restriccin: tipos I, II y III.
Las enzimas de tipo I y III no cortan el DNA en localiza-
ciones especficas con respecto a la secuencia de reco-
nocimiento y de esta manera son menos tiles para el
trabajo con el DNA recombinante en el laboratorio. No
obstante, las enzimas de tipo II siempre cortan en la
misma localizacin dentro de la secuencia de recono-
cimiento o cerca de ella, lo cual las vuelve herramientas
experimentales poderosas.
Las enzimas de restriccin se aslan de bacterias, donde
desempean un papel en la proteccin de la clula
hospedadora contra la infeccin viral. Han sido ais-
ladas ms de 2 500 enzimas de restriccin de tipo II
hasta el presente y han sido nombradas de acuerdo con
las especies bacterianas de las cuales provienen. Las
primeras tres letras del nombre de la enzima son la pri-
mera letra del nombre genrico y las primeras dos letras
del nombre de la especie. Como cada bacteria puede
contener diferentes enzimas de restriccin, tambin se
usa un numeral romano para identificar cada enzima.
La EcoRI, por ejemplo, fue la primera enzima aislada de
Escherichia coli.
De manera esencial, una enzima de tipo II puede cortar
el DNA de tres formas diferentes: corte escalonado para
dejar un 5 sobresaliente (es decir, se deja que una
regin corta de una cadena del DNA tenga un extremo 5
que sobresalga del extremo de la doble cadena del DNA),
un corte escalonado para dejar un 3 sobresaliente, un
corte en el mismo sitio en ambas cadenas para dejar
un extremo romo (figura I2-1). En enzimas que cor-
tan de la manera escalonada, las colas de una cadena
se denominan extremos adhesivos o pegajosos debido
a que permiten que cualquiera de los dos fragmentos
de DNA producidos por la misma enzima de restriccin
forme pares de bases complementarios (figura I2-2).
Una enzima que se denomina ligasa de DNA puede unir
los extremos cortados (ligarlos). La nueva molcula
de DNA que se elabora al unir los fragmentos del DNA se
denomina molcula de DNA recombinante (figura I2-2).
Las molculas de DNA que terminan en forma roma

DNA 1 DNA 2

GAATTC GAATTC
CTTAAG CTTAAG

EcoRI EcoRI

G AATTC G AATTC
CTTAA G CTTAA G

Hibridacin de los fragmentos

de DNA y unin mediante
la ligasa de DNA

G AATTC G AATTC
CTTAA G CTTAA G

Molculas de DNA recombinante

Figura I2-2. Uso de la enzima de restriccin EcoRI para crear DNA

recombinante.
 I2ENZIMAS DE RESTRICCIN 229

5 GA T C 3 5 GG A T C C 3
3 C T AG 5 3 C C T A GG 5

Sau3AI BamHI

5 5
5 GA T C 3 5 G GA T CC 3
3 C T A G 5 5 3 C C T A G 5 G 5

Figura I2-3. Ejemplo de dos enzimas de restriccin con diferentes secuencias de

reconocimiento que producen los mismos extremos adherentes despus de su
divisin; Sau3AI (sitio de reconocimiento 5GATC3) y BamHI (sitio de
reconocimiento 5GGATCC3).

tambin pueden juntarse mediante una ligasa de
pero la reaccin es menos favorable.
Una caracterstica muy til es que algunas enzimas de
restriccin tienen diferentes secuencias de reconoci-
miento, pero generan los mismos extremos adhesivos,
lo que permite que los fragmentos de DNA que originan
estas dos enzimas diferentes se puedan unir. Por ejem-
plo, Sau3AI tiene una secuencia de reconocimiento
de cuatro pares de bases de 5-GATC-3, mientras que
BamHI identifica la secuencia de reconocimiento de
seis pares de bases 5-GGATCC-3, pero cada una genera
DNA, un extremo pegajoso 5-GATC-3 (figura I2-3) que puede
enlazarse con el otro para formar una molcula de DNA
recombinante.
Electroforesis en gel
Cuando una enzima de restriccin corta una molcula
de DNA, los fragmentos de DNA (llamados fragmentos de
restriccin) procedentes de esa digestin restringida
pueden separarse por electroforesis en gel (figura I2-4).
La electroforesis en un gel de poliacrilamida separa frag-
mentos pequeos de DNA de menos de 500 bp de tamao,

1 2

23 130

9 416
6 557
4 361 Direccin
de migracin
2 322
2 027

564

Figura I2-4. Electroforesis en gel de agarosa de fragmentos de DNA. Los

fragmentos de DNA de tamao conocido se sometieron a electroforesis en el
carril 1 (los tamaos en bp se proporcionan a la izquierda). Un digerido de
restriccin de la muestra de DNA se someti a electroforesis en el carril 2.
Por comparacin con las posiciones de migracin de los fragmentos del
carril 1, se puede advertir que los dos fragmentos de la muestra de DNA
tienen tamaos cercanos a los 9 000 y 2 000 bp. Los tamaos pueden
determinarse con ms exactitud si los datos del carril 1 se gracan como una
curva estndar del log del tamao del DNA contra la distancia de migracin y
se usa el resultado para estimar el tamao de los fragmentos de la muestra
de DNA si se toman como base las medidas de sus distancias de migracin.
230 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE
en tanto que los geles de agarosa (que tienen poros ms
grandes) son necesarios para separar fragmentos de
DNA ms grandes. En cada caso, el tamao de los poros
del gel disminuye en la medida que se incrementa la
concentracin del gel, de manera que la concentracin
usada del gel determina el espectro del tamao de los
fragmentos de DNA que puede separar cada concentra-
cin del gel.
Durante la electroforesis del DNA que ha sido digerido
por una enzima de restriccin, los diversos fragmentos
de restriccin se separan en una serie de bandas en el
gel. Como los fragmentos pequeos se trasladan ms
en el gel que los fragmentos ms grandes, el tamao
de cada fragmento puede determinarse al medir la dis-
tancia de migracin con respecto a la de los fragmentos
estndar de DNA de tamao conocido (figura I2-4).
Despus de la electroforesis, el DNA puede localizarse en
el gel mediante su tincin con bromuro de etidio, que se
une al DNA y lo hace fluorescer bajo la luz UV. De manera
alternativa, si el DNA se marca con un radioistopo como
el 32P, la bandas pueden detectarse despus de la elec-
troforesis al colocar el gel contra una pelcula de rayos
X, en la que la radiactividad determina que se formen
granos de plata en la emulsin de la pelcula, lo que pro-
duce imgenes negras que corresponden a las bandas
radiactivas (autorradiografa).
Mapas de restriccin
Cualquier DNA bicatenario ser cortado por una diver-
sidad de enzimas de restriccin que identifican dife-
rentes secuencias de reconocimiento. Tras separar los
fragmentos de restriccin y medir sus tamaos en la
electroforesis en gel, es posible deducir dnde produjo
el corte cada enzima de restriccin en la molcula de
DNA. Se puede dibujar un mapa de restriccin de la
molcula de DNA en el que se muestre la localizacin de
tales sitios de corte (sitios de restriccin) (figura I2-5).
Los mapas de restriccin son tiles en el contexto expe-
rimental durante el trabajo con DNA recombinante, por
ejemplo, para identificar molculas especficas de DNA
por su mapa distintivo, para planear dnde sera mejor
cortar determinadas molculas de DNA para valorar el
progreso del experimento.
E BX
0 5
Miles de nucletidos de DNA (es decir, kilobases, kb)
Figura I2-5. Mapa de restriccin tpico de una molcula de DNA. Se
muestran los sitios de corte, indicados por letras, de diferentes enzimas
de restriccin. Por ejemplo, E denota los sitios donde corta EcoRI.
Polimorsmos de longitud
de los fragmentos de restriccin
El anlisis del DNA genmico humano ha revelado que
hay muchas diferencias en la secuencia del DNA entre
individuos que no tienen efecto obvio, con frecuen-
cia debido a los cambios que se encuentran en intro-
nes o entre genes. Algunos de estos cambios son muy
comunes en individuos de una poblacin y se denomi-
nan polimorfismos. Algunos polimorfismos afectan el
tamao de los fragmentos generados por una enzima
de restriccin particular, por ejemplo al cambiar un
nucletido en la secuencia de reconocimiento y de esa
manera eliminar un sitio de corte. En lugar de que esa
regin genere dos fragmentos de restriccin, ahora se
forma un solo fragmento de restriccin grande (figura
I2-6). De forma alternativa, el polimorfismo puede
resultar de la insercin o delecin de secuencias entre
dos sitios de corte, y de esa manera incrementar o dis-
minuir el tamao de los fragmentos de restriccin pro-
ducidos. Un polimorfismo que afecta los tamaos de
los fragmentos de restriccin se llama polimorfismo
de longitud de los fragmentos de restriccin (RFLP). Con
la condicin de que exista una sonda de DNA (seccin I3)
para una secuencia de DNA de una regin afectada, de
manera que esta secuencia pueda detectarse por hibri-
dacin, los RFLP pueden detectarse por Southern blotting
(seccin I3).
El valor de los RFLP ha descansado en la capacidad de
usarlos como marcadores de enfermedades genticas
humanas especficas. Debe tomarse en cuenta un poli-
morfismo que est muy cerca del sitio de un cambio en
un gen clave que resulta en una enfermedad gentica
humana (figura I2-6). Debido a que estos dos cambios,
el polimorfismo y el defecto gentico, estn muy cerca
en el mismo cromosoma, tienden a ser cohereditarios.
La identificacin de tales RFLP enlazados de forma muy
cercana tiene dos ventajas principales. Primero, los
experimentos pueden dirigirse a la clonacin del DNA
cerca del RFLP en espera de identificar el gen en s mismo,
el cual puede por lo tanto secuenciarse y estudiarse.
Segundo, incluso en ausencia del gen, el RFLP acta como
un marcador de deteccin de la enfermedad; los indi-
viduos que portan el RFLP tienen una probabilidad ms
alta de tener el defecto gnico asociado. Por supuesto,
E SCX B
10 15 20
 I2ENZIMAS DE RESTRICCIN 231

otros RFLP que se localizan a una gran distancia del gen, servir para localizar un RFLP que de manera rutinaria se
o incluso en un cromosoma diferente, estarn esencial- coherede con el defecto gnico.
mente desligados (es decir, debido a la alta probabilidad
A medida que los genes son identificados y secuencia-
de eventos cruzados durante la meiosis para producir
dos, la necesidad de marcadores RFLP declina debido a
clulas de lnea germinal, el gen y el RFLP tendran slo
que pueden emplearse sondas de DNA especficas (sec-
una probabilidad de 50:50 de ser cohereditarios). Por lo
cin I3) para los tipos ms comunes de defectos gni-
tanto, debe llevarse a cabo una gran cantidad de tra-
cos. Adems, en la deteccin de la enfermedad gentica
bajo muy minucioso para identificar un RFLP til para
humana, el uso de la reaccin en cadena de la polime-
una enfermedad gentica humana particular. Necesitan
rasa (PCR; seccin I6) se est convirtiendo en el mtodo
tamizarse grandes nmeros de individuos de grupos
de eleccin en lugar de los anlisis del RFLP ya que es
familiares, algunos de los cuales sufren la enfermedad,
mucho ms rpida de realizar y requiere mucho menos
para acceder a un espectro de posibles RFLP que puedan
material clnico para el anlisis.

a) b) Falciforme

HpaI HpaI* HpaI

14.0kb

HpaI HpaI 7.6kb

7.6 kb 6.4 kb

Sonda de DNA

Figura I2-6. Anlisis de una enfermedad gentica humana por medio

de los RFLP. El anlisis se reere a dos individuos de una familia, uno de
los cuales presenta una globina normal y el otro tiene el gen de la
globina anormal, por lo que produce anemia de clulas falciformes.
a) La globina falciforme se relaciona con un cambio de nucletido
que provoca la prdida del sitio Hpal*, marcado con un asterisco. La
presencia o ausencia de este sitio Hpal* se detecta por hibridacin y
Southern blotting (seccin I3) con el concurso de una sonda de DNA para
el fragmento de 7.6 bp; b) el DNA normal con tres sitios Hpal produce un
fragmento de 7.6 bp que se detecta con la sonda de DNA, pero el DNA
falciforme produce un fragmento de 14.0 bp debido a la prdida del
sitio Hpal*.
SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

I3Hibridacin de cidos nucleicos

Notas clave
La reaccin de El DNA de doble cadena se desnaturaliza en cadenas simples a medida que la
hibridacin temperatura aumenta, pero se renaturaliza en una estructura de doble cadena
a medida que la temperatura desciende. Cualquier molcula de cido nucleico
de dos cadenas simples puede formar estructuras de doble cadena (hibridar)
con la condicin de que tenga suficientes secuencias de nucletidos comple-
mentarios para lograr que el hbrido resultante sea estable bajo condiciones de
reaccin.
Determinacin de La concentracin de una secuencia especfica de cidos nucleicos en una mues-
secuencias de cidos tra puede medirse por hibridacin con una sonda apropiada de DNA marcado.
nucleicos especcas Despus de la hibridacin, se usa una nucleasa para destruir la sonda sin hi-
bridar y la sonda restante es una medida de la concentracin de la secuencia
objetivo. Las condiciones de hibridacin pueden alterarse para asegurar que
slo las secuencias idnticas (condiciones de alta rigurosidad) o las secuencias
idnticas ms las secuencias relacionadas (condiciones de baja rigurosidad) se-
rn hibridadas con la sonda y por lo tanto detectadas.
Southern blotting La prueba de Southern blotting incluye la electroforesis de las molculas de DNA
en un gel de agarosa y luego el manchado de las bandas de DNA separadas en un
filtro de nitrocelulosa. A continuacin el filtro se incuba con una sonda de DNA
marcado para detectar las bandas de DNA separadas que contienen las secuen-
cias complementarias de la sonda.
Northern blotting La prueba de Northern blotting es anloga de la Southern blotting, excepto que
la muestra de cido nucleico que se separa por electroforesis en gel es RNA, en
lugar de DNA.
Hibridacin in situ Para la hibridacin in situ, se incuba una muestra de tejido con una sonda de
cido nucleico marcado, el exceso de la sonda se lava y se examina la locali-
zacin de la sonda hibridada. La tcnica permite la localizacin espacial de la
expresin gnica a determinar, as como la localizacin de genes individuales
en los cromosomas.
Microordenamientos de Un microordenamiento de DNA es un nmero grande de fragmentos de DNA o de
DNA (chips de DNA) oligonucletidos dispuestos en posiciones conocidas en una lmina de vidrio o
silicona. Despus de la hibridacin con DNA complementario objetivo marcado
con fluorescencia (cDNA), el examen mediante el uso de microscopia automati-
zada con lser de exploracin indica cules secuencias de DNA se expresan.

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA

(I2) Enzimas de restriccin

La reaccin de hibridacin temperatura se disminuye y cae por debajo de la Tm,

A medida que el DNA de doble cadena se calienta, se
alcanza una temperatura a la cual las dos cadenas de
reaccin se separan. Este proceso se denomina desna-
turalizacin. La temperatura a la cual la mitad de las
molculas del DNA se desnaturaliza se llama la tempe-
ratura de fusin o Tm de ese DNA. Si a continuacin la
las dos cadenas complementarias formarn enlaces de
hidrgeno entre ellas una vez ms para reconstituir una
molcula de doble cadena. Este proceso se llama rena-
turalizacin (o reasociacin).
De hecho, pueden formarse estructuras de doble cadena
entre cualquiera de las molculas de cidos nucleicos de

dos cadenas simples (DNA-DNA, DNA-RNA, RNA-RNA), siem-
pre que tengan suficientes secuencias de nucletidos
complementarios para producir una molcula de doble
cadena estable bajo las condiciones usadas. El nombre
general que se le da a este proceso es hibridacin y el
producto de cidos nucleicos de doble cadena se llama
hbrido.
Determinacin de secuencias de cidos
nucleicos especcas
La tasa de formacin de hbridos de doble cadena
depende de la concentracin de las especies de dos
cadenas simples. Esto puede usarse para medir la con-
centracin de secuencias de DNA o RNA especficas en
una mezcla compleja. La primera tarea es preparar una
sonda de DNA de cadena simple (es decir, un fragmento
de DNA que sea complementario del cido nucleico que
se est ensayando). sta puede ser una cadena de un
fragmento de restriccin de DNA, DNA clonado o un oli-
gonucletido sinttico. ste debe ser marcado con el fin
de que sea capaz de detectar la formacin de hbridos
entre l y el cido nucleico objetivo. En tanto que la
mayora de las marcaciones usadas consiste en la incor-
poracin de un radioistopo, puede usarse en su lugar
un marcador qumico no radiactivo. Por ejemplo, una
sonda de DNA puede marcarse con digoxigenina, un este-
roide, por medio de dUTP marcado con digoxigenina
durante la sntesis del DNA. Por lo tanto, los hbridos que
contienen la sonda de DNA marcado con digoxigenina
pueden detectarse mediante un anticuerpo antidigoxi-
genina ligado a un colorante fluorescente.
De manera independiente del mtodo de marcacin de
la sonda, la sonda de DNA se incuba con la muestra del
cido nucleico (el DNA o RNA objetivo) y luego se aade
nucleasa para degradar cualquier fraccin de la sonda
de una cadena sin hibridar. La cantidad de sonda mar-
cada que permanece indica la concentracin del cido
nucleico objetivo en la muestra.
Las condiciones de hibridacin (es decir, temperatura,
concentracin de sales) pueden variarse con el prop-
sito de gobernar el tipo de hbridos que se forman. Las
condiciones pueden establecerse de manera que slo
los hbridos perfectamente pareados sean estables y en
consecuencia puedan ensayarse (condiciones conocidas
como de alta rigurosidad). De manera alternativa, las
condiciones pueden ser tales que incluso los hbridos de
baja complementariedad sean estables y puedan detec-
tarse (rigurosidad baja). En consecuencia, mediante la
variacin de las condiciones de la reaccin es posible
detectar y cuantificar slo aquellas secuencias objetivo
que sean idnticas a las de la sonda de DNA o, en forma
alternativa, detectar y cuantificar secuencias relaciona-
das. La hibridacin de las sondas de cido nucleico con
DNA genmico, por ejemplo, puede usarse para medir el
nmero de copias de secuencias de DNA particulares en
el genoma. La hibridacin de una sonda de DNA con RNA
I3HIBRIDACIN DE CIDOS NUCLEICOS 233
celular como el objetivo indicar la concentracin del
correspondiente transcrito de RNA y por lo tanto brindar
informacin acerca del nivel de expresin del gen.
Southern blotting
La electroforesis en gel se usa en forma amplia para
separar y establecer el tamao de las molculas de DNA
durante los experimentos con DNA recombinante. Des-
pus de la electroforesis en gel, hay una necesidad fre-
cuente de detectar uno o ms fragmentos de DNA que
contengan una secuencia de nucletidos especfica. El
Southern blotting una tcnica as llamada en honor al
nombre de su inventor, Edwin Southern resuelve esta
necesidad con facilidad.
En el mtodo de manchado capilar original, despus de
la electroforesis de los fragmentos de restriccin a travs
de un gel de agarosa, el gel es pasado por un lcali pa-
ra desnaturalizar el DNA en cadenas simples y entonces se
neutraliza el pH. El gel se pone en contacto con un filtro
de una membrana de nitrocelulosa o nylon dispuesta de
manera tal que el amortiguador fluya a travs del gel y
transporte los fragmentos del DNA hacia la membrana
(figura I3-1). La membrana se une al DNA de cadena
simple y de esta manera el patrn de bandas del gel es
transferido a ella. El filtro de membrana es separado
del gel, horneado a una temperatura alta para fijar
el DNA que contiene, y luego incubado con una sonda de
DNA radiomarcada. Despus de la hibridacin, la sonda
estar unida slo a los fragmentos de DNA que tengan las
secuencias complementarias. Esto puede visualizarse
mediante el lavado del exceso de la sonda y la coloca-
cin posterior del filtro contra una pelcula de rayos X
para realizarle una autorradiografa. Las imgenes que
se producen en la autorradiografa indican las bandas
que contienen la secuencia de la sonda (figura I3-1).
El Southern blotting todava se utiliza en forma amplia,
aunque en muchos laboratorios el DNA puede trans-
ferirse desde el gel a la membrana de nitrocelulosa o
nylon por transferencia electrofortica ms que por
manchado capilar.
Northern blotting
El Northern blotting sigue en su mayor parte los mismos
procedimientos que el Southern blotting, excepto que
la muestra se analiza por electroforesis en gel y luego lo
que se une al filtro es RNA y no DNA. En consecuencia, el
Northern blotting detecta molculas de RNA complemen-
tarias con la sonda de DNA. Si el RNA celular se somete a
electroforesis, por ejemplo, podra utilizarse una sonda
de DNA para un mRNA especfico para detectar si dicho
mRNA estuvo presente en la muestra. La distancia de
migracin del RNA en el gel podra tambin permitir la
estimacin de su tamao.
Ntese que no existe un inventor denominado Nor-
thern; este nombre se acu debido simplemente a que
234 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

Cavidades usadas para cargar

las muestras
Gel de agarosa
Fragmento de DNA complementario
Direccin de la para la sonda marcada
electroforesis

Remojar en lcali para desnaturalizar el DNA

Membrana de Neutralizar el pH
nitrocelulosa Toallas de papel

Gel de agarosa Accin de las hojas de

papel de ltro como mecha
del amortiguador

Transferir el amortiguador

Hibridar la membrana de nitrocelulosa

con una sonda marcada
Efectuar la autorradiografa

Imagen de una sola banda,

lo que indica que la sonda
hibrid slo ese fragmento de DNA

Figura I3-1. Southern blotting. El procedimiento que se ilustra es el

mtodo original de Southern, que utiliza la accin capilar para manchar
las bandas de DNA desde el gel a la membrana de nitrocelulosa. En el
presente se usa la transferencia electroltica en su lugar.

la tcnica original para el DNA se denomin Southern, de
manera que se recurri a un juego de palabras relacio-
nado con ambos puntos geogrficos.
Hibridacin in situ
Tambin es posible incubar sondas de cidos nucleicos
radiactivos o fluorescentes con secciones de tejidos o
incluso cromosomas, lavar el exceso de la sonda y luego
detectar dnde se hibrid la sonda. Esta tcnica (hibri-
dacin in situ) ha demostrado ser muy poderosa en la
determinacin de cules clulas en un tejido complejo
como el cerebro de los mamferos expresa un gen parti-
cular y para localizar genes especficos en cromosomas
individuales.
Microordenamientos de DNA
(chips de DNA)
Las tcnicas que acaban de describirse tienen la limita-
cin de que slo puede analizarse un pequeo nmero
relativo de muestras al mismo tiempo. En contraste,
los microordenamientos de DNA (chips de DNA, chips
gnicos) pueden analizar la expresin de decenas de
miles de genes de manera simultnea. Un microorde-
namiento de DNA es un gran nmero de secuencias de
DNA que se mancha sobre una lmina de vidrio o sili-
cona en un patrn de rejilla predeterminado; dado el
alto nmero de secuencias de DNA que interviene, se
hace mediante un sistema robtico. En otros casos,
en lugar del manchado de los fragmentos de DNA, el
microordenamiento de DNA puede producirse al sinteti-
zar miles de oligonucletidos sobre la lmina de vidrio
in situ, tantos como 300 000 oligonucletidos por cen-
tmetro cuadrado (ordenamientos de alta densidad). El
microordenamiento, que contiene fragmentos de DNA u
oligonucletidos, puede entonces ser usado para explo-
rar la expresin de cada una de las secuencias de DNA
del tejido o la muestra de inters por hibridacin. En la
terminologa de la hibridacin (vase antes), los DNA u
oligonucletidos del microordenamiento son la sonda
y el RNA del tejido o la muestra es el objetivo.
 I3HIBRIDACIN DE CIDOS NUCLEICOS 235

Para comprender cmo se usan los microordenamientos
de DNA, considrese la siguiente aplicacin tpica (figura
I3-2). Imagnese que el objetivo es determinar qu genes
estn regulados por una hormona que acaba de descu-
brirse. Las clulas se exponen a la hormona (muestra de
la prueba) o se dejan sin tratar (muestra control), el RNA se
asla de cada muestra y se usa para sintetizar el DNA com-
plementario (cDNA) mediante la transcriptasa inversa.
Cuando se sintetiza cDNA a partir del RNA de la mues-
tra de la prueba, uno de los nucletidos precursores es
marcado con, por ejemplo, un colorante fosforescente
rojo, de manera que el cDNA resultante es tambin eti-
quetado con esta marca. El cDNA de la muestra control
se marca de manera similar, pero con, por ejemplo, un
colorante fosforescente verde. Los dos cDNA se mezclan
juntos y se les permite que hibriden con el microorde-
namiento de DNA. Se lava y elimina cualquier cDNA que
no haya hibridado y el microordenamiento de DNA se
examina con un microscopio automatizado de explo-
racin con lser. La excitacin con lser del microor-
denamiento con luz de la longitud de onda apropiada
excita el fluorforo relevante y mide la intensidad de la
fluorescencia resultante de cada DNA o mancha de oligo-
nucletido, lo que permite determinar la extensin de la
hibridacin con el cDNA de prueba (rojo) y de control
(verde). Como se conoce la localizacin exacta de cada
DNA u oligonucletido en el microordenamiento, estos
datos indican de inmediato cules genes son activados
por la hormona (manchas rojas), cules genes se expre-
san slo en ausencia de la hormona (manchas verdes)
y cules genes permanecen sin afectarse y se expresan
tanto en ausencia como en presencia de la hormona
(manchas amarillas = rojo + verde).
Los microordenamientos de DNA se usan ahora de manera
extensa para examinar cambios en la expresin gnica
en plantas y animales. Por ejemplo, en seres humanos,
pueden usarse para determinar qu enfermedades par-
ticulares afectan el patrn de la expresin gnica (el per-
fil de expresin) en diversos tejidos, o la identidad (a
partir del perfil de expresin) del organismo infectante.
Por lo tanto, slo en la medicina clnica, los microor-
denamientos de DNA encierran un alto potencial para el
diagnstico.

DNA impreso en una

lmina de vidrio por un robot u
oligonucletidos sintetizados in situ

cDNA de la muestra en
prueba marcado con un
colorante uorescente rojo
+
cDNA control marcado
con un colorante
uorescente verde

Hibridar

Lavar el cDNA libre

Analizar la hibridacin con un

microscopio automatizado
de exploracin con lser

Figura I3-2. Un uso tpico de un microordenamiento de DNA para determinar

la expresin de miles de genes en forma simultnea (vase el texto para
mayores detalles).
SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

I4Clonacin del DNA

Notas clave
El principio de la La mayora de los fragmentos de DNA no puede autorreplicarse en una clula y
clonacin del DNA por consiguiente deben unirse (ligarse) a un vector (DNA de virus o plsmido)
que pueda replicarse en forma autnoma. De manera tpica, cada vector se une
con un fragmento de ese DNA. Si se usa una mezcla compleja de fragmentos de
DNA, se produce una poblacin de molculas de DNA recombinante. stas se in-
troducen en las clulas hospedadoras, cada una de las cuales contiene de ma-
nera tpica slo un tipo de DNA recombinante. La identificacin de las clulas
que contienen el fragmento de DNA de inters permite la purificacin de una
gran cantidad de ese DNA recombinante solo y por lo tanto del fragmento de DNA
extrao.
Conceptos bsicos de la Para clonar en un vector plsmido, tanto el plsmido como el DNA a clonar de-
clonacin del DNA ben cortarse con la misma enzima de restriccin y mezclarse. Los extremos ad-
herentes de cada DNA se asocian y enlazan juntos. Las molculas resultantes de
DNA recombinante se introducen dentro de clulas hospedadoras bacterianas.
Si el vector contiene un gen(es) de resistencia a antibiticos y las clulas hospe-
dadoras son sensibles a dicho antibitico(s), la colocacin en una placa de agar
nutriente que contenga el antibitico relevante slo les permitir crecer a las
clulas que fueron transfectadas y que contienen el DNA del plsmido.
Bibliotecas de DNA Las bibliotecas de DNA genmico estn hechas a partir del DNA genmico de un
organismo. Una biblioteca completa de DNA genmico contiene todas las se-
cuencias del DNA nuclear de ese organismo. Una biblioteca de cDNA se hace
mediante DNA complementario (cDNA), el que se sintetiza a partir de mRNA me-
diante la transcriptasa inversa. ste contiene slo aquellas secuencias que se
expresan como mRNA en el tejido u organismo de origen.
Deteccin de bibliotecas Las bibliotecas genmicas y las bibliotecas de cDNA pueden detectarse por hi-
de DNA bridacin si se usa una sonda marcada de DNA complementario en parte del gen
deseado. La sonda puede ser un fragmento de DNA aislado (es decir, un fragmen-
to de restriccin) o un oligonucletido sinttico diseado para codificar parte
del gen de acuerdo con lo deducido a partir del conocimiento de la secuencia de
aminocidos de parte de la protena codificada. De manera adicional, la expre-
sin de las bibliotecas de cDNA puede detectarse por medio de un anticuerpo
marcado contra la protena codificada por el gen deseado o mediante cualquier
otro ligando que se una a esa protena.

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA

(I2) Enzimas de restriccin
(I3) Hibridacin de cidos nucleicos

El principio de la clonacin del DNA
Considrese el objetivo experimental de hacer grandes
cantidades de un fragmento particular de DNA en forma
pura a partir de una mezcla de fragmentos de DNA de un
ratn. Aunque los fragmentos de DNA pueden introdu-
cirse dentro de clulas bacterianas, la mayora o todos
ellos perdern la capacidad de autorreplicacin y se
perdern pronto. Sin embargo, se conocen dos tipos
de molculas de DNA que pueden replicarse en forma
autnoma en las clulas bacterianas: los bacterifagos
y los plsmidos. stos son pequeas molculas de DNA
de doble cadena circular que existen libres dentro de
las clulas bacterianas, y con frecuencia son portado-
res de genes particulares que les confieren resistencia
a los frmacos adems de ser autorreplicantes. Si una
molcula de DNA recombinante se hace por la unin de

un fragmento de DNA de ratn al DNA de un plsmido (o
bacterifago), el DNA del ratn se replica cuando el DNA
del plsmido o fago se replica. En este papel, el DNA del
plsmido o fago se conoce como un vector.
Puede elaborarse una poblacin de molculas de DNA
recombinante, cada una conteniendo una molcula re-
combinante de los fragmentos de DNA de ratn de la mez-
cla original. stas pueden introducirse en una poblacin
de bacterias tal que cada clula bacteriana contenga, en
general, un tipo diferente de molcula de DNA recombi-
nante. Si se puede identificar la clula bacteriana que
contiene el DNA recombinante portador del fragmento
de DNA de ratn que se desea, la clula puede multipli-
carse en cultivo y aislarse grandes cantidades del DNA
recombinante. El DNA del ratn de inters puede, en ese
caso, recuperarse en forma pura; por eso se dice que ha
sido clonado.
El vector que se usa para conseguir esta clonacin se
llama vector de clonacin. Los vectores no estn limi-
tados a las clulas bacterianas; los virus de animales y
plantas tambin pueden actuar como vectores.
Conceptos bsicos de la clonacin
del DNA
Existe una amplia variedad de procedimientos dife-
rentes para la clonacin del DNA en vectores plsmidos
o virales y se refiere al lector al libro BIOS Notas ins-
tantneas de biologa molecular para mayores detalles.
No obstante, el esquema bsico de los hechos suele
ser el mismo. Para clonar dentro de un vector pls-
mido, el DNA circular del plsmido es cortado con una
enzima de restriccin (seccin I2) que slo tiene un
sitio de reconocimiento en el plsmido. Esto crea una
molcula lineal del plsmido con extremos adheren-
tes (figura I4-1). En estos momentos, la estrategia de
clonacin ms simple consiste en cortar el DNA que
ser clonado (en el ejemplo anterior, el DNA de ratn)
con la misma enzima de restriccin. De manera alter-
nativa, pueden utilizarse diferentes enzimas de res-
triccin, con la condicin de que creen los mismos
extremos adherentes (seccin I2). El DNA de ratn res-
tringido y el DNA lineal del plsmido se mezclan. Los
extremos adherentes del DNA de ratn se asocian con
los extremos del DNA del plsmido y se unen en forma
covalente por medio de la ligasa de DNA. El DNA del pls-
mido recombinante que resulta se introduce dentro
de clulas hospedadoras bacterianas que recibieron un
tratamiento que las vuelve permeables al DNA. Esta cap-
tacin del DNA por las clulas bacterianas se llama trans-
feccin; se dice que las clulas bacterianas han sido
transfectadas por el plsmido recombinante. En este
punto, se permite el crecimiento y divisin de las clu-
las bacterianas, durante el cual los plsmidos recombi-
nantes se replican muchas veces dentro de tales clulas.
I4CLONACIN DEL DNA 237
Un procedimiento til es seleccionar como vector de
clonacin un plsmido que sea portador de uno o ms
genes resistentes al(los) antibitico(s) ms un hospe-
dador que sea sensible a tales antibiticos (figura I4-1).
Acto seguido, despus de la transfeccin, las clulas
crecen en presencia del antibitico. Slo las clulas que
contienen el DNA del plsmido sern resistentes al(los)
antibitico(s) y podrn crecer. Si las clulas se disemi-
nan en una placa de agar, cada clula se multiplicar
para formar una colonia bacteriana donde todas las
clulas de la colonia contienen el mismo DNA del pls-
mido recombinante y sern portadoras del mismo frag-
mento de DNA extrao. Por consiguiente, todo lo que
ahora se necesita es identificar la colonia de bacterias
particular que contiene la secuencia del DNA de ratn de
inters.
Bibliotecas de DNA
Una biblioteca de DNA es una coleccin de fragmentos
de DNA clonados en un vector de clonacin que un
DNA de inters puede buscar. Si el objetivo es aislar
secuencias de genes particulares, existen dos tipos de
bibliotecas tiles:
z Bibliotecas de DNA genmico. Una biblioteca de DNA
genmico se elabora a partir del DNA genmico de un
organismo. Por ejemplo, una biblioteca genmica de
ratn podra elaborarse por digestin del DNA nuclear
del ratn con una nucleasa de restriccin para produ-
cir un gran nmero de fragmentos de DNA diferentes,
pero todos con extremos adherentes idnticos. Des-
pus, los fragmentos de DNA deberan ligarse dentro de
molculas lineales de vectores plsmidos o dentro
de un vector viral adecuado. Esta biblioteca debe-
ra contener todas las secuencias del DNA nuclear
del ratn y sera til para buscar cualquier gen de
ratn de inters. Cada clon de la biblioteca se llama
clon de DNA genmico. No es forzoso que cada clon
de DNA genmico contenga un gen completo, ya que
en muchos casos la enzima de restriccin cortar
cuando menos dentro de un gen. Por eso, algunos
clones slo contienen una parte del gen.
z Bibliotecas de cDNA. Una biblioteca de cDNA se ela-
bora mediante el uso de la transcriptasa inversa de
un retrovirus para sintetizar copias de DNA comple-
mentario (cDNA) del mRNA total de una clula (o tal
vez de una fraccin de ste). El cDNA de una cadena
se convierte en un DNA de doble cadena y se inserta
dentro del vector. Cada clon de la biblioteca se llama
clon de cDNA. A diferencia de una biblioteca gen-
mica completa que contiene todas las secuencias del
DNA nuclear de un organismo, una biblioteca de cDNA
slo contiene las secuencias que se expresan como
mRNA. Diferentes tejidos de un animal, que expresan
algunos genes en comn pero tambin muchos genes
238 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

Sitio de reconocimiento
nico de EcoRI
AT T C
GA
T TAA G DNA a clonar
C

EcoRI
Gen de resistencia
a un antibitico
AATTC G AATTC G
G CTTAA G CTTAA
Plsmido vector

Digerido
por EcoRI

Asociacin seguida de unin

AA por la ligasa de DNA
A T
TA
TC
G

T
C

C
AG

TT
CTTA

A AG
Plsmido Plsmido
linealizado recombinante

Las clulas bacterianas

Cada colonia bacteriana se vuelven sensibles
es un clon separado de al antibitico
clulas bacterianas, cada
una de las cuales contiene
el mismo plsmido
Dispersin en las placas
recombinante
de agar que contienen
el antibitico relevante

Agar con el antibitico

Figura I4-1. Mtodo simple de clonacin del DNA por intermedio de un vector
plsmido. En el texto se asume como un ejemplo que el DNA a clonar es de ratn.

diferentes, producen por lo tanto diferentes bibliote-
cas de cDNA.
Deteccin de bibliotecas de DNA
Las bibliotecas genmicas se detectan por hibridacin
(seccin I3) con una sonda de DNA que es complemen-
taria de parte de la secuencia de nucletidos del gen
deseado. La sonda puede ser un fragmento de restric-
cin de DNA o tal vez parte de un clon de cDNA. Otro
mtodo es posible si se conoce parte de la secuencia de
la protena del gen deseado. Si se usa el cdigo gentico,
se puede deducir la secuencia de DNA de esa parte del
gen y sintetizarse un oligonucletido con tal secuencia
para que acte como la sonda de DNA.
Cuando se usa un vector plsmido, un procedimiento
simple de deteccin consiste en tomar placas de agar
portadoras de colonias de bacterias que elaboren la
biblioteca genmica y superponer cada placa con
una membrana de nitrocelulosa (figura I4-2). sta se
separa de aqulla y es una rplica de la placa, en que
parte de las clulas bacterianas de cada colonia se han
adherido a ella y en el mismo patrn que las colonias
de la placa. Con frecuencia, este filtro se llama levan-
tamiento de colonia. Se trata con lcali para lisar las
 I4CLONACIN DEL DNA 239

clulas bacterianas y desnaturalizar el DNA y entonces
se lo hibrida con una sonda de DNA radiomarcada. Des-
pus de lavar la parte de la sonda que no reaccion, la
autorradiografa del filtro muestra qu colonias se han
hibridado con la sonda y por lo tanto contienen las
secuencias deseadas. En ese momento, tales colonias
se recuperan de la placa de agar.
Cuando se usa un bacterifago como el vector de clo-
nacin, la biblioteca gnica se detecta como una dis-
posicin de placas en un prado bacteriano. Se usa un
mtodo de deteccin de la hibridacin similar al des-
crito para la deteccin de plsmidos (figura I4-2); en este
caso, el filtro de replicacin se llama levantamiento de
placa.
Para las bibliotecas de cDNA, la deteccin puede llevarse
a cabo por hibridacin, de manera similar. Adems, es
posible elaborar la biblioteca de cDNA mediante un vec-
tor que en realidad transcribe el cDNA insertado y luego
traduce el mRNA resultante para formar la protena
correspondiente al gen clonado. Una biblioteca elabo-
rada con un vector de expresin es una biblioteca de
expresin de cDNA. sta puede detectarse con un anti-
cuerpo marcado que reconoce la protena especfica y
por lo tanto identificar a aquellas bacterias que contienen
el gen deseado y que son las que sintetizan la protena.
No slo anticuerpos, sino que puede utilizarse como
sonda cualquier ligando que se una a la protena objetivo.
Por ejemplo, una hormona marcada puede usarse para
identificar clones que sintetizan protenas receptoras de
la hormona.

Superposicin de agar con un ltro de nitrocelulosa y separacin para crear una rplica

Liberacin del DNA de las clulas bacterianas o un fago mediante un lcali

Neutralizacin e hibridacin con una sonda radiomarcada
Toma de la autorradiografa

La imagen de la pelcula indica

la posicin de las dos placas
de colonias bacterianas o de
fagos que contienen el DNA
clonado complementario de
la sonda marcada

Figura I4-2. Deteccin de una biblioteca gnica por hibridacin.

SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

I5Secuenciacin del DNA

Notas clave
Hay numerosos mtodos El DNA puede ser secuenciado por varios mtodos, pero el mtodo que se usa de
para la secuenciacin del manera usual es el procedimiento de terminacin de la cadena. El DNA (de ca-
DNA dena simple) a secuenciar sirve como la plantilla para la sntesis de una cadena
complementaria cuando se le aportan un cebador especfico y una polimerasa
de DNA adecuada.
Eleccin de la polimerasa La polimerasa de DNA usada para la secuenciacin de terminacin de la cadena
de DNA debe tener alta capacidad de procesamiento y actividad de exonucleasa mnima
(de manera ideal, ninguna). La polimerasa Klenow fue la enzima que se us de
manera original, pero ya fue sustituida por otras enzimas como la Sequenase.
Mtodo de terminacin Se configuran cuatro mezclas para incubacin, cada una con la plantilla de DNA,
de la cadena un cebador especfico del DNA, la polimerasa I de DNA de E. coli y los cuatro dNTP.
De manera adicional, cada mezcla contiene un anlogo de didesoxinuclesido
trifosfato diferente, ddATP, ddCTP, ddGTP o ddTTP. La incorporacin de un
anlogo de didesoxi evita la elongacin adicional y de esta manera produce
la terminacin de la cadena del producto en extensin. Estos productos se so-
meten a electroforesis en un gel de poliacrilamida y la secuencia de DNA se lee
desde el patrn de bandas que produce.
Secuenciacin La secuenciacin automatizada del DNA usa el mtodo de terminacin de la
automatizada del DNA cadena, pero con un oligonucletido cebador marcado con un colorante fluo-
rescente. Cada una de las cuatro reacciones recibe un cebador marcado con
un colorante diferente. Despus de la incubacin, las mezclas de la reaccin se
renen y someten a electroforesis en un carril de un gel de poliacrilamida. El
orden en el cual los diferentes productos de terminacin marcados con fluores-
cencia eluye del gel proporciona la secuencia del DNA. Sistemas ms avanzados
utilizan equipos con capilaridad mltiple en los cuales la preparacin, la carga
y el anlisis de datos de la muestra estn automatizados para un mximo apro-
vechamiento.

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA

(F3) Replicacin del DNA en bacterias
(I3) Hibridacin de cidos nucleicos

Hay numerosos mtodos para la
secuenciacin del DNA
Se han ideado numerosos mtodos para secuenciar el
DNA, como el mtodo de degradacin qumica (tambin
llamado mtodo de Maxam-Gilbert en honor a sus inven-
tores), el mtodo de terminacin de la cadena (tambin
conocido como el mtodo didesoxi de Sanger en honor
a su inventor) y desde hace poco la pirosecuenciacin.
El mtodo de terminacin de la cadena es en estos
momentos el mtodo que ms se usa debido a su velo-
cidad y simplicidad. El mtodo de la degradacin qu-
mica es til para algunos segmentos del DNA que for-
man pares de bases intracatenarios, los cuales pueden
ofrecer dificultad para secuenciarlos por el mtodo de
terminacin de la cadena. La pirosecuenciacin no
necesita electroforesis o separacin de los fragmentos y
de esta manera es ms rpida que los otros dos mtodos,
pero puede generar slo unas pocas decenas de pares
de bases de la secuencia por experimentar. Es til en
situaciones donde un gran nmero de secuencias cortas
se requiere con prontitud. Estos mtodos adicionales se
describen en todas partes; aqu se pondr el acento slo
en el principal mtodo de secuenciacin, el mtodo de
terminacin de la cadena.
El DNA a secuenciar mediante el mtodo de terminacin
de la cadena se prepara con una molcula de cadena
simple de manera que pueda actuar como una plantilla

para la sntesis de DNA (seccin F3) en la reaccin de
secuenciacin. Se usa una polimerasa de DNA adecuada
(vase ms adelante) para copiar la plantilla de DNA, pero
se necesita un cebador para iniciar la sntesis (seccin
F3). El cebador usado puede ser un fragmento de res-
triccin de DNA complementario del de la plantilla uni-
catenaria o puede ser una secuencia corta de DNA com-
plementario que se sintetiz por medios qumicos (un
oligonucletido sinttico).
Eleccin de la polimerasa de DNA
La polimerasa de DNA que se usa en la secuenciacin
de la terminacin de la cadena necesita sintetizar DNA
complementario de la plantilla del DNA por extensin del
cebador. La enzima debe tener alta capacidad de proce-
samiento (es decir, sintetizar tramos largos del DNA sin
detenerse). Pese a ello, la mayor parte de las polimera-
sas de DNA tambin tiene actividad de exonucleasa, lo
que significa que puede degradar el DNA a medida que
lo sintetiza. La polimerasa de DNA ideal para secuencia-
cin del DNA debe tener, por lo tanto, niveles de activi-
dad de exonucleasa 5 a 3 mnimos o de valor cero y
asimismo niveles mnimos o de valor cero de actividad
de exonucleasa 3 a 5.
La primera enzima desarrollada para la secuenciacin
del DNA fue la polimerasa de Klenow, la cual es una poli-
merasa I de DNA de E. coli de la que se elimin la acti-
vidad de exonucleasa 5 a 3 mediante ingeniera gen-
tica, es decir, mediante tcnicas de DNA recombinante.
Desafortunadamente, la polimerasa de Klenow tiene
una capacidad de procesamiento relativamente baja,
de manera que ha sido reemplazada en gran medida
por otras enzimas, en especial por la polimerasa de DNA
T7 de bacterifagos, la cual presenta una capacidad de
procesamiento alta y a la que tambin se le elimin la
actividad de exonucleasa por ingeniera gentica (en el
mercado est disponible como Sequenase).
Mtodo de terminacin de la cadena
Se coloca una mezcla en incubacin que contenga la
plantilla del DNA de una cadena, el cebador, la polime-
rasa I de DNA y los cuatro desoxirribonuclesidos tri-
fosfato (dATP, dGTP, dCTP, dTTP), uno de los cuales
est marcado con radiactividad, ms un anlogo de 23
didesoxirribonuclesido trifosfato, es decir ddGTP. En
esta incubacin, la polimerasa de DNA comienza a copiar
las molculas plantilla mediante extensin del cebador
unido. A medida que se sintetiza la nueva cadena de DNA,
en cada momento que el dGTP debe ser incorporado,
hay una posibilidad de que el ddGTP se incorpore en su
lugar. Si esto sucede, no puede producirse la elongacin
I5SECUENCIACIN DEL DNA 241
adicional de la cadena debido a que los anlogos dides-
oxi 3OH carecen del grupo oxhidrilo 3 necesario
para producir el siguiente enlace 35 fosfodister. En
consecuencia, esa cadena particular se detiene en este
punto. En esta primera mezcla en incubacin se copia
una gran poblacin de plantillas y cada nueva cadena
se detiene al azar en posiciones donde debe aadirse
un G a la nueva cadena que acaba de sintetizarse. Por
consiguiente, por cada G en la secuencia complementa-
ria, debe haber algunas cadenas de DNA nuevas que han
terminado en ese punto (figura I5-1).
De hecho, se colocan cuatro mezclas en incubacin,
cada una de las cuales contiene los mismos componen-
tes, excepto que cada una contiene un diferente anlogo
didesoxi; uno de ddATP, ddCTP, ddTTP o ddGTP (figura
I5-1). Esto produce cuatro conjuntos de fragmentos de
cadena terminada correspondientes a las posiciones A,
C, T y G de la secuencia. Despus de la incubacin, las
cuatro mezclas reactivas se someten a electroforesis en
carriles paralelos de un gel de poliacrilamida y luego
a autorradiografa. La secuencia de DNA se determina
simplemente por lectura del patrn de banda del auto-
rradiograma desde abajo del gel hacia arriba (es decir,
se lee la secuencia del DNA como fue sintetizada desde
el cebador; figura I5-1). La secuencia leda fuera del gel
es la secuencia de la cadena de DNA sintetizada y por
lo tanto es la secuencia complementaria de la cadena
plantilla del DNA original.
Secuenciacin automatizada del DNA
La secuenciacin automatizada del DNA es ahora un
lugar comn, basada en el mtodo de terminacin de la
cadena, pero en la que se usa un colorante fluorescente
fijo a un oligonucletido cebador en lugar de usar una
marcacin radiactiva. Un colorante fluorescente dis-
tinto se fija al cebador de cada una de las cuatro reac-
ciones de secuenciacin pero, despus de la incubacin,
las cuatro mezclas se combinan y someten a electrofo-
resis en un carril del gel. Los sistemas de deteccin por
lser distinguen entonces la identidad de cada producto
terminado a medida que eluye del gel. La secuencia a la
cual los diferentes productos fluorescentes eluyen del
gel proporciona la secuencia del DNA.
Los modernos sistemas de secuenciacin del DNA auto-
matizados, diseados para generar casi un milln de
secuencias de bases por da, usan geles de secuencia-
cin contenidos en mltiples tubos capilares (en lugar
de hacerlo en un formato de gel en placa). La prepara-
cin y carga de las muestras en los geles capilares las lle-
van a cabo robots, que proveen 24 horas de operacin, y
el anlisis de los datos tambin est automatizado.
242 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

Plantilla
de DNA 3 CCGTACTA 5
Cebador 5 3

+ Polimerasa I de DNA de E. coli

+ dATP, dCTP, dTTP, dGTP

+ddGTP +ddATP +ddTTP +ddCTP

5 G G C A T ddG 5 G G C A T G ddA 5 G G C A T G A ddT 5 G G ddC

5 G ddG 5 G G C ddA 5 G G C A ddT

5 ddG

T
A
G
Lectura de la
secuencia de T
la nueva cadena A
de DNA C
sintetizada
G
G

Figura I5-1. Secuenciacin del DNA por el mtodo de terminacin de la cadena (Sanger).
SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

I6Reaccin en cadena de la polimerasa

Notas clave
Principios de la PCR
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) permite un nmero extremada-
mente grande de copias a sintetizar de cualquier secuencia de DNA, siempre que
estn disponibles dos oligonucletidos cebadores para hibridar las secuencias
acompaantes de las cadenas de DNA complementario. La reaccin requiere el
DNA objetivo, los dos cebadores, los cuatro desoxirribonuclesidos trifosfato y
una polimerasa de DNA termoestable como la polimerasa de DNA Taq. Un ciclo
de la PCR consta de tres etapas: desnaturalizacin, hibridacin del cebador y
elongacin. Este ciclo se repite el nmero de veces seleccionado segn el grado
de amplificacin que se requiera.

Aplicaciones de la PCR
La PCR ha producido un notable impacto en la biologa molecular, con apli-
caciones en muchas reas entre las que se incluyen el diagnstico mdico, la
medicina forense y la creacin de mutaciones especficas. La deteccin por PCR
de enfermedades genticas humanas se basa en el anlisis de los microsatlites
(tambin denominados STR), los cuales son repeticiones de secuencias de nu-
cletidos cortas en el genoma humano. Las variaciones en el nmero de repeti-
ciones entre los genomas individuales permiten usar los STR como marcadores
de deteccin.

PCR en tiempo real La PCR en tiempo real permite la cuantificacin de las molculas objetivo de DNA
(o RNA) en muestras biolgicas por medio de la medicin de la tasa de ampli-
ficacin durante la reaccin de la PCR. Un mtodo es incluir un colorante en la
mezcla de la reaccin de la PCR que se une a un DNA de doble cadena y fluoresce
en el estado unido. Un mtodo ms especfico es usar cebadores que tengan
un reportero fluorescente unido de manera covalente a un extremo del ceba-
dor y un agente de extincin en el otro extremo. A medida que se usa el cebador
en la reaccin de la PCR, la actividad de exonucleasa 5 a 3 de la polimerasa Taq
elimina un extremo del cebador y permite que el reportero fluorescente modu-
le la fluorescencia dado que ya no est en estrecha proximidad con la molcula
extinguidora. El incremento en la fluorescencia exhibe por lo tanto la tasa de
la reaccin de amplificacin. La PCR en tiempo real puede usarse para medir la
cantidad de una molcula objetivo en la muestra de prueba ya sea en relacin
con otras muestras o en trminos absolutos.

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (I3) Hibridacin de cidos nucleicos

(F3) Replicacin del DNA en las bacterias (I4) Clonacin del DNA
(I2) Enzimas de restriccin (I5) Secuenciacin del DNA

Principios de la PCR
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es una tc-
nica en extremo simple, pero de un poder inmenso. Per-
mite la amplificacin enorme de una secuencia espec-
fica de DNA, siempre que las secuencias cortas a ambos
lados de la misma se conozcan. Esta tcnica se muestra
en la figura I6-1. Una reaccin de la PCR contiene el DNA
de doble cadena objetivo, dos cebadores que hibridan
las secuencias acompaantes de las cadenas opuestas
a la cadena objetivo, cuatro desoxirribonuclesidos tri-
fosfato y una polimerasa de DNA. Debido a que, como
ya fue visto, la reaccin se calienta a altas temperaturas
en forma peridica, la PCR depende de usar una polime-
rasa de DNA estable al calor. Muchas de tales enzimas
estables al calor procedentes de bacterias termfilas
(bacterias que viven en mbitos de altas temperaturas)
estn disponibles en la actualidad en forma comercial.
La primera de stas en ser usada fue la polimerasa Taq,
proveniente de la bacteria termfila Thermus aquaticus.
244 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE
1er. ciclo
plantilla de DNA
Desnaturalizacin Sntesis
del DNA y asociacin de DNA
de los cebadores (elongacin)
Figura I6-1. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Los asteriscos (*) indican los
primeros productos que origina la PCR (en el tercer ciclo), los cuales constan de la
secuencia de DNA encerrada entre los sitios de los dos cebadores.
1. Desnaturalizacin. La mezcla de la reaccin se
calienta a 94 C por un corto lapso (alrededor de 15
a 30 segundos) para desnaturalizar el DNA objetivo en
cadenas simples que puedan actuar como plantillas
para la sntesis del DNA.
2. Hibridacin del cebador. La mezcla se enfra con
rapidez a una temperatura definida (50 a 60 C), la
cual permite que los dos cebadores se unan a las
secuencias que flanquean al DNA objetivo en cada
una de las dos cadenas. Esta temperatura de hibri-
dacin se calcula con cuidado para asegurar que los
cebadores se unan slo a las secuencias deseadas del
DNA. Un cebador se une a cada cadena (figura I6-1).
Las dos cadenas parentales no se reasocian entre s
debido a que los cebadores exceden en longitud a los
DNA parentales.
2o. ciclo 3er. ciclo
Desnaturalizacin Sntesis Desnaturalizacin Sntesis
del DNA y asociacin de DNA del DNA y asociacin de DNA
de los cebadores de los cebadores
3. Elongacin. La temperatura de la mezcla se eleva a
72 C (la temperatura ptima de la polimerasa Taq)
y se mantiene a esta temperatura por un periodo pre-
seleccionado que permite a la polimerasa Taq elon-
gar cada cebador mediante la copia de las plantillas
de cadena simple. Al final de esta incubacin, ambas
cadenas plantilla de cadena simple se han conver-
tido de manera parcial en cadena doble. La nueva
cadena de cada DNA de cadena doble se extiende por
una distancia variable corriente abajo.
Los tres pasos del ciclo de la PCR se repiten. Por lo tanto,
en el segundo ciclo, las cuatro cadenas se desnaturali-
zan, los cebadores se unen y se extienden. No se nece-
sita aadir ningn otro reactante. Los tres pasos se
repiten una vez ms en un tercer ciclo (figura I6-1) y de
la misma manera por el nmero seleccionado de ciclos
 I6REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA
adicionales. En el tercer ciclo, parte de los productos de
la PCR (indicada por asteriscos en la figura I6-1) repre-
senta a las secuencias del DNA que se hallan slo entre los
dos sitios cebados y la secuencia no se extiende ms all
de estos sitios. A medida que se producen ms ciclos de
reaccin, este tipo de molculas de DNA de doble cadena
se convierte en la mayor de las especies presentes. Des-
pus de 20 ciclos, el DNA original ha sido amplificado un
milln de veces y aumenta a mil millones de veces des-
pus de 30 ciclos. En este punto, la vasta mayora de los
productos es idntica al DNA amplificado y slo los que
se ubican entre los dos sitios cebados.
En la actualidad se usan de rutina los termocicladores
automatizados para reciclar la reaccin sin interferencia
manual, y de esta manera la amplificacin de la secuen-
cia del DNA entre los dos sitios cebados de mil millones de
veces (30 ciclos) puede efectuarse en menos de una hora!
Aplicaciones de la PCR
La PCR tiene ya muchas aplicaciones extendidas y se
estn diseando nuevos usos en una base regular. Algu-
nas (y por cierto, no todas) de las aplicaciones son las
siguientes:
z La PCR puede amplificar una molcula de DNA sola a
partir de una mezcla compleja, lo que evita en gran
medida la necesidad de usar la clonacin del DNA para
preparar dicha molcula. Sin embargo, esto requiere
algunos datos de las secuencias que flanquean al gen
con el fin de amplificarlas y por consiguiente no se
puede usar para amplificar genes de manera espec-
fica si esta informacin se desconoce.
z Variantes de la tcnica pueden amplificar una mol-
cula de RNA sola especfica a partir de una mezcla
compleja. Como la polimerasa Taq no puede copiar
RNA, el primer paso consiste en usar la transcriptasa
inversa para producir un DNA que sea copia del RNA, el
cual entonces puede amplificarse de la manera usual
por la polimerasa Taq. Por lo tanto, esta variante se
denomina PCR con transcriptasa inversa o RT-PCR.
z La PCR es sensible en extremo y puede amplificar de
manera infinita cantidades pequeas de DNA o RNA.
Con el recurso de cebadores apropiados pueden
detectarse cantidades muy pequeas de bacterias y
virus especficos en los tejidos, lo que convierte a la
PCR en una herramienta invaluable para el diagnstico
mdico. De manera importante, dada la sensibilidad
del anlisis por PCR, este diagnstico puede gene-
rarse muy temprano en el curso de la enfermedad.
Por ejemplo, el diagnstico temprano de un cncer
inducido por virus ofrece el potencial de una tasa de
xito mucho ms alta de tratamiento.
z La PCR tambin resulta invaluable para la deteccin
de enfermedades genticas humanas y est reem-
plazando con rapidez el uso de los RFLP (seccin I2).
La deteccin de la PCR se basa en el anlisis de los
245
microsatlites (tambin llamados repeticiones en
tndem cortas o STR), los cuales son repeticiones de
secuencias de nucletidos cortas; usados como mar-
cadores del DNA por la PCR, los STR son tpicamente de
6 bp o menos de tamao y se repiten de 10 a ms
de 30 veces. Dispersas a lo largo del genoma humano,
se producen alrededor de 5 105 STR, con repeticio-
nes de 6 bp o menos, y de esta manera la mayora
de las regiones del genoma cuenta con STR adecuados
para usar como marcadores en la PCR. Los STR pueden
usarse de la misma forma que se usaron los RFLP en
el pasado (seccin I2); los diferentes tamaos de STR
dan diferentes tamaos de fragmentos de DNA ampli-
ficados, que entonces pueden usarse como marcado-
res de deteccin. De manera habitual, los STR suelen
analizarse mediante una marca fluorescente unida a
uno o ambos cebadores de la PCR, seguido de la elec-
troforesis capilar en gel de poliacrilamida. Los pro-
ductos fluorescentes de la PCR migran a travs del gel
ms all de un detector de fluorescencia; el tiempo
que toman en reaccionar con el detector compara-
do con el tiempo que toman los marcadores de
tamao conocido permite a una computadora enla-
zada calcular el tamao de cada producto de la PCR. El
mtodo es muy rpido, confiable y usa muy pequeas
cantidades de material clnico.
z Debido a su extrema sensibilidad, la PCR tambin es
ahora de importancia fundamental en la medicina
forense. La variacin en el nmero de repeticiones
en STR especficas de persona a persona, acoplada a
un gran nmero de STR disponibles para usar como
marcadores, permiten la identificacin individual.
Por ejemplo, es posible usar la PCR para amplificar el
DNA de un simple cabello humano, o del material bio-
lgico dejado en un cigarrillo o en una estampilla, o
de una gota de sangre microscpica. Cualquiera de
estos materiales que permanece en la escena de un
crimen puede generar suficiente DNA para usar la PCR
en la caracterizacin e identificacin de los indivi-
duos relevantes.
z Mediante el uso de cebadores adecuados, es posible
usar la PCR para crear mutaciones puntuales en el DNA
objetivo, lo cual facilita en gran medida el anlisis de
la expresin y funcin del gen (seccin I7).
PCR en tiempo real
La PCR tradicional no es til para cuantificar la cantidad
de plantilla de RNA o DNA original, ya que la cantidad de
producto de la PCR sintetizado se determina ms por la
cantidad de los cebadores y de otros reactivos en la mez-
cla de la reaccin que por la cantidad de la plantilla. Sin
embargo, la cuantificacin es posible si se usa la PCR en
tiempo real.
Ntese que la abreviatura RT-PCR suele reservarse para
la PCR con transcriptasa inversa (vase antes) y no para la
PCR en tiempo real (del ingls Real-time), pero esto no
246 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE
siempre se acepta de manera universal y puede con-
fundir. La PCR en tiempo real se llama de esta manera
debido a que el DNA amplificado se detecta a medida que
la reaccin progresa en tiempo real, en oposicin a la PCR
tradicional, donde el producto de la PCR se analizaba al
final de la amplificacin.
Existen dos mtodos principales para llevar a cabo la PCR
en tiempo real:
z El primero de ellos consiste en incluir un colorante en
la mezcla de la reaccin de la PCR que se una exclusiva-
mente al DNA de doble cadena y que emita fluorescen-
cia con fuerza cuando se una, por ejemplo, al verde
I de SYBR. A medida que la PCR avanza, el colorante
se une al DNA amplificado de cadena doble y emite
fluorescencia. De esta manera, la tasa de la reaccin
puede medirse por el incremento en la fluorescencia
conforme transcurre el tiempo (para lo cual se usa
un termociclador de la PCR en tiempo real), tasa que
resulta proporcional a la cantidad de la plantilla ori-
ginal. No obstante, debido a que el colorante se une
a cualquier DNA de cadena doble con independencia
de su secuencia, no es un mtodo de cuantificacin
especfico.
z El segundo mtodo es para los cebadores usados en la
mezcla de reaccin de la PCR para ser marcados en un
extremo con una molcula que reporta fluorescencia
y en el otro extremo con una molcula extinguido-
ra de la fluorescencia. Debido a que la molcula extin-
guidora se localiza cerca de la que reporta fluores-
cencia, se evita que el cebador intacto emita fluo-
rescencia. Pese a ello, como en la reaccin de la PCR
el cebador se usa durante la amplificacin, la acti-
vidad de exonucleasa 5 a 3 de la polimerasa Taq
remueve un extremo del cebador. De esta manera,
la molcula que reporta fluorescencia no queda tan
cerca de la extinguidora y por lo tanto emite fluo-
rescencia. Pueden usarse mltiples sondas con dife-
rentes marcadores de fluorescencia coloreados para
la deteccin de numerosas secuencias diferentes de
DNA en la misma reaccin (PCR multiplex).
La PCR en tiempo real puede usarse para cuantificar cidos
nucleicos en forma relativa o absoluta. La cuantificacin
relativa mide la diferencia de veces (es decir 2x, 3x) en
la molcula objetivo por PCR entre dos o ms muestras. La
cuantificacin absoluta mide la cantidad exacta de
la molcula objetivo en la muestra al comparar la tasa
de amplificacin con la de los estndares conocidos.
SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

I7Mutagnesis dirigida al sitio

Notas clave
Por qu se usa la La mutagnesis dirigida al sitio usa tcnicas de DNA recombinante para crear
mutagnesis dirigida mutaciones definidas en el gen objetivo.
al sitio?

