Está en la página 1de 386

BIOS.

NOTAS INSTANTNEAS DE
BIOQUMICA Cuarta edicin

David Hames
Nigel Hooper
Subido por:

Libros de Ingeniera Qumica y ms

https://www.facebook.com/pages/Interfase-
IQ/146073555478947?ref=bookmarks

Si te gusta este libro y tienes la posibilidad,


cmpralo para apoyar al autor.
David Hames y Nigel Hooper
Faculty of Biological Sciences, University of Leeds

Traduccin
Hctor Ral Planas Gonzlez

 
   
    
         
       
          
Director editorial: Javier de Len Fraga
Editor sponsor: Edgar Emilio Salas Castillo
Editor de desarrollo: Hctor F. Guerrero Aguilar
Supervisor de produccin: Juan Jos Manjarrez de la Vega

NOTA
La medicina es una ciencia en constante desarrollo. Conforme surjan nuevos conocimientos, se requerirn cambios de la teraputi-
ca. El (los) autor(es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosicacin medicamentosa sean precisos y acordes con
lo establecido en la fecha de publicacin. Sin embargo, ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina, ni los editores
ni cualquier otra persona que haya participado en la preparacin de la obra garantizan que la informacin contenida en ella sea
precisa o completa, tampoco son responsables de errores u omisiones, ni de los resultados que con dicha informacin se obtengan.
Convendra recurrir a otras fuentes de datos, por ejemplo, y de manera particular, habr que consultar la hoja informativa que se
adjunta con cada medicamento, para tener certeza de que la informacin de esta obra es precisa y no se han introducido cambios en
la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administracin. Esto es de particular importancia con respecto a frmacos
nuevos o de uso no frecuente. Tambin deber consultarse a los laboratorios para recabar informacin sobre los valores normales.

Prohibida la reproduccin total o parcial de esta obra,


por cualquier medio, sin autorizacin escrita del editor.

DERECHOS RESERVADOS 2014, respecto a la primera edicin en espaol por,


McGRAW-HILL/INTERAMERICANA EDITORES, S.A. DE C.V.
Prolongacin Paseo de la Reforma 1015, Torre A,
Piso 17, Colonia Desarrollo Santa Fe,
Delegacin lvaro Obregn,
C.P. 01376, Mxico, D. F.
Miembro de la Cmara Nacional de la Industria Editorial Mexicana, Reg. Nm. 736

ISBN: 978-1-4562-2378-6

."$0/2014

Translated from the fourth English edition of:


Biochemistry, David Hames and Nigel Hooper, 4th ed. (BIOS instant notes).
Copyright 2011, by Garland Science, Taylor & Francis Group, LLC.
All Rights Reserved
ISBN: 978-0-415-60845-9

1234567890 2356789014

Impreso en Mxico Printed in Mexico


Comit asesor para la
revisin cientfica de
la edicin en espaol

MC Rosa Mara Dvila Mrquez


Maestra en Ciencia y Tecnologa de los Alimentos
Profesor Investigador Titular A de tiempo completo
Facultad de Ciencias Qumicas
Benemrita Universidad Autnoma del Estado de Puebla

Dra. Marina Gavilanes Ruiz


Departamento de Bioqumica
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)

MC Ariadna Gonzlez Sols


Departamento de Bioqumica. Conjunto E
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)

Dr. Javier Plasencia de la Parra


Profesor titular. Departamento de Bioqumica
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)

Dra. Sobeida Snchez Nieto


Departamento de Bioqumica. Conjunto E
Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM)
Informacin adicional disponible en el
Centro de aprendizaje en lnea
(On-line Learning Center)
www.mhhe.com/medicina/hames_bioquimica4e
Contenido
Prefacio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ix

Seccin A Clulas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
A1 Clulas procariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
A2 Clulas eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
A3 Crecimiento celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
A4 Imgenes de las clulas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
A5 Fraccionamiento celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Seccin B Aminocidos y protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20


B1 Estructura de los aminocidos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
B2 Estructura y funcin de las protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
B3 Mioglobina y hemoglobina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
B4 Colgena . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
B5 Motores moleculares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
B6 Anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54

Seccin C Estudio de las protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60


C1 Purificacin de protenas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60
C2 Electroforesis en gel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66
C3 Secuenciacin de protenas y sntesis de pptidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
C4 Inmunodeteccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77

Seccin D Enzimas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
D1 Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
D2 Termodinmica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
D3 Cintica enzimtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
D4 Inhibicin enzimtica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94
D5 Regulacin de la actividad enzimtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97

Seccin E Membranas y sealizacin celulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103


E1 Lpidos de la membrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103
E2 Estructura de la membrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108
E3 Transporte de membrana: molculas pequeas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115
E4 Transporte de membrana: macromolculas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 120
E5 Transduccin de seales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 124
E6 Funcin nerviosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 132

Seccin F Estructura y replicacin del DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 136


F1 Introduccin al DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 136
F2 Genes y cromosomas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 140
F3 Replicacin del DNA en las bacterias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 145
F4 Replicacin del DNA en los eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150

Seccin G Sntesis y procesamiento del RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154


G1 Introduccin al RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154
G2 Trascripcin en procariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 156
G3 Operones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 160
viii CONTENIDO

G4 Transcripcin en eucariotas: descripcin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 166


G5 Transcripcin de los genes que codifican protenas
en los eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168
G6 Regulacin de la transcripcin por la polimerasa II de RNA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 172
G7 Procesamiento del pre-mRNA eucariota . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 179
G8 Transcripcin y procesamiento del RNA ribosmico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 189
G9 Transcripcin y procesamiento del RNA de transferencia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 195

Seccin H Sntesis de protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 199


H1 El cdigo gentico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 199
H2 Traduccin en procariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 204
H3 Traduccin en eucariotas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 210
H4 Direccionamiento de protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 213
H5 Glucosilacin de protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 220

Seccin I Tecnologa del DNA recombinante. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224


I1 El poder de los mtodos de DNA recombinante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224
I2 Enzimas de restriccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 227
I3 Hibridacin de cidos nucleicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 232
I4 Clonacin del DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 236
I5 Secuenciacin del DNA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 240
I6 Reaccin en cadena de la polimerasa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 243
I7 Mutagnesis dirigida al sitio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 247

Seccin J Metabolismo de carbohidratos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 252


J1 Monosacridos y disacridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 252
J2 Polisacridos y oligosacridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 257
J3 Gluclisis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 260
J4 Gluconeognesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 268
J5 Va de la pentosa fosfato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 275
J6 Metabolismo del glucgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 278
J7 Control del metabolismo del glucgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 281

Seccin K Metabolismo de lpidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 285


K1 Estructura y funcin de los cidos grasos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 285
K2 Descomposicin de los cidos grasos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 288
K3 Sntesis de cidos grasos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 294
K4 Triacilgliceroles. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 299
K5 Colesterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303
K6 Lipoprotenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 308

Seccin L Respiracin y energa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 311


L1 Ciclo del cido ctrico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 311
L2 Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 315
L3 Fotosntesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 326

Seccin M Metabolismo del nitrgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 335


M1 Fijacin y asimilacin del nitrgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 335
M2 Metabolismo de los aminocidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 338
M3 Ciclo de la urea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343
M4 Hemos y clorofilas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 348

Lecturas recomendadas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 352


Abreviaturas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 357
ndice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 360
Prefacio
Transcurrieron cinco aos desde que se public la tercera edicin de Notas instantneas de bio-
qumica. Muchos cambios se produjeron en el tema desde entonces, y realmente ha sido un periodo
emocionante para el descubrimiento en numerosas reas de esta materia. No es de extraar que, por
lo tanto, los autores enfrenten el mismo deseo experimentado por los escritores de libros de texto de
todo el mundo: poder describir a los estudiantes todo sobre los nuevos avances logrados. Sin embargo,
la razn por la que se redact la primera edicin, hace ya muchos aos, fue destacar la informacin
fundamental que un alumno de primer ingreso tiene que saber para contar con una base slida para
los aos de estudio por venir. Esta nueva edicin se mantiene fiel a ese objetivo original, pero a lo
largo del proceso se aprovech la oportunidad de actualizar el contenido de manera significativa.
La conviccin de los autores es que, como en ediciones anteriores, este libro proporcione a los lec-
tores una forma rpida de reconocer y comprender los principales hechos y conceptos que integran
la piedra angular de esta rama de la ciencia. Para aquellos que deseen conocer ms, la seccin de
Lecturas recomendadas proporciona informacin de algunos de los textos convencionales lderes
en bioqumica, que pueden llevar al alumno a la vanguardia de la materia, adems de revisiones ms
detalladas de temas especficos.
Como se hizo notar en el prefacio de la tercera edicin, si bien este libro est dirigido a apoyar a los
estudiantes sobre todo en los primeros aos de la carrera, los autores saben por su experiencia
personal como docentes que puede convertirse con rapidez en un compaero valioso y que, a largo
plazo, podr consultarse siempre que exista la necesidad de refrescar la memoria, lo que lo convierte
en un til apoyo para la revisin.
En la redaccin de sta, su cuarta edicin, se actualizaron todos los temas primordiales, con el obje-
tivo principal de elaborar un libro que tuviera aproximadamente la misma extensin que la edicin
previa, tomando en cuenta que gracias a la retroalimentacin de los estudiantes (y tambin del per-
sonal acadmico), los autores confirmaron que su formato y claridad de enfoque son una fortaleza
importante en comparacin con los grandes textos que estn disponibles en general.
Por ltimo, unas palabras dirigidas al alumno. Como cualquier tema que se estudia a un nivel avan-
zado, la bioqumica al principio puede parecer intimidante (aunque intelectualmente muy gratifi-
cante). Este libro est organizado de tal forma que no es necesario leerlo de principio a fin. Puede
echarse mano de l de acuerdo con el plan de estudios, en busca de comprensin y orientacin aqu y
all a medida que los cursos progresan, y conviene mantenerse en estrecho contacto con l conforme
se acercan los temidos exmenes, donde sin duda demostrar ser una herramienta rpida de revisar
y que permita tranquilidad al constatar que se conocen los aspectos fundamentales. Esperamos
que lo encuentren tan til como muchos estudiantes de cursos anteriores encontraron las ediciones
previas.
David Hames
Nigel Hooper
SECCIN A CLULAS

A1Clulas procariotas
Notas clave
Origen y evolucin En la Tierra, todos los organismos evolucionaron desde un ancestro comn. En
de las clulas la era prebitica, las molculas orgnicas simples se formaron y polimerizaron
de manera espontnea en macromolculas. Despus, tales macromolculas
adquirieron la capacidad de autorreplicarse y catalizar otras reacciones, antes
de encerrarse dentro de una membrana para formar la primera clula. En el
presente, las clulas se dividen en tres grupos principales: bacterias, arqueas
y eucariotas.
Procariotas Las procariotas son los organismos ms abundantes en la Tierra y se dividen
en dos grupos distintos, las bacterias (o eubacterias) y las arqueas (o arqueo-
bacterias). Una clula procariota no contiene un ncleo envuelto por una
membrana.
Estructura de la clula Cada clula procariota est rodeada por una membrana plasmtica. La clula ca-
procariota rece de organelos subcelulares. El cido desoxirribonucleico (DNA) est conden-
sado dentro del citosol, donde forma el nucleoide.
Paredes de la clula El peptidoglucano (protena y oligosacrido) de la pared celular protege a la
bacteriana clula procariota de la presin mecnica y osmtica. Algunos antibiticos
como la penicilina se dirigen contra enzimas que participan en la sntesis de la
pared celular. Las bacterias grampositivas tienen una pared gruesa que rodea
a la membrana plasmtica, mientras que las bacterias gramnegativas tienen
una pared celular ms delgada y una membrana externa, entre las cuales est
el espacio periplsmico.
Flagelos bacterianos Algunas procariotas tienen flagelos similares a colas. Por rotacin de tal flagelo,
las bacterias pueden moverse a travs del medio que las rodea en respuesta a
estmulos qumicos (quimiotaxis). Los flagelos bacterianos estn formados de
la protena flagelina, la cual forma un largo filamento cuya rotacin es dirigida
por un flujo de protones a travs de las protenas motoras flagelares.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (E2) Estructura de la membrana


(B1) Estructura de los aminocidos (F2) Genes y cromosomas
(B5) Motores moleculares (L2) Transporte electrnico y
(E1) Lpidos de la membrana fosforilacin oxidativa

Origen y evolucin de las clulas de las macromolculas de autorreplicarse como se ve


Pese a la gran variedad de sistemas vivos, todos los orga- con los cidos nucleicos del presente y catalizar otras
nismos de la Tierra son bastante uniformes a nivel mo- reacciones, como se demuestra con el cido ribonu-
lecular, lo que indica que todos ellos evolucionaron a par- cleico (RNA) (seccin G1). Se supone que la primera
tir de un ancestro comn. La vida emergi por primera clula debe haberse originado por el cierre del RNA de
vez hace cuando menos 3 800 millones de aos, aunque autorreplicacin en una membrana compuesta por fos-
cmo se origin la vida y cmo surgi la primera clula folpidos (seccin E1), por lo cual el interior de la clula
son asuntos que an se desconocen. Los experimentos se separ del ambiente externo. Las macromolculas
muestran que las molculas orgnicas simples pueden encapsuladas deberan haberse mantenido como una
formarse y polimerizarse de manera espontnea en ma- unidad capaz de autorreproducirse y luego evolucionar
cromolculas bajo las condiciones que se supone exis- hasta dar origen a la gran variedad de formas de vida que
tan en la atmsfera de la Tierra primitiva, en la llamada se encuentran en la Tierra hoy en da. El anlisis de las
era prebitica. El siguiente paso crtico fue la capacidad secuencias de cido desoxirribonucleico (DNA) (seccin
2 SECCIN A CLULAS

F1) de diferentes organismos ha permitido visualizar E1 y E2). Las procariotas carecen de los organelos sub-
una posible va evolutiva a partir de una clula ancestral celulares membranosos caractersticos de las eucario-
comn hacia las clulas y organismos de la actualidad tas (seccin A2). El citosol acuoso contiene las macro-
(figura A1-1). molculas (enzimas, cido ribonucleico mensajero
(mRNA), RNA de transferencia (tRNA) y ribosomas], com-
Por tanto, el mundo vivo tiene tres divisiones o domi-
puestos orgnicos y iones necesarios para el metabo-
nios principales: bacterias, arqueas y eucariotas (sec-
lismo celular. Asimismo, el citosol contiene el cromo-
cin A2). Las bacterias son las procariotas ms comunes
soma procaritico, que consiste en una molcula de DNA
en el suelo y el agua y viven en o sobre organismos ms
circular, la cual est condensada para formar un cuerpo
grandes; entre las mismas se incluyen Escherichia coli (E.
conocido como el nucleoide (figura A1-2) (seccin F2).
coli) y especies de Bacillus, as como las cianobacterias
(algas fotosintticas azul-verdes). Sobre todo las arqueas
habitan en ambientes inusuales como la salmuera, los Paredes de la clula bacteriana
manantiales de aguas cidas y calientes y en la profun- Para proteger a las clulas de insultos mecnicos y de
didad de los ocanos, e incluyen las bacterias azufradas y la presin osmtica, la mayora de las procariotas est
metangenas, aunque otras se encuentran en ambientes rodeada de una pared celular rgida de 3 a 25 nm de
menos hostiles. grosor (figura A1-2). La pared celular est compuesta
de peptidoglucanos, un complejo de oligosacridos
Procariotas y protenas. El componente oligosacrido consiste en
Las procariotas son los organismos ms numerosos y cadenas lineales alternantes de N-acetilglucosamina
dispersos en la Tierra y se clasifican as debido a que no (GlcNAc) y cido N-acetilmurmico (NAM) con uniones
tienen un ncleo rodeado de membrana. Las procariotas 1-4 (seccin J1). Unido mediante un enlace amida al
incluyen dos grupos relacionados pero separados: las grupo del cido lctico del NAM est un tetrapptido que
bacterias (o eubacterias) y las arqueas (o arqueobacte- contiene un D-aminocido. Cadenas de peptidoglu-
rias). Estos dos grupos de procariotas divergen tempra- canos paralelas adyacentes forman uniones covalentes
no en la historia de la vida en la Tierra (figura A1-1). que se entrecruzan a travs de las cadenas laterales
del tetrapptido con otros pptidos cortos. El extenso
entrecruzamiento de los peptidoglucanos de la pared
Estructura de la clula procariota celular les proporciona su fuerza y rigidez. La presencia
En general, las procariotas varan en tamao desde 0.1 de D-aminocidos en los peptidoglucanos otorga la
a 10 m y tienen una de tres formas bsicas: esfrica resistencia de la pared celular a la accin de las proteasas,
(cocos), tipo bastn (bacilos) o helicoidal (espirilos). las cuales actan sobre los L-aminocidos, que son ms
Como todas las clulas, una clula procariota est ro- comunes (seccin F1), pero proporcionan un objetivo
deada por una membrana plasmtica que encierra exclusivo para la accin de ciertos antibiticos como
por completo el citosol y separa a la clula de su ambien- la penicilina. La penicilina acta al inhibir la enzima
te externo (figura A1-2). La membrana plasmtica, la que forma los entrecruzamientos covalentes de los
cual es de alrededor de 8 nm de grosor, consiste en peptidoglucanos y en consecuencia debilita la pared
una bicapa lipdica que contiene protenas (secciones celular. Los enlaces glucosdicos 1-4 entre la GlcNAc

Procariotas Eucariotas

Bacterias Arqueas Animales Hongos Vegetales

Ancestro
comn

Figura A1-1. Evolucin de las clulas.


A1CLULAS PROCARIOTAS 3

y el NAM es susceptible de hidrlisis por la enzima liso- de repelentes por la llamada quimiotaxis. Los flagelos
zima, la cual est presente en las lgrimas, moco y otras bacterianos son diferentes de los cilios y flagelos euca-
secreciones corporales. riticos por dos razones: 1, cada flagelo bacteriano est
elaborado con la protena flagelina (subunidad de 53
Las bacterias pueden clasificarse como grampositivas o
kDa) en oposicin a la tubulina (seccin B5) y 2, el fla-
gramnegativas segn si se colorean o no con la tincin
gelo bacteriano rota en lugar de incurvarse. Una bacte-
de Gram. Las bacterias grampositivas (p. ej., Bacillus
ria E. coli tiene alrededor de seis flagelos que surgen de
polymyxa) tienen una pared celular gruesa (25 nm)
posiciones aleatorias sobre la superficie de las clulas.
que rodea su membrana plasmtica, en tanto que las
Los flagelos son filamentos helicoidales delgados, de
bacterias gramnegativas (p. ej., E. coli) tienen una pared
15 nm de dimetro y 10 m de largo. El microscopio
celular ms delgada (3 nm) y una segunda membrana
electrnico revela que el filamento flagelar contiene
externa (figura A1-3). En contraste con la membrana
11 subunidades en dos vueltas helicoidales, las cuales,
plasmtica, esta membrana externa es muy permeable
cuando se ven desde el extremo final, tienen el aspecto
al paso de molculas relativamente grandes (peso mo-
de un propelente de 11 hojas con un hueco central. Los
lecular > 1 000 Da) debido a las protenas porinas, las
flagelos crecen a travs de la adicin de nuevas sub-
cuales forman poros en la bicapa lipdica (seccin E3).
unidades de flagelina en el extremo ms alejado de las
Entre la membrana externa y la pared celular est el
clulas, que se difunden a travs del hueco central. En su
periplasma, un espacio ocupado por protenas que
base, situada en la membrana plasmtica, est el motor
secreta la clula.
flagelar, un ensamble intrincado de 40 o ms protenas.
La rotacin de los flagelos es dirigida por un flujo de pro-
Flagelos bacterianos tones a travs de ciertas protenas del motor flagelar. Un
Muchas clulas bacterianas tienen uno o ms apndi- motor similar dirigido por protones se encuentra en la
ces semejantes a una cola conocidos como flagelos. Al trifosfatasa de adenosina (ATP-asa) F0F1 que sintetiza el
hacer rotar sus flagelos, las bacterias pueden moverse a trifosfato de adenosina (ATP) (seccin L2).
travs del medio extracelular hacia atrayentes y alejarse

Membrana Membrana plasmtica Pared celular


externa
Membrana
plasmtica

Citosol
Flagelo
Nucleoide DNA

Figura A1-2. Estructura de la clula procariota.

a) b) Espacio Membrana
periplsmico externa

Membrana Pared celular Membrana


plasmtica de peptidoglucano plasmtica

Figura A1-3. Estructura de la pared celular de a) una bacteria grampositiva,


y b) una bacteria gramnegativa.
SECCIN A CLULAS

A2Clulas eucariotas
Notas clave
Eucariotas Las clulas eucariotas tienen un ncleo rodeado por una membrana y varios
organelos subcelulares (internos) rodeados de membrana, cada uno de los cua-
les desempea una funcin especfica.
Membrana plasmtica La membrana plasmtica rodea las clulas y las separa del ambiente externo. La
membrana plasmtica es una barrera con permeabilidad selectiva debido a
la presencia de protenas de transporte especficas y tiene tambin protenas
receptoras que se unen a ligandos especficos. Tambin se relaciona con los pro-
cesos de exocitosis y endocitosis.
Ncleo El ncleo almacena la informacin gentica de las clulas a travs del DNA en
los cromosomas. Est rodeado por una doble membrana, pero la existencia de
poros en sta permite que las molculas se muevan hacia dentro y hacia fuera
del ncleo. El nucleolo que se encuentra dentro del ncleo es el sitio donde se
sintetiza el RNA ribosmico.
Retculo endoplsmico Esta red de vesculas membranosas interconectadas se divide en dos partes dis-
tintas. El retculo endoplsmico rugoso (RER), el cual est tachonado con ribo-
somas, es el sitio de biosntesis de la membrana y de las protenas secretorias y
de su modificacin postraduccin. El retculo endoplsmico liso (SER) interviene
en la biosntesis de fosfolpidos y en la desintoxicacin de compuestos txicos.
Aparato de Golgi El aparato de Golgi es un sistema de sacos aplanados unidos a la membrana.
Recibe vesculas membranosas del RER, a las que les modifica las protenas que
contienen y a las que despus empaca en otras vesculas, las cuales acaban por
fusionarse con la membrana plasmtica u otros organelos subcelulares.
Mitocondrias Las mitocondrias tienen una membrana interna y una externa separadas por
el espacio intermembranoso. La membrana externa es ms permeable que la
membrana interna debido a la presencia de protenas porinas. La membrana
interna, la cual est plegada para formar crestas, es el sitio de la fosforilacin
oxidativa, la que produce ATP. La matriz central es el sitio de la degradacin de
los cidos grasos y del ciclo del cido ctrico.
Cloroplastos Los cloroplastos de las clulas vegetales estn rodeados por una membrana
doble y tienen un sistema de membranas interno de vesculas tilacoides que
estn apilados para formar granos. Las vesculas tilacoides contienen clorofila y
son el sitio de la fotosntesis. La fijacin del dixido de carbono (CO2) tiene lugar
en el estroma, la materia soluble que rodea las vesculas tilacoides.
Lisosomas En las clulas animales, los lisosomas estn rodeados por una membrana sim-
ple. Tienen un pH cido interno (pH 4 a 5), que mantienen protenas de la mem-
brana que bombean iones H+ hacia dentro. En el interior de los lisosomas hay
enzimas hidrolasas cidas que intervienen en la degradacin de las macromo-
lculas, entre otras aquellas que se internalizan mediante endocitosis.
Peroxisomas Los peroxisomas contienen enzimas que participan en la degradacin de los
aminocidos y los cidos grasos, un bioproducto de los cuales es el perxido de
hidrgeno. La enzima catalasa, que tambin se encuentra dentro de los peroxi-
somas, degrada con rapidez este compuesto txico.
Citosol El citosol es la parte soluble del citoplasma donde tiene lugar un gran nmero
de reacciones metablicas, por ejemplo gluclisis, gluconeognesis, sntesis de
cidos grasos. Dentro del citosol est el citoesqueleto.
A2CLULAS EUCARIOTAS 5

Citoesqueleto El citoesqueleto es una estructura interna que controla la forma y movimiento de


la clula y de los organelos internos. El citoesqueleto consiste en microfilamen-
tos, filamentos intermedios y microtbulos. Los microfilamentos son polmeros
helicoidales de 5 a 9 nm de dimetro de la protena actina que tienen una funcin
mecnica de soporte dentro de las clulas. Los filamentos intermedios son fibras
semejantes a cuerdas de 7 a 11 nm de dimetro elaborados a partir de una familia
de protenas filamentosas intermedias que proveen la fuerza mecnica y la resis-
tencia a la tensin de cizallamiento. Los microtbulos son cilindros huecos de
25 nm de dimetro elaborados de la protena tubulina. El huso mittico que
interviene en la separacin de los cromosomas durante la divisin celular est
hecho de microtbulos. La colchicina y la vimblastina inhiben la formacin de
microtbulos, mientras que el taxol los estabiliza. Al interferir con la mitosis,
algunos de estos compuestos se usan como frmacos anticancerosos.
Pared de la clula La pared celular que rodea a una clula vegetal est hecha del polisacrido celu-
vegetal losa. En la madera, el polmero fenlico denominado lignina da a la pared ce-
lular una fuerza y rigidez adicionales.
Vacuola de la clula La vacuola rodeada de membranas usada para almacenar nutrientes y produc-
vegetal tos de desecho tiene un pH cido y, debido al influjo de agua, crea presin de
turgor dentro de la clula cuando sta se empuja contra la pared celular.
Temas relacionados (A1) Clulas procariotas ((F2) Genes y cromosomas
(E4) Transporte de membrana: (H4) Protena de direccionamiento
macromolculas

Eucariotas Membrana plasmtica


Los eucariotas incluyen especies tan diversas como ani- La membrana plasmtica envuelve la clula, y de ese
males, plantas, hongos y mohos del cieno. En todos los modo la separa del ambiente externo al mismo tiempo
eucariotas, la clula est rodeada por una membrana que mantiene la composicin inica y la presin osm-
plasmtica, tiene un ncleo rodeado por una mem- tica correctas en el citosol. La membrana plasmtica,
brana y contiene diversos organelos subcelulares (figu- como todas las membranas, goza de permeabilidad
ra A2-1). Estos organelos son estructuras rodeadas de selectiva para ciertas molculas debido a la presencia de
membranas, cada uno con una funcin exclusiva y protenas especficas en ella (seccin E3). La membrana
tambin con un complemento especfico de protenas plasmtica tambin participa en la comunicacin con
y otras molculas. Las diferencias clave entre las clu- otras clulas, en particular a travs de la unin de ligan-
las eucariota y procariota (seccin A1) se listan en el dos (molculas pequeas como las hormonas, neuro-
cuadro A2-1. Las clulas animal y vegetal tienen la misma transmisores, etc.) a protenas receptoras sobre su
estructura bsica, aunque algunos organelos y estructu- superficie (seccin E5). La membrana plasmtica tam-
ras se encuentran en una y no en la otra (p. ej., cloro- bin interviene en la exocitosis (secrecin) y endocitosis
plastos, vacuolas y pared celular en las clulas vegeta- (internalizacin) de protenas y otras macromolculas
les, lisosomas en las clulas animales). (seccin E4).

Cuadro A2-1. Diferencias clave entre clulas Ncleo


eucariotas y procariotas El ncleo est rodeado por dos membranas, las mem-
Caractersticas Procariota Eucariota branas nucleares interna y externa. Estas dos membra-
nas se fusionan en los poros nucleares, a travs de los
Dimetro Aprox. 1 m 10 a 100 m cuales las molculas (mRNA, protenas, ribosomas, etc.)
Ncleo Ausente Presente pueden moverse entre el ncleo y el citosol. Otras pro-
Organelos Ausentes Presentes tenas, por ejemplo las que participan en la regulacin
citoplsmicos de la expresin gentica, pueden pasar a travs de los
poros desde el citosol al ncleo. La membrana nuclear
Contenido de 1 106 a 5 106 1.5 107 a 5 109
externa es con frecuencia continua con el retculo endo-
DNA (pares
plsmico rugoso (RER). Dentro del ncleo, el DNA est
de bases)
fuertemente enrollado alrededor de protenas histonas
Cromosomas Una molcula de DNA Mltiples molculas y organizado en complejos denominados cromosomas
circular lineales de DNA (seccin F2). Visible bajo el microscopio de luz (seccin
A4) est el nucleolo, una subregin del ncleo que es el
6 SECCIN A CLULAS

a) Citosol Vesculas
Membrana plasmtica
secretorias

Ncleo
Golgi
Nucleolo

Mitocondria

Retculo
endoplsmico
rugoso
Cilio
Lisosomas
Retculo endoplsmico liso Peroxisoma

b) Pared celular Vacuola Retculo endoplsmico liso


Membrana
plasmtica

Cloroplasto Peroxisoma

Nucleolo Mitocondria

Ncleo
Retculo Golgi Citosol
endoplsmico rugoso

Figura A2-1. Estructura de la clula eucariota: a) estructura de una clula animal


tpica; b) estructura de una clula vegetal tpica.

sitio donde tiene lugar la sntesis del cido ribonucleico aparato de Golgi y liberan su contenido en ste. Durante
ribosmico (rRNA). el trnsito a travs del aparato de Golgi, suceden modi-
ficaciones postraduccin adicionales en estas prote-
Retculo endoplsmico nas y luego son clasificadas y empacadas en diferentes
El retculo endoplsmico (ER) es una red de vesculas vesculas (seccin H5). Tales vesculas emergen por la
membranosas interconectadas. El retculo endopls- cara trans del aparato de Golgi (tambin llamada la red
mico rugoso (RER) est poblado en su cara citoslica con de Golgi) y son transportadas a travs del citosol, para
ribosomas, el sitio de la biosntesis de las protenas de terminar por fusionarse con la membrana plasmtica y
la membrana y secretorias (seccin H4). Dentro de la liberar su contenido al espacio extracelular (un proceso
luz del RER estn las enzimas que intervienen en la modi- conocido como exocitosis; seccin E4) o a otros orga-
ficacin postraduccin (glucosilacin, protelisis, etc.) nelos internos (p. ej., lisosomas) (para mayores detalles
de las protenas de la membrana y secretorias (seccin vase la seccin H4).
H5). El retculo endoplsmico liso (SER), el cual carece
de ribosomas, es el sitio de la biosntesis de fosfolpi- Mitocondrias
dos, y es donde tienen lugar numerosas reacciones de
Una mitocondria tiene una membrana interna y una
desintoxicacin.
externa y entre ambas se encuentra el espacio inter-
membranoso (figura A2-2a). La membrana externa
Aparato de Golgi contiene protenas porinas, las cuales la hacen permea-
El aparato de Golgi es un sistema de sacos aplanados ble a molculas de hasta 10 kDa. La membrana interna,
rodeados de membrana. Las vesculas membrano- que es considerablemente menos permeable, presenta
sas procedentes del RER, que contienen protenas de la grandes pliegues denominados crestas, las cuales pro-
membrana y secretorias, se fusionan con la fase cis del truyen en la matriz central. La membrana interna es el
A2CLULAS EUCARIOTAS 7

a) del hospedador y externas en sus subunidades mono-


Membrana externa Espacio intermembranas mricas; las proteasas degradan protenas, las lipasas
degradan lpidos, las fosfatasas eliminan grupos sul-
Membrana fato de los nucletidos y fosfolpidos y las nucleasas
interna degradan DNA y RNA. Los lisosomas intervienen en la de-
gradacin de macromolculas extracelulares que han
Matriz
Crestas sido incluidas dentro de las clulas mediante endocito-
sis (seccin E4), as como en la degradacin y recicla-
b)
Membrana interna
miento de organelos celulares envejecidos normales, un
Membrana externa
proceso que se denomina autofagia.

Peroxisomas
Estroma Estos organismos tienen una membrana de revesti-
Granos Vescula tilacoide
miento nica y contienen enzimas que degradan los ci-
dos grasos y los aminocidos. Un bioproducto de estas
Figura A2-2. Estructura de una a) mitocondria y un reacciones es el perxido de hidrgeno, el cual es txico
b) cloroplasto. para las clulas. La presencia de grandes cantidades de
la enzima catalasa en los peroxisomas convierte con
sitio donde ocurre la fosforilacin oxidativa y el trans- rapidez el perxido de hidrgeno txico en las sustan-
porte de electrones que participa en la produccin de cias inocuas H2O y O2:
ATP (seccin L2). La matriz central es el lugar de numero-
Catalasa
sas reacciones metablicas, como la del ciclo del cido
ctrico (seccin L1) y la degradacin de los cidos grasos 2H2O2> 2H2O + O2
(seccin K2). Tambin se encuentran dentro de la matriz
el DNA mitocondrial, encargado de codificar algunas de Citosol
las protenas mitocondriales. El citosol es aquella parte del citoplasma no incluida
dentro de ninguno de los organelos subcelulares y es
Cloroplastos el principal sitio del metabolismo celular, en el que se
demuestra la presencia de un gran nmero de diferen-
Los cloroplastos, que son estructuras exclusivas de tes enzimas y otras protenas. Por ejemplo, en el citosol
las clulas vegetales, tambin presentan membranas tienen lugar la gluclisis (seccin J3), gluconeognesis
interna y externa. Adems, hay un extenso sistema de (seccin J4), la va de la pentosa fosfato (seccin J5) y
membrana interno hecho de vesculas tilacoides (ve- la sntesis de cidos grasos (seccin K3). El citosol no
sculas aplanadas interconectadas que forman discos) es una sopa homognea, ya que contiene dentro de
apiladas una contra la otra para formar granos (figura s al citoesqueleto. Tambin se encuentran dentro del
A2-2b). Dentro de las vesculas tilacoides est el pig- citosol de muchas clulas los cuerpos de inclusin (gr-
mento verde clorofila (seccin M4), junto a las enzimas nulos de material que no estn rodeados por una mem-
que atrapan la energa luminosa y la convierten en ener- brana), como los grnulos de glucgeno en el hgado
ga qumica bajo la forma de ATP (seccin L3). El estroma, y en las clulas musculares y las gotitas de triacilglicerol
que es el espacio que rodea a las vesculas tilacoides, es en las clulas grasas del tejido adiposo.
el sitio de fijacin del dixido de carbono (CO2 ) el de la
conversin del CO2 en compuestos orgnicos. Los clo-
roplastos, igual que las mitocondrias, contienen DNA, el Citoesqueleto
cual codifica algunas de las protenas de los cloroplastos. El citoesqueleto es una estructura interna importan-
te para el mantenimiento y alteracin de la forma celu-
Lisosomas lar, para permitir que clulas como los espermatozoides
y los leucocitos se muevan de un sitio a otro, en vesculas
Los lisosomas, los cuales se encuentran slo en las clu- del transporte intracelular y arrastrar los cromosomas
las animales, tienen una membrana simple que los durante la mitosis y tambin cuando la clula se divi-
rodea. El pH interno de estos organelos es levemente de en dos. Tres tipos de filamentos componen el cito-
cido (pH 4 a 5) y se mantiene debido a la accin de pro- esqueleto: microfilamentos, filamentos intermedios y
tenas integrales de la membrana que bombean iones de microtbulos, cada uno de ellos con diferentes propie-
hidrgeno en ellos (seccin E3). Los lisosomas contie- dades mecnicas y dinmicas.
nen un conjunto de hidrolasas que muestran actividad
ptima en este pH cido (y que en consecuencia se deno-
minan hidrolasas cidas), pero son inactivas en el pH Microlamentos
neutral del citosol y del lquido extracelular. Estas enzi- Los microfilamentos (tambin conocidos como fila-
mas participan en la degradacin de macromolculas mentos de actina), con un dimetro de 5 a 9 nm, cumplen
8 SECCIN A CLULAS

una funcin de soporte mecnico, lo cual determina la a) d)


forma de la superficie celular y tambin participan en
el movimiento de todas las clulas. Los microfilamentos
son dos polmeros helicoidales de doble hebra de la pro-
tena actina, los cuales parecen ser estructuras flexibles
b) c)
organizadas en una variedad de haces lineales y redes Luz
Protolamento
ms extensas. A travs de su interaccin con la miosina,
los microfilamentos forman ensambles contrctiles que
participan en varios movimientos intracelulares como
el flujo citoplsmico y en la formacin de invaginacio-
nes de la membrana (seccin B5).

Filamentos intermedios
Los filamentos intermedios (7 a 11 nm de dimetro)
proveen fuerza mecnica y resistencia a la fuerza de
cizallamiento. Estn formados de protenas filamen- Figura A2-3. Estructura de un microtbulo: a) la
tosas intermedias que constituyen una familia grande tubulina consiste en las subunidades  y ; b) un
y heterognea que forma fibras tipo cuerda. La piel de protolamento de tubulina consiste en muchas
los animales ms grandes contiene una extensa red subunidades adyacentes; c) el microtbulo se forma
de filamentos intermedios elaborados con la protena a partir de 13 protolamentos alineados de manera
queratina, que tiene una estructura enrollada helicoidal paralela; d) corte transversal del microtbulo hueco.
 de dos hebras, mientras que la lmina nuclear, una
red que est justo por debajo de la membrana nuclear
interna, est formada de otro tipo de filamentos in- que bloquean la proliferacin de las clulas de divisin
termedios. rpida mediante la interferencia del huso mittico.