Mutagnesis dirigida por Se sintetiza un oligonucletido que contiene la mutacin puntual deseada
oligonucletidos esto es, un cambio de un solo nucletido. Luego ste se hibrida con una
plantilla de DNA de una cadena de fago M13 recombinante que contiene la se-
cuencia del gen objetivo. La polimerasa de DNA usa el oligonucletido como ce-
bador para sintetizar una copia completa de la plantilla del DNA, pero que ahora
contiene la mutacin puntual requerida. Despus de la transformacin en la E.
coli y la replicacin, 50% de las molculas de DNA de recombinacin contiene la
secuencia gnica original, pero el otro 50% de las copias contiene la secuencia
del gen mutado. As como las mutaciones puntuales, la mutagnesis dirigida
por un nucletido tambin puede usarse para crear deleciones o inserciones
pequeas en la secuencia objetivo.

Mutagnesis de casete En la mutagnesis de casete, una regin apropiada del gen objetivo es elimina-
da de una molcula de DNA recombinante mediante la digestin de una enzima
de restriccin y es reemplazada por un oligonucletido de cadena doble que ha
sido sintetizado para incluir la(s) mutacin(es) deseada(s).

Mutagnesis dirigida al Se llevan a cabo dos reacciones con la PCR, cada una de las cuales utiliza un
sitio con la PCR cebador oligonucletido portador de la mutacin deseada y un cebador que
hibrida a una secuencia que flanquea la secuencia del gen de inters. Los dos
productos de estas reacciones con la PCR corresponden cada uno a alrededor de
50% de la secuencia del DNA objetivo original. stos son luego desnaturalizados,
mezclados juntos y sometidos a otra reaccin con la PCR, la cual conduce a la
sntesis de molculas de longitud total que contienen la fijacin.

Sntesis de novo Las secuencias gnicas portadoras de mutaciones definidas pueden sintetizar-
se por superposicin de oligonucletidos sintticos mediante una polimerasa
de DNA que llene las brechas.

Ingeniera de protenas La ingeniera de protenas usa tcnicas de DNA recombinante para crear pro-
tenas nuevas. El mtodo de diseo racional usa el conocimiento de las inte-
rrelaciones entre estructura y funcin de la protena objetivo para decidir qu
aminocidos debern mutarse mediante tecnologa de DNA recombinante para
obtener el cambio fenotpico deseado. La evolucin dirigida funciona median-
te la creacin de grandes nmeros de mutaciones a travs de la secuencia del
gen objetivo y luego la seleccin de aquellas que muestren las mejoras en la(s)
caracterstica(s) deseada(s). El proceso se repite hasta la culminacin exitosa
en la seleccin de una protena que satisfaga los resultados deseados. Las pro-
tenas nuevas tambin pueden producirse mediante la fusin de regiones de
los genes que codifican los dominios especficos de las protenas.

Temas relacionados (H1) El cdigo gentico (I4) Clonacin del DNA

(I2) Enzimas de restriccin (I5) Secuenciacin del DNA
(I3) Hibridacin de cidos nucleicos (I6) Reaccin en cadena de la polimerasa
248 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

Por qu se usa la mutagnesis
dirigida al sitio?
De manera clsica se ha aprendido muchsimo acerca
de la funcin gnica mediante el anlisis de las muta-
ciones. De manera tpica, el organismo en estudio se
expone a un mutgeno que genera mutaciones alea-
torias y aquellas mutantes que muestran un fenotipo
particular se seleccionan para estudios adicionales.
Una diversidad de mtodos, entre los que se incluye la
secuenciacin del DNA, se usan para identificar el gen (o
genes) que ha sido mutado y la naturaleza de los cam-
bios. Esto proporciona informacin valiosa sobre el gen
y la funcin de la protena. Sin embargo, este enfoque
clsico es en extremo laborioso e incluye la deteccin de
grandes nmeros de mutaciones aleatorias en espera
de encontrar mutaciones tiles en el gen de inters. En
contraste, las tcnicas con DNA recombinante permiten
realizar cambios definidos en la secuencia del gen y
generar las mutaciones deseadas con certeza. En con-
junto, estas tcnicas se denominan mutagnesis diri-
gida al sitio o mutagnesis in vitro.
Hay muchos mtodos en uso para la mutagnesis diri-
gida al sitio, algunos de los cuales son complejos, y de
esta manera no todos pueden cubrirse en este momento.
No obstante, la descripcin siguiente explica los princi-
pales tipos de procedimientos usados.
Mutagnesis dirigida por
oligonucletidos
Se asume que el objetivo es reemplazar un residuo de
cistena particular por glicina en una protena objetivo,
y que el codn TGC del gen codifica el residuo de cistena
en cuestin. A partir del cdigo gentico (seccin H1)
se sabe que uno de los codones de la glicina es GGC, de
manera que la mutacin requerida consiste en reem-
plazar la T del codn TGC especfico del gen con G para
convertirlo en el codn TGC.
El primer paso es clonar el gen objetivo en el fago M13
como el vector, el cual tiene la caracterstica til de pro-
ducir una plantilla de DNA de una cadena (figura I7-1). A
continuacin se sintetiza un oligonucletido que con-
tiene la mutacin requerida y que es hibridado con el
DNA de una cadena del fago M13 recombinante. Como se
muestra en la figura I7-1, y con mayor detalle en la figura
I7-2, todos los nucletidos del oligonucletido forman
pares de bases con sus nucletidos complementarios
en el gen excepto en la mutacin porque sta no tiene
correspondencia. A continuacin, el oligonucletido se
usa como cebador de la polimerasa de DNA, la cual copia
la plantilla completa del DNA M13 recombinante para pro-
ducir una molcula de DNA de cadena doble, una cadena
de las cuales contiene la mutacin deseada (figura I7-1).
sta se introduce dentro de E. coli, la que produce ml-
tiples copias, la mitad de las cuales contiene la secuen-
cia del gen objetivo original y la otra mitad es portadora
del gen mutado. El fago recombinante resultante puede
colocarse en una placa de agar para producir placas y las
placas del fago mutante pueden identificarse por hibri-
dacin si el oligonucletido portador de la mutacin se
usa como una sonda radiactiva (seccin I4).
Hay una diversidad de variaciones de este protocolo
bsico entre las que se incluyen el uso de plsmidos
de DNA de cadena doble en lugar del fago M13, pero en
cada variante del protocolo el principio de usar un oli-
gonucletido discordante para generar el gen mutado
deseado permanece como tal.
La mutagnesis dirigida por un oligonucletido usada
como se describe aqu genera mutaciones puntuales,
que implican la sustitucin de un nucletido por otro.
A pesar de ello, tambin puede usarse para generar
pequeas inserciones o deleciones como la insercin
de tres nucletidos adicionales que codifican un ami-
nocido adicional o la delecin de tres nucletidos para
remover un aminocido especfico de la protena codi-
ficada por el gen objetivo.

Discordancia
Gen
objetivo

Cadena simple Oligonucletido Sntesis de DNA DNA de doble

de DNA de M13 discordante usando el cadena, una
recombinante asociado al DNA oligonucletido de las cuales
discordante contiene la
como cebador mutacin deseada

Figura I7-1. Mutagnesis dirigida por oligonucletidos. El gen objetivo que contiene un
fago M13 recombinante es hibridado con un oligonucletido que contiene el cambio de
nucletido requerido para producir la mutacin buscada. La sntesis de DNA que utiliza
el oligonucletido como cebador crea una molcula de DNA de doble cadena, una de las
cuales es de tipo natural mientras la otra es portadora de la mutacin puntual.
 I7MUTAGNESIS DIRIGIDA AL SITIO 249
Discordancia

C
5 3
Oligonucletido T C C T G C T CGG A C T A
3 5
A G G A C G TA G C C T G A T
Gen
objetivo Codn
Cys

Figura I7-2. Un oligonucletido que contiene un cambio de un nucletido con respecto

a los pares de bases de la secuencia del DNA original con el gen objetivo, excepto en la
posicin del nucletido sustituido, ya que ste es discordante.

Mutagnesis de casete las que se pueden hacer mediante la mutagnesis diri-

En la mutagnesis de casete, un plsmido recombi-
nante que contiene el gen objetivo es cortado con enzi-
mas de restriccin que escinden un fragmento portador
de la secuencia del gen que ser mutada (figura I7-3).
A continuacin se prepara un oligonucletido de doble
cadena que es sintetizado de manera que incluya la(s)
mutacin(es) deseada(s), cuyos extremos adherentes son
complementarios con los extremos del plsmido recom-
binante cortados. El oligonucletido hibrida al plsmido
cortado y ambos se unen por medio de una ligasa de DNA
T4, la cual produce un plsmido recombinante que con-
tiene la mutacin deseada en el gen (figura I7-3).
Como en la introduccin de mutaciones puntuales, la
mutagnesis de casete tambin puede introducir dele-
ciones o inserciones y stas pueden ser ms grandes que
gida por oligonucletidos.
Mutagnesis dirigida al sitio
con la PCR
Est disponible una diversidad de mtodos para realizar
mutagnesis dirigida al sitio con la PCR. El mtodo que
se muestra en la figura I7-4 usa dos cebadores que se
sitan en los lmites de la secuencia del gen objetivo de
inters (cebadores 1 y 4) y dos cebadores que se super-
ponen en forma parcial, los cuales contienen cada uno
la mutacin deseada (cebadores 2 y 3).
Se llevan a cabo dos reacciones con la PCR, una usa
los cebadores 1 y 2 y la otra, los cebadores 3 y 4. En
el ejemplo que se muestra en la figura I7-4, donde la

Sitios de corte de la
enzima de restriccin

Plsmido
Gen objetivo
recombinante
que contiene
el gen objetivo

Corte con
enzima(s)
de restriccin
relevante

Corte puricado
del plsmido
recombinante

Hibridacin con un
nuevo casete que Casete
contiene la mutacin
o mutaciones deseadas

Plsmido recombinante
que contiene el gen
objetivo con la mutacin
o mutaciones deseadas

Figura I7-3. Mutagnesis de casete.

250 SECCIN I TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

mutacin deseada se encuentra cerca del punto medio Sntesis de novo

de la secuencia del gen objetivo, cada una de las dos
reacciones de la PCR amplifica alrededor de la mitad de
la secuencia objetivo. Luego, los dos productos de la PCR
son desnaturalizados y mezclados, tras lo cual se hibri-
dan debido a la secuencia superpuesta de los cebadores
incorporados 2 y 3. Acto seguido, el DNA hibridado sufre
extensin y amplificacin 3 en la reaccin final de la
PCR en la que usan los cebadores 1 y 4, con la que pro-
duce el DNA amplificado de longitud total que contiene
la mutacin deseada.
Otro mtodo para introducir una mutacin sigue siendo
sintetizar el gen de novo mediante la preparacin de una
serie de oligonucletidos superpuestos cada uno de
alrededor de 150 nucletidos de largo o ms, hibridar-
los juntos y llenar las brechas con la polimerasa de DNA.
Por ltimo, el gen sinttico con las mutaciones deseadas
se inserta en un vector para su amplificacin y luego se
realizan las pruebas necesarias en un organismo hospe-
dador adecuado.

5 3

3 5

2 3
5 3 5 3
1 3
3 5 3 5
PCR PCR

5 3 5 3

3 5 3 5

5 3

3 5

+
5 3

3 5

Extensin 3

5 3

3 5
+
5 3

3 5
Cebadores 1 + 4 con la PCR
4

DNA mutado amplicado

Figura I7-4. Mutagnesis dirigida al sitio con la PCR. Los diversos pasos se describen en el texto.
Adaptado de Strachan T. y Read A. (2011). Human Molecular Genetics, 4a. ed., Garland Science.
 I7MUTAGNESIS DIRIGIDA AL SITIO 251

Ingeniera de protenas mutados que producen las protenas cuyas caracters-

ticas se acercan ms a las pretendidas. A continuacin,
El poder de la tecnologa del DNA recombinante para
los genes mutados seleccionados se someten a nuevas
modificar la secuencia de un gen a voluntad abre el
rondas de mutacin y seleccin, con la esperanza de
potencial para crear protenas novedosas que son ms
que produzcan variantes de protenas que incluso estn
adecuadas para investigaciones especficas, uso clnico
mejor dotadas de las propiedades deseadas. Este pro-
o industrial. Por ejemplo, sera posible aumentar la esta-
ceso se denomina evolucin dirigida porque muestra
bilidad de una enzima especfica o modificar su espe-
paralelismo con la evolucin natural de las mutaciones
cificidad por un sustrato. Este nuevo campo se llama
benficas. La mayor desventaja de la evolucin dirigida
ingeniera de protenas. En la ingeniera de protenas
es el descomunal esfuerzo que se requiere para producir
se utilizan dos mtodos generales, el diseo racional y
y detectar grandes nmeros de variantes de protenas,
la evolucin dirigida.
de manera que se trata de un mtodo de alto rendi-
El diseo racional se basa en el conocimiento de la miento. Pese a ello, encierra la gran ventaja de que no
protena nativa para identificar los cambios que se le se necesita conocer qu aspectos de la estructura pro-
podran hacer para conseguir el resultado deseado, y tenica conducirn a la funcionalidad deseada.
a continuacin dichos cambios se implementan por
Por ltimo, pueden crearse nuevas protenas mediante
ingeniera mediante la mutagnesis dirigida al sitio.
la fusin de partes de genes que codifican dominios
El problema con este mtodo radica en que todava
especficos de protenas de diferentes protenas. Por
no se sabe lo suficiente acerca de las interrelaciones
ejemplo, las inmunotoxinas son nuevas protenas que
estructura-funcin de la mayor parte de las protenas,
se crearon mediante la fusin de un segmento de un gen
para de ese modo ser capaces de predecir qu muta-
que produce una toxina bacteriana o de una planta con
ciones requieren hacerse para alcanzar el objetivo bus-
un gen de un anticuerpo o un factor de crecimiento. El
cado. Sin embargo, como el conocimiento acerca de
objetivo es que el anticuerpo o factor de crecimiento se
la estructura de las protenas continuar en expansin
una a clulas especficas del cuerpo y sean internali-
en los aos por venir, este mtodo encierra un gran
zados por stas, para que luego el fragmento enzim-
potencial.
tico de la toxina pueda matar la clula. Esta tcnica se
En la evolucin dirigida se crean grandes nmeros de encuentra en la bsqueda de una protena de fusin que
variantes del gen de inters, para lo cual se recurre a la luce muy prometedora entre la interleucina humana 2
generacin de mutaciones en las que se usan las tcni- y la protena de la difteria truncada, que ya est en uso
cas del DNA recombinante. Los genes se expresan y luego para tratar un cncer especfico denominado linfoma
se usa un proceso de seleccin para escoger los genes cutneo de clula T.
SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

J1Monosacridos y disacridos
Notas clave

Aldosas y cetosas Un monosacrido tiene la frmula general (CH2O)n y contiene ya sea un gru-
po aldehdo (una aldosa) o un grupo cetona (una cetosa). El grupo aldehdo
o cetona libre puede reducir los iones cpricos (Cu2+) a iones cuprosos (Cu+)
y por consiguiente tal monosacrido se conoce como un azcar reductor.

Estereoismeros Los estereoismeros D y L de los azcares se refieren a la configuracin del

tomo de carbono asimtrico ms alejado del grupo aldehdo o cetona. Se
dice que el azcar es un ismero D si la configuracin de los tomos unidos
a este tomo de carbono es la misma que la del carbono asimtrico en el
D-gliceraldehdo.

Estructuras en anillo Las tetrosas y los azcares ms grandes pueden ciclarse mediante la reac-
cin del grupo aldehdo o cetona con un grupo hidroxilo de otro tomo de
carbono del azcar. La glucosa se cicla principalmente para formar un anillo
de piranosa de seis miembros, mientras que otros azcares forman anillos de
furanosa de cinco miembros. Existen dos formas (anmeros) de D-glucopira-
nosa en funcin de si el grupo hidroxilo unido al tomo de carbono anom-
rico (C-1) se encuentra por debajo del plano del anillo (la forma ) o por en-
cima de este plano (forma ). En solucin, las formas y se interconvierten
a travs de la forma de cadena abierta (mutarrotacin). El anillo de piranosa
puede existir en cualquiera de las conformaciones de tipo bote o silla, pero la
forma de silla predomina ya que los grupos laterales, que son por lo general
grupos OH, tienen menos limitaciones estricas en esta conformacin.
Disacridos Un disacrido se forma cuando dos monosacridos se unen por un enlace
glucosdico. El enlace puede ser o segn la configuracin del tomo de
carbono anomrico implicado en el enlace. Por lo general, est implicado
el tomo de carbono anomrico de slo uno de los dos monosacridos del
enlace, de manera que el disacrido todava presenta un grupo aldehdo o
cetona libre y es reductor. Sin embargo, en la sacarosa ambos tomos de car-
bono anomrico se unen entre s, de manera que la sacarosa es un disacrido
no reductor.
Derivados del azcar Los grupos hidroxilo de los azcares se pueden sustituir por otros grupos
para formar una amplia gama de molculas de importancia biolgica, entre
las que se incluyen azcares fosforilados, aminoazcares y nucletidos.
Nomenclatura Todos los nombres de los azcares simples y derivados del azcar pueden
abreviarse. Esto tambin permite una descripcin abreviada de los azcares
componentes presentes en los disacridos, por ejemplo.

Temas relacionados (H5) Glucosilacin de protenas (J4) Gluconeognesis

(J2) Polisacridos y oligosacridos (J5) Va de la pentosa fosfato
(J3) Gluclisis
 J1MONOSACRIDOS Y DISACRIDOS 253

O O H O H
H
C C C
CH2OH

CHOH C O H C OH HO C H

CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH

D-Gliceraldehdo L-Gliceraldehdo
Gliceraldehdo Dihidroxiacetona
(una aldosa) (una cetosa) Plano del espejo
C3H6O3 C3H6O3
Figura J1-2. El D-gliceraldehdo y el L-gliceraldehdo
Figura J1-1. Estructuras del gliceraldehdo y la son imgenes en espejo entre s (estereoismeros o
dihidroxiacetona. ismeros pticos).

Aldosas y cetosas Ntese que el gliceraldehdo y la dihidroxiacetona tie-

Un hidrato de carbono (o carbohidrato) se compone
de carbono (carbo-) e hidrgeno y oxgeno (-hidrato).
Los carbohidratos ms simples son los monosacridos,
que tienen la frmula general (CH2O)n donde n es 3 o
ms. Un monosacrido o azcar simple consta de una
cadena de carbonos con varios grupos hidroxilo (OH) y
H
un grupo aldehdo (C escrito a menudo como CHO)
O
o un grupo cetona ( C =O ). Un azcar que tiene un grupo
aldehdo se denomina una aldosa, mientras que un az-
car con un grupo cetona es una cetosa. Los hidratos de
carbono ms pequeos para los que n = 3 se denominan
triosas.
Los trminos anteriores se pueden combinar. Por lo
tanto, el gliceraldehdo (figura J1-1) es una triosa que
tiene un grupo aldehdo y as es una aldosa. En con-
secuencia, tambin puede considerarse una aldotriosa.
Del mismo modo, la dihidroxiacetona (figura J1-1) es
una cetotriosa.
Los azcares que contienen un grupo aldehdo o cetona
libre en la configuracin de cadena abierta son capaces
de reducir los iones cpricos (Cu2+) a iones cuprosos
(Cu+) y por eso se denominan azcares reductores. sta
es la base de las pruebas de Fehling y de Benedict para
azcares reductores. Por lo tanto, el extremo reductor
de una cadena de tales azcares es el extremo que lleva
el grupo aldehdo o cetona.
nen la misma composicin qumica, C3H6O3, pero difieren
en la estructura (es decir, son ismeros estructurales).
Estereoismeros
El gliceraldehdo tiene un solo tomo de carbono asi-
mtrico (el central), por lo que son posibles dos este-
reoismeros (tambin llamados ismeros pticos),
esto es, dos formas de gliceraldehdo, denotadas como
D-gliceraldehdo y L-gliceraldehdo, que son imgenes
en espejo entre s (figura J1-2). Tambin existen este-
reoismeros de aminocidos (seccin B1).
Los azcares con cuatro, cinco, seis o siete tomos de
carbono se denominan tetrosas, pentosas, hexosas y
heptosas, respectivamente. En estos casos, los azcares
pueden tener ms de un tomo de carbono asimtrico.
La convencin para numerar los tomos de carbono y
nombrar las configuraciones es la siguiente:
z Los tomos de carbono se numeran desde el extremo
de la cadena de carbonos que se inicia con el grupo
aldehdo (que es el carbono 1, C-1) o el grupo cetona
(que suele ser C-2).
z Los smbolos D y L se refieren a la configuracin del
tomo de carbono asimtrico ms alejado del grupo
aldehdo o cetona.
As, por ejemplo, la glucosa, una aldohexosa, existe en
las formas D y L (figura J1-3a). El carbono asimtrico ms

a) b)
O H O H
1 1 1 1
C C CH2OH CH2OH
2 2 2 2
H C OH HO C H C O C O
3 3 3 3
HO C H H C OH HO C H H C OH
4 4 4 4
H C OH HO C H H C OH HO C H
5 5 5 5
H C OH HO C H H C OH HO C H
6 6 6 6
CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH

D-glucosa L-glucosa D-fructosa L-fructosa

(una aldosa) (una cetosa)

Figura J1-3. a) D-glucosa y L-glucosa; b) D-fructosa y L-fructosa.

254 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

O H O H O R O OH
1 1
C C 1) R OH + R C C
H
2
C OH H
2
C OH
H R H
3 3
HO C H HO C H Alcohol Aldehdo Hemiacetal
4 4
H C OH HO C H
O R O OH
5 5
H C OH H C OH 2) R OH + R' C C
6 6 R" R' R"
CH2OH CH2OH

Alcohol Cetona Hemicetal

D-glucosa D-galactosa

Figura J1-4. Epmeros D-glucosa y D-galactosa. Para las tetrosas y azcares ms grandes, la reaccin
puede tener lugar dentro de la misma molcula, de
modo que la forma de cadena lineal del azcar se cicliza.
alejado del grupo aldehdo es C-5. La D-glucosa (figura Por ejemplo, si el grupo hidroxilo de C-5 de la glucosa
J1-3a) se denomina D debido a que la configuracin de reacciona con el grupo aldehdo, se forma un anillo
los tomos unidos al C-5 es la misma que la del D-glice- de seis miembros, mientras que si el hidroxilo de C-4
raldehdo (figura J1-2). Del mismo modo, la D-fructosa reacciona con el grupo aldehdo, se forma un anillo de
(una cetohexosa; figura J1-3b) se designa D debido a que cinco miembros. La figura J1-5 muestra la ciclizacin
la configuracin en C-5 coincide con la del D-gliceral- de la D-glucosa para formar un anillo de seis carbonos.
dehdo. Los azcares D que difieren en la configuracin Debido a su similitud con el compuesto cclico llamado
en un solo tomo de carbono asimtrico se denominan pirano (figura J1-5b), las estructuras cclicas de seis
epmeros. Por lo tanto, la D-glucosa y la D-galactosa miembros se denominan piranosas.
son epmeros, que slo difieren en la configuracin en
C-4 (figura J1-4). La figura J1-6 muestra la ciclizacin de la cetohexosa
fructosa para formar un anillo de cinco miembros.
Debido a su similitud con el compuesto cclico llamado
Estructuras en anillo furano (figura J1-6b), las estructuras en anillo de cinco
El grupo aldehdo o cetona puede reaccionar con un miembros se denominan furanosas. En general, las
grupo hidroxilo para formar un enlace covalente. De aldosas y cetosas con cinco o ms tomos de carbono
manera formal, la reaccin entre un aldehdo y el grupo pueden formar anillos de piranosa o furanosa de modo
hidroxilo de un azcar (un alcohol) crea un hemiacetal que, en solucin, existe una mezcla de stos. Cul es la
(ecuacin 1), mientras que una cetona reacciona con forma de anillo ms estable y por lo tanto predominante
un grupo hidroxilo (alcohol) para formar un hemicetal depende de la estructura qumica del monosacrido,
(ecuacin 2). incluida la naturaleza de los grupos sustituyentes. Por lo

a) b)
6
CH2OH CH2OH CH2OH
6 6
5 H H 5C OH 5
H O H H O OH O
H H H
4C OH H C
4 1 4 1
OH H 1
OH H
C C O
HO 3 2 OH HO 3 2 HO 3 H
2

H OH H OH H OH
-D-glucosa -D-glucosa Pirano

Figura J1-5. a) Ciclizacin de la forma de cadena abierta de la

D-glucosa; b) estructura del pirano.

a) b)
6 6 6
HOH2C O 1
CH2OH HOH2C OH 1CH2OH HOH2C O 1
OH O
5C H HO C2
5 H HO 2 5 H HO 2

H 4 3 OH H 4C C3 O H 4 3 CH2OH
OH H OH H OH H

-D-fructosa -D-fructosa Furano

Figura J1-6. a) Ciclizacin de la forma de cadena abierta de la

D-fructosa; b) estructura del furano.
 J1MONOSACRIDOS Y DISACRIDOS 255

a) b)
Eje de
a simetra
a H
e O e CH2OH
O O
e e e HO
a H
a H
a a e HO
e e e OH
e HO
a a a a H H
Forma de bote Forma de silla Forma de silla de la
-D-glucosa

Figura J1-7. a) Conformaciones en silla y en bote de los anillos de piranosa;

b) forma de silla estable de la -D-glucosa.

general, la forma cclica predominante de aldohexosas Disacridos

como la glucosa es la piranosa. El grupo aldehdo o cetona del tomo de carbono anom-
Las estructuras cclicas que se muestran en las figuras rico de un monosacrido puede reaccionar con el grupo
J1-5 y J1-6 se denominan proyecciones de Haworth, hidroxilo (u oxhidrilo) de un segundo monosacrido
en las que el plano del anillo puede imaginarse como para formar un disacrido. El enlace covalente formado
aproximadamente perpendicular al plano del papel, con se llama enlace glucosdico. La lactosa (figura J1-8a) es
las lneas gruesas del anillo del diagrama dirigidas hacia un disacrido formado entre el carbono anomrico (C-1)
el lector. Ntese que durante la ciclizacin de la glucosa de la D-galactosa y el C-4 de la D-glucosa. Como el car-
(una aldosa) se forma un nuevo centro asimtrico, en bono anomrico de la molcula de galactosa interviene
C-1, el carbono que enlaza al residuo carbonilo. Por lo en el enlace y est en la configuracin , se llama unin
tanto, existen dos ismeros de D-glucosa (figura J1-5a), (1 4), que puede abreviarse como 1-4. La maltosa
la -D-glucosa (en la que el grupo OH de C-1 se encuen- (figura J1-8) es un disacrido formado entre las posicio-
tra por debajo del plano del anillo) y la -D-glucosa (en la nes C-1 y C-4 de dos unidades de glucosa. Sin embargo,
que el grupo OH de C-1 encuentra por encima del plano aqu la configuracin del tomo de carbono anomrico
del anillo). La estructura de anillo de piranosa de la -D- participante est en la forma y en consecuencia el
glucosa puede escribirse como -D-glucopiranosa. El enlace se llama unin (1 4) y se abrevia 1-4. Para
carbono del carbonilo (C-1 en este caso) se denomina
a)
el tomo de carbono anomrico, y por ello a las formas
y se les llama anmeros. En solucin acuosa, las HOCH2 HOCH2
O O
formas y se interconvierten de forma rpida a travs HO H H
H 1 4 H
de la estructura de cadena abierta para dar una mezcla OH H O OH H
en equilibrio (figura J1-5a). Este proceso se denomina H H OH
mutarrotacin. H OH H OH
Lactosa
En el caso de la cetosa fructosa, el tomo de carbono (Ga l 14 Glc)
anomrico (que lleva el residuo carbonilo) es C-2 y por
b)
lo tanto existen dos ismeros (anmeros) que difieren
en su configuracin sobre ese tomo de carbono (figura HOCH2 HOCH2

J1-6a), es decir, la denominacin / se refiere a la con- H O H H O H

H H
figuracin en C-2, no en C-1. OH H
1 4
OH H
HO O OH
El anillo de piranosa de un azcar de seis carbonos puede
existir en una configuracin de silla o bote (figura J1-7). H OH H OH
Maltosa
Los sustituyentes unidos a los carbonos del anillo que (Glc 14 Glc)
se extienden paralelos al eje de simetra se dice que son
c)
axiles (a), mientras que aquellos que se extienden hacia
el exterior de este eje se dice que son ecuatoriales (e) HOCH2
H O H HOCH2 O H
(figura J1-7). En la forma de bote, existe un considerable
H
impedimento estrico entre los diversos grupos unidos OH H
1 2
H OH
a los tomos de carbono del anillo y, por lo tanto, esta HO O CH2OH
forma es menos favorable desde una perspectiva ener- H OH OH H
gtica. De ah que predomina la forma de silla, como se Sucrosa
muestra para la -D-glucosa en la figura J1-7, donde los (Glc 12Fru)
tomos de hidrgeno ocupan todas las posiciones axiles.
Figura J1-8. Estructura de los disacridos comunes.
256 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

la lactosa y la maltosa, uno de los carbonos anomri-
cos se usa para formar el enlace, lo que deja al segundo
carbono anomrico libre. Por consiguiente, la lactosa y
la maltosa tienen un extremo reductor. En contraste, la
sucrosa (figura J1-8c) es un disacrido constituido por
la formacin de un enlace entre el C-1 anomrico de la
glucosa y el C-2 anomrico de la fructosa, de manera que
la sucrosa carece de un grupo reductor libre.
Derivados del azcar
Los grupos hidroxilo de los monosacridos simples
pueden ser reemplazados por otros grupos para for-
mar una gama de derivados del azcar. Por ejemplo, los
azcares fosforilados como la glucosa 6-fosfato (figura
J1-9) son metabolitos importantes de la gluclisis (sec-
cin J3). En los aminoazcares, un grupo amino (el
cual con frecuencia est acetilado) reemplaza a uno
o ms grupos hidroxilos, por ejemplo la acetil--D-N-
acetilglucosamina (figura J1-9). ste y otros derivados
de azcares son componentes usuales de muchas gluco-
protenas. Los nucletidos (seccin F1), como el ATP,
consisten en un azcar cuyo tomo de carbono anom-
rico forma un enlace covalente con una base nitroge-
nada (figura J1-9). Dado que el enlace se establece entre
el carbono anomrico del azcar y el tomo de nitr-
geno de la base, se llama enlace N-glucosdico. Otras
modificaciones incluyen la oxidacin de uno de los
carbonos para formar un grupo carboxilato, y de esta
manera generar un cido urnico. Por ejemplo, la oxi-
dacin del carbono 6 (C-6) de la D-glucosa es la forma
que produce cido glucurnico (figura J1-9). Los ci-
dos urnicos son componentes importantes de muchos
polisacridos. Las aldosas y cetosas tambin pueden
reducirse para generar alcoholes polihidroxilados, lla-
mados alditoles (figura J1-9), como el sorbitol (D-gluci-
tol), D-manitol y D-xilitol, los cuales son de sabor dulce
y se usan como edulcorantes libres de azcar tanto en
gomas de mascar como en tabletas de menta, y el gli-
cerol, el cual es un importante componente de los lpi-
dos. Los alditoles son molculas lineales que no pueden
ciclizarse.
Nomenclatura
Los azcares simples tienen abreviaturas de tres letras
[p. ej., Glc (glucosa), Gal (galactosa), Man (manosa), Fuc
(fucosa)]. Los derivados de los azcares tambin pue-
den abreviarse, como GlcNAc (N-acetilglucosamina) y
GalNAc (N-acetilgalactosamina). stos tambin permi-
ten una forma abreviada de descripcin de los azcares
que estn enlazados juntos y la naturaleza del enlace
covalente. Por lo tanto, por ejemplo, la lactosa (figura
J1-8a) puede representarse como Gal14Glc.

NH2
O

O P O CH2OH N
N
O H O H
H N N
CH2 OH H O O O
Enlace
HO OH
O P O P O P OCH2 N-glucosdico
H O H O
H N NH
OH H O O O H H
HO C O H CH2OH
OH
H OH CH3 HO OH
Glucosa 6-fosfato -D-N-acetilglucosamina Trifosfato de adenosina (ATP) (un nucletido)

CH2OH CH2OH CH2OH

COO

H O H H C OH HO C H H C OH
H
OH H HO C H HO C H HO C H
OH OH
H C OH H C OH H C OH
H OH
H C OH H C OH CH2OH
cido D-glucurnico
CH2OH CH2OH

Sorbitol D-manitol D-xilitol

(D-glucitol)

Figura J1-9. Ejemplos de derivados azucarados.

SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

J2Polisacridos y oligosacridos
Notas clave
Polisacridos Cadenas largas de monosacridos unidos se denominan de manera grupal po-
lisacridos. Los principales polisacridos de almacenamiento son el glucgeno
(en animales), el almidn (plantas) y el dextrano (en levaduras y bacterias). La
celulosa es un polisacrido estructural que se encuentra en las paredes de las
clulas vegetales.

Glucgeno El glucgeno es un polisacrido de cadena ramificada que contiene residuos

de glucosa ligados por enlaces 1-4, con puntos de ramificacin 1-6. La na-
turaleza ramificada del glucgeno lo vuelve ms accesible a la fosforilasa de
glucgeno durante su degradacin, ya que esta enzima degrada la molcula
mediante la remocin secuencial de los residuos de glucosa del extremo no
reductor.

Almidn El almidn es una mezcla de amilosa sin ramificar (residuos de glucosa unidos
por enlaces 1-4) y amilopectina ramificada (residuos de glucosa unidos por
enlaces 1-4, pero con algunos puntos de ramificacin 1-6).

Dextrano El dextrano consiste en residuos de glucosa unidos de manera preponderan-

te por enlaces 1-6, pero con puntos de ramificacin ocasionales que pueden
formarse por enlaces 1-2, 1-3 o 1-4.

Celulosa La celulosa es un polmero de cadena lineal de unidades de glucosa ligadas

por enlaces 1-4. Las cadenas de polisacridos se alinean para formar fibrillas
que tienen una gran fuerza tensil. Las celulasas, las enzimas que degradan la
celulosa, estn ausentes en los mamferos, pero algunas bacterias, hongos y
protozoarios las producen.

Oligosacridos Las cadenas cortas de monosacridos unidos por enlaces glucosdicos se lla-
man oligosacridos. Los oligosacridos que se encuentran en las glucoprote-
nas estn unidos a un residuo de serina o treonina (oligosacrido unido a O)
o a un residuo de asparagina (oligosacrido unido a un N). Todos los oligosa-
cridos unidos a un N tienen un centro de pentasacrido comn. Los oligo-
sacridos unidos a N altos en manosa tienen residuos de manosa adicionales
unidos al centro, mientras que los oligosacridos unidos a N de tipo complejo
tienen ramas que comprenden combinaciones de GlcNAc, Gal, cido silico y
L-fucosa.

Temas relacionados (H5) Glucosilacin de protenas

(J1) Monosacridos y disacridos
(J6) Metabolismo del glucgeno

Polisacridos en la mayora de las plantas la forma de almacenamiento

Los polisacridos son cadenas largas de unidades de az-
car enlazadas. Segn el polisacrido, las cadenas pue-
den ser lineales o ramificadas. En los animales, el exceso
de glucosa es almacenado como un gran polisacrido
ramificado que se denomina glucgeno, mientras que
de la glucosa es el polisacrido llamado almidn. Las
bacterias y levaduras almacenan glucosa bajo la forma
de otro tipo de disacrido llamado dextrano. En cada
caso, stas son reservas nutricionales; cuando se requie-
ren, son degradadas y los monosacridos liberados se
258 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
metabolizan para producir energa (seccin J3). En con-
traste, la celulosa es un polisacrido estructural usado
para elaborar las paredes celulares de las plantas.
Glucgeno
Una molcula de glucgeno consiste por completo en
unidades de glucosa, la mayora de las cuales est unida
en largas cadenas por enlaces 1-4. Sin embargo, cada
10 unidades o ms, la cadenas se ramifican por la for-
macin de un enlace glucosdico 1-6 (figura J2-1). Cada
segmento de cadena lineal de glucgeno adquiere una
conformacin de hlice abierta, la que incrementa su
accesibilidad a las enzimas del metabolismo del gluc-
geno. Cada cadena termina en un extremo no reductor,
que es un extremo con un grupo 4-OH libre. Como la
enzima que degrada al glucgeno (fosforilasa de gluc-
geno; seccin J6) cataliza la remocin secuencial de uni-
dades glucosilo del extremo no reductor de la cadena de
glucgeno, las ramificaciones numerosas, cada una con
un extremo no reductor, incrementan en gran medida
la accesibilidad del polisacrido a la degradacin. Esto
permite la rpida movilizacin del glucgeno almace-
nado en momentos de necesidad. Las mismas ramas
1-6 son removidas por la enzima desramificante (sec-
cin J6).
Almidn
El almidn existe en las plantas como grnulos de almi-
dn insolubles en los cloroplastos. Cada grnulo de
almidn contiene una mezcla de dos formas de poli-
sacridos, amilosa y amilopectina. La amilosa es un
polmero sin ramificaciones de residuos de glucosa
unidos por enlaces 1-4. La amilopectina es la forma
ramificada; la mayora de los residuos de glucosa cons-
tituyentes estn unidos por enlaces 1-4, pero se pro-
ducen enlaces adicionales 1-6 cada 25-30 residuos, lo
que crea puntos de ramificacin.
CH2OH
H O H z Oligosacridos enlazados al O unidos a la protena a
H
1 travs de enlaces glucosdicos O con los grupos OH
OH H Punto de
O ramicacin 1-6
H OH O
CH2OH
6
CH2
O O
H H H H
H 4
H
1 O
OH H OH H H
Cadena
O O
principal
H OH Enlace H OH
1-4
Figura J2-1. Los enlaces 1-4 en la cadena lineal y
los enlaces 1-6 en los puntos de ramicacin en el
glucgeno.
Dextrano
El dextrano es un polmero de glucosa donde los resi-
duos de glucosa estn unidos sobre todo por enlaces
1-6. No obstante, pueden producirse algunas ramifica-
ciones. stas se establecen de manera tpica por enlaces
1-2, 1-3 o 1-4, segn las especies bacterianas o de
levaduras que sean la fuente del dextrano.
Celulosa
La celulosa es un polisacrido sin ramificaciones de uni-
dades de glucosa unidas por enlaces 1-4 (figura J2-2).
A diferencia del glucgeno, donde los enlaces 1-4 con-
ducen a una conformacin helicoidal del polisacrido,
el enlace entre los residuos de glucosa de la celulosa
crea cadenas lineales muy largas que se ordenan jun-
tas en fibrillas. En las paredes de las clulas vegetales,
las fibrillas de celulosa estn embebidas en (y entre-
cruzadas con) una matriz de otros polisacridos. En
la madera, esta matriz tambin contiene lignina, un
polmero complejo de residuos fenlicos (seccin A2).
Este compuesto tiene una gran fuerza tensil. Los mam-
feros, incluidos los seres humanos, carecen de enzimas
capaces de digerir los enlaces 1-4 de la celulosa y de
esta manera son incapaces de digerir las paredes de las
clulas vegetales. Sin embargo, algunas bacterias pro-
ducen celulasas, las enzimas que degradan la celulosa.
Los animales rumiantes como las vacas tienen bacterias
productoras de celulasa en sus tractos digestivos y de
esa manera pueden digerir la celulosa. Adems, algunos
hongos y protozoarios producen y secretan celulasa.
Oligosacridos
Los oligosacridos son cadenas cortas de monosacri-
dos enlazados por enlaces glucosdicos. En el caso de los
oligosacridos enlazados a protenas (glucoprotenas) o
lpidos (glucolpidos), el oligosacrido no es una unidad
de repeticin sino que consta de un espectro de diferen-
tes monosacridos unidos por tipos de enlaces diversos.
En las glucoprotenas existen dos tipos principales de
enlaces de oligosacridos:
de la serina o treonina de las cadenas laterales (sec-
cin H5, figura H5-1).
CH2OH CH2OH
O
H
O H 1 4
H
OH H O OH H O
H H
H OH H OH
Celulosa
Figura J2-2. La unidad de repeticin de la celulosa
muestra el enlace 1-4.
 J2POLISACRIDOS Y OLIGOSACRIDOS 259

z Oligosacridos enlazados al N unidos a la protena a
travs de enlaces glucosdicos N con los grupos NH2
de la arginina de las cadenas laterales (seccin H5,
figura H5-1). Todos los oligosacridos enlazados al
N tienen un centro comn de pentasacrido de dos
GlcNAc y tres residuos Man, pero la naturaleza de
las cadenas laterales difiere (figura J2-3). En el tipo
de oligosacrido enlazado al N de alto contenido
en manosa, de manera tpica dos a seis residuos
de Man adicionales estn unidos al centro de pen-
tasacrido (p. ej., la figura J2-3a). El tipo complejo
de oligosacrido enlazado al N contiene dos a cinco
ramificaciones externas unidas al Man del centro de
polisacridos; estas ramificaciones contienen com-
binaciones diferentes de GlcNAc, Gal, cido silico
(cido N-acetilneuramnico), manosa y L-fucosa. La
figura 3b muestra un oligosacrido complejo con dos
ramificaciones externas.

a) b)
SA SA

2-3 2-3

Man Man Man Gal Gal

1-2 1-2 1-2 1-4 1-4

Man Man Man GlcNAc GlcNAc

1-2 1-3 1-6 1-2 1-2

Man Man Man Man

1-3 1-6 1-3 1-6

Man Man

1-4 1-4
1-4
GlcNAc GlcNAc GlcNAc

1-4 1-4
1-6
GlcNAc Fuc GlcNAc

Asn Asn

Figura J2-3. Ejemplos de a) oligosacridos de tipo alto en manosa, y b) de tipo

complejo. En cada caso, los azcares que incluye el centro de pentasacrido se
muestran encerrados con la lnea de guiones. SA, cido silico.
SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

J3Gluclisis
Notas clave
Descripcin La gluclisis es un conjunto de reacciones que tienen lugar en el citoplasma de
procariotas y eucariotas. La funcin de la gluclisis consiste en producir energa
(ya sea de manera directa y mediante el aporte de sustratos al ciclo del cido
ctrico y a la fosforilacin oxidativa) y producir intermediarios de las vas bio-
sintticas.
La va metablica La glucosa es fosforilada a glucosa 6-fosfato (por la hexocinasa), la cual es con-
vertida en fructosa 6-fosfato (por la isomerasa de fosfoglucosa) y luego en fruc-
tosa 1,6-bisfosfato (por la fosfofructocinasa, PFK). La fructosa 1,6-bisfosfato es
dividida en gliceraldehdo 3-fosfato y dihidroxiacetona fosfato (por la aldola-
sa) y estas dos triosas son interconvertidas por la isomerasa de triosafosfato. El
gliceraldehdo 3-fosfato es convertido en 1,3-bisfosfoglicerato (por la deshidro-
genasa de gliceraldehdo 3-fosfato), la cual reacciona con el ADP para dar 3-fos-
foglicerato y ATP (catalizada por la cinasa de fosfoglicerato). El 3-fosfoglicerato
es convertido en 2-fosfoglicerato (por una mutasa de fosfoglicerato) y luego en
fosfoenolpiruvato (PEP) por la enolasa. Por ltimo, el PEP y el AMP reaccionan para
formar piruvato y ATP (catalizada por la cinasa de piruvato).
Destinos del piruvato Bajo condiciones aerobias, la deshidrogenasa de piruvato puede convertir el pi-
ruvato en acetilcoenzima A (acetil-CoA), la cual de este modo puede ingresar en
el ciclo del cido ctrico. Bajo condiciones anaerobias, la deshidrogenasa de lac-
tato (LDH) convierte el piruvato en lactato. El NAD+ regenerado por esta reaccin
permite que la gluclisis contine, a pesar de la carencia de oxgeno. Cuando
el oxgeno est disponible, el lactato se convierte en piruvato. En condiciones
anaerobias, levaduras y otros organismos llevan a cabo la fermentacin alcoh-
lica, que convierte el piruvato en acetaldehdo y luego en etanol, durante la cual
se regenera el NAD+ para permitir que la gluclisis contine.
Produccin de energa En la gluclisis se usan dos ATP, y se sintetizan cuatro ATP por cada molcula
de glucosa, de manera que la produccin neta es de dos ATP por glucosa. Bajo
condiciones aerobias, las dos molculas de NADH que se originan durante la
gluclisis tambin producen energa a travs de la fosforilacin oxidativa. La
formacin de lactato bajo condiciones aerobias o la fermentacin alcohlica
producen cada una dos molculas de ATP por cada molcula de glucosa.
Metabolismo de la La fructosa puede ser metabolizada por dos rutas. En el tejido adiposo y el
fructosa msculo, la hexocinasa puede fosforilar la fructosa a fructosa 6-fosfato, que
entonces ingresa en la gluclisis. En el hgado, la mayora de las enzimas pre-
sentes es glucocinasa y no hexocinasa y sta no fosforila la fructosa. En este
tejido, la fructosa es metabolizada en lugar de seguir la va de la fructosa 1-fos-
fato.
Metabolismo de la La galactosa ingresa a la gluclisis a travs de la va de interconversin de ga-
galactosa lactosa-glucosa, una reaccin con una secuencia de cuatro pasos. La falta de la
segunda enzima de esta va, la uridiltransferasa de galactosa 1-fosfato, conduce
a la galactosemia, un estado de enfermedad, a travs de la acumulacin de pro-
ductos txicos, incluido el galactitol formado por la reduccin de la galactosa.
La intolerancia a la lactosa (hipolactasia) es una incapacidad para metabolizar
lactosa debido a la falta de la enzima lactasa.
 J3GLUCLISIS 261

Regulacin de la El paso de control principal es el que cataliza la PFK, pero la hexocinasa y la cina-
gluclisis sa de piruvato son sitios de control adicionales. El ATP inhibe de forma alostrica
la PFK, pero esta inhibicin es liberada por el AMP. El citrato tambin inhibe la PFK.
La elaboracin de fructosa 6-fosfato estimula la formacin de fructosa 2,6-bis-
fosfato, que a su vez estimula la PFK. La enzima que sintetiza fructosa 2,6-bisfos-
fato (fosfofructocinasa 2; PFK-2) y la enzima que la hidroliza a fructosa 6-fosfato
(bisfosfatasa de fructosa 2; FBP-asa 2) tambin son reguladas va hormonal por
el glucagon, que determina que la gluclisis se lentifique cuando los niveles de
glucosa en sangre caen. Los iones H+ tambin inhiben la PFK y por lo tanto evitan
la formacin excesiva de lactato bajo condiciones anaerobias. La hexocinasa es
inhibida por la glucosa 6-fosfato, la cual se elabora despus que la PFK es inhi-
bida. La fructosa 1,6-bisfosfato activa a la cinasa de piruvato, pero el ATP y la
alanina la inhiben por medios alostricos. Como la PFK, tambin es regulada por
medios hormonales a travs del glucagon.

Temas relacionados (J1) Monosacridos y disacridos (J5) Va de la pentosa fosfato

(J2) Polisacridos y oligosacridos (J6) Metabolismos del glucgeno
(J4) Gluconeognesis (L1) Ciclo del cido ctrico

Descripcin 2. La isomerasa de fosfoglucosa convierte a la glucosa

La gluclisis es una serie de reacciones (figura J3-1) que 6-fosfato en fructosa 6-fosfato.
tienen lugar en el citoplasma de todos los procariotas y CH2OPO32
eucariotas. La gluclisis convierte una molcula de glu- H O H Isomerasa 2
O3POH2C O CH2OH
H de fosfoglucosa
cosa en dos molculas de piruvato [las cuales son con-
OH H H HO
vertidas en acetilcoenzima A (acetil-CoA), la sustancia HO OH H OH
que ingresa en el ciclo del cido ctrico]. Se necesitan
H OH HO H
dos molculas de ATP para las reacciones iniciales en la Glucosa 6-fosfato Fructosa 6-fosfato
va glucoltica, pero ms tarde se generan cuatro ATP, lo
que da una produccin neta de dos ATP por molcula de Esta isomerizacin incluye la conversin de una aldosa
glucosa degradada. en cetosa, una conversin que se entiende mejor a tra-
En general, la gluclisis desempea dos funciones. La vs de las representaciones en cadena abierta de tales
primera es producir ATP. Aunque slo se producen dos ATP molculas.
por glucosa de manera directa a partir de las reacciones O H
de la va glucoltica, tambin alimenta con sustratos el C CH2OH
ciclo del cido ctrico y la fosforilacin oxidativa, donde
H C OH C O
se elabora la mayor parte del ATP. El segundo papel es Isomerasa
de fosfoglucosa
producir intermediarios que actan como precursores HO C H HO C H
de varias vas biosintticas. Entre ellos, la acetil-CoA,
por ejemplo, es el precursor de la sntesis de los cidos H C OH H C OH
grasos (seccin K3).
H C OH H C OH

La va metablica CH2OPO32 CH2OPO3

2

Glucosa 6-fosfato Fructosa 6-fosfato

A continuacin se describen los pasos de la gluclisis. (una aldosa) (una cetosa)
1. La glucosa es fosforilada por el ATP para formar glu-
cosa 6-fosfato y ADP. La hexocinasa es la enzima que 3. La fructosa 6-fosfato es fosforilada por el ATP para
cataliza la reaccin. formar fructosa 1,6-bisfosfato y ADP. La enzima que
cataliza este paso es la fosfofructocinasa (PFK).
CH2OH CH2OPO32
2 Fosfofruc- 2 2
H O H H O H O3POH2C O CH2OH O3POH2C O CH2OPO3
H Hexocinasa H tocinasa
+ ATP + ADP + H
+
H HO + ATP H HO + ADP + H+
OH H OH H
HO OH HO OH H OH H OH

H OH H OH OH H OH H
Glucosa Glucosa 6-fosfato Fructosa 6-fosfato Fructosa 1,6-bisfosfato
262 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

Glucosa
ATP
Hexocinasa
ADP

Glucosa 6-fosfato

Isomerasa de fosfoglucosa

Fructosa 6-fosfato
ATP
Fosfofructocinasa (PFK)
ADP

Fructosa 1,6-bisfosfato

Aldolasa

Isomerasa de triosa fosfato

Gliceraldehdo Dihidroxiacetona
3-fosfato fosfato

NAD+ + Pi Deshidrogenasa
de gliceraldehdo
NADH + H+ 3-fosfato

1,3-bisfosfoglicerato

ADP Cinasa
ATP de fosfoglicerato

3-fosfoglicerato

Mutasa
de fosfoglicerato

2-fosfoglicerato

Enolasa
H2O

Fosfoenolpiruvato

ADP Cinasa
ATP de piruvato

Piruvato

Lactato Etanol
Acetil-CoA

cidos grasos
Ciclo del Cuerpos cetnicos
cido ctrico

Figura J3-1. Las reacciones de la gluclisis (de glucosa a piruvato) ms los

destinos del piruvato.
 J3GLUCLISIS 263

4. La aldolasa divide a la fructosa 1,6-bisfosfato (una transferencia del grupo fosforilo desde el 1,3-bisfos-
molcula de seis carbonos) en dos molculas de foglicerato al ADP, lo que genera ATP y 3-fosfoglice-
tres carbonos, el gliceraldehdo 3-fosfato y la dihi- rato.
droxiacetona fosfato. O O

2 C OPO32 C O
CH2OPO3 CH2OPO32 Cinasa
H O de fosfoglicerato
H C OH + ADP H C OH + ATP
C O C O C
Aldolasa
HO C H HO C H + H C OH CH2OPO32 CH2OPO32
1,3-bisfosfoglicerato 3-fosfoglicerato
H C OH H CH2OPO32
8. La mutasa de fosfoglicerato convierte el 3-fosfo-
H C OH
glicerato en 2-difosfoglicerato. Por consiguiente, la
CH2OPO32 reaccin es un movimiento del grupo fosfato a un
Fructosa Dihidroxiacetona Gliceraldehdo
tomo de carbono diferente de la misma molcula.
1,6-bisfosfato fosfato 3-fosfato
O O O O
C Mutasa C
5. El gliceraldehdo 3-fosfato es la nica molcula
de fosfoglicerato
que puede utilizarse para el resto de la gluclisis. H C OH H C OPO32
Sin embargo, la isomerasa de triosa fosfato puede
2
convertir con celeridad la dihidroxiacetona fosfato H C OPO3 H C OH

formada en el paso previo en aldehdo 3-fosfato.

H H
sta es una reaccin de equilibrio; como el glice-
raldehdo 3-fosfato se usa en el resto de la gluclisis, 3-fosfoglicerato 2-fosfoglicerato

se convierte ms dihidroxiacetona fosfato en glice-

9. La enolasa cataliza la deshidratacin del 2-fosfo-
raldehdo 3-fosfato en su reemplazo. Por lo tanto,
glicerato para formar fosfoenolpiruvato (PEP). Esta
de manera efectiva, por cada molcula de fructosa
reaccin convierte el enlace ster del fosfato de baja
1,6-bisfosfato que se divide en el paso 4, continan
energa del 2-fosfoglicerato en el enlace fosfato de
avanzando en la va dos molculas de gliceralde-
alta energa del PEP.
hdo 3-fosfato.

O H O O H 2O O O
CH2OH C C C
Isomerasa
de triosa fosfato Enolasa
C O H C OH H C OPO3
2
C OPO32

H C OH H C
CH2OPO32 CH2OPO32
Dihidroxiacetona fosfato Gliceraldehdo 3-fosfato
H H
(una cetosa) (una aldosa)
2-fosfoglicerato Fosfoenolpiruvato

6. El gliceraldehdo 3-fosfato se convierte en 1,3-bis-

10. En la ltima reaccin, la cinasa de piruvato cataliza
fosfoglicerato. La deshidrogenasa de gliceralde-
la transferencia irreversible desde el punto de vista
hdo 3-fosfato cataliza esta reaccin, en la que
fisiolgico del grupo fosforilo del PEP al ADP para for-
utiliza fosfato inorgnico y NAD+. El otro producto
mar ATP y piruvato.
es NADH. La energa para la creacin de este nuevo
enlace fosfato de alta energa procede de la oxida- O O
ADP
+ O O

+H ATP
cin del grupo aldehdo del gliceraldehdo 3-fos- C C
fato.
C OPO32 C O
O H O OPO3
22 Cinasa de piruvato
Deshidrogenasa
C de gliceraldehdo C H C CH3
3-fosfato
+ +
H C OH + NAD + Pi H C OH + NADH + H H

2 2
Fosfoenolpiruvato Piruvato
CH2OPO3 CH2OPO3
Gliceraldehdo 1,3-bisfosfoglicerato
3-fosfato (1,3-BPG)
Fosforilacin a nivel de sustrato
7. El reciente enlace de fosfato de alta energa creado Hay dos mtodos diferentes por los cuales las clulas
del 1,3-bisfosfoglicerato se usa a continuacin para sintetizan ATP. En la fosforilacin oxidativa, que incluye
sintetizar ATP. La cinasa de fosfoglicerato cataliza la la cadena de transporte de electrones, la generacin del
264 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
ATP va de la mano de la oxidacin del NADH y el FAD2 al
NAD+ y el FAD, respectivamente (seccin L2), y se produce
a travs de la generacin de un gradiente de protones a
travs de la membrana mitocondrial interna. En con-
traste, las dos reacciones sintticas del ATP de la glucli-
sis (catalizada por la cinasa de fosfoglicerato y la cinasa
de piruvato) incluyen la transferencia directa de un
fosfato desde un intermediario de azcar-fosfato al ADP;
estas reacciones son ejemplos de fosforilacin a nivel
de sustrato. Un tercer ejemplo de lo mismo es la sntesis
de GTP por la deshidrogenasa de succinato en el ciclo del
cido ctrico (seccin L1). El GTP puede ser usado para
fosforilar ADP y formar ATP.
Destinos del piruvato
1. Entrar en el ciclo del cido ctrico. La gluclisis
libera relativamente poca energa de la presente
en una molcula de glucosa (vase Produccin de
energa, ms adelante); se libera mucha ms ener-
ga por el metabolismo del piruvato a travs de la va
del ciclo del cido ctrico y de la fosforilacin oxida-
tiva. Al seguir esta ruta (bajo condiciones aerobias),
la enzima deshidrogenasa de piruvato convierte al
piruvato en acetil-CoA, que ingresa entonces en el
ciclo del cido ctrico. La reaccin de la deshidroge-
nasa de piruvato es una descarboxilacin oxidativa
(consltese la seccin L1 para mayores detalles):
Deshidrogenasa de piruvato
piruvato + NAD+ + CoA acetil-CoA + CO2 + NADH
2. Conversin en cidos grasos o cuerpos cetni-
cos. Cuando el nivel de energa celular es alto (es
decir, hay GTP en exceso), la velocidad del ciclo del
cido ctrico (seccin L1) disminuye y la acetil-CoA
comienza a acumularse. Bajo estas condiciones,
la acetil-CoA formada a partir del piruvato puede
usarse para sintetizar cidos grasos o cuerpos cet-
nicos (secciones K2 y K3).
3. Conversin en lactato. El NAD+ usado durante la glu-
clisis (en la formacin de 1,3-bisfosfoglicerato por
la deshidrogenasa de gliceraldehdo 3-fosfato; figura
J3-1) debe ser regenerado si la gluclisis contina.
En condiciones aerobias, el NAD+ se regenera por la
reoxidacin del NADH reducido a travs de la cadena
de transporte de electrones (seccin L2). Cuando el
oxgeno est limitado, como en el msculo durante
la contraccin vigorosa, la reoxidacin del NADH a
NAD+ por la cadena de transporte de electrones se
vuelve insuficiente para mantener la gluclisis. En
estas condiciones, el NAD+ es regenerado porque la
deshidrogenasa de lactato convierte el piruvato en
lactato:
Deshidrogenasa de lactato
piruvato + NADH + H1 lactato + NAD+
Cuando vuelve a haber suficiente oxgeno dispo-
nible, los niveles de NAD+ aumentan a travs de la
operacin de la cadena de transporte de electro-
nes. La reaccin de la deshidrogenasa de lactato
se invierte entonces para regenerar piruvato, que
la deshidrogenasa de piruvato convierte en acetil-
CoA, la cual puede ingresar en el ciclo del cido
ctrico (vase antes). En consecuencia, la opera-
cin de la deshidrogenasa de lactato en mamferos
es un mecanismo para la reoxidacin del NADH a
NAD+ y por lo tanto permite que la gluclisis conti-
ne y se elabore ATP bajo condiciones anaerobias.
El proceso es incluso ms complejo en el caso de
una contraccin vigorosa del msculo esqueltico.
En esta situacin, el lactato producido es llevado
por la corriente sangunea hacia el hgado, donde
se convierte en glucosa y puede regresar otra vez, a
travs de la corriente sangunea, hacia el msculo
esqueltico para que sea metabolizada y produzca
energa.
ste es el ciclo de Cori que se describe en la seccin
J4. Por ltimo, en algunos microorganismos, el lac-
tato es el producto normal del piruvato.
4. Conversin en etanol. En las levaduras y algunos
otros microorganismos, bajo condiciones anae-
robias, el NAD+ que se requiere para continuar la
gluclisis se regenera por un proceso llamado fer-
mentacin alcohlica. El piruvato se convierte en
acetaldehdo (por la descarboxilasa de piruvato) y
luego en etanol (por la deshidrogenasa alcohlica),
reaccin esta ltima en la que el NADH se reoxida a
NAD+:
Descarboxilasa de piruvato
piruvato + H+ acetaldehdo + CO2
Deshidrogenasa de alcohol
acetaldehdo + NADH + H1 etanol + NAD+
Produccin de energa
1. Gluclisis en condiciones aerobias
En la parte inicial de la gluclisis se requieren dos ATP
para que la hexocinasa convierta la glucosa en glucosa
6-fosfato y para que la PFK convierta la fructosa 6-fosfato
en fructosa 1,6-bisfosfato. Pese a ello, la fructosa 1,6-bis-
fosfato da origen a dos unidades de tres carbonos, cada
una de las cuales genera dos ATP en pasos subsecuentes
(catalizados por las cinasas de fosfoglicerato y de piru-
vato), lo que arroja una produccin neta de dos ATP por
molcula de glucosa original (figura J3-1).
La reaccin general es:
Glucosa + 2Pi + 2ADP + 2NAD+ 2 piruvato +
2ATP + 2NADH + 2H+ + 2H2O
Ntese que, bajo condiciones aerobias, las dos molcu-
las de NADH que se sintetizan son tambin reoxidadas
a travs de la cadena de transporte de electrones que
genera ATP. Dada la localizacin citoplsmica de estas
molculas de NADH, cada una se reoxida a travs de la

lanzadera de glicerol 3-fosfato (seccin L2) y produce
alrededor de 1.5 ATP durante la fosforilacin oxidativa o a
travs de la lanzadera de malato-aspartato (seccin L2)
y alrededor de 2.5 ATP durante la fosforilacin oxidativa.
2. Formacin de lactato bajo condiciones
anaerobias
La reaccin general es:
Glucosa + 2Pi + 2ADP 2 lactato + 2ATP + 2H2O
Ntese que el NAD+ y el NADH no se muestran en la reac-
cin anterior debido a que el NADH que se genera en la
gluclisis a partir del NAD+ es vuelto a oxidar y a convertir
en NAD+ durante la conversin del piruvato en lactato.
De esta manera, no hay un cambio neto en los niveles
de NAD+ o NADH durante la gluclisis y por lo tanto en la
conversin del piruvato en lactato. En este caso, slo
se producen dos ATP por la conversin de la glucosa en
lactato.
3. Fermentacin alcohlica
La reaccin general es:
Glucosa + 2Pi + 2ADP + 2H+ 2 etanol +
2ATP + 2CO2 + 2H2O
En la reaccin anterior no se muestran el NAD+ y el NADH
debido a que el NADH que se genera en la gluclisis a par-
tir del NAD+ es vuelto a oxidar a NAD+ positivo durante la
conversin del piruvato en etanol, de manera que no
hay un cambio neto en los niveles de NAD+ o NADH, y la
energa neta producida es de dos molculas de ATP por
molcula de glucosa.
Metabolismo de la fructosa
La fructosa es un azcar abundante en la dieta humana;
la sucrosa (azcar de mesa) es un disacrido que cuando
es hidrolizado produce fructosa y glucosa (seccin J1).
La fructosa es tambin el azcar principal en las frutas y
la miel. Hay dos vas para el metabolismo de la fructosa;
una se produce en el msculo y el tejido adiposo y la
otra en el hgado.
1. En el msculo y en el tejido adiposo, la fructosa
puede ser fosforilada por la hexocinasa (la cual es
capaz de fosforilar la glucosa y la fructosa) para
formar fructosa 6-fosfato, la que entra en la glu-
clisis.
2. En el hgado, las clulas contienen sobre todo
glucocinasa en reemplazo de la hexocinasa y esta
enzima fosforila slo la glucosa. Por consiguiente,
en el hgado, la fructosa es metabolizada por la va
de la fructosa 1-fosfato (figura J3-2).
z La fructocinasa convierte a la fructosa en fruc-
tosa 1-fosfato.
z La aldolasa de fructosa 1-fosfato divide a la fruc-
tosa 1-fosfato en gliceraldehdo y dihidroxiacetona
J3GLUCLISIS 265
Fructosa
Fructocinasa
ATP
ADP
Fructosa 1-fosfato
Aldolasa de
fructosa 1-fosfato
Gliceraldehdo + dihidroxiacetona fosfato
ATP
Cinasa de triosa
ADP
Gliceraldehdo 3-fosfato
Figura J3-2. Va de la fructosa 1-fosfato.
fosfato. La dihidroxiacetona alimenta la gluclisis
en el paso de la isomerasa de triosa fosfato (figura
J3-1).
z La cinasa de triosa fosforila el gliceraldehdo a
gliceraldehdo 3-fosfato y de esta manera ingresa
en la gluclisis.
Metabolismo de la galactosa
La hidrlisis del disacrido lactosa (en la leche) produce
galactosa y glucosa. En consecuencia, la galactosa es
tambin un azcar diettico importante para los huma-
nos. La galactosa y la glucosa son epmeros que difieren
en su configuracin en el C-4 (seccin J1, figura J1-4),
de manera que el ingreso de la galactosa en la gluclisis
requiere una reaccin de epimerizacin. sta tiene lugar
a travs de una va de cuatro pasos llamada va de la
interconversin de galactosa-glucosa (figura J3-3):
1. La galactocinasa fosforila la galactosa y pro-
duce galactosa 1-fosfato. (Vease la reaccin en la
siguiente pgina)
2. La uridiltransferasa de galactosa 1-fosfato cataliza
la transferencia de un grupo uridilo desde la uridina
difosfato (UDP)-glucosa a la galactosa 1-fosfato para
formar UDP-galactosa y glucosa 1-fosfato.
3. La 4-epimerasa de UDP-galactosa convierte a la UDP-
galactosa en UDP-glucosa. Por lo tanto, en general, la
UDP-glucosa no se consume en la va reactiva.
4. Como hecho final, la glucosa 1-fosfato es conver-
tida en glucosa 6-fosfato por la fosfoglucomu-
tasa. Entonces, la glucosa 6-fosfato ingresa en la
gluclisis.
La intolerancia a la lactosa o hipolactasia es una enfer-
medad gentica que se produce debido a una incapa-
cidad para metabolizar la lactosa y as los pacientes
que sufren esta enfermedad no toleran la leche en su
dieta. Por lo regular, la hipolactasia se debe a una falta
de la enzima lactasa, que divide a la lactosa en glucosa
y galactosa. Cualquier lactosa en la leche consumida es
metabolizada por las bacterias en el colon, que convier-
ten el azcar en lactato y generan los gases metano e
hidrgeno.
266 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

HOCH2 HOCH2

HO O H H O H
H O H O O
OH H OH H

H O P O + HO O P O P O Uridina
H OH H OH
O O O
Galactosa 1-fosfato UDP-glucosa

HOCH2 HOCH2

HO O H H O H
H O O H O
OH H OH H

H O P O P O Uridina + HO O P O
H OH H OH
O O O
UDP-galactosa Glucosa 1-fosfato

El gas excesivo causa una sensacin de incomodidad y
plenitud a medida que el intestino se distiende y tambin
produce una flatulencia indeseable. El lactato y cual-
quier cantidad de lactosa que permanezca sin digerirse
determinan asimismo que el agua ingresa en el intes-
tino por smosis, lo cual produce diarrea. La enferme-
dad suele tratarse tan slo mediante la prescindencia de
los alimentos que contienen cantidades sustanciales
de lactosa.
La galactosemia es otra enfermedad gentica causada
por la incapacidad para convertir la galactosa en glu-
cosa. Se acumulan sustancias txicas como el galactitol,
formado por la reduccin de la galactosa, y lleva a graves
consecuencias para el individuo. Los nios que tienen la
enfermedad no crecen, pueden vomitar o tener diarrea
despus de tomar la leche y con frecuencia presentan
un hgado agrandado de tamao acompaado de icte-
ricia. La formacin de cataratas en los ojos, el retardo
mental y una muerte temprana a causa del hgado
daado tambin son posibles. La mayora de los casos
de galactosemia se debe a la deficiencia de la enzima
uridiltransferasa de galactosa 1-fosfato y en consecuen-
cia tales individuos no pueden metabolizar la galactosa.
La enfermedad se trata por medio de la prescripcin de
una dieta libre de galactosa (y libre de lactosa), la cual
previene las cataratas y el dao heptico, pero no el
retardo mental, que puede ser irreversible. Como tales
pacientes presentan niveles normales de 4-epimerasa
de UDP-galactosa, todava pueden sintetizar UDP-galac-
tosa a partir de la UDP-glucosa y de esta manera pueden
todava sintetizar, por ejemplo, oligosacridos en las
glucoprotenas que incluyen residuos Gal.
Regulacin de la gluclisis
Fosfofructocinasa
El paso de control ms importante de la gluclisis es la
reaccin irreversible que cataliza la fosfofructocinasa
(PFK). La enzima es regulada de diversas maneras.
1. Relacin ATP/AMP. Cuando los niveles de ATP caen,
pueden regenerarse a partir del ADP por la cinasa de
adenilato en la siguiente reaccin:
2ADP ATP + AMP
As, un aumento en la concentracin de AMP seala
un estado de baja energa.
El ATP inhibe por medios alostricos a la PFK, pero
esta inhibicin es revertida por el AMP. Lo anterior

Galactosa
ATP
Galactocinasa
ADP
Galactosa 1-fosfato UDP-glucosa

Uridiltransferasa 4-epimerasa
de galactosa 1-fosfato de UDP-galactosa

Glucosa 1-fosfato UDP-galactosa

Fosfoglucomutasa

Glucosa 6-fosfato

Gluclisis

Figura J3-3. Va de interconversin galactosa-glucosa.


permite que la gluclisis sea muy sensible a las
necesidades energticas de la clula, y que aumente
de velocidad cuando el aporte de ATP sea deficien-
te (y el nivel de AMP alto), de manera que pueda ela-
borarse ms ATP y reducir la velocidad cuando exista
suficiente ATP disponible.
2. Citrato. La PFK tambin es inhibida por el citrato, el
primer producto del ciclo del cido ctrico propia-
mente dicho (seccin L1). Un nivel alto de citrato
seala que hay un aporte abundante de intermedia-
rios del ciclo del cido ctrico disponibles y por lo
tanto que no se necesita una degradacin adicional
de la glucosa a travs de la gluclisis.
3. Fructosa 2,6-bisfosfato. La fructosa 2,6-bisfosfato
(F2,6-BP) se sintetiza (figura J3-4) a partir de la fruc-
tosa 6-fosfato con la participacin de una enzima
que se denomina fosfofructocinasa 2 (PFH2), una
enzima diferente a la PFK. La F-2,6-BP es hidrolizada
a fructosa 6-fosfato (figura J3-4) por la fructosa
1,6-bisfosfatasa 2 (FBP-asa 2). De manera increble,
la PFK-2 y la FBP-asa 2 son catalizadas de manera
activa por el mismo polipptido; esto es, sta es una
enzima bifuncional. La fructosa 6-fosfato estimula
la sntesis de F-2,6-BP e inhibe su hidrlisis (figura
J3-4). A la vez, la F-2,6-BP activa con potencia a la
PFK y por lo tanto estimula la gluclisis. El efecto
total es que cuando los niveles de fructosa 6-fos-
fato son altos, la PFK (y en consecuencia la gluclisis)
resulta estimulada. La PFK-2 y la FBP-asa 2 tambin
son controladas por una modificacin covalente
(seccin D5). Cuando los niveles de glucosa en
sangre caen, se libera la hormona glucagon hacia
la circulacin y desencadena una cascada de cAMP
(seccin J7) que conduce a la fosforilacin del poli-
pptido PFK-2/FBP-asa 2 en un residuo de serina.
Esto activa a la FBP-asa 2 e inhibe a la PFK-2, lo
que reduce el nivel de F2,6-BP y as reduce la velo-
cidad de la gluclisis. Lo contrario es cierto cuando
los niveles de glucosa aumentan; el grupo fosfato
es removido del polipptido PFK-2/FBP-asa 2 por
una fosfatasa, y as inhibe a la FBP-asa 2 y activa a
la PFK-2, lo que eleva el nivel de F-2,6-BP y de esta
manera incrementa la velocidad de la gluclisis.
La F-2,6-BP tambin es importante en la preven-
cin de la gluclisis (degradacin de la glucosa) y
en la gluconeognesis (sntesis de glucosa), en las
cuales acta de manera simultnea. Esto se llama
regulacin recproca y se describe en la seccin J4.
4. Iones H+. Los iones H+ inhiben la PFK y as la veloci-
dad de la gluclisis se reduce cuando el pH cae de
manera significativa. Esto evita la formacin exce-
siva de lactato (es decir, cido lctico) bajo condi-
ciones anaerobias (vase antes) y tambin impide
J3GLUCLISIS 267
la condicin mdica conocida como acidosis (un
descenso deletreo en el pH sanguneo).
Hexocinasa
La hexocinasa, la enzima que cataliza el primer paso
irreversible de la gluclisis, es inhibida por la glucosa
6-fosfato. Por lo tanto, cuando la PFK es inhibida, se
elabora fructosa 6-fosfato y de esta manera la glucosa
6-fosfato, ya que estos metabolitos estn en equilibrio
a travs de la isomerasa de fosfoglucosa (figura J3-1).
Por consiguiente, la inhibicin de la hexocinasa refuerza
la inhibicin a nivel del paso PFK. A primera vista, esto
impresiona como algo inusual ya que por lo general el
primer paso es el irreversible de una va (el paso obli-
gado), que por ello es el principal paso de control. Sobre
esta base, puede parecer que la hexocinasa debera ser
la principal enzima de control, no la PFK. Pese a ello, la
glucosa 6-fosfato, el producto de la reaccin de la hexo-
cinasa, tambin puede alimentar la sntesis de gluc-
geno (seccin J6) o la va de la pentosa fosfato (seccin
J5). Por consiguiente, el primer paso irreversible que es
exclusivo de la gluclisis es el catalizado por la PFK y por
lo tanto es el principal paso de control.
Cinasa de piruvato
La cinasa de piruvato cataliza el tercer paso irreversible
de la gluclisis. Es activada por la fructosa 1,6-bisfos-
fato. El ATP y el aminocido alanina inhiben por medios
alostricos la enzima, de manera que la gluclisis se len-
tifica cuando el abastecimiento de ATP y de los precur-
sores biosintticos (indicado por los niveles de Ala) se
encuentra suficientemente alto. Adems, en un control
similar al de la PFK (vase antes), cuando la concentra-
cin de la glucosa en sangre es baja, se libera glucagon,
que estimula la fosforilacin de la enzima a travs de la
cascada del cAMP (seccin J7). Esta modificacin cova-
lente inhibe la enzima, de modo que la gluclisis se len-
tifica en tiempos de niveles de glucosa en sangre bajos.
Estimulada por la
fructosa 6-fosfato
ATP ADP
PFK2
Fructosa 6-fosfato Fructosa 2,6-bisfosfato
FBP-asa2
Pi
Inhibida por la
fructosa 6-fosfato
Figura J3-4. Sntesis y degradacin de la fructosa
2,6-bisfosfato.
SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

J4Gluconeognesis
Notas clave
Descripcin La gluconeognesis sintetiza glucosa a partir de precursores que no son carbohi-
dratos y es importante para el mantenimiento de los niveles de glucosa en san-
gre durante la inanicin o durante el ejercicio vigoroso. El cerebro y los eritroci-
tos dependen casi por completo de la glucosa en sangre como fuente de energa.
La gluconeognesis sucede sobre todo en el hgado y en una menor extensin en
el rin. La mayora de las enzimas de la gluconeognesis son citoslicas, pero
la carboxilasa de piruvato y la glucosa 6-fosfatasa se localizan en la matriz mito-
condrial y estn unidas al retculo endoplsmico liso, respectivamente.
La va metablica El piruvato se convierte en oxalacetato (por la carboxilasa de piruvato). El oxa-
lacetato es descarboxilado y fosforilado a fosfoenolpiruvato (PEP) por la carboxi-
cinasa de fosfoenolpiruvato (carboxicinasa PEP). El PEP se convierte en fructo-
sa 1,6-bisfosfato por la inversin directa de varias reacciones de la gluclisis.
A continuacin, la fructosa 1,6-bisfosfato es desfosforilada a fructosa 6-fosfato
(por la fructosa 1,6-bisfosfatasa) y sta es convertida en glucosa 6-fosfato (por
la isomerasa de fosfoglucosa). Finalmente, la glucosa 6-fosfato es desfosforilada
(por la glucosa 6-fosfatasa) para producir glucosa.
Energa usada La sntesis de una molcula de glucosa a partir de dos molculas de piruvato
requiere seis molculas de ATP.
Transporte de El oxalacetato, el producto del primer paso de la gluconeognesis, debe aban-
oxalacetato donar la mitocondria e ingresar en el citosol, donde tienen lugar los siguientes
pasos enzimticos. Como la membrana mitocondrial interna es impermeable
al oxalacetato, la deshidrogenasa de malato mitocondrial lo convierte en mala-
to. ste deja la mitocondria e ingresa en el citosol, donde la deshidrogenasa de
malato citoslica lo convierte en oxalacetato.
Activacin de la El oxalacetato, el producto de la reaccin de la carboxilasa de piruvato, funciona
carboxilasa de piruvato como un importante intermediario del ciclo del cido ctrico en la oxidacin
de la acetil-CoA y como un precursor de la gluconeognesis. La actividad de la
carboxilasa de piruvato depende de la presencia de acetil-CoA, de manera que
se elabora ms oxalacetato cuando los niveles de acetil-CoA se elevan.
Regulacin recproca Si la gluclisis y la gluconeognesis operan de manera simultnea, el efecto neto
de la gluclisis y la debera ser la hidrlisis de dos molculas de ATP y dos molculas de GTP. Esto se
gluconeognesis evita gracias a la regulacin recproca en los pasos enzimticos que son diferen-
tes en cada va. El AMP activa la fosfofructocinasa (PFK) (ATP), pero inhibe a la fruc-
tosa 1,6-bisfosfatasa (gluconeognesis). El ATP y el citrato inhiben a la PFK, pero el
citrato estimula a la fructosa 1,6-bisfosfatasa. La gluclisis y la gluconeognesis
tambin son sensibles a las condiciones de la inanicin a travs de la concen-
tracin de la fructosa 2,6-bisfosfato (F-2,6-BP). Durante la inanicin se libera
glucagon en la corriente sangunea e inhibe la sntesis de F-2,6-BP. En el estado
de alimentacin se libera insulina en la sangre y determina la acumulacin de
F-2,6-BP. Como la F-2,6-BP activa a la PFK e inhibe a la fructosa 1,6-bisfosfatasa,
en el animal alimentado la gluclisis es estimulada y la gluconeognesis es inhi-
bida y viceversa durante la inanicin. En el hgado, el ATP y la alanina inhiben a
la cinasa de piruvato (gluclisis), mientras que el ADP inhibe a la carboxilasa de
piruvato y a la carboxicinasa de PEP (gluconeognesis). Por consiguiente, la glu-
clisis es inhibida en periodos en los que el ATP y los intermediarios biosintti-
cos estn en exceso, mientras que la gluconeognesis es inhibida en tiempos en
que el nivel de ATP es bajo (y el de ADP es alto). La cinasa de piruvato tambin es
 J4GLUCONEOGNESIS 269

estimulada por la fructosa 1,6-bisfosfato, de manera que sus tasas se incremen-

tan cuando la gluclisis est activa. Durante la inanicin, la secrecin de gluc-
geno en la sangre activa una cascada de cAMP que conduce a la fosforilacin e
inhibicin de la cinasa de piruvato (gluclisis).
Ciclo de Cori Durante un ejercicio vigoroso, el piruvato producido por la gluclisis en el
msculo se convierte en lactato por la accin de la deshidrogenasa de lacta-
to. El lactato se difunde en la corriente sangunea y es transportado al hgado.
Aqu, es convertido en glucosa a travs de la gluconeognesis. La glucosa se
libera a la sangre y queda disponible para ser captada por el msculo (as como
por otros tejidos, entre los que se incluye el cerebro). Este ciclo de reacciones
se denomina ciclo de Cori.

Temas relacionados (H5) Glucosilacin de la protena (J5) Va de la pentosa fosfato

(J1) Monosacridos y disacridos (J6) Metabolismo del glucgeno
(J2) Polisacridos y oligosacridos (L1) Ciclo del cido ctrico
(J3) Gluclisis

Descripcin bolizado a glucosa. En principio, la gluconeognesis es

La gluconeognesis sintetiza glucosa a partir de precur-
sores que no son carbohidratos, entre los que se inclu-
yen el lactato y el piruvato, intermediarios del ciclo del
cido ctrico, los esqueletos carbonados de la mayora de
los aminocidos y el glicerol. Es de extrema importan-
cia dado que el cerebro y los eritrocitos dependen casi
exclusivamente de la glucosa como su fuente de energa
en condiciones normales. El almacenamiento heptico
de glucgeno es suficiente para proveer al cerebro con
glucosa por slo alrededor de medio da en condicio-
nes de ayuno. Por consiguiente, la gluconeognesis es
de especial importancia en periodos de inanicin o de
ejercicio vigoroso. Durante la inanicin, la formacin
de glucosa a travs de la gluconeognesis utiliza en parti-
cular aminocidos procedentes de la degradacin de las
protenas y glicerol de la descomposicin de las grasas.
Durante el ejercicio, los niveles de glucosa en sangre
requeridos por la funcin cerebral y del msculo esque-
ltico se mantienen por medio de la gluconeognesis en
el hgado, rgano que utiliza el lactato producido por el
msculo.
El sitio principal de gluconeognesis es el hgado, aun-
que tambin se produce en una extensin bastante
menor en los riones. Tiene lugar una gluconeognesis
mucho menor en el cerebro o el msculo. Dentro de las
clulas hepticas, la primera enzima de la gluconeog-
nesis, la carboxilasa de piruvato, se localiza en la matriz
mitocondrial. La ltima enzima, la glucosa 6-fosfatasa,
est unida al retculo endoplsmico liso. Las otras enzi-
mas de la va se localizan en el citosol.
La va metablica
En la gluclisis (seccin J3), la glucosa es metabolizada
a piruvato. En la gluconeognesis, el piruvato es meta-
la inversa de la gluclisis. En efecto, algunas de las reac-
ciones de la gluclisis son reversibles y las dos vas tie-
nen estos pasos en comn. Pese a ello, tres pasos de
la gluclisis son esencialmente irreversibles: aquellos
catalizados por las enzimas hexocinasa, fosfofructoci-
nasa (PFK) y cinasa de piruvato (seccin J3). En efecto,
hay un gran cambio en la energa libre negativa en estas
reacciones que de manera habitual dirigen la gluclisis
hacia la formacin de piruvato. Por lo tanto, en la glu-
coneognesis, estos tres pasos deben reservarse para
usar otras reacciones, como se muestra en la figura
J4-1; la gluconeognesis no es la simple inversa de la
gluclisis.
Precursores de la gluconeognesis
El glicerol puede actuar como un sustrato para la sntesis
de glucosa mediante la conversin en dihidroxiacetona
fosfato, un intermediario de la gluconeognesis (figura
J4-1). Con el fin de que el lactato, piruvato, intermedia-
rios del ciclo del cido ctrico y los esqueletos de carbono
de la mayora de los aminocidos acten como precur-
sores de la gluconeognesis, estos compuestos primero
deben convertirse en oxalacetato. Algunos de los esque-
letos de carbono de los aminocidos dan origen al oxala-
cetato en forma directa. Otros alimentan el ciclo del
cido ctrico como intermediarios (secciones L1 y M2)
y el ciclo entonces convierte tales molculas en oxalace-
tato. El lactato es convertido en piruvato por la reaccin
de la deshidrogenasa de lactato (seccin J3) y algunos
aminocidos tambin dan origen al piruvato (seccin
M2). En consecuencia, en el caso de estos precursores,
el primer paso de la va gluconeognica es la conversin
del piruvato en oxalacetato.
Los pasos de la gluconeognesis (figura J4-1) son los
siguientes:
270 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

GLUCLISIS Glucosa GLUCONEOGNESIS

ATP Pi
Hexocinasa 1
Glucosa 6-fosfatasa
ADP

Glucosa 6-fosfato

Isomerasa de fosfoglucosa

Fructosa 6-fosfato

ATP Pi
Fosfofructocinasa 2
Fructosa 1,6-bisfosfatasa
ADP

Fructosa 1,6-bisfosfato

Aldolasa

Isomerasa de triosa fosfato

Gliceraldehdo Dihidroxiacetona
3-fosfato fosfato
Deshidrogenasa NAD+ + Pi NAD+ + Pi
de gliceraldehdo +
NADH + H NADH + H+
3-fosfato
1,3-bisfosfoglicerato

Cinasa de ADP ADP

fosfoglicerato ATP ATP

3-fosfoglicerato

Mutasa
de fosfoglicerato

2-fosfoglicerato

Enolasa

Fosfoenolpiruvato
GDP + CO2
Carboxicinasa
ADP de fosfoenolpiruvato
Cinasa 3 GTP
de piruvato
Oxalacetato
ATP
ADP + Pi
Carboxilasa de piruvato
Piruvato
ATP + CO2

Figura J4-1. Comparacin entre gluconeognesis y gluclisis. Los tres pasos

de la gluclisis que son irreversibles y estn numerados: 1) la hexocinasa en la
gluclisis es revertida por la glucosa 6-fosfatasa en la gluconeognesis; 2) la PFK de
la gluclisis es revertida por la fructosa 1,6-bisfosfatasa de la gluconeognesis; 3) la
cinasa de piruvato de la gluclisis es revertida por dos reacciones secuenciales de la
gluconeognesis catalizadas por la carboxilasa de piruvato y la carboxicinasa PEP.

1. El piruvato se convierte en oxalacetato mediante
una carboxilacin que realiza la enzima carboxi-
lasa de piruvato, que se localiza en la matriz mito-
condrial.
COO
Carboxilasa
de piruvato
C O + CO2 + ATP
CH3
Piruvato
Esta enzima utiliza biotina como transportador
activado de CO2; la reaccin ocurre en dos etapas:
E-biotina + ATP + HCO3 E-biotina-CO2 + ADP + Pi
E-biotina-CO2 + piruvato E-biotina + oxalacetato
2. Luego, el oxalacetato es atacado por la carboxici-
nasa de fosfoenolpiruvato (carboxicinasa PEP), la
cual descarboxila y fosforila de manera simult-
nea la molcula para formar PEP, en una reaccin
durante la cual se libera CO2 y se usa GTP:
COO Carboxicinasa COO
de fosfoenolpiruvato
C O + GTP C O
CH2 CH2
COO
Oxalacetato Fosfoenolpiruvato
De esta manera, la inversin del paso glucol-
tico desde PEP a piruvato requiere dos reacciones
en la gluconeognesis, de piruvato a oxalacetato
mediante la carboxilasa de piruvato y de oxalace-
tato a PEP mediante la carboxicinasa de PEP. Dado
que, durante la gluclisis, la conversin de PEP en
piruvato sintetiza ATP, no es de sorprenderse que
la inversin total de este paso necesite el aporte de
cantidades sustanciales de energa, un ATP para el
paso de la carboxilasa de piruvato y un GTP para
el paso de la carboxicinasa de PEP.
3. El PEP se convierte en fructosa 1,6-bisfosfato en una
serie de pasos que son la inversa de los de la gluc-
lisis (seccin J3) a travs de la intervencin de las
enzimas enolasa, mutasa de fosfoglicerato, cinasa
de fosfoglicerato, deshidrogenasa de gliceraldehdo
3-fosfato, isomerasa de triosa fosfato y aldolasa
(figura J4-1). Esta secuencia de reacciones usa un
ATP y un NADH por cada molcula de PEP metaboli-
zada.
4. La fructosa 1,6-bisfosfato es desfosforilada para for-
mar fructosa 6-fosfato a travs de la enzima fruc-
tosa 1,6-bisfosfatasa, en la reaccin:
fructosa 1,6-bisfosfato + H2O fructosa 6-fosfato + Pi
J4GLUCONEOGNESIS 271
5. La enzima glucoltica isomerasa de fosfoglucosa
convierte a la fructosa 6-fosfato en glucosa 6-fos-
fato.
6. La enzima glucosa 6-fosfatasa convierte a la glu-
COO
cosa 6-fosfato en glucosa. Esta enzima est unida
al retculo endoplsmico liso y cataliza la reaccin:
C O + ADP + Pi
glucosa 6-fosfato + H2O glucosa + Pi
CH2
COO
Energa usada
Oxalacetato Como podra esperarse, la sntesis de glucosa a travs
de la gluconeognesis necesita aporte de energa. Se
requieren dos molculas de piruvato para sintetizar
una molcula de glucosa. La energa se requiere en los
siguientes pasos:
Carboxilasa de piruvato 1 ATP ( 2) = 2 ATP
Carboxicinasa PEP 1 GTP ( 2) = 2 ATP
Cinasa de fosfoglicerato 1 ATP ( 2) = 2 ATP
Total = 6 ATP
Esto se compara con slo dos ATP como la produccin
neta de ATP por la gluclisis. Por lo tanto, se requiere un
aporte extra de cuatro ATP por glucosa para invertir la
O
gluclisis.
P O + GDP + CO2
En los hechos, la reaccin de la deshidrogenasa de glice-
O raldehdo 3-fosfato tambin consume NADH, equivalente
a dos molculas de NADH por cada molcula de glucosa
sintetizada. Como cada NADH citoslico debera usarse
de manera usual para generar alrededor de dos molcu-
las de ATP por medio de la lanzadera de glicerol 3-fosfato
y la fosforilacin oxidativa (seccin L2), esto equivale al
suministro de otros cuatro ATP por glucosa sintetizada.
Transporte de oxalacetato
La carboxilasa de piruvato es una enzima de la matriz
mitocondrial, mientras que las otras enzimas de la gluco-
neognesis se localizan fuera de la mitocondria. Por con-
siguiente, el oxalacetato, producido por la carboxilasa de
piruvato, necesita salir de la mitocondria. Sin embargo, la
membrana mitocondrial interna es impermeable a este
compuesto. En consecuencia, la deshidrogenasa de
malato mitocondrial convierte al oxalacetato en malato
en el interior de la mitocondria, tras lo cual el malato es
transportado a travs de la membrana mitocondrial por
una protena de transporte especial y luego es reconver-
tido en oxalacetato en el citoplasma por una deshidro-
genasa de malato citoslica (figura J4-2).
Activacin de la carboxilasa
de piruvato
El oxalacetato desempea dos funciones principales. Es
un intermediario que se consume en la gluconeognesis
y es tambin un intermediario clave en el ciclo del cido
ctrico ya que se fusiona con la acetil-CoA para formar
272 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

Piruvato

CITOSOL

MATRIZ
MITOCONDRIAL
Piruvato

ATP + CO2
Carboxilasa
de piruvato
ADP+ Pi

Oxalacetato

NADH + H+
Deshidrogenasa
de malato
NAD+

Malato

Malato

NAD+
Deshidrogenasa
de malato
NADH + H+

Oxalacetato

Gluconeognesis

Figura J4-2. Transporte del oxalacetato fuera de la mitocondria.

citrato, y termina por ser regenerado por el ciclo. De esta
manera, la carboxilasa de piruvato genera oxalacetato
para la gluconeognesis, pero tambin debe mantener
niveles de oxalacetato para el funcionamiento del ciclo
del cido ctrico. A raz de esta ltima causa, la actividad
de la carboxilasa de piruvato depende en absoluto de
la presencia de acetil-CoA; el grupo prosttico biotina
de la enzima no puede ser carboxilado a menos que la
acetil-CoA est unida a la enzima. Esta activacin alos-
trica por la acetil-CoA asegura que se elabore ms oxa-
lacetato cuando haya un exceso de acetil-CoA. En este
papel del mantenimiento del nivel de intermediarios del
ciclo del cido ctrico, se dice que la reaccin de la car-
boxilasa de piruvato es anapleurtica.
Regulacin recproca de la gluclisis
y la gluconeognesis
La conversin de la fructosa 6-fosfato en fructosa 1,6-bis-
fosfato por la PFK y la reaccin inversa catalizada por la
fructosa 1,6-bisfosfatasa es un ejemplo de un ciclo de
sustrato (figura J4-3). Si ambas reacciones se producen
en forma simultnea, la reaccin neta es la hidrlisis del
ATP. Por esta razn, tales reacciones han sido denomina-
das ciclos ftiles.
Si se observa la va completa, la gluclisis genera dos
ATP netos por glucosa, mientras que la gluconeogne-
sis utiliza cuatro ATP y dos GTP por glucosa. Por lo tanto,
si la gluclisis y la gluconeognesis pudieran operar en

ATP
Fructosa 6-fosfato
Pi

Fosfofructocinasa
Fructosa 1,6-bisfosfatasa
(PFK)

ADP
Fructosa 1,6-bisfosfato

Figura J4-3. Ciclo del sustrato fructosa 6-fosfato-fructosa 1,6-bisfosfato.

 J4GLUCONEOGNESIS 273

forma simultnea y convirtieran la glucosa en piruvato La gluclisis y la gluconeognesis son sensibles a la

y a la recproca otra vez, el nico resultado neto sera la
utilizacin de dos ATP y dos GTP. Esto se evita por la regu-
lacin coordinada estrecha de la gluclisis y la gluconeo-
gnesis. Como la mayora de los pasos de las dos vas son
comunes, los pasos que son diferentes en cada va
son los sitios de esta regulacin, en particular las inter-
conversiones entre fructosa 6-fosfato y fructosa 1,6-bis-
fosfato y entre PEP y piruvato. La situacin se resume en
la figura J4-4 y se describe con detalle despus.
Regulacin de la PFK y de la fructosa
1,6-bisfosfatasa
Cuando el nivel de AMP es alto, indica la necesidad de
una sntesis mayor de ATP. El AMP estimula a la PFK, lo que
incrementa la tasa de gluclisis, e inhibe a la fructosa
1,6-bisfosfatasa, lo que detiene la gluconeognesis. Por
el contrario, cuando los niveles de ATP y citrato son altos,
sealan que no necesita producirse ms ATP. El ATP y el
citrato inhiben a la PFK, lo que disminuye la tasa de la
gluclisis, en tanto que el citrato estimula a la fructosa
1,6-bisfosfatasa, lo que incrementa la tasa de gluconeo-
gnesis.
inanicin por el nivel de la molcula reguladora fruc-
tosa 2-6-bisfosfato (F-2,6-BP). La F-2,6-BP es sintetizada
a partir de la fructosa 6-fosfato y es hidrolizada a fruc-
tosa 6-fosfato otra vez por un solo polipptido con dos
actividades enzimticas (PFK-2 y FBP-asa 2; seccin J3).
El nivel de F-2,6-BP se encuentra bajo control hormo-
nal. Durante la inanicin, cuando el nivel de glucosa
en sangre es bajo, se libera la hormona glucagon hacia
la sangre, la cual desencadena una cascada de cAMP
(seccin J7) que termina por causar la fosforilacin del
polipptido PFK-2/FBP-asa 2. Este nucletido activa a la
FBP-asa 2 e inhibe a la PFK-2, con lo cual disminuye el
nivel de F-2,6-BP (seccin J3). En el estado de alimen-
tacin, cuando la glucosa en sangre se halla en un nivel
alto, se libera la hormona insulina, que provoca el efecto
opuesto, dado que causa una elevacin en el nivel de
F-2,6-BP. Como la F-2,6-BP estimula con fuerza a la PFK
e inhibe a la fructosa 1,6-bisfosfatasa (figura J4-4), la glu-
clisis resulta estimulada y la gluconeognesis inhibida
en el animal alimentado. Por el contrario, durante la
inanicin, el bajo nivel de F-2,6-BP permite que predo-
mine la gluconeognesis.

GLUCLISIS GLUCONEOGNESIS
Fructosa 6-fosfato

F-2,6-BP El citrato activa

Activan
AMP F-2,6-BP
Fosfofructocinasa Fructosa Inhiben
AMP
ATP 1,6-bisfosfato
Citrato Inhiben
H+

Fructosa 1,6-bisfosfatasa

Pasos comunes

Fosfoenolpiruvato

Carboxicinasa El ADP inhibe

de fosfoenolpiruvato

F-1,6-BP activan Cinasa

de piruvato
ATP Oxalacetato
Inhiben
Ala
Carboxilasa
de piruvato La acetilcoenzima la activa
El ADP la inhibe
Piruvato

Figura J4-4. Regulacin recproca de la gluclisis y la gluconeognesis.

274 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
Regulacin de la cinasa de piruvato, carboxilasa
de piruvato y carboxicinasa de PEP
z En el hgado, los altos niveles de ATP y alanina inhi-
ben a la cinasa de piruvato, de manera que cuando
el ATP y los intermediarios biosintticos se encuen-
tran en abundancia se inhibe la gluclisis (seccin
J3). La acetil-CoA tambin es abundante bajo estas
condiciones y activa a la carboxilasa de piruvato, lo
que favorece la gluconeognesis. Al revs, cuando el
estado de energa de las clulas es bajo, la concen-
tracin de ADP es alta y esto inhibe a la carboxilasa de
piruvato y a la carboxicinasa de PEP, lo que detiene
la gluconeognesis. Al mismo tiempo, el nivel de ATP
estar bajo, de manera que la cinasa de piruvato no
ser inhibida y la gluclisis se activar.
z La fructosa 1,6-bisfosfatasa estimula asimismo a la
cinasa de piruvato (seccin J3; activacin por ante-
alimentacin), de manera que su actividad aumenta
cuando se necesita, a medida que la gluclisis se ace-
lera.
z Durante la inanicin, la prioridad es conservar la
glucosa en sangre para el cerebro y el msculo, de
manera que bajo estas condiciones la cinasa de piru-
vato en el hgado es inactivada. Esto sucede debido a
HGADO
Glucosa
Gluconeognesis
Piruvato
+ NADH + H+
Deshidrogenasa NADH + H
de lactato
NAD+
Lactato
Figura J4-5. Ciclo de Cori.
que la hormona glucagon es secretada hacia la sangre
y activa la cascada de cAMP (seccin J7), que lleva a
la fosforilacin e inhibicin de esta enzima.
Ciclo de Cori
Bajo las condiciones de oxgeno escaso que se experi-
mentan durante el ejercicio vigoroso, la formacin de
NADH por la gluclisis excede a la capacidad de la cadena
respiratoria para oxidarlo y convertirlo en NAD+. La des-
hidrogenasa de lactato convierte entonces el piruvato
producido por la gluclisis muscular en lactato, una
reaccin que regenera NAD+ y que permite que la gluc-
lisis contine para producir ATP (seccin J3).
No obstante, el lactato es un producto metablico sin
salida en la medida que resulta imposible metabolizarlo
ms en tanto no se lo reconvierta en piruvato. El lactato
se difunde afuera del msculo y es transportado en la
sangre hacia el hgado. Aqu se difunde dentro de las
clulas hepticas donde la deshidrogenasa de lactato lo
convierte en piruvato. Luego, el piruvato es convertido
en glucosa a travs de la gluconeognesis y la glucosa
es liberada hacia la corriente sangunea lista para ser
tomada por el msculo esqueltico (y el cerebro). Este
ciclo de reacciones (figura J4-5) se llama ciclo de Cori.
MSCULO
Glucosa
Gluclisis
SANGRE Piruvato
Deshidrogenasa
de lactato
NAD+
Lactato
SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

J5Va de la pentosa fosfato

Notas clave
Descripcin Los dos principales productos de la va son el dinucletido de nicotinamida y
adenina fosfato (forma reducida; NADPH) y ribosa 5-fosfato. La ribosa 5-fosfato
y sus derivados son componentes de importantes molculas celulares como el
RNA, DNA, NAD+, FAD, ATP y de la CoA. El NADPH se requiere en muchas vas biosint-
ticas y en particular para la sntesis de cidos grasos y esteroides. Por lo tanto,
la va es muy activa en tejidos como el tejido adiposo, la glndula mamaria y la
corteza suprarrenal.
Principales reacciones Las reacciones de la va metablica pueden agruparse en tres etapas. En la
de la va primera etapa, las reacciones oxidativas convierten la glucosa 6-fosfato en ri-
bulosa 5-fosfato, lo que genera dos molculas de NADPH. En la segunda etapa, la
ribulosa 5-fosfato se convierte en ribosa 5-fosfato por isomerizacin. La tercera
etapa de reacciones, catalizada por la transcetolasa y la transaldolasa, convierte
a la ribosa 5-fosfato en fructosa 6-fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato y por consi-
guiente enlaza a la va de la pentosa fosfato con la gluclisis.
Control de la va Las reacciones de la transcetolasa y la transaldolasa son reversibles y por lo tan-
to permiten la conversin de la ribosa 5-fosfato en intermediarios glucolticos
cuando no se necesita para otras reacciones celulares, o para la generacin de
ribosa 5-fosfato a partir de intermediarios glucolticos cuando se requiere ms.
La velocidad de la va de la pentosa fosfato es controlada por la regulacin del
NADP+ del primer paso, catalizada por la deshidrogenasa de glucosa 6-fosfato.

Temas relacionados (J1) Monosacridos y disacridos

(J3) Gluclisis
(K3) Sntesis de cidos grasos

Descripcin partir de la acetil-CoA (seccin K3). La actividad de esta

En las clulas, el poder de reduccin est disponible
como NADH y NADPH, pero stos cumplen funciones muy
diferentes. El NADH es oxidado por la cadena respirato-
ria para generar ATP a travs de la fosforilacin oxidativa
(seccin L2). El NADPH se usa en reacciones biosintticas
que requieren poder reductor. A pesar de sus estruc-
turas similares (seccin D1), el NADH y el NADPH no son
intercambiables desde el punto de vista metablico y
por eso la clula debe realizar un conjunto de reacciones
para crear de manera especfica NADPH. Este conjunto
de reacciones es la va de la pentosa fosfato (tambin
conocida como desviacin de la hexosa monofosfato
o como va del fosfogluconato). sta tiene lugar en el
citosol y es de particular importancia en tejidos como
el tejido adiposo, la glndula mamaria y la corteza
suprarrenal, que sintetizan cidos grasos y esteroides a
va es muy baja en el msculo esqueltico, por ejemplo,
el cual no sintetiza cidos grasos ni esteroides.
El conjunto central de reacciones de la va oxida la glu-
cosa 6-fosfato a ribosa 5-fosfato y genera NADPH. Por
consiguiente, as como genera NADPH, la va desempea
una segunda funcin importante en la conversin de
hexosas en pentosas, en particular la ribosa 5-fosfato.
La ribosa 5-fosfato o sus derivados se requieren en la
sntesis de RNA, DNA, NAD+, FAD, ATP, CoA y otras molculas
importantes. En consecuencia, los dos principales pro-
ductos de la va son NADPH y ribosa 5-fosfato.
Principales reacciones de la va
Las reacciones centrales de la va pueden resumirse
como:

glucosa ribosa
2NADP H 2O 2 NADPH 2H CO 2
6-fosfato 5-fosfato
276 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

O O
H C OH C O C CO2
NADPH +
H C OH NADP+ + H+ H C OH H2O H+ H C OH NADP+ NADPH CH2OH
O O
HO C H HO C H HO C H C O

H C OH H C OH H C OH H C OH

H C H C H C OH H C OH
2 2 2 2
CH2OPO3 CH2OPO3 CH2OPO3 CH2OPO3
Glucosa 6-fosfato 6-fosfoglucono- 6-fosfogluconato Ribulosa 5-fosfato
-lactona

La va tiene tres etapas:

Xilulosa 5-fosfato + Ribosa 5-fosfato
Etapa 1: reacciones oxidativas que convierten la (C5) (C5)
glucosa 6-fosfato en ribulosa 5-monofosfato, lo Transcetolasa
que genera dos molculas de NADPH
La deshidrogenasa de glucosa 6-fosfato oxida a la glu- Gliceraldehdo 3-fosfato + Sedoheptulosa 7-fosfato
(C3) (C7)
cosa 6-fosfato a 6-fosfoglucono--lactona (lo que pro-
duce NADPH) y sta es hidrolizada por la lactonasa a Transaldolasa
6-fosfogluconato. En el paso ulterior, la deshidrogenasa
de 6-fosfogluconato convierte a este sustrato en ribu- Fructosa 6-fosfato + Eritrosa 4-fosfato
(C6) (C4)
losa 5-fosfato. sta es una descarboxilacin oxidativa
(es decir, el 6-fosfogluconato es oxidado y un carbono
Xilulosa 5-fosfato Transcetolasa
es removido como CO2). Estas reacciones se muestran
(C5)
en la parte superior:

Etapa 2: isomerizacin de la ribulosa 5-fosfato en Gliceraldehdo 3-fosfato + Fructosa 6-fosfato

(C3) (C6)
ribosa 5-fosfato
La ribulosa 5-fosfato se convierte luego en ribosa 5-fos- En la figura J5-1 se muestran detalles de estas reaccio-
fato por isomerizacin, una reaccin que cataliza la iso- nes, donde se pueden observar las estructuras de las
merasa de fosfopentosa: molculas intervinientes. Estas reacciones requieren
xilulosa 5-fosfato, as como ribosa 5-fosfato. La xilu-
O H losa 5-fosfato es un epmero (seccin J1) de la ribulosa
CH2 OH C 5-fosfato y es un producto de la epimerasa de fosfo-
C O Isomerasa H C OH pentosa:
de fosfopentosa
H C OH H C OH
CH2OH CH2OH
H C OH H C OH Epimerasa
C O C O
2
de fosfopentosa
H2C OPO32 H2C OPO3
H C OH HO C H
Ribosa 5-fosfato Ribosa 5-fosfato H C OH H C OH
2
CH2OPO3 CH2OPO32
Ribulosa 5-fosfato Xilulosa 5-fosfato
Etapa 3: enlazamiento de la va de la pentosa
fosfato a la va de la gluclisis a travs de la En general, las reacciones de esta etapa pueden resu-
transcetolasa y la transaldolasa mirse como:
Si en un momento se requiere slo una pequea can-
tidad de pentosa 5-fosfato para la sntesis de cidos 2 xilulosas ribosa 2 fructosas gliceraldehdo
nucleicos y otras reacciones sintticas, tendera a acu- 5-fosfato 5-fosfato 6-fosfato 3-fosfato
mularse y entonces las enzimas transcetolasa y transal-
dolasa la convierten en fructosa 6-fosfato y gliceralde- Control de la va
hdo 3-fosfato. Estos dos productos son intermediarios Las reacciones de la transcetolasa y la transaldolasa
de la gluclisis. Por lo tanto, estas reacciones proveen son reversibles, de manera que los productos finales de
un enlace entre la va de la pentosa fosfato y la gluclisis. la va de la pentosafosfato pueden cambiar segn las
El resumen de las reacciones se muestra a continuacin: necesidades metablicas de la clula. Por consiguiente,
 J5VA DE LA PENTOSA FOSFATO 277

cuando las clulas necesitan NADPH pero no ribosa 5-fos-
fato, esta ltima se convierte en intermediarios glucol-
ticos que ingresan en la gluclisis. En el otro extremo,
cuando la necesidad de ribosa 5-fosfato excede a la de
NADPH, la fructosa 6-fosfato y el gliceraldehdo 3-fosfato
pueden ser tomados de la gluclisis y convertidos en
ribosa 5-fosfato por las reacciones invertidas de la trans-
cetolasa y la transaldolasa.
La primera reaccin de la va, la oxidacin de la glucosa
6-fosfato por la deshidrogenasa de glucosa 6-fosfato,
es limitante de la velocidad e irreversible. La enzima es
regulada por el NADP+. A medida que la clula usa el
NADPH, la concentracin de NADP+ aumenta y estimula a
la deshidrogenasa de glucosa 6-fosfato, lo que provoca
un aumento de la velocidad de la va y de la regenera-
cin de NADPH.

O CH2OH
H
CH2OH C O H C O

C O H C OH C HO C H
Transcetolasa
HO C H + H C OH H C OH + H C OH
2
H C OH H C OH CH2OPO3 H C OH
2 2
CH2OPO3 CH2OPO3 H C OH
2
CH2OPO3
Xilulosa Ribosa Gliceraldehdo Sedoheptulosa
5-fosfato 5-fosfato 3-fosfato 7-fosfato

CH2OH

C O O CH2OH
O H H
HO C H C C C O
Transaldolasa
H C OH + H C OH H C OH + HO C H
2
H C OH CH2OPO3 H C OH H C OH
2
H C OH CH2OPO3 H C OH
2 2
CH2OPO3 CH2OPO3
Sedoheptulosa Gliceraldehdo Eritrosa Fructosa
7-fosfato 3-fosfato 4-fosfato 6-fosfato

CH2OH
CH2OH O H O H
C O
C O C C
Transcetolasa HO C H
HO C H + H C OH H C OH +
2
H C OH
H C OH H C OH CH2OPO3
2 2
H C OH
CH2OPO3 CH2OPO3
2
CH2OPO3
Xilulosa Eritrosa Gliceraldehdo Fructosa
5-fosfato 4-fosfato 3-fosfato 6-fosfato

Figura J5-1. Detalles de las reacciones de la transaldolasa y la transcetolasa.

SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

J6Metabolismo del glucgeno

Notas clave
Funciones del En primer lugar, el glucgeno se almacena en el hgado y en el msculo esque-
metabolismo ltico como una reserva de energa. El papel del glucgeno almacenado en el
del glucgeno msculo es proveer una fuente de energa en las situaciones de contraccin
muscular prolongada. En contraste, el glucgeno almacenado en el hgado se
usa para mantener los niveles de glucosa en sangre.

Degradacin La fosforilasa de glucgeno y la enzima desramificante de glucgeno son las

del glucgeno enzimas encargadas de la degradacin del glucgeno. La fosforilasa remue-
ve unidades de glucosa en forma secuencial desde los extremos no reductores
de una molcula de glucgeno, lo que produce glucosa 1-fosfato. Esta enzima
slo ataca los enlaces glucosdicos 1-4 y no puede hacerlo con los puntos de
ramificacin 1-6. La fosfoglucomutasa convierte a la glucosa 1-fosfato en glu-
cosa 6-fosfato. En el hgado, la glucosa 6-fosfatasa acaba por liberar la glucosa,
que ingresa en la corriente sangunea. Los msculos carecen de glucosa 6-fos-
fatasa. En su lugar, la glucosa 6-fosfato ingresa en la gluclisis y es oxidada para
producir energa destinada a la contraccin muscular.

Sntesis de glucgeno La fosforilasa de UDP-glucosa sintetiza UDP-glucosa a partir de ATP y de glu-

cosa 1-fosfato. Entonces, la sintasa de glucgeno usa la UDP-glucosa como un
sustrato para sintetizar glucgeno, al que aade un residuo por vez en el extre-
mo no reductor de la molcula de glucgeno, y forma enlaces 1-4 entre los
residuos de glucosilo colindantes. La enzima slo puede extender las cadenas
y por lo tanto requiere un cebador, llamado glucogenina, con el fin de comen-
zar la sntesis. La glucogenina es una protena con ocho unidades de gluco-
sa unidas mediante enlaces 1-4. La enzima ramificante se encarga de crear
las ramas del glucgeno al romper un enlace 1-4 de la cadena de glucgeno
y moverlo hacia una localizacin ms interna de alrededor de siete residuos,
donde lo une a la cadena principal por medio de un enlace 1-6.

Temas relacionados (J1) Monosacridos y disacridos (J4) Gluconeognesis

(J3) Gluclisis (J7) Control del metabolismo del glucgeno

Funciones del metabolismo del glucgeno
El glucgeno es un gran polmero de residuos de glucosa
unidos por enlaces glucosdicos 1-4, con ramificacio-
nes cada 10 residuos o ms a travs de enlaces glucos-
dicos 1-6 (seccin J2 para la estructura). El glucgeno
proporciona una reserva de energa importante para el
cuerpo. Los dos principales sitios de almacenamiento
son el hgado y el msculo esqueltico, donde el gluc-
geno se almacena en grnulos en el citosol. Los grnu-
los no slo contienen glucgeno sino tambin las enzi-
mas y protenas reguladoras que se requieren para su
degradacin y sntesis. El metabolismo del glucgeno es
importante debido a que permite mantener el nivel de la
glucosa en sangre entre las comidas (a travs del alma-
cenamiento de glucgeno en el hgado), as como pro-
veer una reserva de energa para la actividad muscular.
El mantenimiento de la glucosa en sangre es esencial
para proveer a los tejidos con una fuente de energa de
fcil metabolismo, en particular el cerebro, que utiliza
slo glucosa excepto despus de un largo periodo de
inanicin.
Degradacin del glucgeno
La degradacin del glucgeno requiere dos enzimas: la
fosforilasa de glucgeno y la enzima desramificante de
glucgeno.
La fosforilasa de glucgeno (denominada con frecuencia
tan slo fosforilasa) degrada el glucgeno al deshacer
los enlaces glucosdicos 1-4 para liberar una unidad
de glucosa cada vez desde el extremo no reductor de la
molcula de glucgeno (el extremo con un grupo 4-OH
libre; seccin J2) como glucosa 1-fosfato. El otro sustrato
requerido es el fosfato inorgnico (Pi). La reaccin es un
 J6METABOLISMO DEL GLUCGENO 279

ejemplo de fosforlisis, la cual es la rotura de un enlace
covalente mediante la adicin de un grupo fosfato. La
reaccin (reducible) es como sigue:
glucgeno Pi glucgeno glucosa 1-fosfato
(n residuos) (n 1 residuos)
Sin embargo, la fosforilasa de glucgeno puede remo-
ver slo residuos de glucosa que no estn ms all de
cinco residuos de distancia del punto de ramificacin.
La enzima desramificante de glucgeno remueve las
ramificaciones 1-6 y de esa manera permite que la fos-
forilasa contine con la degradacin de la molcula
de glucgeno. La enzima fosfoglucomutasa convierte a
la glucosa 1-fosfato producida en glucosa 6-fosfato:
glucosa 1-fosfato glucosa 6-fosfato
El destino de la glucosa 6-fosfato depende de los tejidos. El
hgado contiene la enzima glucosa 6-fosfatasa, la cual
convierte a la glucosa 6-fosfato en glucosa, que entonces
se difunde hacia la corriente sangunea y de esa manera
mantiene la concentracin de la glucosa en sangre:
glucosa 6-fosfato + H2O glucosa + Pi
Durante la degradacin del glucgeno en el msculo,
el objetivo principal es obtener energa con celeridad y
por eso la glucosa 6-fosfato se metaboliza de inmediato
a travs de la gluclisis. Este tejido no contiene glucosa
6-fosfatasa.
Sntesis de glucgeno
Se necesitan tres enzimas para sintetizar glucgeno:
1. La fosforilasa de UDP-glucosa cataliza la sntesis
de UDP-glucosa (figura J6-1) a partir de UDP y glucosa
1-fosfato:
UTP + glucosa 1-fosfato UDP-glucosa 3 PPi
La pirofosfatasa inorgnica hidroliza de inmediato
al pirofosfato (PPi) y al hacerlo libera energa. Por
lo tanto, la reaccin general es exergnica y esen-
cialmente irreversible.
2. En ese momento entra en accin la sintasa de glu-
cgeno, la que transfiere el residuo glucosilo de
la UDP-glucosa al grupo OH del C-4, en el extremo
no reductor de una molcula de glucgeno, lo que
forma un enlace 1-4 (figura J6-2). Como dato de
inters, la sintasa de glucgeno slo puede extender
una cadena existente. Por consiguiente, necesita un
cebador; ste es una protena llamada glucogenina.
La glucogenina contiene ocho unidades glucosilo
unidas mediante enlaces 1-4, las cuales se aaden
a la protena por s mismas (es decir, por autocat-
lisis). Es sta la molcula por intermedio de la cual
la sintasa de glucgeno extiende. Cada grnulo de
glucgeno contiene slo una molcula de gluco-
genina en su centro. El hecho de que la sintasa de
glucgeno es slo por completo activa cuando est
en contacto con la glucogenina limita el tamao del
grnulo de glucgeno.
3. La enzima ramificante [amilo-(1-41-6)trans-
glucosilasa] es una enzima diferente a la enzima
desramificante de glucgeno. Despus que las uni-
dades de glucosa se unen como una cadena lineal
con enlaces 1-4, la enzima ramificante rompe
uno de los enlaces 1-4 y transfiere un bloque de
residuos (por lo general alrededor de siete) a un
sitio ms interno de la molcula de glucgeno,
donde lo vuelve a fijar mediante la creacin de un
enlace 1-6. Las ramificaciones son importantes
debido a que las enzimas que sintetizan y degra-
dan glucgeno (sintasa de glucgeno y fosfori-
lasa de glucgeno, respectivamente) trabajan slo
en los extremos de la molcula de glucgeno. En
consecuencia, la existencia de muchas terminales
permite una tasa ms rpida de sntesis y degra-
dacin de la que sera posible con un polmero sin
ramificaciones.

HOCH2

H O H
H
OH H O O O O
HO O P O +
O P O P O P O Uridina
H OH O
O
O
O

HOCH2

H O H
H
OH H O O
HO O P O P O Uridina + PPi
H OH O
O

Figura J6-1. Reaccin de la pirofosforilasa de UDP-glucosa.

280 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

HOCH2
HOCH2 HOCH2
H O H
H O O H O H H O H
OH H H H
HO O P O P O Uridina + OH H OH H
H OH HO O O
O O
H OH H OH
UDP-glucosa Glucgeno
(n residuos)

HOCH2 HOCH2 HOCH2

O O H O H H O H H O H
H H H
O P O P O Uridina + OH H OH H OH H
O O O
O O HO

H OH H OH H OH
UDP Glucgeno
(n + 1 residuo)

Figura J6-2. Sntesis de glucgeno por la sintasa de glucgeno.

SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

J7Control del metabolismo

del glucgeno
Notas clave
Descripcin La degradacin y sntesis de glucgeno estn controladas por regulacin alos-
trica y hormonal.
Control alostrico y La fosforilasa existe en una forma activa, la forma a, y en una forma desfosfo-
modicacin covalente rilada, que de manera usual es inactiva, la forma b. La fosforilasa cinasa y la
fosfatasa de protena I interconvierten ambas formas. En el msculo, la fosfori-
lasa b es activada por las altas concentraciones de AMP generado por un ejercicio
extenuante y por lo tanto degrada glucgeno, pero la estimulacin por el AMP
recibe la oposicin de las altas concentraciones de ATP y glucosa 6-fosfato y de
esta manera la enzima permanece inactiva en el msculo en reposo. En el h-
gado, la fosforilasa b no responde al AMP, pero la fosforilasa a es desactivada por
la glucosa, de modo que la degradacin del glucgeno para producir glucosa
sucede slo cuando los niveles de sta son bajos. De manera habitual, la sintasa
de glucgeno existe en una forma inactiva b fosforilada y en una forma a activa
desfosforilada. Una alta concentracin de glucosa 6-fosfato puede activar a la
sintasa b en el msculo en reposo y estimular as la sntesis de glucgeno, pero
la enzima es inactiva cuando el msculo se contrae, donde la concentracin de
glucosa 6-fosfato es baja.
Control hormonal por la La adrenalina estimula la degradacin del glucgeno en el msculo esquelti-
adrenalina y el glucagon co. La adrenalina y el glucagon estimulan la degradacin del glucgeno en el
hgado. La hormona se une a un receptor de la membrana plasmtica y activa a
la ciclasa de adenilato a travs de una protena G. La ciclasa de adenilato sinte-
tiza cAMP a partir de ATP, el cual a su vez activa la proteincinasa A. Esta enzima
fosforila a la fosforilasa cinasa, lo cual la activa. La fosforilasa cinasa convierte
entonces a la fosforilasa inactiva b en fosforilasa activa a mediante fosforilacin.
La misma proteincinasa A inactiva a la sintasa de glucgeno mediante fosfori-
lacin, lo que convierte a la sintasa de glucgeno a en sintasa de glucgeno b.
Cuando los niveles de esta hormona descienden, la estimulacin de la degrada-
cin del glucgeno es detenida por la degradacin del cAMP a 5-AMP, accin
que realiza la fosfodiesterasa, y por medio de la desfosforilacin de las formas
fosforiladas de la fosforilasa y la sintasa, acciones que realiza la fosfatasa de pro-
tena I.
Control hormonal por la La insulina es liberada a la corriente sangunea cuando la concentracin de
insulina la glucosa en sangre es alta y estimula la sntesis de glucgeno. Se une y activa a la
proteincinasa receptora de la membrana plasmtica de las clulas destino. Esto
lleva a la activacin de una proteincinasa que responde a la insulina que activa
a su vez a la fosfatasa de protena I por fosforilacin. La fosfatasa de protena I
activada asegura que la fosforilasa y la sintasa de glucgeno se desfosforilen, y
por lo tanto inhibe la degradacin del glucgeno y activa la sntesis del mismo.
Control del metabolismo Durante la contraccin muscular, los iones Ca2+ liberados desde el retculo sar-
del glucgeno coplsmico activan de manera parcial a la fosforilasa cinasa desfosforilada y as
dependiente del calcio inhiben la degradacin del glucgeno y activan la sntesis del mismo.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (J3) Gluclisis

(E5) Transduccin de seales (J4) Gluconeognesis
(J1) Monosacridos y disacridos (J6) Metabolismo del glucgeno
282 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
Descripcin
Si la sntesis y degradacin simultneas del glucgeno
fueran posibles (figura J7-1), el efecto neto sera la
hidrlisis del UTP a travs de un ciclo del sustrato (tam-
bin llamado un ciclo ftil; seccin J4). No obstante,
ambas vas estn controladas de manera muy cercana
y ese control evita la hidrlisis innecesaria del UTP. Este
control se lleva a cabo mediante regulacin alostrica
y modificacin covalente de la sintasa de glucgeno y
de la fosforilasa de glucgeno. Adems, la modificacin
covalente se halla bajo control hormonal estrecho.
PPi UDP-glucosa
UTP UDP
Glucosa 1-fosfato Glucgeno
Pi
Figura J7-1. La operacin simultnea de
sntesis y degradacin del glucgeno podra
resultar en la hidrlisis neta de UTP.
Control alostrico y modicacin
covalente
La fosforilasa existe en dos formas intercambiables; la
fosforilasa activa a y la fosforilasa b, que por lo regular
est inactiva. La fosforilasa b es un dmero y es conver-
tida en fosforilasa a por fosforilacin de un residuo de
serina de cada subunidad a travs de la enzima fosfori-
lasa cinasa. El proceso puede revertirse y la fosforilasa
inactivarse por la remocin del grupo fosfato que realiza
la fosfatasa de protena I (figura J7-2a).
En el msculo esqueltico, las altas concentraciones de
AMP pueden activar a la fosforilasa b (al actuar en un sitio
alostrico), a lo que se oponen las altas concentracio-
nes de ATP y glucosa 6-fosfato que se encuentran en el
msculo en reposo, de manera que en esta condicin la
fosforilasa b se halla por consiguiente inactiva. Como
la forma predominante de la fosforilasa en el msculo
en reposo corresponde a la fosforilasa b, no se produce
una degradacin significativa del glucgeno en estas
condiciones. Pese a ello, durante el ejercicio, las con-
centraciones de ATP y glucosa 6-fosfato caen y la concen-
tracin de AMP aumenta. Por consiguiente, la fosforilasa
b es activada y esto conduce a la rpida degradacin del
glucgeno para producir tanta energa como se nece-
site. El ATP, AMP o la glucosa 6-fosfato no ejercen ningn
efecto sobre la fosforilasa a y de esa manera permanece
activa bajo cualquier condicin.
En el hgado, el AMP no activa a la fosforilasa b y por lo
tanto permanece inactiva. A diferencia del msculo,
por lo tanto, la degradacin del glucgeno en el hgado
no es sensible al estado energtico de la clula. En su
lugar, la fosforilasa a es desactivada por la glucosa. Esto
se corresponde con los diferentes papeles del almacena-
miento de glucgeno en el hgado, en primer lugar con
el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre.
Por consiguiente, a medida que los niveles de glucosa se
elevan, la degradacin del glucgeno por la fosforilasa
a heptica es desactivada y slo se repone cuando los
niveles de glucosa vuelven a descender.
La sintasa de glucgeno tambin se regula por modifi-
cacin covalente e interacciones alostricas. La enzima
existe bajo una forma de sintasa de glucgeno activa a y
una forma de sintasa de glucgeno habitualmente inac-
tiva b. Empero, a diferencia de la fosforilasa, la forma
activa de la sintasa de glucgeno (sintasa a) es la des-
fosforilada, en tanto que la forma inactiva (sintasa b) es
la que contiene fsforo (figura J7-2b).
Una alta concentracin de glucosa 6-fosfato puede acti-
var a la sintasa de glucgeno b. Durante la contraccin
muscular, los niveles de glucosa 6-fosfato son bajos y
por lo tanto la sintasa de glucgeno b est inhibida. ste
es el momento en que la fosforilasa b se encuentra ms
activa (vase antes). Por lo tanto, cuando se produce
la degradacin del glucgeno, se inhibe su sntesis, lo
que evita la entrada en accin de un ciclo ftil. Cuando
el msculo recupera el estado de reposo y el ATP y los
niveles de glucosa 6-fosfato aumentan, la fosforilasa b es
inhibida (vase antes), lo que detiene la degradacin del
glucgeno, mientras que la sintasa de glucgeno es acti-
vada para restituir las reservas de glucgeno. La forma
a) Fosforilasa cinasa
ATP ADP
Fosforilasa b Fosforilasa a
(desfosforilada, inactiva) (fosforilada, activa)
Pi Fosfatasa de protena I
b) Fosfatasa
de protena Pi
Sintasa de glucgeno b Sintasa de glucgeno a
(fosforilada, inactiva) (desfosforilada, activa)
ADP ATP
Proteincinasa A
Figura J7-2. Regulacin de a) la actividad
de la fosforilasa de glucgeno, y b) actividad
de las sintasa de glucgeno por fosforilacin
(modicacin covalente).
 J7CONTROL DEL METABOLISMO DEL GLUCGENO
a de la sintasa es activa de manera independiente de la
concentracin de glucosa 6-fosfato.
Control hormonal por la adrenalina
y el glucagon
El metabolismo del glucgeno es controlado por hor-
monas en forma estrecha. Cuando los niveles de glucosa
en sangre descienden, el glucagon es secretado por las
clulas del pncreas y acta sobre el hgado para esti-
mular la degradacin del glucgeno en glucosa, la cual
en ese momento se libera hacia la corriente sangunea
para elevar los niveles de glucosa en sangre otra vez.
La contraccin muscular o la estimulacin nerviosa (la
respuesta de lucha o huida) determina la liberacin
de adrenalina desde la mdula suprarrenal y sta acta
sobre el msculo para incrementar la pronta degrada-
cin del glucgeno y as tener glucosa disponible para
satisfacer las necesidades energticas de las clulas.
Se considera en primer lugar la activacin de la degra-
dacin del glucgeno por la adrenalina en el hgado. La
hormona se une a un receptor, llamado receptor adre-
nrgico , en la membrana plasmtica de la clula obje-
tivo (figura J7-3). La unin de la hormona al receptor
determina un cambio conformacional de la protena,
Adrenalina
Receptor de
la adrenalina
ATP cAMP + PPi
Ciclasa
de adenilato
Proteincinasa
(inactiva)
ATP + Defosfo-fosforilasa
cinasa
(inactiva)
ATP +
Figura J7-3. Mecanismos de accin de la adrenalina.
283
el cual a su vez activa una enzima llamada ciclasa de
adenilato. El receptor no activa a la ciclasa de adeni-
lato de manera directa sino que lo hace mediante la
activacin de una protena G como un intermediario
del proceso de sealizacin (vase la seccin E5 para
mayores detalles). La ciclasa de adenilato activada con-
vierte al ATP en 3,5-AMP cclico (cAMP). El cAMP se une
a la proteincinasa A (PKA), tambin conocida como pro-
teincinasa dependiente de cAMP. Esta enzima consiste
en dos subunidades reguladoras (R) y dos subunidades
catalticas (C) que producen un complejo R2C2, que de
manera habitual es inactivo (figura J7-3). La unin
de dos molculas de cAMP a cada una de las subunida-
des reguladoras conduce a la disociacin del complejo
en un complejo R2 y dos subunidades C libres que ahora
son activas desde el punto de vista cataltico. La protein-
cinasa A activa fosforila a la fosforilasa cinasa, la cual
puede existir en una forma desfosforilada inactiva y en
una forma fosforilada activa. Por lo tanto, la fosforilasa
cinasa pasa a estar activada y a su vez fosforila a la fosfo-
rilasa b, lo que la convierte en la fosforilasa activa a, que
a su vez desarrolla la degradacin rpida del glucgeno.
Este conjunto de reacciones se denomina cascada y
est organizado para amplificar la seal original de un
Membrana plasmtica
CLULA HEPTICA
Proteincinasa
(activa)
Fosfo-fosforilasa + ADP
cinasa
(activa)
Fosforilasa Fosforilasa + ADP
de glucgeno b de glucgeno a
(inactiva) (activa)
Glucgeno + Pi Glucosa 1-fosfato
Glucosa 6-fosfato
Glucosa + Pi
Glucosa
284 SECCIN J METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
pequeo nmero de molculas de hormona. Por ejem-
plo, cada molcula de hormona unida causa la produc-
cin de muchas molculas de cAMP dentro de las clu-
las; la proteincinasa A activada a su vez activa muchas
molculas de fosforilasa cinasa, y cada fosforilasa cinasa
activada a su vez activa muchas molculas de fosfori-
lasa. Por consiguiente, una pequea seal hormonal
puede causar un cambio importante del metabolismo
celular.
Para evitar la existencia de un ciclo improductivo (ftil),
la sntesis de glucgeno es detenida durante la estimu-
lacin de la degradacin del glucgeno por parte de la
adrenalina y el glucagon. Esto se alcanza mediante la pro-
teincinasa A activada que, as como fosforila a la fos-
forilasa cinasa, tambin fosforila a la sintasa de gluc-
geno a, lo que la convierte en la forma inactiva de sin-
tasa b (figura J7-4). Por lo tanto, la proteincinasa A activa
la de-gradacin del glucgeno e inhibe la sntesis del
mismo.
Cuando los niveles de adrenalina y glucagon caen otra
vez en la corriente sangunea, la hormona se disocia del
receptor, no se produce ms cAMP y la fosfodiesterasa
de cAMP convierte el cAMP existente en 5-AMP (es
decir, AMP normal y no la forma cclica), una enzima
que permanece activa en las clulas. Esta declinacin en
los niveles de cAMP detiene la cascada de la activacin.
Las enzimas que han sido fosforiladas son ahora desfos-
foriladas por la fosfatasa de protena I, lo que restaura la
situacin a su condicin original.
Control hormonal por la insulina
Las clulas del pncreas liberan insulina en la corriente
sangunea, cuando los niveles de glucosa en sangre
Proteincinasa A
Fosforilasa
cinasa
+
Fosforilasa b Fosforilasa a
(inactiva) (activa)
Figura J7-4. Control dual de la degradacin y sntesis del glucgeno por parte de la protena cinasa A.
estn altos despus de comer, y estimula la sntesis
de glucgeno para almacenar el exceso de glucosa como
glucgeno. Este control tambin se alcanza a travs de
sucesos de fosforilacin. La insulina se une a su recep-
tor en la membrana plasmtica y la activa. Este receptor
tiene actividad de cinasa de tirosina (es decir, fosforila
los residuos de tirosina seleccionados en las protenas
objetivo; seccin E5). Su activacin conduce a la acti-
vacin de una proteincinasa que responde a la insulina
y que entonces fosforila a la fosfatasa de protena I y
al hacerlo la activa. Esta enzima asegura que la sintasa
de glucgeno sea desfosforilada (y por lo tanto sea acti-
vada) y que la fosforilasa cinasa sea tambin desfosfo-
rilada (por lo tanto, inactivada). El efecto neto consiste
en estimular la sntesis de glucgeno.
Control del metabolismo del glucgeno
dependiente del calcio
Como ya se explic, durante el control hormonal de
la adrenalina o el glucagon, la fosforilasa cinasa des-
fosforilada se activa a medida que es fosforilada por
la proteincinasa. sta entonces activa a la fosforilasa y
estimula la degradacin del glucgeno. Sin embargo,
hay tambin otra forma de activar a la fosforilasa cinasa
desfosforilada, cuando menos en forma parcial, y sta
es mediante altas concentraciones de iones Ca2+. ste
representa un mecanismo importante en la contrac-
cin muscular, la cual se desencadena cuando el Ca2+
es liberado de los almacenes internos del retculo sar-
coplsmico (seccin B5). Por lo tanto, del mismo modo
que el control alostrico y el control hormonal durante
la contraccin muscular, los cuales estimulan la degra-
dacin del glucgeno, hay tambin un control depen-
diente del calcio.
Sintasa Sintasa
de glucgeno a de glucgeno b
(activa) (inactiva)
SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

K1Estructura y funcin de
los cidos grasos
Notas clave
Estructura y propiedades Los cidos grasos consisten en una larga cadena hidrocarbonada con un cido
carboxlico terminal. La mayora de los cidos grasos tiene un nmero par
de tomos de carbono en una cadena sin ramificaciones. Los cidos grasos
saturados no tienen dobles enlaces entre los tomos de carbono, mientras que
los cidos grasos monosaturados y poliinsaturados tienen uno o ms enlaces
dobles. Las propiedades de un cido graso dependen de la longitud de la
cadena y del nmero de enlaces dobles.