Microtbulos Pared de la clula vegetal


El tercer tipo de filamentos del citoesqueleto, los micro- Rodeando la membrana plasmtica de una clula ve-
tbulos, determina la posicin de los organelos rodea- getal est la pared celular, la cual proporciona fuerza y
dos de membranas y dirigen su transporte intracelular. rigidez a la clula. Est construida de manera primaria
Por ejemplo, el huso mittico que interviene en la se- por celulosa, un polisacrido similar a un bastn de
paracin de los cromosomas replicados durante la mi- unidades de glucosa a repeticin con uniones 1-4 (sec-
tosis es un ensamble de microtbulos. Los microtbulos cin J2). Tales molculas de celulosa se ordenan juntas
son estructuras cilndricas huecas con un dimetro en haces de fibras mediante puentes de hidrgeno y
externo de 25 nm que estn elaboradas con la protena las fibras a su vez son mantenidas juntas por otros
tubulina (figura A2-3). La pared rgida de un microt- polisacridos que las entrecruzan. En la madera, otro
bulo est hecha de una disposicin helicoidal de sub- compuesto, la lignina, imparte fuerza y rigidez adicional
unidades alternantes de tubulina  y , cada una de 50 a la pared celular. La lignina es un complejo fenlico
kDa de tamao. Un corte transversal a travs del mi- polimerizado insoluble en agua.
crotbulo revela que hay 13 subunidades de tubulina
por vuelta del filamento. Los microtbulos celulares
estn formados por la adicin de molculas de tubulina
Vacuola de la clula vegetal
y a filamentos preexistentes o centros de nucleacin. Las clulas vegetales suelen contener una o ms vacuo-
Un extremo del microtbulo suele fijarse a un centro las rodeadas por membranas. stas se usan para alma-
organizador de microtbulos denominado centroso- cenar nutrientes (p. ej., sucrosa), agua, iones y produc-
ma. Los frmacos colchicina y vimblastina inhiben la tos de desecho (en especial compuestos que contienen
polimerizacin de los microtbulos y por tanto blo- nitrgeno en exceso). Como los lisosomas de las clulas
quean procesos celulares como la divisin celular, animales, las vacuolas tienen un pH cido que mantienen
que depende del funcionamiento de los microtbulos. bombas de hidrgeno de la membrana y contienen una
Otro componente, taxol, estabiliza la tubulina en los diversidad de enzimas degradativas. La entrada de agua
microtbulos y promueve la polimerizacin. Algunos en la vacuola causa su expansin, lo cual crea presin
de estos compuestos, como la vimblastina y el taxol, hidrosttica (turgor) dentro de la clula, que se balancea
se estn utilizando como frmacos anticancerosos ya mediante la resistencia mecnica de la pared celular.
SECCIN A CLULAS

A3Crecimiento celular
Notas clave
Cultivo celular: Las clulas se pueden hacer crecer en cultivos bajo condiciones apropiadas, lo
descripcin que permite realizar estudios biolgicos celulares y manipulacin gentica.
Cultivo y divisin de la Las clulas procariotas pueden crecer en un medio simple que contenga
clula procariota sales inorgnicas y una fuente de energa. En el ciclo de la clula procariota la
replicacin del DNA sucede a medida que la clula crece, antes de la divisin en
dos clulas hijas por fisin binaria.
Cultivo de clulas Las clulas animales y vegetales pueden crecer en cultivo pero, adems de sales
eucariotas inorgnicas y glucosa, requieren varios aminocidos, vitaminas y factores de
crecimiento para sobrevivir. Los cultivos primarios se preparan de manera
directa a partir de tejidos y tienen una expectativa de vida finita. Las lneas
de clulas inmortales derivadas de clulas madre o clulas tumorales pueden
proliferar de manera indefinida en cultivos.
Ciclo de la clula En clulas eucariotas, el ciclo celular consta de las fases M, G1, S y G2. En la fase
eucariota M, la cual dura alrededor de una hora, ocurren la mitosis y la divisin celular,
mientras que en la fase S el DNA cromosmico se replica. La mayor parte del ciclo
celular (95%) se destina a la interfase (fases G1, S y G2). Se dice que las clulas
quiescentes estn en la fase G0.

Temas relacionados (A1) Clulas procariotas (F3) Replicacin del DNA en bacterias
(A2) Clulas eucariotas (F4) Replicacin del DNA en eucariotas
(F2) Genes y cromosomas

Cultivo celular: descripcin conforme la clula crece. La clula entonces se divide


Tanto las clulas procariotas como las eucariotas pue- por fisin binaria. En este proceso, se forman una nueva
den crecer y manipularse en cultivo. El cultivo celular membrana celular y pared celular alrededor del medio
proporciona un gran nmero de clulas idnticas que de la clula, proceso que acaba por dividir la clula
pueden utilizarse en una variedad de estudios biolgi- parental en dos clulas hijas. Cada una de las clulas
cos y bioqumicos. Tales sistemas de cultivos celulares in hijas recibe una copia de DNA cromosmico.
vitro permiten el crecimiento de las clulas a ser estudia-
das y las manipulaciones genticas llevan a la compren- Cultivo de clula eucariota
sin de la estructura gnica y la funcin que realizan. Aunque las levaduras pueden crecer con facilidad en
cultivos que usen medios mnimos como las clulas
bacterianas, otras clulas eucariotas (clulas animales
Cultivo y divisin de clulas procariotas y vegetales) requieren medios de cultivo mucho ms
Las procariotas como la E. coli pueden crecer en solucio- complejos que contengan, adems de sales y glucosa,
nes con medios simples que contenga sales inorgnicas varios aminocidos y vitaminas, que la clula no puede
y una fuente de energa, por ejemplo, glucosa. Algunos producir por s misma. Los medios para el crecimiento
procariotas pueden replicarse en alrededor de 20 minu- de la clula animal tambin contienen suero, el cual
tos bajo condiciones ideales (p. ej., la presencia de una proporciona los diversos factores de crecimiento pro-
fuente de energa apropiada, crecimiento a la tempera- tenicos requeridos para la divisin celular.
tura ptima), lo cual significa que una sola clula puede
multiplicarse en muchos millones en unas pocas horas. Los cultivos de la clula animal se inician mediante la
dispersin (p. ej., mediante homogeneizacin suave,
El ciclo de la clula procariota es relativamente simple seccin A5) de una pieza de tejido en una suspensin
ya que la replicacin del DNA en el cromosoma circu- de las clulas componentes. Las clulas aisladas cre-
lar nico (seccin A1) se produce de manera continua cen entonces en un plato de cultivo plstico bajo
10 SECCIN A CLULAS

condiciones apropiadas con un medio de crecimiento replicacin del DNA, distribucin de los cromosomas du-
definido. Los cultivos preparados directamente a par- plicados a las clulas hijas y divisin celular.
tir de los tejidos de un organismo se refieren como
primarios. De manera habitual, tales cultivos primarios La mitosis (divisin nuclear), en la cual los cromosomas
pueden cultivarse hasta duplicarlos 50 a 100 veces, des- hijos se separan y ocurre la divisin celular (citocinesis)
pus de lo cual el crecimiento se detiene y mueren. En en la fase M, dura tan slo alrededor de una hora (figura
contraste, las clulas derivadas de tumores y clulas A3-1).
madre embrionarias con frecuencia proliferan en cul- La parte restante del ciclo celular (alrededor de 95%)
tivo de manera indefinida y se refieren como lneas se conserva en interfase (figura A3-1), el periodo entre
celulares permanentes o inmortales. Bajo condiciones mitosis. Durante la interfase, los cromosomas se des-
apropiadas, muchas clulas en cultivo conservan las condensan y distribuyen en los ncleos; a nivel mole-
propiedades diferenciadas adecuadas a su origen. Por cular, es el momento en que ambas clulas crecen y se
ejemplo, los fibroblastos continan secretando colge- replica el DNA.
na y las clulas nerviosas extienden axones. Las c-
lulas madre, que con frecuencia se cultivan a partir de La mitosis es seguida por la fase G1 (figura A3-1), la cual
embriones tempranos, mantienen su capacidad pa- corresponde al intervalo entre mitosis y a la iniciacin de
ra diferenciarse en todos los tipos celulares de un orga- la replicacin del DNA cuando la clula crece de manera
nismo adulto. continua. Luego la clula ingresa en la fase S (S por snte-
sis), durante la cual el DNA cromosmico se replica, y por
ltimo en la fase G2, cuando el crecimiento celular con-
Ciclo de la clula eucariota tina y las protenas se sintetizan en preparacin para
La divisin de las clulas eucariotas debe regularse con la mitosis. De manera tpica, las clulas eucariotas en
sumo cuidado tanto con crecimiento celular como con cultivo tienen un ciclo celular cuya duracin es de 16 a
replicacin del DNA y que ambos fenmenos reciban una 24 horas, pero ste puede ser mucho ms extenso (> 100
cuidadosa coordinacin que asegure la formacin de das) para algunas clulas de un organismo multicelular.
clulas hijas que contengan el complemento comple- La mayora de las variaciones en la duracin del ciclo
to de cromosomas intactos (es decir, el genoma com- celular suceden por diferencias en la extensin de la fase
pleto, seccin F2). La vida de una clula eucariota G1. Algunas clulas in vivo, como las neuronas, detienen
puede definirse como un ciclo celular, el cual consiste su divisin por completo y se dice que son quiescentes,
en cuatro procesos coordinados: crecimiento celular, encerradas en una fase G0 (figura A3-1).

Interfase
G2

G1

G0 M

Figura A3-1. Ciclo de la clula eucariota. La fase S tiene una duracin tpica de
6-8 horas, la G2 es una fase en la cual la clula se prepara para la mitosis y dura
2-6 horas, la mitosis (M) en s misma es breve y toma slo alrededor de 1 hora.
La duracin de G1 es muy variable y depende del tipo celular. Las clulas pueden
ingresar en G0, una fase quiescente, en lugar de continuar con el ciclo celular.
SECCIN A CLULAS

A4Imgenes de las clulas


Notas clave
Microscopio de luz En el microscopio de luz, un rayo de luz se enfoca mediante lentes de vidrio
que producen una imagen agrandada del espcimen. En el microscopio de
campo claro, el espcimen se ilumina desde abajo, con el rayo de luz enfocado
sobre el mismo por la lente condensadora. La lente objetivo enfoca despus
la luz incidente que pasa a travs del espcimen sobre su plano focal, lo que
crea una imagen magnificada. Antes de observarlo, el espcimen se fija con
alcohol o formaldehdo y luego se tie con una sustancia qumica como la
hematoxilina o la eosina. El microscopio de contraste de fase y el ms com-
plejo microscopio de contraste de interferencia diferencial pueden utilizarse
para ver clulas vivas.

Microscopio de En el microscopio de fluorescencia, los compuestos fluorescentes (los cuales


uorescencia absorben luz ante una longitud de onda excitante y luego la emiten a la lon-
gitud de onda de emisin) se usan para visualizar un componente particular
de las clulas. En el microscopio confocal, un lser enfoca la luz de la longitud de
onda excitante sobre el espcimen de manera que slo una seccin delgada
del mismo se ilumina. El rayo lser se mueve a travs de la muestra, lo que pro-
duce una serie de imgenes, que son reensambladas por una computadora para
producir un cuadro tridimensional del espcimen. Los compuestos fluorescen-
tes como la rodamina y la fluorescena pueden acoplarse a anticuerpos que reco-
nocen las protenas de inters. La protena fluorescente verde que las medusas
producen de manera natural (GFP) puede emplearse para marcar otras protenas
y de esa manera visualizar la localizacin y movimiento de las protenas en
las clulas vivas. Las interacciones entre diferentes protenas pueden vigilarse
mediante transferencia de energa de resonancia fluorescente (FRET) al marcar
las dos protenas de inters con diferentes fluorocromos. El movimiento late-
ral de una protena marcada con fluorescencia puede monitorearse mediante
recuperacin de la fluorescencia despus del fotoblanqueo (FRAP).
Microscopia electrnica En la microscopia electrnica, un rayo de electrones se enfoca mediante
el auxilio de lentes electromagnticos. El espcimen se monta dentro de un
ambiente con vaco, de manera que los tomos que se encuentran en el aire no
absorban los electrones. En la microscopia electrnica de transmisin, el rayo
de electrones se pasa a travs de una seccin delgada del espcimen que ha
sido teido con metales pesados. Los metales densos en electrones dispersan
los electrones incidentes y con ello producen una imagen del espcimen. En el
microscopio electrnico de rastreo, la superficie de todo el espcimen es reves-
tida con una capa de metal pesado y slo despus el espcimen es rastreado
con un brazo electrnico que produce una imagen tridimensional de ste.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (C4) Inmunodeteccin


(B6) Anticuerpos (E2) Estructura de la membrana
12 SECCIN A CLULAS

Microscopio de luz del microscopio para el espcimen (figura A4-1). Los


diferentes constituyentes subcelulares (ncleo, mito-
En la microscopia de luz se usan lentes de vidrio para
condrias, citosol, etc.) absorben casi el mismo grado
enfocar un rayo de luz sobre el espcimen en investiga-
de luz visible, lo que los vuelve difcil de distinguir bajo
cin. La luz que pasa a travs del espcimen se enfoca
la luz del microscopio sin la tincin previa del espci-
mediante otra lente para producir una imagen magni-
men. Muchos colorantes qumicos se unen a las mol-
ficada.
culas biolgicas; por ejemplo, la hematoxilina se une a
Numerosos tipos diferentes de microscopios de luz se los aminocidos bsicos Arg y Lys de las protenas, y la
usan de manera rutinaria para estudiar distintos aspec- eosina se une a las molculas cidas (como el DNA y las
tos de la estructura celular. El ms simple es el micros- cadenas laterales de los aminocidos Asp y Glu). Otra
copio de campo claro, en el cual una lmpara que se forma de visualizar estructuras especficas intracelu-
halla en la base del microscopio ilumina el espcimen lares es la tincin citoqumica, en la cual una enzima
desde abajo (figura A4-1), con la luz enfocada en el cataliza la produccin de muchas molculas de un pro-
plano del espcimen gracias a una lente condensadora. ducto de una reaccin localizada y coloreada a partir de
La luz incidente que atraviesa el espcimen es recogida un precursor incoloro. Entonces, el producto coloreado
por la lente objetivo y enfocada en su plano focal, lo puede verse en el microscopio de luz, donde la enzima
que acaba por crear una imagen magnificada. Luego est presente. Por ejemplo, los peroxisomas pueden
esta imagen es magnificada por el ocular, con una mag- visualizarse mediante el uso de una tincin citoqumica
nificacin total que es la suma de las magnificaciones para la catalasa (seccin A2).
de cada lente. Con el fin de incrementar la resolucin
alcanzada por un microscopio compuesto, el espcimen
Microscopio de contraste de fase
es con frecuencia recubierto con aceite de inmersin,
Cuando la luz atraviesa una clula viva, la fase de la onda
dentro del cual se coloca la lente objetivo. El lmite de
de luz se modifica de acuerdo con el ndice refractario
resolucin del microscopio de luz usando luz visible es
de la clula: la luz que pasa a travs de una parte de la
de alrededor de 0.2 m.
clula relativamente gruesa o densa, como el ncleo, es
retardada; en consecuencia, su fase es desplazada en
Fijacin y tincin de los especmenes relacin con la luz que pasa a travs de una regin ms
En el microscopio de campo claro, el espcimen a exa- delgada adyacente del citoplasma. Tanto el microscopio
minar suele fijarse en primer lugar con una solucin de contraste de fase como, de una manera ms com-
que contiene alcohol o formaldehdo. Estos compuestos pleja, el microscopio de contraste de interferencia di-
desnaturalizan las protenas y, en el caso del formalde- ferencial (o microscopia de interferencia de Nomarski)
hdo, introducen enlaces covalentes cruzados entre gru- aprovechan los efectos de interferencia producidos
pos amino de molculas adyacentes, los cuales estabili- cuando los dos grupos de ondas de luz se recombinan y
zan las interacciones entre protenas y entre protenas y por tanto crean una imagen de las estructuras celulares.
cidos nucleicos. El espcimen fijado puede entonces Como estos tipos de microscopios no requieren que los
embeberse en parafina o una resina y cortarse en sec- especmenes estn fijos o teidos, se usan para examinar
ciones delgadas (0.5 a 10 m de grosor) con la ayuda de la estructura de los organelos ms grandes (ncleo,
un micrtomo. Cada seccin se monta en un portaobje- mitocondrias, etc.) en las clulas vivas. El microscopio
tos de vidrio y entonces se coloca en la plataforma mvil de contraste de interferencia diferencial mejorado con

Lente ocular

Plano focal

Lente objetivo

Espcimen en la
plataforma mvil

Lente condensadora

Fuente de luz

Figura A4-1. Va ptica de un microscopio compuesto.


A4IMGENES DE LAS CLULAS 13

vdeo puede usarse para visualizar el movimiento de los que se toman a diferentes profundidades a travs de la
organelos dentro de las clulas, por ejemplo junto con muestra. A continuacin, una computadora combina las
los microtbulos (seccin A2). imgenes para proporcionar la imagen tridimensional
completa. El microscopio de deconvolucin consigue
Microscopia de uorescencia el mismo efecto de imagen afilada del microscopio
confocal pero a travs de un proceso diferente.
En la microscopia de fluorescencia, el microscopio de
luz es adaptado para detectar la luz que emite un com-
ponente fluorescente que se usa para teir en forma Protena uorescente verde
selectiva determinados componentes intracelulares. Se La visualizacin de protenas en las clulas vivas ha
dice que una sustancia qumica es fluorescente si absor- sido revolucionada por el descubrimiento de una pro-
be la luz en una longitud de onda (la longitud de onda de tena fluorescente de manera natural encontrada en la
excitacin) y a continuacin emite luz a una longitud medusa Aequorea victoria. En esta protena de 238 ami-
de onda ms larga (longitud de onda de emisin). De nocidos, llamada protena fluorescente verde (GFP),
manera habitual, en la microscopia fluorescente se usan ciertas cadenas laterales de los aminocidos se ciclizan
dos compuestos que son la rodamina y el rojo de Texas, de manera espontnea para formar un cromforo que
los cuales emiten luz roja y la fluorescena, la cual emite fluoresce con color verde. Con la ayuda de tcnicas de
luz verde. Primero, se agrega un anticuerpo contra el DNA recombinante (seccin I1), el DNA codificante de la
antgeno de inters (llamado el anticuerpo primario; GFP puede ser adherido a las secuencias de DNA que codi-
seccin B6) al espcimen. Un componente fluorescente se fican otras protenas y de esta forma introducido dentro
acopla por medios qumicos a un anticuerpo secundario de clulas vivas en cultivo o dentro de clulas especfi-
que reconoce al anticuerpo primario. A continuacin, cas de un animal ntegro. Las clulas que contienen el
el anticuerpo secundario marcado con fluorescencia se gen introducido pasan a producir la protena marcada
aade a la seccin tisular o a la clula permeabilizada, y de con la GFP, la cual florecer de color verde bajo el micros-
esa manera el espcimen se ilumina con luz a la longitud copio de fluorescencia. La localizacin y movimiento
de onda excitante (figura A4-2).Entonces se visualizan de la protena marcada puede entonces estudiarse en
las estructuras del espcimen al cual el anticuerpo est clulas vivas en tiempo real. Se han diseado mltiples
unido. variaciones de la GFP, las cuales emiten luz a diferentes
longitudes de onda, por ejemplo protena fluorescente
La microscopia confocal es un refinamiento de la azulosa (GFP) y la protena fluorescente amarilla (YFP), lo
microscopia de fluorescencia normal que produce im- que ofrece la oportunidad de visualizar varias protenas
genes ms claras de toda la clula o de especmenes en forma simultnea en la misma clula.
de mayor tamao. En el microscopio de fluorescencia
normal, la luz fluorescente emitida por el compuesto
procede de molculas que estn por arriba y por debajo Transferencia de uorescencia por
del plano focal, lo que enturbia la imagen y dificulta energa de resonancia (FRET)
determinar el ordenamiento molecular tridimensional Las interacciones entre una protena y otra pueden
real. Con el microscopio confocal, slo las molculas del monitorearse mediante la transferencia de fluorescen-
plano del foco fluorescen debido al uso de un rayo l- cia por energa de resonancia (FRET). Las dos protenas
ser enfocado en la longitud de onda excitante. El rayo de inters son marcadas con un fluorocromo diferente
lser es movido a diferentes partes del espcimen, lo (marcadas con diferentes variantes de la GFP, vase
que permite la produccin de una serie de imgenes antes), elegidos de manera que el espectro de emisin

Anticuerpo secundario
Anticuerpo marcado con uorescencia Emisin
Antgeno primario
inmovilizado

Excitacin

Figura A4-2. Marcacin de una protena con un anticuerpo marcado con


uorescencia para el microscopio uorescente. El anticuerpo primario reconoce
el antgeno de inters y se une a l en el espcimen. Numerosas molculas del
anticuerpo secundario se unen al anticuerpo primario y proveen una amplicacin
de la seal. El anticuerpo secundario se acopla de manera covalente a un colorante
fosforescente, que emite luz cuando se ilumina a su longitud de onda excitante.
14 SECCIN A CLULAS

de un fluorocromo se superponga con el espectro de Microscopia electrnica


excitacin del otro (figura A4-3a). Si las dos protenas En contraste con la microscopia de luz, donde lentes
se encuentran en una proximidad muy cercana (tanto pticas enfocan un rayo de luz, en el microscopio elec-
como 2 nm), la energa de la luz absorbida puede trans- trnico lentes electromagnticas enfocan un rayo de
ferirse en forma directa desde un fluorocromo al otro electrones. Debido a que tomos del aire absorben los
(figura 3c). En consecuencia, cuando la muestra es ilu- electrones, el espcimen debe montarse en un ambiente
minada bajo la longitud de onda de excitacin del pri- con vaco dentro de un tubo evacuado. La resolucin
mer fluorocromo, la luz es emitida con la longitud de del microscopio electrnico con materiales biolgicos
onda de emisin del segundo. Si las dos protenas no es a lo ms de 0.10 nm. En la microscopia electrnica
se encuentran en proximidad cercana, no transfieren la de transmisin, un rayo de electrones es dirigido a
fluorescencia (figura A4-3b). travs del espcimen y las lentes electromagnticas se
usan para enfocar los electrones transmitidos para
Recuperacin de la uorescencia producir una imagen en la pantalla de visualizacin o
despus del fotoblanqueo (FRAP) en una pelcula fotogrfica (figura A4-4a). Como en la
El movimiento lateral de las protenas en una mem- microscopia de luz estndar, se ven cortes delgados del
brana puede visualizarse a travs del uso de la tcnica espcimen. Sin embargo, para la microscopia electrni-
de recuperacin de la fluorescencia despus del foto- ca de transmisin los cortes deben ser mucho ms
blanqueo (FRAP). En esta tcnica, una pequea regin de delgados (50 a 100 nm de grosor). Como los electrones
inters de las clulas que expresa una protena marcada pasan de manera uniforme a travs del material bio-
con GFP es expuesta a un pulso de luz muy intensa de un lgico, los especmenes sin teir proporcionan imgenes
lser, que destruye (blanquea) las molculas fluorescen- muy pobres. Por consiguiente, el espcimen debe ser
tes del rea. La fluorescencia de esta regin blanqueada teido en forma rutinaria con el fin de dispersar algunos
es revisada de manera subsecuente como una funcin de los electrones incidentes, lo cuales no son enfocados
del tiempo, ya que otras protenas marcadas con fluo- por las lentes electromagnticas y por tanto no forman
rescencia se mueven dentro de la regin blanqueada de imagen. Metales pesados como el oro y el osmio se
la membrana. La tasa de recuperacin de la fluorescen- usan con frecuencia para teir los materiales biolgicos.
cia depende de la movilidad lateral de la protena mar- En particular, el tetraxido de osmio tie de manera
cada con fluorescencia. preferencial ciertos componentes celulares como las

a)
Excitacin Excitacin
Emisin a Emisin
a 440 nm CFP a 490 nm YFP
490 nm a 527 nm
(azul) (amarilla)

Protena X Protena Y

b) c)

440 nm Azul a FRET


490 nm 440 nm Amarilla
a 527 nm

Figura A4-3. FRET. Para determinar si dos protenas interactan dentro de la clula,
las protenas primero se marcan con dos variantes diferentes de GFP. a) En este
ejemplo, la protena X se acopla a GFP, la cual se excita a 440 nm y emite luz azul
a 490 nm, mientras que la protena Y se acopla a YFP, la cual se excita a 490 nm y
emite luz amarilla a 527 nm. b) Si la protena X y Y no interactan, slo se produce
uorescencia a partir de CFP cuando la muestra se ilumina a 440 nm y uoresce a 490
nm. c) Cuando las protenas X y Y interactan, sucede FRET. Al iluminar la muestra a
440 nm se excita CFP, cuya emisin a su vez excita a YFP, que emite luz amarilla a 527
nm.
A4IMGENES DE LAS CLULAS 15

membranas, las cuales aparecen negras en la imagen. se ven en el microscopio electrnico, las manchas oscu-
El microscopio electrnico de transmisin cuenta con ras y pequeas debidas a las partculas de oro se ven en la
suficiente poder de resolucin como para usarlo para imagen donde una molcula de anticuerpo se ha unido a
obtener informacin acerca de las formas de las prote- su antgeno (seccin C4) y de esa manera la tcnica puede
nas purificadas, virus y organelos subcelulares. Pueden utilizarse para localizar protenas especficas.
obtenerse vistas tridimensionales de las estructuras con
En la microscopia electrnica de barrido, un espci-
resoluciones de 2 a 10 nm con el uso de la tcnica de
men (ntegro) se fija y luego se reviste con una capa
tomografa electrnica, la cual genera imgenes tridi-
delgada de un metal pesado como el platino. Entonces
mensionales mediante anlisis por computadora de
un rayo electrnico recorre el espcimen y excita
imgenes bidimensionales obtenidas en una gama
molculas dentro de ste que liberan electrones
de vistas diferentes. La microscopia crioelectrnica, en
secundarios. Tales electrones secundarios se enfocan
la cual la muestra se congela con rapidez a muy bajas
sobre un detector y se muestra la imagen resultante
temperaturas, se usa para determinar las estructuras
(figura A4-4b). El microscopio electrnico de barrido
tridimensionales de las protenas (seccin B2).
produce una imagen tridimensional debido a que el
Los anticuerpos pueden ser marcados con partculas de nmero de electrones secundarios producidos por
oro electrnicamente densas de una forma similar a la cualquier punto nico del espcimen depende del
que se marca con compuestos fluorescentes en la micros- ngulo del rayo electrnico en relacin con la superficie
copia de fluorescencia y entonces unirse a protenas del espcimen. La resolucin del microscopio electr-
especficas en secciones delgadas del espcimen. Cuando nico de barrido es slo de alrededor de 10 nm.

a) b)
Fuente de electrones

Lente condensadora Lente

Espcimen
Deector del rayo
Lente objetivo
Lente
Imagen en el tubo
de rayos catdicos
Lente proyectora

Imagen en la pantalla
Detector
Espcimen

Figura A4-4. Principales caractersticas de un a) microscopio electrnico de


transmisin y un b) microscopio electrnico de barrido.
SECCIN A CLULAS

A5Fraccionamiento celular
Notas clave
Aislamiento de las clulas Los tejidos animales y vegetales contienen una mezcla de tipos celulares y la
y sus partes: descripcin mayora de las clulas contiene mltiples organelos subcelulares. Con el fin de
estudiar clulas y organelos en aislamiento, es deseable tener una poblacin
homognea de clulas.

Citometra de ujo Las clulas individuales pueden identificarse mediante un citmetro de flujo.
Los anticuerpos, acoplados a compuestos fluorescentes que se unen a mol-
culas en la superficie de determinados tipos de clulas, pueden usarse para
separar clulas entre s en un clasificador de clulas activado por fluorescencia
(FACS).
Fraccionamiento El fraccionamiento subcelular consiste en producir aberturas en una clula
subcelular (p. ej., mediante homogeneizacin) y en la separacin de los diversos organe-
los entre s, de manera habitual, mediante centrifugacin. La centrifugacin
diferencial separa los organelos subcelulares con base en su tamao y
densidad. Se usa una ultracentrfuga para generar fuerzas poderosas que
separan los diversos organelos, los cuales sedimentan en el fondo del tubo de
centrifugacin. Con fuerzas menores, sedimentan el ncleo, las mitocondrias,
cloroplastos y lisosomas, mientras que se necesitan fuerzas mayores para
que sedimenten el retculo endoplsmico, el aparato de Golgi y la membrana
plasmtica. La centrifugacin con un gradiente de densidad de equilibrio usa
un gradiente de una solucin densa (p. ej., solucin de sucrosa) para separar
organelos subcelulares con base en su densidad.
Protenas marcadoras Una forma conveniente para determinar la pureza de una preparacin de
organelos es medir la actividad de una protena marcadora o enzima en las
diversas fracciones subcelulares. Una protena marcadora es aquella que se
encuentra slo dentro de un compartimiento particular de la clula.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (C4) Inmunodeteccin


(A4) Imgenes celulares (D1) Introduccin a las enzimas
(C2) Electroforesis en gel

Aislamiento de clulas y sus partes: de material, pero contienen una mezcla heterognea de
descripcin clulas. Se han desarrollado tcnicas con las que pueden
aislarse poblaciones homogneas de clulas, hacerlas
La mayora de los tejidos animales y vegetales contiene
crecer en cultivos para amplificarlas y en pasos subse-
una mezcla de tipos celulares y casi todas las clulas
cuentes estudiar y fraccionar sus partes constitutivas.
contienen mltiples organelos subcelulares (seccin
A2). Aunque las tcnicas microscpicas (seccin A4)
pueden usarse para visualizar organelos y grandes mol- Citometra de ujo
culas internas de las clulas, muchos estudios sobre la Pueden identificarse diferentes clulas a travs de la
estructura celular y su funcin requieren muestras de medicin de la luz o la fluorescencia que emiten, a
tipos particulares clulas y de organelos o componen- medida que traspasan un rayo lser de un citmetro
tes internos de las mismas. La mayora de los procedi- de flujo. En un clasificador de clulas activado por
mientos bioqumicos requiere la obtencin de grandes fluorescencia o FACS (figura A5-1), un instrumento ba-
nmeros de clulas y entonces se las rompe con recur- sado en la citometra de flujo, las clulas pueden iden-
sos fsicos para aislar sus componentes. Las muestras tificarse y separarse entre ellas. Las clulas de inters
tisulares proveen con frecuencia grandes cantidades se marcan primero con un anticuerpo, el cual es espe-
A5FRACCIONAMIENTO CELULAR 17

cfico para una particular molcula de la superficie ce- cente. Estas poblaciones homogneas pueden entonces
lular. El anticuerpo es acoplado a un colorante fluo- usarse para efectuar anlisis bioqumicos o cultivos. El
rescente (seccin A4), de manera que cuando las clulas contenido de DNA y RNA de una clula tambin puede
pasan un rayo lser en una fila y en una corriente es- medirse mediante la citometra de flujo.
trecha, puede medirse la fluorescencia de cada clula. A
continuacin, una boquilla vibratoria forma pequeas
gotitas, cada una de las cuales contiene una sola clula, Fraccionamiento subcelular
a la que se le da una carga positiva o negativa, lo que Con el propsito de estudiar macromolculas y pro-
depende de si la clula que contiene es fluorescente. cesos metablicos internos de las clulas, el fraccio-
Un campo elctrico fuerte separa las diferentes gotas namiento subcelular suele ser de ayuda para aislar un
cargadas en contenedores separados, de manera que tipo de organelo subcelular (seccin A2) del resto de los
cada contenedor termina por tener una poblacin ho- contenidos celulares. De manera inicial, la membrana
mognea de clulas con respecto a la molcula de la plasmtica (la pared celular, si est presente) debe rom-
superficie celular marcada con un anticuerpo fluores- perse. Para hacerlo, el tejido o la muestra de las clulas

Vibrador de boquilla ultrasnico


(forma gotitas)
Suspensin de clulas

Lquido de revestimiento

Lser
Detectores Analizador

Pequeos grupos
de gotas con carga

positiva debido a la
deteccin de una clula Pequeos grupos
+ de gotas con carga
no uorescente +
negativa debido a la
deteccin de clulas
2 000 V + +2 000 V uorescentes solas
+



+
+

Recolector de culas Recolector de culas

Matraz para las gotitas que no fueron desviadas

Figura A5-1. Clasicador de clula activado por uorescencia. Un anticuerpo


especco para una protena particular de la supercie celular se liga a una
molcula uorescente y luego se aade a una mezcla de clulas. Cuando cada
clula pasa a travs del rayo lser se le monitorea la uorescencia. A las gotas
que contienen clulas solas se les asigna una carga positiva o negativa, segn si
la clula lleva unido el anticuerpo marcado con uorescencia. Acto seguido, las
gotas que contienen una sola clula son desviadas por un campo elctrico en
tubos de recoleccin de acuerdo con su carga. La concentracin de clulas es
tal que la mayora de las gotas no contiene clulas y el ujo es desviado hacia
un contenedor de desecho junto con cualquier cmulo de clulas.
18 SECCIN A CLULAS

se suspenden en una solucin de sucrosa isotnica (0.25 de Golgi. Una centrifugacin final a 100 000 g durante
a 0.32 M) amortiguada a un pH apropiado y se hacen 90 minutos resultar en un sedimento ribosmico y
aberturas a las clulas por homogeneizacin en un un sobrenadante que en esencia es libre de materias
homogeneizador o mezclador, por sonicacin o some- particuladas y se considera que es la verdadera fraccin
tindolas a altas presiones (presin francesa o bomba citoslica soluble. Sin embargo, las fracciones aisladas
de nitrgeno). La homogeneizacin inicial y el fraccio- por centrifugacin diferencial no suelen encontrarse por
namiento subcelular suelen efectuarse a 4 C con el fin completo libres de otros organelos subcelulares y de esa
de minimizar la degradacin enzimtica de los consti- manera pueden necesitar una purificacin adicional.
tuyentes celulares. La muestra de clulas rotas es con Para separaciones a fuerzas g bajas, se usa una centrfuga
frecuencia filtrada a travs de muselina o de otra gasa preparadora, la cual tiene un rotor que gira en el aire
fina para eliminar los cmulos ms grandes de material a la presin ambiental. No obstante, se requiere una
antes de continuar el procedimiento. ultracentrfuga para separaciones a fuerzas g ms altas,
en la cual la cmara se mantiene en un alto vaco para
Centrifugacin diferencial reducir la friccin y el subsecuente calentamiento, que
podra ocurrir entre el rotor que gira y el aire.
En la centrifugacin diferencial, los diversos organe-
los subcelulares se separan uno de otro con base en
su tamao y densidad, por lo cual las estructuras ms Centrifugacin con gradiente
grandes y pesadas sedimentan con ms rapidez. Se de densidad de equilibrio
usa una centrfuga para generar fuerzas poderosas, La centrifugacin con gradiente de densidad de equili-
hasta de 100 000 veces la fuerza de la gravedad (g). La brio se usa con frecuencia para purificar adicionalmente
muestra homogeneizada se coloca en un tubo de cen- los organelos despus de su separacin parcial por
trfuga apropiado, el cual se carga en el rotor de la centrifugacin diferencial. En este procedimiento, los
centrfuga y se somete a centrifugacin (figura A5-2a). organelos se separan con base en su densidad. La frac-
En primer lugar se usan fuerzas g relativamente bajas cin de organelos impura se carga hasta llenar el tubo de
durante breves periodos, pero luego se usan fuer- la centrfuga que contiene un gradiente de una solucin
zas g cada vez ms altas por periodos ms prolonga- densa (p. ej., una solucin del sucrosa; figura A5-3). La
dos. Por ejemplo, la centrifugacin a 600 g durante solucin de sucrosa est ms concentrada (densa) en la
3 minutos hace sedimentar el ncleo y los organe- parte inferior del tubo y su concentracin (y densidad)
los ms grandes (figura A5-2b). El sobrenadante de disminuye a medida que se asciende en el tubo. Durante
este paso se elimina hacia un tubo fresco y entonces la centrifugacin (p. ej., a 160 000 g durante 3 h), los
se centrifuga a 6 000 g durante 8 minutos para hacer diferentes organelos se mueven hacia abajo del tubo
sedimentar las mitocondrias, peroxisomas y, si estn hacia una posicin de equilibrio, donde su densidad es
presentes, lisosomas o cloroplastos. La centrifugacin igual a la de la sucrosa en esa posicin. Las fuerzas de
del siguiente sobrenadante a 40 000 g durante 30 mi- sedimentacin tienden a mover los organelos un poco
nutos hace sedimentar la membrana plasmtica y ms hacia abajo del tubo pero, si hacen eso, los hacen
fragmentos del retculo endoplsmico y del aparato ingresar en una regin de densidad ms alta que la

a) Homogeneizado b)

600 g, 3 min
Ncleos Sobrenadante
sedimentados
6 000 g, 8 min
Centrifugacin
Mitocondrias,cloroplastos, Sobrenadante Sobrenadante
lisosomas, peroxisomas
sedimentados 40 000 g, 30 min

Membrana plasmtica, Sobrenadante


fragmentos del aparato
Sedimento
de Golgi y RER 100 000 g, 90 min
sedimentados
Subunidades Citosol
ribosmicas sobrenadante
sedimentadas

Figura A5-2. Fraccionamiento celular por centrifugacin diferencial: a) esquema del


fraccionamiento celular de una muestra de tejido; b) aspecto de una muestra en el tubo
de la centrfuga antes y despus de la centrifugacin.
A5FRACCIONAMIENTO CELULAR 19

del organelo y de esa manera stos flotan y ascienden en el microscopio electrnico (seccin A4). Una alterna-
hacia la posicin previa. Las mitocondrias, lisosomas y tiva disponible ms accesible consiste en medir la acti-
peroxisomas difieren en densidad y por eso pueden ser vidad de (un ensayo para valorar) una enzima particular
efectivamente separados uno del otro mediante una (seccin D1), la cual es caracterstica de un organelo y
centrifugacin por gradiente de densidad (figura A5-3). que por consiguiente no se encuentra en cualquier sitio
De manera similar, el retculo endoplsmico rugoso, de las clulas. Por ejemplo, la catalasa es una buena
el aparato de Golgi y la membrana plasmtica pueden enzima marcadora de peroxisomas, la deshidrogenasa
separarse usando un gradiente de densidad ms bajo. El de succinato de la mitocondrias, la catepsina C o fosfa-
cloruro de cesio, que es ms denso, se usa para producir tasa cida de los lisosomas, y la fosfatasa alcalina de la
el gradiente de densidad para la separacin de partculas membrana plasmtica. Por tanto, la presencia de cata-
ms densas como el DNA, RNA y protenas mediante la lasa en una fraccin de los lisosomas debera significar
centrifugacin con gradiente de densidad de equilibrio. su contaminacin con peroxisomas. Un buen indicador
para comprobar la pureza o grado de contaminacin
de una preparacin de organelos consiste en medir la
Protenas marcadoras actividad de tales enzimas en las diferentes fracciones
Cuando la muestra celular ha sido fraccionada, la aisladas. De manera alternativa, una protena marca-
pureza de las preparaciones con los diferentes orga- dora puede detectarse si se recurre al SDS-PAGE (seccin
nelos necesita valorarse. Una forma en la cual puede C2) y el Western blotting con un anticuerpo especfico
hacerse esto es mediante la valoracin de la morfologa (seccin C4).