Nomenclatura Los cidos grasos se nombran de acuerdo con el nmero de tomos de carbono
de la cadena y del nmero y posicin de cualquier doble enlace. Alguno de los
cidos grasos ms comunes son palmitato (C16:0), estearato (C18:0), oleato
(C18:1), linoleato (C18:2), linolenato (C18:3) y araquidonato (C20:4). En un cido
graso, los enlaces dobles suelen estar en la configuracin cis.
Funciones Los cidos grasos tienen cuatro funciones biolgicas principales:
1. Actan como almacenes de energa (triacilgliceroles) y molculas combus-
tibles
2. Son componentes de las membranas (glicerofosfolpidos y esfingolpidos)
3. Diversas protenas estn modificadas de manera covalente por los cidos
grasos
4. Los derivados de los cidos grasos sirven como hormonas y como segundos
mensajeros intracelulares
Prostaglandinas Las prostaglandinas y otros eicosanoides (prostaciclinas, tromboxanos y
leucotrienos) derivan del araquidonato. Todos estos compuestos actan como
hormonas locales. La aspirina reduce la inflamacin al inhibir a la sintasa de
prostaglandina H2, la enzima que cataliza el primer paso en la sntesis de las
prostaglandinas.

Temas relacionados (E1) Lpidos de la membrana (K2) Descomposicin de cidos grasos

(E2) Estructura de la membrana (K3) Sntesis de cidos grasos
(E5) Transduccin de seales (K4) Triacilgliceroles

Estructura y propiedades con tomos de hidrgeno (figura K1-1a). De all se

deriva la frmula general CH3(CH2)nCOOH, donde n es
Un cido graso consiste en una cadena hidrocarbonada
un nmero par. Los cidos grasos monoinsaturados
y un grupo de cido carboxlico terminal (figura K1-1).
tienen un doble enlace en su estructura (figuras K1-1b y
La mayora de los cidos grasos que se encuentran en
K1-1c), mientras que los cidos grasos poliinsaturados
biologa tiene un nmero par de tomos de carbono
tienen dos o ms dobles enlaces (figura K1-1d). En los
ordenados en una cadena sin ramificaciones. La longi-
cidos grasos poliinsaturados, los dobles enlaces estn
tud de la cadena suele situarse entre 14 a 24 tomos de
separados por al menos un grupo metileno.
carbono y los cidos grasos ms comunes contienen 16
o 18 tomos de carbono. Un cido graso saturado tiene Las propiedades de los cidos grasos dependen de la
todos los tomos de carbono de su cadena saturados longitud de su cadena y del nmero de dobles enlaces.
286 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

Los cidos grasos con longitud de cadena ms corta
tienen temperaturas de fusin ms bajas que aqu-
llos con cadenas ms largas. Los cidos grasos insatu-
rados tienen temperaturas de fusin ms bajas que
los cidos grasos saturados con la misma longitud de
cadena, mientras que los correspondientes cidos
grasos poliinsaturados tienen temperaturas de fusin
incluso ms bajas (seccin E1).
Nomenclatura
Los cidos grasos se nombran de acuerdo con el nmero
total de tomos de carbono y con el nmero y posicin
de cualquier doble enlace. Los nombres sistemticos de
los cidos grasos se estructuran al aadir cido -oico
al nombre del hidrocarburo parental. Sin embargo, a
medida que los cidos grasos se ionizan al pH fisio-
lgico suelen escribirse como RCOO y tienen nombres
que terminan en -ato en lugar de cido -oico. Por
consiguiente, un cido graso saturado de C18 debera
llamarse octadecanoato. No obstante, muchos nombres
no sistemticos todava siguen en uso (cuadro K1-1).
Tambin hay notaciones ms resumidas que mues-
tran el nmero de tomos de carbono y el nmero de
cualquier doble enlace en la estructura. Un cido graso
con 18 carbonos y ningn doble enlace se designa 18:0,
mientras que uno con 18 carbonos y dos dobles enlaces
es 18:2. Los tomos de carbono de los cidos grasos
se enumeran desde el residuo del cido carboxlico
y de esta manera la posicin de los dobles enlaces puede
describirse mediante el nmero del primer carbono par-
ticipante en el enlace (p. ej., 9 muestra un doble enlace
entre los carbonos 9 y 10 de la cadena del cido graso;
figura K1-1b). La configuracin de los dobles enlaces en
la mayora de los cidos grasos insaturados es cis, as
llamada debido a que los dos hidrgenos en los tomos
de carbono a cualquier lado del doble enlace estn en
el mismo lado de la molcula (figura K1-1b) (en latn,
cis significa en el mismo lado de). En consecuencia,
el nombre sistemtico completo del linoleato (cuadro
K1-1) es cis, cis-9, 12-octadecadienoato (figura K1-1d).
Durante la degradacin de los cidos grasos (seccin
K2) se forman algunos ismeros trans (figura K1-1c),
donde los hidrgenos en los tomos de carbono a cual-
quier lado del doble enlace estn en lados opuestos de
la molcula (en latn, trans significa atravesado).
Funciones
Los cidos grasos tienen cuatro funciones biolgicas
principales:
1. Los cidos grasos actan como molculas combusti-
bles, se almacenan como triacilgliceroles y se degra-
dan para generar energa (secciones K2 y K4)

a)
H H H H H H H H H H H H H H H O

H C C C C C C C C C C C C C C C C

H H H H H H H H H H H H H H H O

Palmitato (hexadecanoato) C16:0

b)
H H H H H H H H H H H H H H H O
9 1
H C C C C C C C C C C C C C C C C

H H H H H H H H H H H H H O

Palmitoleato (cis-9-hexadecenoato) C16:1

c)
H H H H H H H H H H H H H H H H O
9 1
H C C C C C C C C C C C C C C C C C C

H H H H H H H H H H H H H H H H O

(Trans-9-octadecenoato) C18:1

d)
H H H H H H H H H H H H H H H H H O
12 9 1
H C C C C C C C C C C C C C C C C C C

H H H H H H H H H H H H H O

Linoleato (cis, cis-9, 12-octadecadienoato) C18:2

Figura K1-1. Estructuras de a) un cido graso saturado (palmitato, C16:0);

b) un cido graso monoinsaturado con un doble enlace en conguracin cis
(palmitoleato, C16:1); c) un cido graso monoinsaturado con el doble enlace en
conguracin trans (C18:1), y d) un cido graso poliinsaturado (linoleato, C18:2).
 K1ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LOS CIDOS GRASOS 287

Cuadro K1-1. Nombres y frmulas de algunos cidos grasos comunes.

cido graso Frmula Nm. de dobles enlaces Nm. de tomos de carbono
Palmitato CH3(CH2)14COO Ninguno 16

Estearato CH3(CH2)16COO Ninguno 18
Oleato CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COO 1 18

Linoleato CH3(CH2)4(CH=CHCH2)2(CH2)6COO 2 18
Linolenato CH3CH2(CH=CHCH2)3(CH2)6COO 3 18

Araquidonato CH3(CH2)4(CH=CHCH2)4(CH2)2COO 4 20

2. Se usan para elaborar glicerofosfolpidos y esfingol-
pidos, que son componentes esenciales de las mem-
branas biolgicas (seccin E1)
3. Los cidos grasos modifican de manera covalente
a numerosas protenas (seccin E2). El miristato
(C14:0) y el palmitato (C16:0) estn fijos en forma di-
recta a algunas protenas, mientras que el fosfatidili-
nositol se enlaza en forma covalente al C terminal de
otras protenas a travs de una compleja estructura
glucosilada
4. Los derivados de los cidos grasos sirven como hor-
monas (como las prostaglandinas) y como segundos
mensajeros intracelulares (como el DAG y el IP3) (sec-
cin E5)
Prostaglandinas
Las prostaglandinas y las molculas estructuralmente
relacionadas prostaciclinas, tromboxanos y leucotrie-
nos se llaman eicosanoides porque contienen 20 tomos
de carbono (en griego, eico significa 20). Estas hormo-
nas tienen vidas relativamente cortas y por lo tanto
actan cerca de sus sitios de sntesis en el cuerpo. Deri-
van del precursor comn araquidonato (figura K1-2).
Este cido graso poliinsaturado es un derivado del lino-
leato (cuadro K1-1). Las prostaglandinas estimulan la
inflamacin, modulan la transmisin sinptica entre las
clulas nerviosas e inducen el sueo. Aunque la aspirina
(cido acetilsaliclico) se ha usado durante siglos para
reducir la inflamacin, el dolor y la fiebre, no fue sino
hasta 1974 que John Vane descubri cmo acta. La
aspirina inhibe la sntesis de prostaglandinas mediante
la inhibicin irreversible de la sintasa de prostaglan-
dina H2. Esta enzima cataliza el primer paso de la sn-
tesis de las prostaglandinas, prostaciclinas y tromboxa-
nos (figura K1-2). Otros frmacos antiinflamatorios no
esteroideos (NSAID), como el ibuprofeno, tambin inhi-
ben a la sintasa de prostaglandina H2.

Araquidonato

Sintasa de
prostaglandina
H2

Prostaglandina H2 Leucotrienos

Prostaciclina Otras Tromboxanos

prostaglandinas

Figura K1-2. Interrelacin biosinttica de los eicosanoides.

SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

K2Descomposicin
de los cidos grasos
Notas clave
Descripcin La descomposicin de cidos grasos (tambin llamada oxidacin ) consiste en
la oxidacin de los cidos grasos de cadena larga con produccin de energa
en la forma de ATP. Los cidos grasos se convierten en sus derivados acil-CoA
y luego se metabolizan por la remocin de las unidades de acetil-CoA de dos
carbonos del extremo de la cadena acilo.
Activacin La degradacin de los cidos grasos se produce en el citosol de los procariotas
y en la matriz mitocondrial de los eucariotas. El cido graso se activa mediante
la formacin de un enlace tioster con la coenzima A (CoA) antes de ingresar
en las mitocondrias.
Transporte en las La membrana mitocondrial interna es impermeable a los derivados acil-CoA
mitocondrias de cadena larga y de esta manera stos deben transportarse hacia el interior de
las mitocondrias como derivados de la carnitina por la translocasa de carnitina/
acilcarnitina.
Va de la oxidacin  La degradacin de los cidos grasos incluye la repeticin de una secuencia de
cuatro reacciones:
1. La oxidacin del acil-CoA por el FAD para formar un trans-2-enoil-CoA.
2. La hidratacin para formar 3-hidroxiacil-CoA.
3. La oxidacin por NAD+ para formar 3-cetoacil-CoA.
4. La tilisis por una segunda molcula de CoA para formar acetil-CoA y un
acil-CoA acortado en dos tomos de carbono.
El FADH2 y el NADH producidos alimentan directamente la fosforilacin oxidativa,
mientras que la acetil-CoA alimenta el ciclo del cido ctrico, donde se producen
FADH2 y NADH adicionales.

Oxidacin de cidos Los cidos grasos insaturados requieren la accin de enzimas adicionales con
grasos insaturados el fin de ser completamente degradados por la oxidacin .
Oxidacin de cidos Los cidos grasos que tienen un nmero impar de tomos de carbono dan
grasos de cadena impar origen a la acetil-CoA y a la propionil-CoA (tres tomos de carbono) en la ronda
final de la degradacin de los cidos grasos.
Regulacin La tasa de degradacin de los cidos grasos es controlada por la disponibilidad
de cidos grasos libres en la sangre, la cual se origina por la descomposicin de
los triacilgliceroles.
Combustible energtico La degradacin completa del palmitato (C16:0) en la oxidacin genera 28
molculas de ATP provenientes de la oxidacin del NADH y el FADH2 producidos
directamente y 80 ATP provenientes de la degradacin de las molculas de acetil-
CoA en el ciclo del cido ctrico. Sin embargo, se requieren dos equivalentes de
ATP para activar el palmitato a sus derivados acil-CoA antes de su oxidacin. Por
lo tanto, la produccin neta es de 106 ATP.
Cuerpos cetnicos Cuando es excesiva, la acetil-CoA producida por la oxidacin de los cidos
grasos se convierte en acetoacetato y en D-3-hidroxibutirato. Junto con la
acetona, estos compuestos se denominan de manera colectiva cuerpos cet-
nicos.
 K2DESCOMPOSICIN DE LOS CIDOS GRASOS
Temas relacionados (K1) Estructura y funcin de
los cidos grasos
(K3) Sntesis de cidos grasos
(K4) Triacilgliceroles
Descripcin
La descomposicin de cidos grasos gira alrededor de
la oxidacin de los cidos grasos de cadena larga. Los
cidos grasos se convierten primero en sus derivados
acil-CoA (CoA) y luego se degradan por la remocin
sucesiva de unidades de dos carbonos del extremo del
cido graso como acetil-CoA. La va produce FADH2 y
NADH en forma directa. La acetil-CoA producida tambin
puede ingresar en el ciclo del cido ctrico y producir
FADH2 y NADH adicionales (seccin L1). El FADH2 y el NADH se
oxidan entonces en la cadena respiratoria de transporte
de electrones para producir energa en la forma de ATP
(seccin L2).
Activacin
La degradacin de los cidos grasos tiene lugar en el
citosol de los procariotas, en los peroxisomas de las
plantas y en la matriz mitocondrial de todos los otros
eucariotas. Antes de ingresar en la matriz mitocon-
drial, los cidos grasos son activados para formar un
enlace tioster con la CoA (figura K2-1). La sintetasa
de acil-CoA (tambin llamada tiocinasa de cidos gra-
sos) se encarga de catalizar esta reaccin, que sucede
en la membrana mitocondrial externa, donde radica la
enzima, y usa una molcula de ATP. La reaccin total es
irreversible debido a la hidrlisis subsecuente del PPi en
dos molculas de Pi.
Transporte en la mitocondria
Las molculas de acil-CoA de cadena pequea y media
(hasta de 10 tomos de carbono) pueden cruzar con faci-
lidad la membrana mitocondrial interna por difusin.
Pese a eso, las acil-CoA de cadena ms larga no cruzan
con tanta facilidad la membrana mitocondrial interna
y requieren un mecanismo de transporte especfico.
Para lograrlo, las acil-CoA de cadena larga se conjugan
a la molcula polar de carnitina, la cual se encuentra
en plantas y animales. Esta reaccin, catalizada por una
O
R C + ATP + HS CoA
O Sintetasa de
acil-CoA
Figura K2-1. Activacin de un cido graso.
289
(K5) Colesterol
(L1) Ciclo del cido ctrico
(L2) Transporte de electrones y
fosforilacin oxidativa
enzima en la cara externa de la membrana mitocondrial
interna (aciltransferasa de carnitina I), remueve el
grupo CoA y lo sustituye por una molcula de carnitina
(figura K2-2). A continuacin, la acilcarnitina es trans-
portada a travs de la membrana mitocondrial inter-
na por una translocasa de carnitina/acilcarnitina. Esta
protena integral de transporte de la membrana (seccin
E3) transporta molculas de acilcarnitina hacia la matriz
mitocondrial y molculas de carnitina libre hacia fuera.
Una vez dentro de la matriz mitocondrial, el grupo acilo
es transferido de regreso hacia la CoA, lo que libera a
la carnitina, por accin de la enzima aciltransferasa de
carnitina II, que se localiza en el lado matricial de la
membrana mitocondrial interna (figura K2-2).
Va de la oxidacin 
Las reacciones individuales que intervienen en la degra-
dacin de los cidos grasos por oxidacin son las si-
guientes (figura K2-3):
1. La oxidacin de la acil-CoA a enoil-CoA forma un
enlace doble trans-2 en la cadena acilo con produc-
cin de FADH2 (catalizada por la deshidrogenasa de
acil-CoA).
2. La hidratacin de la trans-2-enoil-CoA para formar
3-hidroxiacil-CoA (catalizada por la hidratasa de
enoil-CoA).
3. La oxidacin de la 3-hidroxiacil-CoA a 3-cetoacil-
CoA con produccin de NADH (catalizada por la des-
hidrogenasa de hidroxiacil-CoA).
4. La separacin, o tilisis, de la 3-cetoacil-CoA por una
segunda molcula de CoA, lo que produce acetil-CoA
y una acil-CoA acortada en dos tomos de carbono
(catalizada por la cetotiolasa ).
Por lo tanto, la descomposicin de cidos grasos indivi-
duales sucede como una secuencia repetida de cuatro
reacciones: oxidacin (por FAD), hidratacin, oxidacin
O
R C S CoA + AMP + PPi
290 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA

ESPACIO
MATRIZ
INTRAMEMBRANOSO

Translocasa

Acil-CoA Carnitina Carnitina Acil-CoA

1 2
CoASH Acilcarnitina Acilcarnitina CoASH

1 = Aciltransferasa de carnitina I
2 = Aciltransferasa de carnitina II

Figura K2-2. Transporte de cidos grasos a travs de la

membrana mitocondrial interna.

(por NAD+) y tilisis. Estas cuatro reacciones integran una cadena del cido graso. La separacin del enlace 2 (o
ronda de degradacin de los cidos grasos (figura K2-3) ) de la cadena acilo (vase la nomenclatura en la figura
y su efecto total es remover unidades de dos carbonos K2-3, estructura de arriba) da a la descomposicin de
en forma secuencial bajo la forma de acetil-CoA de la los cidos grasos su nombre alternativo, oxidacin . La

O
4 3 2 1
R CH2

CH2

CH2 C SCoA Acil-CoA

FAD
Oxidacin Deshidrogenasa de acil-CoA
FADH2
H O
4 3 2 1
R CH2 C C C SCoA Trans-2-enoil-CoA

H
H2O
Hidratacin Hidratasa de enoil-CoA

OH H O
4 3 2 1
R CH2 C C C SCoA l-3-hidroxiacil-CoAA

H H

NAD+
Oxidacin Deshidrogenasa de hidroxiacil-CoA
NADH + H+

O O
4 3 2 1
R CH2 C CH2 C SCoA 3-cetoacil-CoA

CoASH
Tilisis Cetotiolasa

O O
4 3 2 1
R CH2 C SCoA + H3C C SCoA

Acil-CoA acortada en Acetil-CoA

dos tomos de carbono

Figura K2-3. Resumen de las reacciones participantes en

la degradacin de cidos grasos.

acil-CoA acortada sufre despus ciclos adicionales de oxi-
dacin hasta el ltimo ciclo, cuando la acil-CoA de cua-
tro tomos de carbono es dividida en dos molculas de
acetil-CoA. En consecuencia, una acil-CoA de 16 carbo-
nos saturados, como el palmitoil-CoA, debera ser com-
pletamente degradada en ocho molculas de acetil-CoA
a travs de siete rondas de degradacin, lo que lleva a
la ecuacin final:
Palmitoil-CoA + 7 FAD + 7 NAD+ + 7 CoA + 7 H2O
8 acetil-CoA + 7 FADH2 + 7 NADH + 7 H+
Las mitocondrias contienen tres deshidrogenasas de
acil-CoA, las cuales actan sobre las acil-CoA de cadena
corta, media y larga, respectivamente. En contraste, hay
slo una de cada una de las enzimas hidratasa de enoil-
CoA, deshidrogenasa de hidroxiacil-CoA y cetotiolasa ,
las cuales tienen una especificidad amplia con respecto
a la longitud de la cadena acilo.
En animales, la acetil-CoA producida por la degradacin
de los cidos grasos no puede convertirse en piruvato u
oxalacetato. Aunque los dos tomos de carbono de la
acetil-CoA ingresan en el ciclo del cido ctrico, ambos
resultan oxidados a CO2 en las reacciones que catalizan
la deshidrogenasa de isocitrato y la deshidrogenasa de
cetoglutarato (seccin L1). Por consiguiente, los ani-
males no pueden convertir cidos grasos en glucosa.
En contraste, las plantas tienen dos enzimas adiciona-
les, la liasa de isocitrato y la sintasa de malato, que les
H H
5 4 3 2
R C C CH2 CH2
FAD
Deshidrogenasa de acil-CoA
FADH2
H H H O
5 4 3 2
R C C C
NADPH + H+
Reductasa de 2,4-dienoil-CoA
NADP+
H H
5 4 3 2
R CH2 C C CH2
Isomerasa
H O
5 4 3 2
R CH2 CH2 C C
Figura K2-4. Enzimas accesorias requeridas para el
metabolismo de los cidos grasos insaturados.
K2DESCOMPOSICIN DE LOS CIDOS GRASOS 291
permite convertir los tomos de carbono de la acetil-
CoA en oxalacetato. Esto se logra a travs de la va del
glioxilato, una ruta que incluye enzimas de la mitocon-
dria y del glioxisoma, un organelo membranoso espe-
cializado de las plantas.
Oxidacin de los cidos grasos
insaturados
Los cidos grasos insaturados requieren un procesa-
miento adicional antes de que puedan ser degradados por
completo a travs de la oxidacin . Las acil-CoA insatu-
radas con dobles enlaces en tomos de carbono impares
(por ejemplo, entre el C-9 y el C-10, como en el palmi-
toleato; seccin K1, figura K1-1b) participan en el me-
canismo de degradacin de la va normal, hasta que la
deshidrogenasa de acil-CoA encuentra la cis-3-enoil-
CoA formada al final de la tercera ronda. La presencia
del doble enlace entre C-3 y C-4 evita la formacin de
otro doble enlace entre C-2 y C-3. Para superar este pro-
blema, una isomerasa convierte el enlace cis-3 en un
doble enlace trans-2 y la resultante trans-2-enoil-CoA
puede continuar adelante en la va de la oxidacin
(figura K2-4).
Adems de la isomerasa se requiere otra enzima para la
oxidacin de los cidos grasos poliinsaturados, los cua-
les tienen un doble enlace en un tomo de carbono par.
En este caso, el intermediario 2,4-dienoilo resultante de
O
1
Acil-CoA insaturada con
C SCoA doble enlace en el tomo
de carbono con nmero par
1
C C SCoA 2,4-dienoil-CoA
H
O
1
C SCoA Cis-3-enoil-CoA
1
C SCoA Trans-2-enoil-CoA
292 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS
la accin de la deshidrogenasa de acil-CoA es atacado
por la reductasa de 2,4-dienoil-CoA para formar cis-
3-enoil-CoA (figura K2-4). La isomerasa convierte este
producto en la forma trans, la cual contina adelante
en la va. Estas reacciones son importantes ya que ms
de la mitad de los cidos grasos de las plantas y los lpi-
dos de los animales son insaturados (y con frecuencia
poliinsaturados).
Oxidacin de cidos grasos
de cadena impar
Los cidos grasos que tienen un nmero de tomos de
carbono impar (los cuales son relativamente raros en
la naturaleza) tambin son degradados en la va de la
oxidacin en la misma forma que los que tienen un
nmero par de tomos de carbono. La nica diferencia
es que, en la ronda final, el intermediario acil-CoA de
cinco carbonos es separado en una molcula de propio-
nil-CoA de tres carbonos y en una molcula de acetil-
CoA de dos carbonos. La propionil-CoA es convertida en
succinil-Co, la cual ingresa en el ciclo del cido ctrico
(seccin L1).
Regulacin
El punto principal de control de la oxidacin es la
disponibilidad de cidos grasos. La fuente principal de
cidos grasos libres en la sangre es la descomposicin
de los almacenes de triacilglicerol del tejido adiposo, lo
cual es regulado por la accin de la lipasa de triacilglice-
rol sensible a la hormona (seccin K4). La descomposi-
cin y la sntesis de cidos grasos estn controladas de
manera coordinada para evitar un ciclo improductivo
(seccin K3).
Produccin de energa
Por cada ronda de degradacin, se producen una mol-
cula de FADH2, una de NADH y una de acetil-CoA. Cada
NADH genera dos molculas y media de ATP y cada FADH2
genera una molcula y media de ATP durante la fosfori-
lacin oxidativa (seccin L2). De manera adicional, cada
acetil-CoA produce 10 ATP en su oxidacin en el ciclo del
cido ctrico (seccin L1). La produccin total por cada
ronda de degradacin del cido graso es por lo tanto de
14 molculas de ATP.
Cuadro K2-1. Clculo del ATP producido por la oxidacin completa el palmitato
Paso degradativo
7 4 ATP por la oxidacin del NADH y el FADH2 producidos en cada ronda de degradacin
8 10 ATP por la rotura de la acetil-CoA en el ciclo del cido ctrico
2 equivalentes de ATP por la activacin del palmitato
Total =
La degradacin completa de la palmitoil-CoA (C16:0)
requiere siete rondas de degradacin y por lo tanto pro-
duce 7 (2.5 + 1.5) = 28 molculas de ATP. Se produce
un total de ocho molculas de acetil-CoA y por lo tanto
otros 8 10 = 80 ATP. Por consiguiente, los ATP totales pro-
ducidos por cada molcula de palmitato degradada son
28 + 80 = 108 ATP. No obstante, uno de los ATP es hidro-
lizado a AMP y PPi durante la activacin del palmitato
a palmitoil-CoA, de donde resulta que se pierden dos
enlaces de alta energa. En consecuencia, la produccin
neta es de 106 ATP (cuadro K2-1).
La produccin de ATP se reduce un poco en los cidos
grasos insaturados por las reacciones metablicas adi-
cionales, las cuales les permiten ser degradados en la va
de la oxidacin , y que incluyen el uso de NADH o evitar
una reaccin productora de FADH2 (figura K2-4).
Cuerpos cetnicos
Cuando el nivel de acetil-CoA proveniente de la oxida-
cin se incrementa en exceso y requiere que ingrese
en el ciclo del cido ctrico, la acetil-CoA se convierte en
acetoacetato y en D-3-hidroxibutirato por un proceso
conocido como cetognesis. El D-3-hidroxibutirato, el
acetoacetato y su producto de degradacin no enzim-
tica acetona se refieren de manera grupal como cuerpos
cetnicos (figura K2-5).
De manera inicial, las molculas de acetil-CoA se con-
densan para formar acetoacetil-CoA en una reaccin, la
cual es esencialmente la inversa de la tilisis de la oxida-
cin. La acetoacetil-CoA reacciona con otra molcula de
acetil-CoA para formar 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA
(HMG-CoA) (figura K2-5). Esta molcula es dividida para
formar acetoacetato y acetil-CoA. (La HMG-CoA tambin
es el punto de inicio para las biosntesis de colesterol;
seccin K5.) Despus, el acetoacetato es reducido a
D-3-hidroxibutirato en la matriz mitocondrial o sufre
una descarboxilacin lenta y espontnea a acetona
(figura K2-5). En la diabetes, el acetoacetato se produce
con mayor rapidez que la que necesita para ser metabo-
lizado. Por consiguiente, los diabticos no tratados pre-
sentan niveles altos de cuerpos cetnicos en su sangre
y el aroma de acetona puede detectarse con frecuencia
en su respiracin.
ATP producido
28
80
2
106
 K2DESCOMPOSICIN DE LOS CIDOS GRASOS 293
O O
H2O
C S CoA + C S CoA
CoA Acetil-CoA CoA O C CH3
2 acetil- CH2 CH2
CoA CH2
C O HO C CH3
Acetil-CoA
CH3 CH2 COO

Acetoacetato
Acetoacetil-CoA COO
3-hidroxi
CO2
3-metilglutaril-CoA NADH + H+ CH3
+
H NAD
O C
HO C CH3 CH3
CH2 Acetona

COO
D-3-hidroxibutirato

Figura K2-5. Conversin de la acetil-CoA en los cuerpos cetnicos acetoacetato,

acetona y D-3-hidroxibutirato.

El hgado es el principal sitio de produccin del ace-
toacetato y el D-3-hidroxibutirato y no son slo produc-
tos de degradacin de escaso valor fisiolgico. Se usan
de preferencia a la glucosa como una fuente de energa
en ciertos tejidos como el msculo cardiaco y la corteza
renal. Aunque de manera habitual la glucosa es el prin-
cipal combustible del cerebro, bajo condiciones de
ayuno o diabetes, este rgano puede modificarse para
usar acetoacetato de manera predominante.
SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

K3Sntesis de cidos grasos

Notas clave
Descripcin La sntesis de cidos grasos incluye la condensacin de unidades de dos carbonos
bajo la forma de acetil-CoA para formar largas cadenas hidrocarbonadas
en una serie de reacciones. El complejo sintasa de cidos grasos lleva a cabo
estas reacciones, que requieren NADPH como reductor. Los cidos grasos estn
unidos en forma covalente a la protena transportadora de acilo (ACP) durante
su sntesis.
Transporte en el citosol Dado que la sntesis de cidos grasos tiene lugar en el citosol, la acetil-CoA
producida a partir de piruvato debe ser transportada fuera de las mitocondrias.
Como la membrana mitocondrial interna es impermeable a la acetil-CoA, sta
se combina primero con oxalacetato para formar citrato, el cual cruza con
facilidad la membrana. En el citosol, el citrato es dividido para regenerar la
acetil-CoA.
La va metablica El primer paso obligado en la biosntesis de cidos grasos es la carboxilacin de
la acetil-CoA para formar malonil-Co, la cual es catalizada por la carboxilasa
de acetil-CoA, una enzima que contiene biotina. La acetil-CoA y la malonil-CoA
se convierten en sus derivados ACP. El ciclo de elongacin en la sntesis de cidos
grasos incluye cuatro reacciones: condensacin de acetil-ACP y malonil-ACP para
formar acetoacetil-ACP, que libera ACP libre y CO2, luego la reduccin por la NADPH
para formar D-3-hidroxibutiril-ACP, seguida por la deshidratacin a crotonil-ACP
y, como paso final, la reduccin por la NADPH para formar butiril-ACP. Rondas
sucesivas de elongacin agregan ms unidades de dos carbonos de la malonil-
ACP a la cadena hidrocarbonada en crecimiento, hasta que se forma el palmitato
de 16 carbonos. La elongacin adicional de los cidos grasos tiene lugar en la
superficie citoslica del SER.
Formacin de dobles Las enzimas para la introduccin de los dobles enlaces dentro de la cadena
enlaces tambin estn presentes en la superficie citoslica del SER. Los cidos grasos
poliinsaturados linoleato y linolenato no pueden ser sintetizados por los
mamferos y por lo tanto se denominan cidos grasos esenciales ya que tienen
que ser ingeridos en la dieta.
Regulacin El punto de control clave de la sntesis de cidos grasos es la carboxilasa de acetil-
CoA. Esta enzima se inactiva por fosforilacin a travs de una proteincinasa
activada con AMP. Por consiguiente, cuando la carga de energa de las clulas
es baja (AMP alto, ATP bajo), la carboxilasa de acetil-CoA est inactiva. La enzima
se reactiva por una desfosforilacin que lleva a cabo la proteinfosfatasa 2A.
El glucagon y la adrenalina inhiben la sntesis de cidos grasos al inhibir a la
proteinfosfatasa 2A, mientras que la insulina estimula la sntesis de cidos
grasos mediante la activacin de la fosfatasa. La carboxilasa de acetil-CoA
tambin es regulada por medios alostricos: el citrato activa la enzima, en tanto
que la palmitoil-CoA la inhibe.

Temas relacionados (D5) Regulacin de la actividad (K2) Descomposicin de cidos grasos

enzimtica (K4) Triacilgliceroles
(J5) Va de la pentosafosfato (L1) Ciclo del cido ctrico
(K1) Estructura y funcin de
los cidos grasos

Descripcin
Los cidos grasos se sintetizan por la condensacin de
dos unidades de dos carbonos. Sin embargo, en trminos
de los pasos enzimticos participantes, el proceso no es
la inversa de la oxidacin (seccin K2). La sntesis de
cidos grasos incluye una serie especfica de reacciones
para construir una larga cadena hidrocarbonada a partir
de unidades de acetil-CoA. Las diferencias clave entre la
sntesis de cidos grasos y su degradacin son:
z La sntesis de cidos grasos tiene lugar en el citosol de
procariotas y eucariotas, en tanto que su degradacin
sucede en las mitocondrias de los eucariotas.
z La sntesis de cidos grasos utiliza NADPH como el
reductor, mientras que la oxidacin produce NADH.
z Durante su sntesis, los cidos grasos se enlazan en
forma covalente a una protena transportadora de
acilos (ACP), en contraposicin a la CoA en su degra-
dacin.
z En los organismos superiores, las actividades enzi-
mticas propias de la sntesis de cidos grasos estn
presentes en una cadena polipeptdica multifuncio-
nal (como un dmero) llamada sintasa de cidos gra-
sos, mientras que en la oxidacin cada actividad
depende de enzimas diferentes.
Transporte en el citosol
Los cidos grasos se sintetizan en el citosol, pero la ace-
til-CoA se produce a partir del piruvato en las mitocon-
drias (seccin L1). Por consiguiente, la acetil-CoA debe
transferirse de las mitocondrias al citosol para que tenga
lugar la sntesis de cidos grasos. No obstante, la mem-
brana mitocondrial interna no es fcilmente permea-
ble a esta molcula. Este problema se resuelve mediante
la condensacin de la acetil-CoA con oxalacetato para
MITOCONDRIA
Acetil-CoA
Citrato
Oxalacetato
ADP + Pi
CO2 + ATP
Carboxilasa
de piruvato
Piruvato
Figura K3-1. Transporte de la acetil-CoA desde la matriz
mitocondrial al citosol.
K3SNTESIS DE CIDOS GRASOS 295
formar citrato (figura K3-1). A continuacin, ste se
transporta hacia el citosol, donde la liasa de ATP-citrato
lo divide para regenerar acetil-CoA y oxalacetato a travs
de un proceso que requiere energa. El oxalacetato, el
cual tampoco puede cruzar la membrana mitocondrial
interna, es devuelto a la matriz mitocondrial a travs de
su conversin, en primer lugar, en malato (catalizada
por la deshidrogenasa de malato) y luego en piruvato
(catalizada por la enzima de malato unido a NADP+)
(figura K3-1). Esta ltima reaccin de descarboxilacin
genera NADPH, el cual puede utilizarse en la sntesis de
cidos grasos. El NADPH restante que se requiere en la sn-
tesis de los cidos grasos es provisto por la va de la
pentosa fosfato (seccin J5). Cuando regresa a la matriz
de la mitocondria, la carboxilasa de piruvato carboxila
el piruvato para formar oxalacetato con la hidrlisis de
una molcula adicional de ATP (figura K3-1).
La va metablica
El primer paso forzoso en la sntesis de los cidos gra-
sos es la carboxilacin de la acetil-CoA para formar
malonil-CoA, para lo cual se utiliza CO2 en la forma de
HCO3 (figura K3-2). Esta reaccin es catalizada por la
enzima carboxilasa de acetil-CoA, la cual tiene biotina
como el grupo prosttico, una caracterstica comn en
las enzimas que unen CO2. En la reaccin, que es irrever-
sible, se hidroliza una molcula de ATP. Todos los pasos
de elongacin de la sntesis de cidos grasos incluyen
intermediarios ligados al grupo sulfhidrilo terminal de la
unidad reactiva fosfopantetena de la ACP; la fosfopan-
tetena es tambin la unidad reactiva de la CoA. Por lo
tanto, los siguientes pasos son la formacin de acetil-ACP
y malonil-ACP por las enzimas acetiltransacilasa y malo-
niltransacilasa, respectivamente (figura K3-2). (Para la
sntesis de cidos grasos con un nmero impar de to-
mos de carbono, el punto de iniciacin es la propionil-
ACP de tres carbonos en lugar de la malonil-ACP.)
CITOSOL
ATP
Acetil-CoA
Citrato
Liasa de ATP-citrato
Oxalacetato
ADP + Pi
NADH + H+
Deshidrogenasa
de malato
NAD+
NADP+
Malato
NADPH + CO2
Enzima de malato
Piruvato enlazado al NADP+
296 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

HCO3 Pi
O ATP ADP O
O
H3C C SCoA C CH2 C SCoA
Carboxilasa de

Acetil-CoA acetil-CoA O Malonil-CoA

ACP Acetil Malonil ACP

transacilasa transacilasa
CoA CoA

O O
O
H 3C C ACP C CH2 C ACP

Acetil-ACP O Malonil-ACP

Figura K3-2. Formacin de acetil-ACP y malonil-ACP.

El ciclo de elongacin de la sntesis de cidos grasos 1. Condensacin de la acetil-ACP con la malonil-ACP

tiene cuatro etapas por cada ronda de sntesis (figura para formar acetoacetil-ACP con liberacin de ACP li-
K3-3). Para la primera ronda de sntesis estn: bre y CO2 (catalizada por la enzima condensante de
acil-malonil-ACP).

O O
O
Acetil-ACP H3C C ACP + C CH2 C ACP Malonil-ACP

O

Condensacin Enzima condensante de acil-malonil-ACP

ACP + CO2

O O

H3C C CH2 C ACP Acetoacetil-ACP

NADPH + H+
Reduccin Reductasa de -cetoacil-ACP

NADP+

H3C CH CH2 C ACP D-3-hidroxibutiril-ACP

OH

Deshidratacin Deshidratasa de 3-hidroxiacil-ACP

H2O

H O

H3C C C C ACP Crotonil-ACP

NADPH + H+
Reduccin Reductasa de enoil-ACP

NADP+

H3 C CH2 CH2 C ACP Butiril-ACP

Figura K3-3. El ciclo de elongacin de la sntesis de cidos grasos.


2. La reduccin de la acetoacetil-ACP para formar D-3-hi-
droxibutiril-ACP mediante NADPH como reductor (cata-
lizada por la reductasa de -cetoacil-ACP).
3. La deshidratacin de D-3-hidroxibutiril-ACP para pro-
ducir crotonil-ACP (catalizada por la deshidratasa de
3-hidroxiacil-ACP).
4. La reduccin de la crotonil-ACP por una segunda
molcula de NADPH para dar butiril-ACP (catalizada por
la reductasa de enoil-ACP).
La primera ronda de elongacin produce la butiril-ACP
de cuatro carbonos. El ciclo se repite a partir de la malo-
nil-ACP, que aporta unidades de dos carbonos en cada
ciclo para el alargamiento de la cadena de acil-ACP. sta
contina hasta que se forma la palmitoil-ACP de 16 car-
bonos. Esa molcula no es aceptada por la enzima con-
densante de acil-malonil-ACP, y por lo tanto no puede
elongarse de manera adicional por este proceso. En su
lugar, es hidrolizada por una tioesterasa para dar pal-
mitato y ACP.
La estequiometra total para la sntesis del palmitato es:
8 acetil-CoA + 7 ATP + 14 NADPH + 6 H+
palmitato + 14 NADP+ + 8 CoA + 6 H2O +
7 ADP + 7 Pi
Por cada una de las siete rondas para la elongacin del
cido graso, se usa un ATP en la sntesis de la malonil-
CoA y dos NADPH en las reacciones de reduccin.
En eucariotas, la elongacin de los cidos grasos ms
all del palmitato de 16 carbono la realizan enzimas que
se localizan en la superficie citoslica del SER. La malo-
nil-CoA se usa como el donador de dos carbonos y los
cidos grasos se elongan como sus derivados CoA ms
que como sus derivados ACP.
En los procariotas, cada una de las reacciones de la sn-
tesis del cido graso es catalizada por una enzima dife-
rente. En cambio, en eucariotas, las enzimas del ciclo
de elongacin en la sntesis de los cidos grasos est
presente en una sola cadena polipeptdica, un com-
plejo enzimtico multifuncional llamado sintasa de
cido graso. El complejo de la sintasa de cido graso
existe como un dmero, con idas y vueltas incesantes
del residuo ACP por la cadena acilo entre los sucesivos
sitios catalticos y desde una subunidad del dmero a la
otra. sta es, en efecto, una lnea de produccin de alta
eficiencia para la biosntesis de los cidos grasos.
Formacin de los dobles enlaces
En los eucariotas, el SER tiene enzimas capaces de intro-
ducir dobles enlaces en las molculas de acil-CoA en
una reaccin de oxidacin que usa oxgeno molecular.
Esta reaccin es catalizada por un complejo de tres
enzimas unido a la membrana: la reductasa de NADH-
citocromo b5, el citocromo b5 y una desaturasa. La reac-
cin completa es:
K3SNTESIS DE CIDOS GRASOS 297
acil-CoA saturada + NADH + H+ + O2
acil-CoA monoinsaturada + NAD+ + 2 H2O
La reaccin puede repetirse para introducir ms de un
doble enlace en un cido graso.
Los mamferos carecen de las enzimas que insertan
dobles enlaces en los tomos de carbono ms all del
C-9 de la cadena del cido graso. Por lo tanto, no pue-
den sintetizar linoleato ni linolenato, ambos con dobles
enlaces ms all del C-9 de la cadena (el linoleato tiene
dobles enlaces cis, cis-9, 12, y el linolenato tiene todos
los dobles enlaces cis-9, 12, 15). Por lo tanto, en los ma-
mferos, el linoleato y el linolenato se llaman cidos gra-
sos esenciales porque tienen que ser aportados en la
dieta. Estos dos cidos grasos insaturados son tambin
los puntos de iniciacin para la sntesis de otros cidos
grasos insaturados como el araquidonato. Este cido gra-
so C20:4 es el precursor de diversas molculas de impor-
tancia biolgica, como las prostaglandinas, prostacicli-
nas, tromboxanos y leucotrienos (seccin K1).
Regulacin
La sntesis de los cidos grasos tiene lugar cuando car-
bohidratos y energa son abundantes y los cidos grasos
escasos. La enzima clave en la regulacin de la sntesis
de los cidos grasos es la carboxilasa de acetil-CoA, la
cual sintetiza malonil-CoA. ste es un buen ejemplo
de control en el paso obligado de la va metablica.
Una proteincinasa activada por el AMP inactiva a la
carboxilasa de acetil-CoA al fosforilarle un solo residuo
de serina (figura K3-4) (seccin D5). A diferencia de la
proteincinasa dependiente de cAMP (proteincinasa A)
(seccin K4), el cAMP no afecta esta cinasa, y en su
lugar es estimulada por el AMP e inhibida por el ATP. En
consecuencia, cuando la carga de energa de las clulas
desciende (es decir, que hay una relacin AMP:ATP alta), la
sntesis de cidos grasos se detiene. La proteinfosfatasa
2A remueve el grupo fosfato de la carboxilasa de acetil-
CoA inactivada (figura K3-4) y por lo tanto la reactiva.
La carboxilasa de acetil-CoA tambin es sujeto de regu-
lacin hormonal. Cuando se requiere energa, el gluca-
gon y la adrenalina inhiben a la proteinfosfatasa 2A, y
por lo tanto mantienen a la carboxilasa de acetil-CoA
en la forma inactiva (figura K3-4) y bloquean la sntesis
de cidos grasos. En el estado de buena alimentacin,
cuando los niveles de glucosa en sangre son altos, la
insulina estimula a la carboxilasa de acetil-CoA, quiz
a travs de la activacin de la proteinfosfatasa 2A (figura
K3-4), y en consecuencia conduce a un incremento en
la sntesis de cidos grasos.
As como en su control por fosforilacin/desfosforila-
cin, la carboxilasa de acetil-CoA tambin es regulada
por medios alostricos (para una descripcin ms
completa de la regulacin alostrica, vase la seccin
D5). El intermediario citrato del ciclo del cido ctrico,
cuyo nivel es alto cuando la acetil-CoA y el ATP son
298 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

+ AMP

ATP

Proteincinasa activada
ATP por el AMP ADP

P P

Citrato

+ Palmitoil-
Carboxilasa Carboxilasa CoA
activa inactiva Carboxilasa
Pi Proteinfosfatasa 2A H2O parcialmente activa

Glucagon
Adrenalina
+ Insulina

Figura K3-4. Resumen del control de la carboxilasa de acetil-CoA

por fosforilacin y regulacin alostrica.

abundantes, estimula por medios alostricos a la car-
boxilasa de acetil-CoA. Esto resulta en la conversin de
la forma fosforilada inactiva en una forma parcialmente
activa que todava persiste fosforilada (figura K3-4), y
por lo tanto activa la sntesis de cidos grasos de manera
que el exceso de acetil-CoA sea almacenado como
residuos de cidos grasos dentro del triacilglicerol en el
tejido adiposo. En contraste, los altos niveles de palmi-
toil-CoA, la cual es abundante cuando hay un exceso de
cidos grasos, antagoniza el efecto del citrato sobre la
carboxilasa de acetil-CoA, con lo cual reduce su activi-
dad (figura K3-4) y detiene la sntesis adicional de cidos
grasos.
SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

K4Triacilgliceroles
Notas clave
Estructura y funcin Los triacilgliceroles (grasas o triglicridos) consisten en tres cadenas de cidos
grasos esterificadas a una columna vertebral de glicerol. Los triacilgliceroles
son el principal almacn de energa y los principales lpidos dietticos de los
seres humanos. Son insolubles en agua y se almacenan en clulas adiposas
especializadas (clulas grasas).
Sntesis Los triacilgliceroles se sintetizan a partir de glicerol 3-fosfato, el cual es
derivado del intermediario glucoltico dihidroxiacetona-fosfato, y de acil-CoA.
Las molculas de acil-Co se agregan al glicerol 3-fosfato para formar, primero,
cido lisofosfatdico y luego cido fosfatdico. El grupo fosfato es removido
entonces para formar DAG, el cual es acilado de manera adicional para formar
triacilglicerol. La energa para la sntesis de los triacilgliceroles proviene de la
hidrlisis de los enlaces tioster de alta energa de la acil-CoA.
Descomposicin Los cidos grasos de los triacilgliceroles son liberados de la columna vertebral
del glicerol por accin de las lipasas. Los cidos grasos libres pueden entonces
degradarse por oxidacin para producir energa. El glicerol se convierte en
dihidroxiacetona-fosfato, la cual ingresa en la gluclisis.
Regulacin La concentracin de los cidos grasos libres en la sangre est controlada por
la tasa a la cual la lipasa de triacilglicerol sensible a la hormona hidroliza los
triacilgliceroles almacenados en el tejido adiposo. El glucagon, la adrenalina
y la noradrenalina causan un incremento en el nivel intracelular de cAMP, el
cual activa de manera alostrica a la proteincinasa dependiente de cAMP. La
cinasa a su vez fosforila a la lipasa sensible a la hormona, con lo cual la activa,
y conduce a la liberacin de cidos grasos a la sangre. La insulina produce el
efecto opuesto; disminuye el nivel de cAMP, lo cual lleva a la desfosforilacin e
inactivacin de la lipasa sensible a la hormona.

Temas relacionados (E1) Lpidos de la membrana (K3) Sntesis de cidos grasos

(E5) Transduccin de seales (K5) Colesterol
(K2) Descomposicin de cidos grasos (K6) Lipoprotenas

Estructura y funcin energa de 17 kJ g1 de los carbohidratos o las protenas.

Los triacilgliceroles (tambin denominados grasas o
triglicridos) constan de tres cadenas de cidos gra-
sos esterificadas a una columna vertebral de glicerol.
Los triacilgliceroles simples tienen tres cidos grasos
idnticos esterificados a la columna vertebral de glice-
rol, mientras que los triacilgliceroles mixtos tienen dos
o tres cadenas de cidos grasos diferentes (figura K4-1).
Los triacilgliceroles constituyen el principal almacn de
combustibles y el principal lpido diettico de los seres
humanos. Los triacilgliceroles representan un almacn
de energa muy concentrada. La energa producida por
la oxidacin completa de los cidos grasos es de alre-
dedor de 38 kJ g1, comparada con una produccin de
Las propiedades hidrfobas de las grasas las vuelve in-
solubles en agua y se almacenan en clulas especializa-
das que se llaman clulas adiposas (clulas grasas), las
cuales consisten casi por entero en triacilglicerol. Estas
clulas se especializan en la sntesis y almacenamiento
de triacilgliceroles y en su movilizacin como molculas
combustibles. Los triacilgliceroles se transportan alre-
dedor del cuerpo en partculas grandes de lpidos y pro-
tenas llamadas lipoprotenas (seccin K6).
Sntesis
Los triacilgliceroles se sintetizan a partir de acil-CoA y
glicerol 3-fosfato (figura K4-2). El intermediario glucol-
300 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

a) b)
O O
H2C O C (CH2)14 CH3 H2C O C (CH2)14 CH3
O O
HC O C (CH2)14 CH3 HC O C (CH2)7 CH CH (CH2)7 CH3
O O

H2C O C (CH2)14 CH3 H2C O C (CH2)7 CH CH (CH2)7 CH3

Figura K4-1. Estructura de a) un triacilglicerol simple (1,2,3-tripalmitoil-

glicerol) y b) un triacilglicerol mixto (1-palmitoil-2,3-dioleoil-glicerol).

CH2 OH
Dihidroxiacetona fosfato
C O

CH2 O PO32
NADH + H+
Deshidrogenasa de glicerol 3-fosfato
+
NAD

CH2 OH
Glicerol 3-fosfato
HO C H
O
CH2 O PO32
R1 C SCoA
Aciltransferasa de glicerol 3-fosfato

H SCoA O

CH2 O C R1

HO C H cido lisofosfatdico
O
CH2 O PO32
R2 C SCoA

Aciltransferasa de 1-acilglicerol-3-fosfato
H SCoA O

O CH2 O C R1

R2 C O C H cido fosfatdico

CH2 O PO32
Fosfatasa de cido fosfatdico
Pi O

O CH2 O C R1

R2 C O C H Diacilglicerol

O
CH2 OH
R3 C SCoA
Aciltransferasa de diacilglicerol
H SCoA O

O CH2 O C R1

R2 C O C H O Triacilglicerol

CH2 O C R3

Figura K4-2. Sntesis de triacilgliceroles.


O CH2OH
O CH2 O C
R C O C H O
CH2 O C
Triacilglicerol
3H2O
Lipasas
3H+
CH2OH
HO CH + 3 RCOO
CH2OH
Glicerol cidos grasos libres
Gluclisis Oxidacin-
Figura K4-3. Descomposicin de los triacilgliceroles.
tico dihidroxiacetona fosfato primero se reduce a glice-
rol 3-fosfato, el cual, su vez, acilado por la aciltransfera-
sa de glicerol 3-fosfato, forma cido lisofosfatdico. Acto
seguido, ste reacciona con una molcula adicional de
acil-CoA para formar cido fosfatdico. La remocin del
grupo fosfato del cido fosfatdico genera DAG, el cual es
acilado de manera adicional con una tercer molcula
de acil-CoA para formar triacilglicerol (figura K4-2). El
ATP no interviene en la sntesis de los triacilgliceroles. En
su lugar, las reacciones suceden por la rotura de los en-
laces tioster de alta energa entre el residuo acilo y la
CoA. El cido fosfatdico (fosfatidato) y el DAG tambin
se usan en la sntesis de los fosfolpidos de la membrana
(seccin E1) y asimismo el DAG se utiliza como segundo
mensajero en la sealizacin de las clulas (seccin E5).
Descomposicin
El acontecimiento inicial en la utilizacin de la grasa al-
macenada y la grasa diettica como fuente de energa
es la hidrlisis del triacilglicerol por las lipasas. Estas en
zimas liberan las tres cadenas de cidos grasos de la
columna vertebral de glicerol (figura K4-3). A partir de
su liberacin, los cidos grasos pueden ser degradados
en la oxidacin  para generar energa (seccin K2). La
columna vertebral de glicerol tambin se utiliza y para
ello primero se transforma en dihidroxiacetona fosfato,
un producto intermedio de la gluclisis (figura K4-4).
ste requiere dos enzimas, cinasa de glicerol, la cual usa
ATP para fosforilar el glicerol, y produce L-glicerol 3-fos-
fato, y la deshidrogenasa de glicerol 3-fosfato, la cual
produce dihidroxiacetona fosfato.
En el intestino, las grasas dietticas son hidrolizadas
por la lipasa pancretica y los cidos grasos liberados
K4TRIACILGLICEROLES 301
R Glicerol
HO CH
CH2OH
ATP
R
Cinasa de glicerol
ADP
CH2OH
L-glicerol 3-fosfato
HO CH
CH2O PO32
NAD+
Deshidrogenasa de glicerol 3-fosfato
NADH + H+
CH2OH
Dihidroxiacetona fosfato
O C
CH2O PO32
Figura K4-4. Conversin del glicerol en el
intermediario glucoltico dihidroxiacetona fosfato.
ingresan en las clulas intestinales. Las propiedades se-
mejantes a detergentes de las sales biliares facilitan los
procesos de digestin y de captacin (seccin K5).
Regulacin
El principal control de la degradacin de los cidos gra-
sos en la oxidacin  (seccin K2) radica en la concen-
tracin de los cidos grasos libres en la sangre, la cual
es, a su vez, controlada por la tasa de hidrlisis de tria-
cilgliceroles en el tejido adiposo por la lipasa de triacil-
glicerol sensible a la hormona. Esta enzima es regulada
por la fosforilacin y desfosforilacin (figura K4-5) en
respuesta a los niveles controlados por hormonas del
segundo mensajero intracelular cAMP (seccin E5). Las
hormonas catablicas glucagon, adrenalina y noradre-
nalina, las cuales son liberadas en momentos de necesi-
dad metablica, se unen a las protenas receptoras de la
superficie celular e incrementan los niveles de cAMP en
las clulas adiposas a travs de la activacin de la cicla-
sa de adenilato (vase seccin E5 para mayores detalles
sobre la va de transduccin de seales). El cAMP activa
por medios alostricos a la proteincinasa dependiente
de cAMP (conocida por otro lado como proteincina-
sa A), la cual fosforila diversas enzimas intracelulares
como la lipasa sensible a la hormona. La fosforilacin
de la lipasa sensible a la hormona la activa y por lo tanto
estimula la hidrlisis de triacilgliceroles, lo que aumen-
ta los niveles de cidos grasos en la sangre, y de mane-
ra subsecuente activa la oxidacin en tejidos como el
msculo estriado y el hgado. El glucagon y la adrenalina
tambin evitan la desfosforilacin, y por lo tanto la acti-
vacin, de la carboxilasa de acetil-CoA, y de esta mane-
ra se inhibe la sntesis de los cidos grasos (seccin K3).
302 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

La hormona anablica insulina tiene el efecto opuesto
al del glucagon y la adrenalina. Estimula la formacin
de triacilglicerol a travs de la disminucin del nivel de
cAMP, el cual promueve la desfosforilacin e inactiva-
cin de la lipasa sensible a la hormona (figura K4-5). La
insulina tambin estimula la desfosforilacin de la car-
boxilasa de acetil-CoA y por este medio activa la snte-
sis de cidos grasos (seccin K3). Por lo tanto, la sntesis
y degradacin de cidos grasos es controlada de manera
coordinada con el fin de evitar un ciclo improductivo.

cAMP
Glucagon +
Adrenalina Insulina
Noradrenalina +

Proteincinasa
ATP dependiente de cAMP ADP

Lipasa Lipasa
inactiva activa
sensible a Pi sensible a
la hormona la hormona
+ Insulina

Figura K4-5. Resumen del control de la lipasa

de triacilglicerol sensible a la hormona.
SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

K5Colesterol
Notas clave
Funciones del colesterol El colesterol es un componente de las membranas celulares y es el precursor de
las hormonas esteroideas y de las sales biliares.
Biosntesis del colesterol Los 27 tomos de carbono del colesterol derivan de la acetil-CoA. Primero se
combinan acetil-CoA y acetoacetil-CoA para formar 3-hidroxi-3-metilglutaril-
CoA (HMG CoA), la cual, a su vez, es reducida a mevalonato por la reductasa de
HMG CoA. El mevalonato es convertido en los componentes isopreno de cin-
co carbonos 3-isopentenilpirofosfato y su ismero dimetilalilpirofosfato. Estos
dos compuestos se condensan para formar el geranilpirofosfato de 10 carbonos,
el cual es elongado a farnesilpirofosfato de 15 carbonos a travs de la adicin de
otra molcula de isopentenilpirofosfato. Las dos molculas de farnesilpirofosfato
se condensan para formar el escualeno de 30 carbonos, el cual entonces se
cicliza y convierte en colesterol.
Regulacin de la El colesterol puede obtenerse en la dieta o sintetizarse en el hgado. Los niveles
biosntesis de colesterol altos de colesterol y sus metabolitos disminuyen la cantidad e inhiben la
actividad de la reductasa de HMG CoA, la enzima que cataliza el paso forzoso
en la biosntesis del colesterol. Esta enzima tambin puede ser inhibida por
medios teraputicos mediante compuestos de estatina.
Sales biliares Las sales biliares (o cidos biliares) son la principal forma excretoria del
colesterol. Estos compuestos polares son formados en el hgado por la con-
versin del colesterol en glicocolato o taurocolato. Las sales biliares, semejantes
a detergentes, son secretadas en el intestino, donde ayudan a la digestin y
captacin de los lpidos dietticos.
Vitamina D La vitamina D deriva del colesterol por una serie de reacciones, una de las cuales
requiere la accin de la luz UV para romper el enlace entre los tomos de carbono.
La deficiencia de vitamina D causa raquitismo en los nios y osteomalacia en
los adultos.
Hormonas esteroideas Las hormonas esteroideas, como los progestgenos, andrgenos, estrgenos,
glucocorticoides y mineralocorticoides, derivan del colesterol por una serie de
reacciones que incluyen las enzimas que contienen hemo del citocromo P-450.
Estas monooxigenasas requieren O2 y NADPH para funcionar e intervienen en el
metabolismo de los frmacos.

Temas relacionados (D5) Regulacin de la actividad (K3) Sntesis de cidos grasos

enzimtica (K4) Triacilgliceroles
(E1) Lpidos de la membrana (K6) Lipoprotenas
(K2) Descomposicin de cidos grasos (M4) Hemos y clorofilas

Funciones del colesterol sales biliares (vase ms adelante). Por consiguiente, el

El colesterol es un esteroide. Es un constituyente
importante de las membranas celulares, donde, en los
mamferos, modula la fluidez (seccin E1). El coleste-
rol es tambin el precursor de hormonas esteroideas
como la progesterona, testosterona y cortisol, y de las
colesterol es con toda claridad una molcula esencial,
pese a que su depsito en las arterias puede dar origen
a enfermedades cardiovasculares y accidentes cerebro-
vasculares, dos de las principales causas de muerte en
los seres humanos.
304 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

Biosntesis del colesterol
Los animales son capaces de sintetizar colesterol de novo
mediante una serie elegante de reacciones en las cuales
los 27 tomos de carbono del colesterol son derivados de
la acetil-CoA. En primer lugar, las unidades de acetato
se convierten en unidades isopreno de cinco carbonos,
que luego se condensan para formar un precursor lineal
del colesterol cclico.
La primera etapa en la sntesis del colesterol es la for-
macin de isopentenilpirofosfato (figura K5-1). La
acetil-CoA y la acetoacetil-CoA se combinan para for-
mar 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG CoA). Este
proceso tiene lugar en el hgado, donde la HMG CoA de
las mitocondrias se usa para formar cuerpos cetnicos
durante el ayuno (seccin K2), mientras que en el cito-
sol es usada para sintetizar colesterol en el estado de
alimentacin (bajo la influencia del colesterol). Luego,
la HMG CoA es reducida a mevalonato por la reductasa
de HMG CoA (figura K5-1). ste es el paso obligado en la
biosntesis del colesterol y es un punto de control clave.
El mevalonato se convierte en 3-isopentenilpirofosfato
por tres reacciones consecutivas en las cuales interviene
el ATP, y en las que se libera CO2 en la ltima reaccin
(figura K5-1).
Las unidades de isopreno de cinco carbonos de isopen-
tenilpirofosfato se condensan para formar escualeno,
un compuesto de 30 carbonos (figura K5-2). Primero, el
isopentenilpirofosfato se isomeriza a dimetilalilpirofos-
fato (figura K5-2a), el cual reacciona con otra molcula
de isopentenilpirofosfato para formar el compuesto de
10 carbonos geranilpirofosfato (figura K5-2b). Enton-
ces otra molcula de isopentenilpirofosfato reacciona
con el geranilpirofosfato para formar el compuesto de
15 carbonos farnesilpirofosfato. A continuacin, dos
molculas de farnesilpirofosfato se condensan para for-
mar escualeno (figura K5-2b).

Acetil-CoA + Acetoacetil-CoA

C S CoA

CH2

HO C CH3 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA
(HMG CoA)
CH2

COO

2 NADPH + 2 H+
Reductasa de HMG CoA
+
CoA + 2 NADP

COO

CH2

HO C CH3 Mevalonato

CH2

CH2OH

ATP
ADP
ATP
ADP
ATP
ADP + Pi + CO2

CH2
Isopentenilpirofosfato
C CH3

CH2 O O

CH2O P O P O

O O

Figura K5-1. Sntesis de isopentenilpirofosfato.

 K5COLESTEROL 305

Acto seguido, el escualeno se convierte en epxido de reduccin de un doble enlace por parte del NADPH y la
escualeno en una reaccin en la que interviene el O2 y el migracin del otro doble enlace (figura K5-2b).
NADPH (figura K5-2b). El epxido de escualeno se cicliza
para formar lanosterol y al final colesterol, que se forma El y el compuesto de 20 carbonos
FARNESILPIROFOSFATO
a partir del lanosterol en una serie de reacciones en las (el cual se forma por la con-
GERANILGERANILPIROFOSFATO
que se produce la remocin de tres grupos metilo, la densacin de otro isopentenilpirofosfato con farne-

a)
O O O O
H3 C H3C

C CH2 CH2 O P O P O C CH CH2 O P O P O
H2C O O H3C O O

Isopentenilpirofosfato Dimetilalilpirofosfato

b)

O P P + O P P

Isopentenil P P Dimetilalil P P
PPi

O P P Geranilpirofosfato

Isopentenil P P

PPi

O P P Farnesilpirofosfato

Farnesil P P NADPH + H+

2PPi NADP+

Escualeno (C30)
O2 + NADPH + H+

H2O + NADP+

Epxido de escualeno (C30)

Lanosterol (C30)
NADPH + H+
CH3
+ CH3
NADP
CH3

H3C
CH3 CH3
Colesterol (C27)
CH3 CH3

HO

Figura K5-2. Sntesis de escualeno y colesterol a partir de isopentenilpirofosfato: a) isomerizacin

del isopentenilpirofosfato a dimetilalilpirofosfato; b) sntesis de colesterol.
306 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS
silpirofosfato) se enlazan de manera covalente a resi-
duos de cistena en varias de las protenas, dando ori-
gen a protenas preniladas, y promueven su asociacin
con las membranas (seccin E2). El dolicol, el cual con-
tiene alrededor de 20 unidades de isopreno, se usa para
transportar al precursor biosinttico de los oligosacri-
dos ligados a N, que de manera subsecuente se fija a las
protenas (seccin F5).
Regulacin de la biosntesis de colesterol
El colesterol puede obtenerse de la dieta o sintetizarse
de novo, sobre todo en el hgado. El colesterol se trans-
porta alrededor del cuerpo en partculas de lipopro-
tenas (seccin K6). La tasa de sntesis de colesterol
depende del nivel celular del mismo. Los niveles altos
de colesterol y sus metabolitos controlan la biosnte-
sis del colesterol a nivel de la reductasa de HMG CoA, la
enzima que cataliza el paso forzoso en la biosntesis del
colesterol. Los controles de corto plazo de esta enzima
se rompen por inhibicin competitiva, efectos alostri-
cos y modificacin covalente con base en la fosforila-
cin reversible. Como la carboxilasa de acetil-CoA en la
sntesis de los cidos grasos (seccin K3), la reductasa
de HMG CoA es inactivada por la fosforilacin a la que es
sometida por una cinasa de protena activada por AMP, y
se retiene en esta forma bajo la influencia del glucagon
durante el ayuno. Sin embargo, el mecanismo regula-
dor primario de la reductasa de HMG CoA es un control
por retroalimentacin a largo plazo de la cantidad de
la enzima. La tasa de sntesis de su mRNA es contro-
lada por la protena de unin del elemento regulador
de esterol (SREBP), el cual sensa la cantidad de colesterol
en la clula.
La reductasa de HMG CoA puede ser inhibida con recur-
sos teraputicos mediante la administracin de frma-
cos denominados estatinas (por ejemplo, lovastatina y
sinvastatina), los cuales inhiben en forma competitiva
a la enzima y por lo tanto reducen la tasa de biosnte-
sis de colesterol. En consecuencia, estos compuestos
se usan de manera rutinaria para el tratamiento de la
hipercolesterolemia (niveles altos de colesterol en san-
gre) (seccin K6).
O
a)
C C C N
HO C C H O
HO OH
H
Figura K5-3. Estructuras de las sales biliares a) glicocolato y b) taurocolato.
Sales biliares
Las sales biliares (o cidos biliares) son derivados pola-
res del colesterol y constituyen la principal va para la
excrecin del colesterol en los mamferos. En el hgado,
el colesterol se convierte en el intermediario activado
colil-CoA, el cual reacciona con el grupo amino de la
glicina para formar glicocolato (figura K5-3a) o con el
grupo amino de la taurina (H2N-CH2-CH2-SO3, un deri-
vado de la cistena) para formar taurocolato (figura
K5-3b). Despus de la sntesis en el hgado, las sales
biliares glicocolato y taurocolato se almacenan y con-
centran en la vescula biliar, antes de ser liberadas en
el intestino delgado. Como contienen regiones polares
y apolares (esto es, son molculas anfipticas), las sales
biliares son detergentes muy efectivos y actan para
solubilizar los lpidos dietticos. El incremento resul-
tante en el rea superficial de los lpidos ayuda a su
hidrlisis por las lipasas y a su captacin por las clulas
del intestino delgado (seccin K4). La absorcin intes-
tinal de las vitaminas liposolubles A, D, E y K tambin
requiere la accin de las sales biliares.
Vitamina D
La vitamina D deriva del 7-dehidrocolesterol por la
accin del componente UV de la luz solar sobre la piel.
La luz UV provoca la fotlisis del 7-dehidrocolesterol
entre los C-9 y C-10, lo que conduce al reordenamiento
de los dobles enlaces de la molcula para formar pre-
vitamina D3 (figura K5-4). Esta molcula se isomeriza
de manera espontnea para formar vitamina D3 (cole-
calciferol). En el hgado y los riones tienen lugar reac-
ciones de hidroxilacin subsecuentes que producen
1,25-dihidroxicolecalciferol (1,25(OH)D3), la hormona
activa (figura K5-4). El raquitismo, el cual es causado
por una deficiencia de vitamina D, fue una enfermedad
histrica comn de la niez de Bretaa debido al bajo
contenido de vitamina D de la dieta nacional, y a falta
de exposicin a la luz solar. Incluso hoy en da, la gente
cuya religin le exige mantener el cuerpo cubierto, de
manera que su piel no se expone a la luz solar, tiene difi-
cultades para mantener un nivel adecuado de vitamina
O
CH2 C
O
b)
C C C N CH2 CH2 SO3
HO C C H
HO OH
H
 K5COLESTEROL 307

D. En los adultos, esto toma la forma de la osteomalacia
(el ablandamiento y debilitamiento de los huesos).
Hormonas esteroideas
El colesterol es el precursor de las cinco principales cla-
ses de hormonas esteroideas (cuadro K5-1). La sntesis
de las hormonas esteroideas se inicia por la remocin de
una unidad de seis carbonos del carbono 20 de la cadena
lateral del colesterol para formar pregnenolona, el pre-
cursor comn de todas las hormonas esteroideas (figura
K5-5). Una serie de reacciones catalizadas por el cito-
cromo P-450 modifica la pregnenolona para dar origen
a las diferentes hormonas individuales (figura K5-5).
El citocromo P-450 es un grupo de enzimas que contie-
nen hemo (seccin M4), que debe su nombre a la longi-
tud de onda mxima de su espectro de absorcin cuando
est unido al monxido de carbono. ste se localiza en
las mitocondrias y en el SER de muchas clulas, y con-
siste en una familia de enzimas estructuralmente rela-
cionadas con diferentes especificidades de sustratos. En
los seres humanos, el citocromo P-450 participa en el
metabolismo de los frmacos, por ejemplo, mediante la
metabolizacin oxidativa de frmacos como la cafena y
el ibuprofeno. Aunque su accin es benfica en general,
desempea un papel protector en la remocin de sus-
tancias qumicas extraas, algunos de los carcingenos
ms poderosos se generan por la accin del citocromo
P-450 sobre compuestos dainos. Todas las enzimas
catalizan las llamadas reacciones de la monooxigenasa,
en la cual un tomo de oxgeno del oxgeno molecular
se inserta dentro de la molcula del sustrato y los otros
tomos de oxgeno forman agua. Los electrones reque-
ridos para llevar a cabo la reduccin del oxgeno y for-
mar agua son aportados por cadenas de transporte de
electrones especializadas, las cuales guardan una rela-
cin funcional con las enzimas P-450. Estas cadenas de
transporte de electrones suelen tener al NADPH como el
ltimo donador de electrones, de manera que una reac-
cin catalizada por el citocromo P-450 se caracteriza en
general por la participacin del O2 y el NADPH.

Colesterol (C27)

7-dehidrocolesterol Colesterol

Luz UV Pregnenolona (C21)

Previtamina D3

Isomerizacin Progestgenos (C21)

Vitamina D3
(colecalciferol) Glucocorticoides Andrgenos
(C21) Mineralocorticoides (C19)
Hidroxilacin (C21)

1,25-dihidroxicolecalciferol
Estrgenos
(C18)

Figura K5-4. Formacin de la vitamina D. Figura K5-5. Va biosinttica para la sntesis de las
hormonas esteroideas.

Cuadro K5-1. Clases de hormonas esteroideas

Clase Sitio de sntesis Hormona Accin
Progestgenos Cuerpo lteo Progesterona Prepara el revestimiento uterino para
la implantacin del huevo; mantiene el
embarazo
Andrgenos Testculos Testosterona Desarrollo de caractersticas sexuales
secundarias masculinas
Estrgenos Ovario Estrona Desarrollo de caractersticas sexuales
secundarias femeninas
Glucocorticoides Corteza suprarrenal Cortisol Promueven la gluconeognesis y la
formacin de glucgeno; incrementan
la degradacin de grasas y protenas
Mineralocorticoides Corteza suprarrenal Aldosterona Aumentan la reabsorcin de Na+ y la
excrecin de K+ e H+ por los tbulos
renales
SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS

K6Lipoprotenas
Notas clave
Estructura y funcin Las lipoprotenas son partculas globulares que consisten en un centro hidrfobo
de triacilgliceroles y steres de colesterol rodeados por una cubierta de protenas,
fosfolpidos y colesterol. Las apoprotenas de la superficie contribuyen a
solubilizar los lpidos y a dirigir a las lipoprotenas hacia los tejidos correctos.
Hay cinco tipos diferentes de lipoprotenas, que se clasifican de acuerdo con
sus propiedades funcionales y fsicas: quilomicrones, lipoprotenas de muy baja
densidad (VLDL), lipoprotenas de densidad intermedia (IDL), lipoprotenas de
baja densidad (LDL) y lipoprotenas de alta densidad (HDL). La principal funcin
de las lipoprotenas es transportar triacilgliceroles, colesterol y fosfolpidos
alrededor del cuerpo.
Quilomicrones El intestino sintetiza los quilomicrones, que se encargan de transportar los
triacilgliceroles dietticos al msculo esqueltico y al tejido adiposo, y al
colesterol diettico hacia el hgado. En estos tejidos finales, los triacilgliceroles
son hidrolizados por la lipasa de lipoprotena de la superficie de las clulas. Los
quilomicrones remanentes ricos en colesterol se transportan en la sangre hacia
el hgado, donde son captados mediante endocitosis mediada por el receptor.
VLDL, IDL y LDL Las VLDL son sintetizadas en el hgado y transportan triacilgliceroles, colesterol
y fosfolpidos hacia otros tejidos, donde la lipasa de lipoprotena hidroliza los
triacilgliceroles y libera los cidos grasos para su captacin. Los remanentes de
las VLDL se transforman primero en IDL y luego en LDL a medida que todas sus
apoprotenas que no son apoB-100 son removidas y su colesterol esterificado.
Las LDL se unen a la protena receptora de las LDL situada en la superficie de las
clulas destino, donde son internalizadas mediante endocitosis mediada por
el receptor. El colesterol, que es liberado de las lipoprotenas por la accin de
las lipasas lisosmicas, se incorpora en la membrana celular o es reesterificado
para su almacenamiento.
HDL Las HDL se sintetizan en la sangre y extraen el colesterol de las membranas
celulares para convertirlo en steres de colesterol. La mayora de las HDL es
tomada por las clulas hepticas mediante endocitosis mediada por el receptor
y el colesterol se elimina en la forma de sales biliares.
Ateroesclerosis La ateroesclerosis se caracteriza por el engrosamiento arterial rico en colesterol
(ateromas) que estrecha las arterias y determina que se formen cogulos de
sangre. Si estos cogulos de sangre bloquean las arterias coronarias que irrigan
el corazn, el resultado es un infarto del miocardio, o ataque al corazn.
Hipercolesterolemia Es un trastorno hereditario en el cual los individuos carecen de receptores
familiar funcionales de las LDL, lo que evita que el colesterol de stas sea captado por los
tejidos. Los niveles muy elevados de colesterol resultantes conducen a un in-
cremento en la formacin de ateromas y pueden causar la muerte por un infarto
miocrdico durante la infancia.

Temas relacionados (E1) Lpidos de la membrana (K4) Triacilgliceroles

(E4) Transporte de membrana: (K5) Colesterol
macromolculas

Estructura y funcin
Los triacilgliceroles (seccin K4), fosfolpidos (seccin
E1) y colesterol (seccin K5) son relativamente insolu-
bles en solucin acuosa. Por consiguiente, son transpor-
tados por la sangre alrededor del cuerpo como compo-
nentes de las lipoprotenas. Estas partculas globulares,
semejantes a micelas, consisten en un centro hidrfobo
de triacilgliceroles y steres de colesterol rodeados por
una cubierta anfiptica de protenas, fosfolpidos y
colesterol. Los componentes protenicos de las lipopro-
tenas se llaman apolipoprotenas (o apoprotenas).
Cuando menos hay 10 diferentes apoprotenas en las
distintas lipoprotenas humanas. Sus funciones son
ayudar a solubilizar los lpidos hidrfobos y a actuar
como seales del direccionamiento celular. Las lipopro-
tenas se clasifican en cinco grupos sobre la base de sus
propiedades fsicas y funcionales (cuadro K6-1).
z Los quilomicrones son las lipoprotenas ms gran-
des y menos densas. Transportan triacilgliceroles y
colesterol dietticos (exgenos) desde el intestino a
los tejidos del cuerpo.
z Las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL), las
lipoprotenas de densidad intermedia (IDL) y las lipo-
protenas de baja densidad (LDL) son un grupo de
lipoprotenas relacionadas que transporta triacilgli-
ceroles y colesterol de produccin interna (endge-
nos) desde el hgado a los tejidos.
z Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) transportan
el colesterol endgeno de los tejidos al hgado.
Quilomicrones
Los quilomicrones, la mayor de las lipoprotenas, se sin-
tetizan en el intestino. Transportan los triacilgliceroles
ingeridos hacia los tejidos, en particular hacia el msculo
esqueltico y el tejido adiposo, y transportan el colesterol
ingerido al hgado (figura K6-1). En los tejidos destino,
los triacilgliceroles son hidrolizados por la accin de la
lipasa de lipoprotena, una enzima que se localiza en el
lado externo de las clulas y que es activada por la apoC-
II, una de las apoprotenas de la superficie de los quilo-
micrones. Los tejidos toman y usan los cidos grasos y
monoacilgliceroles en la produccin de energa o reeste-
rifican triacilglicerol para su almacenamiento. A medida
Cuadro K6-1. Caractersticas de las cinco clases de lipoprotenas
Lipoprotena Masa molecular (kDa) Densidad (g ml1)
Quilomicrones >400 000 <0.95
VLDL 10 000-80 000 <1.006
IDL 5 000-10 000 1.006-1.019
LDL 2 300 1.019-1.063
HDL 175-360 1.063-1.210
C, colesterol; CE, ster de colesterol; TG, triacilglicerol; PL, fosfolpido.
K6LIPOPROTENAS 309
que el contenido de triacilglicerol se agota, los quilomi-
crones se contraen y forman remanentes de quilomicro-
nes ricos en colesterol, los cuales son transportados en
la sangre hacia el hgado (figura K6-1). Aqu, se unen a
receptores especficos de los remanentes de la superfi-
cie celular y son tomados por los hepatocitos mediante
endocitosis mediada por el receptor (seccin E4).
VLDL, IDL y LDL
El hgado es el encargado de sintetizar las VLDL, que
transportan una diversidad de lpidos (cuadro K6-1) a
otros tejidos, sobre todo al tejido adiposo y el msculo
esqueltico. Como en el caso de los quilomicrones, los
triacilgliceroles de las VLDL son atacados por la lipasa
de lipoprotena y los cidos grasos que se liberan son
tomados por los tejidos (figura K6-1). Los remanentes
de las VLDL permanecen en la sangre, primero como IDL y
luego como LDL. En la transformacin en LDL, gran parte
del colesterol es esterificado en su grupo hidroxilo del
C-3 mediante la adicin de una cadena de cidos gra-
sos procedente de la fosfatidilcolina (lecitina); la enzima
aciltransferasa de lecitina-colesterol (LCAT) lleva a cabo
esta anexin. Adems, se remueven todas las apoprote-
nas diferentes de apoB-100.
Ms tarde, las LDL son tomadas por las clulas destino a
travs de endocitosis mediada por el receptor (seccin
E4). El receptor de LDL, una glucoprotena transmem-
brana de la superficie de las clulas destino, se une de
manera especfica a la apoB-100 del revestimiento de la
LDL. Los receptores entonces se agrupan dentro de cavi-
dades revestidas de clatrina y se internalizan (seccin E4,
figura E4-3). Una vez que estn en los lisosomas, las LDL
son digeridas por las enzimas lisosmicas y los steres
de colesterol son hidrolizados por una lipasa lisosmica
que deja al colesterol libre (figura K6-1). ste luego es
incorporado dentro de la membrana celular y cualquier
exceso es reesterificado para su almacenamiento por
accin de la aciltransferasa de acil-CoA colesterol (ACAT).
Para evitar la elaboracin de colesterol y sus steres
derivados en la clula, los valores altos de colesterol:
z Reducen la sntesis del receptor de LDL, cuyo gen regula
la SREBP, y de esta manera disminuyen la captacin de
colesterol por endocitosis mediada por el receptor.
% protenas Lpidos principales Apoprotenas
1.5-2.5 TG A, B-48, C, E
5-10 TG, PL, CE B-100, C, E
15-20 CE, TG, PL B-100, C, E
20-25 CE, PL B-100
40-55 PL, CE A, C, D, E
310 SECCIN K METABOLISMO DE LPIDOS
Grasa
diettica Colesterol endgeno
Sales biliares
Colesterol
INTESTINO
Quilomicrones
Remanentes de
los quilomicrones
Capilares
sanguneos
Lipasa de
lipoprotena
cidos grasos libres
Produccin
de energa
MSCULO
Figura K6-1. El transporte de triacilglicerol y colesterol por lipoprotenas.
z Inhiben la biosntesis celular de colesterol al inhibir
a la reductasa de HMG CoA (seccin K5)
HDL
Las HDL tienen la funcin opuesta a la de las LDL en el sen-
tido de que remueven el colesterol de los tejidos. Las HDL
se sintetizan en la sangre, sobre todo a partir de com-
ponentes derivados de la degradacin de otras lipopro-
tenas. Las HDL adquieren su colesterol por extraccin
del mismo de las membranas celulares y su conver-
sin en steres de colesterol por la accin de la LCAT
(figura K6-1). Luego, las HDL son tomadas directamente
por el hgado o transfieren sus steres de colesterol a las
VLDL, de las cuales alrededor de la mitad es tomada por
el hgado mediante endocitosis mediada por el receptor
(figura K6-1). El hgado es el nico rgano que puede eli-
minar cantidades significativas de colesterol, en primer
lugar en la forma de sales biliares (seccin K5).
Ateroesclerosis
La ateroesclerosis, el tipo ms comn de endureci-
miento de las arterias, se caracteriza por la presencia
de engrosamientos arteriales ricos en colesterol (ate-
romas). Esta enfermedad progresiva comienza con el
depsito intracelular de lpidos, en primer lugar de ste-
res de colesterol, en las clulas de msculo liso de la
pared arterial. Estas lesiones se fibrosan y convierten
en placas calcificadas que estrechan y pueden bloquear
las arterias. Tambin es ms probable que se originen
cogulos sanguneos, los cuales pueden detener el flujo
HGADO
CLULA
DESTINO
Colesterol Lisosoma
diettico
LDL
Colesterol
VLDL
IDL HDL
Capilares
sanguneos
Lipasa de
lipoprotena
Almacenamiento
TEJIDO
ADIPOSO
sanguneo y privar a los tejidos del oxgeno. Si estos blo-
queos se producen en las arterias coronarias, las arterias
que irrigan el corazn, el resultado es un infarto del mio-
cardio o ataque cardiaco, el cual es la causa ms comn
de muerte en los pases industrializados occidentales.
En las arterias cerebrales, los cogulos sanguneos cau-
san accidentes vasculares cerebrales, mientras que los
que aparecen en los vasos sanguneos perifricos de las
extremidades pueden conducir a una posible gangrena
y su correspondiente amputacin.
Hipercolesterolemia familiar
La hipercolesterolemia familiar es un trastorno heredi-
tario en el cual los homocigotos tienen un nivel muy
elevado de colesterol en sangre, mientras que en los
heterocigotos dicho nivel duplica el de los individuos
normales. Esto no slo resulta en el depsito del coles-
terol en la piel como ndulos amarillos que se cono-
cen como xantomas, sino tambin en la formacin de
ateromas que pueden causar la muerte al provocar un
infarto del miocardio durante la infancia. En la mayora
de los casos de hipercolesterolemia familiar, el defecto
molecular es la falta de receptores funcionales de las
LDL. Por lo tanto, el colesterol LDL no puede ser tomado
por los tejidos y produce una alta concentracin en la
sangre. Los cigotos pueden tratarse mediante trasplante
heptico, mientras que los heterocigotos pueden tra-
tarse mediante inhibicin de la reductasa de HMG CoA
con estatinas (seccin K5) y por medio de la reduccin
de la reabsorcin intestinal de sales biliares, lo que
reduce el nivel de colesterol sanguneo.
SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA

L1Ciclo del cido ctrico

Notas clave

Funcin El ciclo oxida el piruvato (que se forma durante la degradacin glucoltica de

la glucosa) a CO2 y H2O, con la produccin concomitante de energa. Tam-
bin es oxidada la acetil-CoA procedente de la descomposicin de los cidos
grasos y de los productos de degradacin de los aminocidos. Adems, el
ciclo produce precursores para las vas biosintticas.

Localizacin El ciclo del cido ctrico tiene lugar dentro de las mitocondrias de los euca-
riotas y en el citosol de los procariotas.

El ciclo El ciclo del cido ctrico tiene ocho etapas:

1. Produccin de citrato a partir del oxalacetato y de la acetil-CoA (catalizada
por la citrato sintasa).
2. Isomerizacin del citrato a isocitrato (catalizada por la aconitasa).
3. Oxidacin del isocitrato a -cetoglutarato (catalizada por la isocitrato des-
hidrogenasa; la reaccin requiere NAD+).
4. Oxidacin del -cetoglutarato a succinil-CoA (catalizada por el complejo
de la -cetoglutarato deshidrogenasa; la reaccin requiere NAD+).
5. Conversin de la succinil-CoA en succinato [catalizada por la succinil-
CoA sintetasa; la reaccin requiere fosfato inorgnico y GDP (o ADP)].
6. Oxidacin del succinato a fumarato (catalizada por la succinato deshidro-
genasa; la reaccin utiliza FAD).
7. Hidratacin del fumarato a malato (catalizada por la fumarasa).
8. Oxidacin del malato a oxalacetato (catalizada por la malato deshidroge-
nasa; la reaccin requiere NAD+).
Produccin de energa Por cada vuelta del ciclo se producen alrededor de 10 molculas de ATP, una
directamente en el ciclo y alrededor de nueve a partir de la reoxidacin de
tres molculas de NADH y de un FADH2 producidas por el ciclo y que pasaron
por la fosforilacin oxidativa.
Regulacin El ciclo del cido ctrico es regulado en los pasos que catalizan la citrato
sintasa, la isocitrato deshidrogenasa y la -cetoglutarato deshidrogenasa a
travs de la inhibicin por retroalimentacin por ATP, citrato, NADH y succinil-
CoA, y la estimulacin de la isocitrato deshidrogenasa por ADP. El complejo
de la piruvato deshidrogenasa, del cual convierte el piruvato en acetil-CoA
para que ingrese en el ciclo, es inhibido por la acetil-CoA y el NADH. De ma-
nera adicional, esta enzima es inactivada por fosforilacin, una reaccin que
cataliza la cinasa de la piruvato deshidrogenasa. Un alto ndice de NADH/NAD+,
acetil-CoA/CoA o de ATP/ADP estimula la fosforilacin de la piruvato deshi-
drogenasa y as inactiva esta enzima. El piruvato inhibe a la cinasa. La re-
mocin del grupo fosfato (desfosforilacin) por una fosfatasa reactiva a la
piruvato deshidrogenasa.
Vas biosintticas Aminocidos, purinas y pirimidinas, porfirinas, cidos grasos y glucosa son
sintetizados a travs de vas que utilizan intermediarios del cido ctrico
como precursores.
312 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA
Temas relacionados (J3) Gluclisis
(J4) Gluconeognesis
(K2) Catabolismo de cidos grasos
(K3) Sntesis de cidos grasos
Funcin
El ciclo del cido ctrico, tambin conocido como el ciclo
TCA (cido tricarboxlico) o ciclo de Krebs (en honor a su
descubridor, en 1937), se usa para oxidar el piruvato que
se forma durante la degradacin glucoltica de la glucosa
en CO2 y H2O. Tambin oxida a la acetil-CoA que se ori-
gina por la degradacin de los cidos grasos (seccin K2),
y a los productos de la degradacin de los aminocidos
(seccin M2). De manera adicional, el ciclo suministra
precursores para muchas vas biosintticas.
Localizacin
El ciclo del cido ctrico opera en las mitocondrias de los
eucariotas y en el citosol de los procariotas. La succinato
deshidrogenasa, nica enzima del ciclo del cido ctrico
unida a la membrana, est embebida en la membrana
mitocondrial interna de los eucariotas y en la mem-
brana plasmtica de los procariotas.
El ciclo
El ciclo del cido ctrico forma la parte central de un
proceso en tres pasos, los cuales oxidan molculas com-
bustibles orgnicas en CO2 con la produccin concomi-
tante de ATP.
Paso 1: oxidacin de las molculas combustibles
a acetil-CoA
Una fuente importante de energa es la glucosa, la cual
se convierte en piruvato durante la gluclisis (seccin
J3). La piruvato deshidrogenasa es un complejo de tres
enzimas y cinco coenzimas localizado en la matriz mito-
condrial, es el enlace entre la gluclisis y el ciclo del
cido ctrico. Esta enzima oxida el piruvato para formar
acetil-CoA y CO2.
Piruvato + CoA + NAD+ acetil-CoA +
CO2 + NADH + H+
Esta reaccin irreversible incluye una oxidacin y la pr-
dida de CO2 y por esta razn el proceso se llama descar-
boxilacin oxidativa.
Paso 2: ciclo del cido ctrico
El ciclo lleva a cabo la oxidacin de grupos acetilo proce-
dentes de la acetil-CoA a CO2 con la produccin de cua-
tro pares de electrones, que de manera inicial se alma-
cenan en los transportadores de electrones reducidos
(L2) Transporte de electrones y fosfori-
lacin oxidativa
(M2) Metabolismo de aminocidos
NADHy FADH2. Las estructuras moleculares de los inter-
mediarios metablicos se presentan en la figura L1-1.
El ciclo tiene ocho etapas:
1. Se produce el citrato (6C) a partir de la condensacin
irreversible de acetil-CoA (2C) y oxalacetato (4C)-
catalizada por la citrato sintasa.
Acetil-CoA + oxalacetato + H2O citrato + CoA
2. La aconitasa cataliza una isomerizacin que con-
vierte al citrato en isocitrato (6C). En realidad, sta
es una reaccin en dos pasos durante los cuales se
forma cis-aconitato como un intermediario. Es el cis-
aconitato el que le da su nombre a la enzima.
H2O H 2O
Citrato cis-aconitato isocitrato
3. El isocitrato es oxidado a -cetoglutarato (5C) y CO2
por la isocitrato deshidrogenasa. Esta enzima mito-
condrial requiere NAD+, el cual es reducido a NADH.
Isocitrato + NAD+ -cetoglutarato + CO2 + NADH
4. El complejo de la -cetoglutarato deshidrogenasa
oxida el -cetoglutarato a succinil-CoA (4C) y CO2.
Similar a la piruvato deshidrogenasa, ste es un com-
plejo de tres enzimas y utiliza NAD+ como un cofactor.
-cetoglutarato + CoA + NAD+ succinil-CoA +
CO2 + NADH
5. La succinil-CoA sintetasa convierte la succinil-CoA
en succinato (4C). La reaccin usa la energa que se
libera por la ruptura del enlace del succinil-CoA para
sintetizar GTP (en especial en animales) o ATP (exclusi-
vamente en plantas) a partir de Pi y, respectivamente,
GDP o ADP, por ejemplo:
Succinil-CoA + Pi + GDP succinato + CoA + GTP
6. La succinato deshidrogenasa oxida el succinato a fu-
marato (4C). El FAD est unido estrechamente a la enzi-
ma (indicado en la ecuacin siguiente como E-FAD)
y es reducido para producir FADH2.
Succinato + E-FAD fumarato + E-FADH2
7. La fumarasa convierte el fumarato en malato (4C);
sta es una reaccin de hidratacin, requiere la adi-
cin de una molcula de agua.
Fumarato + H2O malato
 L1CICLO DEL CIDO CTRICO 313

COO
O
Acetil-CoA CH2
CoA
CH3 C S CoA
HO C COO
COO
H2O CH2
2 CH2
1 COO
COO Citrato H C COO

C O HO C H

CH2 Oxalacetato COO

Isocitrato CoA
COO
NAD+
NADH
3
8 NADH
NAD+
CO2
COO
COO
HO C H
CH2
CH2 -cetoglutarato
CH2
COO
Malato C O

COO
COO O
7
CH C S CoA 4
HC CH2 NAD+

COO COO CH2

H2O
Fumarato
6 CH2 COO NADH
Succinil-CoA CO2
CH2 5
COO
E-FADH2 Succinato
GDP + Pi
E-FAD
GTP
CoA

Figura L1-1. Ciclo del cido ctrico (las reacciones 1-8 se describen en el texto).

8. La malato deshidrogenasa oxida el malato a oxala- Cada una de las tres molculas de NADH producidas por
cetato (4C). Otra vez la enzima requiere NAD+ como vuelta en el ciclo genera alrededor de 2.5 ATP y el nico
un cofactor que acepte el par de electrones libres y E-FADH2 produce alrededor de 1.5 ATP en la fosforila-
produce NADH. cin oxidativa (seccin L2). Un GTP (o ATP) se sintetiza
de manera directa durante la conversin del succinil-
Malato + NAD+ oxalacetato + NADH + H+
CoA en succinato. Por ello, la oxidacin de una molcula
de piruvato en la va del ciclo del cido ctrico produce
Paso 3: oxidacin del NADH y el FADH2 producidos alrededor de 10 molculas de ATP.
por el ciclo del cido ctrico
El NADH y el FADH2 producidos por el ciclo del cido ctrico
son reoxidados y la energa liberada se usa para sinteti- Regulacin
zar ATP por medio de la fosforilacin oxidativa (seccin La regulacin del ciclo est regida por la disponibilidad de
L2). sustratos, la inhibicin por los productos que se acumu-
lan, y la inhibicin por retroalimentacin alostrica
Produccin de energa que llevan a cabo los intermediarios subsecuentes del
ciclo. Son tres las enzimas reguladas en el ciclo (citra-
La reaccin general del ciclo del cido ctrico es como
to sintasa, isocitrato deshidrogenasa y -cetoglutarato
sigue:
deshidrogenasa) y tambin la enzima que convierte al
Acetil-CoA + 3NAD+ + E-FAD + GDP + Pi + 2H2O piruvato en acetil-CoA para ingresar en el ciclo, lla-
2CO2 + 3NADH + E-FADH2 + GTP + 2H+ + CoA mada piruvato deshidrogenasa (figura L1-2):
314 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA

El ATP, la acetil-CoA
y el NADH inhiben
Piruvato Acetil-CoA

NADH + CO2 Citrato

El ATP y el
citrato inhiben Isocitrato
Oxalacetato
NADH El ATP y el
NADH inhiben
El ADP estimula
NADH + CO2
Malato -cetoglutarato
La succinil-CoA
y el NADH
inhiben
Fumarato NADH + CO2
Succinil-CoA

Succinato
FADH2
GTP

Figura L1-2. Puntos de regulacin del ciclo del cido ctrico.

z El citrato y tambin el ATP inhiben a la citrato sintasa
(la Km por la acetil-CoA se eleva conforme el nivel de
ATP aumenta).
z El NADH y el ATP inhiben a la isocitrato deshidrogenasa,
en tanto que el ADP la activa.
z El NADH y la succinil-CoA inhiben a la -cetoglutarato
deshidrogenasa.
piruvato deshidrogenasa estimulando as la conver-
sin del piruvato en acetil-CoA.
En general, el ciclo se acelera cuando los niveles de
energa celular son bajos (alta concentracin de ADP,
bajas concentraciones de ATP y NADH) y decae o dismi-
nuye conforme se acumula ATP (y tambin el NADH, la
succinil-CoA y el citrato).

z El NADH y la acetil-CoA inhiben a la piruvato deshi- Vas biosintticas

drogenasa (inhibicin por producto). Sin embargo,
Los intermediarios del ciclo proveen precursores para
en eucariotas la enzima tambin es controlada por
muchas vas biosintticas. Por ejemplo:
fosforilacin/desfosforilacin a travs de la cinasa
y de una fosfatasa de la piruvato deshidrogenasa. z La sntesis de cidos grasos a partir de citrato (seccin
La cinasa cataliza la fosforilacin de un residuo de K3).
serina especfico en la piruvato deshidrogenasa y
z La sntesis de aminocidos por transaminacin del
utiliza ATP como el donador de fosfato, lo que inac-
-cetoglutarato (seccin M2).
tiva a la enzima. La remocin del grupo fosfato por
la fosfatasa reactiva a la enzima. Con frecuencia, la z La sntesis de nucletidos de purina y pirimidina a
actividad de la piruvato deshidrogenasa depende del partir del -cetoglutarato y el oxalacetato.
balance relativo entre las reacciones de la cinasa y
z El oxalacetato puede convertirse en glucosa mediante
la fosfatasa. El incremento de las proporciones NADH/
gluconeognesis (seccin J4).
NAD+, acetil-CoA/CoA o ATP/ADP estimula la fosforila-
cin lo que inactiva a la piruvato deshidrogenasa. z La succinil-CoA es un intermediario central en la sn-
Conforme se produce piruvato se inhibe a la cinasa tesis del anillo de porfirina de los grupos hemo (sec-
y por lo tanto permite que la fosfatasa reactive a la cin M4).
SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA

L2Transporte de electrones
y fosforilacin oxidativa
Notas clave
Descripcin El transporte de electrones y la fosforilacin oxidativa reoxidan el NADH y el
FADH2 y atrapan la energa liberada como ATP. En los eucariotas, el transpor-
te de electrones y la fosforilacin oxidativa tienen lugar en la membrana inter-
na de las mitocondrias, en tanto que en los procariotas el proceso sucede en la
membrana plasmtica.

Potencial redox El potencial de oxidacin-reduccin, E (o potencial redox), de una sustancia

es una medida de su afinidad por los electrones. El potencial redox estndar
(E0) se mide bajo condiciones estndar, a un pH de 7, y se expresa en voltios. El
cambio en la energa libre estndar de una reaccin a un pH de 7, G 0, puede
calcularse a partir del cambio en el potencial redox E0 de los sustratos y los
productos. Una reaccin con un E0 positivo tiene un G 0 negativo (es decir,
es exergnica).

Transporte de electrones Los electrones se transfieren desde el NADH al oxgeno a lo largo de la cade-
desde el NADH na de transporte de electrones (tambin llamada cadena respiratoria). El NADH
transporta los electrones a la NADH-Q oxidorreductasa (Complejo I), un gran
complejo de protenas que contiene FMN y dos tipos de centros de fierro-azufre
(FeS) unidos a las fierro azufre protenas. Los electrones son aceptados por el
FMN para producir FMNH2 y luego se transfieren a los tomos de hierro del cen-
tro FeS, los cuales aceptan y donan los electrones alternando entre los estados
de Fe3+ y Fe2+. Los electrones de la oxidorreductasa de NADH-Q se transfieren
a la ubiquinona (coenzima Q, Q), y la convierte en ubiquinol (o QH2), luego
se transportan los electrones a la Q-citocromo c oxidorreductasa (Complejo
III). Este complejo contiene citocromo b y citocromo c1, as como una protena
FeS. Un citocromo contiene un grupo hemo con un tomo de hierro central,
el cual cambia del estado Fe3+ al estado Fe2+ al aceptar un electrn. Cuando el
electrn es donado a otro componente, el tomo de hierro recupera el estado
Fe3+ inicial. La Q-citocromo c oxidorreductasa transporta los electrones al cito-
cromo c, el cual a su vez los transfiere a la citocromo c oxidasa (Complejo IV),
un complejo que contiene dos citocromos (citocromo a y citocromo a3), ambos
contienen tomos de cobre (dos CuA y un CuB, respectivamente). Durante la
transferencia de electrones, los tomos de cobre ciclan entre los estados Cu2+
y Cu+. Al final, la citocromo c oxidasa transporta cuatro electrones al oxgeno
molecular para formar dos molculas de agua.

Formacin de un El cambio en el potencial redox a lo largo de la cadena es una medida del cam-
gradiente de protones bio en la energa libre en cada paso. En los pasos que incluyen a la NADH-Q
oxidorreductasa, la Q-citocromo c oxidorreductasa y la citocromo c oxidasa,
el cambio en la energa libre es suficientemente grande como para bombear
protones a travs de la membrana mitocondrial interna, desde la matriz mito-
condrial hacia el espacio intermembrana, para crear un gradiente de protones.
Por tanto, cada uno de estos complejos es una bomba de H+ impulsada por el
transporte de electrones.

Transporte de electrones El FADH2 es reoxidado a FAD al donar dos electrones a la succinato-Q reducta-
desde el FADH2 sa (Complejo II), un complejo proteico que contiene centros FeS. ste trans-
316 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA

fiere los electrones a la ubiquinona, en la va principal de la cadena de

transporte de electrones, donde su transporte posterior lleva a la formacin
de un gradiente de protones y a la sntesis de ATP. No obstante, la succinato-Q
reductasa no bombea por s misma los H+.

Inhibidores del La rotenona y el amital inhiben el transporte de electrones a nivel de la NADH-

transporte de electrones Q oxidorreductasa, la antimicina A inhibe a la Q-citocromo c oxidorreductasa,
y el cianuro a (CN), la azida (N3) y el monxido de carbono (CO) inhiben a la
citocromo c oxidasa.

Fosforilacin oxidativa La fosforilacin oxidativa es el proceso de sntesis de ATP acoplado a la oxida-

cin del NADH y el FADH2 oxidacin que ocurre durante el transporte de elec-
trones a travs de la cadena respiratoria. Esto tiene lugar por un mecanismo
extraordinario conocido como la hiptesis quimiosmtica. La energa liberada
por el transporte de electrones se usa para bombear iones H+ fuera de la mito-
condria y crear as un gradiente electroqumico de protones (H+). Los protones
fluyen de regreso hacia la mitocondria a travs de la ATP sintasa localizada en
la membrana mitocondrial interna, movimiento que impulsa la sntesis de ATP.

sintasa como un
ATP La ATP sintasa se localiza en la membrana mitocondrial interna. Consiste en dos
motor rotatorio componentes mayores, la F1 ATPasa unida al componente F0 (factor de acopla-
miento 0). Por lo que la ATP sintasa tambin se conoce como la F0F1 ATPasa. En
las mitocondrias, este complejo usa la energa liberada por el trasporte de elec-
trones para dirigir la sntesis de ATP. La porcin F1 tiene una estructura de subu-
nidades 33, mientras que F0 consiste en un anillo de 10 a 14 subunidades c.
Durante la sntesis de ATP, los protones fluyen a travs de un canal situado entre
las subunidades y el anillo c, lo que provoca que el anillo c rote. La rotacin
del anillo c hace girar la subunidad de la F1 dentro de un anillo formado por
las subunidades y . Los cambios conformacionales en las subunidades
llevan a la sntesis de ATP.

Flujo de ATP y ADP a El ATP abandona la matriz mitocondrial y el ADP ingresa a travs de una prote-
travs de la membrana na el translocador de ATP-ADP o tambin llamado de adenn nucletidos que se
mitocondrial interna localiza en la membrana mitocondrial interna; por donde sale un ATP por cada
ADP que ingresa. Del mismo modo, el Pi ingresa en intercambio por un OH que
sale a travs de la protena transportadora de fosfato que tambin se locali-
za en la membrana mitocondrial interna. Estas dos protenas de transporte se
asocian con la ATP sintasa para formar el sintasoma de ATP.

Produccin de ATP Se sintetizan alrededor de 2.5 molculas de ATP por cada NADH oxidado, y se
sintetiza casi 1.5 ATP por cada FADH2 oxidado.

Acoplamiento y control De manera habitual, el transporte de electrones se acopla en forma estrecha a

respiratorio la sntesis de ATP; los electrones no fluyen a travs de la cadena de transporte
de electrones hacia el oxgeno a menos que el ADP sea fosforilado de manera
simultnea a ATP. Si hay ADP disponible, se produce el transporte de electrones
y se sintetiza ATP; a medida que la concentracin de ADP disminuye, el trasporte
de electrones decae. Este proceso, llamado control respiratorio, asegura que
los electrones fluyan slo cuando se requiera la sntesis de ATP.

Desacoplantes Algunas sustancias qumicas (p. ej., 2,4-dinitrofenol; DNP) son agentes que de-
sacoplan; stos permiten que el transporte de electrones avance sin que haya
sntesis de ATP. Estas sustancias desacoplan a las mitocondrias al transportar
iones H+ a travs de la membrana mitocondrial interna y as disipan el gra-
diente de protones. La energa derivada del transporte de electrones desaco-
plado se libera como calor. El desacoplamiento tambin se produce de forma
natural en algunos tejidos (p. ej., las mitocondrias del tejido adiposo pardo se
desacoplan a travs de una protena llamada termogenina). La produccin
 L2TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACIN OXIDATIVA 317

resultante de calor (termognesis) por el tejido adiposo sirve para proteger a

los tejidos sensibles del cuerpo en los animales recin nacidos y para mantener
la temperatura corporal durante la hibernacin.

Reoxidacin del NADH El NADH citoslico no puede cruzar la membrana mitocondrial interna e ingre-
citoslico sar en las mitocondrias para ser reoxidado. Sin embargo, puede reoxidarse a
travs de la lanzadera del glicerol 3-fosfato. La glicerol 3-fosfato deshidroge-
nasa citoslica oxida el NADH y reduce a la dihidroxiacetona fosfato a glicerol
3-fosfato. El glicerol 3-fosfato ingresa en la mitocondria, donde es convertido
en dihidroxiacetona fosfato por la glicerol 3-fosfato deshidrogenasa mitocon-
drial (una enzima que une FAD). La dihidroxiacetona fosfato se difunde de re-
greso otra vez hacia el citosol. El FADH2 producido por la enzima es reoxidado
por transferencia de sus electrones a la cadena de transporte de electrones.
Como los dems electrones que ingresan en la cadena de transporte de elec-
trones desde FADH2, slo se sintetizan alrededor de dos ATP por molcula de NADH
citoslico. En el corazn y el hgado, el NADH citoslico puede ser reoxidado a
travs de la lanzadera de malato-aspartato. En el citosol, el oxalacetato es redu-
cido a malato por el NADH e ingresa en la mitocondria a travs del transportador
de malato--cetoglutarato. En la matriz, el malato es reoxidado a oxalacetato a
expensas del NAD+ el que se convierte en NADH, lo que resulta en una transferen-
cia neta de electrones desde el NADH citoslico al NADH de la matriz. El oxalace-
tato se convierte en aspartato por transaminacin, abandona la mitocondria y
es reconvertido en oxalacetato en el citosol, otra vez por transaminacin.

Temas relacionados (J3) Gluclisis

(L1) Ciclo del cido ctrico
(L3) Fotosntesis

Descripcin NADH + H+ + O2 NAD+ + H2O

En eucariotas, el transporte de electrones y la fosfori-
lacin oxidativa ocurren en la membrana interna de la
mitocondria. Estos procesos reoxidan el NADH y el FADH2
que se originan en el ciclo del cido ctrico (localizado en
la matriz mitocondrial; seccin L1), la gluclisis (locali-
zada en el citoplasma; seccin J3) y en la oxidacin de
los cidos grasos (localizada en la matriz mitocondrial;
seccin K2) y atrapan la energa liberada como ATP. En
procariotas, los componentes del transporte de electro-
nes y la fosforilacin oxidativa se localizan en la mem-
brana plasmtica (seccin A1). La fosforilacin oxidativa
es la fuente principal de ATP de las clulas.
Potencial redox
La oxidacin de una molcula incluye la prdida de
electrones. La reduccin de una molcula incluye la
ganancia de electrones. Como los electrones no se crean
ni destruyen en una reaccin qumica, si una molcula
se oxida, otra debe reducirse (es decir, es una reaccin
de oxidacin-reduccin). Por lo tanto, por definicin,
las reacciones de oxidacin-reduccin incluyen la trans-
ferencia de electrones. En la reaccin de oxidacin-
reduccin:
Cuando el NADH se oxida a NAD+, pierde electrones. Cuan-
do el oxgeno molecular es reducido a H2O, gana elec-
trones.
El potencial de oxidacin-reduccin, E (o potencial
redox), es una medida de la afinidad de una sustancia
por los electrones y se mide en relacin con el hidr-
geno. Un potencial redox positivo significa que la
sustancia tiene una afinidad ms alta por los electro-
nes que el hidrgeno y de esta manera aceptar elec-
trones de ste. Una sustancia con un potencial redox
negativo tiene una afinidad por los electrones ms baja
que el hidrgeno y donar electrones al H+ para formar
hidrgeno. En el ejemplo anterior, el NADH es un poten-
te agente reductor con un potencial redox negativo y
tiene tendencia a donar electrones. El oxgeno es un
agente de oxidacin poderoso con un potencial redox
positivo y tiene tendencia a aceptar electrones.
En los sistemas biolgicos, el potencial redox estndar
de una sustancia (E0) se mide bajo condiciones estndar,
a un pH de 7, y se expresa en voltios. En una reaccin de
oxidacin-reduccin, donde se produce la transferencia
de electrones, el cambio en el voltaje total de la reaccin
318 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA
(cambio en el potencial elctrico, E) es la suma de los
cambios de voltaje de los pasos de oxidacin-reduccin
individuales. El cambio en la energa libre estndar de
una reaccin a un pH de 7, G 0, puede calcularse con
facilidad a partir del cambio en el potencial redox E0
de los sustratos y los productos:
G 0 = nF E0
donde n es el nmero de electrones transferidos, E0 est
en voltios (V), G 0 est en caloras por mol (kcal mol1) y
F es una constante llamada Faraday (23.06 kcal V1 mol1).
Ntese que una reaccin con una E0 positiva tiene una
G 0 negativa (es decir, es exergnica).
Como en la siguiente reaccin:
NADH + H+ + O2 NAD+ + H2O
E0 = 11.14 V
G = 52.6 kcal mol
0 1
Transporte de electrones desde el NADH
Si se compara la energtica de la oxidacin de NADH:
NADH + H+ + O2
NAD+ + H2O G 0 = 52.6 kcal mol1
y la sntesis de ATP:
ADP + Pi + H+ ATP + H2O G 0 = 17.3 kcal mol1
queda claro que la oxidacin del NADH libera suficiente
energa para producir la sntesis de numerosas molcu-
las de ATP. Sin embargo, la oxidacin de NADH y la sntesis
de ATP no ocurren en un solo paso. Los electrones no se
transfieren desde el NADH al oxgeno de manera directa.
En su lugar, los electrones se transfieren desde el NADH
al oxgeno a lo largo de una cadena de acarreadores de
electrones, que de manera grupal se denomina cade-
na de transporte de electrones (tambin llamada ca-
dena respiratoria).
La mayora de los componentes proteicos de la cadena
de transporte de electrones existen como cuatro grandes
complejos proteicos embebidos en la membrana mi-
tocondrial interna y que se denominan:
z NADH-Q oxidorreductasa (Complejo I)
z Succinato-Q reductasa (Complejo II)
FADH2
(avoprotenas)
NADH-Q
NADH oxidorreductasa
H+
Sitios de bombeo de H+
Figura L2-1. Descripcin de la cadena de transporte de electrones (cadena respiratoria).
z Q-citocromo c oxidorreductasa (Complejo III)
z Citocromo c oxidasa (Complejo IV)
Los electrones fluyen desde NADH al oxgeno a travs de
tres de estos complejos, como se muestra en la figura
L2-1. Cada complejo contiene varios transportadores de
electrones (vase ms adelante) que trabajan en forma
secuencial para transportar los electrones a lo largo de
la cadena. Dos transportadores de electrones pequeos
tambin son necesarios para enlazarse a estos grandes
complejos: la ubiquinona, la cual tambin se denomina
coenzima Q (y se abrevia Q), y el citocromo c (figura
L2-1).
El flujo de electrones desde el NADH a lo largo de la cadena
respiratoria puede resumirse como sigue:
1. NADH-Q oxidorreductasa (Complejo I)
La NADH-Q oxidorreductasa (Complejo I) es un com-
plejo masivo de cuando menos 46 protenas. Se une al
NADH y lo reoxida a NAD+, accin durante la cual los dos
electrones se transfieren desde el NADH al grupo prost-
tico llamado FMN (figura L2-2) para producir FMNH2 (vase
la seccin D1 para revisar la estructura del FMN). Cada
electrn es aceptado junto con un ion hidrgeno, H+, de
manera que en total se aceptan dos electrones y dos H+.
Luego los electrones se transfieren, dentro del Complejo
I, a un centro de hierro-azufre (FeS) que se encuentra
en las protenas fierro-azufre (tambin denominadas
protenas de hierro no hemo). Existen varios centros
FeS, pero en cada caso los tomos de hierro estn coor-
dinados con tomos de azufre inorgnico. Dentro de un
centro FeS, un electrn es transportado por el tomo de
hierro, el cual, al aceptar el electrn, cambia del estado
Fe3+ (frrico) al Fe2+ (ferroso) (figura L2-2). A medida que
el electrn se pasa a otro transportador de electrones, el
tomo de hierro del centro FeS cambia otra vez al estado
Fe3+.
2. Ubiquinona
Los electrones de los centros FeS del Complejo I se pasan
a la ubiquinona (Q), una pequea molcula liposoluble
de la membrana mitocondrial interna. Esta molcula
puede actuar como un transportador de electrones al
aceptar hasta dos electrones y dos iones H+. Al hacerlo
as, la ubiquinona (Q) se convierte en ubiquinol (QH2).
Q-citocromo c Citocromo Oxidasa del
Q oxidorreductasa c citocromo c O2
H+ H+
 L2TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACIN OXIDATIVA 319
Complejo II
Succinato-Q reductasa

FADH2 FAD

Fe3+S Fe2+S

Complejo I NADH-Q Complejo III Complejo IV

oxidorreductasa Q-citocromo c oxidorreductasa Citocromo c oxidasa
cyt.c cyt.a cyt.a3
NADH FMN Fe2+S Q Fe3+ Fe2+ Fe3+ H2O
cyt.b FeS cyt.c1 Cu+ Cu2+
NAD+ FMNH2 Fe3+S QH2 cyt.c cyt.a cyt.a3 1_
2O2
Fe2+ Fe3+ Fe2+
Cu2+ Cu+

H+ H+ H+

Figura L2-2. Detalles del transporte de electrones.

3. Q-citocromo c oxidorreductasa (Complejo III)
Cuando el ubiquinol (QH2) dona sus dos electrones al
siguiente transportador de la cadena, la Q-citocromo c
oxidorreductasa (Complejo III), tambin se liberan los
iones H+. Este complejo (figura L2-2) contiene dos tipos
de citocromos (citocromo b y citocromo c1), as como
una protena con FeS.
Un citocromo es una protena con un grupo hemo
unido que contiene un tomo de hierro (seccin M4,
figura M4-1). Diferentes citocromos tienen grupos hemo
distintos, pero todos los citocromos poseen la capaci-
dad para actuar como transportadores de electrones.
Cuando el electrn es aceptado, el tomo de hierro del
grupo hemo cambia del estado Fe3+ (frrico) al estado
Fe2+ (ferroso). El citocromo b tiene dos hemos llamados
hemo bL (L por baja afinidad) y hemo bH (H por alta afi-
nidad). El citocromo c1 tiene un solo hemo.
La protena con fierro-azufre tiene dos iones hierro y
dos tomos de azufre inorgnico en un centro de Rieske
2Fe2S (as nombrado en honor a John Rieske, su des-
cubridor) con un tomo de hierro coordinado con dos
residuos de cistena y un tomo de hierro coordinado
con dos residuos de histidina (figura L2-3).
La figura L2-2 muestra el paso de electrones desde el
ubiquinol (QH2) a travs del citocromo b, y los compo-
nentes FeS y citocromo c1 del complejo de la Q-cito-
cromo c oxidorreductasa al siguiente transportador de
electrones, el citocromo c.
Como el ubiquinol es un transportador de dos electro-
nes, en tanto que los citocromos son transportadores
de un electrn, la va de la transferencia de electro-
nes dentro del complejo de la Q-citocromo c oxidorre-
ductasa es complicada. El proceso involucrado, para el
acoplamiento de la transferencia de electrones desde Q
al citocromo c y el transporte de protones a travs de la
membrana, se llama ciclo Q (figura L2-4):
z Dos molculas de QH2 unidas una despus de la otra
al complejo de la Q-citocromo c oxidorreductasa.

His

Cys NH
S S N
Fe Fe
S S N
NH
Cys

His

Figura L2-3. Centro de erro-azufre de Rieske en el que se muestran

dos tomos de hierro, uno coordinado con dos residuos de cistena y
uno coordinado con dos residuos de histidina.
320 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA

z La primera QH2 se une a un sitio del Complejo III lla-
mado sitio Qo (figura L2-4a). ste cede dos electrones y
dos iones H+ (los cuales son liberados hacia el espacio
intermembranal, es decir, hacia aquel situado entre las
dos membranas de la mitocondria). Se dona un elec-
trn hacia el centro de Rieske 2Fe2S y luego hacia el
citocromo c1 para hacerlo finalmente al citocromo c
(el cual se reduce). El otro electrn fluye a travs de
los dos grupos hemo del citocromo b (primero bL y
luego bH) y ms tarde a la otra Q unida al Complejo
III en un segundo sitio llamado sitio Qi (figura L2-4a).
Cuando recibe el electrn, esta molcula Q se con-
vierte en un radical anin de semiquinona (Q).
z El segundo QH2 tambin se une al sitio Qo y cede
dos electrones y dos iones H+ (los cuales se liberan
hacia el espacio intermembranal). Un electrn fluye
a travs del centro de Rieske y el citocromo c1 hacia
otra molcula de citocromo c, a la que reduce (figura
L2-4b). El segundo electrn fluye a travs del cito-
cromo b (primero bL y luego bH) y luego hacia Q en
el sitio Qi, el cual acepta dos protones (desde la matriz
mitocondrial) para formar QH2.
z Por lo tanto, en general, dos molculas de QH2 son
oxidadas a dos molculas de Q y una molcula de Q
es reducida a QH2. As, el resultado neto es que un
QH2 es convertido en Q. De manera adicional, dos
molculas de citocromo c reciben cada una un elec-
trn y son reducidas, cuatro protones se liberan por
el lado citoplsmico de la membrana y dos protones
son tomados desde la matriz mitocondrial.
4. Citocromo c
El citocromo c es una protena perifrica de la membrana
que se halla dbilmente unida a la superficie externa de
la membrana mitocondrial interna. Se une al complejo
de la Q-citocromo c oxidorreductasa y acepta un elec-
trn a travs de una transicin de Fe+3 a Fe+2. Luego se
une al complejo de la citocromo c oxidasa (Complejo IV)
y dona el electrn, con el tomo de hierro del hemo del
citocromo c que se revierte al estado Fe+3 (figura L2-2).
5. Oxidasa de citocromo c (Complejo IV)
La oxidasa del citocromo c (Complejo IV) contiene dos
citocromos (citocromo a y a3). El citocromo a contiene

a)
cyt.c
2H+ Espacio
intermembranal
e FeS c1
QH2
Qo
e
Q bL
Membrana
mitocondrial
interna
Q bH
Qi
Qt

Complejo III Matriz

b)
cyt.c
2H+ Espacio
intermembranal
e FeS c1
QH2
Qo
e
Q bL
Membrana
mitocondrial
interna
bH
Qt
Qi
QH2

Complejo III Matriz

Figura L2-4. El ciclo Q. a) En la primera fase, dos electrones de un

QH2 unido en el sitio Qo son transferidos, uno al citocromo c y el otro a
una molcula de Q unida al sitio Qi
QBSB
GPSNBS
MB
TFNJRVJOPOB
2t. La
recientemente formada Q se disocia del sitio Qo. b) Un segundo QH2 se
une al sitio Qo y dona dos electrones, uno a una segunda molcula de
citocromo c
Z
FM
PUSP
QBSB
SFEVDJS
MB
TFNJRVJOPOB
2t a QH2, aceptando
dos protones de la matriz en el proceso.
 L2TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACIN OXIDATIVA 321

dos tomos de cobre, CuA, y el citocromo a3 est unido
con un tomo de cobre diferente, CuB. Durante la trans-
ferencia de electrones, los tomos de hierro de los cito-
cromos ciclan entre los estados Fe3+ y Fe2+, mientras los
tomos de cobre ciclan entre los estados Cu2+ y Cu+. La
reaccin de la citocromo c oxidasa es compleja; trans-
fiere cuatro electrones desde cuatro molculas de cito-
cromo c y cuatro iones H+ hacia el oxgeno molecular
para formar dos molculas de H2O:
citocromo c oxidasa
4 cyt. c (Fe2+) + 4 H+ + O2 4 cyt. c (Fe3+) + 2 H2O
Formacin de un gradiente de H+
Todos los transportadores de electrones de la cadena
de transporte de electrones interactan de acuerdo
con sus potenciales redox. Cada vez que se produce
la transferencia de un electrn, el transportador que
lo acepta tiene una afinidad ms alta por los electro-
nes que el transportador donante. Por eso, hay un flujo
neto de electrones desde el NADH (potencial redox ms
negativo, menos afinidad por los electrones) al oxgeno
(potencial redox ms positivo, afinidad ms alta por los
electrones). Esto asegura un flujo unidireccional de
los electrones. Sin embargo, ntese que cada citocromo,
cada centro FeS y cada tomo de cobre pueden trans-
portar slo un electrn por cada dos electrones dona-
dos por el NADH. As tambin, cada molcula de oxgeno
(O2) necesita aceptar cuatro electrones para reducir-
se en una molcula de H2O. Los diversos componentes se
ordenan de tal manera que permiten que sus diferen-
tes propiedades para aceptar los electrones trabajen de
manera coordinada.
El cambio en el potencial redox a lo largo de la cadena
es una medida del cambio en la energa libre que ocurre
(vase antes). Los potenciales caen (es decir, se hacen
ms positivos) a travs de la cadena, pero sobre todo
en los tres pasos ms largos que corresponden a los de
los tres complejos principales de protenas: Complejos
I, III y IV. El gran cambio de energa libre en cada uno
de estos tres pasos, y slo en estos tres pasos, alcanza la
magnitud suficiente para bombear los iones H+ desde
la matriz mitocondrial a travs de la membrana mito-
condrial interna y hacia el espacio intermembrana
(figura L2-5).
Por ello, cada uno de estos tres complejos (Complejo I,
III y IV) es una bomba de H+ dirigida por el transporte
de electrones (figuras L2-1 y L2-2). Por lo tanto, el trans-
porte de electrones a lo largo de la cadena desde el NADH
libera energa que se usa para crear un gradiente de H+.
Transporte de electrones desde el FADH2
La succinato deshidrogenasa cataliza la oxidacin del
succinato a fumarato en el ciclo del cido ctrico (seccin
L1). La succinato deshidrogenasa contiene FAD unido y
es reducido a FADH2 durante la reaccin. La reoxidacin
del FADH2 ocurre a travs de la succinato-Q reductasa
(Complejo II), una protena integral de la membrana
mitocondrial interna. La succinato deshidrogenasa es
parte de este complejo, pero tambin contiene centros
FeS. Durante la reoxidacin del FADH2, los dos electro-
nes pasan desde el FADH2 a los centros FeS y luego son
pasados a la ubiquinona (Q; figura L2-2). stos luego
ingresan a la cadena de transporte de electrones prin-
cipal y provocan que los iones H+ se bombeen fuera de la
mitocondria para la oxidacin del NADH. No obstante,
la succinato-Q reductasa por s misma no es una bomba
de H+ debido a que el cambio en la energa libre de la
reaccin general es demasiado pequeo. El FADH2 de
otras flavoprotenas, como el de la glicerol 3-fosfato
deshidrogenasa mitocondrial en la lanzadera de glicerol

MEMBRANA
MITOCONDRIAL
INTERNA
ESPACIO MATRIZ
INTERMEMBRANAL MITOCONDRIAL
+
+
+
transport
Electron

H+

+
[H+] alta + [H+] baja
ADP + Pi
H+
ATP
+
+

ATP
sintasa

Figura L2-5. Mecanismo de la fosforilacin oxidativa.