Fraccin de
Densidad en incremento

organelos
de la sucrosa

Centrifugacin Lisosomas

Mitocondria

Peroxisomas

Figura A5-3. Separacin de organelos mediante


centrifugacin con gradiente de densidad de equilibrio.
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B1Estructura de los aminocidos


Notas clave
Aminocidos Todas las protenas estn formadas por el mismo grupo de 20 aminocidos
estndar. Un aminocido tpico cuenta con un grupo amino primario, un
grupo carboxilo, un tomo de hidrgeno y una cadena lateral (grupo R) fija a
un tomo de carbono  central (C).
Enantimeros Los aminocidos con cuatro diferentes grupos dispuestos en tetraedro alre-
dedor del tomo C pueden existir en una configuracin D O L. Estos dos enan-
timeros no son imgenes en espejo superpuestas y pueden distinguirse con
base en sus diferentes planos de rotacin de la luz polarizada. En las protenas
se encuentra slo el enantimero L.
Los 20 aminocidos Las diferentes cadenas laterales de los grupos R presentan distintas propieda-
estndar des fisicoqumicas. Pueden ser polares, cidas, bsicas, aromticas, volumi-
nosas, con una conformacin inflexible, capaces de formar enlaces de hidr-
geno y enlaces cruzados, as como de presentar reactividad qumica. La glicina
(Gly, G) tiene un tomo de hidrgeno como su grupo R. La alanina (Ala, A),
valina (Val, V), leucina (Leu, L), isoleucina (Ile, I) y la metionina (Met, M) tie-
nen cadenas laterales alifticas de diferentes estructuras que son hidrfobas
e inertes desde el punto de vista qumico. Las cadenas laterales aromticas
de la fenilalanina (Phe, F), tirosina (Tyr, Y) y triptfano (Trp, W) tambin son de
naturaleza hidrfoba. La prolina (Pro, P), un aminocido de conformacin
rgida, tiene su cadena lateral aliftica unida otra vez al grupo amino, por lo
que en realidad es un iminocido. La cadena lateral azufrada e hidrfoba de la
cistena (Cys, C) es muy reactiva y puede formar un enlace disulfuro con otro
residuo cistena. Los aminocidos bsicos arginina (Arg, R) y lisina (Lys, K)
poseen cadenas laterales con carga positiva, en tanto que la cadena lateral de
la histidina (His, H) puede presentar carga positiva o neutra en un pH neutral.
Las cadenas laterales de los aminocidos cidos cido asprtico (Asp, D) y
cido glutmico (Glu, E) muestran carga negativa en un pH neutral. La cadena
lateral amida de la asparagina (Asn, N) y la glutamina (Gln, Q) y la cadena la-
teral hidroxilo de la serina (Ser, S) y la treonina (Thr, T) es polar y sin carga y
puede formar enlaces de hidrgeno.
cidos, bases y pH El pH es una medida de la concentracin de H+ en una solucin. Un cido es un
donador de protones; una base en un aceptor de protones y ambos juntos se
denominan par acidobsico conjugado, por ejemplo el cido actico (CH3COOH)
y el acetato (CH3COO). El pK de un cido es el pH al cual el cido se disocia a la
mitad. La ecuacin de Henderson-Hasselbalch expresa la interrelacin entre
pH, pK y el cociente entre cido y base.
Amortiguadores Un par conjugado acidobsico puede fungir como un amortiguador, es decir,
resistir los cambios del pH. En una curva de titulacin de un cido, el punto
de inflexin indica el valor del pK. La capacidad de amortiguamiento del par
acidobsico lo indica el pK 1 unidad de pH. En los lquidos biolgicos, los
iones fosfato y carbonato actan como amortiguadores. Aminocidos, prote-
nas, cidos nucleicos y lpidos tambin tienen alguna capacidad de amorti-
guamiento.
B1ESTRUCTURA DE LOS AMINOCIDOS 21

Ionizacin de los Los grupos amino  y carboxilo  de los aminocidos actan como grupos
aminocidos acidobsicos, ya que donan o aceptan un protn conforme a la variacin del
pH. A pH bajo, ambos grupos se hallan protonados, pero a medida que el pH
se incrementa pierden un ion hidrgeno, primero el grupo carboxilo y des-
pus el amino. El pK de los 20 aminocidos estndar es de 1.82.9 para el
grupo carboxilo  y de 8.810.8 para el grupo amino . Los aminocidos con
una cadena lateral ionizable tienen un grupo acidobsico adicional con un pK
caracterstico.

Temas relacionados (B2) Estructura y funcin de (B3) Mioglobina y hemoglobina


las protenas (B4) Colgena

Aminocidos tiene la propiedad de la quiralidad (del griego cheir =


Los aminocidos son los ladrillos con los que se constru- mano) (figura B1-1b). Las dos imgenes en espejo que
yen las protenas (seccin B2). Las protenas de todas las no se superponen se denominan enantimeros. Los
especies, desde las bacterias a los seres humanos, estn enantimeros son indistinguibles con la mayor parte de
elaboradas de los mismos 20 aminocidos estndar. las tcnicas fsicas y qumicas, pero pueden distinguirse
Diecinueve de ellos son aminocidos con un grupo con base en su diferente rotacin ptica del plano de la
amino primario (NH3+) y un grupo de cido carbox- luz polarizada. Las molculas se clasifican con dextro-
lico (carboxilo; COOH) fijo a un tomo de carbono cen- rrotatorias (D; del griego dextro = derecho) o levorrota-
tral, que se denomina tomo de carbono (C) porque torias (L; del griego levo = izquierdo) segn si rotan el
est adyacente al grupo carboxilo (figura B1-1a). Tam- plano de la luz polarizada en el sentido de las agujas
bin un tomo de hidrgeno est fijo al C y una cadena del reloj o al contrario, respectivamente. Los aminoci-
lateral variable o grupo R. La nica excepcin a esta dos D y L tambin pueden distinguirse por enzimas que
estructura general la representa prolina, que tiene un de manera habitual slo reconocen uno u otro de los
grupo amino secundario que la convierte en realidad enantimeros. En las protenas slo se encuentran ami-
en un iminocido . Los nombres de los aminocidos nocidos L. Los aminocidos D son excepcionales en la
suelen escribirse en forma abreviada, en ocasiones por naturaleza y slo se encuentran en paredes de las clu-
medio de tres letras y en otras con una. As, por ejemplo, las bacterianas (seccin A1) y en ciertos antibiticos.
la prolina se abrevia Pro o P (figura B1-2).
Los 20 aminocidos estndar
Enantimeros Los 20 aminocidos estndar difieren slo en la estruc-
Todos los aminocidos, excepto la glicina (Gly o G; figura tura de la cadena lateral o grupo R (figuras B1-2 y B1-3).
B1-2), tienen cuatro diferentes grupos ordenados como Pueden subdividirse en grupos ms pequeos con base
un tetraedro alrededor del tomo C, el cual se conoce en la similitud de las propiedades de sus cadenas late-
entonces como un centro asimtrico o centro quiral y rales. Presentan diferentes propiedades fisicoqumicas

Plano
a) b)
COO del espejo COO

_
COO
+ -tomo de + +
H3N C H carbono H3N C H H C NH3

R R
Aminocido L Aminocido D

Figura B1-1. a) Estructura bsica de un aminocido en que se muestran los


cuatro diferentes grupos que rodean al tomo de carbono  central; b) los dos
enantimeros de un aminocido.
22 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) COO COO COO COO


+ + + +
H3 N C H H3 N C H H3N C H H3 N C H
H CH3 CH CH2
H3C CH3 CH
H3C CH3
Glicina Alanina Valina Leucina
(Gly, G) (Ala, A) (Val, V) (Leu, L)

COO COO COO COO


+ + + +
H3 N C H H3N C H H2N C H H3N C H

H C CH3 CH2 H2C CH2


CH2
CH2 CH2 CH2 SH

CH3 S
CH3

Isoleucina Metionina Prolina Cistena


(Ile, I) (Met, M) (Pro, P) (Cys, C)
b)
COO COO COO
+ + +
H3N C H H3N C H H3 N C H

CH2 CH2 CH2


C CH
NH

OH

Fenilalanina Tirosina Triptfano


(Phe, F) (Tyr, Y) (Trp, W)

Figura B1-2. Los aminocidos estndar: a) grupos hidrfobos alifticos R; b)


grupos hidrfobos aromticos R. Los pesos moleculares de los aminocidos se
proporcionan en el Cuadro B1-1.

de acuerdo con la naturaleza de sus cadenas laterales. de vista conformacional. La cadena lateral azufrada de
Algunos son cidos y otros bsicos. Algunos presentan la cistena (Cys, C) (figura B1-2a) tambin es hidrfoba
pequeas cadenas laterales mientras que las de otros pero es muy reactiva y proclive a reaccionar con otra
son grandes y voluminosas. Ciertos aminocidos poseen cistena para formar un enlace disulfuro (seccin B2).
cadenas laterales hidrfobas (repelen el agua) en tanto
que otras son hidrfilas o polares (les atrae el agua).
Algunas confieren inflexibilidad conformacional y otras
Aminocidos hidrfobos y aromticos
pueden participar en enlaces de hidrgeno y enlaces La fenilalanina (Phe, F), tirosina (Tyr, Y) y triptfano
covalentes. Algunas presentan reactividad qumica. (Trp, W) (figura B1-2b) son hidrfobos a raz de sus ani-
llos aromticos.
Aminocidos hidrfobos, alifticos
La glicina (Gly, G) (figura B1-2a), el aminocido ms Aminocidos polares, con carga
pequeo y con la estructura ms simple, tiene un tomo Los restantes aminocidos son todos polares, con cade-
de hidrgeno en la posicin de la cadena lateral y por nas laterales hidrfilas, algunas de las cuales presentan
consiguiente no existe como par de estereoismeros carga en un pH neutral. Los grupos amino de las cade-
puesto que tiene dos grupos idnticos (tomos de hidr- nas laterales de los aminocidos bsicos arginina (Arg,
geno) unidos al tomo C. Las cadenas laterales alifti- R) y lisina (Lys, K) (figura B1-3a) estn protonados y
cas de la alanina (Ala, A), valina (Val, V), leucina (Leu, por tanto tienen carga positiva en un pH neutral. La
L), isoleucina (Ile, I) y metionina (Met, M) (figura 2a) cadena lateral de la histidina (His, H) (figura B1-3a)
carecen de reactividad qumica y son hidrfobas por puede tener carga positiva o no presentar carga en un
naturaleza. La prolina (Pro, P) (figura B1-2a) tambin es pH neutral. En contraste, en un pH neutral, los grupos
hidrfoba, con su cadena lateral aliftica unida otra vez carboxilo de las cadenas laterales de los aminocidos
al grupo amino, lo que la vuelve rgida desde el punto cido asprtico (aspartato; Asp, D) y cido glutmico
B1ESTRUCTURA DE LOS AMINOCIDOS 23

a)
COO COO COO COO COO
+ + + + +
H3N C H H3 N C H H3 N C H H3 N C H H3N C H
CH2 CH2 CH2 CH2 CH2
CH2 CH2 C NH COO CH2
CH2 CH2 CH COO
HC N+
NH CH2 H
+ +
C NH2+ NH3+
NH2
Arginina Lisina Histidina Aspartato Glutamato
(Arg, R) (Lys, K) (His, H) (Asp, D) (Glu, E)
b)
COO COO COO COO
+ + + +
H3N C H H3 N C H H3 N C H H3 N C H
CH2OH H C OH CH2 CH2
CH3 C CH2
H2N O C
H2N O
Serina Treonina Asparagina Glutamina
(Ser, S) (Thr, T) (Asn, N) (Gln, Q)

Figura B1-3. Aminocidos estndar: a) polar, grupos R con carga; b) polar, grupos R sin
carga. Los pesos moleculares de los aminocidos se proporcionan en el cuadro B1-1.

(glutamato; Glu, E) (figura B1-3a), que como su nombre Por ejemplo:


lo dice son cidos, estn desprotonados y poseen carga CH3COOH H+ + CH3COO
negativa. cido actico Acetato
NH4+ H+ NH3
Aminocidos polares, sin carga Ion amonio Amoniaco
La cadena lateral de la asparagina (Asn, N) y la gluta-
La especie que se forma por la ionizacin de un cido es
mina (Gln, Q) (figura B1-3b), los derivados amdicos de
su base conjugada. Al contrario, la protonacin de una
Asp y Glu, respectivamente, carece de carga pero puede
base produce su cido conjugado. As, por ejemplo, el
participar en los enlaces de hidrgeno. La serina (Ser,
cido actico y el acetato representan un par acidob-
S) y la treonina (Thr, T) (figura B1-3b) son aminocidos
sico conjugado.
polares debido a su grupo hidroxilo reactivo en la cadena
lateral y tambin pueden participar en los enlaces de La ionizacin de un cido dbil se representa as:
hidrgeno (como puede hacerlo el grupo hidroxilo del
aminocido aromtico Tyr). HA H+ + A
La constante de equilibrio (K) aparente de esta ioniza-
cidos, bases y pH cin se define como:
+
El pH de una solucin es una medida de su concentra- K = [H ][A ]
cin de protones (H+) y pH se define como: [HA] (Ecuacin 1)
El pK de un cido se define como:
1
pH = log10 = log10 [H+] 1
H+ pK = logK = log
K
en la cual los corchetes denotan una concentracin El pK de un cido es el pH al cual se disocia a la mitad,
molar. es decir, cuando [A] = [HA].
Un cido puede definirse como un donador de protones La ecuacin de Henderson-Hasselbalch expresa la
y una base, como un receptor (aceptor) de protones. interrelacin entre pH y el cociente entre cido y base.
Se deriva como sigue. El reordenamiento de la ecuacin
cido H+1 + base
1 da:
24 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

1 1 [A] se refiere como pK 1, o la capacidad de amortigua-


+ =
[H ] K [HA] miento.
Si se aplica el logaritmo a ambos lados de la ecuacin Los lquidos biolgicos, como el citosol y lquidos extra-
se tiene: celulares como la sangre, son amortiguados. Por ejem-
1 1 [A] plo, en los individuos sanos, el pH de la sangre recibe
log + = log + log
[H ] K [HA] cuidadosa atencin para mantenerlo a un pH de 7.4.
Los principales componentes amortiguadores de la
Si se sustituye el pH por el log de 1/[H+] y el pK por el
mayor parte de los lquidos biolgicos son el ion fosfato
log de 1/K da:
(H2PO4, pK de 6.82) y el ion carbonato (HCO3, pK de
[A] 6.35) debido a que los mismos tienen valores de pK en
pH = pK + log
[HA] ese espectro. Pese a ello, muchas molculas biolgicas,
que es la ecuacin de Henderson-Hasselbalch. Esta entre las cuales se reconocen los aminocidos, prote-
ecuacin indica que el pK de un cido es numrica- nas, cidos nucleicos y lpidos, poseen numerosos gru-
mente igual al pH de la solucin cuando la concentra- pos acidobsicos que son efectivos para amortiguar en
cin molar del cido es igual a la de su base conjugada. el espectro del pH fisiolgico (pH 6 a 8).
El pH de una solucin puede calcularse a partir de la Cuando se trabaja con enzimas, protenas y otras mol-
ecuacin de Henderson-Hasselbalch si se conocen las culas biolgicas, es con frecuencia crucial amortiguar
concentraciones molares de A y HA y el pK de HA. De el pH de una solucin con el fin de evitar la desnatu-
manera similar, el pK de un cido puede calcularse si ralizacin (prdida de actividad) de los componentes
se conocen las concentraciones molares de A y HA y el de inters (seccin D3). En los laboratorios se recurre a
pH de la solucin. muchos amortiguadores para lograr este propsito. Uno
de los ms comunes es el tris(hidroximetil)aminoetano
Amortiguadores o Tris, que tiene un pK de 8.08.

Un par conjugado acidobsico como el del cido actico


y el acetato puede resistir cambios en el pH de una solu- Ionizacin de los aminocidos
cin, es decir, puede actuar como un amortiguador. Al Los 20 aminocidos estndar tienen dos grupos aci-
aadir hidrxido (OH) a una solucin de cido actico dobsicos: los grupos amino  y carboxilo  unidos al
sucede lo siguiente: tomo C. Los aminocidos con una cadena lateral ioni-
zable (Asp, Glu, Arg, Lys, His, Cys, Tyr) tienen un grupo
CH3COOH + OH CH3COO + H2O
acidobsico adicional. La curva de titulacin de la Gly
Una grfica sobre la dependencia del pH de esta solu- se muestra en la figura B1-5a. A un pH bajo (esto es, una
cin de la cantidad de OH aadida se llama curva de concentracin alta de iones hidrgeno), tanto el grupo
titulacin (figura B1-4). Existe un punto de inflexin de amino como el grupo carboxilo estn protonados por
la curva en el pH de 4.8, que es el pK del cido actico. completo, de manera que el aminocido se encuentra
En la vecindad de tal pH, una cantidad relativamente en la forma catinica H3N+CH2COOH (figura B1-5b). Como
grande de OH (o H+) produce un cambio escaso en el pH el aminocido en solucin se titula con cantidades
ya que el OH (o H+) agregado reacciona con el CH3OOH(o crecientes de una base fuerte (p. ej., NaOH) pierde dos
CH3COO), respectivamente. Los cidos dbiles son ms protones, primero el del carboxilo, que tiene el valor
eficaces para amortiguar cambios del pH dentro de una de pK ms bajo (pK = 2.3), y luego el del grupo amino,
unidad de pH del pK (figura B1-4), lo que con frecuencia que tiene el valor de pK ms alto (pK = 9.78). El valor al

1.0 pK1
Equivalentes de OH aadidos

pK = 4.8

0.5

0
0 3 4 5 6 7
pH

Figura B1-4. Curva de titulacin del cido actico.


B1ESTRUCTURA DE LOS AMINOCIDOS 25

cual la Gly carece de carga neta se denomina su punto Lys tienen valores de pK de 12.5 y 10.5, respectivamente.
isoelctrico, o pI. Los grupos carboxilo  de los 20 ami- Slo la cadena lateral de la His, con un valor de pK de
nocidos estndar tienen valores de pK en el espectro 6.0, est ionizada dentro del espectro del pH fisiolgico
de 1.8 a 2.5, en tanto que sus grupos amino  tienen (pH de 6 a 8). Debera recordarse que cuando los ami-
valores de pK en el espectro de 8.7 a 10.7 (cuadro B1-1). nocidos estn unidos en las protenas, slo los grupos
Las cadenas laterales de los aminocidos cidos Asp y de las cadenas laterales y los grupos terminales amino 
Glu tienen valores de pK de 3.9 y 4.1, respectivamente, y carboxilo  de la cadena polipeptdica estn libres para
en tanto que aqullos de los aminocidos bsicos Arg y ionizarse (seccin B2).

a) 2.0

3)
1.5
Equivalentes de OH

2)
aadidos

1.0

0.5

1) pK1 pI pK2
0
0 2 4 6 8 10 12 14
pH
b)
OH OH
H H H
+ +
H3N C COOH H3 N C COO H2 N C COO

H H H
1) 2) 3)

Figura B1-5. Ionizacin de la glicina: a) curva de titulacin de la glicina;


b) disociacin de la glicina. Los nmeros en negritas entre parntesis en
a) corresponden a las estructuras de b).

Cuadro B1-1. Valores de pK y pesos moleculares de los 20 aminocidos estndar.


Aminocido Peso molecular pK del -COOH pK del -NH3+ pK de la cadena lateral
Alanina 89.1 2.35 9.87
Arginina 174.2 1.82 8.99 12.48
Asparagina 132.1 2.14 8.72
cido asprtico 133.1 1.99 9.90 3.90
Cistena 121.2 1.92 10.70 8.37
cido glutmico 147.1 2.10 9.47 4.07
Glutamina 146.2 2.17 9.13
Glicina 75.1 2.35 9.78
Histidina 155.2 1.80 9.33 6.04
Isoleucina 131.2 2.32 9.76
Leucina 131.2 2.33 9.74
Lisina 146.2 2.16 9.06 10.54
Metionina 149.2 2.13 9.28
Fenilalanina 165.2 2.20 9.31
Prolina 115.1 1.95 10.64
Serina 105.1 2.19 9.21
Treonina 119.1 2.09 9.10
Triptfanon 204.2 2.46 9.41
Tirosina 181.2 2.20 9.21 10.46
Valina 117.1 2.29 9.74
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B2Estructura y funcin de las protenas


Notas clave
Protenas: descripcin Las protenas desarrollan una gran variedad de funciones, entre ellas, el trans-
porte y almacenamiento de otras molculas, soporte mecnico, generacin de
movimiento, proteccin inmunitaria, catalizadoras, participan en la sealiza-
cin celular y transmisin del impulso nervioso. Cada protena cuenta con una
secuencia de aminocidos especfica cuya determinacin es gentica.
Enlace peptdico Una protena es una secuencia lineal de aminocidos unidos entre s por
enlaces peptdicos. El enlace peptdico es una unin covalente entre el grupo
amino de un aminocido y el grupo carboxilo de otro aminocido. La confor-
macin raqudea de un polipptido es especificada por los ngulos de rotacin
del enlace CN (phi, ) y el enlace CC (psi,) de cada uno de sus residuos
de aminocidos. Los valores que pueden tener y  desde el punto de vista
estrico se pueden consultar en la grfica de Ramachandran.
Estructura primaria La secuencia lineal de los aminocidos unidos por los enlaces peptdicos se
llama estructura primaria de las protenas. La posicin de los enlaces disulfuro
covalentes entre los residuos de cistena tambin se incluye en la estructura
primaria.
Estructura secundaria La estructura secundaria de una protena se refiere al plegamiento regular de
regiones de la cadena polipeptdica. Los dos tipos ms comunes de estructuras
secundarias son la hlice y la hoja plegada . La hlice es una disposicin
helicoidal parecida a un bastn, cilndrica, de los aminocidos en la cadena
polipeptdica, que se mantiene por enlaces de hidrgeno paralelos al eje de la
hlice. En la hoja plegada , los enlaces de hidrgeno se forman entre seccio-
nes adyacentes de polipptidos que se disponen en la misma direccin (para-
lelos) o en direcciones opuestas (antiparalelos).
Estructura terciaria La estructura terciaria de una protena se refiere al ordenamiento tridimensio-
nal de todos los aminocidos en la cadena polipeptdica. Esta conformacin
nativa y activa desde el punto de vista biolgico se mantiene gracias a mlti-
ples enlaces no covalentes.
Estructura cuaternaria Si una protena est formada por ms de una cadena polipeptdica, se dice
que tiene estructura cuaternaria. sta se refiere a la disposicin espacial de
las subunidades polipeptdicas y a la naturaleza de las interacciones entre las
mismas.
Estabilidad de la protena Adems de los enlaces peptdicos entre los residuos de los aminocidos, la
estructura tridimensional de una protena se mantiene por una combinacin
de interacciones no covalentes (fuerzas electrostticas, fuerzas de van der
Waals, enlaces de hidrgeno, fuerzas hidrfobas) e interacciones covalentes
(enlaces disulfuro).
Determinacin de la La estructura tridimensional de una protena puede determinarse mediante
estructura de una tcnicas fsicas complejas como la cristalografa de rayos X, la espectroscopia
protena con resonancia magntica nuclear (NMR) y la microscopia crioelectrnica.
Plegamiento de las Las protenas se pliegan en forma espontnea en su conformacin nativa y
protenas la estructura primaria es la que dicta su estructura tridimensional. En primer
lugar, son las fuerzas hidrfobas las que dirigen de manera primaria el plega-
miento, que sigue un conjunto ordenado de vas. Protenas accesorias, como
las chaperonas moleculares, contribuyen a que las protenas se plieguen co-
rrectamente en la clula. Enfermedades como la de Alzheimer se deben a que
las protenas se pliegan mal.
B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 27

Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos (B4) Colgena


(B3) Mioglobina y hemoglobina (B6) Anticuerpos

Protenas: descripcin enlace qumico covalente entre el grupo amino  de un


Las protenas son las macromolculas ms verstiles de aminocido y el grupo carboxilo de otro (figura B2-1a)
los organismos vivos, donde llevan a cabo una diversi- (seccin B1). Cuando dos aminocidos estn unidos por
dad de funciones. stas transportan y almacenan otras medio de un enlace peptdico para formar un dipptido,
molculas (p. ej., la hemoglobina y la mioglobina; sec- todava conservan un grupo amino libre en un extremo
cin B3), proporcionan soporte mecnico (p. ej., la co- y un grupo carboxilo libre en el otro extremo, los cua-
lgena; seccin B4), generan movimiento (p. ej., la les pueden unirse a aminocidos adicionales. Por tanto,
actina y la miosina; seccin B5), proveen proteccin cadenas largas sin ramificaciones de aminocidos pue-
inmunitaria (p. ej., anticuerpos; seccin B6), actan den mantenerse unidas por enlaces peptdicos para for-
como catalizadores (enzimas; secciones D1 a D5), inter- mar oligopptidos (hasta 25 residuos de aminocidos) y
vienen en la sealizacin celular (seccin E5), y trans- polipptidos (> 25 residuos de aminocidos). Advirtase
miten impulsos nerviosos (seccin E6). Cada protena que el polipptido todava conserva un grupo amino
cuenta con una secuencia de aminocidos especfica libre en un extremo y un grupo carboxilo libre en el
que determinan los genes (seccin H1). Casi todas las otro. Por convencin, las cadenas peptdicas se escriben
protenas contienen entre 50 y 2 000 aminocidos uni- hacia abajo, con el grupo amino libre a la izquierda y
dos por medio de enlaces peptdicos. Como el peso el carboxilo libre a la derecha y un guin entre los ami-
molecular promedio de un aminocido es cercano a 110 nocidos para indicar los enlaces peptdicos. En conse-
(cuadro B1-1), los pesos moleculares de la mayora de cuencia, el tripptido +H3N serina-leucina-fenilalanina-
las protenas se hallan entre 5 500 y 220 000. Tambin COO debe escribirse Ser-Leu-Phe (con el cdigo de tres
es posible referirse a la masa de una protena, la cual letras) o S-L-F (con el cdigo de una letra).
se expresa en unidades de Dalton, donde un Dalton
(Da) es igual a una unidad de masa atmica. Por consi- El enlace entre el carbono y el nitrgeno exhibe un
guiente, una protena con un peso molecular de 25 000 carcter parcial de enlace doble debido a la proximidad
tiene una masa de 25 000 Da o 25 kDa. del doble enlace entre el carbono y el oxgeno del grupo
carbonilo, lo que permite la existencia de las estructu-
ras de resonancia de la figura B2-1b. A causa de ello, la
Enlace peptdico longitud del enlace CN es tambin ms corta que la
Las protenas son secuencias lineales de aminocidos de los enlaces simples CN habituales. La unidad pep-
unidos por enlaces peptdicos. El enlace peptdico es un tdica, la cual est constituida por los tomos CONH, es

a) H H H O H
+ O + O + O
H3 N C C + H3N C C H3N C C N C C + H2O
O O O
R1 R2 R1 H R2
Enlace
peptdico

Unidades peptdicas rgidas y planas


b) c)
O O H H O H O H O
+
C N C N N C C N C C N C C
H H R1 H R2 H R3

Rotacin libre alrededor de CN


y de los enlaces C C

Figura B2-1. a) Formacin de un enlace peptdico; b) estructuras de resonancia del


enlace peptdico; c) unidades peptdicas de un polipptido.
28 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

C H
O

N
C
C
C
C
N

O
H
R

Figura B2-2. Un segmento de una cadena polipeptdica muestra los ngulos de


torsin alrededor de los enlaces CN () y CC ().

por tanto relativamente rgida y plana, no obstante lo por completo (toda-trans), los ngulos y se defi-
cual puede tener lugar la rotacin libre alrededor de los nen como de 180 y se incrementan para una rotacin
enlaces CN y CC (los enlaces que se hallan a cada a favor de las agujas del reloj cuando se ven desde C
lado del enlace peptdico), lo que permite que unidades (figura B2-2). El espectro conformacional de los ngu-
peptdicas adyacentes se encuentren en ngulos dife- los de torsin, y , de la columna vertebral de un
rentes (figura B2-1c). El hidrgeno del grupo amino est polipptido est restringido por impedimentos estri-
casi siempre en el lado opuesto (trans) del enlace doble cos. Desde el punto de vista estrico, el valor permitido
del oxgeno del carbonilo y no en el mismo lado (cis). de y puede determinarse si se calcula la distancia
entre los tomos de un tripptido a todos los valores
La columna vertebral de una protena es una secuencia de y para la unidad peptdica central. Estos valo-
unida de grupos peptdicos planos y rgidos. La con- res se visualizan en un diagrama de contorno estrico,
formacin raqudea de un polipptido depende de los conocido por otro lado como mapa de conformacin o
ngulos de rotacin o ngulos de torsin alrededor de grfica de Ramachandran (figura B2-3). Si se observa la
los enlaces CN (phi, ) y CC (psi, ) de cada uno de figura B2-3, puede verse que la mayor parte de las reas
sus residuos de aminocidos. Cuando la cadena poli- de la grfica de Ramachandran (en su mayora combi-
peptdica est en su conformacin plana, extendida naciones de y ) son inaccesibles desde la perspectiva

180

C

(grados)

180
180 0 180
(grados)

Figura B2-3. Grca de Ramachandran en la que se muestran los ngulos


permitidos para la poli-L-alanina (regiones oscuras). , Valores - que producen la
mano derecha de la hlice ; , la hoja plegada  antiparalela; , la hoja plegada 
paralela; C, la hlice de colgena.
B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 29

conformacional a una cadena polipeptdica. Slo tres tdica. Los dos tipos ms comunes de pliegues de las
regiones pequeas del mapa de conformacin son fsi- protenas son la hlice  y la hoja plegada . En la hlice
camente accesibles a una cadena polipeptdica y dentro similar a un bastn, los aminocidos se disponen en
de tales regiones se encuentran los valores y que una conformacin helicoidal regular (figura B2-5a). El
producen la lateralizacin a la derecha de la hlice , las oxgeno del grupo carbonilo de cada enlace peptdico
hojas plegadas paralelas y antiparalelas y la hlice de est unido al hidrgeno del grupo amino del cuarto ami-
la colgena (vase ms adelante y la seccin B4). nocido situado ms all del enlace (figura B2-5b), con
el enlace de hidrgeno dispuesto casi en paralelo al eje
La cadena polipeptdica se pliega para configurar la for-
de la hlice. En una hlice hay 3.6 aminocidos por
ma especfica (conformacin) de la protena. Esta con-
vuelta de la hlice y cubren una distancia de 0.54 nm,
formacin es la disposicin tridimensional de los to-
en tanto que cada residuo de aminocido representa un
mos en la estructura y est determinada por la secuencia
avance de 0.15 nm a lo largo del eje de la hlice (figura
de los aminocidos. La estructura de las protenas tiene
B2-5a). Todos los aminocidos de las cadenas laterales
cuatro niveles: primario, secundario, terciario y a veces,
se localizan a lo largo de la parte externa de la hlice
pero no siempre, cuaternario.
cilndrica (figura B2-5c). Ciertos aminocidos se hallan
con ms frecuencia en unas hlices que en otras. En
Estructura primaria esta situacin se encuentra la Pro, que rara vez se reco-
El nivel primario de la estructura de una protena es la noce en regiones helicoidales debido a que no puede
secuencia lineal de aminocidos como quedan unidos formar el patrn de enlace de hidrgeno correcto a raz
por los enlaces peptdicos. Esta secuencia est determi- de que carece de un tomo de hidrgeno en su tomo de
nada a su vez por la secuencia de bases de los nucle- nitrgeno. Por esta causa, la Pro se encuentra con ms
tidos en la codificacin gentica de la protena (seccin frecuencia al final de una hlice , donde altera la direc-
H1). Tambin se incluye en la estructura primaria la cin de la cadena polipeptdica y hace concluir la hlice.
localizacin de cualquier otro enlace covalente. De Diferentes protenas muestran cantidades distintas de
manera primaria, stos son enlaces disulfuro entre resi- cadenas polipeptdicas plegadas en hlices . Por ejem-
duos de cistena que se hallan adyacentes en el espacio, plo, la cadena polipeptdica nica de la mioglobina pre-
pero no en la secuencia lineal de aminocidos. Estos senta ocho hlices (seccin B3).
entrecruzamientos covalentes entre cadenas polipept- En la hoja plegada , se forman enlaces de hidrgeno
dicas separadas o entre partes diferentes de la misma entre los enlaces peptdicos de diferentes cadenas poli-
cadena se forman por la oxidacin de los grupos SH de peptdicas o de diferentes secciones de la misma cadena
los residuos de cistena que se yuxtaponen en el espa- polipeptdica (figura B2-6a). El carcter plano de los
cio (figura B2-4). El disulfuro resultante se llama residuo enlaces peptdicos fuerza al polipptido a ser plegado
de cistena. Los enlaces disulfuro son frecuentes en las con las cadenas laterales de los aminocidos haciendo
protenas extracelulares, pero rara vez se encuentran protrusin hacia arriba y abajo de la hoja (figura B2-6b).
en protenas intracelulares. Algunas protenas como la En las hojas plegadas , las cadenas polipeptdicas adya-
colgena presentan entrecruzamientos covalentes entre centes pueden ser paralelas o antiparalelas segn si
cadenas laterales de residuos de Lys (seccin B4). corren en la misma direccin o en la direccin opuesta,
respectivamente (figura B2-6c). La cadena polipeptdica
Estructura secundaria que se halla dentro de una hoja plegada est extendida
El nivel de estructura secundario de una protena es por completo, de manera que existe una distancia de
el plegamiento regular de regiones de la cadena polipep- 0.35 nm desde un tomo de C al siguiente. Las cadenas

H H
+ +
H3 N C COO H3N C COO
CH2 CH2
Oxidacin
SH S +
+ 2H
SH Reduccin S
CH2 CH2
+ +
H3N C COO H3N C COO
H H
Cistena (x2) Cistina

Figura B2-4. Formacin de un enlace disulfuro entre dos residuos de cistena,


de lo que resulta la formacin de un residuo de cistina.
30 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a)
tomos C de residuos de
aminocidos consecutivos

(3.6 residuos 0.15 nm (100 de rotacin


de aminocidos 0.54 nm por residuo
por vuelta)

Posicin de la cadena
polipeptdica, consiste en
tomos C y los de los enlaces
peptdicos C N
R
c) R R
b)
H H H O H H H O H
R
N C C N C C N C C N C C N C C R

H R1 O R2 H R3 O R4 H R5 O
R R
Enlaces de hidrgeno
R R

Figura B2-5. Plegamiento de la cadena polipeptdica en una hlice : a) modelo


de una hlice  con slo los tomos C a lo largo de la columna vertebral que se
muestra; b) en la hlice , el grupo CO del residuo n es hidrgeno ligado al grupo
NH del residuo (n+4); c) vista de un corte transversal de una hlice  en el que se
muestran las posiciones de las cadenas laterales (grupos R) de los aminocidos en
el lado externo de la hlice.

a)

Enlaces de
hidrgeno

b) c) Paralela

Antiparalela

Figura B2-6. Plegamiento de la cadena polipeptdica en una hoja plegada : a)


enlaces de hidrgeno entre dos secciones de una cadena polipeptdica donde forma
una hoja plegada ; b) vista lateral de una de las cadenas polipeptdicas en una hoja
plegada  donde se muestran las cadenas laterales (grupos R) jas a los tomos C
sobresaliendo por arriba y abajo de la hoja; c) debido a que la cadena polipeptdica
tiene polaridad, pueden formarse hojas plegadas  paralelas o antiparalelas.