322 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA
3-fosfato (vase ms adelante) y la acil-CoA deshidroge-
nasa en la oxidacin de los cidos grasos (seccin K2),
tambin ceden sus electrones dentro de la cadena de
transporte de electrones a la ubiquinona.
Inhibidores del transporte de electrones
Se conocen varios inhibidores especficos de cada uno
de los transportadores de electrones, se usaron en los
primeros estudios para determinar el orden de los com-
ponentes de la cadena respiratoria. Por ejemplo:
z La rotenona y el amital inhiben el transporte de elec-
trones en la NADH-Q oxidorreductasa y as evitan la
oxidacin del NADH, pero en cambio la oxidacin del
FADH2 todava puede producirse ya que ste alimenta
la cadena con electrones a nivel de Q (figura L2-1) (es
decir, despus del punto de inhibicin).
z La antimicina A inhibe el transporte de electrones a
nivel del complejo de la Q-citocromo c oxidorreduc-
tasa.
z El cianuro (CN), la azida(N3) y el monxido de car-
bono (CO) inhiben a la citocromo c oxidasa.
Fosforilacin oxidativa
Fosforilacin oxidativa es el nombre que se le da a la
sntesis de ATP (fosforilacin) que se produce cuando
el NADH y el FADH2 son oxidados (de all oxidativa) por el
transporte de electrones a travs de la cadena respira-
toria. A diferencia de la fosforilacin a nivel de sustrato
(secciones J3 y L1), sta no incluye intermediarios qu-
micos fosforilados. En su lugar, en 1961, Peter Mitchell
propuso un mecanismo muy diferente, la hiptesis qui-
miosmtica. sta propone que la energa liberada por el
transporte de electrones se usa para crear un gradiente
de protones a travs de la membrana mitocondrial
interna, que entonces se usa para dirigir la sntesis de
ATP. As, el gradiente de protones se acopla al transporte
de electrones y a la sntesis de ATP, no a un intermedia-
rio qumico. La evidencia es abrumadora acerca de que
sta es en efecto la forma en que trabaja la fosforilacin
oxidativa. La sntesis de ATP la lleva a cabo una enzima
llamada ATP sintasa que se localiza en la membrana
mitocondrial interna (figura L2-5).
En resumen, el proceso es como sigue. El transporte de
electrones por la cadena respiratoria desde la oxidacin
del NADH determina que los H+ sean bombeados fuera
de la matriz mitocondrial, a travs de la membrana
mitocondrial interna, hacia el espacio intramembranal
(figura L2-5) por las tres bombas de H+: los Complejos I,
III y IV (vase antes). [Debido a que el FADH2 es reoxidado
a travs de la ubiquinona (figuras L2-1 y L2-2), su oxi-
dacin posterior determina que los iones H+ sean bom-
beados slo por los Complejos III y IV y de esta manera
la cantidad de ATP producido a partir de FADH2 es menor
que desde NADH.]
El cambio de energa libre en el transporte de un ion
con carga elctrica a travs de una membrana se rela-
ciona con su carga elctrica y con su concentracin. El
bombeo de los protones hacia fuera de la mitocondria
genera una concentracin ms alta de estos iones en el
espacio intramembranal y cambia el potencial elctrico,
por la conversin en positivo del lado de la membrana
mitocondrial interna que mira hacia el espacio intra-
membranal (figura L2-5). En consecuencia, se forma un
gradiente electroqumico de protones. Los protones
fluyen de regreso hacia la matriz mitocondrial a travs
de la ATP sintasa, y dirige la sntesis de ATP. La ATP sintasa
es dirigida por la fuerza protn motriz, que es la suma
del gradiente de pH (es decir, el gradiente qumico de
los iones H+) y el potencial de membrana (es decir, el
potencial de carga elctrica a travs de la membrana
mitocondrial interna).
ATP sintasa como un motor rotatorio
La ATP sintasa puede verse como una proyeccin esfrica
desde la membrana interna (figura L2-6). Si las mitocon-
drias se someten a ruptura snica, se forman vesculas
submitocondriales en las cuales las esferas de la ATP sin-
tasa apuntan hacia fuera (figura L2-6). En 1960, Racker
mostr que las esferas pueden removerse y que aisladas
hidrolizan ATP, es decir, que las esferas tienen actividad
de ATPasa (llamada F1; figura L2-7). Las vesculas sub-
mitocondriales desprovistas de la F1, pueden todava
transportar electrones a lo largo de la cadena de trans-
porte de electrones, pero estn imposibilitadas para
sintetizar ATP. Estas vesculas submitocondriales sin F1
contienen la otra parte importante de la ATP sintasa, lla-
mada F0 (factor de acoplamiento 0), la cual est embe-
bida en la membrana mitocondrial interna (figura L2-7).
Como est compuesta por estas dos partes principales,
la ATP sintasa tambin se conoce como F0F1 ATPasa. El
complejo completo aprovecha la energa liberada por
el transporte de electrones para dirigir la sntesis de ATP,
mientras que sola, sin el acoplamiento al transporte de
electrones, el componente F1 hidroliza ATP.
La F1 ATPasa consiste de cinco tipos de protenas con
la siguiente proporcin: 3 , 3 , 1 , 1 , 1 . Las seis
subunidades y estn ordenadas de manera alternada
en un anillo, con un tallo central formado por las subu-
nidades y (figura L2-7). La F0 consiste de un anillo
de 10 a 14 subunidades c embebidas en la membrana
mitocondrial interna. sta contacta con una subunidad
a que se enlaza a dos subunidades b y a la nica subu-
nidad para formar una columna larga que se conecta a
la cabeza de la porcin F1 de la ATPasa (figura L2-7). La
estructura total de la F0F1 ATPasa es un motor molecular
extraordinario. Durante la sntesis de ATP, los protones
fluyen a travs de un canal creado en la interfaz entre la
subunidad a y las subunidades c, lo que determina que
el anillo de la subunidad c gire respecto a la subunidad
esttica a. Por lo tanto, el anillo c acta como la parte
mvil o rotor y la subunidad a como un estator. A
 L2TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACIN OXIDATIVA 323

Ruptura membranal
Membrana externa
Matriz
Membrana interna

Sonicacin

F1 ATPasa

Cresta

Mitocondria Vesculas submitocondriales

Figura L2-6. La ruptura snica (sonicacin) de la mitocondria produce

vesculas submitocondriales.

medida que el anillo de la subunidad c rota, hace girar el
tallo de la subunidad , el cual por lo tanto gira rpida-
mente dentro del anillo . El anillo no puede rotar
porque es mantenido en su lugar por el brazo de las dos
subunidades b y la subunidad (figura L2-7).
Las tres subunidades del anillo pueden unir ADP y
fosfato inorgnico. A medida que la subunidad rota
dentro del anillo , la energa mecnica se usa para
dirigir la sntesis de ATP; se sintetizan tres molculas de
ATP por cada 360 de rotacin de la subunidad (lo cual
equivale a ms de 1 000 molculas por segundo!).
Cmo se hace el ATP? Experimentos de intercambio
isotpico mostraron que el ATP es formado por la ATP
sintasa incluso en ausencia de la fuerza protn motriz,
pero el ATP no abandona a la enzima a menos que los
protones fluyan a travs de ella. Paul Boyer propuso
el mecanismo de unin y cambio, el cual explica esta
observacin. En esencia, a medida que la subunidad
rota, ese giro se transmite hacia las tres subunidades ,
la conformacin de la protena en los sitios de unin de
nucletidos de cada una de las subunidades cambia
y pasa a travs de tres estados diferentes, los cuales son
unin de ADP y Pi, sntesis de ATP y luego liberacin del
ATP. De este modo, la energa mecnica de la rotacin
de la subunidad dirige la interconversin de estos tres
diferentes estados en los cuales el ATP no slo es sinteti-
zado sino que tambin es liberado de la enzima.
Flujo de ATP y ADP a travs de la
membrana mitocondrial interna
Las grandes cantidades de ATP sintetizado dentro de las
mitocondrias necesitan salir hacia el citoplasma para
ser usadas en numerosas reacciones celulares y el ADP
necesita ingresar en la matriz mitocondrial para ser fos-
forilado. Pese a ello, ninguna molcula puede difundirse
a travs de la membrana. Su paso a travs de esta barrera
es posible gracias a una muy abundante protena de
transporte, la translocasa de ATP-ADP, que est situada
en la membrana mitocondrial interna. sta puede unir
ATP o ADP y mirar de manera alternativa hacia el lado

ATP-asa F1

b2

a F0

Figura L2-7. Representacin esquemtica del complejo de la ATP sintasa.

324 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA
matricial o citoplsmico de la membrana interna; une
un ADP en el lado citoplsmico y luego lo libera en el
lado matricial, donde une un ATP y lo libera en el lado
citoplsmico. Resulta crucial que por cada ATP que salga
ingrese un ADP y viceversa.
El otro componente requerido para la sntesis del ATP
dentro de la matriz es por supuesto el Pi. ste ingresa por
medio de un transportador de fosfato en intercambio
por un OH que sale. En combinacin, la translocasa de
ATP-ADP y el transportador de fosfato permiten que un
ADP y un Pi ingresen en intercambio por un ATP y un OH
que abandonan la mitocondria (al costo de un H+ que
ingresa). Estas dos protenas transportadoras en asocia-
cin con la ATP sintasa forman un gran complejo llamado
el sintasoma de ATP.
Produccin de ATP
El nmero exacto de molculas de ATP generadas por la
oxidacin del NADH y FADH2 ha sido sujeto de debate en
aos recientes debido a que su clculo depende de la
estequiometra del bombeo de protones.
Datos actuales sugieren que la NADH-Q oxidorreductasa,
la Q-citocromo c oxidorreductasa y la citocromo c oxi-
dasa bombean a travs de la membrana mitocondrial
interna y fuera de la matriz 4, 2 y 4 electrones, respec-
tivamente. Alrededor de tres protones que fluyen a tra-
vs de la ATP sintasa son suficientes para generar una
molcula de ATP y es necesario un protn adicional para
transportar el ATP desde la matriz mitocondrial hacia el
citoplasma (vase antes). De esta manera, una molcula
de NADH reoxidada por la cadena de transporte de elec-
trones determina que sta conduzca alrededor de 10
protones a travs de la membrana mitocondrial interna
y se requieren alrededor de cuatro protones para sinteti-
zar una molcula de ATP; en otras palabras, se sintetizan
cerca de 2.5 molculas de ATP (10/4) por cada NADH reoxi-
dado. En el caso de la oxidacin del FADH2, el producto es
de alrededor de 1.5 molculas de ATP (6/4).
Acoplamiento y control respiratorio
De manera habitual, el transporte de electrones est
estrechamente acoplado a la sntesis del ATP (es decir,
que los electrones no fluyen a travs de la cadena de
transporte de electrones hacia el oxgeno a menos que
el ADP sea simultneamente fosforilado a ATP). Con to-
da claridad, tambin se deduce que el ATP no se sinte-
tiza a menos que ocurra el transporte de electrones para
proveer el gradiente de protones. Entonces, la fosforila-
cin oxidativa necesita NADH o FADH2, oxgeno, ADP y fos-
fato inorgnico. La tasa real de fosforilacin oxidativa
depende de la disponibilidad de ADP. Si se aade ADP a las
mitocondrias, la tasa de consumo de oxgeno aumenta a
medida que el flujo de electrones recorre la cadena y por
lo tanto la tasa de utilizacin de oxgeno cae cuando todo
el ADP ha sido fosforilado a ATP, un proceso denominado
control respiratorio. Este mecanismo asegura que el
flujo de electrones a lo largo de la cadena slo se pro-
duce cuando se necesita sintetizar ATP. Si el nivel de
ATP es alto y el de ADP es bajo, no se produce transporte
de electrones, la acumulacin de NADH y FADH2, as como
el exceso de citrato inhiben el ciclo del cido ctrico (sec-
cin L1) y la gluclisis (seccin J3).
Desacoplantes
Algunas sustancias qumicas, como el 2,4-dinitrofenol
(DNP), actan como agentes desacoplantes, esto es,
cuando se aaden a las clulas, detienen la sntesis de
ATP mientras el transporte de electrones contina y por
lo tanto se consume oxgeno. La razn es que el DNP y
otros agentes desacoplantes son pequeas molculas
liposolubles que se unen a los H+ y los transportan a
travs de las membranas (es decir, son ionforos para
los H+). El transporte de electrones tiene lugar y bombea
hacia fuera los protones a travs de la membrana mito-
condrial interna, pero el DNP en la misma membrana
transporta los H+ de regreso hacia la mitocondria, lo que
evita la formacin de un gradiente de protones. Como
no se forma un gradiente de protones, es imposible que
se produzca ATP por fosforilacin oxidativa. En su lugar,
la energa derivada del transporte de electrones se libera
como calor.
La produccin de calor por desacoplamiento se llama
termognesis. Es importante en ciertas situaciones bio-
lgicas. Por ejemplo, el desacoplamiento se presenta de
manera natural en el tejido adiposo pardo. Este tejido
es rico en mitocondrias, cuya membrana mitocondrial
interna contiene una protena llamada termogenina (o
protena desacoplante). La termogenina permite que
los H+ fluyan de regreso hacia las mitocondrias sin tener
que hacerlo a travs de la ATP sintasa y de ese modo
desacopla el transporte de electrones y la fosforilacin
oxidativa, lo que genera calor. La importancia de este
fenmeno natural es que el tejido adiposo pardo se
encuentra en reas corporales sensibles de algunos ani-
males neonatos (incluidos los seres humanos), donde
la produccin de calor suministra proteccin frente a
un ambiente fro. Igualmente, la termognesis del tejido
adiposo pardo desempea un papel en el manteni-
miento de la temperatura corporal en los animales que
hibernan.
Reoxidacin del NADH citoslico
La membrana mitocondrial interna es impermeable al
NADH. En consecuencia, el NADH que se produce en el
citoplasma durante la gluclisis debe reoxidarse a travs
de una lanzadera de membrana, una combinacin de
reacciones enzimticas que superan la impermeabili-
dad de esta barrera. La figura L2-8 muestra la lanzadera
del glicerol 3-fosfato. La dihidroxiacetona fosfato del
citosol es reducida a glicerol 3-fosfato y el NADH oxidado
a NAD+ por accin de la glicerol 3-fosfato deshidrogenasa
 L2TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACIN OXIDATIVA 325

CITOSOL MEMBRANA MITOCONDRIAL

INTERNA

Dihidroxiacetona Dihidroxiacetona
fosfato fosfato

NADH + H+
Glicerol E-FADH2 Glicerol
3-fosfato 3-fosfato
deshidrogenasa NAD+ deshidrogenasa
E-FAD
Glicerol Glicerol
3-fosfato 3-fosfato

Figura L2-8. Lanzadera de glicerol 3-fosfato.

citoslica. El glicerol 3-fosfato se difunde a travs de
la membrana mitocondrial interna, donde la glicerol
3-fosfato deshidrogenasa mitocondrial (una protena
transmembranal de la membrana mitocondrial interna)
lo vuelve a convertir en dihidroxiacetona fosfato. Acto
seguido, la dihidroxiacetona fosfato se difunde de regre-
so hacia el citosol. La deshidrogenasa de glicerol 3-fos-
fato mitocondrial no usa NAD+ y en su lugar recurre al
FAD. El FADH2 unido a la enzima (E-FADH2) es reoxidado
por transferencia de sus electrones a la ubiquinona en
la misma membrana mitocondrial interna (vase antes).
Ntese que la lanzadera no permite que el NADH citopls-
mico ingrese en la mitocondria, pero es una estrategia
que permite transportar de manera efectiva los dos elec-
trones del NADH a la mitocondria y alimenta con stos
la cadena de transporte de electrones. Como en reali-
dad los electrones del NADH citoplsmico ingresan en la
cadena de transporte de electrones desde el FADH2, slo
se sintetiza alrededor de 1.5 en lugar de los cerca de 2.5
ATP que produce cada NADH que se producen dentro de la
mitocondria a partir del ciclo del cido ctrico (seccin
L1) y de la oxidacin de los cidos grasos (seccin K2).
Una lanzadera similar, la lanzadera de malato-aspar-
tato, acta en el corazn y el hgado (figura L2-9). El
oxalacetato del citosol se convierte en malato por
accin de la malato deshidrogenasa citoplsmica, en el
proceso reoxida el NADH a NAD+. El malato ingresa en la
mitocondria a travs del transportador de malato--
cetoglutarato localizado en la membrana mitocondrial
interna. En la matriz, el malato es reoxidado a oxala-
cetato por el NAD+ para formar NADH. El oxalacetato no
cruza con facilidad la membrana mitocondrial interna y
por ello es transaminado para formar aspartato, el cual
abandona la mitocondria y es reconvertido en oxalaceta-
to en el citosol, otra vez por transaminacin. El resul-
tado neto de este ciclo de reacciones es transferir los
electrones del NADH del citosol al NADH de la matriz mito-
condrial, el cual es reoxidado por la cadena de trans-
porte de electrones.

CITOSOL MEMBRANA MATRIZ

MITOCONDRIAL MITOCONDRIAL
INTERNA
Malato Malato
Transportador
de malato-
-cetoglutarato
NAD+ NAD+
Malato Malato
deshidrogenasa deshidrogenasa
NADH NADH

Oxalacetato Oxalacetato

-cetoglutarato -cetoglutarato
Aspartato Aspartato
aminotransferasa aminotransferasa
Glutamato Glutamato
Transportador
de glutamato-
aspartato
Aspartato Aspartato

Figura L2-9. La lanzadera de malato-aspartato.

SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA

L3Fotosntesis
Notas clave
Descripcin La fotosntesis usa la energa solar para sintetizar carbohidratos a partir de di-
xido de carbono y agua. En las reacciones dependientes de la luz (light reac-
tions), la energa luminosa dirige la sntesis de NADPH y ATP. En las reacciones
independientes de la luz (reacciones de fijacin de carbono; dark reactions), el
NADPH y el ATP se usan para sintetizar carbohidratos a partir de la fijacin de CO2
y H2O.
Localizacin En las plantas superiores (o de hojas verdes) y en las algas, la fotosntesis tiene
lugar en los cloroplastos. Las reacciones dependientes de la luz ocurren en las
membranas de los tilacoides y las reacciones independientes de la luz tienen
lugar en el estroma. En las bacterias fotosintticas, las reacciones luminosas tie-
nen lugar en la membrana plasmtica bacteriana o en invaginaciones de sta
(cromatforos).
Aprovechamiento de La luz solar es absorbida por molculas de clorofila, cada una de las cuales es
la luz en las plantas una magnesio porfirina. Pigmentos accesorios, como los carotenoides, absor-
superiores ben luz en otras longitudes de onda y de esa manera maximizan la absorcin de
la luz. Los pigmentos estn ordenados en fotosistemas, cada uno de los cuales
consiste en un complejo antena y un centro de reaccin fotosinttico. Un com-
plejo antena tiene varios cientos de molculas de clorofila y pigmentos acceso-
rios ensamblados juntos en la membrana tilacoidal. La absorcin de un fotn
por una molcula de clorofila eleva a un electrn a un orbital de energa ms
alto. La clorofila excitada puede pasar su energa extra a otra molcula de cloro-
fila del complejo por transferencia de un excitn. La energa es canalizada hacia
dos molculas de clorofila especiales en el centro de reaccin fotosinttico.
Fotosistemas I y II Las plantas de hojas verdes y las algas usan dos tipos de fotosistemas: el foto-
sistema I, con clorofila P700 en su centro de reaccin, y el fotosistema II, con
clorofila P680 en su centro de reaccin. Los dos fotosistemas se enlazan a una
cadena de transportadores de electrones. Cuando se disponen en el orden de
sus potenciales redox, los componentes forman el llamado esquema Z. La luz
excita al P680 del fotosistema II y lo lleva a un estado excitado P680*. El P680* ex-
citado pasa un electrn de alta energa a la feofitina (clorofila sin el centro de
magnesio) y se oxida a P680+. sta acepta un electrn del agua y regresa al esta-
do basal. En general, la remocin de cuatro electrones de dos molculas de agua
genera cuatro H+ y una molcula de O2. Los electrones de alta energa aceptados
por la feofitina se pasan en orden a la plastoquinona (Q), el complejo citocromo
bf (tambin llamado complejo del citocromo b6 f) y a la plastocianina. La luz
excita al P700 del fotosistema I a P700*. El P700* excitado pasa un electrn de
alta energa a la ferredoxina y sufre una oxidacin quedando como P700+. El
P700+ acepta un electrn procedente de la plastocianina y recupera el estado
basal. Para finalizar, dos electrones de dos molculas de ferredoxina reducida
se transfieren al NADP+ para formar NADPH.
Fotofosforilacin no El complejo del citocromo bf es una bomba de protones y, durante el transporte
cclica de electrones, bombea H+ desde el estroma hacia el espacio tilacoidal, lo que
genera un gradiente de H+. Los iones H+ tambin se liberan dentro del espacio
tilacoidal cuando el fotosistema II oxida agua para producir oxgeno, mientras
que los iones H+ usados para reducir NADP+ a NADPH son tomados del estroma.
Ambos efectos contribuyen a generar el gradiente de H+. El gradiente de pro-
tones dirige la sntesis de ATP a travs de una ATP sintasa que se localiza en la
 L3FOTOSNTESIS 327

membrana del tilacoide (fotofosforilacin). Como el transporte de electrones

incluye una disposicin lineal de los transportadores de electrones, el sistema
se llama fotofosforilacin no cclica.
Fotofosforilacin cclica Cuando hay poco NADP+ disponible para aceptar electrones, se usa una va al-
ternativa de transporte de electrones. Los electrones de alta energa donados
por el fotosistema I pasan a la ferredoxina, despus al complejo del citocromo
bf, luego a la plastocianina y por ltimo regresan a la P700 del fotosistema I.
El gradiente de protones resultante generado por el complejo del citocromo bf
dirige la sntesis del ATP (fotofosforilacin cclica), pero no se produce NADPH ni
tampoco O2.
Fotosntesis bacteriana Las cianobacterias utilizan dos fotosistemas como las plantas de hojas verdes.
La bacteria fotosinttica prpura, Rhodospirillum rubrum, slo tiene un foto-
sistema con un centro de reaccin fotosinttico. ste puede llevar a cabo el trans-
porte de electrones cclico y sintetizar ATP (fotofosforilacin cclica). De manera
alternativa, puede utilizarse un transporte de electrones no cclico que produce
NADH. El cido sulfhdrico (H2S) puede actuar como un donador de electrones, lo
que genera azufre (S). El gas hidrgeno (H2) y una variedad de compuestos org-
nicos tambin pueden usarse como donadores de electrones. Al no usar el agua
como donador de electrones no se produce oxgeno.
Reacciones Las reacciones que no dependen de la luz (reacciones de fijacin de carbono)
independientes de la luz usan el ATP y el NADPH producido por las reacciones luminosas para fijar dixido
de carbono y sintetizar los carbohidratos sacarosa y almidn. Las reacciones
forman un ciclo (llamado ciclo de Calvin), en el cual la enzima ribulosa bisfos-
fato carboxilasa/oxigenasa (rubisco), localizada en el estroma, condensa una
molcula de dixido de carbono con la ribulosa 1,5-bisfosfato para producir
dos molculas de 3-fosfoglicerato. Otras reacciones regeneran luego la ribulosa
1,5-bisfosfato. La fijacin de tres molculas de CO2 requiere seis NADPH y nueve
ATP y conduce a la produccin neta de una molcula de gliceraldehdo 3-fosfato.
Para la sntesis de sacarosa, el gliceraldehdo 3-fosfato sale hacia el citosol y es
convertido en fructosa 6-fosfato y glucosa 1-fosfato. Esta ltima es convertida
en UDP-glucosa, que reacciona con la fructosa 6-fosfato para formar sacarosa
6-fosfato. La hidrlisis de la sacarosa 6-fosfato produce sacarosa. El gliceralde-
hdo 3-fosfato procedente del ciclo de Calvin tambin se utiliza para sintetizar
glucosa 1-fosfato, la cual genera ADP-glucosa, CDP-glucosa o GDP-glucosa
como precursores para la sntesis de almidn.
Va C4 Cuando la concentracin de CO2 es baja, la rubisco puede agregar O2 a la ribu-
losa 1,5-bisfosfato (actividad de oxigenasa) en lugar del CO2 (actividad de car-
boxilasa) para producir 2-fosfoglicolato y 3-fosfoglicerato. El metabolismo del
fosfoglucolato libera CO2 y NH4+ y gasta energa. El consumo de O2 con liberacin
de CO2 se llama fotorrespiracin. Las plantas de climas calientes cierran sus es-
tomas para reducir la prdida de agua. Esto causa una cada en la concentracin
de CO2 en la hoja y favorece la fotorrespiracin. Para evitar este problema, estas
plantas llevan a cabo el ciclo de Calvin slo en las clulas de la vaina, que estn
protegidas del O2 del aire por las clulas del mesfilo. El CO2 es transportado
desde la va area de las clulas mesfilas hacia las clulas de la vaina mediante
su combinacin con tres molculas de carbono (C3) para producir cuatro mo-
lculas de carbono (C4). Esta va del C4 asegura una concentracin alta de CO2
para la fijacin del carbono por la rubisco en las clulas de la vaina.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas

(L2) Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa
(M4) Hemos y clorofilas
328 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA
Descripcin
La fotosntesis ocurre en las plantas superiores, algas y
bacterias fotosintticas. Su papel es atrapar la energa
solar y usarla para dirigir la sntesis de carbohidratos a
partir de dixido de carbono y agua. Si se usa (CH2O) para
representar a los carbohidratos, la reaccin general es:
Luz
H2O + CO2 (CH2O) + O2
Las reacciones de la fotosntesis ocurren en dos fases:
z Reacciones de la fase luminosa o dependientes de
la luz: las cuales usan la energa luminosa para sin-
tetizar NADPH y ATP.
z Reacciones de la fase oscura o independientes de la
luz: que usan NADPH y ATP para sintetizar carbohidra-
tos a partir de la fijacin de CO2. De hecho, el trmino
reacciones en la oscuridad es un nombre errneo;
estas reacciones de fijacin de carbonos deberan lla-
marse en realidad reacciones independientes de la luz.
Localizacin
En las plantas superiores y las algas, la fotosntesis tiene
lugar en los cloroplastos (seccin A2). En forma similar
a una mitocondria, un cloroplasto tiene una membrana
externa muy permeable y una membrana interna que
es impermeable a la mayora de las molculas y iones.
Dentro de cada cloroplasto est el estroma, que con-
tiene enzimas solubles (anlogas a las de la matriz de
una mitocondria). Sin embargo, en tanto que la membra-
na interna de una mitocondria contiene la cadena de
transporte de electrones y la ATP sintasa (seccin L2), en
un cloroplasto stas se localizan, junto a sistemas foto-
sintticos que absorben luz, membranas aplanadas api-
ladas dentro del estroma llamadas tilacoides (seccin
A2). Por lo tanto, los eventos primarios de atrapamiento
de la energa solar en la fotosntesis, las reacciones lumi-
nosas, se producen en las membranas de los tilacoides.
Las reacciones en la oscuridad tienen lugar en el estroma.
En las bacterias fotosintticas, las reacciones luminosas
se producen en la membrana plasmtica bacteriana, o
en invaginaciones de la misma llamadas cromatforos.
Aprovechamiento de la luz
en las plantas superiores
La luz solar es absorbida por molculas de clorofila. La
clorofila es una porfirina en la cual los tomos de nitr-
geno estn coordinados con un ion de magnesio (sec-
cin M4, figura M4-1) (es decir, es una magnesio porfi-
rina). Esto contrasta con un hemo, en el cual los tomos
de nitrgeno estn coordinados con un tomo de hierro
para formar una hierro porfirina (secciones L2 y M4).
Las plantas superiores contienen dos tipos de molculas
de clorofila, la clorofila a y la clorofila b, que difieren
ligeramente en su estructura y en la longitud de onda de
la luz que pueden absorber. Aunque la luz es atrapada
por las molculas de clorofila en forma directa, tambin
existen numerosos pigmentos accesorios que absorben
luz y pasan la energa de excitacin a las molculas de
clorofila. Por consiguiente, los carotenoides son pig-
mentos accesorios importantes en las plantas de hojas
verdes, mientras que las ficobilinas son pigmentos
accesorios de las bacterias fotosintticas. Estos pigmen-
tos absorben la luz a longitudes de onda diferentes que
las de la clorofila y por eso actan juntos para maximizar
la luz cosechada.
Cuando una molcula de clorofila es excitada por un
quantum de luz (un fotn), un electrn se excita y se
proyecta hacia un orbital de energa ms alto. La cloro-
fila excitada puede pasar su energa extra a la molcula
de clorofila vecina por transferencia del excitn (tam-
bin llamada transferencia de energa de resonancia) y
as regresar al estado de reposo o basal. En forma alter-
nativa, el electrn de alta energa puede donarse, por
lo que la clorofila acepta un electrn de baja energa de
otras fuentes.
La captura de la energa solar se produce en los foto-
sistemas. Cada fotosistema consiste en un complejo
de antena y en un centro de reaccin fotosinttico. El
complejo antena est compuesto de varios cientos de
molculas de clorofila y de pigmentos accesorios agru-
pados juntos en la membrana tilacoidal. Cuando una
molcula de clorofila en el complejo antena absorbe luz
y se excita, la energa se transfiere mediante un excitn,
de molcula en molcula, hasta que al final es canali-
zada hacia dos molculas de clorofila especiales en el
centro de reaccin fotosinttico. El centro de reaccin
pasa la energa como un electrn de alta energa a una
cadena de transportadores de electrones de la mem-
brana tilacoidal (vase ms adelante).
Fotosistemas I y II
Las plantas superiores y las algas usan dos tipos de foto-
sistemas llamados fotosistema I (PSI) y fotosistema II
(PSII). La clorofila del centro de reaccin del PSI tiene
una absorcin mxima a 700 nm y por eso recibe el
nombre de P700 (P por pigmento) y la clorofila del cen-
tro de reaccin del PSII presenta una absorcin mxima
a 680 nm y por eso recibe el nombre de P680.
Los dos fotosistemas estn unidos por otros transpor-
tadores de electrones, en particular al complejo de
citocromo bf. Cuando se ordenan de acuerdo con sus
potenciales redox (seccin L2), los diversos componen-
tes forman el llamado esquema Z (figura L3-1) debido
a que la forma general del diagrama redox se ve como
una Z.
La secuencia de reacciones producidas durante la absor-
cin de la luz (figura L3-1) es como sigue:
1. La luz es cosechada por el complejo santena por las
clorofilas del PSII y la energa se canaliza hacia el cen-
tro de reaccin en donde se localiza el P680.

P680*
Potencial
redox
(V)
Fotosistema
Luz II
P680
2H2O
Mn2+
4H+
+ O2
Figura L3-1. Esquema Z de la fotofosforilacin no cclica en las plantas de
hojas verdes. Ntese que las echas del diagrama representan la secuencia
de eventos durante la fotosntesis, como se describe en el texto, y no son
interconversiones metablicas.
2. El P680 excitado (P680*) emite un electrn de alta
energa que pasa a la plastoquinona (Q), una qui-
nona mvil de la membrana tilacoide que tiene una
estructura similar a la ubiquinona de la cadena trans-
portadora de electrones mitocondrial (seccin L2).
Esto deja a P680 como un catin P680+. La plastoqui-
nona se reduce al aceptar un total de dos electrones
y dos iones H+ para formar plastoquinol (QH2).
3. El P680+ extrae un electrn del agua, lo que lo devuelve
al estado basal. La remocin de cuatro electrones de
dos molculas de agua requiere cuatro quantos de luz
que caen en el PSII y conduce a la produccin de cua-
tro iones H+ y una molcula de O2:
4 fotones
2 H2O 4e + 4 H+ + O2
Esta reaccin es mediada por un grupo de cuatro
iones de manganeso (Mn2+) en el PSII.
La reaccin general catalizada por el fotosistema II es:
Luz
2Q + 2H2O O2 + 2QH2
4. Luego los electrones se pasan desde QH2 a travs
del complejo del citocromo b f (tambin llamado
complejo del citocromo b6 f) a la plastocianina (Pc).
La Pc es una protena que contiene cobre y acepta
L3FOTOSNTESIS 329
P700*
Fd
Ferredoxina-NADP
reductasa
Q
Complejo del NADP+ NADPH
citocromo bf + H+
Pc
Bomba
de H+
Fotosistema
Luz I
P700
electrones por el cobre que cicla entre los estados
Cu2+ y Cu+:
Complejo del citocromo bf
QH2 + 2 Pc (Cu2+) Q + 2 Pc (Cu+) + 2H+
El complejo del citocromo bf es anlogo al Complejo
III de la fosforilacin oxidativa (seccin L2) y de
manera similar la reaccin funciona a travs del ciclo
Q (seccin L2) con el plastoquinol y la plastocianina,
que en esencia desempean los mismos papeles que
el ubiquinol y el citocromo c. En el paso del Com-
plejo III de la fosforilacin oxidativa, los protones son
tomados desde la matriz y liberados del lado citopls-
mico de la membrana mitocondrial interna, mientras
que en el paso del complejo del citocromo bf en la
fotosntesis, los protones son tomados del estroma y
liberados en el lumen del tilacoide.
5. La energa luminosa que llega al complejo antena del
PSI se canaliza hacia el centro de reaccin. Aqu, el
P700 se excita (a P700*) y emite un electrn de alta
energa hacia la ferredoxina (una protena que con-
tiene como mnimo de centros FeS; seccin L2) al
tiempo que se convierte, en el catin P700+. El P700+
recibe el electrn de la Pc reducida (del paso 4 previo)
y de esta manera retorna al estado basal.
El fotosistema I cataliza la reaccin general, como sigue:
330 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA
Luz
Pc (Cu+) + Fdoxidado Pc (Cu2+) + Fdreducido
6. Dos electrones de alta energa de dos molculas de
ferredoxina reducida se transfieren al NADP+ para for-
mar NADPH. La ferredoxina-NADP reductasa es la en-
cargada de la reaccin.
Ferredoxina-NADP+ reductasa
NADP+ + 2 e + H+ NADPH
Si se toma en cuenta la secuencia completa del trans-
porte de electrones a travs de PSI y PSII, la reaccin
puede escribirse como sigue, con los electrones que flu-
yen desde el H2O hasta el NADP+, reducindolo a NADPH:
Luz
2 H2O + 2 NADP+ 2 NADPH + 2 H+ + O2
Fotofosforilacin no cclica
Durante la operacin del esquema Z, se crean electrones
de alta energa mediante el ingreso de energa a travs de
los dos fotosistemas, a partir de los cuales los electro-
nes transitan a lo largo de una cadena de transporta-
dores de potencial redox cada vez menor (figura L3-1).
Esto es anlogo al paso de los electrones a lo largo de
la cadena respiratoria en la mitocondria (seccin L2).
Como se describi antes, otra similitud es el funciona-
miento del complejo del citocromo bf es una bomba de
protones (figura L3-1), que bombea iones H+ desde el
estroma hacia el espacio tilacoidal (figura L3-2), lo que
produce un gradiente de H+ durante el transporte de
electrones. Debido a la orientacin de los diversos com-
ponentes del transporte de electrones en la membrana
del tilacoide (figura L3-2), los iones H+ liberados cuan-
do el PSII oxida al agua para producir oxgeno se liberan
en el lumen del tilacoide, mientras que los iones H+ usa-
dos para reducir el NADP+ a NADPH por la ferredoxina-NADP
reductasa son aceptados en el estroma. De esta manera,
estas dos reacciones tambin contribuyen al gradiente
de protones.
ESTROMA
Complejo
PS II PQ del
citocromo
bf
2H2O 2+
Mn
H+
4H+ ESPACIO
O2
TILACOIDE
Figura L3-2. Formacin del gradiente de protones y sntesis de ATP.
El gradiente de protones sustenta la sntesis de ATP me-
diante una ATP sintasa que se localiza en la membrana
tilacoidal (figura L3-2). Esto lleva por nombre fotofos-
forilacin y es anlogo al mecanismo de sntesis de ATP
a travs de disipar el gradiente de protones durante la
fosforilacin oxidativa en las mitocondrias (seccin L2).
La diferencia estriba en que los protones se bombean
hacia fuera en el caso de las mitocondrias, pero dentro de
un subcompartimiento, el espacio tilacoidal, en el caso
de los cloroplastos. Debido a la va alternativa (cclica)
para el transporte de electrones y la sntesis de ATP (vase
ms adelante), la formacin de ATP a travs de la opera-
cin conjunta de los PSI y PSII (figura L3-1; el esquema
Z) se llama fotofosforilacin no cclica.
Fotofosforilacin cclica
Cuando la relacin NADPH/NADP+ es alta y hay poco NADP+
disponible para aceptar electrones, se usa una va de
transporte de electrones alternativa que incluye slo al
PSI y unos pocos transportadores de electrones (figura
L3-3). Aqu el electrn de alta energa es pasado por la
ferredoxina hacia el complejo del citocromo bf en lugar
de hacerlo hacia el NADP+. De aqu el electrn fluye hacia
la plastocianina y regresa otra vez hacia el P700 del PSI.
El gradiente de protones resultante generado por el
bombeo de H+ por el complejo del citocromo bf estimula
entonces la sntesis de ATP. Durante esta fosforilacin
cclica se forma ATP pero no NADPH. De manera adicional,
dado que el PSII no interviene, no se produce O2.
En resumen, cuando el transporte de electrones opera
en un modo no cclico, a travs de PSI y PSII, los pro-
ductos son NADPH y ATP. Por el otro lado, en el transporte
de electrones cclico, el nico producto es ATP.
Fotosntesis bacteriana
Las cianobacterias llevan a cabo la fotosntesis mediante
dos fotosistemas, como en las plantas de hojas verdes.
No obstante, otras bacterias fotosintticas, como la bac-
ADP
+ Pi ATP
NADP+
+
ATP
H+ NADPH
sintasa
Fd
Ferredoxina-
PS I NADP
reductasa
PC
H+
 L3FOTOSNTESIS 331

teria prpura fotosinttica Rhodospirillum rubrum, slo
tiene un fotosistema. ste puede realizar el transpor-
te de electrones cclico, con el que genera un gradiente
de protones y por lo tanto sintetiza ATP (fotofosforilacin
cclica).
De manera alternativa, puede recurrir a un patrn de
transporte de electrones no cclico en el cual los electro-
nes de los citocromos pasan al NAD+ (en lugar de hacerlo
al NADP+ como las plantas superiores) para producir NADH.
El donador de electrones es, por ejemplo, el sulfuro de
hidrgeno (H2S), el cual genera azufre (S). Ciertas bacte-
rias fotosintticas tambin pueden usar el gas hidrgeno
(H2) y una variedad de compuestos orgnicos como do-
nadores de electrones. Como el H2O no se usa como
donador de electrones, no se produce oxgeno.
Reacciones de la fase oscura
Las reacciones en la fase oscura (tambin denomina-
das reacciones de fijacin de carbono) usan el ATP y el
NADPH producidos por las reacciones en la claridad para
convertir el dixido de carbono en carbohidratos. Los
productos finales son sacarosa y almidn.
Una extraordinaria enzima llamada ribulosa bisfos-
fato carboxilasa/oxigenasa (con frecuencia se abrevia
rubisco) cataliza la reaccin clave de fijacin de carbono,
que se localiza en el estroma. La reaccin condensa una
molcula de CO2 con la ribulosa 1,5-bisfosfato (una mo-
lcula de cinco carbonos) para producir un interme-
diario transitorio de seis carbonos que se hidroliza con
rapidez a dos molculas de 3-fosfoglicerato (figura L3-4).
La rubisco es una enzima muy lenta que fija slo tres
molculas de su sustrato cada segundo y por lo tanto
se necesita una gran cantidad de la enzima por cada
planta. De manera tpica, la rubisco representa 50% o
ms de las protenas totales de un cloroplasto. En efecto,
sta es quiz la protena ms abundante de la Tierra.
La reaccin de la rubisco forma parte de un ciclo de
reacciones llamado ciclo de Calvin, que conduce a la
regeneracin de la ribulosa 1,5-bisfosfato (lista para fijar
otra molcula de CO2) y a la produccin neta de gliceral-
dehdo 3-fosfato para la sntesis de sacarosa y almidn.
Deben fijarse tres molculas de CO2 para generar una
molcula de gliceraldehdo 3-fosfato (una molcula de
tres carbonos). La reaccin general es:
3 CO2 + 6 NADPH + 9 ATP gliceraldehdo +
6 NADP+ + 9 ADP + 8 Pi
3-fosfato
Las diversas reacciones se muestran en la figura L3-5.
A continuacin de la formacin de seis molculas de
3-fosfoglicerato, se usan seis ATP y seis NADPH para gene-
rar seis molculas de gliceraldehdo 3-fosfato.

P700*

Fd

Complejo del
Potencial citocromo
redox bf
Bomba de H+
( V)

PC

Fotosistema
Luz I
P700

Figura L3-3. Fotofosforilacin cclica en las plantas superiores. Ntese que

las echas de este diagrama representan la secuencia de sucesos durante la
fotosntesis, como se describe en el texto, y son interconversiones metablicas.
332 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA

CH2O P

CH2O P CHOH
CO2 +
C O COO
Rubisco +
CHOH
COO
CHOH
CHOH
CH2O P
CH2O P
Ribulosa Dos molculas
1,5-bisfosfato de 3-fosfoglicerato

Figura L3-4. Reaccin de la rubisco.

Despus, slo se usa una de estas molculas de glice- Sntesis de sacarosa

raldehdo 3-fosfato para formar fructosa 6-fosfato y, al
La mayor parte del gliceraldehdo 3-fosfato producido
final, almidn. Las otras cinco molculas de gliceralde-
por el ciclo de Calvin en los cloroplastos se exporta hacia
hdo 3-fosfato se convierten en una serie de pasos (en
el citosol y se utiliza para producir el disacrido sacarosa.
los que participan la aldolasa, la transcetolasa y otras
Primero, el gliceraldehdo 3-fosfato se convierte en fruc-
cinco enzimas diferentes) en tres molculas de ribulosa
tosa 6-fosfato y glucosa 1-fosfato. Las reacciones qumi-
5-fosfato, las cuales luego se fosforilan (mediante tres
cas que intervienen son en esencia las contrarias a las
molculas de ATP), para formar tres molculas de ribu-
de la gluclisis (seccin J3). A continuacin, la glucosa
losa 1,5-bisfosfato, lista para otra ronda del ciclo. Por lo
1-fosfato se convierte en UDP-glucosa, que reacciona con
tanto, una ronda completa del ciclo, donde se aprove-
la fructosa 6-fosfato para sintetizar sacarosa 6-fosfato:
chan tres molculas de CO2 para formar una molcula
de gliceraldehdo 3-fosfato, requiere 6 + 3 = 9 ATP y 6 UDP-glucosa + fructosa 6-fosfato
NADPH. sacarosa 6-fosfato + UDP

6 6ATP
3-fosfoglicerato
3 CO2 (C3) 6ADP

3
Ribulosa 6
1,5-bisfosfato (C5) 1,3-bisfosfoglicerato
3ADP (C3)
3ATP
3 Ribulosa 5-fosfato (C5) 6NADPH

6NADP+
Aldolasa, 6Pi
transcetolasa
y otras cinco 6
enzimas Gliceraldehdo
5 3-fosfato
Gliceraldehdo (C3)
3-fosfato
(C3)

1
Gliceraldehdo
3-fosfato
(C3)

Fructosa 6-fosfato
(C6)

Sacarosa Almidn

Figura L3-5. Ciclo de Calvin.


La hidrlisis de la sacarosa 6-fosfato produce sacarosa.
ste es el principal azcar que se transporta entre las
clulas de las plantas superiores, anlogo al abasteci-
miento de glucosa a los tejidos a travs de la corriente
sangunea en los animales (seccin J4).
Sntesis de almidn
En tanto que los animales almacenan el exceso de car-
bohidratos como glucgeno (secciones J2 y J6), las plan-
tas lo hacen en la forma de almidn (seccin J2). El almi-
dn se produce en el estroma de los cloroplastos y se
almacena como granos de almidn en ese mismo lugar.
La sntesis de almidn sucede a partir de ADP-glucosa,
CDP-glucosa o GDP-glucosa (pero no UDP-glucosa). La va
incluye la conversin de gliceraldehdo 3-fosfato (proce-
dente del ciclo de Calvin) en glucosa 1-fosfato, la cual a
su vez es usada para sintetizar el azcar que se utiliza
en la sntesis de los diferentes nucletidos.
La va C4
Bajo condiciones atmosfricas normales, la rubisco
agrega CO2 a la ribulosa 1,5-bisfosfato. Pese a ello,
cuando la concentracin de CO2 es baja, puede agregar
O2 en su lugar. Esto produce 2-fosfoglucolato y 3-fosfo-
glicerato. El fosfoglucolato puede conservarse y usarse
para reacciones biosintticas, pero la va para alcanzarlo
libera CO2 y NH4+ y disipa energa metablica. Debido a
que el resultado neto de este proceso es consumir O2 y
liberar CO2, se conoce como fotorrespiracin.
ste representa un problema importante para las plan-
tas en climas clidos. Las plantas cierran los poros de
intercambio de gas de sus hojas (estomas) para conser-
var el agua, pero esto conduce a una cada en la con-
centracin de CO2 dentro de la hoja, lo que favorece la
fotorrespiracin. Adems, a medida que la temperatura
Malato deshidrogenasa
Oxalacetato
NADPH
Pi Fosfoenolpiruvato
AIRE
carboxilasa
CO2 CO2 AMP
+ PPi
Fosfoenolpiruvato
Piruvato-Pi
dicinasa
CLULA DEL MESFILO
Figura L3-6. Va del C4.
L3FOTOSNTESIS 333
se eleva, la actividad de oxigenasa de la rubisco (que usa
O2) aumenta con mayor rapidez que la actividad de car-
boxilasa (que usa CO2), lo que tambin favorece la foto-
rrespiracin. Para evitar estos inconvenientes, algunas
plantas adaptadas a vivir en climas calientes, como el
maz y la caa de azcar, desarrollaron un mecanismo
para maximizar la actividad de la rubisco carboxilasa.
En tales plantas, la fijacin del carbono que utiliza el
ciclo de Calvin tiene lugar slo en las clulas de la vaina
que estn protegidas del aire por las clulas del mes-
filo. Como las clulas de la vaina no se exponen al aire,
la concentracin de O2 es baja. El CO2 se transporta
del aire a las clulas de la vaina a travs de las clulas del
mesfilo y se combina con molculas de tres carbonos
(C3) para producir molculas de cuatro carbonos (C4).
stas ingresan en las clulas de la vaina, donde son
degradadas en compuestos de C3 con liberacin de CO2.
Las molculas de C3 regresan a las clulas del mesfilo
para aceptar ms CO2.
Este ciclo garantiza una alta concentracin de CO2 para
la actividad de carboxilasa de la rubisco en las clulas
de la vaina. Como el ciclo se basa en el transporte de
CO2 a travs de molculas de cuatro carbonos (C4),
se denomina ciclo C4, y las plantas que disponen del
mismo se llaman plantas C4. Todas las plantas restan-
tes reciben el nombre de plantas C3 ya que atrapan el
CO2 de manera directa del compuesto de tres carbonos
3-fosfoglicerato (figura L3-4).
Los detalles de la va C4 se presentan en la figura L3-6. Los
pasos que intervienen son los siguientes:
z En la clula del mesfilo, el fosfoenolpiruvato (C3)
acepta CO2 para formar oxalacetato (C4), una reac-
cin que cataliza la fosfoenolpiruvato carboxilasa.
z La malato deshidrogenasa dependiente de NADP+
convierte al oxalacetato en malato (C4).
Malato Malato
NADP + NADP+
Enzima Ciclo
CO2 de Calvin
mlica
NADPH
ATP
+ Pi
Piruvato Piruvato
CLULA DE LA VAINA
334 SECCIN L RESPIRACIN Y ENERGA
z El malato ingresa en la clula de la vaina y libera CO2
con formacin de piruvato (C3); esta reaccin es cata-
lizada por la enzima mlica dependiente de NADP+.
z El piruvato regresa a la clula del mesfilo, la que lo
usa para regenerar fosfoenolpiruvato. Esta reaccin,
catalizada por la piruvato-Pi dicinasa es inusual ya
que requiere ATP y Pi y rompe un enlace de alta energa
para generar AMP y pirofosfato.
El pirofosfato procedente de la piruvato-Pi dicinasa es
degradado con rapidez, de manera que, en general, el
precio neto que deben pagar las plantas para que opere
esta bomba de CO2 es la hidrlisis de dos enlaces de fos-
fato de alta energa por cada molcula de CO2 que trans-
porte:
CO2 (en aire) + ATP CO2 (clula de la vaina) +
AMP + 2 Pi
SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

M1Fijacin y asimilacin del nitrgeno

Notas clave
Ciclo del nitrgeno El ciclo del nitrgeno es el movimiento del nitrgeno a travs de la cadena ali-
mentaria a partir de compuestos inorgnicos simples, en primer lugar amonia-
co, hasta compuestos orgnicos complejos.

Fijacin del nitrgeno La fijacin del nitrgeno es la conversin del gas N2 en amoniaco, un proceso
realizado por algunas bacterias del suelo, cianobacterias y las bacterias sim-
biticas Rhizobium, que invaden los ndulos de las races de las plantas legu-
minosas. El complejo de la nitrogenasa es el responsable de este proceso, que
consiste en un reductasa y una nitrogenasa que contiene hierro y molibdeno.
Al menos se hidrolizan 16 molculas de ATP para formar dos molculas de amo-
niaco. En Rhizobium, la leghemoglobina se utiliza para proteger a la nitrogena-
sa de la inactivacin por O2.
Asimilacin del nitrgeno El amoniaco es asimilado por todos los organismos en compuestos orgnicos
que contienen nitrgeno (aminocidos, nucletidos, etc.) por la accin de la
deshidrogenasa de glutamato (para formar glutamato) y la sintetasa de gluta-
mina (para formar glutamina).

Temas relacionados (B3) Mioglobina y hemoglobina (L3) Fotosntesis

(L1) Ciclo del cido ctrico (M2) Metabolismo de aminocidos
(L2) Transporte de electrones y (M4) Hemos y clorofilas
fosforilacin oxidativa

Ciclo del nitrgeno Fijacin de nitrgeno

El ciclo del nitrgeno se refiere a la circulacin de nitr-
geno a travs de la cadena alimenticia de los organismos
vivos (figura M1-1). Este complejo ciclo incluye bacte-
rias, plantas y animales. Todos los organismos pueden
convertir el amoniaco (NH3) en compuestos orgnicos
de nitrgeno, es decir, compuestos que contienen enla-
ces CN. Sin embargo, slo unos pocos microorganis-
mos pueden sintetizar amoniaco a partir del gas nitr-
geno (N2). Aunque el gas N2 constituye alrededor de 80%
de la atmsfera de la Tierra, es un compuesto no reactivo
desde el punto de vista qumico. La primera etapa en el
ciclo del nitrgeno es la reduccin del gas N2 en amo-
niaco, un proceso al que se conoce como fijacin de
nitrgeno. El amoniaco tambin se puede obtener por
reduccin del ion nitrato (NO3-) presentes en el suelo. La
mayora de las plantas y microorganismos son capaces
de llevar a cabo la reduccin del nitrato. El amoniaco
que resulta de estos dos procesos puede ser asimilado
por todos los organismos. Dentro de la biosfera, existe
un equilibrio entre las formas orgnicas e inorgnicas
totales de nitrgeno. La conversin de nitrgeno org-
nico en inorgnico se produce a travs de catabolismo,
desnitrificacin y decadencia (figura M1-1).
El proceso de conversin del gas N2 atmosfrico en
amoniaco (fijacin de nitrgeno) lo llevan a cabo slo
unos pocos microorganismos denominados diaztro-
fos. stos son algunas de las bacterias del suelo de vida
libre como Klebsiella y Azotobacter, las cianobacterias
(algas verdeazules), y las bacterias simbiticas (sobre
todo Rhizobium). Las bacterias simbiticas Rhizobium
invaden las races de las plantas verdes leguminosas
(plantas pertenecientes a la familia de los chcharos o
guisantes; p. ej., los frijoles, el trbol, la alfalfa) y forman
ndulos radiculares donde se lleva a cabo la fijacin del
nitrgeno. La cantidad de N2 que fijan estos microorga-
nismos diazotrficos se estima dentro del orden de 1011
kg por ao, alrededor de 60% del nitrgeno de la Tierra
que acaba de fijarse. Los relmpagos y la radiacin ultra-
violeta fijan otro 15%, y el resto proviene de procesos
industriales.
La falta de reactividad qumica del enlace NN se com-
prueba de forma clara cuando entra en consideracin el
proceso industrial de la fijacin de nitrgeno. Este pro-
ceso, ideado por Fritz Haber en 1910 y que an se utiliza
en fbricas de fertilizantes, implica la reduccin de N2 en
336 SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

INORGNICO
N2
Algunos
Fijacin del Desnitricacin microorganismos
nitrgeno
Reduccin La mayora de las plantas
NH3 NO3
del nitrato y microorganismos

Asimilacin Catabolismo
y biosntesis

Aminocidos
Nucletidos
Porrinas Todos los organismos

Biosntesis Catabolismo

Protenas
ORGNICO
DNA, RNA
Polisacridos
Fosfolpidos

Figura M1-1. Interrelaciones entre el metabolismo del

nitrgeno inorgnico y el orgnico.

presencia de H2 gaseoso sobre un catalizador de hierro (22) y contiene un complejo de hierro-molibdeno. La

a una temperatura de 500 C y una presin de 300 atms-
feras.
N2 + 3 H2 2 NH3
Complejo de la nitrogenasa
El complejo de la nitrogenasa es el encargado de la
fijacin biolgica del nitrgeno, que consta de dos pro-
tenas: una reductasa, que proporciona electrones con
alto poder reductor, y una nitrogenasa, que utiliza estos
electrones para reducir el N2 a NH3 (figura M1-2). La
reductasa es un dmero de 64 kDa de subunidades idn-
ticas que contiene un grupo hierro-azufre y dos sitios de
unin de ATP. La nitrogenasa es una protena ms grande
de 220 kDa, que se compone de dos subunidades y dos
transferencia de electrones de la protena reductasa a la
protena nitrogenasa se acopla a la hidrlisis del ATP por
la reductasa. A pesar de que la reduccin de N2 en NH3
es slo un proceso de seis electrones:
N2 + 6 e + 6 H+ 2 NH3
la reductasa es imperfecta y tambin se forma H2. Por lo
tanto, tambin se requieren dos electrones adicionales:
N2 + 8 e + 8 H+ 2 NH3 + H2
Los ocho electrones de alto potencial provienen de la
ferredoxina reducida que se produce en los cloroplas-
tos por accin del fotosistema I o en el transporte de
electrones oxidativo (figura M1-2) (secciones L2 y L3).
La reaccin general de la fijacin biolgica de nitrgeno:

2 ADP + 2 Pi
Ferredoxinared Reductasaox Nitrogenasared N2 + 8 H+
Fotosntesis o
transporte
oxidativo de
electrones
Ferredoxinaox Reductasared Nitrogenasaox 2 NH3 + H2

2 ATP

Se repite ocho veces

Figura M1-2. Flujo de electrones en la reduccin del N2 catalizada

por la nitrogenasa.
 M1FIJACIN Y ASIMILACIN DEL NITRGENO 337

N2 + 8 e + 8 H+ + 16 ATP + 16 H2O travs de dos reacciones principales que catalizan la

2 NH3 + H2 + 16 ADP + 16 Pi
pone de manifiesto que es, en trminos energticos,
muy costosa, ya que al menos se hidrolizan 16 mol-
culas de ATP.
Leghemoglobina
El complejo de la nitrogenasa es en extremo sensible a la
inactivacin por O2, por lo que la enzima debe ser pro-
tegida de esta sustancia reactiva. En los ndulos de las
races de las leguminosas, la proteccin se otorga por
la sntesis simbitica de la leghemoglobina. La planta
sintetiza la parte globina de esta protena monomrica
de unin de oxgeno (seccin B3), mientras que Rhizo-
bium sintetiza el grupo hemo (seccin M4). La leghe-
moglobina tiene una afinidad muy alta por el O2, por
lo que mantiene una concentracin lo suficientemente
baja para proteger la nitrogenasa.
Asimilacin de nitrgeno
El siguiente paso en el ciclo del nitrgeno es la asimila-
cin de nitrgeno inorgnico en forma de amoniaco o
de ion amonio en compuestos orgnicos que contienen
nitrgeno. Todos los organismos asimilan amoniaco a
deshidrogenasa de glutamato y la sintetasa de gluta-
mina para dar origen a los aminocidos glutamato (Glu)
y glutamina (Gln), respectivamente. El nitrgeno del
grupo amino en el Glu y el nitrgeno de la amida en la
Gln se utilizan en ms reacciones biosintticas para dar
lugar a otros compuestos.
Deshidrogenasa de glutamato
La deshidrogenasa de glutamato cataliza la aminacin
reductora del intermediario del ciclo del cido ctrico
-cetoglutarato (figura M1-3a) (seccin L1). Aunque la
reaccin es reversible, el agente reductor que se utiliza
en la reaccin biosinttica es NADPH. Esta enzima tam-
bin participa en el catabolismo de aminocidos (sec-
cin M2).
Sintetasa de glutamina
La sintetasa de glutamina cataliza la incorporacin de
amoniaco en la glutamina y obtiene energa a partir de la
hidrlisis de ATP (figura M1-3b). Esta enzima se caracte-
riza como una sintetasa, en lugar de una sintasa, debido
a que la reaccin acopla la formacin del enlace con la
hidrlisis de ATP. En contraste, una sintasa no requiere
ATP.

a)

COO COO

CH2 CH2
+
CH2 + NH3 + NADPH + 2 H CH2 + H2O + NADP+
+
C O H C NH3

COO COO

Cetoglutarato Glutamato

b) O

COO C NH2

CH2 CH2

CH2 + NH3 + ATP CH2 + ADP + Pi

+ +
H C NH3 H C NH3

COO COO

Glutamato Glutamina

Figura M1-3. Asimilacin del amoniaco por a) la

deshidrogenasa de glutamato y b) la sintetasa de
glutamina.
SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

M2Metabolismo de los aminocidos

Notas clave
Biosntesis de Algunos organismos pueden sintetizar los 20 aminocidos esenciales, mien-
aminocidos tras que otros no. Los aminocidos no esenciales son aquellos que pueden sin-
tetizarse, los aminocidos esenciales tienen que ingerirse en la alimentacin.
Los 20 aminocidos esenciales se pueden agrupar en seis familias biosintticas
segn el intermediario metablico del cual deriva su esqueleto de carbono.
Degradacin de Los aminocidos se degradan por la eliminacin del grupo amino y la con-
aminocidos versin del esqueleto de carbono que resulta en uno o ms intermediarios
metablicos. Los aminocidos se denominan glucognicos si sus esqueletos
de carbono pueden dar lugar a la sntesis de glucosa, y cetognicos si pueden
dar lugar a los cuerpos cetnicos. Algunos aminocidos son tanto glucognicos
como cetognicos.
Transaminacin Los grupos amino se remueven de los aminocidos mediante un proceso que
se denomina transaminacin. El aceptor de esta reaccin es por lo general el
cetocido cetoglutarato , lo que resulta en la formacin de glutamato y el ce-
tocido que corresponde. La coenzima de todas las transaminasas es el fosfato
de piridoxal, que deriva de la vitamina B6.
Desaminacin oxidativa El glutamato producto de la transaminacin es desaminado por oxidacin que
del glutamato lleva a cabo la deshidrogenasa de glutamato para producir amoniaco. Esta en-
zima es inusual al ser capaz de utilizar NAD+ o NADP+ y est sujeta a regulacin
alostrica.
Oxidasas de aminocidos Oxidasas de L-aminocidos y D-aminocidos que utilizan FMN o FAD como coen-
zima, respectivamente, degradan pequeas cantidades de aminocidos.
Metabolismo de la Primero, la monooxigenasa hidroxilasa de fenilalanina convierte la fenilalanina
fenilalanina en tirosina, una reaccin en la que interviene la coenzima tetrahidrobiopteri-
na. Por transaminacin y una reaccin de la dioxigenasa, la tirosina se convierte
en homogentisato, que a su vez se metaboliza a fumarato y acetoacetato.
Errores congnitos del Son trastornos metablicos hereditarios cuya causa es la ausencia de una en-
metabolismo zima de una va metablica. La alcaptonuria se debe a la falta de oxidasa de
homogentisato y es inofensiva, mientras que la fenilcetonuria, que se debe a la
falta de la hidroxilasa de fenilalanina, puede causar retraso mental grave.

Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos
(J3) Gluclisis
(J4) Gluconeognesis
(J5) Va de la pentosa fosfato
(K2) Degradacin de cidos grasos
(K3) Sntesis de cidos grasos
(L1) Ciclo del cido ctrico
(L2) Transporte de electrones y fosforila-
cin oxidativa
(M1) Fijacin y asimilacin del nitrgeno
(M3) El ciclo de la urea
 M2METABOLISMO DE LOS AMINOCIDOS 339

Biosntesis de aminocidos CICLO DEL CIDO CTRICO

Las plantas y los microorganismos pueden sintetizar los

20 aminocidos estndar. Los mamferos, sin embargo, Cetoglutarato Oxalacetato

no pueden sintetizar los 20, y deben obtener algunos de

ellos en su dieta. Los aminocidos que se suministran
Glu Asp
en la alimentacin se conocen como esenciales, mien-
tras que el resto que el organismo puede sintetizar se
denominan no esenciales. Esta designacin se refiere
a las necesidades de un organismo bajo un conjunto Gln Pro Arg Asn Met Thr Lys
particular de condiciones. En los seres humanos, los Familia del
glutamato Ile
aminocidos no esenciales son Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,
Familia del aspartato
Glu, Gln, Gly, Pro, Ser y Tyr, mientras que los esenciales
son His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp y Val (vase la
GLUCLISIS
seccin B1 para las estructuras de los 20 aminocidos
estndar). Las vas para la biosntesis de los aminoci-
dos son diversas y a menudo varan de un organismo 3-fosfoglicerato Piruvato

a otro. Sin embargo, todos tienen una caracterstica en

comn: sus esqueletos de carbono provienen de inter-
Ser Ala Val Leu
mediarios clave de las vas metablicas centrales (glu-
clisis, seccin J3; ciclo del cido ctrico, seccin L1, o Familia del piruvato
la va de la pentosa fosfato, seccin J5) (figura M2-1). Cys Gly
Los aminocidos se pueden agrupar en seis rutas bio- Familia de la serina
sintticas segn el intermediario del cual derivan (figura
VA DE LA PENTOSA
M2-1). Por lo general, el grupo amino primario proviene GLUCLISIS
FOSFATO
de la transaminacin del glutamato.
Fosfoenolpiruvato
Eritrosa 4-fosfato Ribosa 5-fosfato
Degradacin de aminocidos
Ya que no hay espacio para el exceso de aminocidos,
y como las protenas se recambian de forma constante, Phe Tyr Trp His

los aminocidos tienen que degradarse de manera con- Familia aromtica

tinua. El grupo amino se elimina primero y el esque-
leto de carbono que resulta se convierte en uno o ms
intermediarios metablicos principales y se utiliza como
combustible metablico. Los esqueletos de carbono de
los 20 aminocidos estndar se canalizan en slo siete
molculas: piruvato, acetil-CoA, acetoacetil-CoA, ceto-
glutarato , succinil-CoA, fumarato y oxalacetato (figura
M2-2). Los aminocidos que se degradan a piruvato,
cetoglutarato , succinil-CoA, fumarato y oxalacetato
se denominan glucognicos, ya que pueden dar lugar
a la sntesis de glucosa. Esto se debe a que los interme-
diarios del ciclo del cido ctrico y el piruvato pueden
convertirse en fosfoenolpiruvato y luego en glucosa a
travs de la gluconeognesis (secciones J4 y L1). En con-
traste, los aminocidos que se degradan a acetil-CoA o
acetoacetil-CoA se denominan cetognicos, ya que dan
lugar a los cuerpos cetnicos (seccin K2); la acetil-CoA
o la acetoacetil-CoA tambin pueden utilizarse para sin-
tetizar lpidos (seccin K3). Del conjunto estndar de 20
aminocidos, slo Leu y Lys son exclusivamente ceto-
gnicas. Ile, Phe, Trp y Tyr son tanto cetognicos como
glucognicos ya que algunos de sus tomos de carbono
terminan en acetil-CoA o acetoacetil-CoA, mientras
que otros terminan en precursores de la glucosa. Los 14
aminocidos restantes se clasifican nicamente como
glucognicos.
Figura M2-1. Familias biosintticas de aminocidos.
Transaminacin
Antes del metabolismo de los esqueletos de carbono
en un importante intermediario metablico, el grupo
amino del aminocido tiene que eliminarse primero
por un proceso que se denomina transaminacin. En
este proceso, el grupo amino de la mayora de los ami-
nocidos se transfiere al cetoglutarato  para formar
glutamato y el cetocido correspondiente:
-aminocido + -cetoglutarato -cetocido
+ glutamato
Las enzimas que catalizan estas reacciones se llaman
transaminasas (aminotransferasas) y en los mamferos
se encuentran sobre todo en el hgado. Por ejemplo, la
transaminasa de aspartato cataliza la transferencia del
grupo amino del aspartato al cetoglutarato (figura
M2-3a), mientras que la transaminasa de alanina cata-
liza la transferencia del grupo amino de la alanina al
cetoglutarato (figura M2-3b).
340 SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

Ala Cys
Gly Ser
Thr Trp

Glucosa
Ile Leu Lys
Leu Phe Trp
Piruvato
Trp Tyr
Fosfoenolpiruvato

Acetil-CoA Acetoacetil-CoA

Asn
Oxalacetato
Asp Cuerpos cetnicos

CICLO DEL CIDO

Asp CTRICO
Phe Fumarato Citrato
Tyr

Arg Gln
Succinil-CoA Cetoglutarato Glu His
Ile Met
Pro
Thr Val

Figura M2-2. Destinos de los esqueletos de carbono de los

aminocidos.

Fosfato de piridoxal sustrato, el grupo amino de los aminocidos entrantes

La coenzima (o grupo prosttico) de todas las tran-
saminasas es el fosfato de piridoxal, que deriva de la
piridoxina (vitamina B6), y que de manera transitoria
se convierte en fosfato de piridoxamina durante la tran-
saminacin (figura M2-4). En ausencia de sustrato, el
grupo aldehdo del fosfato de piridoxal forma un enlace
covalente de base de Schiff (enlace de imina) con el
grupo amino de la cadena lateral de un residuo de lisina
especfico en el sitio activo de la enzima. Adems del
desplaza al grupo amino de la lisina del sitio activo y
se forma un nuevo enlace de base de Schiff con el sus-
trato aminocido. La base de Schiff-fosfato de piridoxal-
aminocido resultante que se forma se mantiene unido
con firmeza a la enzima por mltiples interacciones
no covalentes.
El aminocido se hidroliza para formar un cetocido y
fosfato de piridoxamina, y el grupo amino se transfiere
de forma temporal del sustrato aminocido al fosfato de

a)
COO COO

COO CH2 COO CH2

CH2 CH2 CH2 CH2

+
H C NH3+ + C O C O + H C NH3

COO COO COO COO

Aspartato Cetoglutarato Oxalacetato Glutamato

b)

COO COO

CH2 CH2

CH3 CH2 CH3 CH2

+ +
H C NH3 + C O C O + H C NH3

COO COO COO COO

Alanina Cetoglutarato Piruvato Glutamato

Figura M2-3. Reacciones catalizadas por: a) la transaminasa

de aspartato y b) la transaminasa de alanina.
 M2METABOLISMO DE LOS AMINOCIDOS 341
+
a) b) c) NH3
O H
CH2OH C CH2
O O

HOH2C OH O P OH2C OH O P OH2C OH
+ CH3
O + CH3
O + CH3
N N N
H H H

Figura M2-4. Estructuras de: a) la piridoxina (vitamina B6), b) el fosfato de

piridoxal y c) el fosfato de piridoxamina.

piridoxal (figura M2-5). Estos pasos constituyen la mitad aminocido y regenerar el complejo enzima-fosfato de
de la reaccin global de transaminacin. La segunda piridoxal (figura M2-5).
mitad se produce por una inversin de las reacciones
Las reacciones catalizadas por las transaminasas son
anteriores, cuando un segundo cetocido reacciona
endergnicas, ya que no requieren un aporte de ener-
con el fosfato de piridoxamina para producir un segundo
ga metablica. Tambin son libremente reversibles y la
direccin de la reaccin est determinada por las concen-
COO COO traciones relativas de los pares aminocidos-cetocidos.
El fosfato de piridoxal no slo se usa como la coenzima
CH2 CH2
+
en las reacciones de transaminacin, sino que tambin
H C NH3 C O es la coenzima de numerosas reacciones en las que
COO COO intervienen los aminocidos, como las descarboxilacio-
Oxalacetato
nes, desaminaciones, racemizaciones y separaciones del
Aspartato
grupo aldol.

+ Desaminacin oxidativa del glutamato

O H NH3
C
Transaminasa Los grupos amino que han sido canalizados hacia el
de aspartato H C H
glutamato a partir de otros aminocidos se convierten
Fosfato Fosfato de a continuacin en amoniaco por accin de la deshidro-
de piridoxal piridoxamina
genasa de glutamato (figura M2-6). Esta enzima encie-
rra la peculiaridad de ser capaz de utilizar NAD+ o NADP+
(seccin D1). En la biosntesis del glutamato se usa la
forma NADP+ de la coenzima (seccin M1), mientras que
la NADP+ se usa en su degradacin. La deshidrogenasa de
glutamato consiste en seis subunidades idnticas y est
COO COO
sujeta a regulacin alostrica (vase la seccin D5 para
CH2 CH2 una descripcin detallada de la regulacin alostrica). El
CH2 CH2 GTP y el ATP son inhibidores alostricos, mientras que
+ el GDP y el ADP son activadores alostricos. En consecuen-
H C NH3 C O
cia, cuando la carga de energa de la clula es baja (es

COO COO decir, que hay ms ADP y GDP que sus formas trifosfato),
Glutamato Cetoglutarato la deshidrogenasa de glutamato se activa y se incre-
menta la oxidacin de los aminocidos. Los esqueletos
Figura M2-5. Reaccin general de transaminacin. de carbono resultantes se utilizan entonces como com-
bustible metablico, con ellos se alimenta el ciclo del
cido ctrico (seccin L1) y acaban por generar energa
COO COO
a travs de la fosforilacin oxidativa (seccin L2).
CH2 CH2
+ +
CH2 + NAD + H2O NH4 + CH2 + NADH + H+
+
Oxidasas de aminocidos
H C NH3 C O
La ruta principal para la desaminacin de los aminoci-
COO COO dos es la transaminacin, seguida por la desaminacin
Glutamato Cetoglutarato
oxidativa del glutamato. Sin embargo, tambin existe una
ruta menor que implica la oxidacin directa del amino-
Figura M2-6. Desaminacin oxidativa del glutamato cido por la oxidasa de L-aminocidos. Esta enzima utiliza
por accin de la deshidrogenasa de glutamato. FMN como su coenzima (seccin D1), en la que el FMNH2
342 SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

R R mientras se est de pie. Este defecto carece de peligro,

+ +
H C NH3 + FMN + H2O C O + FMNH2 + NH4
COO COO
Aminocido Cetocido
FMNH2 + O2 FMN + H2O2
Figura M2-7. Accin de la oxidasa de L-aminocidos.
resultante es reoxidado por el O2 molecular, un proceso
que tambin genera el H2O2 txico (figura M2-7). La cata-
lasa se encarga de neutralizar el H2O2. Rin e hgado
son tambin ricos en la oxidasa de D-aminocidos que
contiene FAD. No obstante, la funcin de esta enzima en
los animales es poco clara ya que los ismeros D de los
aminocidos son raros en la naturaleza y slo se presen-
tan en las paredes de las clulas bacterianas (seccin A1)
y en ciertos antibiticos.
Metabolismo de la fenilalanina
El metabolismo de la fenilalanina se estudiar con mayor
detalle, ya que se conocen dos errores congnitos del
metabolismo que afectan esta va. En primer lugar, la
hidroxilasa de fenilalanina hidroxila la fenilalanina para
formar otro aminocido aromtico, la tirosina (figura
en contraste con el otro trastorno, la fenilcetonuria. En
la fenilcetonuria hay un bloqueo en la hidroxilacin de la
fenilalanina a tirosina causado por una ausencia o defi-
ciencia de la hidroxilasa de fenilalanina o, muy rara
vez, de su coenzima tetrahidrobiopterina. El resultado
es un incremento de 20 veces en los niveles de fenilala-
nina en la sangre, con la subsecuente transaminacin a
fenilpiruvato. Si se deja sin tratar, se produce un retardo
mental grave, con una expectativa de vida de 20 aos en
promedio. Con una incidencia de 1:20 000, esta afeccin
se detecta ahora en el nacimiento, con tratamientos
que consisten en restringir el consumo de fenilalanina
(para lo cual se coloca al individuo en una dieta baja
de fenilalanina), y con la cual se minimiza la necesidad de
metabolizar el exceso. Sin embargo, debe suministrarse
suficiente fenilalanina para llenar las necesidades
de crecimiento y reemplazo. El edulcorante artificial
aspartame es el ster de Asp-Phe-metilo y con frecuen-
cia se encuentra en bebidas dietticas sin alcohol y otros
productos alimenticios dietticos. Como es una fuente
de fenilalanina diettica, aparece una etiqueta de adver-
tencia para los fenilcetonricos en todos los productos
que contienen aspartame.
+
NH3
CH2 C COO Fenilalanina

M2-8). La coenzima de esta reaccin es la tetrahidro- H

biopterina reductora, la cual es oxidada a dihidrobiop- Tetrahidrobiopterina O2
terina. La hidroxilasa de fenilalanina se clasifica como Hidroxilasa de fenilalanina
monooxigenasa porque uno de los tomos del O2 apa- Dihidrobiopterina H2O
rece en el producto y el otro en el H2O. La tirosina es
+
entonces transaminada a p-hidroxifenilpiruvato, el cual NH3
a su vez es convertido en homogentisato por la hidroxi- HO CH2 C COO Tirosina
lasa de p-hidroxifenilpiruvato. Esta hidroxilasa es un H
ejemplo de una dioxigenasa, dado que ambos tomos de
O2 se incorporan en el producto (figura 8). Acto seguido, Cetocido
Transaminasa
la oxidasa de homogentisato, otra dioxigenasa, divide Aminocido
el homogentisato antes de que se produzcan fumarato
y acetoacetato en la reaccin final. El fumarato puede O
alimentar el ciclo del cido ctrico (seccin L1), mientras HO CH2 C COO p-hidroxifenilpiruvato
que el acetoacetato puede usarse para formar cuerpos
cetnicos (seccin K2). Por consiguiente, la fenilalanina O2
y la tirosina son glucgenas y cetgenas. Hidroxilasa de p-hidroxifenilpiruvato
CO2

Errores congnitos del metabolismo HO OH

Se conocen dos errores congnitos del metabolismo Homogentisato
que afectan el metabolismo de la fenilalanina. stos CH2 COO
son trastornos metablicos hereditarios causados por
la ausencia de una de las enzimas de la va. Uno de estos Oxidasa de homogentisato
trastornos, la alcaptonuria, se origina por la ausencia
de la oxidasa de homogentisato. Esto provoca la acu- Fumarato + Acetoacetato
mulacin de homogentisato, que de manera posterior
se excreta en la orina, y el cual se oxida a color negro Figura M2-8. Metabolismo de la fenilalanina.
SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

M3Ciclo de la urea
Notas clave
Excrecin de amoniaco El exceso de nitrgeno se excreta como amoniaco. Los organismos amoniotli-
cos excretan amoniaco en forma directa, los uricotlicos lo excretan como cido
rico y los ureotlicos lo excretan como urea.
Ciclo de la urea En el ciclo de la urea, el amoniaco se combina en primer lugar con dixido de
carbono para formar carbamoilfosfato. ste se combina con ornitina para for-
mar citrulina, la que a su vez se condensa con aspartato, la fuente del segundo
tomo de nitrgeno de la urea, para formar argininosuccinato. Este compuesto
es a su vez dividido en arginina y fumarato, y la arginina a su vez se divide para
formar urea y regenerar ornitina. Las primeras dos reacciones tienen lugar en
las mitocondrias de las clulas hepticas, mientras que las restantes tres suce-
den en el citosol.
Enlace con el ciclo del El fumarato producido en el ciclo de la urea puede ingresar en forma directa en
cido ctrico el ciclo del cido ctrico y convertirse en oxalacetato. El oxalacetato puede ser
transaminado a aspartato, el cual alimenta el ciclo de la urea, o convertirse en
citrato, piruvato o glucosa.
Hiperamonemia La hiperamonemia es un incremento en los niveles de amoniaco de la sangre
causado por un defecto en una enzima del ciclo de la urea. El amoniaco en ex-
ceso es canalizado hacia glutamato y glutamina, con un efecto deletreo en la
funcin cerebral.
Formacin de xido El gas xido ntrico (NO) deriva de la arginina por la accin de la sintasa de xido
ntrico ntrico. Este metabolito de vida corta desencadena una va de transduccin de
seales que provoca la dilatacin de las arterias.
Formacin de creatina El intermediario arginina del ciclo de la urea puede condensarse con glicina
fosfato para formar guanidinoacetato, el cual a su vez es metilado por el donador de
metilos S-adenosilmetionina a creatina. Luego, la creatina es fosforilada para
formar creatina fosfato, un producto de alta energa almacenada que se en-
cuentra en el msculo.
Ciclo del metilo activado La S-adenosilmetionina es el principal donador de metilo de las reacciones bio-
lgicas. Es regenerado a travs de los intermediarios S-adenosilhomocistena,
homocistena y metionina en el ciclo del metilo activado.
cido rico El cido rico, el principal producto de desecho nitrogenado de los organismos
uricotlicos, tambin se forma en otros organismos a partir de la degradacin
de las bases pricas. La gota es causada por el depsito excesivo de cristales de
cido rico en las articulaciones.

Temas relacionados (J4) Gluconeognesis (L1) Ciclo del cido ctrico

(J6) Metabolismos del glucgeno (M2) Metabolismo de los aminocidos
(K4) Triacilgliceroles
344 SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

Excrecin del amoniaco Ciclo de la urea

Los compuestos que contienen nitrgeno no se alma-
cenan, como sucede con los carbohidratos (glucgeno,
seccin J6) o los lpidos (triacilglicerol, seccin K4). Por
consiguiente, el nitrgeno ingerido en exceso del que se
requiere por el organismo debe excretarse. Primero, el
exceso de nitrgeno se convierte en amoniaco, el cual
luego se excreta de los organismos vivos en una de tres
formas. Muchos animales acuticos se limitan a excretar
el amoniaco de manera directa en el agua circundante.
Las aves y los reptiles terrestres excretan el amoniaco en
la forma de cido rico, mientras que la mayora de los
vertebrados terrestres convierten el amoniaco en urea
antes de excretarlo. Estas tres clases de organismos se
llaman: amoniotlicos, uricotlicos y ureotlicos, res-
pectivamente.
La urea se sintetiza en el hgado por intermedio del
ciclo de la urea. sta luego es secretada en la corriente
sangunea y tomada por los riones para su excrecin
en la orina. El ciclo de la urea fue la primera va meta-
blica cclica en descubrirse, mrito que correspondi
a Hans Krebs y Kurt Henseleit en 1932, cinco aos antes
de que Krebs descubriera el ciclo del cido ctrico (sec-
cin L1). La reaccin general de esta va es:
NH4+ + HCO3 + H2O + 3 ATP + aspartato
urea + 2 ADP + AMP + 2Pi+ PPi + fumarato
Uno de los tomos de nitrgeno de la urea proviene
del amoniaco, el otro se transfiere desde el amino-
cido aspartato, mientras que el tomo de carbono pro-
cede del CO2 que se origina en el bicarbonato (HCO3).

MITOCONDRIA
O
1
2 ATP + HCO3 + NH3 H2N C OPO32 + 2 ADP + Pi
Carbamoilfosfato
O C NH2

Pi NH

(CH2)3
Ornitina 2 H C
+
NH3

Citrulina COO
+
NH3

(CH2)3

H C NH3+ COO
Citrulina CH2
COO
+
Ornitina ATP H C NH3
CICLO DE
3 COO
LA UREA
O AMP + PPi Aspartato

H 2N C NH2

Urea 5
COO
H2O Arginino- CH2 +
succinato NH2
Arginina H C N C
+ H
H2N NH2 COO
NH
C 4 (CH2)3
NH +
H C NH3
(CH2)3
COO COO
+
H C NH3
C H CITOSOL
COO
H C

COO
Fumarato

Figura M3-1. Ciclo de la urea. Las enzimas que intervienen en este ciclo son:
, sintetasa de carbamoilfosfato; , transcarbamoilasa de ornitina; , sintetasa
de argininosuccinato; , argininosuccinasa, y , arginasa.

NH3 + CO2
Carbamoilfosfato
Citrulina
CICLO DE
Ornitina
LA UREA
Urea
Arginina
Figura M3-2. El ciclo de la urea y el ciclo del cido ctrico estn enlazados por el
fumarato y la transaminacin del oxalacetato a aspartato.
La ornitina, un aminocido que no forma parte del
conjunto estndar de los 20 aminocidos y que no se
encuentra en las protenas, es el transportador de estos
tomos de nitrgeno y carbono. En el ciclo de la urea
intervienen cinco reacciones enzimticas (figura M3-1),
la primera de las cuales acontece en las mitocondrias y
las otras tres en el citosol:
1. La sintetasa de carbamoilfosfato, la cual no es un
miembro del ciclo de la urea desde el punto de vista
tcnico, cataliza la condensacin y activacin del
amoniaco (desde la desaminacin oxidativa del glu-
tamato por la deshidrogenasa de glutamato; seccin
M2) y CO2 (en la forma de bicarbonato, HCO3) para
formar carbamoilfosfato. La hidrlisis de dos mol-
culas de ATP convierte a esta reaccin en esencial-
mente irreversible.
2. La segunda reaccin tambin sucede en las mito-
condrias e incluye la transferencia del grupo carba-
moilo procedente del carbamoilfosfato a la ornitina
por la accin de la transcarbamoilasa de ornitina.
Esta reaccin forma otro aminocido no estndar, la
citrulina, el cual debe ser transportado fuera de la mi-
tocondria hacia el citosol, donde tienen lugar las res-
tantes reacciones del ciclo.
3. A continuacin, la citrulina se condensa con aspar-
tato, la fuente del segundo tomo de nitrgeno de la
urea, por la accin de la enzima sintetasa de argi-
ninosuccinato para formar argininosuccinato. La
reaccin es dirigida por la hidrlisis del ATP a AMP y
PPi, con la hidrlisis subsecuente del pirofosfato. En
consecuencia, los dos enlaces de alta energa del ATP
acaban por dividirse.
4. La argininosuccinasa retira entonces el esqueleto
de carbono del aspartato del argininosuccinato en la
forma de fumarato, lo que conduce al tomo de nitr-
geno en otro producto, la arginina. Como el ciclo de
M3CICLO DE LA UREA 345
Cetocido
Transaminacin
Aspartato Aminocido
Oxalacetato
Arginino-
succinato
Malato
Fumarato
la urea tambin produce arginina, este aminocido
se clasifica como no esencial en los organismos ureo-
tlicos. La arginina es el precursor inmediato de la
urea.
5. Entonces se forma la urea a partir de la arginina por
accin de la arginasa con la regeneracin de ornitina.
Acto seguido, la ornitina es llevada de regreso a la
mitocondria lista para combinarse con otra molcula
de carbamoilfosfato.
Enlace con el ciclo del cido ctrico
La sntesis de fumarato por la argininosuccinasa enlaza
al ciclo de la urea con el ciclo del cido ctrico (figura
M3-2). El fumarato es un intermediario de este ltimo
ciclo, el cual es entonces hidratado a malato, que a su
vez es oxidado a oxalacetato (seccin L1).
El oxalacetato tiene diversos destinos posibles:
z Transaminacin a aspartato (seccin M2), el cual
luego puede alimentar otra vez el ciclo de la urea.
z Condensacin con acetil-CoA para formar citrato, el
cual luego contina en una nueva ronda del ciclo del
cido ctrico (seccin L1).
z Conversin en glucosa a travs de la gluconeognesis
(seccin J4).
z Conversin en piruvato.
Hiperamonemia
Por qu los organismos necesitan destoxificar el amo-
niaco en primer lugar? La respuesta a esta pregunta
es obvia cuando se considera qu sucede si se pro-
duce un bloqueo en el ciclo de la urea debido a una
enzima defectuosa. Cualquier bloqueo de las enzimas
del ciclo de la urea conduce a un incremento en la can-
tidad de amoniaco en la sangre, lo que se denomina
346 SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

NH3 NH3

Cetoglutarato Glutamato Glutamina

Deshidrogenasa Sintetasa
de glutamato de glutamina

Figura M3-3. El exceso de amoniaco lleva a la

formacin de glutamato y glutamina.

hiperamonemia. La causa ms comn de tal bloqueo es El ciclo del metilo activado

un defecto gentico que se hace aparente poco despus
del nacimiento, cuando los lactantes afectados se vuel-
ven letrgicos y presentan vmitos peridicos. Si se deja
sin tratar, lo que sigue es un coma y un dao cerebral
irreversibles. Las razones de esto no se comprenden del
todo, pero pueden deberse a que el exceso de amoniaco
conduce a una formacin incrementada de glutamato y
glutamina (figura M3-3) (seccin M1). Estas reacciones
conducen al agotamiento del intermediario cetogluta-
La S-adenosilmetionina sirve como un donador de gru-
pos metilo en numerosas reacciones biolgicas [p. ej.,
en la formacin de creatina fosfato (vase antes) y en
la sntesis de cidos nucleicos]. Es formada a travs de la
accin del ciclo del metilo activado (figura M3-5). Durante
+
NH 2

rato del ciclo del cido ctrico, el cual puede entonces H2N C NH
comprometer la produccin de energa, en especial en CH2
el cerebro. Esto tambin condiciona un incremento de
CH2
los aminocidos cidos glutamato y glutamina, lo cual
puede causar dao directo al cerebro. CH2
+ CICLO DE
H3N CH COO LA UREA

Formacin del xido ntrico Arginina

+
El gas xido ntrico (NO), un radical libre de corta vida, es H3N CH2 COO
producido a partir de la arginina en una reaccin com- Glicina
Ornitina
pleja que cataliza la sintasa de xido ntrico (NOS). El NO
acta al unirse y activar la ciclasa de guanilato, la cual +
NH2
participa en la transduccin de seales (seccin E5). El
NO es producido por clulas endoteliales en respuesta
H2N C NH CH2 COO
a numerosos agentes y condiciones fisiolgicas, induce Guanidinoacetato
la dilatacin de las arterias y es responsable, entre otras
S-adenosil-
cosas, de la ereccin del pene.
metionina
S-adenosil-
Formacin de creatina fosfato homocistena
+
El ciclo de la urea es tambin el punto de arranque para NH2
la sntesis de otro metabolito importante, la creatina
H2N C N CH2 COO
fosfato. Este fosfgeno provee un reservorio de fosfato
de alta energa en las clulas musculares (seccin B5) ya CH3

que la energa liberada por su hidrlisis es mayor que Creatina

la liberada por la hidrlisis del ATP (G de la hidrlisis
de la creatina fosfato = 10.3 kcal mol1 comparado con ATP Cinasa de
7.3 kcal mol1 en el caso de la hidrlisis del ATP, seccin creatina

D2). El primer paso en la formacin de creatina fosfato ADP

es la condensacin de la arginina y la glicina para for-
+
mar guanidinoacetato (figura M3-4). En esta reaccin se O NH2
H
libera ornitina y luego puede ser reutilizada en el ciclo O P O N C N CH2 COO
de la urea. A continuacin, el guanidinoacetato es meti-
O CH3
lado con un grupo metilo que dona la S-adenosilmetio-
nina para formar creatina, la cual a su vez es fosforilada Creatina fosfato
por la cinasa de creatina para formar creatina fosfato
(figura M3-4). Figura M3-4. Formacin de creatina fosfato.
 M3CICLO DE LA UREA 347

PPi + Pi COO
+
H C NH3 CH3
activado
CH2
ATP
CH2

Adenosilo S CH3
+
S-adenosilmetionina
COO COO
+
+
H C NH3 H C NH3
CH2 CH2
CH2 CH2
S Adenosilo S
CH3 S-adenosilhomocistena
Metionina
COO
+
H C NH3

CH2
H2O
CH2

SH
CH3 Adenosilo

Homocistena

Figura M3-5. El ciclo del metilo activado.

la donacin de su grupo metilo a otro compuesto, la organismos ureotlicos por rotura de las bases pricas
S-adenosilmetionina se convierte en S-adenosilhomo- del DNA y el RNA (secciones F1 y G1). Algunos individuos
cistena. Para regenerar S-adenosilmetionina, se retira tienen un alto nivel srico de urato de sodio (la forma
el grupo adenosilo de la S-adenosilhomocistena para predominante de cido rico a pH neutro), el cual
formar homocistena. Acto seguido, la enzima metil- puede llevar a que los cristales de este compuesto pue-
transferasa de homocistena se encarga de metilar a esta dan depositarse en las articulaciones y los riones, una
ltima para formar metionina. Esta enzima es una de afeccin que se conoce como gota, un tipo de artritis
slo dos enzimas que contienen vitamina B12 encon- que se caracteriza por articulaciones en extremo dolo-
trada en los eucariotas. La metionina resultante es acti- rosas.
vada a S-adenosilmetionina con liberacin de los tres
O
fosfatos del ATP.
H
C N
HN C
cido rico C C
C O

O N N
El cido rico (figura M3-6) es el principal producto de H H
desecho del nitrgeno de los organismos uricotlicos
(reptiles, aves e insectos), pero tambin se forma en los Figura M3-6. cido rico.
SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

M4Hemos y clorofilas
Notas clave
Tetrapirroles
Biosntesis de hemos El punto de iniciacin de la sntesis de hemos y clorofilas es el cido aminole-
y clorolas vulnico (ALA), al cual elaboran los animales a partir de glicina y succinil-CoA
Degradacin del hemo El hemo es degradado por la oxigenasa de hemo a la biliverdina tetrapirrlica
Los tetrapirroles son una familia de pigmentos basados en una estructura qu-
mica comn que incluye los hemos y las clorofilas. Los hemos son tetrapirroles
cclicos que contienen hierro y que se encuentran de manera habitual como el
grupo prosttico de la hemoglobina, mioglobina y los citocromos. Las clorofi-
las son tetrapirroles modificados que contienen magnesio y que se presentan
como pigmentos aprovechadores de la luz y del centro de reaccin en la foto-
sntesis de las plantas, algas y bacterias fotosintticas.
por intermedio de la enzima sintasa de ALA. La deshidratasa de ALA cataliza una
reaccin que condensa dos molculas de ALA para formar porfobilingeno. La
desaminasa de porfobilingeno cataliza la condensacin de cuatro molculas
de porfobilingeno para formar un tetrapirrol lineal. Este compuesto se cicliza
para formar uroporfiringeno III, el precursor de los hemos, clorofilas y vitami-
na B12. Se producen modificaciones adicionales para formar protoporfirina IX.
Despus, la va biosinttica se ramifica y el hierro se inserta para formar hemo,
y el magnesio es insertado para comenzar una serie de conversiones que llevan
a la clorofila.
lineal. La reductasa de biliverdina convierte luego este pigmento verde en la
bilirrubina rojo-anaranjada. La lipfila bilirrubina es transportada en la sangre
unida a la albmina srica y luego convertida en el hgado en un compuesto
ms hidrosoluble al resultar conjugada con el cido glucurnico. El diglucu-
rnido de bilirrubina resultante se secreta en la bilis y al final se excreta en las
heces. La ictericia se debe a la impregnacin de una bilirrubina insoluble en la
piel y en la esclertica de los ojos. En las plantas ms grandes, el hemo es de-
gradado al fitocromo ficobiliprotena, la cual interviene en la coordinacin de
la respuesta a la luz, mientras que en las algas es metabolizada a los pigmentos
aprovechadores de la luz ficocianina y ficoeritrina.

Temas relacionados (B3) Mioglobina y hemoglobina (L2) Transporte de electrones y

(D5) Regulacin de la actividad fosforilacin oxidativa
enzimtica (L3) Fotosntesis
(L1) Ciclo del cido ctrico (M2) Metabolismo de los aminocidos

Tetrapirroles Los hemos (figura M4-1a) son un grupo diferente de

Los pigmentos hemo rojo y clorofila verde, tan impor-
tantes en los mecanismos productores de energa de la
respiracin y la fotosntesis, son miembros de la familia
de pigmentos denominados tetrapirroles. Comparten
estructuras similares (figura M4-1) y tienen algunos pa-
sos comunes en su sntesis y degradacin. La estructura
bsica de un tetrapirrol es de cuatro anillos pirrlicos
rodeando a un tomo metlico central.
pigmentos tetrapirrlicos que estn presentes como el
grupo prosttico de las globinas (hemoglobina y mio-
globina; seccin B3) y los citocromos (con inclusin de
aquellos que participan en el transporte de electrones
respiratorio y fotosinttico; secciones L2 y L3) y el cito-
cromo P-450 que interviene en las reacciones de destoxi-
ficacin. Algunas enzimas, como las catalasas y peroxi-
dasas, contienen hemo. En todas estas hemoprotenas,
la funcin del hemo es unirse y liberar un ligando de su

a)
CH3
CH3
N N
Fe
N N
CH3
COOH COOH
Hemo
Fitol CH2 CH
Figura M4-1. Estructura del a) hemo y b) la clorola.
tomo de hierro central, o que el tomo de hierro sufra
un cambio en su estado de oxidacin y libere o acepte un
electrn por su participacin en una reaccin redox.
Las clorofilas tambin son una familia diferente de
pigmentos, dado que existen en formas distintas en las
bacterias fotosintticas, algas y plantas mayores. Com-
parten una funcin comn en todos estos organismos
al actuar como pigmentos aprovechadores de la luz y
del centro de reaccin en la fotosntesis (seccin L3).
Esta funcin se logra mediante diversas modificaciones
a la estructura tretetrapirrlica bsica. stas incluyen: la
insercin del magnesio como el ion metlico central,
la adicin de un quinto anillo a la estructura tetrapi-
rrlica, la prdida de un doble enlace de uno o ms de
los anillos pirrlicos y la unin de una cadena lateral
especfica a una molcula larga similar a la de un cido
graso llamada fitol (figura M4-1b). Estos cambios dan a
las clorofilas y a las bacterioclorofilas diversas propie-
dades tiles. Por ejemplo, las clorofilas estn unidas a la
membrana, absorben luz en longitudes de onda mayo-
res que el hemo y son capaces de responder a la exci-
tacin por la luz. De esta forma, las clorofilas pueden
aceptar y liberar energa luminosa y dirigir el transporte
de electrones fotosinttico (seccin L3).
Biosntesis de hemos y clorolas
En los animales, hongos y algunas bacterias, el primer
paso en la sntesis de tetrapirroles es la condensacin
del aminocido glicina con succinil-CoA (un interme-
diario del ciclo del cido ctrico; seccin L1) para formar
cido aminolevulnico (ALA). La enzima sintasa de ALA
cataliza esta reaccin (figura M4-2a), la cual requiere la
coenzima fosfato de piridoxal (seccin M2) y se loca-
liza en las mitocondrias de los eucariotas. Este paso
M4HEMOS Y CLOROFILAS 349
b)
CH3
CH3
N N CH3
Mg
N N
CH3 CH3
CH3
O
CO2CH3
O
O Fitol
Clorola
CH3 CH3 CH3
C CH2 (CH2 CH2 CH CH2)2 CH2 CH2 CH
CH3
obligado de la va est sujeto a regulacin. El hemo
inhibe por retroalimentacin la sntesis de la sintasa de
ALA (seccin D5). En las plantas, algas y muchas bacte-
rias hay una va alternativa para la sntesis de ALA que
incluye la conversin del esqueleto de cinco carbonos
del glutamato en una serie de tres pasos que llevan a
producir ALA. En todos los organismos, dos molculas de
ALA se condensan para formar porfobilingeno en una
reaccin catalizada por la deshidratasa de ALA (tambin
llamada sintasa de porfobilingeno) (figura M4-2a). La
inhibicin de esta enzima por el hierro es una de las
principales manifestaciones del envenenamiento por
hierro agudo.
Luego se condensan cuatro porfobilingenos de la
cabeza a la cola en una reaccin catalizada por la desa-
minasa de porfobilingeno para formar un tetrapirrol
lineal (figura M4-2b). Este tetrapirrol lineal unido a la
enzima se cicliza para formar uroporfiringeno III,
el cual presenta un ordenamiento asimtrico de las
cadenas laterales (figura M4-2b). El uroporfiringeno
III es el precursor comn de todos los hemos y cloro-
filas as como de la vitamina B12. La va contina con
algunas modificaciones ms a los grupos fijos al lado
externo de la estructura anular, para terminar por for-
mar protoporfirina IX (figura M4-2b). En este punto,
ya sea el hierro o el magnesio son insertados dentro de
la cavidad central, lo que fuerza a la porfirina a sinteti-
zar hemo o clorofila, respectivamente. A partir de aqu,
se producen otras modificaciones y al final los grupos
prostticos especializados de las porfirinas se fijan a sus
respectivas apoprotenas (la forma de la protena que
consiste slo en la cadena polipeptdica) para formar
la holoprotena funcional desde el punto de vista bio-
lgico.
350 SECCIN M METABOLISMO DEL NITRGENO

a) +
NH3 COO CO2 COO COO
H + + ALA
CH2 + CH2 CoA CH2 COO CH2

COO CH2 Sintasa de ALA CH2 Deshidratasa de ALA CH2 CH2
+
C S CoA C CH2 NH3 C C

O O C CH
CH2 N
Glicina Succinil-CoA -aminolevulinato H
(ALA) +
H3 N
Porfobilingeno

b) P A P A M
CO2H
CO2H
A P A P M Fe2+ Hemo
NH HN NH HN NH N
4 HO Mg 2+

NH HN NH HN N HN Clorola
N P A A A M M y
+ H
N H3 bacterioclorola
A P P P P P
Porfobilingeno Tetrapirrol lineal Uroporringeno III Protoporrina IX

A = CH2COOH
M = CH3
P = CH2CH2COOH

Figura M4-2. Va de la sntesis del hemo y la clorola: a) sntesis de porfobilingeno

a partir de glicina y succinil-CoA; b) sntesis de la protoporrina IX a partir del
porfobilingeno. A = CH2COOH; M = CH3; P = CH2CH2COOH.

La biosntesis del hemo se produce en primer lugar en reptiles y anfibios, este pigmento hidrosoluble es el
los eritrocitos inmaduros (85% de los grupos hemo del producto final de la degradacin del hemo y se excreta
cuerpo), con la parte restante en el hgado. Han sido directamente. En los mamferos, sin embargo, acontece
identificados diversos defectos genticos de la sntesis
Hemo
del hemo que dan origen a los trastornos llamados por-
firias. NADPH + O2
+ Oxigenasa de hemo
NADP + H2O
Degradacin del hemo CO
Fe3+
Los pigmentos biliares existen en los reinos vegetal
y animal y estn formados por la degradacin de la M V M P P M M V
estructura tetrapirrlica cclica del hemo. En los anima-
les, esta va es un sistema excretor a travs del cual el
hemo de la hemoglobina de los glbulos rojos envejeci- O N C N C N C N O
H H H H H H
dos y otras hemoprotenas es removido del cuerpo. En el
reino vegetal, sin embargo, el hemo es degradado para Biliverdina

formar pigmentos biliares, los cuales tienen su principal

funcin en la coordinacin de las respuestas a la luz en NADPH + H+
Reductasa de biliverdina
las plantas mayores (la ficobiliprotena fitocromo) y
NADP+
en el aprovechamiento de la luz en las algas (las ficobi-
liprotenas ficocianina y ficoeritrina).
M V M P P M M V

En todos los organismos, la degradacin del hemo

comienza con una reaccin que lleva a cabo una
O N C N C N C N O
enzima comn. Esta enzima, la oxigenasa de hemo, H H H H2 H H H
est presente sobre todo en el bazo y el hgado de los Bilirrubina
vertebrados, y produce la abertura oxidativa del anillo
del hemo para producir el pigmento biliar verde bili- Figura M4-3. Degradacin del hemo a los
verdina, un tetrapirrol lineal (figura M4-3). La oxige- pigmentos biliares biliverdina y bilirrubina.
nasa de hemo es un miembro de la familia de enzimas M = metilo (CH3); V = vinilo (CH=CH2);
del citocromo P-450 y requiere NADPH y O2. En las aves, P = propionilo (CH2CH2CH2OH).

una conversin adicional a la bilirrubina de color rojo
anaranjado; esta reaccin es catalizada por la reduc-
tasa de biliverdina (figura M4-3). El color cambiante de
un hematoma es un indicador visible de estas reaccio-
nes degradativas. La bilirrubina, como otras molculas
lipfilas del tipo de los cidos grasos libres, a continua-
cin es transportada en la sangre unida a la albmina
srica. En el hgado, su hidrosolubilidad se incrementa
por la conjugacin a dos molculas de cido glucur-
nico, un residuo azucarado que difiere de la glucosa
en que tiene un grupo COO en el carbono 6 en lugar
de un grupo CH2OH. El diglucurnido de bilirrubina
M4HEMOS Y CLOROFILAS 351
resultante se secreta en la bilis y luego en el intestino,
donde es metabolizado de manera adicional por las
enzimas bacterianas y excretado de esta manera en
las heces.
Cuando la sangre contiene cantidades excesivas de bili-
rrubina insoluble, stas se depositan en la piel y en las
esclerticas de los ojos, por lo cual resulta una decolora-
cin amarilla. Esta afeccin, llamada ictericia, es indica-
tiva de un deterioro de la funcin heptica, obstruccin
del conducto biliar, o una degradacin excesiva de los
eritrocitos.
Lecturas recomendadas
Si bien existen muchos libros de texto exhaustivos sobre bioqumica y biologa molecular, ninguno
de ellos puede satisfacer todas las necesidades. Por cuestiones subjetivas, los lectores pueden preferir
diferentes libros y, por tanto, los autores opinan que no sera de gran ayuda recomendar un libro por
encima de otro. En su lugar, se ofrece una lista de algunos de los ttulos lderes sobre el tema, cuya
lectura, por experiencia, resultaron de utilidad a sus alumnos.

Lecturas generales
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. y Walter, P. (2007) Molecular Biology of the Cell,
5a. ed., Garland Science, Taylor & Francis Group, Nueva York.
Berg, J.M., Tymoczko, J.L. y Stryer, L. (2006) Biochemistry: International Edition, 6a. ed., W.H. Free-
man and Company, Nueva York.
Brown, T.A. (2006) Genomes 3, 3a. ed., Garland Science, Taylor & Francis Group, Nueva York.
Lodish, H., Berk, A., Kaiser, C.A., Krieger, M., Scott, M.P., Bretscher, A., Ploegh, H. y Matsudaira, P.
(2007) Molecular Cell Biology, 6a. ed., W.H. Freeman and Company, Nueva York.
Voet, D., Voet, J.G. y Pratt, C.W. (2008) Principles of Biochemistry, 3a. ed., John Wiley and Sons, Nueva
York.
Watson, J.D., Baker, T.A., Bell, S.P., Gann, A., Levine, M., Losick, R. e Inglis, C. (2007) Molecular Biology
of the Gene, 6a. ed., Pearson Education, San Francisco, CA.

Lecturas avanzadas
La siguiente seleccin de libros y artculos se recomienda para aquellos lectores que desean conocer
ms acerca de aspectos especficos. En muchos casos pueden ser demasiado avanzados para los
estudiantes de primer ingreso, pero son fuentes muy tiles de informacin en temas que pueden ser
objeto de estudio en los ltimos aos.

Seccin A
Bergeron, J.J.M., Au, C.E., Desjardins, M., McPherson, P.S. y Nilsson, T. (2010) Cell biology through
proteomics ad astra per alia porci. Trends Cell Biol. 20: 337-345.
Brunet, S., Thibault, P., Gagnon, E., Kearney, P., Bergeron, J.J.M. y Desjardins, M. (2003) Organelle
proteomics: looking at less to see more. Trends Cell Biol. 13: 629-638.
Egner, A. y Hell, S.W. (2005) Fluorescence microscopy with super-resolved optical sections. Trends
Cell Biol. 15: 207-215.
Leis, A., Rockel, B., Andrees, L. y Baumeister, W. (2009) Visualizing cells at the nanoscale. Trends Bio-
chem. Sci. 34: 60-70.
Lidke, D.S. y Wilson, B.S. (2009) Caught in the act: quantifying protein behaviour in living cells. Trends
Cell Biol. 19: 566-574.
Lundin, V.F., Leroux, M.R. y Stirling, P.C. (2010) Quality control of cytoskeletal proteins and human
disease. Trends Biochem. Sci. 35: 288-297.
McConnell, R.E. y Tyska, M.J. (2010) Leveraging the membrane cytoskeleton interface with myo-
sin-1. Trends Cell Biol. 20: 418-426.
Piston, D.W. y Kremers, G.-J. (2007) Fluorescent protein FRET: the good, the bad and the ugly. Trends
Biochem. Sci. 32: 407-414.
 LECTURAS RECOMENDADAS 353

Seccin B
Carugo, O. y Carugo, K.D. (2005) When X-rays modify the protein structure: radiation damage at work.
Trends Biochem. Sci. 30: 213-219.
Feige, M.J., Hendershot, L.M. y Buchner, J. (2010) How antibodies fold. Trends Biochem. Sci. 35: 189-
198.
Fitzkee, N.C., Fleming, P.J., Gong, H., Panasik Jr, N., Street, T.O. y Rose, G.D. (2005) Are proteins made
from a limited parts list? Trends Biochem. Sci. 30: 73-80.
Harding, C.V. y Neefjes, J. (2005) Antigen processing and recognition. Curr. Opin. Immunol. 17: 55-57.
Hirokawa, N. y Takemura, R. (2003) Biochemical and molecular characterization of diseases linked to
motor proteins. Trends Biochem. Sci. 28: 558-565.
Hogg, P.J. (2003) Disulphide bonds as switches for protein function. Trends Biochem. Sci. 28: 210-214.
Koonce, M.P. y Sams, M. (2004) Of rings and levers: the dynein motor comes of age. Trends Cell Biol.
14: 612-619.
Livk, F. y Petrie, H.T. (2001) Somatic generation of antigen-receptor diversity: a reprise. Trends
Immunol. 22: 608-612.
Manis, J.P., Ming Tian, M. y Frederick, W.A. (2002) Mechanism and control of class-switch recombina-
tion. Trends Immunol. 23: 31-39.
Royer Jr, W.E., Knapp, J.E., Strand, K. y Heaslet, H.A. (2001) Cooperative hemoglobins: conserved fold,
diverse quaternary assemblies and allosteric mechanisms. Trends Biochem. Sci. 26: 297-304.
Yildiz, A. y Selvin, P.R. (2005) Kinesin: walking, crawling or sliding along? Trends Cell Biol. 15: 112-120.

Seccin C
Brunet, S., Thibault, P., Gagnon, E., Kearney, P,. Bergeron, J.J.M. y Desjardins, M. (2003) Organelle
proteomics: looking at less to see more. Trends Cell Biol. 13: 629-638.
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Abreviaturas
E0 cambios en el potencial redox dNDP desoxirribonuclesido 5-difosfato
G0 cambio de la energa libre estndar de una dNMP desoxirribonuclesido 5-monofosfato
reaccin a pH 7 DNP 2,4-dinitrofenol
G energa libre de activacin de Gibbs dNTP desoxirribonuclesido 5-trifosfato
ACP protena transportadora de acilos DPE elemento promotor corriente abajo
ADP difosfato de adenosina DRE elemento de respuesta al cAMP
Ala alanina dsRNA RNA de doble cadena
ALA cido aminolevulnico dTTP desoxitimidina 5-trifosfato
AMP monofosfato de adenosina E energa
Arg arginina E 0 potencial redox estndar
Asn asparagina EC Comisin de Enzimas
Asp cido asprtico ECG electrocardiograma
ATC-asa carbamoiltransferasa de aspartato eIF factor de iniciacin eucariota
ATP trifosfato de adenosina ELISA ensayo por inmunoabsorcin ligado a
ATP-asa trifosfatasa de adenosina enzimas
bp par de bases ER retculo endoplsmico
BPG 2,3-bisfosfoglicerato EtP etanolamina fosfato
BSE encefalopata espongiforme bovina ETS espaciador del transcrito externo
bZIP protena bsica de la cremallera de leucina F-2,6-BP fructosa 2,6-bisfosfato
C tomo de carbono Fab unin al antgeno fragmentario
cAMP monofosfato de adenosina cclico FACS clasificador celular activado por
CAP protena activadora de catabolitos fluorescencia
cDNA DNA complementario FAD dinucletido de flavina y adenina
CDP difosfato de citidina FBPasa2 fructosa bisfosfatasa 2
CFP protena fluorescente azul FMN mononucletido de flavina
CFTR regulador de la conductancia FRAP recuperacin de la fluorescencia despus del
transmembrana de la fibrosis qustica fotoblanqueo
cGMP monofosfato de guanosina cclico FRET transferencia de energa por resonancia
CJD enfermedad de Creutzfeldt-Jakob fluorescente
CM carboximetilo G energa libre de Gibbs
CNBr bromuro de ciangeno GDP difosfato de guanosina
CoA acetilcoenzima A GEF factor de intercambio de nucletidos de
COPI protena de revestimiento guanina
CRP protena de respuesta al cAMP GFP protena fluorescente verde
CStF factor F de estimulacin de escisin GlcNAc N-acetilglucosamina
CTD dominio C terminal Gln glutamina
CTP trifosfato de citosina Glu cido glutmico
Cys cistena GLUT1 transportador o uniportador de glucosa
DAG 1,2-diacilglicerol eritrocitario
dATP desoxiadenosina 5-trifosfato Gly glicina
dCTP desoxicitidina 5-trifosfato GPCR receptor acoplado a la protena G
DEAE dietilaminoetilo GPI glucosilfosfatidilinositol
dGTP desoxiguanosina 5-trifosfato GTP trifosfato de guanosina
DIPF diisopropilfosfofluoridato H entalpa
DNA cido desoxirribonucleico HbA hemoglobina del adulto
358 ABREVIATURAS

HbF hemoglobina F NMR resonancia magntica nuclear

HbS hemoglobina de clulas falciformes NOS sintasa de xido ntrico
HDL lipoprotena de alta densidad Nt nucletido
His histidina ORC origen del complejo de replicacin
HIV virus de inmunodeficiencia humana ORF marco de lectura abierto
HLH hlice-asa-hlice ORT terapia de rehidratacin oral
HMG 3-hidroxi-3-metilglutarilo P presin
HMM meromiosina pesada PAGE electroforesis en gel de poliacrilamida
HPLC cromatografa lquida de alto desempeo PAP polimerasa poli(A)
Hsp protena de choque por calor Pc plastocianina
HTH hlice-giro-hlice PEP fosfoenolpiruvato
Hyl 5-hidroxilisina PFK fosfofructocinasa
Hyp 4-hidroxiprolina PH homologa con la pleckstrina
IDL lipoprotena de densidad intermedia Phe fenilalanina
IF factor de iniciacin pI punto isoelctrico
IgA inmunoglobulina A P1 fosfato inorgnico libre
IgG inmunoglobulina G PI 3-cinasa 3-cinasa de fosfatidilinositol
IgM inmunoglobulina M p constante de disociacin
Ile isoleucina P
A proteincinasa A
IP3 1,4,5-trisfosfato de inositol PP1 pirofosfato inorgnico
IPTG isopropiltiogalactsido Pro prolina
IRES sitio interno de entrada al ribosoma PSI fotosistema I
ITS espaciador del transcrito interno PSII fotosistema II
K constante de equilibrio PTB unin a fosfotirosina
b velocidad de reaccin inversa PTH feniltiohidantona
f velocidad de reaccin antergrada RER retculo endoplsmico rugoso
Km constante de Michaelis RFLP polimorfismo de longitud de los fragmentos
LCAT aciltransferasa de lecitina-colesterol de restriccin
LDH deshidrogenasa de lactato RIP protelisis intramembrana regulada
LDL lipoprotena de baja densidad RNA cido ribonucleico
Leu leucina RNA Pol polimerasa de RNA
LMM meromiosina ligera RNAi interferencia del RNA
Lys lisina RNP ribonucleoprotena
MALDI-TOF desorcin/ionizacin lser asistida por rRNA RNA ribosmico
matriz-tiempo-de-vuelo S entropa
MAP cinasa proteincinasa activada por mitgeno [S] concentracin del sustrato
Met metionina SDS dodecilsulfato de sodio
miRISC complejo de silenciamiento inducido por el SECIS secuencia de insercin de la selenocistena
miRNA
SE-Cys selenocistena
miRNA micro-RNA
SER retculo endoplsmico liso
miRNP microrribonucleoprotena
Ser serina
mRNA RNA mensajero
SH2 homologa Src 2
MS espectrometra de masa
SH3 homologa Src 3
MWC modelo de Monod-Wyman-Changeaux
sida sndrome de inmunodeficiencia adquirida
NAD+ dinucletido de nicotinamida y adenina
snoRNA RNA nucleolar pequeo
NADH dinucletido de nicotinamida y adenina
reducido snRNA RNA nuclear pequeo

NADP+ dinucletido de nicotinamida y adenina SREBP protena de unin al elemento regulador de

fosfato esteroles
NADPH dinucletido de nicotinamida adenina SRP partcula de reconocimiento de seal
fosfato reducido SSB unin al DNA de cadena simple
NAM cido N-acetilmurmico STR repeticiones cortas en tndem
NHP protena no histona T temperatura
 ABREVIATURAS 359

TBP protena de unin a la caja TATA trp opern del triptfano

TCA cido tricarboxlico Tyr tirosina
TFII factor de transcripcin de la polimerasa de U unidad enzimtica
RNA II UBF factor de unin corriente arriba
TFIID factor de transcripcin IID UCE elemento de control corriente arriba
TFIIIA factor de transcripcin A de la polimerasa de UDP uridina disfosfato
RNA III UTP uridina 5-trifosfato
TFIIIC factor de transcripcin IIIC UTR regin sin traducir
TGF- factor de crecimiento transformante UV ultravioleta
Thr treonina V volumen
Tris tris(hidroximetil)aminometano Val valina
tRNA RNA de transferencia VLDL lipoprotena de muy baja densidad
Trp triptfano YFP protena fluorescente amarilla
ndice alfabtico
A renaturalizacin, 232
ABC,transportadores, 117
Abierto, complejo promotor, 157, 170-171
Accidente vascular cerebral, 303, 310
Acetil-CoA, carboxilasa de, 295, 297, 298,
301, 302, 306
Acetilcolina, 120, 132, 135
Acetilcolinesterasa, 135, 194
Acetoacetato, 288, 292, 293, 338, 342
Acetona, 288, 292
Acidobsico, par, conjugado, 20, 23
cidos grasos, cadenas en esfingolpidos,
103, 104-105
esenciales, 297
estructura y propiedades, 285-286
funciones, 285, 286-287
monoinsaturados, 285
nomenclatura, 285, 286
oxidacin . Vase cidos grasos,
degradacin de
poliinsaturados, 285, 291
prostaglandinas, 285, 287
cidos grasos, degradacin de, 288-293
activacin, 288-289
de cidos grasos, 288, 289
cuerpos cetnicos, 288, 292
descripcin, 288, 289
detalles de las reacciones, 289, 290
oxidacin de cidos grasos
de cadena impar, 288, 292
insaturados, 288, 291-292
participacin de la carnitina, 288, 289
produccin de energa, 289, 292
regulacin, 288, 292
transporte en las mitocondrias, 288, 289
va de oxidacin , 288, 289-291
va del glioxilato, 291
cidos grasos, sntesis, 294-298
descripcin, 294, 295
estequiometra, 297
formacin de los dobles enlaces, 294,
297
reacciones, 294, 295
regulacin, 294, 297-298
transporte en el citosol, 294, 295
cidos nucleicos, hibridacin, 232-235
chips de DNA, 290, 232, 234-235
desnaturalizacin, 232
hibridacin in situ, 232, 234
medicin de la concentracin de la
secuencia objetivo, 232
microordenamientos de DNA, 232,
234-235
Northern blotting, 232, 233-234
reaccin de hibridacin, 232, 233
reasociacin, 232
rigurosidad, 232
sondas de DNA, 232, 233, 234
Southern blotting, 232, 233
temperatura de fusin, Tm, 232
Tm, 232
uso de disoxigenina, 232
Acilcoenzima A (acil-CoA), 292, 299, 322
sintasa, 289
Acilo, protena transportadora (ACP), 294,
295
Aciltransferasa de colesterol (ACAT), 309
Acoplamiento, 316, 324
Acrilamida, 67
Actina, 5, 7, 27, 47, 49, 50-51, 111
Adelantada, cadena, 145, 147, 150, 151
Adenilacin, 101
Adenilato, ciclasa de, 281, 283, 301
cinasa de, 267
Adenosina, difosfato de. Vase ADP
monofosfato de. Vase AMP
trifosfato de. Vase ATP
ADP, 89
ribosilacin de, 101
Adrenalina, control de degradacin del
triacilglicerol, 286, 288, 299, 301
control de metabolismo del glucgeno,
281-282
control de sntesis de cidos grasos, 297
Afinidad, cromatografa de, 61, 64-65
Agarosa, gel, electroforesis en, 227, 229, 230
Agrobacterium tumefaciens, 141
Alcalina, fosfatasa, 19
Alcaptonuria, 338, 342
Alcohlica, deshidrogenasa, 96
Aldosas, 252, 253, 256, 261
Aldosterona, 307c
, hlice, 26, 29
Alisina, 42, 46
Almidn, estructura, 257, 258
sntesis, 327, 331
35-AMP cclico. Vase cAMP
Alosteria. Vase Alostrica, regulacin
Alostrica, regulacin, 99
modelo concertado (simetra), 98, 99
modelo de Monod-Wyman-Changeaux,
98
modelo de simetra (concertado), 98, 99
modelo secuencial, 99
Alostrico, activador, 97, 99, 100
inhibidor, 97, 99, 100
Alzheimer, enfermedad de, 26
Amiloide-, pptido, 35
Aminocidos, 20
aminocidos estndar, 20, 21-22
biosntesis, 338, 339
cetognicos, 338, 339
curva de titulacin, 20, 24
degradacin, 338-339
enantimeros, 20, 21
esenciales, 338, 339
estructura, 20-25
glucognicos, 338, 339
ionizacin, 21, 23, 24
metabolismo, 338-342
no esenciales, 338, 339
oxidasas, 338, 341-342
pesos moleculares, 27
valores pK, 20, 23-25
Aminocidos, degradacin, 338-339.
Vase tambin Urea, ciclo
desaminacin del glutamato, 338, 341
errores congnitos del metabolismo,
338, 342
fosfato de piridoxal, 338, 340-341
metabolismo de la fenilalanina, 338, 342
transaminacin, 338, 339
va de las oxidasas de aminocidos, 338,
341-342
Aminoazcares, 252, 255
Aminolevulnico, cido (ALA), 348, 349
sintasa de, 348, 349
Amital, 316, 322
Amoniaco, 337, 338, 341, 343, 344
excrecin, 343, 344
Amonio, sulfato, precipitacin, 60, 62
Amoniotlicos, 343, 344
Amortiguadores, 20, 24
AMP, 89
Andrgenos, 303, 307
Anemia, falciforme, 40
perniciosa, 85
Angina, 126
Angiotensina, enzima convertidora de, 95
Aniones, intercambio de, protena de
banda, 3, 111
Anmeros, 252, 255
Anquirina, 111
Anticongelante, envenenamiento por, 96
Anticuerpos. Vase tambin Inmunitario,
sistema; Anticuerpos, sntesis
cadenas, ligeras, 54, 56
pesadas, 54, 56
clases, 54, 57-58
cromatografa de afinidad, 61, 64-65
determinante antignico, 77
dominios, 54, 56
ELISA, 77, 78
eptopo, 54, 58, 77
estructura, 54-59
fragmento F(ab)2, 54, 56, 57
fragmento Fc, 54, 56-57
fragmentos Fab, 54, 56
IgA, 54, 58
 NDICE ALFABTICO 361
IgD, 54, 58 Azcares, 252-256. Vase tambin cAMP, elemento de respuesta al, 174
IgE, 54, 58 Monosacridos fosfodiesterasa de, 284
IgG, 54, 57 derivados del azcar, 256 protena de respuesta al, 160, 163
IgM, 54, 57 enlaces glucosdicos, 255 proteincinasa dependiente de, 130, 283,
inmuno (western) blotting, 79-80 nomenclatura, 256 297, 299, 301
inmunocitoqumica, 77 segundo mensajero, 125, 129, 130, 301
inmunodeteccin, 77 Canales, 116
mtodos, 77-80 B inicos, ligados a receptores, 124, 128
inmunoelectrnica, microscopia, 77 sensibles al voltaje, 133-134
inmunofluorescente, microscopia de luz, -Aminopropionitrilo, 46 Carbamoilfosfato, 343, 344, 345
77 B, linfocitos, 54, 55, 58 sintetasa de, 345
monoclonales, 54, 58 Bacterias. Vase tambin Replicacin del Carbnica, anhidrasa, 39
policlonales, 54, 58 DNA en bacterias; Transcripcin Cardiolipina. Vase Fosfatidilglicerol
recombinacin somtica, 54, 58. Vase en eucariotas; Transcripcin Cardiotnicos, esteroides, 118
tambin Anticuerpos, sntesis en procariotas; Traduccin Cardiovascular, enfermedad, 303
regiones, constantes, 59 en eucariotas; Traduccin en Carnitina, 288, 289
hipervariables, 56 procariotas aciltransferasa de, 289
marco, 56 clasificacin, 3 translocasa de, 288, 289
variables, 56 estructura, 1-3 Carotenoides, 326-328
sntesis, 54, 58-59 flagelos, 1, 3 Caspasa, 101
unin de antgenos, sitios, 54, 56 gramnegativas, 3 Casquete o caperuza, formacin, en el
uso de un segundo anticuerpo, 78 grampositivas, 3 mRNA, 179, 181-182
Western blotting, 79-80 pared celular, 2-3 Catabolitos, protena activadora de (CAP),
Anticuerpos, sntesis, 54, 58-59 Bacteriorrodopsina, 110 160, 163
cambio de clase, 59 Baja densidad, lipoprotenas (SDF), receptor represin de, 160, 163
recombinacin somtica, 58 de, 123, 186, 308, 309 Catalasa, 4, 7, 12, 19
unin DJ, 59 Bases, DNA, 136, 138 Cataltico, RNA, 184, 193
unin VDJ, 59 RNA, 154, 156 Catepsina C, 19
unin VJ, 59 Basolateral, membrana, 115, 118 cDNA, bibliotecas, 236, 237-239
Antgeno, 65 Bicapa lipdica, 2, 103, 105-106, 109, 110, expresin, 236, 239
Antimicina A, 316, 322 113 microordenamientos de DNA y, 323, 325
Anti-SD, secuencia, 206 Bidimensional, electroforesis en gel, Clula nerviosa, canales inicos con
Apical, membrana, 115, 118 66, 69 compuerta de voltaje, 169-170
Apolipoprotenas, edicin de premRNA, Biliar, conducto, 351 estructura, 168-169
190 Biliares, pigmentos, 350 periodo refractario, 171
Apoptosis, 97, 101 sales, 301, 303, 306, 310 permeabilidad, 169
Araquidnico, cido, 105, 126 Bilirrubina, 348, 351 potencial de accin, 168, 169
Arginasa, 344, 345 Biliverdina, 348, 350 Celular, divisin, 5, 8, 9, 10
Argininosuccinasa, 345 reductasa de, 348, 351 estructura, eucariota, 4-8
Argininosuccinato, 343, 345 Bigenas, aminas, 124, 126, 132, 135 procariota, 1-3
Arqueobacterias, 1, 2 Biotina, 271, 272, 294, 295 sealizacin, 103-135
DNA, 141 Bohr, efecto de, 39 Celulosa, 5, 8, 257, 258
Artritis, 347 Borrelia burgdorferi, 141 Centrifugacin, gradiente de densidad de
Ascrbico, cido. Vase Vitamina, C Botulnica, toxina, 122 equilibrio, 16, 18-19
Aspartame, 342 Bromofenol, azul, 67 velocidad diferencial, 16, 18
Aspartato, transcarbamoilasa, 97, 99 Centrosoma, 8
Aspirina, 94, 126, 285, 287 Cepillo, membrana con borde en. Vase
Atenuacin, 161, 163-164 C Apical, membrana
Ateroesclerosis, 308, 310 Cerrado, complejo del promotor, 157
Ateromas, 308, 310 Ca2+, activacin de la proteincinasa C, 130 Cesio, cloruro, 19
ATP-asa, Ca2+, 113-114, 130 ATP-asa de, 113, 116, 130 Cetognesis, 292
contraccin-relajacin del msculo, 49 cinasas de protena dependientes de Cetnicos, cuerpos, 264, 292-293
F0F1, 3, 316, 322 calmodulina-Ca2+, 131 Cetosas, 252, 253
Na+/K+, 115, 117-118 como segundo mensajero, 130 cGMP, como segundo mensajero, 125, 130
tipo P, 115, 117 contraccin muscular y, 51, 281, 284 Chaperonas, 216, 218
ATP, ATP-asa F0F1, 3, 316, 322 control del metabolismo del glucgeno moleculares, 26, 35
estructura, 89 y, 281 Chlamydomonas, 144
sintasa de, 316, 322-323, 328, 330, 323 protenas de unin de, 130-131 Cianobacterias, 2, 327, 330, 335
sntesis. Vase Oxidativa, fosforilacin; transduccin de seales, 159 Ciangeno, bromuro de, 71, 72
Sustrato, fosforilacin a nivel de transporte, 115, 116 Ciclo celular, eucariotas, 9, 10, 150
Autoempalme del RNA, 184, CAAT, caja, 172, 174 procariotas, 9
Autorradiografa, 66, 70, 77, 80 Cadena, terminacin, secuenciacin del Ciclosporina A, 35
Axn, 132, 133 DNA y, 240-241, 242 Cilios, 48, 52, 53
montculo, 133 Calmodulina, 125, 130-131 Cimgenos, 101
Axonema, 52, 53 Calor, protenas de choque por, 35 Cinesinas, 47, 51-52
Azida, 316, 322 Calvin, ciclo de, 327, 331, 332, 333 Citocinas, receptores de, 126-127
362 NDICE ALFABTICO