plegadas presentan siempre un ligero encorvamiento consiste casi por completo en pilas de hojas plegadas 
y, si participan numerosos polipptidos, la hoja puede antiparalelas.
cerrarse para formar un tonel . Mltiples hojas plega-
das proporcionan fuerza y rigidez en muchas estruc- Con el fin de plegarse de forma hermtica dentro de la
turas protenicas, como la fibrona de la seda, la cual forma compacta de una protena globular, con frecuen-
B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 31

cia la cadena polipeptdica invierte su direccin, para la mioglobina (seccin B3), la principal fuerza directriz
lo cual hace una vuelta  (horquilla o vuelta invertida). que subyace al plegamiento de la cadena polipeptdica
En estas vueltas , el oxgeno del grupo carbonilo de es el requerimiento energtico para sepultar los amino-
un aminocido se une al hidrgeno del grupo amino cidos apolares en el interior hidrfobo, lejos del medio
del cuarto aminocido (figura B2-7). Las vueltas se acuoso e hidrfilo circundante. La cadena polipeptdica
encuentran con frecuencia donde se conectan los extre- se pliega de manera espontnea y la mayor parte de
mos de las hojas plegadas antiparalelas. Se dice que las sus cadenas laterales hidrfobas resulta sepultada en el
regiones de la cadena polipeptdica que no estn en una interior, en tanto que sus cadenas laterales polares, con
estructura secundaria regular tienen una conformacin carga, permanecen en su superficie. Cuando est ple-
enrollada o en asa. Cerca de la mitad de las cadenas gada, la conformacin tridimensional, la activa des-
polipeptdicas de una protena globular tpica se hallan de la perspectiva biolgica (nativa), de la protena se
en esta conformacin. mantiene no slo por interacciones hidrfobas sino
tambin por fuerzas electrostticas, enlaces de hidr-
geno y, si estn presentes, enlaces disulfuro. Las fuerzas
Estructura terciaria electrostticas incluyen puentes salinos entre grupos
El tercer nivel estructural que se encuentra en las prote- con cargas opuestas y las mltiples interacciones dbi-
nas, la estructura terciaria, alude a la disposicin espacial les de van der Waals entre las cadenas laterales alifticas
de los aminocidos que estn lejos en la secuencia lineal estrechamente empacadas del interior de las protenas.
as como a aquellos residuos que estn adyacentes. Otra
vez, es la secuencia de los aminocidos la que especi- En muchas protenas grandes, la cadena polipeptdica
fica esta estructura tridimensional final (figuras B2-8 y se pliega en dos o ms regiones compactas y globula-
B2-9). En protenas globulares solubles en agua como res llamadas dominios. La mayora de los dominios

Cadena
polipeptdica

Enlace de
hidrgeno

Figura B2-7. Plegamiento de una cadena polipeptdica en una vuelta .

a) ArgValGluLysMetValLouAlaGly

b)

c) d)

Figura B2-8. Los cuatro niveles de estructura de las protenas: a) estructura


primaria (secuencia de aminocidos); b) estructura secundaria (hlice );
c) estructura terciaria; d) estructura cuaternaria.
32 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) b)

c) d)

Figura B2-9. Varias representaciones grcas de la RND3/RHOE, una pequea


protena que une GTP formando un complejo con este nucletido (representacin
del trifosfato de guanosina desde diferentes perspectivas): a) la representacin de
barras y bolitas revela la localizacin de todos los tomos de la protena;
b) los indicios de la columna vertebral de C muestran cmo se pliega la cadena
polipeptdica; c) la representacin con cintas destaca cmo se organizan las hlices
 y las hebras  en la protena; d) un modelo de la supercie accesible al agua
revela los numerosos baches y grietas de la supercie de la protena.

consta de 30 a 400 aminocidos y en ellos la cadena protenas est el del pliegue de la inmunoglobulina que
polipeptdica se pliega en estructuras especficas, con se encuentra en anticuerpos y otras protenas del sis-
regiones peptdicas que casi no se pliegan y que vincu- tema inmunitario (seccin B6) y la hlice-giro-hlice,
lan a los dominios sin interrupciones. En consecuencia, dedos de cinc y los dominios bsicos que se hallan en
muchos dominios son unidades independientes, si se las protenas que se unen con el DNA (seccin G6).
los ve desde una perspectiva estructural, que tienen las
caractersticas de las protenas globulares pequeas.
En tanto, diversas protenas pueden tener dominios Estructura cuaternaria
en comn aunque sus estructuras terciarias completas Las protenas que contienen ms de una cadena poli-
sean diferentes. Entre los ejemplos de dominios en las peptdica, como la hemoglobina (seccin B3), exhiben
B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 33

un cuarto nivel estructural de las protenas que se deno- estructura de otras macromolculas biolgicas como
mina estructura cuaternaria (figura B2-8). Este nivel la hlice doble del DNA (seccin F1) y las bicapas lip-
estructural alude a la disposicin espacial de las subu- dicas (seccin E1). Por ltimo, los enlaces de hidr-
nidades polipeptdicas y a la naturaleza de las interac- geno son crticos para las propiedades del agua y para
ciones entre ellas. Tales interacciones pueden ser enla- su papel como solvente bioqumico.
ces covalentes (p. ej., enlaces disulfuro) o interacciones
z Fuerzas hidrfobas: efecto hidrfobo es el nom-
no covalentes (fuerzas electrostticas, enlaces de hidr-
bre que se les da a aquellas fuerzas que causan las
geno, interacciones hidrfobas).
molculas apolares para minimizar su contacto con
el agua. Lo anterior se ve con toda claridad con las
Estabilidad de las protenas molculas anfipticas como los lpidos y los deter-
gentes que forman micelas en una solucin acuosa
Un conjunto de interacciones no covalentes (fuerzas
(seccin E1). Asimismo, las protenas encuentran
electrostticas, enlaces de hidrgeno, fuerzas hidrfo-
una conformacin en la que sus cadenas laterales
bas) y de interacciones covalentes (enlaces disulfuro)
apolares estn en gran medida fuera del alcance del
mantiene la conformacin tridimensional nativa de una
solvente acuoso y en consecuencia las fuerzas hidr-
protena, adems de los enlaces peptdicos entre los
fobas son un determinante de gran importancia en
aminocidos.
la estructura, plegamiento y estabilidad de las pro-
z Fuerzas electrostticas: incluyen las interacciones tenas. En stas, los efectos de las fuerzas hidrfobas
entre dos grupos inicos de carga opuesta, como el suelen designarse enlazamiento hidrfobo, con lo
caso del grupo amonio de la Lys y el grupo carboxilo cual se pretende indicar la naturaleza especfica del
del Asp, con frecuencia referido como par inico o plegamiento de la protena bajo la influencia del efec-
puente salino. Adems, las asociaciones no covalen- to hidrfobo.
tes entre molculas elctricamente neutras, que en
z Enlaces disulfuro: estos enlaces covalentes se for-
conjunto se conocen como fuerzas de van der Waals,
man entre residuos de Cys que estn muy cercanos
originadas de interacciones electrostticas entre
en la conformacin final de la protena (figura B2-4)
dipolos permanentes o inducidos, como el del grupo
y funcionan como estabilizadores de la estructura tri-
carbonilo de los enlaces peptdicos.
dimensional. En realidad, los enlaces disulfuro slo
z Enlaces de hidrgeno: son interacciones predomi- se forman en el ambiente oxidante del retculo endo-
nantemente electrostticas entre un grupo donador plsmico (seccin A2) y por tanto se encuentran en
dbilmente cido y un tomo aceptor que es porta- primer lugar en las protenas extracelulares y secre-
dor de un par de electrones solitarios y que en conse- tadas.
cuencia presenta una carga parcial negativa que atrae
al tomo de hidrgeno. En los sistemas biolgicos, el
grupo donador es un tomo de oxgeno o nitrgeno
Determinacin de la estructura
que tiene un tomo de hidrgeno unido a l a travs de las protenas
de un enlace covalente y el aceptor es el oxgeno o Con frecuencia puede predecirse la presencia de hli-
el nitrgeno (figura B2-10). De manera habitual, los ces y hojas plegadas en las protenas a partir de la
enlaces de hidrgeno estn en el espectro de 0.27 secuencia de aminocidos primaria. En cambio, no es
a 0.31 nm y son muy direccionales, es decir que el posible predecir la estructura tridimensional precisa de
hidrgeno donador y los tomos aceptores son coli- una protena de slo conocer su secuencia de aminoci-
neales. Los enlaces de hidrgenos son ms fuertes dos, a menos que su secuencia sea muy similar a una
que las fuerzas de van der Waals pero mucho ms protena cuya estructura tridimensional ya se conoce.
dbiles que los enlaces covalentes. Los enlaces de Se requieren mtodos fsicos muy complejos y anlisis
hidrgeno no slo desempean un rol importante muy elaborados de los datos experimentales para deter-
en la estructura de las protenas sino tambin en la minar la conformacin de una protena. La estructura

Donador del Receptor del


enlace H enlace H
O H . . . .N
O H . . . .O
N H . . . .N
N H . . . .O

Figura B2-10. Ejemplos de enlaces de hidrgeno


(se muestran en lneas de punteadas).
34 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

tridimensional de una protena puede determinarse a protenas, en particular de las protenas con multi-
nivel atmico mediante tcnicas como la cristalografa subunidades, las cuales son difciles de cristalizar. En
de rayos X, la espectroscopia con resonancia magntica esta tcnica, la muestra de la protena se congela con
nuclear (NMR) y la microscopia crioelectrnica. rapidez en helio lquido para preservar su estructura.
A continuacin, la protena congelada e hidratada se
En la cristalografa de rayos X, el primer requerimiento
examina en un microscopio crioelectrnico que usa
son los cristales de protenas muy purificadas. En el
una dosis baja de electrones para evitar cualquier dao
cristal, millones de molculas de protenas estn pre-
inducido por la radiacin en la estructura. Las imge-
cisamente alineadas unas con otras en una disposi-
nes resultantes se analizan por medio de programas de
cin rgida caracterstica de cada protena. Entonces,
computadora complejos, que sirven para reconstruir la
los haces de rayos X se hacen pasar a travs del cris-
estructura tridimensional de la protena.
tal (figura B2-11). Las longitudes de onda de los rayos
X son de 0.1 a 0.2 nm, lo suficientemente cortos para
discriminar los tomos en el cristal de la protena. Los Plegamiento de las protenas
tomos del cristal desvan los rayos X y al hacerlo pro-
Bajo condiciones fisiolgicas apropiadas, las protenas
ducen un patrn de difraccin de manchas discretas en
se pliegan de modo espontneo en su conformacin
la pelcula fotogrfica. Las intensidades de la difraccin
nativa. Como no se necesitan plantillas externas, queda
mxima (la oscuridad de las manchas de la pelcula) se
implcito que la estructura primaria de la protena
usan entonces matemticamente para construir la ima-
determina su estructura tridimensional. A partir de
gen tridimensional del cristal de protena.
experimentos con la protena RNA-asa A, se ha observado
La espectroscopia con resonancia magntica nuclear que son en primer lugar los residuos internos de la pro-
(NMR) puede utilizarse para determinar las estructuras tena los que dirigen su plegamiento a la conformacin
tridimensionales de protenas pequeas (hasta de alre- nativa. Es menos probable que la alteracin de los resi-
dedor de 30 kDa) en solucin acuosa. En esta tcnica, duos superficiales por mutacin afecte el plegamiento
una solucin de protena concentrada se coloca en un que los cambios en los residuos internos. Asimismo, ha
campo magntico y se miden los efectos de diferentes sido observado que el plegamiento de la protena es diri-
frecuencias de radio en el giro de diferentes tomos de gido en primer lugar por las fuerzas hidrfobas. No ha
la protena. El comportamiento de cualquier tomo es sido posible plegar protenas en su conformacin nativa
influido por los tomos cercanos de los residuos adya- a travs de un conjunto de vas ordenadas en lugar de
centes, pero donde los residuos ms cercanos causan recurrir a una exploracin al azar de todas las conforma-
ms perturbaciones que los alejados. Con base en la ciones posibles hasta encontrar la correcta.
magnitud del efecto, puede calcularse la distancia entre
Aunque las protenas pueden plegarse in vitro (en el
los residuos y emplearse para generar la estructura tri-
laboratorio) sin la presencia de protenas accesorias,
dimensional de la protena.
este proceso puede tomar minutos a das. In vivo (en la
La microscopia crioelectrnica se usa con frecuencia clula), este proceso requiere slo unos pocos minutos
para determinar la estructura tridimensional de las porque las clulas contienen protenas accesorias, las

Fuente de rayos X

Haz de rayos X
Cristal de
protena

Rayos difractados

Detector (p. ej., una pelcula fotogrca)

Figura B2-11. Cristalografa de rayos X. Cuando un haz estrecho de rayos X


atraviesa un cristal, parte del mismo pasa siguiendo la misma direccin y otra
parte es desviada (difractada) en diversas direcciones. La intensidad de las ondas
difractadas se registra en una pelcula fotogrca o en un detector electrnico de
estado slido. La estructura tridimensional de la protena puede determinarse con
los datos de la difraccin.
B2ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS 35

cuales ayudan al polipptido a plegarse en su confor- y calreticulina. stas evitan el plegamiento inapro-
macin nativa. Hay tres clases principales de protenas piado y la agregacin de las protenas, que por lado
accesorias para el plegamiento de las protenas: pueden ocurrir debido a que las regiones hidrfobas
internas se exponen a otras similares.
z Las isomerasas de proteindisulfuro catalizan las
reacciones de intercambio de disulfuros y por consi- Algunas enfermedades son consecuencia del plega-
guiente facilitan la bsqueda de los enlaces disulfuro miento errneo de las protenas. Por ejemplo, en la
de una protena hasta encontrar el par correcto. neurodegenerativa y fatal enfermedad de Alzheimer,
los pequeos pliegues errneos del pptido amiloide
z Las cis-trans isomerasas de peptidilprolilo catalizan
y los agregados en el cerebro matan las neuronas circun-
por otro lado la lenta interconversin de los enlaces
dantes. Por su parte, en las enfermedades infecciosas
peptdicos X-Pro entre sus conformaciones cis y trans
por priones, como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob
y de esta forma aceleran el plegamiento de los poli-
(CID) en los seres humanos y la encefalopata espongi-
pptidos que contienen Pro. Una de las clases de cis-
forme bovina (BSE o enfermedad de las vacas locas), la
trans isomerasas de peptidilprolilo es inhibida por el
forma celular normal de la protena prinica, la cual
frmaco inmunosupresor ciclosporina A.
tiene sobre todo una estructura secundaria helicoidal
z Chaperonas moleculares, las cuales incluyen pro- , sufre una transicin conformacional hacia la forma
tenas como las protenas de choque por calor 70 infecciosa de la protena, que presenta una estructura
(hsc 70), las chaperoninas y las lectinas calnexina predominante de hoja .
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B3Mioglobina y hemoglobina
Notas clave
Protenas que unen La hemoglobina y la mioglobina son las dos protenas que unen oxgeno pre-
oxgeno sentes en los organismos multicelulares grandes. La hemoglobina transporta
oxgeno en la sangre y se localiza en los eritrocitos; por su parte, la mioglobina
almacena el oxgeno en los msculos.
Mioglobina La mioglobina, cuya estructura tridimensional fue resuelta mediante la cristalo-
grafa de rayos X, es una protena globular elaborada con una sola cadena poli-
peptdica de 153 residuos de aminocidos, que estn plegados en ocho hlices
. El grupo prosttico hemo se localiza dentro de una hendidura hidrfoba de
la cadena polipeptdica plegada.
Hemoglobina La hemoglobina adulta (HbA) presenta estructura cuaternaria ya que est
formada por cuatro cadenas polipeptdicas, dos cadenas  y dos cadenas 
(2 y 2), cada una de ellas con un grupo prosttico hemo. Cada polipptido de la
hemoglobina presenta una estructura tridimensional casi idntica a la de la ca-
dena polipeptdica de la mioglobina.
Unin del oxgeno al hemo El grupo prosttico hemo consiste en un anillo de protoporfirina IX y un tomo
de Fe2+ central, el cual forma cuatro enlaces con el anillo de la porfirina. De
manera adicional, en un lado del anillo de la porfirina, el Fe2+ forma un enlace
con la histidina proximal (His F8), un residuo de ocho aminocidos a lo largo
de la hlice F de la hemoglobina. El sexto enlace del Fe2+ es con una molcula de
O2. Cerca de donde se une el O2 est la histidina distal (His E7), la encargada
de evitar que el monxido de carbono se una con ms eficiencia.
Alosteria La hemoglobina es una protena alostrica. La unin del O2 es cooperativa; la
unin del O2 a una subunidad aumenta la facilidad de unin de molculas de
O2 adicionales a las otras subunidades. La curva de disociacin del oxgeno
de la hemoglobina es sigmoidea, mientras que la de la mioglobina es hiperb-
lica. La mioglobina tiene una afinidad mayor por el oxgeno que la hemoglo-
bina. La oxihemoglobina y la desoxihemoglobina tienen diferentes estructuras
cuaternarias. A medida que el O2 se une al Fe2+ distorsiona el grupo hemo y
mueve la histidina proximal. Esto a su vez mueve la hlice F y altera las interac-
ciones entre las cuatro subunidades. El H+, el CO2 y el 2,3-bisfosfoglicerato (BPG)
son efectores alostricos que promueven la liberacin de O2 de la hemoglobina.
El BPG se une en la cavidad central situada entre las cuatro subunidades.
Hemoglobina fetal La hemoglobina F (HbF), la cual consiste en dos cadenas  y dos cadenas  (2
y 2), est presente en el feto. La HbF une BPG con menos firmeza que la HbA y
por consiguiente presenta una afinidad ms alta por el O2, que promueve la
transferencia del O2 desde la circulacin materna a la fetal.
Hemoglobinopatas Las hemoglobinopatas son enfermedades causadas por hemoglobinas anor-
males. La mejor caracterizada de stas es la que reconoce un mecanismo de
transmisin gentica, la enfermedad hemoltica anemia de clulas falciformes.
Es causada por la sustitucin no conservadora de una Glu por una Val, lo que
resulta en la aparicin de un parche pegajoso hidrfobo en la superficie de la
protena. Esto permite que se formen largos agregados de fibras de molcu-
las de hemoglobina, los cuales distorsionan la forma de los glbulos rojos. Los
heterocigotos que portan slo una copia del gen de la clula falciforme son ms
resistentes al paludismo que los homocigotos para el gen normal.
B3MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA 37

Temas relacionados (B2) Estructura y funcin de las (M4) Hemos y clorofila


protenas
(D5) Regulacin de la actividad
enzimtica

Protenas que unen oxgeno revel que la hemoglobina est elaborada de cuatro
La hemoglobina es una de las dos protenas que unen cadenas polipeptdicas, cada una de las cuales presenta
oxgeno que se encuentran en los vertebrados. La fun- una estructura tridimensional similar a la de la cadena
cin de la hemoglobina es transportar oxgeno en la san- polipeptdica nica de la mioglobina (figura B3-1b), pese
gre desde los pulmones hasta todos los tejidos restantes a que sus secuencias de aminocidos difieren en 83% de
del cuerpo, con el propsito de aportarles a las clulas los residuos. Lo anterior destaca un tema relativamente
el O2 que necesitan para la fosforilacin oxidativa de los comn de la estructura de las protenas: que secuencias
productos alimenticios (seccin L2). La hemoglobina se primarias muy diferentes pueden especificar estructu-
encuentra en la sangre dentro de los eritrocitos (gl- ras tridimensionales muy similares. El tipo principal de
bulos rojos). La funcin esencial de estas clulas, ade- hemoglobina que se encuentra en adultos (HbA) est
ms de otras, es fungir como un saco para transportar elaborado con dos cadenas polipeptdicas diferentes: la
hemoglobina, ya que los eritrocitos maduros carecen cadena , que consta de 141 residuos de aminocidos,
de cualquier organelo interno (ncleo, mitocondrias, y la cadena , que consta de 146 residuos (22; figura
etc.). La otra protena que une O2 es la mioglobina, la B3-1b). Cada cadena, como en la mioglobina, consta de
que almacena el oxgeno en los tejidos del cuerpo donde ocho hlices y cada una contiene un grupo prosttico
lo mantiene listo para cuando las clulas lo necesiten. hemo (figura B3-1b). Por consiguiente, la hemoglobina
Las concentraciones ms altas de mioglobina se hallan puede unir cuatro molculas de O2. Las cuatro cadenas
en los msculos esqueltico y cardiaco, que requieren polipeptdicas se hallan empacadas de manera muy
grandes cantidades de O2 debido a su gran necesidad de estrecha una junto a la otra en una disposicin tetra-
O2 durante la contraccin (seccin B5). drica para formar una molcula de forma casi esfrica,
cuya forma se mantiene por mltiples interacciones no
covalentes (seccin B2).
Mioglobina
La mioglobina es una protena relativamente pequea
con una masa de 17.8 kDa elaborada con 153 aminoci-
Unin del oxgeno al hemo
dos dispuestos en una cadena polipeptdica nica. Fue El grupo prosttico hemo de la mioglobina y la hemo-
la primera protena en tener su estructura tridimensio- globina est hecho de un anillo de protoporfirina IX
nal determinada por cristalografa de rayos X (seccin con un tomo de hierro en estado de oxidacin ferroso
B2), logro llevado a cabo por John Kendrew en 1957. La (Fe2+) (seccin M4; figura B3-2). Este Fe2+ se une con cua-
mioglobina es una tpica protena globular que tiene tro tomos de nitrgeno en el centro del anillo de proto-
una estructura compacta muy plegada, con la mayor porfirina y adems forma dos uniones adicionales a
parte de los residuos de aminocidos hidrfobos orde- cada lado del plano del anillo de protoporfirina. Una de
nados en el interior y muchos de los residuos polares stas es con un residuo de histidina, el cual se halla ocho
dispuestos en la superficie. La cristalografa de rayos X residuos ms all a lo largo de la hlice F de la hemo-
revel que la cadena polipeptdica nica de la mioglo- globina, la histidina proximal (His F8) (figura B3-2). El
bina consiste por completo en una estructura secunda- sexto enlace es con uno de los tomos de oxgeno de
ria helicoidal  (seccin B2). De hecho, hay ocho hli- la molcula de O2 (figura B3-2). Cerca de donde el O2
ces  en la mioglobina (designadas A-H) (figura B3-1a). se une con el grupo hemo, se encuentra otro residuo
Dentro de una hendidura hidrfoba formada por el de histidina, la histidina distal (His E7) (figura B3-2).
plegamiento de la cadena polipeptdica est el grupo Esto sirve para dos funciones de mucha importancia.
prosttico hemo (figura B3-1a). Esta unidad no polipep- Primero, evita que los grupos hemo de las molculas de
tdica est unida en forma no covalente a la mioglobina hemoglobina cercanas hagan contacto con otras y oxi-
y resulta esencial para la actividad biolgica de la pro- den el hierro al estado Fe3+, en el cual no pueden unir
tena (es decir, la unin de O2). mucho O2. Segundo, evita que el monxido de carbono
(CO) se una con la configuracin ms favorable al Fe2+,
y disminuye de este modo la afinidad del hemo por el
Hemoglobina CO. Este hecho es importante en virtud de que el CO con-
La estructura tridimensional de la hemoglobina fue trae uniones irreversibles con el hemo y as la protena
resuelta por medio de la cristalografa de rayos X (sec- no puede unir mucho O2 ms. En consecuencia, aun-
cin B2), hecho que logr Max Perutz en 1959. sta que el sitio de unin del oxgeno en la hemoglobina y
38 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) b)
2 1

Cadena
polipeptdica Grupo
prosttico
hemo 2 1

c) d)

Figura B3-1. Estructura de la a) mioglobina y de la b) hemoglobina, en la que se


muestran las cadenas polipeptdicas  y . Indicios de la columna vertebral de C en
c) la mioglobina humana y d) la hemoglobina humana en la que se ven las hlices 
y el grupo prosttico hemo en un modelo qumico molecular y cmo se mapea el
monmero de mioglobina en la estructura de la hemoglobina (crculo).

Hlice F
CONH CH CONH

CH2 CONH CH CONH

C NH CH2
His
Proximal HC CH C NH
(His F8) N
HC CH
2 + O2 N
Fe
2+
Fe
Vista lateral HN CH HN CH
del anillo de O
O2
protoporrina IX HC N HC N
O C
C His Distal
(His E7)
CH2 CH2

CONH CH CONH CONH CH CONH


Hlice E

Figura B3-2. Unin del O2 al hemo. El Fe2+ del anillo de la protoporrina est enlazado
a la His F8 pero no a la His E7, que est muy cerca. A medida que el Fe2+ une O2, la
hlice F se mueve ms cerca de la hlice E (vase el texto para mayores detalles).
B3MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA 39

la mioglobina es slo una pequea parte de la protena que la histidina proximal tambin se mueva. sta, a su
total, la cadena polipeptdica modula la funcin del vez, cambia su posicin en la hlice F y en regiones de
grupo prosttico hemo. la cadena polipeptdica a cualquiera de los extremos de la
hlice. Por consiguiente, el movimiento en el centro de
la subunidad se transmite a las superficies, donde causa
Alosteria
que las interacciones inicas que mantienen las cuatro
La hemoglobina es una protena alostrica (consltese subunidades juntas se rompan y restablezcan en una
la seccin D5 para una descripcin ms completa de la posicin diferente, que altera la estructura cuaternaria y
alosteria). Esto significa que la unin del O2 a una de conduce a la unin cooperativa del O2 a la hemoglobina.
las subunidades es afectada por sus interacciones con las
otras subunidades. De hecho, la unin del O2 a una
subunidad de la hemoglobina induce cambios confor- Efecto Bohr
macionales (vase ms adelante y la figura B3-2) que se La concentracin de iones H+ y CO2 en los tejidos cir-
retransmiten a las otras subunidades, lo que aumenta cundantes afecta la unin del O2 a la hemoglobina, o
su capacidad de unir O2 al incrementar su afinidad por efecto Bohr. En tejidos con alta actividad metablica
esta molcula. Por ello, se dice que la unin del O2 a la como el msculo, la concentracin de estas dos sustan-
hemoglobina es cooperativa. En contraste, la unin del cias es relativamente alta. Esto causa un cambio en la
O2 a la cadena polipeptdica nica de la mioglobina es curva de disociacin de O2 de la hemoglobina hacia
no cooperativa. Lo anterior se hace muy aparente en las la derecha, lo que promueve la liberacin del O2. Lo
curvas de disociacin del oxgeno de las dos protenas: anterior sucede debido a que hay sitios de unin de H+,
la de la hemoglobina es sigmoidea, lo cual refleja que la en primer lugar el His146 en la cadena , que tienen una
unin es cooperativa, en tanto que la de la mioglobina afinidad ms alta de unin del H+ en la desoxihemo-
es hiperblica (figura B3-3). A partir de la curva de diso- globina que en la oxihemoglobina. Un aumento del CO2
ciacin de O2 tambin puede verse que para cualquier determina un incremento de H+ debido a la accin de
presin de oxgeno especfica el grado de saturacin de la enzima anhidrasa carbnica, encargada de catalizar la
la mioglobina es ms alto que el de la hemoglobina. En reaccin:
otras palabras, la mioglobina presenta una afinidad ms
alta por el O2 que la hemoglobina. Lo anterior significa CO2 + H2O HCO3 + H+
que en la sangre de los capilares musculares, por ejem- De manera adicional, el CO2 puede reaccionar con los
plo, la hemoglobina habr de liberar su O2 a la mioglo- grupos amino primarios de la cadena polipeptdica para
bina para que lo almacene all. formar un carbamato con carga negativa. Otra vez, este
cambio de carga de positiva a negativa favorece la con-
Mecanismo del cambio alostrico formacin de la desoxihemoglobina. En su regreso en
la sangre hacia los pulmones, las concentraciones de
La cristalografa de rayos X revel que la oxihemoglo-
H+ y CO2 son relativamente ms bajas y la del O2 ms
bina, la forma que tiene cuatro molculas de O2 uni-
alta, de manera que el proceso se invierte y el O2 se une
das, difiere mucho en su estructura cuaternaria de la
a la hemoglobina. De este modo, puede verse que la
desoxihemoglobina, la forma sin O2 unido. En ausencia
hemoglobina no slo transporta O2 sino que tambin
de O2 unido, el Fe2+ yace ligeramente hacia un lado del
lo hace con el CO2 en su regreso a los pulmones, donde
anillo de porfirina, el cual es de por s algo curvo (figura
es eliminado.
B3-2). A medida que la molcula de O2 se une al grupo
prosttico hemo atrae al Fe2+ hacia dentro del plano del El 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) es una molcula de fosfato
anillo de porfirina (figura B3-2), al mismo tiempo que orgnico muy aninica (figura B3-4) que est presente
aplana dicho anillo. El movimiento del Fe2+ determina en los eritrocitos junto a la hemoglobina. Esta molcula

Mioglobina
1

Hemoglobina
Saturacin (y)

0.5

pO2 en los pO2 en los


capilares pulmones

0
0 20 40 60 80 100
Presin de O2 (pO2 en mmHg)

Figura B3-3. Curvas de disociacin del oxgeno de la hemoglobina y la mioglobina.


40 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

Figura B3-4. 2,3-bisfosfoglicerato.

promueve la liberacin de O2 de la hemoglobina al sustituciones conservadoras. En contraste, slo unos po-


reducir la afinidad de la protena por este gas. El BPG cos residuos han sido sustituidos entre especies por resi-
se une en la pequea cavidad del centro de las cuatro duos muy diferentes (p. ej., una Leu hidrfoba por una
subunidades. En la oxihemoglobina, dicha cavidad es Lys con carga positiva, o un Glu con carga negativa por
demasiado pequea para alojar el BPG, en tanto que en la una Arg con carga positiva), las llamadas sustituciones
desoxihemoglobina es lo suficientemente grande para no conservadoras, ya que este tipo de cambio podra
dar acomodo a una molcula de BPG. Cuando se une a tener un efecto mayor en la estructura y funcin de la
la cavidad central de la desoxihemoglobina forma enla- protena.
ces inicos con las cadenas laterales de aminocidos
Se han caracterizado varios cientos de hemoglobinas
cargados positivamente de las subunidades , lo que
anormales, que han dado origen a las llamadas hemo-
estabiliza la estructura cuaternaria. El H+, CO2 y BPG son
globinopatas. Es probable que la hemoglobinopata
todos efectores alostricos (seccin D5) ya que favore-
mejor caracterizada sea la anemia de clulas falcifor-
cen la conformacin de la desoxihemoglobina y en con-
mes (hemoglobina de clulas falciformes; HbS). Esta
secuencia promueven la liberacin de O2. Como estas
enfermedad se caracteriza porque los eritrocitos tienen
tres molculas actan en sitios diferentes, sus efectos
una forma caracterstica de hoz o de luna en cuarto cre-
se suman.
ciente. La base molecular de esta enfermedad radica en
el cambio de un Glu por una Val en la posicin 6 de la
Hemoglobina fetal cadena , lo que resulta en la sustitucin de un residuo
polar por uno hidrfobo. Esta sustitucin no conserva-
En el feto hay una clase diferente de hemoglobina, la
dora de la Val por el Glu adjudica a la HbS un parche
hemoglobina F (HbF), la cual consta de dos cadenas 
hidrfobo pegajoso en el lado externo de sus cadenas
y dos cadenas (22), en contraste con la hemoglobina
. En la esquina entre las hlices E y F de la cadena de
del adulto (HbA, 22). En condiciones fisiolgicas, la
la desoxi-HbS hay un sitio hidrfobo complementario
HbF tiene una afinidad ms alta por el O2 que la HbA,
del parche pegajoso (figura B3-5). Por consiguiente, el
lo que optimiza la transferencia de oxgeno desde la
sitio complementario en una molcula de desoxi-HbS
circulacin materna a la fetal a travs de la placenta.
puede unirse al parche pegajoso de otra molcula de
La base molecular de esta diferencia en la afinidad por
desoxi-HbS y dar origen a la formacin de largas fibras
el O2 radica en que la HbF se une al BPG con menos
de molculas de hemoglobina que distorsionan el eri-
fuerza que la HbA. Cerca del nacimiento, la sntesis de
trocito. La microscopia electrnica (seccin A4) ha reve-
la cadena  se detiene y comienza la de la cadena  (la
lado que las fibras tienen un dimetro de 21.5 nm y que
cual est presente en la HbA).
consisten en una hlice de 14 hebras. Adems de la in-
teraccin crtica entre los parches pegajosos, mltiples
Hemoglobinopatas interacciones polares estabilizan la fibra. En la HbS, el
sitio complementario est enmascarado, de manera que
La comparacin de las secuencias primarias de las
la formacin de las fibras largas slo acontece cuando
cadenas de la hemoglobina en ms de 60 especies
se produce una concentracin alta de la forma desoxi-
diferentes revela que slo nueve residuos de la cadena
genada de la HbS.
polipeptdica son invariables (es decir los mismos) en
todas las especies. Estos nueve residuos incluyen a las La anemia de clulas falciformes en una enfermedad
histidinas proximal y distal, que son imprescindibles hemoltica de transmisin gentica. Las clulas falci-
para el funcionamiento correcto de la protena. Muchos formes son ms frgiles que los eritrocitos normales, se
de los restantes residuos son remplazados de una espe- lisan con ms facilidad y presentan una vida media ms
cie a otra por residuos con propiedades similares (p. ej., corta, lo que conduce a una anemia grave. Como la ane-
la Val hidrfoba es sustituida por la Ile hidrfoba, o la mia de clulas falciformes es de transmisin gentica,
Ser polar es remplazada por la Asn polar), las llamadas los homocigotos tiene dos copias del gen anormal y los
B3MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA 41

Oxi-HbA Oxi-HbS O2 Desoxi-HbS

Sustitucin
de Glu por Val
O2
Parche Sitio
hidrfobo pegagoso hidrfobo
xn

Figura B3-5. Bases moleculares de la agregacin de las molculas de


desoxihemoglobina en la anemia de clulas falciformes.

heterocigotos una copia normal y una anormal. Por lo de los heterocigotos. La frecuencia del gen falciforme es
regular, los homocigotos tienen una esperanza de vida relativamente alta en ciertas partes de frica y correla-
reducida como resultado de infecciones, insuficiencia ciona con la incidencia de paludismo. La razn de esto
renal, insuficiencia cardiaca o trombosis, todas ellas es que los heterocigotos estn protegidos contra la forma
debidas a que las clulas falciformes quedan atrapadas ms letal del paludismo, mientras que los homocigo-
en los vasos sanguneos pequeos, lo que condiciona tos normales son ms vulnerables a esta enfermedad.
dao tisular. En contraste, los heterocigotos no suelen Ahora puede determinarse la herencia de la hemoglo-
padecer sntomas ya que slo alrededor de 1% de sus bina anormal mediante tcnicas con DNA recombinante
eritrocitos es falciforme, comparado con cerca de 50% (seccin I1).
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B4Colgena
Notas clave
Funcin y diversidad Colgena es el nombre asignado a una familia con relaciones estructurales
que forma fibras insolubles fuertes. Las colgenas consisten en tres cadenas
polipeptdicas, cuya identidad y distribucin vara entre los tipos de colgena.
Los diferentes tipos de colgena se encuentran en distintas localizaciones del
cuerpo.
Biosntesis: descripcin Los polipptidos de la colgena son modificados despus de su traduccin por
hidroxilacin y glucosilacin durante su transporte a travs del retculo endo-
plsmico rugoso y el aparato de Golgi. Los tres polipptidos forman la proco-
lgena trihelicoidal, que se secreta fuera de la clula. La extensin peptdica es
removida para dar lugar a la tropocolgena, la cual se agrega en una microfibri-
lla y se entrecruza de modo covalente para formar la fibra de colgena madura.
Composicin y Una tercera parte de los residuos de aminocidos de la colgena son de
modicaciones Gly, mientras que una cuarta parte es de Pro. Los aminocidos hidroxilados
postraduccin 4-hidroxiprolina (Hyp) y 5-hidroxilisina (Hyl) se forman despus de la traduc-
cin por la accin de la hidroxilasa de prolina y la hidroxilasa de lisina. Estas
enzimas que contienen Fe2+ requieren cido ascrbico (vitamina C) para su
actividad. En el escorbuto, una enfermedad por deficiencia de vitamina C, la
colgena no se forma de manera correcta debido a la incapacidad para hidroxi-
lar a la Pro y la Lys. Los residuos Hyl suelen modificarse con carbohidratos luego
de su traduccin.
Estructura La colgena contiene una secuencia tripeptdica repetida de Gly-X-Y, donde X
suele ser la Pro y Y suele ser la Hyp. Cada polipptido de la colgena se pliega
en una hlice de 3.3 residuos por vuelta. Las tres cadenas polipeptdicas se jun-
tan para formar un cable helicoidal triple cuyas cadenas se mantienen juntas
gracias a los puentes de hidrgeno que se forman entre las cadenas. Cada tres
residuos, uno pasa a travs del centro de la triple hlice, el cual est tan abarro-
tado que slo la Gly es lo suficientemente pequea para encajar.
Secrecin y agregacin Los pptidos de extensin en el N y C terminales de las cadenas polipeptdicas
dirigen la formacin del cable helicoidal triple y evitan la agregacin prematura
de las molculas de procolgena dentro de la clula. Despus de su secrecin
fuera de la clula, los pptidos de extensin son separados por peptidasas y
las resultantes molculas de tropocolgena se disponen juntas en un orden
alternado.
Enlaces cruzados Los enlaces cruzados covalentes entre y dentro de las molculas de tropocol-
gena confieren fuerza y rigidez a la fibra de colgena. Estos enlaces cruzados se
forman entre la Lys y su derivado aldehdo alisina. sta deriva de la accin de
la oxidasa de lisilo sobre la Lys. Esta enzima contiene cobre y necesita fosfato
de piridoxal para actuar.
Formacin de hueso La hidroxiapatita (fosfato de calcio) se deposita en sitios de nucleacin entre
los extremos de las molculas de tropocolgena, como el paso inicial en la for-
macin del hueso.
Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos (H4) Direccionamiento de las
(B2) Estructura y funcin de las protenas
protenas
B4COLGENA 43

Funcin y diversidad y un polmero de fosfato de calcio. En los tendones,


La colgena, que est presente en todos los organis- la colgena forma fibras tipo cuerdas de alta fuerza
mos multicelulares, no es una protena sino una fami- tensil, mientras que en la piel forma fibras de tejido
lia de protenas con relacin estructural. Es la protena suelto que pueden expandirse en cualquier direccin.
ms abundante de los mamferos y est presente en Los distintos tipos de colgena se caracterizan por
casi todos los rganos corporales, donde sirve para diferentes composiciones de polipptidos (cuadro
mantener a las clulas juntas en unidades discretas. B4-1). Cada colgena est compuesta por tres cadenas
Es asimismo el principal elemento fibroso de la piel, de polipptidos, las cuales pueden ser idnticas (como
huesos, tendones, cartlagos, vasos sanguneos y dien- en los tipos II y III) o pueden ser de dos clases diferentes
tes. Las diferentes protenas de colgena desempe- (tipos I, IV y V). Una sola molcula de colgena de tipo I
an muy diferentes funciones. La estructura dura en tiene una masa molecular de 285 kDa, un ancho de 1.5
extremo de los huesos y los dientes contiene colgena nm y una longitud de 300 nm.

Cuadro B4- 1. Tipos de colgena.


Tipo Composicin polipeptdica Distribucin
I [1(I)]2 2(I) Piel, hueso, tendn, crnea, vasos sanguneos
II [1(II)]3 Cartlago, disco intervertebral
III [1(III)]3 Piel fetal, vasos sanguneos
IV [1(IV)]2 2(IV) Membrana basal
V [1(V)]2 2(V) Placenta, piel

Biosntesis: descripcin antes de ser secretada. En ese transcurso sufre modifi-


Como otras protenas secretadas, los ribosomas sinteti- caciones postraduccin, como la hidroxilacin y con-
zan los polipptidos de la colgena en el retculo endo- jugacin con carbohidratos a las que se somete a Pro
plsmico rugoso (RER; seccin H4). Luego, la cadena y Lys (figura B4-1). Antes de su secrecin, tres cadenas
polipeptdica pasa a travs del RER y el aparato de Golgi de polipptidos se juntan para formar una estructura

Sntesis de polipptidos

Modicaciones
postraduccin
Dentro del RET y el aparato
de Golgi del broblasto
Cable helicoidal
triple de procolgena

Secrecin

Remocin de los
pptidos de extensin

Tropocolgena
Dentro del espacio extracelular
del tejido conectivo
Agregacin dentro
de la miobrilla

Enlazamiento cruzado

Fibra de colgena

Figura B4-1. Descripcin de la biosntesis de colgena.


44 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

helicoidal triple conocida como procolgena. En ese estabilizacin de la estructura de la colgena mediante
momento, la procolgena es secretada al espacio extra- la formacin de enlaces de hidrgeno (vase ms ade-
celular del tejido conectivo, donde peptidasas remueven lante). En caso de deficiencia de vitamina C, la Hyp (y
cadenas de polipptidos de extensin a nivel de los N y C la Hyl) no se sintetiza, lo que ocasiona el debilitamiento
terminales (pptidos de extensin) para formar tropo- de las fibras de colgena. Esto conduce a lesiones de la
colgena (figura B4-1). Las molculas de tropocolgena piel, vasos sanguneos frgiles y cicatrizacin deficiente
se agregan y forman numerosos enlaces entrecruzados de las heridas, que son las caractersticas del escorbuto.
para producir fibras de colgena madura (figura B4-1).
La otra modificacin postraduccin que le sucede a la
colgena es la glucosilacin. En este caso, los residuos
Composicin y modicaciones de azcar, que por lo general se limitan a la glucosa,
galactosa y sus disacridos, estn fijos al grupo hidroxilo
postraduccin
de los residuos Hyl de reciente formacin, ms que en
La composicin de aminocidos de la colgena es los residuos de Asn o de Ser/Thr, como ocurre con la
muy caracterstica. Cerca de una tercera parte de sus glucosilacin ms extendida ligada a N u O (seccin H5).
residuos son de Gly, mientras que otra cuarta parte es La cantidad de carbohidrato unido a la colgena vara
de Pro, que son proporciones significativamente ms de 0.4% a 12% del peso, de acuerdo con el tejido en el
altas que las que se encuentran en otras protenas. Los que se sintetice.
aminocidos hidroxilados 4-hidroxiprolina (Hyp) y
5-hidroxilisina (Hyl) (figura B4-2) se encuentran slo
en la colgena. Estos aminocidos hidroxilados se for- Estructura
man por la accin de las enzimas hidroxilasa de pro- La estructura primaria de cada polipptido de la col-
lina e hidroxilasa de lisina, respectivamente, sobre los gena se caracteriza por una repeticin de la secuencia
aminocidos parentales (figura B4-2). Estas enzimas tripeptdica de Gly-X-Y, donde X suele ser, pero no de
cuentan con un ion Fe2+ en su sitio activo y requieren manera exclusiva, Pro y Y es con frecuencia Hyp. Cada
cido ascrbico (vitamina C) para su actividad. El cido una de las tres cadenas polipeptdicas de la colgena
ascrbico acta como un antioxidante, lo que le permite tiene alrededor de 1 000 residuos de largo y las tres se
mantener al ion Fe2+ en su estado reducido. La hidroxilasa pliegan en una hlice que slo tiene 3.3 residuos por
de prolina y la hidroxilasa de lisina son dioxigenasas que vuelta, en lugar de los 3.6 residuos por vuelta de la hlice
usan una molcula de O2. El cetoglutarato , un interme- (seccin B2). Esta estructura secundaria es exclusiva de
diario del ciclo del cido ctrico (seccin L1), es un sus- la colgena y con frecuencia se refiere como hlice de la
trato obligatorio que se convierte en succinato durante colgena. Las tres cadenas polipeptdicas yacen parale-
la reaccin (figura B4-2). Ambas enzimas hidroxilan slo las y se enrollan una alrededor de la otra con una ligera
los residuos de Pro y Lys que forman parte de la cadena inclinacin a la derecha, retorcidas como una cuerda
polipeptdica, y por tanto slo cuando el residuo est en para formar un cable helicoidal triple (figura B4-3).
el lado N terminal de la Gly. La Hyp es importante para la Cada tercer residuo de cada polipptido pasa a travs

COO COO
CH2 CH2
Hidroxilasa 2 1 + CH2 + CO2
N CH CO + CH2 + O2 N CH CO
de prolina
5 3
H 2C CH2 C O H 2C CH2 C O
CH2 COO 4
C O
H OH
Prolina Cetoglutarato HIdroxiprolina Succinato

2 1
NH CH CO NH CH CO
3
CH2 CH2
4
CH2 HIdroxilasa CH2
+ Cetoglutarato + O2 de lisina
+ Succinato + CO2
5
CH2 H C OH
6
CH2 CH2
NH + 3 NH3+
Lisina HIdroxilisina

Figura B4-2. Formacin de hidroxiprolina e hidroxilisina.


B4COLGENA 45

del centro de la hlice triple, el cual est tan atiborrado deformidades esquelticas. Se conoce el espectro com-
que slo una cadena lateral pequea como la Gly puede pleto de tales mutaciones, que causan la produccin
encajarse. Lo anterior explica la necesidad absoluta de de colgena defectuosa y resulta en una osteognesis
Gly cada tres residuos. Los residuos de las posiciones X y imperfecta (huesos frgiles).
Y se localizan en el lado externo del cable helicoidal tri-
ple, donde hay espacio para las cadenas laterales abul- Secrecin y agregacin
tadas como la Pro y otros residuos. Las tres cadenas de
Cuando los polipptidos de colgena se sintetizan, tie-
polipptidos se hallan alternadas, de modo que el resi-
nen residuos de aminocidos adicionales (100 a 300) en
duo Gly de una cadena se alinea con el residuo X de la
sus N y C terminales que no estn en la fibra de colgena
segunda cadena y con el residuo Y de la tercera cadena.
madura (figura B4-4). Estos pptidos de extensin con-
La hlice triple se mantiene unida a raz de una extensa
tienen con frecuencia residuos de Cys que por lo general
red de enlaces de hidrgeno (seccin B2), en particular
no existen en la cadena polipeptdica restante. Los pp-
entre el grupo amino primario de la Gly de una hlice
tidos de extensin contribuyen a alinear correctamente
y el grupo carboxilo primario de la Pro en la posicin X
los tres polipptidos ya que estn juntos en la hlice
de una de las otras hlices. Adems, los grupos hidroxi-
triple, un proceso al que puede ayudar la formacin de
lo de los residuos Hyp participan en la estabilizacin de
enlaces de disulfuro entre los pptidos de extensin y
la estructura. La relativamente inflexible Pro y la Hyp,
las vecinas cadenas de polipptidos. Los pptidos de ex-
confieren tambin rigidez a la estructura de la colgena.
tensin tambin evitan la agregacin prematura de las
La importancia de que la Gly se encuentre cada tercer hlices triples de la procolgena dentro de la clula.
residuo se confirma cuando una mutacin en la codi- Cuando se secretan fuera del fibroblasto, la accin de
ficacin del DNA de la colgena tipo I lleva a incorporar las peptidasas extracelulares elimina los pptidos de ex-
un aminocido diferente en una sola posicin de una tensin (figura B4-4). Las molculas de tropocolgena
cadena polipeptdica de 1 000 residuos. Por ejemplo, si resultantes se agregan entonces juntas en una disposi-
una mutacin lleva a la incorporacin de una Cys en cin alternada de cabeza a cola en la fibra de colgena
lugar de una Gly, la hlice triple es interrumpida ya que (figura B4-4).
la cadena lateral CH2-SH de la Cys es demasiado grande
para encajar en el interior de la hlice triple. Lo anterior
conduce a una estructura desplegada en forma parcial
Enlaces cruzados covalentes
que es susceptible a hidroxilacin y glucosilacin exce- Entre y dentro de las molculas de tropocolgena, los
siva y a que los fibroblastos no la secreten con eficien- enlaces cruzados covalentes imparten fuerza y rigidez
cia. Esto, a su vez, resulta en una estructura de col- a las fibras de colgena. Como casi no hay residuos de
gena defectuosa que puede originar huesos frgiles y Cys en la colgena madura final, estos enlaces cruzados

Una cadena polipeptdica


plegada en una hlice con
3.3 residuos por vuelta

Tres cadenas polipeptdicas


plegadas juntas para formar
un cable helicoidal triple

Figura B4-3. Disposicin de las tres cadenas de polipptidos en la colgena.


46 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

Polipptido
Pptidos de
Pptidos de extensin
extensin
Direccin del
plegamiento

Cable helicoidal
Peptidasas de triple de procolgena
secrecin

Tropocolgena

Sitios de nucleacin
para la formacin de hueso

Enlaces cruzados
Fibra de
colgena

Tropocolgena 67 nm 35 nm

Figura B4-4. Funcin de los pptidos de extensin en el plegamiento y secrecin


de la procolgena. Cuando son secretados fuera de la clula, los pptidos de
extensin son removidos y las molculas de tropocolgena resultantes agregadas y
entrecruzadas para formar una bra.

covalentes no son enlaces de disulfuro, como sucede por inhibe en forma irreversible a la lisiloxidasa y as evita
lo regular en las protenas, sino que son enlaces cruza- los enlaces cruzados de las molculas de tropocolgena,
dos singulares que se forman entre la Lys y su derivado de lo cual resultan anormalidades serias de los huesos,
aldehdo alisina. Los residuos de alisina se forman por articulaciones y grandes vasos sanguneos debidas a la
la accin de la monooxigenasa lisiloxidasa sobre la Lys colgena frgil. Otra enfermedad por deficiencia de
(figura B4-5). Para su actividad, esta enzima que con- la colgena, el sndrome de Ehlers-Danlos tipo V, se
tiene cobre requiere la coenzima fosfato de piridoxal, debe a la deficiencia de lisiloxidasa y se manifiesta por
que es un derivado de la vitamina B6 (seccin M2). A articulaciones hipermviles e hiperextensibilidad de
continuacin, el grupo aldehdo de la alisina reacciona la piel.
de manera espontnea con el grupo amino de la cadena
lateral de la Lys o con otro residuo de alisina de otra Formacin de hueso
cadena polipeptdica para formar enlaces covalentes
La disposicin alternada regular de los espacios entre
entre las cadenas.
los extremos de las molculas de tropocolgena en una
La importancia de los enlaces cruzados en el funciona- fibra de colgena (figura B4-4) corresponde a los sitios
miento normal de la colgena lo demuestra la enferme- de nucleacin para el depsito de una forma del fosfa-
dad latirismo. Esta enfermedad se presenta en seres to de calcio, la hidroxiapatita, en la formacin del hue-
humanos y animales que ingieren semillas de chcharos so. Se aade ms hidroxiapatita hasta que los sitios de
dulces (Lathyrus odoratus), las cuales contienen la sus- nucleacin crecen y se articulan con otros para formar
tancia qumica aminopropionitrilo . Este compuesto la estructura sea madura.

NH CH CO NH CH CO
Lisilo +
(CH2)4 + O2 (CH2)3 + NH4 + H 2O
+ oxidasa
NH2 C
Lisina O O
Alisina

Figura B4-5. Conversin de la lisina en alisina por la lisiloxidasa.


SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B5Motores moleculares
Notas clave
Motores moleculares Los motores moleculares o protenas motoras se unen a los filamentos del
citoesqueleto y usan energa derivada de la hidrlisis del ATP para moverse a lo
largo de ellos. La regin de la cabeza o dominio motor hidroliza el ATP y se une
a los filamentos, en tanto que la regin de la cola se une a la carga. Los tipos
principales de protenas motoras son las miosinas, las cinesinas y las dinenas.
Estructura del msculo Cada clula de los msculos estriados de los vertebrados contiene dentro de su
sarcoplasma muchas miofibrillas paralelas, las cuales estn elaboradas de
unidades de sarcmeros repetidos. Dentro de cada sarcmero, en forma alter-
nante, estn las bandas oscuras A y las bandas claras I, en medio de las cuales
estn la zona H y la lnea Z, respectivamente. Una miofibrilla contiene dos tipos
de filamentos: los gruesos, que son de miosina y los delgados, que son de actina,
tropomiosina y troponina. Cuando el msculo se contrae, los filamentos grue-
sos y delgados se deslizan unos sobre otros y acortan la longitud del sarcmero.
Miosina La protena miosina consiste en dos cadenas de polipptidos pesadas y en dos
pares de cadenas livianas ordenadas como una regin globular de cabeza doble
fija a una espiral enrollada helicoidal de hebra doble. Las molculas de miosina
se ensamblan en filamentos, hidrolizan el ATP y unen actina.
Actina El constituyente principal de los filamentos delgados es la actina, que puede
existir como un monmero globular de actina G o como un polmero fibroso
de actina F. Los filamentos de actina estn conectados a los filamentos gruesos
mediante puentes cruzados formados por las cabezas S1 de la miosina.
Generacin de la fuerza La formacin y disociacin cclicas de complejos entre los filamentos de actina
en el msculo y las cabezas S1 de la miosina lleva a la contraccin del msculo. Al unirse a la
actina, la miosina libera sus enlaces Pi y ADP. Esto provoca un cambio conforma-
cional en la protena, que mueve el filamento de actina a lo largo del filamento
grueso. En ese momento, el ATP se une a la miosina y desplaza a la actina. La
hidrlisis del ATP hace regresar la cabeza S1 a su conformacin original.
Troponina y tropomiosina La tropomiosina yace a lo largo del filamento delgado y evita la asociacin de
la miosina con la actina en el estado de reposo. En respuesta a la estimulacin
nerviosa, desde el retculo sarcoplsmico, se liberan iones de Ca2+ que se unen a
la subunidad TnC de la troponina y causan un cambio de conformacin en esta
protena. Mediante un mecanismo alostrico, este movimiento se transmite a
travs de las subunidades TnI y TnT de la troponina a la tropomiosina, lo que
determina que esta ltima se mueva de su sitio y permita la asociacin de la
actina con la miosina.
Cinesinas Las cinesinas se mueven a lo largo de los microtbulos y participan en el movi-
miento de las vesculas y organelos alrededor de la clula en la segregacin
de los cromosomas. Una molcula de cinesina tiene dos cabezas, ambas con
actividad de ATP-asa, las cuales se unen de manera alternativa al microtbulo y
mueven de ese modo a la cinesina y su carga a lo largo de ste.
48 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

Dinena Los cilios eucariticos son protrusiones similares a cabellos en la superficie


de las clulas que consisten de forma predominante en microtbulos. En un
cilio, las fibras de los microtbulos se mantienen unidas en una disposicin
caracterstica de 9 + 2 dentro del axonema. Las parejas de nueve microtbulos
ms externos se ven como una figura en ocho, con un crculo ms pequeo, la
subfibra A y un crculo ms grande, la subfibra B. La dinena es una protena
muy grande que forma puentes cruzados con las subfibras B y posee activi-
dad de ATP-asa. Dos brazos de la dinena se proyectan desde la subfibra A, la
cual, tras la hidrlisis del ATP, se mueve a lo largo de las subfibras B adyacentes.
Debido a que nexina extensible se une entre las parejas, este movimiento des-
lizante se convierte en una flexin local del cilio.
Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas

Motores moleculares la zona H, es menos densa que el resto de la banda. En


medio de la banda I est la lnea Z, que es una zona muy
Los motores moleculares o protenas motoras se unen
densa y estrecha. Un corte transversal de una miofibrilla
a un filamento del citoesqueleto y utilizan la energa
revela que hay dos tipos de filamentos que interactan.
derivada de ciclos repetidos de hidrlisis del ATP para
Los filamentos gruesos, cuyo dimetro es cercano a 15
moverse a lo largo de ste; por tanto, convierten la ener-
nm, se encuentran slo en la banda A (figura B5-1a) y
ga qumica en movimiento. Existen muchos tipos dife-
consisten de manera primaria en la protena miosina,
rentes de protenas motoras en las clulas eucariotas que
mientras que los filamentos delgados, cuyo dimetro
difieren en el tipo de filamento al que se unen, la direc-
se acerca a los 9 nm, contienen actina, tropomiosina y
cin en la cual se mueven a lo largo del filamento y la
el complejo troponina.
carga que transportan. Las protenas motoras se asocian
con los filamentos por medio de la regin de la cabeza Cuando el msculo se contrae, puede acortarse como
o dominio motor, que es el que se une e hidroliza el una tercera parte de su longitud original. Informacin
ATP, mientras que la regin de la cola se une a la carga obtenida por cristalografa de rayos X (seccin B2) y
que se transporta. Hay tres tipos de protenas motoras: estudios microscpicos de luz y electrnicos (seccin
las miosinas, que se unen a los filamentos de actina e A4) llevan a la propuesta del modelo de filamento desli-
intervienen en la contraccin muscular; las cinesinas, zante para explicar la contraccin muscular. Se observ
que se unen a los microtbulos y participan en el movi- que los filamentos grueso y delgado no cambian de lon-
miento de vesculas y organelos alrededor de la clula gitud durante la contraccin, pero en cambio se vio que
y en la segregacin de los cromosomas y las dinenas, la longitud del sarcmero disminuye a medida que los
que tambin se unen a los microtbulos y proveen la filamentos grueso y delgado se deslizan y pasan uno
energa para el movimiento de cilios y flagelos de las sobre el otro (figura B5-1). Por consiguiente, conforme el
clulas eucariotas. msculo se contrae, los tamaos de la zona H y la banda
I disminuyen. La fuerza de la contraccin es generada
Estructura del msculo por un proceso que mueve activamente un tipo de fila-
mento ms all del filamento ms cercano del otro tipo.
El proceso generador de fuerza que mejor se entiende en
los sistemas biolgicos es el de la contraccin del mscu-
lo estriado de los vertebrados, as llamado debido a que Miosina
se ve estriado (rayado) con el microscopio de contraste
La miosina es una protena grande (520 kDa) consistente
de fase (seccin A4). Este msculo se compone de nume-
en seis cadenas de polipptidos: dos cadenas pesadas
rosas clulas multinucleadas a las que rodea una mem-
(220 kDa cada una) y dos pares de cadenas livianas (20
brana plasmtica que se excita con estmulos elctricos.
kDa cada una). Esta gran protena desempea tres acti-
Cada clula contiene dentro de su sarcoplasma (citosol)
vidades biolgicas:
muchas miofibrillas paralelas, cada una de un dimetro
aproximado de 1 nm. El sarcoplasma tambin es rico en 1. Las molculas de miosina se ensamblan de forma
ATP, fosfato de creatina (seccin M3) y enzimas glucol- espontnea en filamentos en soluciones de poten-
ticas (seccin J3). La unidad funcional de la miofibrilla cia inica y pH fisiolgicos.
es el sarcmero, el cual se repite cada 2.3 m a lo largo
2. La miosina es una ATP-asa que hidroliza el ATP y pro-
del eje de la fibrilla (figura B5-1a). Una banda oscura A
duce ADP y Pi.
y una banda clara I se alternan de manera regular a lo
largo de la miofibrilla. La regin central de la banda A, 3. La miosina une la forma polimerizada de la actina.
B5MOTORES MOLECULARES 49

a) Banda A Banda I Banda A

Zona H Zona H
Z Z Z

Sarcmero
Filamentos delgados Filamentos gruesos

b)

Sarcmero

Figura B5-1. Diagrama esquemtico donde se muestra el aspecto del msculo


estriado de los vertebrados como se lo ve con el microscopio de contraste de fase:
a) relajado; b) contrado.

La miosina consiste en una regin globular de doble potencia inica, existe como un monmero de 42 kDa
cabeza unida a un largo bastn. El bastn es una espi- denominado actina G debido a su forma globular. A
ral enrollada helicoidal  de doble hebra formada por medida que la potencia inica de la solucin aumenta
las dos cadenas pesadas, en tanto que las cabezas son hasta alcanzar la del nivel fisiolgico, la actina G se poli-
tambin parte de cada cadena pesada con las cadenas meriza en una forma fibrosa, la actina F, que recuerda a
livianas unidas (figura B5-2a). La protelisis limitada de los filamentos delgados que se encuentran en el mscu-
la miosina con la proteasa tripsina produce su disec- lo. Aunque la actina, como la miosina, es una ATP-asa,
cin en dos fragmentos: meromiosina ligera (LMM) y la hidrlisis del ATP no forma parte del ciclo de contrac-
meromiosina pesada (HMM) (figura B5-2b). Estudios cin-relajacin del msculo sino en el del ensamble y
funcionales de estos dos fragmentos revelan que la LMM desensamble del filamento de actina.
puede todava formar filamentos pero pierde su activi-
En los filamentos gruesos emergen puentes cruzados
dad de ATP-asa, mientras que la HMM es incapaz de for-
desde el eje del filamento en una disposicin helicoidal
mar filamentos pero conserva su actividad de ATP-asa y
regular hacia cualquier extremo, donde hay una regin
puede unirse a la actina. De manera adicional, la pro-
desnuda en el medio que carece de puentes cruzados
teasa papana (figura B5-2b) puede dividir la HMM en dos
(figura B5-3). En el msculo sin ATP, los puentes cruza-
subfragmentos globulares idnticos (S1) y un subfrag-
dos de la miosina interactan con los filamentos de actina
mento en forma de bastn (S2). El subfragmento S1,
circundantes. La direccin absoluta de las molculas de
cuya estructura se determin mediante cristalografa
actina y miosina invierte la mitad entre las lneas Z. Por
de rayos X, contiene un sitio ATP-asa, un sitio de unin de
tanto, a medida que los dos filamentos delgados que se
actina y dos sitios de unin de cadenas ligeras. La esci-
unen a los puentes cruzados en cualquier extremo de
sin proteoltica de la miosina tiene lugar en regiones
un filamento grueso se mueven uno hacia el otro desli-
bisagra flexibles de la protena que separan el dominio
zndose sobre el filamento grueso, la distancia entre las
globular S1 de los dominios tipo bastn S2 y LMM (figura
lneas Z se acorta y el msculo se contrae (figura B5-3).
B5-2c). Estas regiones bisagra juegan un papel crucial en
la contraccin del msculo.
Generacin de fuerza en el msculo
Actina La formacin y disociacin cclicas de puentes cruzados
La actina, el constituyente principal de los filamentos entre la actina y las cabezas S1 de la miosina hace con-
delgados, existe en dos formas. En soluciones de baja traer el msculo por los cambios conformacionales que
50 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

a) Cadena pesada
Cadenas livianas
COO
COO

Espiral enrollada helicoidal


Regin de la
cabeza globular

b)
c) S1
COO

S1 S2
Tripsina

Bisagras LMM
COO
HMM LMM

Papana

S1
S2
S1
Figura B5-2. Estructura de la miosina donde se puede ver a) la asociacin de
las dos cadenas pesadas y los dos pares de cadenas ligeras; b) la fragmentacin
proteoltica de la miosina, y c) las regiones bisagra entre los dominios.

ocurren en la cabeza S1 de la miosina. En el msculo en la regin en bisagra situada entre los dominios S1 y S2
reposo, las cabezas S1 son incapaces de interactuar con que modifica su orientacin relativa con la molcula de
la actina en los filamentos delgados debido a la interfe- actina en el filamento delgado (figura B5-4c). ste cons-
rencia estrica de la protena reguladora tropomiosina tituye el golpe de poder de la contraccin muscular y
(figura B5-4a). La miosina tiene enlaces con el ADP y el Pi. resulta en el movimiento del filamento delgado en una
Cuando el msculo recibe un estmulo, la tropomiosina distancia de alrededor de 10 nm en relacin con el fila-
se mueve hacia fuera y permite que las cabezas S1 se mento grueso, hacia el centro del sarcmero. Entonces
proyecten fuera del filamento grueso para fijarse en la el ATP se une a la cabeza S1, lo que provoca la rpida
actina en el filamento delgado (figura B5-4b). Cuando liberacin de la actina [es decir, la disociacin de los
se produce la unin de la miosina-ADP-Pi a la actina, pri- ligamentos delgado y grueso (figura B5-4d)]. Luego el
mero se libera el Pi y despus el ADP. Ni bien el ADP se ATP sufre una hidrlisis parcial por la cabeza S1 libre
libera, la cabeza S1 sufre un cambio conformacional en que lo convierte en ADP y Pi y la cabeza S1 recupera su

Filamentos de actina Filamento de miosina

Lnea Z Grupos cabeza Lnea Z


de la miosina

Figura B5-3. Diagrama esquemtico para mostrar la interaccin de los lamentos


gruesos de miosina y los lamentos delgados de actina durante la contraccin del
msculo esqueltico.
B5MOTORES MOLECULARES 51

conformacin original lista para otra ronda de fijacin citoplsmica del catin con respecto a la que muestra en
(figura B5-4e), cambio conformacional y liberacin. reposo, que es menor de 1 M a casi 10 M. El Ca2+ se
une a sitios del TnC, lo que provoca un cambio confor-
macional de este polipptido que se transmite a travs
Troponina y tropomiosina de los otros componentes del complejo de la troponina
La troponina y la tropomiosina median la regulacin de a la tropomiosina. A consecuencia de lo anterior, la tro-
la contraccin muscular en respuesta al Ca2+. Estas dos pomiosina se mueve hacia fuera, lo que permite que la
protenas estn presentes en el filamento delgado, junto cabeza S1 de la miosina interacte con la actina e ini-
a la actina y constituyen alrededor de una tercera parte cie un ciclo de contraccin. Por consiguiente, el Ca2+
de la masa de ste. La tropomiosina es una protena controla la contraccin muscular por un mecanismo
elongada de 70 kDa que forma un bastn helicoidal de alostrico (seccin D5) que implica a la troponina, la
dos hebras, el cual yace casi paralelo al eje mayor del tropomiosina, la actina y la miosina.
filamento delgado. La troponina es un complejo de tres
cadenas de polipptidos: TnC (18 kDa), el cual se une
al Ca2+; TnI (24 kDa), el que se une a la actina y TnT
Cinesinas
(37 kDa), el cual se une a la tropomiosina. Cuando un Las cinesinas se mueven a lo largo de los microtbu-
estmulo nervioso estimula el msculo, el retculo sar- los formados por la protena tubulina (seccin A2) y
coplsmico libera iones Ca2+ (una forma especializada estn relacionadas con el movimiento de las vesculas
de ER que se encuentra en las clulas musculares; sec- y organelos alrededor de la clula y en la segregacin
cin A2) en el citoplasma, lo que eleva la concentracin de los cromosomas. Una molcula de cinesina tiene

Filamento delgado
a)
Pi
S1
S2 Miosina
ADP

Filamento grueso
La jacin
libera Pi
b)

Actina
Miosina
ADP

El golpe de poder
libera ADP
10 nm
c)

Miosinaactina

La unin del ATP


libera la actina
d)

MiosinaATP

Hidrlisis del ATP

e)
Pi
Miosina
ADP

Figura B5-4. Mecanismo de la generacin de fuerza en el msculo a medida que el


lamento grueso de miosina interacta con el lamento delgado de actina.
52 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

dos cabezas, las cuales operan en tndem: una se une impulsados por cilios o un flagelo (seccin A1). En las
al microtbulo y luego lo hace la otra. De este modo, la clulas eucariotas, los cilios difieren de los flagelos slo
molcula de cinesina camina a lo largo del microt- en que son mucho ms largos. Todos los cilios y flage-
bulo de una manera muy procesual. En contraste con la los eucariticos presentan el mismo diseo bsico: un
miosina, en que la unin con el ATP promueve la diso- haz de fibras denominado axonema rodeado por una
ciacin de la actina, la adicin de ATP incrementa con membrana que es continua con la membrana plasm-
fuerza la afinidad de la cinesina por los microtbulos. El tica (figura B5-5). En un axonema, las fibras de microt-
ciclo comienza con ambas cabezas de una molcula de bulos estn en una disposicin caracterstica de 9 + 2,
cinesina en la forma enlazada al ADP. Una de las cabezas con un grupo perifrico de nueve pares de microtbulos
se une al microtbulo y libera su ADP, que es rempla- rodeando dos microtbulos simples (figura B5-5). Cada
zado por ATP. La unin del ATP provoca un cambio con- una de las nueve parejas externas adquiere un aspecto
formacional que bloquea la cabeza en el microtbulo parecido a un 8, cuyo crculo ms pequeo se llama
y atrae el enlazador de las dos cabezas hacia adelante subfibra A y el crculo mayor, subfibra B. La subfibra A
y de esa manera lanza la segunda cabeza a lo largo del se une a una vaina central por medio de rayos radiales,
microtbulo. La hidrlisis del ATP tiene lugar en la pri- mientras las parejas de microtbulos vecinas se mantie-
mera cabeza mientras la segunda cabeza interacta nen juntas por enlaces de nexina. Dos brazos de dinena
con el microtbulo. El intercambio de ATP por ADP en la emergen de cada subfibra A, con todos los brazos de un
segunda cabeza atrae la primera cabeza de la molcula cilio apuntando en la misma direccin (figura B5-5).
de cinesina hacia adelante, lo que la hace mover a lo
La dinena es una protena muy grande (1 000 a 2 000
largo del microtbulo en una forma escalonada. Luego
kDa) que consiste en una, dos o tres cabezas segn cul
el ciclo se repite para mover la molcula de cinesina y
sea la fuente. Las cabezas de la dinena forman puen-
su carga enlazada a lo largo del microtbulo.
tes cruzados con las subfibras B y poseen actividad de
ATP-asa. La unin del ATP a la dinena determina que se
Dinena disocie de la subfibra B. Durante la hidrlisis del ATP y
Las proyecciones similares a cabellos, o cilios, de la su conversin en ADP y Pi, la dinena vuelve a unirse con
superficie de ciertas clulas eucariotas, como las que la subfibra B con la consecuente liberacin de Pi y ADP.
revisten las vas respiratorias, consisten sobre todo en Este ciclo de la ATP-asa produce el movimiento del cilio
microtbulos (seccin A2). Los cilios intervienen en el conforme las parejas externas del axonema se deslizan
movimiento de las corrientes de lquidos sobre la super- una sobre la otra. Los puentes cruzados de la dinena
ficie de las clulas. Clulas libres como los protozoarios generan la fuerza entre las parejas adyacentes. Por con-
y los espermatozoides de varias especies pueden ser siguiente, los brazos de la dinena sobre la subfibra A de

Membrana
plasmtica
Subbra A

Subbra B Rayo
radial

Vaina
Nexina central

Brazo de
dinena
externo
Brazo de
dinena
interno

Pareja Microtbulo
externa de solitario central
microtbulos

Figura B5-5. Diagrama de un corte transversal de un cilio.