Citocinesis, 10 Colchicina, 5, 8 Desnaturalizacin, enzimas, 24, 90, 92

Citocromo bf, complejo, 326, 327, 328,
329
Citocromo b6f, complejo, 326, 329
Citocromo P-450, 346, 350
Citocromos, 348
Citoesqueleto, 5, 7-8
Citosol, 4, 7
Ctrico, ciclo del cido, 311-314
deshidrogenasa de -cetoglutarato,
regulacin, 313
deshidrogenasa de isocitrato,
regulacin, 313-314
deshidrogenasa de piruvato, regulacin,
313-314
funcin, 311, 312
localizacin, 311, 312
pasos de la reaccin, 312-313
produccin de energa, 311, 313
provisin de precursores de vas
biosintticas, 314
regulacin, 311, 313-314
sintasa de citrato, regulacin, 313-314
Citrulina, 343, 345
Clase I o clase II, aminoacilsintetasa, 204,
205-206
Clatrina, cavidades revestidas, 120, 121, 123
endocitosis mediada por el receptor, 120,
122-123
vesculas revestidas, 120, 121, 123
Clorofila, 7, 326, 328
Cloroplasto, 4, 7, 16, 18, 140, 144, 166, 167,
184, 213, 218, 326, 328, 330, 331, 333
genoma del, 144
Cobalamina, 85
Cdigo gentico, 199-203
anticodones, 199, 201
cdigo de tripletes, 199, 200
codn, de iniciacin, 199, 200
de terminacin, 199, 200
codones, 199, 200, 202
de detencin, 200
con sentido, 202
colineal, 200
degeneracin, 199, 201-202
marcos de lectura, 199, 202
abiertos, 199, 203
mutacin puntual, 202
pareos de bases tambaleantes, 202
secuencia de protenas deducida, 203
sinnimos, 199, 202
superposicin de genes, 199
tRNA de isoaceptacin, 199, 202
universalidad, 199, 202
Colgena, 42-46
agregacin, 42, 45
biosntesis, 42, 43-44
composicin, 42, 44
entrecruzamientos, 42
estructura, 42, 44-45
funcin y diversidad, 42, 43
hlice, 42, 44, 45
modificacin postraduccin, 42, 43, 44
pptidos de extensin, 42, 44
procolgena trihelicoidal, 42
secrecin y agregacin, 42, 45
Colecalciferol, 306
Clera, toxina del, 130
Colesterol, 103, 303-307
biosntesis, 304-306
endocitosis mediada por receptor del,
103, 122-123
excrecin, 306
fluidez de la membrana y, 103, 107
funciones, 303
regulacin de la biosntesis, 303, 306
sntesis, de hormonas esteroideas, 303, 307
de vitamina D, 303, 306
Colil-CoA, 306
Colonia, levantamiento de, 238
Complementariedad geomtrica, 82
Conector, DNA, 140, 142
Congelada, fractura, tcnica de, 112
Congnitos, errores del metabolismo, 338,
342
Coomassie, azul brillante, 66, 70
COPI, 120, 122
Cori, ciclo de, 269, 274
Cortisol, 303
Creatina, cinasa de, 86
formacin de fosfato, 343, 346
Crestas, 4, 6
Crioelectrnica, microscopia, 15
Cromatina, 142. Vase tambin
Cromosomas
estructura superior, 143
Cromatografa, afinidad, 61, 64, 65
filtracin por gel, 60, 62-63
inmunoafinidad, 61, 65
interaccin hidrfoba, 61
intercambio de iones, 60, 63-64
lquida de alto desempeo (HPLC), 72
Cromosomas, eucariotas, protenas de
andamiaje, 141, 144
asas radiales, 142, 144
comparacin con cromosomas
procariotas, 5
cromatina, 142
fibra de 30 nm, 140, 143
genomas de los organelos, 140, 144
histonas, 140, 142
interfase, 140, 142
matriz nuclear, 144
modelo en zigzag, 143
modelo solenoide, 143
nucleosomas, 140, 142-143
octmero de histonas, 141
protenas no histonas, 142
relacin de empaque, 143
replicacin, 150-153
Cromosomas, procariotas, 140, 141-142
C terminal, dominio (CTD), de la polimerasa
II de RNA, 168, 171, 179, 181
Cultivo celular, 9
D
D-3-Hidroxibutirato, 292
Dansilo, cloruro, 71, 72
Desacoplantes, 316, 324
PCR, 243, 250
protenas, 92
Desoxirribionuclesidos, 136, 137
Desoxirribonucletidos, 136, 137
Deteccin, bibliotecas de DNA, 236, 238, 239
enfermedades genticas humanas, por
PCR, 243, 245
Detergente, solubilizacin de protenas de
membrana, 60, 61, 108, 113
uso de SDS en SDS-PAGE, 66, 67-68
Dextrano, 257, 258
Diabetes, 292
1,2-Diaciglicerol, 125
Dilisis, 62, 65
Digitalina, 115, 118
Dihidrobiopterina, 342
Dihidrofolato, reductasa de, 95
Diisopropilfosfofluoridato (DIPF), 94
Dinamina, 123
Dinena, 48, 52-53
2,4-Dinitrofenol, como desacoplador, 316,
324
Direccionamiento de protenas
mitocondriales, protenas hsc60 y
hsc70, 218
protenas Tim, 218
protenas Tom, 218
Disacridos, 252, 255
Disulfuro, enlace, 20, 22, 29, 33
Ditiotreitol, 67, 73
DNA, bibliotecas, 236, 237-238
chips, 232, 234-235
microordenamientos, 232, 234-235
DNA, clonacin, 236-239
bibliotecas de cDNA, 236, 237-238
genmico, 237
deteccin de bibliotecas de DNA, 236,
238-239
expresin de la biblioteca de cDNA,
236, 239
levantamiento, de colonia, 238
de placa, 239
pasos bsicos participantes, 236, 237
principios de, 236, 237
rplica de la placa, 238
transfeccin, 237
vector de expresin, 239
DNA, organizacin, eucariotas, 140, 142
procariotas, 140, 141-142
DNA, polimerasa I de, 145-146
polimerasa II, 145, 146
polimerasa III, 145, 146, 147, 148
DNA genmico, bibliotecas, 236, 237
DnaA, protena de reconocimiento del
origen, 146
DnaB, 146, 148
Doble hlice, 138-139
Dolicolfosfato, 220, 221
Dopamina, 135
E
Edman, degradacin de, 71, 72
Ehlers-Danlos, sndrome de, 46

Eicosanoides, 285, 287
Elastasa, 82, 83, 101
Electrones, transporte, 315-325
acoplamiento, 316, 324
amital, 316-322
antimicina A, 316, 322
ATP-asa F0F1, 316, 322
azida, 316, 322
centro de 2Fe2C de Rieske, 319
cianuro, 316, 322
ciclo Q, 319
citocromo b, 315, 319
citocromo c, 315, 320
citocromo c1, 315, 320
complejo I, 318, 322
complejo II, 318, 321
complejo III, 318, 319-320
complejo IV, 318, 320, 321
control respiratorio, 316, 324
desacoplamiento en el tejido adiposo
pardo, 324
desacoplantes, 316-317, 324
descripcin, 315, 317
desde el FADH2, 321-322
desde el NADH, 315, 318-320
2,4-dinitrofenol, como desacoplante,
316, 324
formacin del gradiente de H+, 315, 322
fosforilacin oxidativa, 316, 322
fuerza protn motriz, 322
gradiente electroqumico de protones,
322
hiptesis quimiosmtica, 316, 322
lanzadera, de glicerol 3-fosfato,
317, 324
de malato-aspartato, 317, 325
monxido de carbono como inhibidor,
216, 322
oxidasa del citocromo c, 315, 320, 321
oxidorreductasa, de NADH-Q, 315, 318
de Q-citocromo c, 315, 318, 319
potencial redox, 315, 317-318
estndar, 315, 317
protenas de fierro-azufre, 318, 319
reductasa de succinato-Q, 321
rotenona, 316, 322
sintasa de ATP, 316, 322
termogenina, 316, 324
ubiquinona, 315, 318
Electrnica, microscopia, 11, 14-15
ELISA, 77, 78-79
sndwich de, 77, 78
Empacamiento, relacin de, del DNA en los
cromosomas, 142, 143
Empalme, factores del, 183
Empalme del pre-mRNA, 179-182-183
Encefalinas, 135
Endocitosis, 5, 7, 120, 122
mediada por receptor, 120, 122-123
Endosimbitica, teora, 167
Endosoma, 120, 123, 218
Endosomas iniciales, 123
Energa libre, 87, 88
Entalpa, 88
Enteropeptidasa, 101
Entropa, 88
Enzima, 81-86
actividad especfica, 91
alostrica, 97, 98
apoenzima, 85
cambio de energa libre, 87, 88-89
catalizadores, 81, 82
cintica, 90
clasificacin, 81, 83
coenzimas y grupos prostticos, 81, 84-86
cofactores, 84
complejo enzima-sustrato, 82
desnaturalizacin, 90
energa de activacin y estado de
transicin, 87, 88
ensayo, 81, 83-84
especificidad del sustrato, 81, 82-83
grfica de Lineweaver-Burk, 90, 93
grupos prostticos, 81, 84-86
holoenzima, 85
inhibicin por retroalimentacin, 91
inhibidor, 93
isoenzimas, 86
modelo, de ajuste inducido, 82
de cerradura y llave, 82
de Michaelis-Menten, 90, 92-93
nomenclatura, 83
pH ptimo, 86, 92
sitio activo, 81, 82
temperatura, 91-92
termodinmica, 87-88. Vase tambin
Termodinmica
unidades enzimticas, 91
velocidad de la reaccin inicial, 84
Eosina, 12
Epmeros, 254
Equilibrio, constante de, 23, 89
Escorbuto, 44, 85
Escualeno, 303, 304
Esfingolpidos, 103, 104, 285
Esfingomielina, 103, 104, 106, 108, 113, 132
Espectrina, 111
Espliceosomas, 179, 181, 183, 184
Esquelticas, deformidades, 45
Estatinas, 306, 310
Estearato, 103, 104-105
Estereoismeros, aminocidos, 22
monosacridos, 252, 253
Esteroideas, hormonas, clases, 307
control de la transcripcin, 174
receptores, 174, 175
sealizacin por, 124, 126
sntesis, 126, 303, 307
transporte a travs de las membranas,
115, 116, 124, 126
Esteroles, 103, 104
Estrgeno, 126
Estroma, 4, 7
Estrona, 307
Estructura del DNA, bases del DNA, 136
desoxirribonuclesidos, 136, 137
desoxirribonucletidos, 136, 137
disposicin antiparalela, 139
doble hlice, 136, 138-139
enlaces 35-fosfodister, 136, 137
nuclesidos, 136
nucletidos, 136-137
NDICE ALFABTICO 363
pareamiento de bases, 139
pirimidinas, 136, 139
purinas, 136, 139
secuencia de bases, 138
Eubacterias, 1, 2
Exocitosis, 4, 5, 120, 121-122, 135, 214
Exones, corte y empalme alternativo, 180,
185
descripcin, 168
unin por corte y empalme del RNA, 181,
182
F
FAD, 86
Fagocitosis, 57, 120, 122
Fagosoma, 120, 122
Falciforme, anemia por clula, 40, 41, 231
Farnesilo, 111
pirofosfato, 111
Fenilalanina, hidroxilasa de, 338, 342
Fenilcetonuria, 338, 342
Feniltiohidantona, aminocidos, 72
Fermentacin alcohlica, 260, 264, 265
Ferredoxina, 326, 329
Fibra de 30 nm, 140, 143
Fibrosis qustica, 117
Ficobilinas, 328
Ficocianina, 348, 350
Ficoeritrina, 348, 350
Filamentos, flagelares, 3
intermedios, 8
microfilamentos, 7-8
microtbulos, 8
Fitocromo, 348, 350
Fitol, 349
Flagelina, 1, 3
Flagelos, 1, 3, 48, 52
Flavina, mononucletido de. Vase FMN
Flavina y adenina, dinucletido de. Vase
FAD
Flujo, citometra de, 16-17
Flujo de ATP y ADP a travs de la membrana
mitocondrial interna, 316,
323-324
sintasoma de ATP, 324
translocasa de ATP-ADP, 323
transportador de fosfato, 324
Fluorescamina, 71, 72
Fluorescena, 11, 13, 77
Fluorescencia, clasificador celular activado
por, 16, 17
microscopia de, 13, 15
recuperacin, despus del fotoblanqueo
(FRAP), 11, 14, 108, 112
FMN, 86
Fosfatasa cida, 19
Fosfatdico, cido, 299, 300, 301
Fosfatidilcolina, 103, 104, 105, 106
Fosfatidiletanolamina, 103, 104, 105, 106
Fosfatidilglicerol, 104
Fosfatidilinositol, 104, 105, 110, 127
4,5-bisfosfato, 130
3-cinasa de, 127
Fosfatidilserina, 103, 104, 105, 106
364 NDICE ALFABTICO
35-Fosfodister, enlaces, 136, 137, 138,
145, 146, 148
Fosfoglucolato, 327, 333
Fosfogluconato, va. Vase Pentosa fosfato,
va
Fosfolipasa C, 125, 130, 131
Fosfopantetena, 295
Fosforilacin/desfosforilacin, 311, 314
Fosfotirosina, dominios de unin de, 127
Fotosntesis, 326-334
aprovechamiento de la luz en plantas de
hojas verdes, 326, 328
bacterias, 327, 330-331
carotenoides, 326, 328
centro de reaccin fotosinttica, 326, 327,
328
ciclo de Calvin, 327, 331, 332, 333
clorofila, 326, 328
complejo, antena, 328
citocromo b6f, 326, 329
citocromo bf, 326, 327, 329, 330, 331
descripcin, 326, 328
esquema Z, 326, 328, 329, 330, 331
ferredoxina, 326, 327, 329, 330
ficobilinas, 328
fotofosforilacin, cclica, 327, 330, 331
no cclica, 326, 327, 329, 330
fotorrespiracin, 327, 333
fotosntesis bacteriana, 327, 330-331
fotosistemas I y II, 326, 328-330
localizacin, 326, 328
plantas C3, 333
plantas C4, 333
plastocianina, 326, 327, 329, 330
plastoquinol, 329
plastoquinona, 326, 329
reacciones, en la claridad, 331
en la oscuridad, 328
fijacin de carbono, 326, 327, 328
reductasa de ferredoxina-NADP, 329, 330
rubisco (carboxilasa de ribulosa
bisfosfato), 327, 331, 332, 333
sntesis, de almidn, 327, 333
de sacarosa, 327, 331, 332-333
transferencia de energa de resonancia,
328
va C4, 327, 333-334
FRAP, 11, 14, 108, 112
FRET, 13-14
Fructosa, ciclizacin, 254
estructura, 253
metabolismo, 260, 265
Fuerzas electrostticas, 26, 31, 33, 82
Furanosas, 254
Fusin, temperatura de, Tm, de los cidos
nucleicos, 232
Ftiles, ciclos, 272
G Geranilpirofosfato, 303, 304
G, protena, receptores acoplados a, 110,
124, 128-129
G1, fase, 9, 10
G2, fase, 9, 10
Galactitol, 260, 266
Galactosa, estructura, 254
galactosemia, 260, 266
metabolismo, 260, 265-266
nomenclatura, 252, 256
va de interconversin galactosa-glucosa,
260, 265
Gel, electroforesis en, 66-70
Genes codificantes de protenas, expresin
en eucariotas
caja TATA, 168, 170, 174
casquete del mRNA, 168, 169, 179,
181-182, 187, 188
edicin del RNA, 180, 186
elementos de control corriente arriba
en eucariotas, 213-214
elongacin, 168, 170-171
empalme alternativo, 185
empalme del RNA, 179, 181, 182-183.
Vase tambin RNA, empalme del
factores de transcripcin de la
polimerasa II de RNA, 168, 170,
172-173
factores de transcripcin general, 168,
170
iniciacin, 168, 169, 171
organizacin gnica, 168-169
poliadenilacin del mRNA, 180, 181,
184-185
pre-mRNA, 179, 180
procesamiento alternativo, 180, 185
procesamiento del pre-mRNA, 179-188
regulacin de la transcripcin, 171-178.
Vase tambin Regulacin de la
transcripcin en eucariotas
secuencia iniciadora (Inr), 168, 170
sitios de poliadenilacin alternativos,
141, 185
sitios promotores de la polimerasa II de
RNA, 169
terminacin, 168, 169, 170-171, 180, 185
transcripcin por la polimerasa II
de RNA, 172-178. Vase tambin
Transcripcin en eucariotas;
Regulacin de la transcripcin en
eucariotas
Genes codificantes de protenas,
expresin en procariotas, 156, 159.
Vase tambin Regulacin de la
transcripcin en procariotas
mRNA policistrnico, 160, 161, 163,
164
opern lac, 160, 161. Vase tambin Lac,
opern
opern trp, 160, 161, 163. Vase tambin
Trp, opern
Genoma Humano, Proyecto, 224
Genmica, 224-225
funcional, 224
Geranilgeranilpirofosfato, 305-306
Gibbs, energa libre de activacin, 87, 88, 92
Gliceraldehdo, 253
Glicerofosfolpidos, 103, 104
Glicerol 3-fosfato, lanzadera de, 317, 324-
325
Glioxilato, va del, 291
Glucagon, control de la degradacin del
triacilglicerol, 299, 301
control del metabolismo del glucgeno,
130, 281
inhibicin de la sntesis de cidos grasos,
294, 297
Glucocorticoides, 303
Glucoesfingolpidos, 104, 113
Glucoforina, 108, 109
Glucgeno, estructura, 257, 258
sntesis y degradacin. Vase Glucgeno,
sntesis y degradacin
Glucgeno, sntesis y degradacin, 278-280
cascada, 284
control, alostrico y modificacin
covalente, 281, 282-283
metabolismo del glucgeno
dependiente de calcio, 281, 284
control hormonal, por adrenalina y
glucagon, 281, 283-284
por insulina, 281, 284
enzima desramificante del glucgeno,
278
enzima ramificante, 278, 279
del glucgeno, 278, 279
fosforilasa de glucgeno, control de,
278
reaccin, 279
fosforilasa de UDP-glucosa, 278, 279
funcin, de ciclasa de adenilato, en el
control de, 283
de cinasa fosforilasa, en el control de,
282
de fosfatasa de protena, en el control
de, 281, 282
de proteincinasa, en el control de, 281,
283-284
funciones del metabolismo del
glucgeno, 278
glucogenina, 278, 279
reacciones de degradacin del
glucgeno, 278-279
regulacin, 281, 282
a travs de la proteincinasa
dependiente de cAMP, 283-284
sintasa de glucgeno, control de, 278
reacciones, 279
sntesis de glucgeno, reacciones,
279-280
Gluclisis, 260-267
control, cinasa de piruvato, 261, 267
fosfofructocinasa, 261, 266-267
hexocinasa, 261, 267
conversin en etanol, 260, 264
descripcin, 260, 261
destinos del piruvato, 260, 264
fosforilacin a nivel de sustrato, 263-264
metabolismo, fructosa, 260, 265
galactosa, 260, 265-266
lactato, 264
piruvato, 260, 263
produccin de energa, 260, 264-265
regulacin, 266-267
regulacin recproca, con la
gluconeognesis, 267, 268, 272-274
va metablica, pasos, 260, 261-263

Gluconeognesis, 268-274
activacin de la carboxilasa de piruvato,
268, 271-272
ciclo de Cori, 269, 274
descripcin, 268, 269
energa usada, 268, 271
precursores, 269, 271
regulacin recproca con la gluclisis,
268, 272-274
transporte de oxalacetato, 268, 271
va metablica, 268, 269
Glucoprotenas, 114, 255, 258
Glucosa, ciclizacin, 254, 255
ensayo ligado, 84
estructura, 252, 254
glucosilacin de protenas, 220-223
inhibicin, de ciclasa de adenilato, 163
del opern lac, 162, 163
metabolismo. Vase Gluclisis
nomenclatura, 252, 256
oxidasa de, 184
terapia de rehidratacin, 115, 119
oral, 115, 119
transporte, 115, 118, 119
Glucsidos cardiacos, 115, 118
Glucosilacin, 220-223
Glucosilfosfatidilinositol (GPI), protenas
unidas al, 110
Glucurnico, cido, 256, 348, 351
GLUT1, 116-117
Glutamato, biosntesis, 341
degradacin, 341
desaminacin oxidativa, 338, 341
deshidrogenasa de, 335, 337
estructura, 23
hiperamonemia y, 343, 345-346
neurotransmisor, 135
peso molecular, 23, 25
pK, 25
35-GMP cclico. Vase cGMP
Golgi, aparato de, 4, 6, 18, 42, 43, 120, 121
Granos, 4, 7
GTP-asa, protenas interruptoras de, 128,
129-130
Guanililciclasa, 124, 126, 130
Guanililtransferasa, 179, 181
Guanina, factor de intercambio del
nucletido, 129
metiltransferasa de, 181
H Ibuprofeno, 287, 307
Haworth, proyecciones de, 255
Hemiacetal, 254
Hemicetal, 254
Hemo, biosntesis, 348-350
citocromos y, 315, 319, 320, 348
clorofila y, 348
degradacin, 348, 350-351
hemoglobina y, 36, 37
leghemoglobina, 337
mioglobina y, 36, 37
unin del oxgeno a, 36, 37-39
Hemoglobina y mioglobina, 36-41
alosteria, 36, 39
curva de disociacin del oxgeno, 36, 39
efecto Bohr, 39-40
fetal, 36, 40
hemoglobinopatas, 36, 40-41
histidina, distal, 36, 37, 40
proximal, 36, 37, 40
mecanismos de cambio alostrico, 39
unin del oxgeno al hemo, 36, 37-39
Hemoglobinopatas, 36, 40-41
Henderson-Hasselbalch, ecuacin de,
23-24
Hendidura, protena de, 81, 82
Hepatitis, 86
Heptosas, 253
Hexosa monofosfato, cortocircuito; Vase
Pentosa fosfato, va
Hexosas, 253
Hibridacin. Vase cidos nucleicos,
hibridacin
Hidrfobo, efecto, 33, 106
Hidrgeno, enlaces de, 33
perxido, 7
Hidrolasa, 83
3-Hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG CoA),
292, 303, 304
5-Hidroxilisina, 42, 44
4-Hidroxiprolina, 42, 44
Hierro, envenenamiento por, 349
Hiperamonemia, 343, 345-346
Hipercolesterolemia, 306, 308, 310
Histamina, 58, 126
Histonas, 140, 142-143
Hoja . Vase Plegada , hoja
Homocistena, 347
Homogenizacin, 18, 60, 61
Homogentisato, 338, 342
Hormona, lipasa de triacilglicerol sensible
a, 292, 299, 301
Hormonas, 124-126
control, metabolismo del glucgeno,
281-284
sntesis de cidos grasos, 294-298
descomposicin de los triacilgliceroles,
299, 301
esteroideas, 303, 307
Hueso, formacin, 42, 46
Huesos frgiles, 45
I mRNA policistrnico, 161
Ictericia, 266, 351
Iminocido, 20, 21
Inmunoelectrnica, microscopia, 77
In situ, hibridacin, 232, 234
In vitro, mutagnesis, 248. Vase tambin
Mutagnesis dirigida al sitio
Inclusin, cuerpos de, 7
Indirecta, ELISA, 78
Inhibicin enzimtica, 94-96
competitiva reversible, 94, 95-96
irreversible, 94-95
no competitiva reversible, 94, 96
Inmviles, sndrome de los cilios, 53
Inmunitario, sistema, 55
NDICE ALFABTICO 365
Inmunoabsorbente ligado a enzimas,
ensayo. Vase ELISA
Inmunoafinidad, cromatografa por, 61, 65
Inmunocitoqumica, 77
Inmunodeficiencia humana, virus de la, 95
Inmunodeteccin, mtodos, 77-80
Inmunofluorescente, microscopia de luz,
77
Inmunoglobulina, pliegue, 32
Inmunusupresor, frmaco, 35
Inositol, 1,4,5-trisfosfato de (IP3), 125, 130
Insuficiencia cardiaca congestiva, 115, 118
Insulina, control, degradacin de
triacilglicerol, 299, 301
sntesis de cidos grasos, 294, 297
metabolismo del glucgeno, 282, 284
receptor, 124, 126
regulacin de la gluconeognesis, 268,
273
Interfase, 10, 140, 142
Intermedios, filamentos, 5, 8
Intestinales, clulas epiteliales, 115, 118
Intrones, autoempalme, 184
descripcin, 168
remocin por empalme del RNA, 179, 182
Inversa, gentica, 224
transcriptasa, 95
Ionizacin, cidos y bases, 23
aminocidos, 21
Isoaceptacin, tRNA, 202
Isoelctrico, enfoque, 61, 66, 68-69
punto (pI), 25, 66
Isoenzima (isozima), 86
Isopentenilpirofosfato, 142, 304
K
Krebs, ciclo de. Vase Ctrico, ciclo del
cido
L
Lac, opern, control negativo, 163
control positivo, 163
CRP/CAP, 160, 163
estructura, 161, 162
induccin, 161
regulacin de la glucosa, 161, 163
represor del lac, 160, 162-163
Lactato, deshidrogenasa de, 81, 86, 260, 264
Lactosa, control del opern lac, 161
enzimas del metabolismo de la lactosa,
161
estructura, 256
intolerancia (hipolactasia), 260, 266
nomenclatura, 252, 256
Lanosterol, 305
Latirismo, 46
LDL, receptor, 123, 309
Lecitina-colesterol, aciltransferasa de
(LCAT), 309
Leucotrienos, 285, 297
Lignina, 6-7
366 NDICE ALFABTICO

Lineweaver-Burk, grfica, 90, 93 dirigido, por ATP, 115, 117-118 transporte, de acetil-CoA, 288, 289
Linoleato, 285, 286, 287, 297 por iones, 115, 118 de electrones; Vase Electrones,
Linolenato, 285, 295, 297 pasivo, 115, 116 transporte
Lipasas, 7, 299, 301, 306 simporte, 115, 118 de oxalacetato, 294, 295
Lipdicas, balsas, 113 uniportadores, 116, 118 Mitgeno, proteincinasa activada por,
Lipdicos, dominios, 108, 113 Mensajero RNA. Vase Transcripcin 165
Lipoprotenas, 308-310 en eucariotas; Transcripcin en Mitosis, 10
alta densidad (HDL), 308, 310 procariotas; Lac, opern; Trp, opern Mittico, huso, 5, 8
apolipoprotena B, 186 Meromiosina, 49 Moleculares, motores, 47-53
baja densidad (LDL), 123, 308, 309 Metabolmica, 224, 225 Monosacridos, 252-256
densidad intermedia (IDL), 308, 309 flujo metablico, 225 aldosas, 252, 253
estructura y funcin, 308, 309 metaboloma, 224, 225 anmeros, 252, 255
lipasa, 309 perfil metablico, 225 azcares reductores, 253
muy baja densidad (VLDL), 308, 309 Metanol, envenenamiento por, 95-96 cetosas, 252, 256
quilomicrones, 308, 309 Metilo activado, ciclo, 343, 346-347 configuraciones en bote/silla, 252,
tipos, 308 Metotrexato, 95 254
Liposomas, 108, 113 Mevalonato, 303, 304 derivados del azcar, 252, 254-255
Lisiloxidasa, 46 Mevinolina. Vase Lovastatina D-galactosa, 254
Lisina, hidroxilasa de, 42, 44 Micelas, 33 D-glucosa, 253, 254
Lisofosfatdico, cido, 299, 300, 301 Michaelis, constante (Km sigla), 90, 93, 98 dihidroxiacetona, 253
Lisosoma, 4, 5, 6, 7, 8, 16, 18, 19, 62, 104, Michaelis-Menten, ecuacin de, 93 epmeros, 254
120, 121, 122, 123, 213, 214, 218, 309, modelo de, 90, 92 estereoismeros, 252, 253-254
310 Microfilamentos, 5, 7-8 estructuras anulares, 252, 254-255
Lisozima, 3 Micro-RNA (miRNA), 186, 187-188 furanosas, 254
Lovastatina, 306 Microsatlites, 243, 245 gliceraldehdo, 262, 263
Microscopia, confocal, 13 hemiacetal, 254
contraste de fase, 12-13 hemicetal, 254
M crioelectrnica, 15 heptosas, 253
de luz, 11, 12 hexosas, 253
M, fase, 9, 10 electrnica, 11, 14-15 ismeros pticos, 253
Macrfagos, 57, 120 de barrido (o rastreo), 11, 15 mutarrotacin, 252, 255
Madre, clulas, 9, 10 de transmisin, 11, 14-15 nomenclatura, 252, 256
Malato-aspartato, lanzadera de, 265, 317, fluorescencia, 11, 13-14 pentosas, 253
325 FRAP, 11, 14 piranosas, 254
MALDI-TOF, 71, 73, 75 FRET, 11, 13-14 proyecciones de Haworth, 255
Malonato, 95, 96 inmunofluorescencia, 11, 13 tetrosas, 252, 253, 254
Malonil-CoA, 294, 295, 296, 297 Microtbulos, 5, 7, 8 triosas, 253
Maltosa, 255, 256 Mielina, vaina, 104, 132, 133 Monxido de carbono, 36, 37, 126, 307,
Manchado. Vase Southern blotting; Mineralocorticoides, 303, 307 316, 322
Northern blotting; Western blotting Miocrdico, infarto, 81, 86, 308, 310 mRNA, silenciamiento del, 180, 186-187
Masa, espectrometra, 69, 71, 73, 74, 75, 225 Mioglobina, curva de disociacin del complejo microprocesador, 187,
Maxam-Gilbert, mtodo de, 240 oxgeno, 36, 39 188
Mediado, transporte, 115, 116 estructura, 36, 37 Dicer, 188
Membrana, balsas lipdicas, 113 unin de oxgeno, 36, 37-39 Drosha, 188
bicapa lipdica, 2, 3, 61, 103, 105, 107, 109, Miosina, 47, 48-49 miRISC (RNA-complejo de
110 Miristato, 110, 111, 287 silenciamiento inducido), 180, 187,
carbohidratos, 103, 104, 108, 114 Mitocondrias, autoempalme de intrones, 188
dominios lipdicos, 108, 113 184 miRNA (cadena intil), 187, 188
fluidez, 103, 107 ciclo de la urea, 343, 345 miRNA, mecanismo de accin, 188
lpidos, 103-107 ciclo del cido ctrico. Vase Ctrico, ciclo Pasha, 188
modelo de mosaico fluido, 108, 111 del cido pre-mRNA, 179, 180, 181
permeabilidad, 115, 116, 133 cdigo gentico, 199, 202 sntesis, 181
potencial elctrico, 117, 128, 133 degradacin de cidos grasos y, Multipartitas, genomas, 141-142
protenas, 103, 104, 108, 109, 110, 111, 289-290 Multiplex, PCR, 246
115, 124, 129, 213, 215 direccionamiento de protenas, Msculo, actina, 47, 48, 49
integrales de la membrana, 7, 108, 109, 213-219 cinesinas, 47, 48, 51-52
110, 112, 113 edicin del RNA, 186 dinena, 47, 48, 52-53
perifricas de la membrana, 108, 111 estructura, 4, 6-7 estriado, 47, 48, 49
purificacin de las protenas de fosforilacin oxidativa. Vase Oxidativa, estructura, 47, 48
membrana, 108, 113 fosforilacin filamentos, delgados, 47, 48, 49, 50
temperatura de transicin, 107 fraccionamiento subcelular, 16, 17-18 gruesos, 47, 48, 49, 50
Membrana, transporte de, 115-119 genoma, 144 generacin de fuerza en, 49-51
activo, 115, 117, 150-151 protenas marcadoras, 16, 19 miofibrilla, 47, 48
antiporte, 115, 118 replicacin del DNA, 151 miosina, 47, 48-49
difusin, facilitada, 115, 116-117 sntesis de tetrapirrol, 349 modelo de filamento deslizante, 48
simple, 115, 116 transcripcin, 166, 167 sarcmero, 47, 48, 49, 50

tropomiosina, 47, 48, 50, 51
troponina, 47, 48, 51
Mutagnesis dirigida al sitio, 247-251
con la PCR, 247, 249-250
diseo racional, 251
evolucin dirigida, 251
ingeniera de protenas, 247, 251
mutagnesis de casete, 247, 249
por oligonucletidos, 247, 248
sntesis de novo, 247, 250
Mutarrotacin, 252, 255
N Operones, 160-165. Vase tambin Lac,
N-Acetilglucosamina, 2, 220, 256
N-Acetilmurmico, cido, 2
N, oligosacridos unidos a, centro de
pentasacrido y, 223
dolicolfosfato, funcin, 220, 221
estructura, 220, 221
sntesis, 220, 221-223
tipo alto en manosa, 220, 221-223
tipo complejo, 220, 221
Na+/K+, ATP-asa de, 115, 117-118, 119,
132, 133
NADH, 84, 85
NADH-Q, oxidorreductasa de, 315, 318, 319,
322, 324
NADPH, 84, 86
Negativo, control transcripcional, 160,
163
Neurona. Vase Clula nerviosa
Neurotransmisores, 168, 171-172
Neutrfilo, 16
Nexina, 67
Niacina, 106
Ninhidrina, 91
Ntrico, xido, 160, 436, 440
sintasa de, 440
Nitrocelulosa, 89
Nitrgeno, asimilacin, 424, 426-427
ciclo, 425-426
fijacin, ciclo del nitrgeno, 335
complejo de la nitrogenasa, 335,
336-337
diaztrofos, 335
leghemoglobina, 335, 337
reacciones, 337
Nitroglicerina, 126
No esteroideos antiinflamatorios,
frmacos, 287
No mediado, transporte, 115
Noradrenalina, 299, 301, 302
Northern blotting, 80, 232, 233-234
Nuclear pequeo, RNA. Vase snoRNA
Nuclear, resonancia magntica,
espectroscopia, 26, 34
Nucleares, poros, 5, 214, 219
Ncleo, 1, 2, 3, 4, 5
Nucleoide, 1, 2, 3, 140, 141
Nucleolar pequeo, RNA. Vase snoRNA
Nucleolo, 4, 5, 6
Nuclesidos, 136, 137, 154
Nucleosomas, 140, 142-143, 150, 153
Nucletidos, 136-137, 138, 154
O Papana, 49, 50, 54, 56, 57
O, oligosacridos unidos a, estructura, 220,
221, 257, 258
sntesis, 220
Octilglucsido, 113
Okazaki, fragmentos de, 145, 146-147, 148,
150, 151
Oleato, 103, 105, 285, 287
Oligopptido, 27
Oligosacridos, 220, 257, 258-259. Vase
tambin N, oligosacridos unidos a;
O, oligosacridos unidos a
opern; Trp, opern
pticos, ismeros, de monosacridos, 253
Organelos, genomas de, 140 144
transcripcin, 166, 167
Organismo(s), amoniotlicos, 344
oriC, locus, 146
Origen de los complejos de replicacin
(ORC) en eucariotas, 150
Ornitina, 343, 344, 345
transcarbamoilasa, 345
Osmio, tetrxido, 14-15
Osmtica, lisis, 60, 61
Osteognesis imperfecta, 45
Osteomalacia, 303, 307
Oxidativa, fosforilacin, 315-325
acoplamiento, 316, 324
ATPasa de F0F1, 316, 322
control respiratorio, 316, 324
definicin, 315, 322
desacoplamiento en el tejido adiposo
pardo, 316, 324
desacoplantes, 316, 324
descripcin, 316, 317
2,4-dinitrofenol, como desacoplador,
316, 324
fuerza motriz de los protones, 315, 321
funcin de las sintasa de ATP, 316, 322
gradiente electroqumico de protones,
316, 322
hiptesis quimiosmtica, 322
mecanismo, 316-317
sintasa de ATP, 322-323
unida al transporte de electrones y al
gradiente de H+, 315, 316, 321-322
Oxgeno, curva de disociacin, 36, 39
protenas de unin. Vase Hemoglobina y
mioglobina; Mioglobina
P 164
P, ATP-asas tipo, 115, 117
Palndromo, terminacin de la
transcripcin, 159
Palmitato, 103, 104, 105, 110, 111, 285, 286,
287
Palmitoil-CoA, 291, 292, 294, 298
Palmitoleato, 286, 291
Paludismo, 36, 41
Pncreas, 101, 120, 121, 125, 283, 284
Pancreatitis, 101
Pantotnico, cido, 85
NDICE ALFABTICO 367
Paramecium, 144
Pareamiento de bases,
complementariedad, 139, 188
Pared celular, bacteriana, 1, 2-3
vegetal, 5, 8
Pareos de bases tambaleantes, 202
PCR. Vase Polimerasa, reaccin en cadena
de (PCR)
Pegajosos, extremos, 228
Pelagra, 85
Penicilina, 1, 2, 94-95
Pentosa fosfato, va, 7, 267, 275-277
control de la, 346, 348-349
descripcin, 346
detalles de la reaccin, 347-348
relacin con la gluclisis, 348
Pentosas, 253, 275
Pepstatinas, 96
Peptidilprolilo, isomerasas cis-trans de, 35
Peptidoglucano, 1, 2, 3
Pptidos, enlaces, 26, 27-29
sntesis, 71, 76
Periplasma, 3
Permeasas, 116
Peroxisoma, 6, 214
Pinocitosis, 120, 122
Pinza-parcela, 135
Piranosas, 317
Piridoxal, fosfato de, 59, 106, 430-341,
445
Piridoxamina, fosfato de, 431
Piridoxina. Vase Vitamina, B6
Pirofostato de isopentenilo, 111
Piruvato, carboxilasa de, 104, 339, 340
pK, 20, 21, 23, 24, 25
Placa, levantamiento de, 238
Plasmtica, membrana, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 16,
17, 18, 19
Plastoquinol, 329
Pleckstrina, dominios de homologa, 127
Plegada , hoja, 26, 28, 29, 30
Poliacrilamida, gel, electroforesis en, 61, 63,
66, 67, 68, 69, 73, 79
Poliadenilacin del mRNA, descripcin,
171, 180, 184
mecanismo, 171, 180, 184
participacin en la terminacin
de la transcripcin, sitios de
poliadenilacin alternativos, 159,
169, 171, 180, 181, 185
Polianflito, 66, 68, 69
Policistrnico, mRNA, 140, 160-161, 163,
Polimerasa, reaccin en cadena de (PCR),
243-246
anlisis de microsatlites, 243, 245
aplicaciones, 243, 245
ciclo PCR, 243, 244-245
diagrama, 244
PCR con la transcriptasa inversa, 235,
236, 245
PCR en tiempo real, 243, 245-246
PCR multiplex, 246
principios, 243
Polimerasas de DNA, eucariota, 145, 150-153
368 NDICE ALFABTICO
Polisacridos, 257-259
almidn, 257, 258. Vase tambin
Almidn
amilopectina, 257, 258
amilosa, 257, 258
celulosa, 257, 258
dextrano, 257, 258
glucgeno, 257, 258, 267, 269, 278-280.
Vase tambin Glucgeno
Porfiria, 350
Porfirina, 36, 37, 38, 39, 311, 314, 326, 328,
348, 349, 350
Porfobilingeno, 348, 349, 350
Porina, protena, 3, 4, 6, 110, 115, 117
Postraduccin, modificacin, 4, 6, 42, 43,
44, 71, 74, 75, 76
Potencial de accin. Vase Membrana,
potencial elctrico
Pregnenolona, 307
Primario, transporte activo, 115, 117-118
Priones, enfermedades por, 35
Prinica, protena, 35
Procolgena, 42, 43, 44, 45, 46
Proelastasa, 97, 101, 102
Proenzima. Vase Cimgenos
Progestgenos, 303, 307
Progesterona, 126, 303, 307
Programada, muerte celular. Vase
Apoptosis
Propionil-CoA, 288, 292
Prostaciclinas, 285, 287, 297
Prostaglandina H2, sintasa de, 94, 285, 287
Prostaglandinas, 124, 126, 285, 287, 297
Prostticos, grupos, 81, 84-85, 349
Protaminas, 142
Proteasas, 2, 7, 60, 61, 62
caspasa, 101
inhibidores, 60, 61, 62
lisosmicas, 7
pancreticas, 97, 101
VIH, 95
Protena, direccionamiento, 267-275
chaperonas, 274
descripcin, 268
endocitosis mediada por el receptor, 273
exocitosis, 269
funcin de la hsc70 mitocondrial, 274
partcula de reconocimiento de seal
(SRP), 269
peptidasa seal, 269
protenas, cloroplasto, 268, 275
integrales de la membrana, 267
lisosmicas, 267, 272-273
membrana plasmtica, 267, 270-271
mitocondriales, 268, 272-274
nucleares, 268, 275
que atraviesan la membrana, 271
retculo endoplsmico, 271-272
secretoras, 267, 268-270
secuencia de direccionamiento de la
matriz, 274
secuencia de seal, 269
interna, 271
secuencias, de detencin-transferencia,
271
topgenas, 271
seal, KDEL, 271
localizacin nuclear, 275
manosa 6-fosfato, 272
Protena, glucosilacin, 220-223
central, 223
centro de pentasacrido, 220, 223
descripcin, 2206
dolicolfosfato, funcin de, 220, 221, 222
glucosilacin terminal, 223
oligosacridos unidos al N, estructura,
220, 221-223
sntesis, 220, 221-223
oligosacridos unidos al O, estructura,
220
tipos de glucosilacin, 220
Protena(s), de andamiaje, 140
determinacin de la estructura, 33-34
disulfuro, isomerasa de, 35
ensayo, 60, 62
estabilidad, 26, 33
estabilizacin, 61-62
estructura, 26-35
cuaternaria, 26, 31, 32-33
primaria, 26, 29, 31, 34
secundaria, 26, 29-31
terciaria, 26, 31-32
fosfatasa de, 281, 282, 284
huella digital, 71
integral de la membrana, 109, 112, 113
miristoilada, 110, 111, 113
modificacin covalente, 97, 101-102
palmitoilada, 110, 111, 113
perifrica de la membrana, 108, 111
plegamiento, 26, 29, 30, 31, 34-35
errneo, 26, 35
prenilada, 110, 111
purificacin, 60-65
que atraviesan la membrana, 110, 111
secuenciacin, 71-76
secuencia, base de datos de, 94
sntesis. Vase Traduccin en eucariotas;
Traduccin en procariotas
transportadoras, 4, 115, 116
unida al GPI, 110, 113
unida a lpidos, 110, 113
Proteincinasa, 101
activada por el AMP, 294, 297, 298
dependiente del cAMP, 283
proteincinasa A, 130, 281, 282, 283, 284
proteincinasa C, 130, 131
Protemica, 95, 282-283
expresin de la protemica, 282
perfilamiento de protenas, 282
procesividad, 301
proteoma, 88, 95, 282
Protn, fuerza motriz del, 408
Protoporfirina IX, 50, 445
Puntuales, mutaciones, 245, 247, 248, 249
Q de control corriente arriba, 213
Q, ciclo, cloroplastos, 418
mitocondrias, 405
Q-citocromo c, oxidorreductasa de, 399,
402
Quilomicrones, 308, 309-310
remanentes de, 309
Quimiosmtica, hiptesis, 316, 322
Quimiotaxis, 1, 3
Quimotripsina, 72, 82, 83, 97, 101
Quimotripsingeno, 97, 101
R
Rab, protenas, 165
Ramachandran, grfica de, 37
Ranvier, nodos de, 132, 133
Raquitismo, 303, 306
Ras, protenas, 165
Rayos X, cristalografa, 34
Reasociacin, cidos nucleicos, 291
Receptor, acoplado a la protena G, 140,
163-165
adrenrgico , 356
Ca2+, 167
de importacin, 274
endocitosis mediada por el, 153, 156,
390
ensayo, 78
fagocitosis, 155
glucocorticoides, 223
hormona, esteroidea, 219, 220, 221
tiroidea, 223
insulina, 357
intracelular, 160
LDL, 390
manosa 6-fosfato, 272
posinptico, 169
reciclamiento, 157, 273
rianodina, 166
SRP, 269
superficie celular, 8, 156, 161
unido a un canal inico, 161
unido a una enzima, 159
Receptora, cinasa de tirosina, 357
Recombinante, DNA, 161-163. Vase
tambin DNA, clonacin
Red, trans Golgi, 6, 121
Redox, potencial, 398, 401
Reductores, azcares, 315
Regulacin de la transcripcin en
eucariotas, genes codificantes de
protenas, caja CAAT, 218
caja GC, 218
caja TATA, 213
control por hormonas esteroideas, 219
CRE (elemento de respuesta al cAMP), 219
dominios del factor de transcripcin,
219-223. Vase tambin
Transcripcin, factores de la
elemento, celular hipofisario, 219
promotor corriente abajo, 213
respuesta a la hormona, 219
elementos, cis, 218
reguladores, 216, 218-219
factores de transcripcin, 214, 218,
219-233. Vase tambin
Transcripcin, factores de la
general, 214

factores trans. Vase Transcripcin,
factores de la
mecanismo, 217-218
mejoradores, 216, 219
organizacin del promotor, 213-214
promotor, central, 213
polimerasa II de RNA, 213-214
secuencia iniciadora Inr, 213
silenciadores, 223
Regulacin de la transcripcin en
procariotas, caja Pribnow, 157
control, negativo, 163
positivo, 163
elemento corriente arriba, 158
elongacin, 156, 158
genes codificantes de protenas. Vase
tambin Lac, opern; Trp, opern
iniciacin, 156, 157-158
mRNA policistrnico, 161
opern lac, 161-162
opern trp, 163
promotores, 157-158. Vase tambin Lac,
opern; Trp, opern
protena, activadora de catabolitos (CAP),
163
de respuesta al cAMP (CRP), 163
represin de catabolitos, 162
secuencia -10, 157
secuencia -35, 157
subunidades de la polimerasa de RNA, 157,
166, 167
terminacin, 159
Renina, 96
Replicacin, burbuja de, 146, 147, 151
horquilla de, 145, 146, 147, 151
ojo de, 146, 147, 151
unidades de, 151
Replicacin del DNA en bacterias, 145-149
bidireccionalidad, 146
burbuja de replicacin, 145, 146
cadena, adelantada, 145, 147
retrasada, 145, 147
cebador de RNA, 145, 147-148
DnaA, 146
DnaB, 146
fragmentos de Okazaki, 145, 146-147
horquillas de replicacin, 145, 146
plantilla, 145
polimerasas de DNA, 145-146
primasa, 145, 147
problema del desenrollamiento, 148
protena SSB, 148
protenas accesorias, 145, 148-149
reaccin de la polimerasa de DNA, 145
semiconservativa, 146
topoisomerasa I, 145, 148
topoisomerasa II, 145, 148-149
Replicacin del DNA en eucariotas, 150-153
ambas direcciones, 150
burbujas de replicacin, 151
cadenas adelantada y retrasada, 150, 151
cebadores de RNA, 151
fragmentos de Okazaki, 150, 151
horquillas de replicacin, 151
origen de los complejos de replicacin
(ORC), 150
polimerasas de DNA, 145, 150-153
primasa, 151
replicacin de la cromatina, 150, 153
replicones mltiples, 150-151
telomerasa, en replicacin de
cromosomas eucariotas, 150, 152
telmeros, replicacin, 150, 152-153
unidades de replicacin, 151
Replicn, 151
Respiratoria, cadena; Vase Electrones,
transporte
Respiratorio, control, 316, 324
Restriccin, enzimas de, 227-231
digestin, 227-229
extremos adhesivos, 228
extremos pegajosos, 228
mapas restriccin, 227, 230
polimorfismos de longitud de los
fragmentos de restriccin (RFLP), 227,
230-231
3 sobresaliente, 228
5 sobresaliente, 228
Restriccin, fragmentos de, polimorfismos
de longitud (RFLP), 227, 230-231
mapas de, 227, 230
Retculo endoplsmico, 4, 6, 18, 213,
216-217
liso, 4, 268, 269, 271
rugoso, 4, 42, 43, 213, 216-217
Retinoico, cido, 126
Revestidas, vesculas, 121, 123
Revestimiento, protenas de, 121
Rezagada, cadena, 145, 147, 150, 151
Rianodina, receptor de, 125, 130
Riboflavina, 85
Ribonuclesidos, 136, 154, 156, 157,
158
Ribonucletidos, 154
Ribosomas, estructura, 189, 190
funcin en la traduccin. Vase
Traduccin en eucariotas;
Traduccin en procariotas
Ribosmico, genes de RNA en eucariotas,
autoempalme, 184
elemento de control corriente arriba,
192
elemento promotor, de la caja A, 194
de la caja C, 194
factor de unin corriente arriba, 192
organizacin en eucariotas, 192
procesamiento del rRNA, 192
promotor, 192
ribozimas, 193-194
snoRNA, 193
transcripcin, del gen 5S, 194
de genes 28S, 18S, 5.8S, 191-193
por polimerasa I de RNA, 191
por polimerasa III de RNA, 194
Ribosmico, genes de RNA en procariotas,
transcripcin y procesamiento,
191
Ribozimas, 82, 184, 190, 193-194, 208
Rigurosidad, de hibridacin, 232, 233
RNA de interferencia (RNAi), 224
RNA, edicin del, 180, 186
polimerasa de, procariota, 156-159
NDICE ALFABTICO 369
polimerasa I de, 166, 189, 191, 192, 193
polimerasa II de, 166, 168, 169-170,
171, 172-178, 181, 185, 187. Vase
tambin Transcripcin; Regulacin
de la transcripcin en eucariotas;
Regulacin de la transcripcin en
procariotas
polimerasa III de, 166, 175, 194, 196, 197
procesamiento. Vase Casquete o
caperuza; RNA, empalme del; RNA,
edicin del; Poliadenilacin del
mRNA
RNA, empalme del, 179, 182-184, 186
autoempalmes de intrones, 184
compromiso snRNA/snRNP, 184
espliceosoma AT-AC, 183
funcin del espliceosoma, 183
intrones AT-AC, 183
premRNA, 183, 184-185
prerRNA, 191, 193
pretRNA, 195, 196, 198
punto de ramificacin, 182
reacciones de transesterificacin, 182
ribozimas, 184
RNA cataltico, 184, 193
sitio de corte y empalme, 183
sitios de empalme, 182
soga intermedia, 182
vas de empalme alternativas, 185
RNA, estructura, bases en el RNA, 136
estructura secundaria, 154, 155
ribonuclesidos, 136
ribonucletidos, 136-137
Rodamina, 11, 13, 112
Rotenona, 316, 322
Rubisco (ribulosa bisfosfato carboxilasa/
oxigenasa), 327, 331, 332, 333
S
S-Adenosilhomocistena, 343, 347
S-Adenosilmetionina, 343, 346, 347
S, fase, 9, 10
Salino, puente, 33
Sanger, mtodo didesoxi de, 240, 241, 242
Sangunea, coagulacin, cascada de, 97,
101
Sarcmero, 48, 50
Sarcoplasma, 48
Sarcoplsmico, retculo, 51
Sarina, 94
SDS PAGE, 66, 67-68
Secuenciacin del DNA, 240-242
automatizada, 240, 241
eleccin de la polimerasa de DNA,
240, 241
mtodo, de degradacin qumica, 240
didesoxi de Sanger, 240
de Maxam-Gilbert, 240
terminacin de la cadena, 240, 241
numerosos mtodos, 240-241
pirosecuenciacin, 240
Secundario, activo, transporte, 115, 118
Sedimentacin, coeficiente de, 190
Segundo mensajero, 125, 130
370 NDICE ALFABTICO
Selenocistena, secuencia de insercin de
(elemento SECIS), 199, 202
Selenoprotenas, 202
Sentido, codones con, 2021
Seales, transduccin de, 124-131. Vase
tambin Receptor
Sealizacin, complejos de, 127
Sealizacin celular, 125, 131
Serina, proteasas de, 82, 83
Seudouridilacin, 241
Sigma, factor 70, 157
Silenciadores, 178
Sinapsis, 132
Sinptica, hendidura, 135
vescula, 135
Sinaptobrevina, 122
Sinvastatina, 306
SL1, 192
SNAP-25, 122
SNARE, 122
snoRNA, caja C/D, 193
caja H/ACA, 193
funcin en el procesamiento del pre-
rRNA, 189, 193
transcripcin, 166-167
snRNA, funcin en el empalme del RNA,
182-184
transcripcin, 166
Solubilizacin de protenas de la
membrana, 108, 113, 114
Southern blotting, 80, 232, 233
Src, homologa, dominios de, 127
Streptomyces coelicolor, 141
Subcelular, fraccionamiento, 16, 17-18
Succinato, deshidrogenasa de, 19, 95, 96,
264
Sucrosa, estructura, 255
sntesis, 327, 331, 332-333
Suicida, inhibidor, 95
Sustrato, ciclos, 313
fosforilacin a nivel de, 263-264
Svedberg, unidades (S), 190
T factores de la
Tndem cortas, repeticiones en (STR),
245
Taq, polimerasa, 245
Tardos, endosomas, 123
Taurocolato, 306
Taxol, 8
TCA, ciclo. Vase Ctrico, ciclo del cido
Telmero, replicacin del, 152-153
Termodinmica, 87-89
primera ley de la, 87-88
segunda ley de la, 88
Testosterona, 307
Tetnica, toxina, 122
Tetrahidrobiopterina, 342
Tetrahidrofolato, 85
Tetrapirroles, 348, 349
Tetrodotoxina, 135
Tetrosas, 253
Tiamina, pirofosfato de, 85
Tiempo real, PCR en, 303, 306-307
Tilacoides, vesculas, 218, 328
Tiroxina, 126
Tm, temperatura de fusin, de los cidos
nucleicos, 232
Tomografa electrnica, 15
Topoisomerasa I, 148
Topoisomerasa II, 148
Traduccin en eucariotas, 210-212
comparacin con procariotas, 211
complejos de iniciacin, 211
consenso de Kozak, 211
elongacin, 21
estructura del ribosoma, 190
exploracin, 211
factores de iniciacin, 211
iniciacin, por exploracin, 210
sin exploracin, 210, 212
participacin de la protena de unin
poli(A), 211
RNA de picornavirus, 212
sitio interno de entrada del ribosoma
(IRES), 212
terminacin, 212
Traduccin en procariotas, 204-209
activacin de aminocidos, 205
anticodn, 205
codn de inicio o codn de iniciacin,
206
codones de terminacin, 208
comparacin con eucariotas, 211
complejos de iniciacin, 206-207
descripcin, 205
elongacin, 204, 207-208
factores, de elongacin, 207-208
de iniciacin, 206-207
de liberacin, 208
formacin del enlace peptdico, 207
iniciacin, 204, 206-207
ribosomas; tres sitios, 206
secuencia, anti-SD, 206
de Shine-Dalgarno, 206
sntesis de aminoacil-tRNA, 204, 205
terminacin, 205, 208-209
Trans, factores. Vase Transcripcin,
Transaminacin, 338, 339
Transaminasas, 339
Transcripcin, factores de la, cremallera de
leucina, 177
dedo de cinc, 175-176
dominios, bsicos, 176
de activacin, 173, 177
de dimerizacin, 173, 177
de unin del DNA, 175
mltiples, 175
motivo hlice-asa-hlice, 177
motivo hlice-giro-hlice, 175
represores, 178
Transcripcin en eucariotas, descripcin,
166-167
genes, 5S rRNA, 166, 194
codificantes de protenas, 169-171.
Vase tambin Regulacin de la
transcripcin en eucariotas
de rRNA, 166, 189
tRNA, 166
mRNA, 169-171. Vase tambin Genes
codificantes de protenas, expresin
en eucariotas; Regulacin de la
transcripcin en eucariotas
polimerasas de RNA, 166-167
regulacin. Vase Regulacin de la
transcripcin en eucariotas
snoRNA, 166
snRNA, 166
subunidades de la polimerasa de RNA, 166,
167
tres polimerasas de RNA, 166
Transcripcin en procariotas, elemento de
secuencia 10, 157
elemento de secuencia 35, 157
elementos promotores, 156, 157-158
elongacin, 157, 158
factor rho, 159
iniciacin, 157, 158-159
mRNA, 166. Vase tambin Lac, opern;
Trp, opern
rRNA, 159
terminacin, 157, 159
tRNA, 189
Transcriptasa inversa-PCR (RT-PCR), 245
Transcriptoma, 225
Transcriptmica, 225
Transfeccin, 237
Transferencia, RNA de, estructura, 196
modificacin, 198
procesamiento, en eucariotas, 196-198
en procariotas, 196
sntesis, en eucariotas. Vase
Transcripcin en eucariotas
en procariotas. Vase Transcripcin en
procariotas
Transferencia de fluorescencia por energa
de resonancia (FRET), 13-14
Transgnicos, organismos, 224, 225-226
Translocn, 213, 215-219
Transportadores, 116, 117
Transporte. Vase tambin Membrana,
transporte de
macromolculas a travs de las
membranas, 120-122
molculas pequeas a travs de las
membranas, 115-119
Triacilgliceroles, 299-302
descomposicin, 299, 301
estructura, 299
funcin, 299
regulacin, 299, 301-302
sntesis, 299-301
Triglicridos. Vase Triacilgliceroles
Triosas, 253
Tripsina, activacin proteoltica, 101
clasificacin, 82-83
especificidad del sustrato, 82-83
protena inhibidora de la tripsina, 101
sitios de unin de sustrato, 83
Tripsingeno, 101
Triton X-100, 61, 113
tRNA. Vase Transferencia, RNA de
Tromboxanos, 287
Tropocolgena, 44, 45, 46
Tropomiosina, 47, 51
 NDICE ALFABTICO 371
Troponina, 47, 51 Ureotlicos, 344 D3, 306
Trp, opern, 161, 163, 164 rico, cido, 343, 344, 347 E, 306
atenuacin, 161, 163-164 Uricotlicos, 344 K, 306
contra represin, 165 Uroporfiringeno III, 349 precursores, 85
regulacin, 163 3UTR (regin no traducida 3) del mRNA,
represin, 165 169
represor, 160, 165 5UTR (regin no traducida 5) del mRNA, W
terminador de la transcripcin, 164 169
Tubulina, 8 Western blotting, 79-80

V
U X
van der Waals, fuerzas de, 33
Unin, mecanismo de, y cambio, 323 Vector de expresin, 239 Xantoma, 310
Unin(es), estrechas, 118 Vegetal, clula, vacuola, 5, 6, 8
Uniportador (GLUT-1), 116 Verde, protena fluorescente, 11, 13
UP, elemento (elemento corriente arriba), Vibrio cholerae, 142 Y
158 Vimblastina, 8
Urea, ciclo, 343-347 Vitamina, A, 126, 385 Yodoacetamida, 94
descripcin, 344 B1, 85 Yodoacetato, 73
enlace con el ciclo del cido ctrico, B2, 85
343, 345 B6, 46, 85, 338, 340, 341
formacin de creatina fosfato, 343, B12, 85, 347, 348, 349 Z
346-347 C, 56, 85
hiperamonemia, 343, 345-346 D, 85, 126, 304, 306-307 Zigzag, modelo en, 143