B5MOTORES MOLECULARES 53

una pareja recorren a lo largo la subfibra B de la pareja inmviles, el llamado sndrome de cilios inmviles.
adyacente. A diferencia del msculo, donde los filamen- Los pacientes que sufren esta enfermedad tienen tras-
tos de actina y miosina se deslizan unos sobre otros, tornos pulmonares crnicos debido a que los cilios de
en un cilio, los rayos radiales resisten el movimiento las vas respiratorias son incapaces de barrer las bacte-
deslizante, el cual es convertido en una flexin local. rias y otras partculas extraas. De manera adicional, los
La muy extensible protena nexina mantiene las parejas varones con este defecto gentico son infrtiles ya que
adyacentes juntas durante este proceso. sus espermatozoides son incapaces de moverse debido
a la inactividad de los flagelos.
Un defecto o ausencia de cualquiera de las protenas
del axonema (p. ej., dinena, nexina) condiciona cilios
SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

B6Anticuerpos
Notas clave
Sistema inmunitario: El sistema inmunitario tiene dos funciones principales: reconocer los agentes
descripcin patgenos invasores y desencadenar respuestas que los destruyan. El sistema
inmunitario humoral recae en los linfocitos B, que producen anticuerpos que se
unen a los antgenos extraos. El sistema inmunitario celular utiliza linfocitos
T asesinos que reconocen y destruyen a las clulas invasoras de modo directo.
La respuesta inmunitaria primaria se produce durante el contacto inicial con
un antgeno extrao y resulta en la produccin de inmunoglobulina M (IgM) y,
a continuacin, de inmunoglobulina G (IgG). Si se vuelve a encontrar el mismo
antgeno, la memoria inmunolgica conduce a respuestas inmunitarias secun-
darias que producen un incremento mucho ms rpido y grande de la produc-
cin de IgG especfica.
Estructura del anticuerpo Cada molcula de IgG consiste en cuatro cadenas de polipptidos (dos cadenas
ligeras idnticas y dos cadenas pesadas idnticas unidas por enlaces disulfuro) y
tiene dos sitios de unin de antgenos (es decir que es divalente). Cada cadena
ligera y cada cadena pesada consta de una regin variable y una regin cons-
tante. Cada cadena ligera se pliega en dos dominios, uno para la regin varia-
ble y otro para la regin constante. Cada cadena pesada de la IgG se pliega en
cuatro dominios, uno para la regin variable y tres para la regin constante. La
papana digiere a la IgG y la convierte en dos fragmentos Fab (cada uno de los
cuales tiene un sitio de unin de antgeno, lo que significa que es monovalente)
y un fragmento Fc. La pepsina digiere a la IgG y libera un fragmento F(ab)2 que
cuenta con dos sitios de unin de antgeno.
Cinco clases de Las inmunoglobulinas humanas existentes son las clases IgA, IgD, IgE, IgG
inmunoglobulinas e IgM, las cuales contienen cadenas pesadas , , ,  y , respectivamente. La
IgM es un pentmero que se une a los microorganismos invasores y activa el
complemento para matar las clulas y fagocitarlas. La IgG es el principal anti-
cuerpo que se encuentra en la sangre despus de la estimulacin antignica
y tambin encierra la capacidad de cruzar la placenta. La IgA acta en par-
ticular en las secreciones corporales. La IgE provee inmunidad contra algunos
parsitos, pero es asimismo la causa de los sntomas clnicos de las reacciones
alrgicas. La funcin exacta de la IgD se desconoce.
Anticuerpos policonales Una preparacin de molculas de anticuerpos que se originan de numerosas
clonas de clulas diferentes se llama anticuerpo policlonal. Consiste en una
mezcla de molculas de anticuerpos que se unen a diferentes partes (eptopos)
del antgeno con diferentes afinidades de unin.
Anticuerpos El anticuerpo monoclonal es el anticuerpo producido por una sola clona de
monoconales clulas; todas las molculas de anticuerpos son idnticas y se unen al mismo
sitio antignico con idnticas afinidades de unin.
Sntesis de anticuerpos No existe un gen de anticuerpos completo en las clulas de la lnea germinal.
Los genes de las cadenas livianas y pesadas se ensamblan por recombinacin
somtica durante la maduracin del linfocito B. Un linfocito B puede cambiar
la clase de anticuerpo que expresa mientras mantiene la misma secuencia de
genes que codifica para la regin variable de la cadena pesada pero si la une a
un nuevo segmento del gen C. La nueva cadena pesada tiene una regin cons-
tante diferente, pero la misma especificidad de unin de antgeno de la cadena
pesada previa.
B6ANTICUERPOS 55

Temas relacionados (A4) Imgenes celulares (C1) Purificacin de las protenas


(B2) Estructura y funcin de las (C4) Inmunodeteccin
protenas

Sistema inmunitario: descripcin tenas, carbohidratos, cidos nucleicos); estos compo-


Hay dos funciones vitales del sistema inmunitario: nentes extraos se denominan antgenos.
reconocimiento de un agente patgeno invasor (bacte-
ria, hongos, protozoarios y virus causantes de enferme- Respuestas inmunitarias primaria
dad) como diferente de los componentes normales del
cuerpo (y en consecuencia tratado como extrao) y en
y secundaria
consecuencia el desencadenamiento de mecanismos La presencia de un antgeno extrao estimula la pro-
que lleven a la destruccin del invasor, como la activa- duccin de un anticuerpo especfico en la corriente san-
cin del complemento (vase ms adelante) y de clulas gunea, el cual reconocer y se unir estrechamente al
fagocitarias que engullan y digieran el microorganismo antgeno. Despus de la inyeccin de un antgeno, las
invasor (seccin E4). Las clulas encargadas de la inmu- primeras molculas de anticuerpos que se producen son
nidad de los vertebrados son los glbulos blancos llama- de la clase de inmunoglobulinas M (molculas IgM). Sin
dos linfocitos, los cuales se originan en clulas precur- embargo, alrededor de diez das despus de la inyeccin
soras (madre) de la mdula sea. El sistema inmunitario del antgeno, la cantidad de IgM en la corriente sangu-
tiene dos partes principales, las cuales interactan para nea declina (el ttulo de anticuerpos) y se produce el
proporcionar proteccin total al animal: aumento concurrente de otra clase de anticuerpos lla-
mada inmunoglobulina G (IgG) (figura B6-1). A sta se
z La respuesta inmunitaria humoral (humor es un tr-
le llama respuesta inmunitaria primaria.
mino anticuado que significa fluido) depende de la
produccin de protenas solubles llamadas anticuer- Una de las caractersticas ms importantes del sistema
pos (o inmunoglobulinas) por los linfocitos B (clu- inmunitario es que, cuando un animal tropieza con un
las B), as llamados porque las clulas maduran en la agente patgeno en particular, el sistema le confiere
mdula sea (del ingls bone, que significa hueso). proteccin contra futuras infecciones por el mismo.
Esta memoria inmunitaria significa que, si el mismo
z La respuesta inmunitaria celular es mediada por los
agente patgeno o antgeno se encuentra por segunda
linfocitos T (clulas T), as llamados porque su madu-
vez, quiz incluso dcadas despus del primer encuen-
racin a partir de las clulas madre tiene lugar en el
tro, el sistema reacciona mucho ms rpido y de manera
timo. Los linfocitos T intactos son responsables del
ms drstica y produce una gran cantidad de IgG espe-
reconocimiento y muerte de los invasores extraos.
cfica para contrarrestar al antgeno. sta es la respuesta
Tanto en la inmunidad celular como en la humoral, inmunitaria secundaria (figura B6-1), que es mediada
el reconocimiento de los invasores extraos depende por clulas T de memoria y clulas B de memoria lon-
del reconocimiento de macromolculas extraas (pro- gevas.
Log10 del ttulo de anticuerpos

Primera Segunda lgG


inyeccin inyeccin
de antgeno de antgeno

lgM

0 1 2 3 4 5 6 7
Semanas despus de la inyeccin inicial de antgeno

Figura B6-1. Respuestas inmunitarias primaria y secundaria a la inyeccin


de un antgeno.
56 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

Estructura del anticuerpo de inmunoglobulina, las partes hipervariables de las


cadenas liviana y pesada se conectan en asas para for-
Cadenas ligera y pesada mar el sitio de unin de antgenos. Las partes restan-
Cada molcula de IgG tiene forma de Y y consiste en tes de cada regin variable conservan una secuencia
cuatro cadenas de polipptidos unidas por enlaces razonablemente constante, por lo general no estable-
disulfuro, de las cuales dos copias idnticas son cade- cen contacto directo con el antgeno y se denominan
nas ligeras (L) (25 kDa) y otras dos copias idnticas son regiones marco.
cadenas pesadas (H) (50 kDa) (figura B6-2a). Los extre-
mos terminales N de una cadena pesada y su cadena Dominios de anticuerpos
ligera vecina cooperan para formar un sitio de unin Cada cadena ligera consiste en dos segmentos repeti-
de antgeno, de manera que la molcula de IgG tiene dos de alrededor de 110 aminocidos que se pliegan
dos sitios de unin de antgenos, es decir que es diva- en dos dominios tridimensionales compactos, de los
lente. Debido a ello, una sola molcula de anticuerpo cuales uno representa la regin variable de la cadena
puede unir dos molculas de antgeno y as forma enla- ligera y el otro, la regin constante. Cada cadena pesada
ces cruzados y hace precipitar a los antgenos fuera de tambin est elaborada de unidades repetidas de alre-
la solucin. dedor de 110 aminocidos de largo. Como cada cadena
pesada de la IgG tiene alrededor de 440 aminocidos
de longitud, forma cuatro dominios un dominio para
Regiones variable y constante
la regin variable y tres dominios para la regin cons-
La comparacin de las secuencias de aminocidos de tante. La similitud de las secuencias de aminocidos
muchos polipptidos de las inmunoglobulinas ha mos- entre los diferentes dominios sugiere que se originaron
trado que cada cadena ligera tiene una regin variable por la duplicacin de genes habida durante la evolucin.
en su extremo N terminal y una regin invariable o
constante en su C terminal (figura B6-2b). De manera
similar, cada cadena pesada tiene una regin N terminal Fragmentos Fab y Fc
variable y una regin C terminal constante. Como son La papana, que es una proteasa, corta la molcula de
las partes terminales N de las cadenas pesadas y ligeras IgG para liberar los dos brazos de la molcula en forma
las que forman el sitio de unin de antgenos, la varia- de Y, cada uno de los cuales posee un sitio de unin de
bilidad de las secuencias de aminocidos de esas regio- antgeno que se llama fragmento Fab (del ingls Frag-
nes explica cmo pueden formarse diferentes sitios con ment antigen binding) (figura B6-3). Debido a que los
especificidades diferenciadas para la unin de antge- fragmentos Fab slo tienen un sitio de unin de antgeno
nos. De hecho, la variabilidad de las regiones variables (es decir que son monovalentes), no pueden entrecru-
de las cadenas ligeras y pesadas se localiza sobre todo zar antgenos. El tallo liberado de la molcula en forma
en tres regiones hipervariables de cada cadena (figura de Y (que consiste en las dos partes C terminales idn-
B6-2b). En la estructura tridimensional de la molcula ticas de las dos cadenas H) se denomina fragmento Fc

a)
b)
Sitio de unin Sitio de unin Sitio de unin Sitio de unin
de antgeno de antgeno de antgeno de antgeno

N Cadena N
pesada
VH
N N
VL CH
S
S

SS Variable SS
S

CL
S
S

S
S

SS SS
Cadena C C
ligera Constante
Regiones
hipervariables
C C

Figura B6-2. Estructura de una molcula de anticuerpo: a) cada molcula de


anticuerpo consiste en dos cadenas ligeras idnticas y dos cadenas pesadas
idnticas la molcula tiene dos sitios de unin de antgeno, cada uno de ellos
formado por una cadena ligera y una cadena pesada; b) las regiones N-terminal
de las cadenas ligeras y pesadas son variables en sus secuencias de aminocidos
entre los anticuerpos (regiones variables; regiones V). Los trminos genricos de
estas regiones en la cadena ligera son VI y CLy en la cadena pesada, Vh y Ch.
B6ANTICUERPOS 57

(as llamado porque cristaliza en seguida). Los fragmen- Las diferentes cadenas pesadas confieren distintas pro-
tos Fc son los portadores del sitio efector que produce piedades y funciones a cada una de las clases de inmu-
la destruccin del antgeno, por ejemplo, al activar el noglobulinas.
sistema del complemento e inducir la fagocitosis de los
z La IgM tiene cadenas pesadas y existe como un
agentes patgenos por otros glbulos blancos. En con-
pentmero en combinacin con otro polipptido lla-
traste con la papana, la pepsina (otra proteasa) corta la
mado cadena J, el cual se encarga de iniciar la polime-
molcula de IgG para liberar los dos brazos de sta que
rizacin para formar la estructura pentamrica. Con
todava se mantienen juntos y en consecuencia es un
su gran nmero de sitios de unin de antgeno, cada
fragmento que posee dos sitios de unin de antgeno
molcula de IgM se une de manera muy estrecha a
(es decir que es divalente) y todava puede formar enla-
cualquier agente patgeno que tiene mltiples copias
ces cruzados con los antgenos. Este fragmento se llama
del mismo antgeno en su superficie. La unin induce
F(ab)2 (figura B6-3).
a la regin Fc a activar la va del complemento, el cual
acaba por causar la muerte del agente patgeno. La
Cinco clases de inmunoglobulinas IgM tambin activa a los macrfagos para que fago-
citen a los agentes patgenos. No es de sorprender
Los seres humanos tienen cinco clases diferentes de
en virtud de sus funciones, que la IgM sea el primer
molculas de anticuerpos que difieren tanto en su
anticuerpo producido cuando un animal responde a
estructura como en su funcin. Tales molculas se deno-
un nuevo antgeno (figura B6-1).
minan inmunoglobulina A (IgA), IgD, IgE, IgG e IgM y
cada una tiene su propio tipo de cadena pesada: , , , z La IgG es la principal inmunoglobulina en la corriente
y , respectivamente. Por consiguiente, las molculas sangunea al final de la respuesta inmunitaria prima-
de IgA tienen dos cadenas pesadas idnticas, las mol- ria y en particular durante la respuesta inmunitaria
culas de IgD tienen dos cadenas pesadas idnticas y secundaria (figura B6-1). Como la IgM, puede activar
as sucesivamente. La clase de anticuerpos humanos IgG el complemento y desencadenar la respuesta de los
se subdivide en cuatro subclases de IgG: IgG1, IgG2, IgG3 macrfagos, pero es el nico anticuerpo que puede
e IgG4, cuyas cadenas pesadas son 1, 2, 3 y 4, respec- atravesar la placenta y de ese modo proporcionar
tivamente. proteccin inmunitaria al feto. Tambin se secreta en

Papana
S
S

SS
S
S

SS

Pepsina Pepsina

Papana Pepsina

Dos
fragmentos de Fab

Fragmento
F(ab )2

SS SS
S
S

SS
S
S

SS

SS Fragmentos
SS de Fc
digeridos

Un fragmento Fc

Figura B6-3. La digestin de una molcula de anticuerpo por la papana produjo


dos fragmentos Fab monovalentes y un fragmento Fc, en tanto que la digestin por
la pepsina produjo un fragmento F(ab)2 divalente.
58 SECCIN B AMINOCIDOS Y PROTENAS

la leche materna y es asimilada por el intestino del molculas de anticuerpos en una preparacin de anti-
animal recin nacido para enviarla a la circulacin cuerpo monoclonal se unirn al mismo eptopo del
sangunea, con lo que provee proteccin continua antgeno.
despus del nacimiento.
El problema radica en que si se asla una clula indivi-
z La IgA es la principal clase de anticuerpos en secre- dual productora de anticuerpo y crece en cultivo, sus
ciones como las lgrimas, saliva y en secreciones de descendientes tienen una esperanza de vida acotada,
los pulmones y el intestino. Representa la primera l- que limita en gran medida su uso en las preparacio-
nea de defensa inmunitaria contra la infeccin en nes de rutina de anticuerpos monoclonales. En 1975,
tales sitios. Milstein y Khler descubrieron de qu forma pueden
z La IgE se produce en tejidos donde, despus de producirse de manera indefinida y en grandes canti-
enlazarse al antgeno, estimula a las clulas cebadas dades los anticuerpos monoclonales de casi cualquier
(mastocitos) para que liberen una serie de factores. especificidad deseada. Su mtodo consisti en fusionar
A su vez, algunos de stos activan glbulos blancos un linfocito B productor de anticuerpos de la especi-
(llamados eosinfilos) para que maten varios tipos de ficidad deseada con una clula derivada de un tumor
parsitos. No obstante, las clulas cebadas tambin linfoctico canceroso, llamada clula de mieloma y que
pueden liberar aminas con actividad biolgica, como es inmortal. La fusin de clulas se llama hibridoma,
la histamina, que causan dilatacin e incrementan la que es inmortal y secreta el mismo anticuerpo espec-
permeabilidad de los vasos sanguneos, que son los fico original codificado por el linfocito B.
causantes de los sntomas que se observan en reac-
Los anticuerpos monoclonales que se producen por
ciones alrgicas como la fiebre del heno y el asma.
intermedio de esta tecnologa son herramientas comu-
z La IgD se halla en la superficie de los linfocitos B nes de la investigacin contempornea debido a su
maduros y en indicios en varios lquidos corporales, muy alta especificidad. Por ejemplo, tales anticuerpos
no obstante su funcin exacta se desconoce. pueden usarse para localizar determinadas molculas
intracelulares (seccin A4) o secuencias de aminocidos
Tambin existen dos formas de cadenas ligeras. Las
particulares de las protenas (seccin C4). Si primero
molculas de anticuerpos en cualquiera de las clases
se unen a una matriz insoluble, tambin resultan de
o subclases de anticuerpos pueden tener dos cadenas
extrema utilidad para unirse y por tanto purificar una
ligeras o dos cadenas ligeras . Contra lo que sucede
molcula particular contenida en extractos o fracciones
con las diferentes cadenas pesadas antes descritas, no
celulares (seccin C1). Asimismo, se ha incrementado
se conocen diferencias de funcin biolgica entre las
su uso en la medicina, tanto como herramienta diag-
cadenas ligeras y .
nstica como teraputica, por ejemplo para inactivar
toxinas bacterianas y tratar ciertas formas de cncer.
Anticuerpos policlonales
Si un antgeno se inyecta en un animal, varias clulas Sntesis de anticuerpos
productoras de anticuerpos unirn ese antgeno, aun- Se cree que el genoma humano contiene tan pocos
que con diferentes grados de afinidad y de ese modo el como 105 genes y sin embargo un ser humano puede
anticuerpo que aparezca en la corriente sangunea dar producir cuando menos 1015 diferentes tipos de anti-
origen a numerosos clones de clulas, es decir que ser cuerpos, en trminos de especificidad de unin a un
un anticuerpo policlonal. En una preparacin de anti- antgeno. Para dar cuenta de la mayor parte de esta
cuerpo policlonal, diferentes molculas de anticuerpos diversidad de anticuerpos, los genes existen en seccio-
se unirn a diferentes partes de un antgeno macromo- nes de codificacin separadas y se ensamblan durante la
lecular, con diferentes afinidades de unin. La regin maduracin del linfocito B por un proceso denominado
de unin reconocida por cualquier molcula de anti- recombinacin somtica. Este proceso de ensamble
cuerpo se llama eptopo. La mayora de los anticuerpos tiene lugar en cada linfocito B. Mediante el ensamble de
reconoce estructuras superficiales especficas de una diferentes fragmentos de DNA, pueden crearse genes de in-
protena ms que secuencias de aminocidos determi- munoglobulinas completamente nuevos y de este modo
nadas (los eptopos se definen por la conformacin del se cuenta con un reservorio potencial enorme de diver-
antgeno protenico). Una preparacin de anticuerpos sidad de anticuerpos.
policlonales se unir a muchos eptopos del antgeno
protenico. No existen genes de anticuerpos completos en las clulas
de la lnea germinal. Los genes para las cadenas ligeras
y pesadas se ensamblan por recombinacin somtica
Anticuerpos monoclonales durante la maduracin de los linfocitos B. En la lnea
Si puede aislarse un clon simple de clulas produc- germinal, cada gen de cadena ligera existe como mlti-
toras de anticuerpos, todos los anticuerpos que pro- ples segmentos de los genes V y J corriente arriba de un
duzca dicho clon sern idnticos; asimismo, todas las solo segmento del gen C. Durante la diferenciacin del
B6ANTICUERPOS 59

linfocito B, un segmento del gen V se une con un seg- y despus la unin DJ se une a un segmento del gen V
mento del gen J (unin VJ) para ensamblar el gen com- (unin VDJ); la secuencia gnica VDJ codifica la regin
pleto de la cadena ligera, lo que suele ocurrir por dele- variable del polipptido de la cadena pesada (figura
cin del DNA participante. Las secuencias de los genes V y B6-4).
J codifican la regin variable, mientras que el segmento
Un linfocito B puede cambiar la clase de anticuerpo
del gen C codifica la regin constante del polipptido de
que se est expresando al mover un nuevo segmento
la cadena ligera (figura B6-4).
del gen C a la posicin que ocupaba el segmento VDJre-
Las cadenas pesadas son codificadas por mltiples seg- combinado y para ello elimina el DNA que intervino. La
mentos de los genes V, J y D, los cuales yacen corriente nueva cadena pesada presenta una regin constante
arriba de una copia simple de segmentos del gen C para diferente, pero conserva la misma regin variable y de
cada una de las regiones constantes de las cadenas , esta manera, cuando se produce el cambio de clase y el
, , y . Durante la diferenciacin del linfocito B, un linfocito pasa a producir IgA en lugar de IgM, la especi-
segmento del gen D se une a un segmento J (unin DJ), ficidad del anticuerpo por el antgeno se mantiene.

CADENA LIGERA
Variable Constante

V J C

CADENA PESADA
Variable Constante

V D J C

Figura B6-4. La regin variable de la cadena ligera es codicada por dos


segmentos gnicos separados, V y J. La regin variable de la cadena pesada es
codicada por tres segmentos gnicos, V, D y J.
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C1Purificacin de protenas
Notas clave
Principios de la El fin de la purificacin de protenas es aislar una protena particular del resto
puricacin de en el material inicial. Se usa una combinacin de tcnicas de fraccionamien-
protenas to que explotan la solubilidad, tamao, carga, hidrofobicidad y afinidad de
unin especfica de la protena de inters. El material inicial que se usa es una
fuente relativamente abundante de la protena de inters que sea fcil de obte-
ner. El uso de tcnicas de DNA recombinante implica que pueden obtenerse
grandes cantidades de protenas que de manera habitual son escasas median-
te la expresin de clulas bacterianas o eucariotas.
Homogeneizacin La protena debe obtenerse en solucin antes de su purificacin. La homo-
y solubilizacin geneizacin y la lisis osmtica son dos procesos usados para destruir tejidos
y clulas, que luego se someten a centrifugacin diferencial para aislar la
fraccin subcelular en la que se localiza la protena de inters. En el caso de
las protenas unidas a la membrana, la estructura membranosa debe solu-
bilizarse con un detergente para que libere la protena. Se deben tener pre-
cauciones para evitar que las protenas se desnaturalicen o inactiven durante
la purificacin debido a factores fsicos o biolgicos. Entre stos se incluyen
el amortiguamiento del pH de las soluciones, efectuar los procedimientos a
bajas temperaturas e incluir inhibidores de las proteasas para evitar protelisis
indeseables.
Ensayo de protenas Con el propsito de vigilar el progreso de la purificacin de una protena,
es necesario disponer de un ensayo para la misma. Segn sea la protena, el
ensayo puede incluir la medicin de su actividad enzimtica o propiedades
de unin de ligandos, o puede cuantificar la protena presente por medio de
anticuerpos contra la misma.
Precipitacin del sulfato La solubilidad de las protenas disminuye a medida que la concentracin de
de amonio sulfato de amonio en la solucin aumenta. La concentracin de sulfato de amo-
nio a la cual una protena determinada pierde su solubilidad y precipita suele
ser bastante diferente de la de otras protenas de la mezcla y til para efectuar
la separacin.
Cromatografa de La cromatografa de filtracin en gel separa protenas con base en su tamao
ltracin en gel y forma, para lo cual usa cuentas porosas encerradas en una columna. Las
protenas grandes o elongadas no pueden atravesar los poros de las cuen-
tas y eluyen desde el fondo de la primera columna, en tanto que las protenas
ms pequeas atraviesan las cuentas, disponen de un volumen lquido mayor
accesible a ellas y se mueven a travs de la columna con mayor lentitud, por lo
que eluyen ms tarde.
Cromatografa de En la cromatografa de intercambio de iones, las protenas se separan con base
intercambio de iones en su carga neta. En la cromatografa de intercambio de aniones se usa una
columna que contiene cuentas con carga positiva, mientras que en la cro-
matografa de intercambio de cationes se usan cuentas con carga negativa, a
las cuales se unen protenas con una carga positiva neta. A continuacin, las
protenas unidas se eluyen al aadirles una solucin de cloruro de sodio o al
modificarles el pH del amortiguador.
C1PURIFICACIN DE PROTENAS 61

Cromatografa de La cromatografa de afinidad explota la unin especfica de determinada


anidad molcula a una protena, o su ligando (p. ej., un antgeno por su anticuerpo,
tambin conocida como cromatografa por inmunoafinidad). Un soporte inso-
luble inmoviliza el ligando y queda encerrado en una columna. Al agregar una
mezcla de protenas, slo la protena de inters se une al ligando. Las restan-
tes protenas atraviesan la columna con libertad. La protena unida se eluye
entonces desde el ligando inmovilizado en una forma muy purificada.

Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (B1) Estructura de los aminocidos


(A5) Fraccionamiento celular (C2) Electroforesis en gel

Principios de la puricacin Homogeneizacin y solubilizacin


de protenas Una vez que se identifica una fuente apropiada, el si-
El fin fundamental de la purificacin de protenas es guiente paso es solubilizar la protena. En el caso de las
aislar una protena determinada de otras protenas protenas de lquidos biolgicos, por ejemplo el suero
contaminantes, de manera que sea posible estudiar su sanguneo o el medio de cultivos celulares, no hay nada
estructura y otras propiedades. Cuando se identifica ms que hacer, pero en el de numerosas protenas,
una fuente celular apropiada de protenas, las prote- es necesario desintegrar tejidos y clulas (lisarlos). La
nas se liberan en una solucin y luego se separan del homogeneizacin y subsecuente centrifugacin dife-
material contaminante mediante el uso secuencial de rencial de muestras biolgicas se detallan en la seccin
una serie de diferentes tcnicas de fraccionamiento A5. Adems de los procedimientos que se describen all,
o separacin. Estas tcnicas explotan una o ms de otra forma sencilla de desintegrar clulas que no tienen
las siguientes propiedades bsicas de las protenas: una pared celular rgida para liberar su contenido cito-
solubilidad, tamao, carga, hidrofobicidad o sus afi- slico es la lisis osmtica. Cuando las clulas animales
nidades de unin especficas. Entre estas tcnicas de se colocan en una solucin hipotnica (como el agua
separacin se reconocen las tcnicas cromatogrficas o una solucin amortiguada sin sucrosa), el agua de la
como las de intercambio de iones, filtracin en gel solucin circundante se difunde hacia el ms concen-
o cromatografa de afinidad, cromatografa por in- trado citosol, lo que provoca que la clula se hinche y
teraccin hidrfoba, en la cual la protena se une a un explote. A continuacin se recurre a la centrifugacin
material hidrfobo, o tcnicas electroforticas como diferencial para eliminar a los organelos subcelulares
la del enfoque isoelctrico (seccin C2). Otros proce- contaminantes (seccin A5). Las protenas que estn
dimientos electroforticos, en especial la electrofore- unidas a la membrana requieren un paso solubilizador
sis en gel de poliacrilamida (PAGE) con dodecilsulfato adicional. Despus de su aislamiento por centrifugacin
de sodio (SDS) (seccin C2), se usan para monitorear la diferencial, la membrana apropiada recibe tratamiento
extensin de la purificacin y para determinar la masa con un detergente como el Triton X-100 para romper
molecular y composicin en subunidades de la prote- la bicapa lipdica y liberar las protenas integrales de la
na purificada. membrana en una solucin (para mayores detalles, con-
sltese la seccin E2).

Seleccin de una fuente de protenas


Antes de intentar purificar una protena, lo primero es Estabilizacin de las protenas
considerar la fuente del material de inicio. Las prote- A lo largo del proceso de purificacin, deben seguirse
nas difieren en su distribucin celular y tisular y por determinados pasos para asegurar que la protena de
tanto, si se sabe que una protena es abundante en deter- inters no se inactive o desnaturalice por factores fsi-
minado tejido (p. ej., el renal), tiene sentido comenzar cos o biolgicos. El pH de las soluciones a usar necesita
la purificacin a partir de tal tejido. Asimismo, algu- amortiguarse con sumo cuidado (seccin B1) a un pH al
nas fuentes son ms accesibles que otras y ste es otro cual la protena sea estable, lo que por lo regular sucede
aspecto que debe tenerse en cuenta. En el presente, con alrededor de un pH de 7. Con frecuencia, la tempera-
el uso de las tcnicas de DNA recombinante (seccin I1), tura debe mantenerse por debajo de 25 C (en general,
incluso las protenas escasas pueden expresarse (sinte- cerca de 4 C) para evitar su desnaturalizacin trmica
tizarse) en clulas bacterianas y eucariotas desarrolla- y reducir al mnimo la actividad de las proteasas. Bajo
das en cultivos (seccin A3) y de manera subsecuente homogeneizacin, las proteasas del material fuente,
obtenerse cantidades relativamente grandes de una pro- que de manera habitual se hallan en compartimientos
tena. subcelulares diferentes, son liberadas en la solucin y se
62 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

ponen en contacto con la protena de inters, a la que hacen precipitar la protena coagulante fibringeno
pueden degradar. Por ejemplo, las hidrolasas cidas de del suero sanguneo, en tanto que 2.4 M de sulfato de
los lisosomas (seccin A2) podran ser liberadas en la amonio es la cantidad requerida para que la albmi-
solucin y degradar con rapidez a la protena de inters. na precipite. No obstante, muchas otras protenas tam-
Por consiguiente y del mismo modo como los procedi- bin precipitan a estas concentraciones de sulfato de
mientos se llevan a cabo a baja temperatura, es comn amonio. En consecuencia, es una tcnica de separacin
incorporar inhibidores de las proteasas (seccin D4) relativamente burda, aunque con frecuencia representa
en los amortiguadores utilizados en las etapas iniciales un paso de concentracin conveniente. A veces, el des-
de los procedimientos de aislamiento con el propsito de plazamiento se usa en las etapas finales de un proce-
minimizar protelisis indeseadas. dimiento de purificacin para concentrar una solucin
diluida de la protena y hacer que sta precipite y luego
pueda ser redisuelta en un volumen de amortiguador
Ensayos de protenas
ms pequeo.
Se debe contar con medios adecuados de deteccin
(ensayos) de la protena para vigilar los sucesos de ca-
da etapa del proceso de purificacin. Los ensayos ms
Dilisis
sencillos son aquellos que se verifican con las enzimas Las protenas de molculas pequeas pueden separarse
que catalizan reacciones cuyos productos son fciles por dilisis a travs de una membrana semipermeable
de detectar (para mayores detalles sobre ensayos enzi- como el celofn (acetato de celulosa). Los poros de la
mticos, vase la seccin D1). Las protenas que no membrana permiten el paso de molculas de hasta al-
son enzimas pueden ensayarse (probarse) a travs de rededor de 10 kDa, al tiempo que las molculas ms
la observacin de sus efectos biolgicos. Por ejemplo, grandes son retenidas en la bolsa de dilisis (figura C1-1).
un receptor puede ensayarse midiendo su capacidad de Como casi todas las protenas tienen masas molecula-
unir su ligando especfico. Las tcnicas inmunolgicas res mayores de 10 kDa, esta tcnica resulta inadecuada
suelen emplearse para ensayar a la protena de inters para el fraccionamiento de protenas, pero se usa con
mediante anticuerpos especficos que la reconocen (p. frecuencia para eliminar molculas pequeas como las
ej., radioinmunoensayo, inmunoensayo ligado a enzi- de sal y sulfato de amonio de una solucin de protenas.
mas [ELISA] o el anlisis Western blot [seccin C4]). Debe subrayarse que, en equilibrio, la concentracin
de molculas pequeas dentro de la bolsa de dilisis es
igual a la concentracin de afuera (figura C1-1b) y por
Precipitacin del sulfato de amonio ello suele ser necesario efectuar numerosos cambios
Un primer paso de separacin empleado de manera en la solucin circundante para reducir lo suficiente la
habitual es el de la precipitacin del sulfato de amonio. concentracin de molculas pequeas en la solucin de
Esta tcnica se basa en el hecho de que la solubilidad de las protenas.
la mayor parte de las protenas est disminuida en altas
concentraciones salinas. A medida que la concentracin
de sal se eleva, se alcanza un punto en el cual la protena Cromatografa de ltracin en gel
pierde su solubilidad y precipita. La concentracin de En la cromatografa de filtracin en gel (cromatogra-
sal que se requiere para este efecto de desplazamiento fa de exclusin de tamao o cromatografa de tamiz
salino vara de protena a protena y por consiguiente molecular), las molculas se separan con base en su
es til para usar en el fraccionamiento de una mezcla tamao y forma. La muestra de protenas en un volu-
de protenas. Por ejemplo, 0.8 M de sulfato de amonio men pequeo se aplica en el extremo superior de una

a) b)

Figura C1-1. Separacin de molculas por dilisis, con base en el tamao:


a) punto inicial; b) en equilibrio.
C1PURIFICACIN DE PROTENAS 63

columna de cuentas porosas (dimetro de 0.1 mm), que cuentas y se eluyen antes. La cromatografa de filtracin
estn hechas de un polmero insoluble pero muy hidrata- en gel tambin puede utilizarse para estimar la masa
do como la poliacrilamida (Bio-Gel) o los carbohidratos molecular de una protena. Existe una interrelacin
dextrano (Sephadex) o agarosa (Sefarosa) (figura C1-2a). lineal entre el volumen de elucin relativo de una pro-
Las molculas pequeas pueden ingresar en los poros tena (Ve/Vo donde Ve es el volumen de elucin de una
de las cuentas, mientras que las molculas ms grandes protena determinada y Vo es el volumen eliminado de
o elongadas no pueden hacerlo. Por consiguiente, las la columna, que es el volumen del espacio del solvente
molculas ms pequeas tienen un volumen de lquido que rodea las cuentas; figura C1-2b) y el logaritmo de su
mayor accesible a ellas, tanto el del lquido que rodea a masa molecular. Por tanto, la columna puede deter-
las cuentas porosas como el que se halla en su interior. minar una curva estndar de Ve/Vo contra el log10 de la
En contraste, las molculas ms grandes slo disponen masa molecular mediante el uso de protenas de masa
del lquido que rodea a las cuentas y por tanto se mue- conocida. En consecuencia, el volumen de elucin de
ven a travs de la columna con ms rapidez, lo que las cualquier muestra de protenas permite estimar su masa
lleva a ser las primeras que emergen del fondo (elucin) molecular tomando como referencia su posicin en la
(figuras C1-2a y C1-2b). Las molculas ms pequeas se curva estndar (figura C1-2c).
mueven con mayor lentitud a travs de la columna y elu-
yen ms tarde. Estn disponibles cuentas con diferentes
tamaos de poros, lo que permite separar protenas de Cromatografa de intercambio de iones
distintos tamaos de manera efectiva. La cromatografa En la cromatografa de intercambio de iones, las prote-
de filtracin en gel se usa con frecuencia para eliminar nas se separan con base en su carga total (neta). Si una
la sal de una muestra protenica (p. ej., para remover el protena tiene una carga neta negativa a pK 7, se une a
sulfato de amonio despus de la precipitacin de ste), una columna que contiene cuentas con carga positiva,
ya que la sal ingresa en las cuentas porosas y es eluida mientras que una protena sin carga o con carga positiva
ms tarde, en tanto que las protenas no ingresan en las neta no se unir (figura C1-3a). Las protenas con carga

Amortiguador aadido
Mezcla de por la parte superior
a)
protenas

Cuentas Molculas Molculas


porosas grandes pequeas

Columna de
vidrio/plstico

Tubo para
recolectar
protenas

Molculas Molculas
b) grandes pequeas c)
Vo
Ve Ve
1 2
+
Catnidad de protenas

Vo Volumen vaco +
Ve Volumen de elucin Ve
+
de las protenas Vo
+

Volumen de eluyente Log10 de la masa molecular

Figura C1-2. Cromatografa por ltracin en gel: a) ilustracin esquemtica de la


cromatografa por ltracin en gel; b) diagrama de la elucin en el que se indica la
separacin; c) grca del volumen de elucin relativo contra el logaritmo de la masa
molecular de protenas conocidas, en el que se indica de qu forma la masa molecular de
una protena desconocida puede leerse cuando se conoce su volumen de elucin relativo.
64 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Mezcla de Amortiguador NaCl


a)
protenas

Protenas
Cuentas con carga
con carga negativa
positiva

Columna
de vidrio
Protenas Protenas
con carga con carga
positiva Tubo para
recolectar negativa
protenas

Baja densidad
de carga Alta densidad
negativa de carga
b) Protenas Gradiente
negativa
con carga de NaCl
positiva
Catnidad de
protenas

Volumen de eluyente

Figura C1-3. Cromatografa de un intercambio inico: a) esquema de la


cromatografa de intercambio inico; b) el diagrama muestra la separacin de una
protena con carga neta positiva que no se ha unido a las matrices con carga positiva
y, as, pasa de forma directa a travs de la columna, en tanto que otras dos protenas
con diferente carga negativa neta se unen a las matrices con carga positiva y son
eludidas, lo que aumenta la concentracin de NaCl en la columna. La protena con
menor densidad de carga negativa es eludida antes que aquella con carga negativa
de mayor densidad.

negativa unidas a tal columna pueden entonces eluirse las columnas de intercambio aninico al disminuir el
si la columna se lava con una solucin de cloruro de pH del amortiguador y de las columnas de intercambio
sodio (de iones Cl y Na+) de gradiente cada vez mayor catinico al incrementar el pH del amortiguador, por-
(concentracin en incremento) al pH apropiado. Los que de ese modo se altera el estado de ionizacin de
iones Cl compiten con la protena por los grupos con las cadenas laterales de aminocidos (seccin B1) y por
carga positiva de la columna. Las protenas que tienen consiguiente la carga neta de la protena.
una densidad o carga negativa menor eluyen primero,
seguidas por las que tienen una densidad o una carga
negativa mayor (figura C1-3b). Las columnas que con- Cromatografa de anidad
tienen grupos dietilaminoetilo (DEAE) con carga positiva La cromatografa de afinidad explota la afinidad espe-
(como el DEAE-celulosa o el DEAE-Sephadex) se usan para cfica y alta de la unin no covalente de una protena a
separar a las protenas con carga negativa (protenas otra molcula, el ligando. Primero, el ligando se fija en
aninicas). Esta tcnica se denomina cromatografa forma covalente a una matriz inerte y porosa (como la
de intercambio aninico. Las columnas que contienen Sefarosa). Luego la mezcla de protenas se hace pasar
grupos carboximetilo (CM) con carga negativa (como por una columna que contiene el ligando inmovilizado.
el CM-celulosa o el CM-Sephadex) se usan para separar La protena de inters se une al ligando mientras las
las protenas con carga positiva (protenas catinicas). restantes protenas pasan a travs de la columna (figura
Esta tcnica se denomina cromatografa de intercam- C1-4). Despus de un extenso lavado de la columna con
bio catinico. Como una alternativa a la elucin con un amortiguador para arrastrar a las protenas unidas ines-
gradiente de NaCl, las protenas pueden ser eluidas de pecficamente, la protena de inters enlazada se libera
C1PURIFICACIN DE PROTENAS 65

del ligando inmovilizado agregando ligando soluble, que que se interrumpa la interaccin antgeno-anticuerpo;
compite con el ligando inmovilizado por la protena, o de rutina, se logran ms de 1 000 purificaciones con este
alterando las propiedades del amortiguador (mediante paso solo. Si el antgeno protenico se expone de manera
cambio del pH o de la concentracin de sal). Si se recurre habitual en la membrana plasmtica de un tipo celular
a ligando soluble para eluir la protena de la columna, deseado, estas clulas pueden purificarse de una mez-
con frecuencia es necesario usar una dilisis extensa para cla de clulas con slo hacer pasar la mezcla a travs
remover el pequeo ligando de la gran protena. Debido de la columna. Slo las clulas que porten el antgeno
a que esta tcnica utiliza las propiedades de unin espe- en su superficie se unirn y podrn eluirse en un paso
cficas y con frecuencia exclusivas de la protena, suele posterior.
ser posible separar la protena de una mezcla de cientos
Otras combinaciones de empleo usual de un ligando
de otras protenas en un solo paso cromatogrfico.
inmovilizado y una protena a purificar usadas por
La cromatografa de inmunoafinidad, en la cual se usa los sistemas cromatogrficos de afinidad incluyen un
un anticuerpo para purificar su antgeno, representa una inhibidor para purificar una enzima (seccin D4), una
de las formas ms comunes de la cromatografa de afi- hormona (p. ej., la insulina) para purificar a su recep-
nidad. En la cromatografa de inmunoafinidad, un anti- tor (seccin E5) y una lectina (p. ej., la concanavalina
cuerpo especfico a un antgeno protenico se acopla a A) para purificar una glucoprotena (secciones E2 y
cuentas de una matriz inerte, las cuales se encierran en H5). Los avances en la tecnologa del DNA recombinante
una columna de vidrio o de plstico. Al aadir la solu- (seccin I1) implican que las protenas se pueden dise-
cin impura de protenas en el extremo superior de la ar con secuencias de aminocidos especficas en el
columna, el antgeno protenico se unir al anticuerpo extremo del C terminal, el llamado rabillo. La protena
en la matriz al tiempo que los otros componentes flu- recombinante con el rabillo puede entonces expresarse
yen a travs de la columna. De este modo, el antgeno en un sistema celular adecuado y la afinidad del rabillo
protenico puede eluirse en un estado puro o casi puro por un anticuerpo inmovilizado u otra molcula explo-
con slo cambiar el pH del amortiguador de manera tarse para purificar la protena.

a) Mezcla de
diferentes Ligando
protenas Protena soluble
especca aadido
unida al
ligando

Ligando inmovilizado
en un soporte insoluble Las protenas
y encerrado en una inespeccas
Las protenas
columna de vidrio pasan a travs
especcas
de la columna
eluyen unidas
al ligando soluble
b) Protenas inespeccas
sin unirse

Agregado de
Cantidad de protena

ligando soluble

Protena
especca

Volumen de eluyente

Figura C1-4. Cromatografa de anidad: a) diagrama esquemtico de la


cromatografa de anidad; b) diagrama de la elucin en el que se indica que las
protenas inespeccas que no se unen al ligando inmovilizado pasan a travs de la
columna, en tanto que las protenas especcas se unen al ligando inmovilizado y se
eluyen de la columna slo al aadir ligando soluble.
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C2Electroforesis en gel
Notas clave
Electroforesis En la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), las protenas se aplican
contra un gel de poliacrilamida poroso y se separan en un campo elctrico con
base en su carga negativa neta y su tamao. Las protenas con mayor carga
negativa y ms pequeas migran ms a travs del gel que las protenas con
menos carga negativa y de tamao ms grande.
SDS-PAGE En el SDS-PAGE, la muestra de protenas se trata con un agente reductor para
romper los enlaces de disulfuro y luego con el agente detergente dodecilsulfa-
to de sodio (SDS), el cual desnaturaliza las protenas y las recubre por completo
con una carga negativa. A continuacin, la muestra se fracciona por electrofo-
resis a travs de un gel de poliacrilamida. Como todas las protenas tienen ya
una carga idntica en relacin con la masa, se separan con base en su masa.
Las protenas ms pequeas se mueven ms rpido. El SDS-PAGE puede utili-
zarse para determinar el grado de pureza de una muestra de protenas, esti-
mar la masa molecular de una protena y deducir el nmero de subunidades
polipeptdicas de una protena.
Enfoque isoelctrico En un enfoque isoelctrico, las protenas se separan por electroforesis en un
gel que contiene polianfolitos, los cuales producen un gradiente de pH. stos
separan con base en su contenido relativo de residuos con cargas positivas o
negativas. Cada protena migra a travs del gel hasta que alcanza un punto en
el que carece de una carga neta, que es su punto isoelctrico (pI).
Electroforesis en gel En la electroforesis en gel bidimensional, las protenas se someten en primer
bidimensional lugar al enfoque isoelctrico y luego, en la segunda direccin, al SDS-PAGE para
producir un patrn bidimensional de manchas separadas con base en la carga
y en la masa.
Esta tcnica puede emplearse para comparar el proteoma de clulas que
estn bajo diferentes condiciones.
Visualizacin de las Las protenas pueden visualizarse directamente en geles mediante su tincin
protenas en geles con el colorante azul brillante de Coomassie o con una tincin de plata. Las
protenas marcadas con radiactividad pueden detectarse mediante la super-
posicin de una pelcula de rayos X al gel, donde se buscan las reas ms
oscuras de la autorradiografa revelada que se corresponden con las protenas
radiomarcadas. Una protena determinada de inters puede detectarse por
inmunoblot (Western blot) si se sigue su transferencia desde el gel a la nitroce-
lulosa y se utiliza un anticuerpo que la reconozca de manera especfica. Luego
se detecta este anticuerpo primario con un anticuerpo secundario ligado a una
enzima o radiomarcado.
Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos (C3) Secuenciacin de protenas y
(B2) Estructura y funcin de las sntesis de pptidos
protenas (C4) Inmunodeteccin
(C1) Purificacin de protenas
C2ELECTROFORESIS EN GEL 67

Electroforesis completa (debida a los enlaces de las molculas de


SDS) y en consecuencia la base para su separacin es
Cuando se colocan en un campo elctrico, las molcu-
las con una carga neta, como las protenas, se mueven slo su masa. En primer lugar, la mezcla de protenas
hacia un electrodo o hacia el otro, un fenmeno cono- recibe un tratamiento con un agente reductor como el
cido como electroforesis. Cuanto mayor sea la carga 2-mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los enlaces
elctrica, la molcula se mover ms rpido. En la elec- disulfuro (figura C2-2) (seccin B2). Despus se agrega
troforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), la separa- el poderoso detergente aninico SDS, el cual destruye
cin electrofortica tiene lugar en un gel, el cual sirve casi todas las interacciones no covalentes de la protena,
de tamiz molecular. Las molculas pequeas se mueven al desplegar las cadenas polipeptdicas. Alrededor de
con facilidad a travs de los poros del gel, en tanto que una molcula de SDS se une, por medio de su cadena
las molculas ms grandes se retrasan. Loa geles sue- alquilo hidrfoba, a la columna vertebral polipept-
len elaborarse con poliacrilamida, una sustancia inerte dica por cada dos residuos de aminocidos, lo que da
desde el punto de vista qumico que se forma con faci- a la protena desnaturalizada una gran carga negativa
lidad por la polimerizacin de la acrilamida. El tamao neta que es proporcional a su masa. En ese momento
de los poros del gel puede controlarse mediante la elec- se coloca la mezcla SDS/protena a las cavidades para la
cin apropiada de las concentraciones de acrilamida y muestra de la parte superior del gel de poliacrilamida
del reactivo de entrecruzamiento, la bisacrilamida de (figura C2-1). El amortiguador, que es el mismo tanto
metileno. Cuanto ms alta sea la concentracin de acri- en los reservorios superior e inferior y en el gel, tiene
lamida usada, ms pequeos los tamaos de los poros un pH aproximado de 9, de manera que las protenas
en el gel final. Por lo regular, el gel se coloca entre dos presentan una carga negativa neta y migran hacia el
placas de vidrio separadas por una distancia de 0.5 a nodo del reservorio inferior. Una corriente elctrica (de
1.0 mm (figura C2-1). La muestra de protena se agrega alrededor de 300 V) se aplica a travs del gel desde arriba
a las pequeas cavidades de la parte superior del gel, hasta abajo durante 30 a 90 minutos con el propsito de
las que se forman al colocar un molde de plstico en el mover las protenas a lo largo del gel (figura C2-1). Des-
gel antes de que frage (figura C2-1). Un colorante azul pus de efectuar la electroforesis, el gel se remueve del
(azul de bromofenol) se mezcla con la muestra de pro- aparato y se visualizan las protenas (figura C2-3a). Las
tenas para ayudar a cargarla sobre el gel. Debido a que protenas pequeas se mueven ms lejos a travs del gel,
el bromofenol es una molcula pequea, tambin migra mientras que las grandes se mueven ms lento a medida
con celeridad a travs del gel durante la electroforesis y que son contenidas por los enlaces cruzados con el gel.
de esa manera indica la progresin de la electroforesis. Bajo estas condiciones, la movilidad de la mayora de las
cadenas polipeptdicas es linealmente proporcional al
logaritmo de su masa. Por consiguiente, si las protenas
SDS-PAGE de masa molecular conocida sufren la electroforesis a lo
En el dodecilsulfato de sodio (SDS)-PAGE, las protenas largo de la muestra, la masa de las protenas desconoci-
se desnaturalizan y recubren con una carga negativa das puede determinarse porque existe una interrelacin

Cavidades para
la muestra
Ctodo

Reservorio para
el amortiguador
superior
la electroforesis

Muestra
Direccin de

Gel de poliacrilamida
encerrado entre dos
placas de vidrio
(sandwich)
nodo

Reservorio para
el amortiguador
inferior

Figura C2-1. PAGE. Las muestras de protenas se cargan dentro de pequeas


cavidades formadas en la parte superior del gel. Se aplica un campo elctrico a
travs del gel desde arriba hasta abajo y las protenas descienden por el gel. Las
protenas ms pequeas son las que migran ms.
68 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Protena de una Protena con dos subunidades, Y y Z,


sola subunidad unidas por un enlace disulfuro
X Y Z

s s

Se calientan con SDS


y 2-mercaptoetanol

SH

Molculas de SDS HS
con carga negativa

Electroforesis en gel
de poliacrilamida

Z
X

Gel de poliacrilamida

Figura C2-2. SDS-PAGE. La mezcla de protenas se calienta en presencia de


2-mercaptoetanol, que rompe cualquier enlace disulfuro, y SDS. Las cadenas
polipeptdicas desplegadas son recubiertas con molculas de SDS con carga
negativa, por lo cual migran hacia el nodo del PAGE. Los polipptidos ms
pequeos migran ms a travs del gel que los grandes.

lineal entre el log10 de la masa molecular y la distancia grupos con carga positiva o negativa. Cuando una pro-
migrada a travs del gel (figura C2-3b). Las protenas tena se halla en su punto isoelctrico (pI) (seccin B1),
que difieren en masa por alrededor de 2% (p. ej., 40 y 41 su carga neta es de cero y en consecuencia no se mover
kDa; una diferencia de casi 10 residuos de aminocidos) en un campo elctrico. En el enfoque isoelctrico, se usa
pueden distinguirse bajo condiciones adecuadas. El SDS- un gel de poliacrilamida que presenta poros grandes (de
PAGE es una tcnica rpida, sensible y de amplio uso que manera que no impide la migracin de las protenas) y
puede emplearse para determinar el grado de pureza de contiene una mezcla de polianfolitos (pequeos pol-
una muestra de protenas, para estimar la masa mole- meros con mltiples cargas, que tienen varios valores
cular de una protena desconocida y para deducir el de pI). Si se aplica un campo elctrico al gel, los polian-
nmero de subunidades de una protena. folitos migran y producen un gradiente de pH. Para
separar las protenas por medio del enfoque isoelc-
trico, se les somete a electroforesis a travs del gel. Cada
Enfoque isoelctrico protena migra a travs del gel hasta que alcanza una
El enfoque isoelctrico separa protenas por medios posicin a la cual el pH es igual a su pI (figura C2-4).
electroforticos con base en su contenido relativo de Si una protena difunde lejos de esta posicin, su carga
C2ELECTROFORESIS EN GEL 69

a) b)
1 2 3 4
kDa

la electroforesis
Direccin de

Log10 de la masa
94
43
30
144

Distancia migrada

Figura C2-3. SDS-PAGE. a) Aspecto de las protenas despus de la electroforesis en


un gel de SDS-poliacrilamida. Lnea 1, protenas (marcadores) de masa molecular
conocida; lnea 2, mezcla de protenas sin puricar; lnea 3, protena parcialmente
puricada; lnea 4, protena puricada hasta homogeneidad/pureza aparente. b)
Determinacin de la masa molecular de una protena desconocida por comparacin
de su movilidad electrofortica (distancia migrada) con la de aquellas protenas
(marcadores) de masa molecular conocida.

neta cambiar a medida que se mueva dentro de una en su masa (figura C2-5). El resultado global es que las
regin de diferente pH y las fuerzas electroforticas protenas se separan con base en su tamao y su carga.
resultantes la movern de regreso a su posicin isoelc- Por consiguiente, dos protenas que tienen un pI muy
trica. De esta forma, cada protena es enfocada en una similar o idntico y que producen una sola banda por
banda estrecha (tan delgada como 0.01 de unidad de enfoque isoelctrico, si tienen diferentes masas produ-
pH) alrededor de su pI. cirn dos manchas por electroforesis en gel bidimensio-
nal (figura C2-5). De manera similar, las protenas con
masas moleculares similares o idnticas, las cuales pro-
Electroforesis en gel bidimensional duciran una sola banda por SDS-PAGE, tambin han de
El enfoque isoelctrico puede combinarse con el SDS- producir dos manchas si tienen diferente pI debido a la
PAGE para obtener separaciones de muy alta resolucin separacin inicial por enfoque isoelctrico. La separa-
en un procedimiento que se denomina electroforesis en cin de alta resolucin de las protenas de una mezcla
gel bidimensional. En primer lugar, la muestra de pro- compleja que pueda alcanzarse por electroforesis en gel
tena se somete a un enfoque isoelctrico en una tira bidimensional hace a esta tcnica de extrema utilidad
estrecha de gel que contiene polianfolitos (figura C2-4). para comparar el proteoma (el complemento completo
Esta tira de gel de enfoque isoelctrico se coloca a con- de protenas de una clula u organismo) de clulas o
tinuacin en la parte superior de un SDS-gel de polia- tejidos bajo condiciones diferentes, como es el caso de
crilamida y se somete a electroforesis para producir un las clulas diferenciadas contra las indiferenciadas, y
patrn bidimensional de manchas, en el cual las pro- se utiliza con frecuencia antes del anlisis de manchas
tenas han sido separadas en la direccin horizontal de protenas individuales por espectrometra de masa
con base en su pI, y en la direccin vertical con base (seccin C3).

a) b)
Gradiente de PH estable

7.0 7.0

6.0 6.0

5.0 5.0

Figura C2-4. Enfoque isoelctrico: a) antes de aplicar una corriente elctrica;


b) despus de aplicar una corriente elctrica, las protenas migran a una posicin en
la cual su carga neta es cero (pl).
70 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Enfoque isoelctrico

pH 10 pH 4
Manchas de protenas

Electroforesis
en gel SDS

Bandas de protenas

Figura C2-5. Electroforesis en gel bidimensional. Primero, la muestra de protena


se somete a un enfoque isoelctrico en una dimensin y luego a SDS-PAGE en la
segunda dimensin.

Visualizacin de protenas en geles Otra forma de visualizar la protena de inters consiste


en usar un anticuerpo contra dicha protena en un
Como la mayora de las protenas en los geles no es inmunoblot (Western blot) (consltese la seccin C4,
visible a la observacin directa para el ojo franco, se para mayores detalles). Para esta tcnica, las protenas
debi desarrollar un mtodo para poder visualizar- tienen que transferirse del gel a una hoja de nitroce-
las despus de la electroforesis. La tincin de las prote- lulosa o una membrana de nylon. Esto se consigue al
nas de uso ms corriente se hace con el colorante azul superponer el gel sobre la hoja de nitrocelulosa y man-
brillante de Coomassie. Despus de la electroforesis, el char sta con las protenas al aplicar corriente elctrica.
gel que contiene las protenas separadas se sumerge en Acto seguido, la nitrocelulosa tiene una imagen exacta
una solucin alcohlica cida del colorante. sta desna- del patrn de protenas que presentaba el gel. El exce-
turaliza las protenas, las fija en el gel de manera que no so de sitios de unin sobre la nitrocelulosa se bloquea
sea posible su lavado y permite que el colorante se les con una solucin inespecfica de protenas como la leche
una. Despus de lavar el exceso de colorante, las pro- en polvo, antes de colocar la nitrocelulosa en una solu-
tenas son visibles como discretas bandas azules (figura cin que contenga el anticuerpo que habr de reconocer
C2-3a). Puede visualizarse tan poco como 0.1 a 1.0 g a la protena de inters (el anticuerpo primario). Des-
de una protena en el gel si se usa el colorante azul bri- pus de remover el exceso de anticuerpo libre, el anti-
llante de Coomasie. Una tincin de las protenas ms cuerpo primario que se encuentra unido de manera espe-
sensible consiste en remojar el gel en una solucin de cfica a la protena de inters se detecta con un anticuerpo
sales de plata. Sin embargo, esta tcnica es ms difcil radiomarcado y fluorescente o un anticuerpo acoplado
de aplicar. Si la muestra de protenas es radiactiva, las a una enzima, que en ambos casos se denomina anti-
protenas pueden visualizarse indirectamente si al gel cuerpo secundario. Como paso final, hay que detectar
se le superpone una hoja de pelcula de rayos X. Con el anticuerpo secundario, lo que se consigue al colocar la
el tiempo (horas a semanas, de acuerdo con la radiac- nitrocelulosa contra una hoja de pelcula de rayos X
tividad de las protenas de la muestra), la radiacin (si se utiliz un anticuerpo secundario radiomarcado),
emitida oscurece la pelcula. Despus de revelar la pe- mediante un detector de fluorescencia, o al agregar a la
lcula, la autorradiografa resultante muestra reas nitrocelulosa una solucin que contenga un sustrato al
oscurecidas correspondientes a las posiciones de las que la enzima que se acopl al anticuerpo secundario
protenas radiomarcadas. convierta en un producto coloreado e insoluble.
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C3Secuenciacin de protenas
y sntesis de pptidos
Notas clave
Anlisis de la El nmero de cada tipo de aminocido en una protena puede determinarse por
composicin de hidrlisis cida y separacin de los aminocidos individuales por cromatografa
aminocidos de intercambio de iones. Los aminocidos se detectan por una reaccin colori-
mtrica con, por ejemplo, nihidrina o fluorescamina.
Degradacin de Edman El aminocido N terminal de una protena puede determinarse si la protena
se hace reaccionar con cloruro de dansilo o fluorodinitrobenceno antes de la
hidrlisis cida. La degradacin de Edman puede determinar la secuencia de
aminocidos de una protena y consiste en la remocin secuencial de un resi-
duo por vez del extremo N terminal.
Estrategia de Con el fin de secuenciar una protena completa, la cadena polipeptdica debe
secuenciacin romperse en fragmentos ms pequeos mediante el uso de sustancias qumi-
cas (p. ej., bromuro de ciangeno) o enzimas (p. ej., tripsina). Los fragmentos
ms pequeos resultantes se secuencian entonces mediante la degradacin de
Edman. La secuencia completa se ensambla por medio del anlisis de los frag-
mentos superpuestos generados por la escisin del polipptido con diferentes
reactivos.
Espectrometra de masa La espectrometra con tiempo de vuelo de la ionizacin por desorcin con lser
asistida con matriz (MALDI-TOF) se usa para determinar la masa precisa de los
pptidos. Los pptidos se inmovilizan en una matriz orgnica y entonces se
someten a un lser, el cual determina que sean eliminados bajo la forma de
un gas ionizado. Los pptidos ionizados en el gas se aceleran en un campo
elctrico y se separan. La espectrometra de masa en tndem (MS-MS) utiliza dos
espectrmetros de masa en tndem para fragmentar ms los pptidos. El mapa
peptdico resultante es diagnstico de la protena y se refiere como la huella
digital de las protenas.
Protemica La protemica es la rama de la ciencia que estudia el complemento completo
de las protenas, o proteoma, en una clula del organismo.
Tecnologa de DNA La secuencia de una protena puede determinarse si se recurre a la tecnologa
recombinante del DNA recombinante para identificar y secuenciar la parte del DNA que codi-
fica la protena. La secuencia de aminocidos de la protena puede deducirse a
partir de su secuencia de DNA usando el cdigo gentico.
Informacin derivada La secuencia de aminocidos de una protena no slo revela la estructura pri-
de la secuencia de las maria de la protena sino que tambin informa sobre las posibles familias o gru-
protenas pos de protenas y sus interrelaciones evolutivas, las potenciales duplicaciones
de genes y las posibles modificaciones postraduccin. De manera adicional, el
conocimiento de la secuencia de aminocidos puede utilizarse para producir
anticuerpos especficos.
Sntesis de pptidos En la sntesis de pptidos en fase slida, los polipptidos se sintetizan por
medios qumicos, que consisten en agregar aminocidos libres a un pptido
amarrado. Para prevenir reacciones indeseadas, el grupo amino  y los grupos
reactivos de las cadenas laterales de los aminocidos libres se protegen (blo-
quean) con recursos qumicos y luego se desprotegen (desbloquean) con los
mismos recursos cuando el aminocido se fija a la cadena polipeptdica en
desarrollo.
72 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Temas relacionados (B1) Estructura de los aminocidos (C1) Purificacin de protenas


(B2) Estructura y funcin de las (C2) Electroforesis en gel
protenas

Anlisis de la composicin se identificara como Val, pero la secuencia restante per-


de aminocidos manecera ignorada. La reaccin adicional con cloruro
de dansilo no revelara el siguiente residuo de la secuen-
Puede determinarse el nmero de cada tipo de amino-
cia ya que el pptido se degrada totalmente en el paso
cido en una muestra de protenas mediante el anlisis
de la hidrlisis cida.
de la composicin de aminocidos. La muestra de la pro-
tena purificada se hidroliza en sus aminocidos consti- Pehr Edman super este problema cuando ide un
tutivos mediante calor en 6 M de HCl a 110 C durante mtodo para marcar el residuo del N terminal y luego
24 horas, dentro de un tubo vaco y sellado. La mezcla lo escindi del resto del pptido sin afectar los enlaces
resultante (el hidrolizado) de aminocidos se somete peptdicos entre los otros aminocidos. En la degrada-
a cromatografa de intercambio de iones (seccin C1) cin llamada de Edman se remueve un residuo por vez
en una columna de poliestireno sulfatado donde se de manera secuencial desde el extremo N terminal de
separan los 20 aminocidos estndar (seccin B1). A un pptido o protena y se identifica. El grupo amino N
continuacin, los aminocidos separados se detectan y terminal sin carga de la protena se hace reaccionar con
cuantifican al hacerlos reaccionar con ninhidrina. Los fenilisotiocianato para formar un derivado feniltiocar-
aminocidos  producen un color azul, mientras que el bamoilo, el cual se libera del resto de la protena como
iminocido Pro genera un color amarillo. La cantidad de un aminocido de fenilhidantona cclico (PTH), bajo
cada aminocido en una muestra desconocida pue- condiciones cidas leves (figura C3-1). Esta reaccin de
de determinarse al comparar la absorbancia ptica con separacin ms suave deja a la parte restante del pp-
una cantidad conocida de cada uno de los aminoci- tido intacta, disponible para otra ronda de marcacin y
dos en una muestra estndar. Con la ninhidrina, puede liberacin. El aminocido PTH liberado se identifica por
detectarse tan poco como 10 nmol de cada aminocido. cromatografa lquida de alto desempeo (HPLC). Esta
Un sistema de deteccin ms sensible (detecta menos tcnica de secuenciacin ha sido automatizada y refi-
de 10 nmol de un aminocido) usa fluorescamina para nada de manera que pueden secuenciarse ms de 50
reaccionar con el grupo amino  y formar un producto residuos desde el N terminal de una protena a partir de
fluorescente. El anlisis de la composicin de aminoci- picomoles de material.
dos indica el nmero de cada residuo de aminocido en
un pptido, pero no informa nada acerca de la secuen-
cia de aminocidos. Por ejemplo, la composicin de Estrategia de secuenciacin
aminocidos del oligopptido: Una protena promedio de 50 kDa debera conte-
Val-Phe-Asp-Lys-Gly-Phe-Val-Glu-Arg ner alrededor de 500 aminocidos. Por consiguiente,
incluso con grandes cantidades de material muy purifi-
debera ser: cado, slo pude secuenciarse alrededor de una dcima
del N terminal de una protena por la degradacin de
(Arg, Asp, Glu, Gly, Lys, Phe2, Val2)
Edman. Con el propsito de secuenciar una protena
donde los parntesis y las comas entre cada aminocido ms grande, el primer paso es escindirla en fragmen-
denotan que sta es la composicin de aminocidos, no tos ms pequeos de 20 a 100 residuos, los cuales luego
la secuencia. se separan y secuencian. Una escisin especfica puede
alcanzarse por mtodos qumicos o enzimticos. Por
Degradacin de Edman
ejemplo, la sustancia qumica bromuro de ciangeno
El residuo amino terminal (N terminal) de una protena (CNBr) corta las cadenas de polipptidos en el lado del
puede identificarse si se hace reaccionar la protena con C terminal de los residuos Met, mientras que las enzi-
un compuesto que forme un enlace covalente estable mas tripsina y quimotripsina escinden en el lado del
con el grupo amino  libre, antes de su hidrlisis con 6 C terminal de los residuos bsicos (Arg, Lys) y aro-
M de NaCl. El aminocido con el N terminal marcado mticos (Phe, Trp, Tyr), respectivamente. En el caso
puede identificarse al comparar sus propiedades cro- de la digestin por la tripsina, una protena con seis
matogrficas con las de derivados de los aminocidos Lys y cinco Arg producira 12 pptidos trpticos, cada
estndar. Los reactivos usados de manera usual para el uno de los cuales terminara en una Arg o Lys, adems
anlisis del N terminal son el fluorodinitrobenceno y del pptido del C terminal. Los fragmentos peptdicos
el cloruro de dansilo. Si esta tcnica se aplicara al oligo- que se obtienen por separacin especfica qumica o
pptido del ejemplo anterior, el residuo del N terminal enzimtica se separan luego por cromatografa (p. ej.,
C3SECUENCIACIN DE PROTENAS Y SNTESIS DE PPTIDOS 73

Fenilisotiocianato R1 O R2 O R3 O
N=C=S + H2 N C C N C C N C C
H H H H H
Marcado

H S H R1 O R2 O R3 O
N C N C C N C C N C C
H H H H H

Liberacin

S R2 O R3 O
N C
H2 N C C N C C
C N H
H H H
O C
H R1
Derivado PTH

Figura C3-1. Degradacin de Edman. El aminocido N terminal es marcado con


fenilisotiocianato. Bajo hidrlisis cida dbil, este residuo es liberado como un
derivado PTH y el pptido se acorta un residuo, listo para otra ronda de marcado y
liberacin.

cromatografa por intercambio de iones; seccin C1) y a ya sea con un gel de poliacrilamida que contenga la
su vez la degradacin de Edman determina la secuencia protena o haciendo su transferencia a nitrocelulosa
de cada uno. (seccin C2).
Aunque ahora se conoce la secuencia de cada fragmento Para resumir los pasos clave en la secuenciacin qu-
peptdico, no se sabe cul es el orden de estos fragmen- mica de una protena:
tos en la cadena polipeptdica. La siguiente etapa es la
1. Purificar la protena.
de generar fragmentos superpuestos por escisin de
otra muestra de la cadena polipeptdica original con una 2. Reducir cualquier enlace disulfuro y bloquear su
sustancia qumica o enzima diferentes (p. ej., quimo- reoxidacin con yodoacetato.
tripsina), separar los fragmentos y luego secuenciarlos.
3. Escindir la protena con bromuro de ciangeno o
Estos pptidos quimotrpticos se superponen con uno
una proteasa (p. ej., tripsina).
o ms de los pptidos trpticos, lo que permite esta-
blecer el orden de los fragmentos (figura C3-2). De esta 4. Separar los fragmentos y secuenciarlos.
forma, es posible secuenciar la extensin completa de la
cadena polipeptdica. 5. Repetir los pasos 3 y 4 usando un reactivo qumico o
proteasa diferentes con el fin de producir fragmen-
Para secuenciar los polipptidos en una protena con tos superpuestos y luego revisar las superposiciones
mltiples subunidades, primero deben disociarse las entre los dos conjuntos de secuencias con el prop-
cadenas polipeptdicas, lo que se hace por destruccin sito de construir la secuencia completa.
de las interacciones no covalentes con agentes desna-
turalizantes como la urea o el clorhidrato de guani-
dina. Tambin deben romperse los enlaces disulfuro de Espectrometra de masa
la protena, lo que se logra por reduccin con 2-mer- La masa precisa de las protenas y pptidos intactos deri-
captoetanol o ditiotreitol. Para evitar la recombinacin vados de ellas puede determinarse por espectrometra
de los residuos de cistena, se aade yodoacetato para de masa. sta es una tcnica muy sensible que requiere
formar derivados estables de S-carboximetilo. Des- slo pequeas cantidades de material. El mtodo de
pus, debe separarse cada cadena polipeptdica, por espectrometra de masa que se usa ms se llama espec-
ejemplo, por cromatografa de intercambio de iones trometra con tiempo de vuelo de la ionizacin por
(seccin C1), antes de secuenciarlas. En la actualidad, desorcin con lser asistida con matriz (MALDI-TOF).
tan poco como cantidades de picomoles de protenas En este mtodo, primero los pptidos se mezclan con
pueden secuenciarse si para ello se recurre al SDS-PAGE, un cido orgnico y luego se secan en una laminilla
74 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Pptidos trpticos Pptidos quimotrpticos

Gly Phe Val Glu Arg Asp Lys Gly Phe

Val Phe Asp Lys Val Phe


Val Glu Arg

Pptidos trpticos

Val Phe Asp Lys Gly Phe Val Glu Arg

Pptidos quimotrpticos

Figura C3-2. Uso de fragmentos superpuestos para determinar la secuencia de un


pptido. Primero, la protena se somete a la digestin de la tripsina y los pptidos
que resultan se separan y secuencian. La protena se hace digerir por separado
con quimotripsina y, otra vez, los pptidos resultantes se separan y secuencian.
Es posible determinar el orden de los fragmentos peptdicos en la protena por
comparacin de las secuencias obtenidas.

de cermica o metal. Luego, la muestra es sometida a La secuenciacin de protenas por espectrometra de


un rayo lser, tras lo cual los pptidos abandonan la masa presenta numerosas ventajas sobre la secuencia-
laminilla bajo la forma de un gas ionizado, en el cual cin qumica de Edman tradicional.
cada molcula es portadora de una o ms cargas posi-
 Se requieren cantidades de material mucho menores.
tivas (figura C3-3a). Despus, los pptidos ionizados
se aceleran en un campo elctrico y vuelan hacia un  La secuencia del pptido puede obtenerse en slo
detector. El tiempo que les toma alcanzar el detector de- unos pocos minutos comparada con la hora que
pende de su masa y su carga; los pptidos ms gran- demanda tan slo realizar un ciclo de la degradacin
des se mueven con mayor lentitud y los que estn ms de Edman.
cargados lo hacen con mayor celeridad. La masa pre-
 La espectrometra de masa puede utilizarse para
cisa se determina a travs del anlisis de los pptidos
secuenciar numerosos polipptidos de una mezcla
que presentan una carga simple. Las masas del pptido
en lugar de necesitar la purificacin completa de la
resultante, o huellas dactilares, pueden utilizarse en
mezcla antes de realizar el anlisis.
la bsqueda de bases de datos de secuencias prote-
nicas para compararlas con las masas tericas calcula-  La espectrometra de masa puede usarse para deter-
das a partir de todos los pptidos divididos en teora de minar la secuencia de los pptidos que presentan
todas las protenas de un genoma secuenciado (figura los grupos N terminales bloqueados como el piro-
C3-3b). De este modo, la identidad de la protena ori- glutamato, un derivado del Glu en el que el grupo
ginal y su secuencia pueden determinarse con facilidad carboxilo de la cadena lateral forma un enlace amida
mediante una combinacin de espectrometra de masa con su grupo amino primario (una modificacin
y de bsqueda de secuencias protenicas en las bases eucariota postraduccin comn que obstaculiza la
de datos. reaccin de Edman) y para caracterizar otras modi-
ficaciones postraduccin como la glucosilacin y la
Puede usarse una variacin de este mtodo para deter-
fosforilacin.
minar de manera directa las secuencias de cada pp-
tido. Despus de la digestin por la tripsina de la pro-
tena purificada y de la determinacin de sus masas Protemica
por medio de la espectrometra de masa como se acaba El proteoma es el complemento de protenas completo
de explicar, cada pptido se fragmenta an ms en sus de una clula u organismo. La protemica representa
enlaces peptdicos y las masas de los fragmentos resul- un esfuerzo a gran escala para identificar y caracterizar
tantes se miden en un segundo espectrmetro de masa todas las protenas que codifica el genoma de un orga-
acoplado. Resulta as la denominada espectrometra nismo, incluidas las modificaciones postraduccin de
de masa en tndem (MS-MS). Las diferencias de masas stas. Cada vez con mayor frecuencia, en el campo de la
entre los fragmentos pueden usarse para construir una protemica, las protenas resueltas por electroforesis
secuencia de aminocidos parcial la cual, a su vez, en gel bidimensional (seccin C2) se someten a diges-
puede utilizarse para buscar secuencias de protenas en tin por tripsina y las masas moleculares en extremo
las bases de datos o para proporcionar los medios para exactas de los pptidos producidas por la espectrome-
la clonacin de genes. tra de masa se utilizan como huellas dactilares para
C3SECUENCIACIN DE PROTENAS Y SNTESIS DE PPTIDOS 75

identificar la protena al compararla con las que figuran incluso protenas muy grandes o protenas que resultan
en las bases de datos de los tamaos peptdicos trpticos muy difciles de purificar para ser determinadas por la
reales o predichos (figura C3-3). primera secuenciacin del tramo de DNA que las codifi-
ca y por tanto usando el cdigo gentico para descifrar
la secuencia de la protena (seccin H1). Incluso as, con
Tecnologa de DNA recombinante frecuencia se requieren algunos datos de las secuencias
Aunque la degradacin de Edman y la espectrometra de las protenas para confirmar que la secuencia obte-
de masa han servido para secuenciar numerosas pro- nida de la protena es la correcta y para identificar cual-
tenas, la determinacin de las secuencias completas de quier modificacin postraduccin en la protena. Por
las grandes protenas por estos mtodos es un proceso consiguiente, las tcnicas de secuenciacin del DNA y de
demandante y consumidor de tiempo. La tecnologa del las protenas se usan juntas con mucha frecuencia para
DNA recombinante (seccin I1) ha permitido secuenciar determinar la secuencia completa de una protena.

Lser

a)

+ + +
Deteccin en un
2 analizador de masa
Laminilla
de metal

Muestra

b)
N C
Protena digerida con tripsina.
Las masas de los pptidos
resultantes se miden con la
espectrometra de masa MALDI-TOF
Abundancia

0 1500
m/z (cociente masa/carga)

Secuencia de la protena buscada


en las bases de datos

Figura C3-3. Espectrometra de masa para determinar la secuencia de una protena.


a) En un espectrmetro de masa MALDI-TOF, los pulsos de luz de un lser ionizan una
mezcla de pptidos que se absorbe en una laminilla de metal . Un campo elctrico
acelera las molculas de la muestra hacia el detector . El tiempo que tardan en
llegar al detector es inversamente proporcional a la masa de la protena. b) Uso de
la espectrometra de masa para identicar protenas. Se utiliza la tripsina para que
digiera la protena de inters y los fragmentos peptdicos resultantes se cargan en
el espectrmetro de masa, donde se miden sus masas. A continuacin se buscan las
bases de datos de secuencias para identicar la protena, cuyo perl trptico digerido
se calcula y compara con los datos determinados de manera experimental.
76 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

Informacin derivada de las 6. Los datos de la secuencia de aminocidos pueden


secuencias de las protenas emplearse para disear sondas de DNA que son espe-
cficas para la codificacin gentica de la protena
La secuencia de aminocidos puede proveer informa- (secciones I3 e I4).
cin acerca de la estructura primaria de las protenas
y ms.
1. La secuencia de inters puede compararse con otras Sntesis de pptidos
secuencias conocidas para ver sus similitudes. Por Los polipptidos pueden sintetizarse por medios qu-
ejemplo, las secuencias de la hemoglobina y la mio- micos al crear enlaces covalentes entre los aminoci-
globina indican que pertenecen al grupo o familia de dos y el extremo de una cadena polipeptdica en cre-
las protenas globina (seccin B3). cimiento. En la sntesis de pptidos en fase slida,
la cadena polipeptdica en crecimiento se fija de forma
2. La comparacin de las secuencias de la misma pro-
covalente desde su C terminal a un soporte insoluble co-
tena de diferentes especies puede proporcionar in-
mo las cuentas de poliestireno. El siguiente aminocido
formacin acerca de sus interrelaciones evolutivas.
de la secuencia debe reaccionar con el grupo amino del
3. La presencia de segmentos de secuencia repetidos pptido fijo, pero debe contar con un grupo amino libre
de la misma protena en diferentes especies indicara que tambin puede reaccionar. Para resolver este pro-
que la protena pudo haberse originado por duplica- blema, el aminocido libre debe tener su grupo amino
cin de genes (p. ej., en las molculas de anticuerpos;  qumicamente protegido (bloqueado) de manera que
seccin B6). no reaccione con otras molculas. Cuando el nuevo
aminocido se acopla, su grupo amino , ahora N ter-
4. Dentro de la secuencia de aminocidos puede haber
minal, se libera (desbloquea) para que sea posible el
secuencias especficas que actan como seales para
siguiente enlace peptdico. En consecuencia, cada ciclo
el procesamiento postraduccin de la protena (por
de adicin de un nuevo aminocido requiere un paso de
el ejemplo, los procesos de glucosilacin o proteol-
acoplamiento y un paso de desacoplamiento. De ma-
tico; seccin H5).
nera adicional, los grupos reactivos de las cadenas late-
5. Los datos de la secuencia de aminocidos puede uti- rales deben bloquearse para evitar que se produzcan
lizarse para preparar anticuerpos especficos para la reacciones indeseables.
protena de inters que pueden usarse para estudiar
su estructura y funcin (seccin C4).
SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

C4Inmunodeteccin
Notas clave
Mtodos de A raz de la alta especificidad de una anticuerpo por su eptopo, un anticuerpo
inmunodeteccin generado contra un antgeno protenico particular puede emplearse para deter-
minar la localizacin de tal antgeno en una clula (inmunocitoqumica) para
detectar y cuantificar el antgeno en una mezcla compleja (ELISA) o para detectar
protenas despus de un SDS-PAGE (Western blotting).
Inmunocitoqumica El anticuerpo contra el antgeno de inters se marca con fluorescencia para
permitir la localizacin del antgeno en una clula a visualizar por inmunofluo-
rescencia o microscopia inmunoelectrnica.
ELISA Puede emplearse un sndwich ELISA para detectar y cuantificar la cantidad de
un antgeno protenico especfico en una muestra. El anticuerpo se une a un
polmero de soporte inerte y luego se expone a la muestra. La protena libre
se lava y se aade un segundo anticuerpo que reacciona con el antgeno en
un eptopo distinto. Este segundo anticuerpo se marca con un colorante fluo-
rescente o lleva unida una enzima que convierte un sustrato incoloro en un
producto con color. La cantidad unida del segundo anticuerpo y por tanto la
cantidad del antgeno protenico presente en la muestra original, se determina
por cuantificacin de la intensidad del color o de la fluorescencia que se pro-
duce. Puede emplearse una prueba de ELISA indirecta, en la cual el antgeno
se une a un polmero inerte, para detectar la presencia en una muestra de un
anticuerpo contra el antgeno.
Inmuno (Western) Las muestras de protenas se separan por SDS-PAGE y las protenas resultantes
blotting se transfieren a una hoja de nitrocelulosa o nylon. stas se incuban con anti-
cuerpo especfico contra una protena y el anticuerpo sobrante se lava. En el
gel que une el anticuerpo, estas protenas se detectan por autorradiografa (si
el anticuerpo especfico fue radiomarcado) o mediante un segundo anticuerpo
marcado que se une al anticuerpo primario.
Temas relacionados ((A4) Imgenes celulares (C2) Electroforesis en gel
(C1) Purificacin de protenas (B6) Anticuerpos

Mtodos de inmunodeteccin Inmunocitoqumica


La disponibilidad de un anticuerpo (inmunoglobulina) En la inmunocitoqumica, una marca fluorescente (p.
contra un antgeno especfico (seccin B6) ofrece la ej., fluorescena, la cual emite luz verde) se acopla a un
oportunidad de utilizar dicho anticuerpo en un amplio anticuerpo, el que a continuacin se aade a una clula
espectro de mtodos de deteccin inmunolgica. El fija. Entonces puede visualizarse la unin del anticuerpo
sitio del antgeno que un anticuerpo reconoce se deno- a su antgeno al detectar su fluorescencia por microsco-
mina determinante antignico o eptopo. Tanto los pia de luz inmunofluorescente (para mayores detalles,
anticuerpos monoclonales como los policlonales (sec- consltese la seccin A4). Incluso puede alcanzarse un
cin B6) pueden usarse para inmunodeteccin del ant- grado de resolucin mayor si se recurre a anticuerpos a
geno deseado. La alta especificidad de un anticuerpo los que se hayan acoplado partculas electrnicas den-
por su eptopo permite usarlo como un reactivo para sas, como el oro coloidal, que luego pueden visualizarse
determinar la localizacin del antgeno en una clula con la ayuda de la microscopia electrnica (seccin A4).
(inmunocitoqumica), para detectar y cuantificar un En efecto, la microscopia inmunoelectrnica puede
antgeno en una mezcla compleja (ELISA) y para detec- mapear la posicin de los antgenos protenicos dentro
tar protenas tras su separacin por SDS-PAGE (Western de las clulas y dentro de complejos de macromolculas
blotting). como los ribosomas.
78 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

ELISA que reconoce la protena pero en un eptopo diferente


al del primer anticuerpo (figura C4-1). El segundo anti-
Los anticuerpos especficos pueden usarse para detec-
cuerpo se fija a un grupo fluorescente o una enzima que
tar y cuantificar la cantidad de antgeno correspon-
puede catalizar la conversin de un sustrato incoloro en
diente en una muestra biolgica. Existen varios tipos de
uno coloreado. La intensidad del color o la fluorescen-
ensayos inmunolgicos. Una versin popular la repre-
cia producidas por cada muestra se mide para determi-
senta el inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA), el cual
nar la cantidad de antgeno presente en cada muestra.
puede detectar y cuantificar con facilidad menos de un
Existen numerosas mquinas disponibles para explorar
nanogramo de una protena antignica especfica. El
las cavidades de la placa de microtitulacin despus de
sndwich ELISA permite la deteccin y cuantificacin del
una ELISA, donde miden la absorbancia o fluorescencia
antgeno. Este mtodo emplea una bandeja de plsti-
y cuantifican la cantidad de antgeno unido en cada
co que tiene cavidades moldeadas (bandeja de micro-
cavidad.
titulacin) donde el anticuerpo ha sido acoplado al
plstico que forma las cavidades (figura C4-1). Las mues- Un formato alternativo, la ELISA indirecta, puede em-
tras que contienen al antgeno a ensayar se agregan a plearse para detectar la presencia de anticuerpo con-
las pequeas cavidades. Si el antgeno est presente y el tra un antgeno particular en una muestra biolgica. El
anticuerpo lo reconoce, se le une (figura C4-1). A conti- antgeno por s mismo est unido en las cavidades de la
nuacin, las cavidades se lavan para eliminar las prote- bandeja de microtitulacin, a las cuales se aade la mez-
nas libres y luego se incuban con un segundo anticuerpo cla que contiene el anticuerpo que reconoce al antgeno.

Primer anticuerpo jo
a un soporte slido

Agregado de la muestra
que contiene antgeno
Incubacin
Lavado para eliminar las
molculas que no se unieron

Aadidura del
segundo anticuerpo
con la enzima unida

Sustrato
Lavado para remover incoloro
el segundo anticuerpo Producto
que no se uni. coloreado
Incubacin con el
sustrato de la enzima

Figura C4-1. Prueba ELISA realizada con un segundo anticuerpo, al que se le


uni (conjug) una enzima que convierte los sustratos incoloros en productos
coloreados.
C4INMUNODETECCIN 79

La presencia del anticuerpo de unin puede detectar- protenas de la muestra deben transferirse a un medio
se si se aade un anticuerpo fluorescente secundario ms accesible.
que en este caso reconozca al primer anticuerpo (vase
Este proceso se llama blotting (manchar). El gel se
ms adelante). Esta tcnica es la base de la prueba para
coloca cerca de una hoja de nitrocelulosa o nylon y
detectar la infeccin por el virus de inmunodeficiencia
luego se le aplica un campo elctrico de modo que las
humana (VIH), en la que una protena viral es inmovi-
protenas migren desde el gel a la hoja, donde quedan
lizada y puede medirse la presencia de un anticuerpo
unidas. La hoja de nitrocelulosa se incuba con una
contra sta en una muestra de sangre.
protena como la albmina srica bovina para que se
una a sitios de unin de protenas inespecficos, para
Inmuno (Western) blotting de esa manera evitar uniones espurias de molculas de
anticuerpos en etapas subsecuentes. Se dice que este
Esta tcnica puede utilizarse para la deteccin de una o paso consiste en bloquear sitios de unin inespec-
ms protenas en una mezcla. La muestra se somete a ficos. A continuacin, la hoja de nitrocelulosa se hace
electroforesis en un SDS-gel de poliacrilamida (SDS-PAGE; reaccionar con anticuerpos marcados, los anticuerpos
seccin C2) que separa las protenas con base en su que no reaccionan se eliminan por lavado y las bandas
tamao, de lo cual resulta una serie de bandas de prote- protenicas que se unieron al anticuerpo se vuelven
nas debajo del gel (figura C4-2). Debido a que la matriz visibles y pueden identificarse (figura C4-2). El mtodo
de gel no permite que protenas grandes como los anti- para visualizarlas depende del mtodo que se utiliz
cuerpos ingresen con facilidad, como paso previo las para marcar el anticuerpo. Si la marcacin consisti en

Cavidades para la muestra


a)

Gel de SDS-pliacrilamida
Direccin
de la
electroforesis
Bandas de los polipptidos
separados

Transferencia (blot) de las


b)
protenas a la hoja del
polmero

Incubacin con anticuerpo


c) radiomarcado. Lavado para
remover el anticuerpo que
no se uni. Realizar la
autorradiografa
Bandas de polipptidos que
] se unen al anticuerpo
especco

Figura C4-2. Inmuno (Western) blotting con un anticuerpo radiomarcado: a)


electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida, de la que resultan
polipptidos separados en bandas discretas; b) membrana de nitrocelulosa o nylon,
sobre la que se gracaron las bandas de las protenas (es decir, un Western blot);
c) autorradiografa despus de incubar el Western blot con anticuerpo
radiomarcado, de lavar el anticuerpo que no se uni y de colocar la membrana
contra una pelcula de rayos X.
80 SECCIN C ESTUDIO DE LAS PROTENAS

la incorporacin de una marca radiactiva (p. ej., 125I), anticuerpo anticonejo de cabra). El segundo anticuerpo
se lleva a cabo una autorradiografa para detectar las podra ser radiomarcado y su unin detectarse por
bandas de protenas radiactivas (figura C4-2). En forma autorradiografa o se le podra conjugar una enzima que
alternativa, el anticuerpo puede detectarse incubando origine un producto coloreado como en la prueba ELISA
la hoja con un segundo anticuerpo que reconoce al pri- (figura C4-1). Se usa una tcnica similar para manchar
mer anticuerpo (p. ej., si el primer anticuerpo se des- el DNA (Southern blotting; seccin I3) o el RNA (Northern
arroll en conejos, el segundo anticuerpo podra ser un blotting; seccin I3).
SECCIN D ENZIMAS

D1Introduccin
Notas clave
Las enzimas como Las enzimas son catalizadores que cambian la velocidad de reaccin sin que
catalizadores cambien ellas mismas. Presentan una especificidad muy alta y su actividad
puede ser regulada. Virtualmente, todas las enzimas son protenas, aunque se
han identificado algunos RNA con actividad cataltica.
Sitio activo El sitio activo es la regin de la enzima que se une al sustrato para formar un
complejo enzima-sustrato y transformarlo en un producto. El sitio activo es
una entidad tridimensional, que suele ser una hendidura o grieta en la super-
ficie de la protena, en el cual el sustrato se une por mltiples interacciones
dbiles. Se han propuesto dos modelos para explicar de qu forma las enzimas
se unen a sus sustratos: el modelo de llave y cerradura y el modelo de ajuste
inducido.
Especicidad por el La especificidad de una enzima por el sustrato la determinan las propiedades
sustrato y ordenamiento espacial de los residuos de aminocidos del sitio activo.
Clasicacin de las Las enzimas se clasifican en seis grupos principales con base en el tipo de reac-
enzimas cin que catalizan. Cada enzima tiene un nmero de clasificacin exclusivo.
Ensayos enzimticos Un ensayo enzimtico mide la conversin de un sustrato en un producto, bajo
condiciones de cofactores, pH y temperatura a las cuales las enzimas alcanzan
su actividad ptima. Se usan concentraciones altas de sustratos, de manera
que la velocidad de reaccin inicial sea proporcional a la concentracin de la
enzima. Se mide ya sea la velocidad de aparicin del producto o la velocidad
de desaparicin del sustrato y para ello suele recurrirse al cambio en la absor-
bancia que detecta un espectrofotmetro.
Ensayos de enzimas Si el sustrato o el producto de una reaccin catalizada por una enzima son
ligadas incapaces de absorber la luz a una determinada longitud de onda, puede ensa-
yarse la enzima y para ello se la liga a otra reaccin catalizada por una enzima
que no incluye un cambio en la absorbancia. La segunda enzima debe estar
en exceso, de manera que el paso limitante de la velocidad en el ensayo ligado
es la accin de la primera enzima.
Coenzimas y grupos Algunas enzimas requieren la presencia de cofactores, que son unidades no
prostticos protenicas pequeas, para funcionar. Los cofactores pueden ser iones inorg-
nicos o molculas orgnicas complejas llamadas coenzimas. Un cofactor que
est unido en forma covalente a la enzima se denomina grupo prosttico. Una
holoenzima es la forma catalticamente activa de la enzima con su cofactor,
mientras que una apoenzima es la parte protenica sola. Muchas coenzimas
derivan de precursores de las vitaminas dietticas y sus deficiencias propician
ciertas enfermedades.
Isozimas Las isozimas son formas diferentes de una enzima que catalizan la misma
reaccin pero que exhiben diferentes propiedades fsicas o cinticas. Las iso-
zimas de la deshidrogenasa de lactato (LDH) pueden separarse por medio de
la electroforesis y usarse en el contexto clnico para diagnosticar una infarto
del miocardio.
Temas relacionados (A4) Imgenes celulares (D3) Cintica de las enzimas
(B2) Estructura y funcin de las (D4) Inhibicin enzimtica
protenas (D5) Regulacin de la actividad
(D2) Termodinmica enzimtica
82 SECCIN D ENZIMAS

Las enzimas como catalizadores En el modelo de cerradura y llave propuesto por Emil
Las enzimas son catalizadores que incrementan la Fischer en 1894, se pensaba que la forma del sustrato y
velocidad de una reaccin qumica sin que ellas mis- del sitio activo de la enzima encajaban como una llave
mas cambien en el proceso. En ausencia de una enzima, en su cerradura (figura D1-1a). Se consideraba que las
la reaccin casi no puede acontecer, en tanto que en dos formas eran rgidas y fijas y que se complementa-
su presencia la velocidad puede incrementarse hasta ban de forma perfecta una con la otra cuando se reunan
1017 veces. Por lo regular, las reacciones catalizadas por en la alineacin correcta (tambin referida como com-
enzimas tienen lugar bajo condiciones relativamente plementariedad geomtrica). En el modelo de ajuste
leves (temperaturas muy por debajo de 100 C, a la pre- inducido propuesto por Daniel E. Koshland Jr. en 1958,
sin atmosfrica y pH neutral) si se las compara con la unin del sustrato induce un cambio conformacional
las reacciones qumicas correspondientes. Las enzimas en el sitio activo de la enzima (figura D1-1b). De manera
presentan tambin una especificidad muy alta por los adicional, la enzima puede distorsionar el sustrato y for-
sustratos sobre los que actan y los productos que for- zarlo a que adquiera una conformacin similar a la del
man. Adems, la actividad enzimtica puede regularse, estado de transicin (seccin D2). Por ejemplo, la unin
y vara en respuesta a la concentracin de sustratos u de glucosa a la hexocinasa induce un cambio confor-
otras molculas (seccin D5). Casi todas las enzimas macional en la estructura de la enzima en la que el sitio
son protenas, aunque se han identificado unas pocas activo asume una forma que se complementa con la
molculas de RNA (ribozimas) con actividad cataltica. del sustrato (glucosa) slo despus de que ste se une a
la enzima. Lo real es que diferentes enzimas muestran
caractersticas de ambos modelos, con alguna comple-
Sitio activo mentariedad y algn cambio conformacional.
El sitio activo de una enzima es la regin que une el
sustrato y lo convierte en producto. Suele ser una parte
relativamente pequea de la molcula completa de la Especicidad del sustrato
enzima y es una entidad tridimensional formada por Las propiedades y el ordenamiento espacial de los resi-
residuos de aminocidos que pueden yacer alejados duos de los aminocidos que forman el sitio activo de
de la cadena polipeptdica lineal (seccin B2). Por lo una enzima determinan qu molculas pueden unirse y
general, el sitio activo es una hendidura o grieta de la ser sustratos de la enzima. Por lo regular, son los cam-
superficie enzimtica que forma un ambiente predo- bios en relativamente unos pocos aminocidos en el
minantemente apolar, que mejora la unin del sus- sitio activo los que determinan la especificidad por
trato. El sustrato se une al sitio activo por mltiples el sustrato. Lo anterior se ve con toda claridad en las
fuerzas dbiles (interacciones electrostticas, enlaces tres enzimas digestivas tripsina, quimotripsina y elas-
de hidrgeno, fuerzas de van der Waals, interacciones tasa (seccin D5). Estas tres enzimas pertenecen a una
hidrfobas; vase la seccin B2) y en algunos casos por familia de enzimas denominada proteasas de serina
enlaces covalentes reversibles. Una vez que la molcula serina porque tienen un residuo serina en el sitio
de sustrato est unida y se form un complejo enzima- activo que desempea un papel crtico en la catlisis y
sustrato, los residuos con actividad cataltica del sitio ac- proteasas porque catalizan la hidrlisis de los enlaces
tivo de la enzima actan sobre la molcula de sustrato peptdicos de las protenas. Las tres enzimas dividen
para transformarla, primero, en el complejo del esta- enlaces peptdicos en sustratos protenicos en el lado
do de transicin (seccin D2) y luego en el producto, el del carboxilo de ciertos residuos de aminocidos.
cual se libera a la solucin. Acto seguido, la enzima est
La tripsina divide en el lado del carboxilo de residuos
lista para volverse a unir a otra molcula de sustrato y
de Lys o Arg con carga positiva, la quimotripsina divide
comenzar su ciclo cataltico otra vez.
en el lado del carboxilo de residuos de aminocidos aro-
De manera original, se propusieron dos modelos para mticos e hidrfobos voluminosos y la elastasa divide
explicar de qu manera la enzima se une a su sustrato. en el lado del carboxilo de residuos de aminocidos con

a) b)

+ +
Enzima Sustrato Complejo enzima- Enzima Sustrato Complejo enzima-
sustrato sustrato

Figura D1-1. Unin de un sustrato a una enzima: a) modelo de llave y cerradura;


b) modelo de ajuste inducido.
D1INTRODUCCIN 83

cadenas laterales pequeas y sin carga. La naturaleza de y la quimotripsina tienen nombres que no denotan su
los distintos grupos de aminocidos en el sitio de unin sustrato. Algunas enzimas tiene varios nombres alterna-
del sustrato determina sus diferentes especificidades, tivos. Para racionalizar los nombres de las enzimas, se
sitios que son complementarios de los del sustrato sobre acord un sistema internacional de nomenclatura de
el que actan. En consecuencia, la tripsina presenta un enzimas. Este sistema coloca a las enzimas en una
residuo Asp con carga negativa en su sitio de unin del de seis clases principales basadas en el tipo de reaccin
sustrato que interacta con la carga positiva de las cade- que catalizan (cuadro D1-1). De este modo, cada enzima
nas laterales de la Lys y la Arg del sustrato (figura D1-2a). se identifica de manera exclusiva con un nmero de
En su sitio de unin del sustrato, la quimotripsina tiene clasificacin de cuatro partes. As, la tripsina tiene el
residuos de aminocidos con cadenas laterales peque- nmero de la Comisin de Enzimas (EC) 3.4.21.4, en
as como la Gly y la Ser que le dan acceso a la cadena el que el primer nmero (3) significa que es una hidro-
lateral voluminosa del sustrato (figura D1-2b). En con- lasa, el segundo nmero (4) denota que es una protea-
traste, la elastasa tiene las cadenas laterales sin carga sa que hidroliza enlaces peptdicos, el tercer nmero
relativamente grandes de dos residuos de los aminoci- (21), que es una proteasa de serina con un residuo de
dos Val que sobresalen en el sitio de unin del sustrato serina crtico en el sitio activo y el cuarto nmero (4)
y que evitan el acceso de todas las cadenas laterales indica que fue la cuarta enzima asignada a esta clase.
pequeas de la Gly y la Ala (figura D1-2c). En comparacin, la quimotripsina tiene el nmero EC
3.4.21.1, y la elastasa el 3.4.21.36.
Clasicacin de las enzimas
Muchas enzimas se nombran aadiendo el sufijo -asa Ensayos enzimticos
al nombre de su sustrato. Por consiguiente, ureasa es La cantidad de protena enzimtica presente puede
el nombre de la enzima que cataliza la hidrlisis de la determinarse (ensayarse) en trminos del efecto cata-
urea y la fructosa-1,6-bisfosfatasa hidroliza la fructosa- ltico que produce, es decir, la conversin de sustrato
1,6-bisfosfato. Pese a ello, otras enzimas como la tripsina en producto. Con el fin de ensayar (determinar la acti-

Cuadro D1-1. Clasicacin internacional de las enzimas


Clase Nombre Tipo de reaccin catalizada Ejemplo
1 Oxidorreductasas Transferencia de electrones A +BA+B

Deshidrogenasa
alcohlica
2 Transferasas Transferencia de grupos AB + C A + BC Hexocinasa
funcionales
3 Hidrolasas Reacciones de hidrlisis AB + H2O AH + Tripsina
BOH
4 Liasas Adicin o remocin de un AB A=B + XY Descarboxilasa
grupo para formar un enlace de piruvato
doble X Y
5 Isomerasas Transferencia de grupos AB AB Isomerasa de
dentro de la misma molcula malato
X Y Y X
6 Ligasas Formacin de enlaces A + B AB Carboxilasa de
(o sintasas) acoplada a la hidrlisis de piruvato
ATP
ATP, trifosfato de adenosina.

a) b) c)

O O Val Val
C Sitio de unin
del sustrato
Asp

Figura D1-2. Representacin esquemtica de los sitios de unin de sustrato en las


proteasas de serina: a) tripsina; b) quimotripsina; c) elastasa.
84 SECCIN D ENZIMAS

vidad) una enzima, debe conocerse la ecuacin total de si se sigue el incremento de la absorbancia a 340 nm, de
la reaccin catalizada y debe estar disponible un pro- acuerdo con la siguiente ecuacin:
cedimiento analtico para determinar la desaparicin
del sustrato o la aparicin del producto. Adems, se de- CH3CH(OH)COO + NAD+ CH3COCOO + NADH + H+
be tomar en cuenta si la enzima requiere cualquier
lactato piruvato
cofactor y el pH y la temperatura a los cuales la enzima
alcanza su actividad ptima (seccin D3). En las enzimas
de los mamferos, la temperatura suele situarse den-
Ensayos de enzimas ligadas
tro del rango de 25 a 37 C. Para finalizar, es esencial que Numerosas reacciones no incluyen sustratos o produc-
la velocidad de la reaccin que se ensaye sea una medida tos que absorben la luz a una longitud de onda adecuada.
de la actividad enzimtica presente y que un insuficiente En estos casos, es con frecuencia posible ensayar la
aporte de sustrato no la limite. Por tanto, suelen reque- enzima que cataliza dicha reaccin si se la liga (o acopla)
rirse muy altas concentraciones de sustrato, de manera a una segunda reaccin enzimtica que no incluye un
que la velocidad de la reaccin inicial, la cual se deter- cambio de la absorbancia caracterstico. Por ejemplo, la
mina por medios experimentales, sea proporcional a la accin de la enzima oxidasa de glucosa, la cual se utili-
concentracin de la enzima (seccin D3). za con frecuencia para medir la concentracin de glucosa
en la sangre de los pacientes diabticos, no resulta en un
Se logra un ensayo ms conveniente de una enzima si se cambio de la absorbancia despus de la conversin de
mide la velocidad de aparicin del producto o la velo- los sustratos en productos (figura D1-3). Sin embargo, el
cidad de desaparicin del sustrato. Si el sustrato (o perxido de hidrgeno que se produce en esa reaccin
producto) absorbe luz a una determinada longitud de puede ser activado por una segunda enzima, la peroxi-
onda, pueden medirse los cambios en la concentracin dasa, la cual convierte de manera simultnea un com-
de tales molculas si se siguen los cambios en la absor- puesto incoloro en uno coloreado (cromgeno), cuya
bancia de esta longitud de onda mediante un espectro- absorbancia puede medirse con facilidad (figura D1-3).
fotmetro. Si el sustrato (o producto) fluoresce (seccin
A4), los cambios en la concentracin pueden medirse si Si la actividad de la primera enzima (oxidasa de glucosa)
se siguen los cambios en la fluorescencia con la ayuda se pretende medir con exactitud, la segunda enzima
de un fluormetro. Como la absorbancia (o fluorescen- (peroxidasa) y sus cosustratos o coenzimas (abajo) de-
cia) es proporcional a la concentracin, la tasa de cam- ben estar en exceso para no convertirse en el paso que
bio en la absorbancia (o fluorescencia) es proporcional limite la velocidad del ensayo ligado. Ello asegura que la
a la tasa de actividad de la enzima en moles de sustrato tasa de produccin del cromgeno coloreado es propor-
usados (o producto formado) por unidad de tiempo. cional a la tasa de produccin de H2O2, cuya produccin
a su vez es proporcional a la actividad de la oxidasa de
Dos molculas usuales usadas en la medicin de la glucosa.
absorbancia en los ensayos enzimticos son las coenzi-
mas dinucletido de adenina y nicotinamida reducido
(NADH) y dinucletido de adenina y nicotinamida redu- Coenzimas y grupos prostticos
cido fosfato (NADPH) (abajo), las cuales se absorben en Muchas enzimas requieren la presencia de pequeas
la regin ultravioleta (UV) a 340 nm. Por consiguiente, si unidades no protenicas o cofactores para llevar a
durante el transcurso de la reaccin se producen NADHo cabo su reaccin particular. Los cofactores pueden ser
NADPH, habr un incremento relativo de la absorbancia a uno o ms iones inorgnicos, como el Zn2+ o el Fe2+,
340 nm, mientras que si la reaccin incluye la oxidacin o una molcula orgnica compleja llamada coenzima.
de NADH o NADPH a NAD+ o NADP+, respectivamente, habr Un metal o coenzima que se mantenga unido en forma
una disminucin correspondiente de la absorbancia, ya covalente a la enzima se denomina grupo prosttico
que estas formas oxidadas no absorben a 340 nm. Un (consultar el hemo de la hemoglobina; vase seccin B3).
ejemplo lo representa la deshidrogenasa de lactato, cuya Una enzima activa y completa desde el punto de vista
actividad con el lactato como sustrato puede ensayarse cataltico junto a su coenzima o ion metlico se llama

Glucosa + O2 + H2O

Oxidasa de glucosa

cido glucnico + H2O2


Compuesto incoloro
Peroxidasa
Compuesto coloreado oxidado
H2 O

Figura D1-3. Un ensayo de enzima ligada con la oxidasa de glucosa y la peroxidasa


puede usarse para medir la cantidad de glucosa de una muestra de sangre.
D1INTRODUCCIN 85

holoenzima. La parte protenica sola de la enzima sin La NADP+ difiere de la NAD+ en que tiene un grupo fosfato
su cofactor se denomina apoenzima. Algunas coenzi- adicional fijo a una de las ribosas (figura D1-4). Estas
mas, como el NAD+, estn unidas y se liberan de la enzima dos coenzimas comparten una funcin comn ya que
durante su ciclo cataltico y en efecto funcionan como ambas actan como transportadoras de electrones y
cosustratos. Muchas coenzimas derivan de precursores participan en las reacciones de oxidorreduccin. La NAD+
de las vitaminas (cuadro D1-2), los cuales suelen ser es de empleo ms comn en las reacciones catablicas
constituyentes esenciales de la dieta del organismo y en (degradativas), mientras que la NADP+ interviene ms en
consecuencia dan origen a enfermedades por deficien- las reacciones anablicas (biosintticas). La parte reac-
cia cuando se produce un aporte inadecuado. tiva de ambas molculas es el anillo de nicotinamida,
el cual existe en un estado oxidado o reducido y debido
Las coenzimas dinucletido de adenina y nicotina- a ello acta como aceptor o donador de electrones en
mida (NAD+) y dinucletido de adenina y nicotinamida una reaccin enzimtica. La reaccin tambin incluye la
fosfato (NADP+) se basan en una estructura comn que transferencia de protones, de acuerdo con la ecuacin:
consiste en la base adenina, dos ribosas ligadas por gru-
pos fosfato y un anillo de nicotinamida (figura D1-4). NAD+ + H+ + 2e NADH

Cuadro D1- 2. Algunas coenzimas comunes, sus vitaminas precursoras y las


enfermedades que produce su deciencia
Coenzima Precursor Enfermedad que provoca su
deficiencia
Coenzima A cido pantotnico Hipertensin
FAD, FMN Riboflavina (vitamina B2) Dermatitis
+ +
NAD , NADP Niacina (cido nicotnico) Pelagra (dermatitis, depresin, diarrea)
Pirofosfato de tiamina Tiamina (vitamina B1) Beriberi (prdida de peso, trastornos
cardiacos, disfuncin neurolgica)
Tetrahidrofolato cido flico Anemia, defectos del tubo neural en
desarrollo
Desoxiadenosilcobalamina Cobalamina (vitamina B12) Anemia perniciosa
Vitamina C (cido ascrbico) Escorbuto (encas tumefactas y
sangrantes, hemorragias subdrmicas)
Fosfato de piridoxal Piridoxina (vitamina B6) Depresin, confusin, convulsiones
FAD,dinucletido de adenina y flavina; FMN, mononucletido de flavina; NAD+, dinucletido de adenina y nicotina-
mida; NADP+, dinucletido de adenina y nicotinamida fosfato.

Figura D1-4. Estructuras de las coenzimas NAD+ y NADP+.


86 SECCIN D ENZIMAS

El dinucletido de adenina y flavina (FAD) y el mononu- pequeas diferencias en la secuencia de aminocidos.


cletido de flavina (FMN) son asimismo transportadores Las dos subunidades pueden combinarse al azar entre
de electrones y presentan estructuras qumicas relacio- ellas y formar cinco isozimas que tienen las composi-
nadas (figura D1-5). Ambas coenzimas constan de una ciones H4, H3M, H2M2, HM3 y M4. Las cinco isozimas se pue-
unidad de mononucletido de flavina, que es la que den resolver por medio de la electroforesis (seccin
contiene el sitio activo. La FAD tiene un azcar adicional C2). Las subunidades M predominan en el msculo
y una base adenina, que completan su estructura. La FAD y esqueltico y el hgado, en tanto que las subunida-
la FMN reaccionan con dos protones, as como con dos des H predominan en el corazn. Las subunidades H4
electrones, en alternancia entre el estado reducido y el y H3M son predominantes en el corazn y los glbulos
oxidado: rojos, H2M2 se encuentra sobre todo en el cerebro, mien-
tras que HM3 y M4 son ms frecuentes en el hgado y el
FAD + 2H+ + 2e FADH2 msculo esqueltico. Lo anterior deja ver que el patrn
de isozimas es caracterstico de un tejido en particu-
Isozimas lar, un factor de una inmensa importancia diagnstica
para la medicina. El infarto del miocardio, la hepatitis
Las isozimas (isoenzimas) son formas diferentes de una
infecciosa y las enfermedades musculares incluyen
enzima que catalizan la misma reaccin, pero que exhi-
la muerte celular en el tejido afectado, con liberacin
ben diferentes propiedades fsicas o cinticas, como el
del contenido celular a la sangre. Como la LDH es una
punto isoelctrico, el pH ptimo, la afinidad por el sus-
protena citoslica soluble, se libera con facilidad en
trato o el efecto de los inhibidores. Diferentes formas
las afecciones anteriores. En circunstancias normales,
de isozimas de una determinada enzima derivan por lo
hay poca LDH en sangre. Por tanto, el patrn de isozimas
general de genes distintos y suelen encontrarse en dife-
LDH en la sangre es indicativo del tejido que las liber y
rentes tejidos del cuerpo.
de esta manera puede utilizarse para diagnosticar una
Un ejemplo de una enzima que presenta diferentes afeccin y para vigilar el progreso del tratamiento. Para
formas de isozimas es la deshidrogenasa de lactato el diagnstico clnico del infarto del miocardio, adems
(LDH), que cataliza la conversin reversible de lactato en del patrn de isozimas LDH, se miden de rutina otras en-
piruvato en presencia de la coenzima NADPH (vase zimas, como la cinasa de creatina y la aminotrans-
antes). La LDH es un tetrmero de dos tipos distintos ferasa de aspartato, junto con un electrocardiograma
de subunidades, llamadas H y M, las cuales exhiben (ECG).

Figura D1-5. Estructuras de las coenzimas FAD y FMN.


SECCIN D ENZIMAS

D2Termodinmica
Notas clave
Termodinmica El conocimiento de la termodinmica, que describe la interrelacin entre las
diversas formas de energa y de qu manera sta afecta la materia, permite
determinar si un proceso fsico es posible. La primera y segunda leyes de la
termodinmica estn combinadas en la funcin de la termodinmica, la ener-
ga libre (G). La unidad de energa es el Julio (J) o la calora (cal).
Energa de activacin y Para que una reaccin qumica tenga lugar, debe superarse la barrera de ener-
estado de transicin ga necesaria para transformar las molculas del sustrato a su estado de transi-
cin. El estado de transicin tiene la energa libre ms alta de una reaccin. La
diferencia en energa libre entre el sustrato y el estado de transicin se llama
energa libre de activacin de Gibbs ( G). Una enzima estabiliza el estado de
transicin y reduce la ( G) y de ese modo incrementa la velocidad a la que
sucede la reaccin.
Cambio de energa libre La diferencia en el nivel de energa entre los sustratos y los productos se deno-
mina cambio en la energa libre de Gibbs ( G). Una G negativa indica que la
reaccin es favorable desde la perspectiva termodinmica de la direccin ms
conveniente de la misma, mientras que una G positiva indica que la reaccin
es desfavorable desde la perspectiva termodinmica y requiere un aporte de
energa para que evolucione en la direccin conveniente. Una reaccin des-
favorable desde el punto de vista energtico obedece con frecuencia a que
la misma se liga a una reaccin favorable desde el punto de vista energtico,
como la de la hidrlisis del trifosfato de adenosina (ATP).
Equilibrios qumicos De manera habitual, una reaccin qumica existe en estado de equilibrio din-
mico. La constante de equilibrio (K) define la relacin de las concentraciones de
sustrato y de producto en equilibrio. Las enzimas no modifican la posicin
de equilibrio, pero aceleran la consecucin de la posicin de equilibrio al ace-
lerar las reacciones hacia delante y hacia atrs.
Temas relacionados (D1) Introduccin a las enzimas (D4) Inhibicin enzimtica
(D3) Cintica de las enzimas (D5) Regulacin de la actividad
enzimtica

Termodinmica denomina el entorno. La primera ley de la termodin-


El conocimiento de la termodinmica permite deter- mica, una declaracin matemtica de la ley de conser-
minar si un proceso fsico es posible y se requiere para vacin de la energa, establece que la energa total de un
comprender por qu las protenas se pliegan en su con- sistema y su entorno es una constante:
formacin nativa, por qu algunas reacciones catalizadas
por enzimas requieren un aporte de energa, cmo los E = EB EA = Q W
msculos generan la fuerza mecnica, entre tantas ms.
en la cual EA es la energa del sistema al comienzo del
La termodinmica (de las palabras griegas therme, calor y
proceso y EB, al final del proceso. Por su parte, Q es
dynamis, poder) es la descripcin de la interrelacin entre
el calor absorbido por el sistema y W es el trabajo efec-
las diferentes formas de energa y de qu forma la energa
tuado por el sistema. El cambio en la energa de un sis-
afecta la materia a nivel macroscpico. Como se aplica a
tema depende slo de los estados inicial y final y no de
la bioqumica, la termodinmica se interesa con frecuen-
la forma en que se alcanza dicho estado. Los procesos
cia en describir las condiciones bajo las cuales los proce-
en los cuales el sistema libera calor (es decir que tiene
sos se producen de manera espontnea (por s mismos).
una Q negativa) se conocen como procesos exotrmicos
En la termodinamia, un sistema es la materia dentro de y aqullos en los que el sistema gana calor (es decir que
una regin definida. La materia del resto del universo se tienen una Q positiva) se conocen como endotrmicos.
88 SECCIN D ENZIMAS

La unidad de energa del SI es el Julio (J), aunque la calo- cambio de la energa libre G de una reaccin es un cri-
ra (cal) todava se usa con frecuencia (1 kcal = 4.184 kJ). terio valioso para saber si esa reaccin puede ocurrir de
manera espontnea:
La primera ley de la termodinmica no puede usarse para
predecir si una reaccin puede suceder de manera espon-  Una reaccin puede suceder de manera espontnea
tnea ya que algunas reacciones espontneas tienen una slo si G es negativa
E positiva. Por tanto, se requiere una funcin de E dife-
 Un sistema est en equilibrio si la G es cero
rente. Una de tales funciones es la entropa (S), la cual es
una medida del grado de imprevisibilidad o desorden de  Una reaccin no se puede producir de manera espon-
un sistema. La entropa de un sistema se incrementa ( S) es tnea si la G es positiva. Se necesita un aporte de
positiva cuando el sistema se desordena ms. La segunda energa para impulsar una reaccin
ley de la termodinmica establece que un proceso puede
 La G de una reaccin es independiente de la va de
producirse de forma espontnea slo si la suma de las
la transformacin
entropas del sistema y de su entorno aumenta (o que
el universo tiende al desorden mximo), esto es:  La G no proporciona informacin acerca de la velo-
cidad de una reaccin
(Ssistema+Sentorno)>0 para un proceso espontneo.
Sin embargo, usar la entropa como criterio para saber si Energa de activacin y estado
un proceso bioqumico puede ocurrir en forma espont- de transicin
nea es difcil porque los cambios entrpicos de las reac-
Los cambios de energa que tienen lugar durante el
ciones qumicas no son fciles de medir y debe cono-
curso de una reaccin bioqumica particular se mues-
cerse el cambio entrpico del sistema y de su entorno.
tran en la figura D2-1. En todas las reacciones, existe una
Estas dificultades se resuelven al usar una funcin ter-
barrera de energa que debe superarse para que la reac-
modinmica diferente, la energa libre (G), propuesta
cin tenga lugar. sta es la energa necesaria para trans-
por Josiah Willard Gibbs, la cual combina la primera y la
formar las molculas del sustrato y llevarlas al estado
segunda leyes de la termodinmica:
de transicin una forma qumica parcialmente ines-
G = H T S table entre los sustratos y los productos. El estado de
transicin ostenta la energa libre ms alta de cualquier
en la cual G es la energa libre de un sistema que sufre componente de la reaccin. La energa de activacin
una transformacin a una presin (P) y una temperatura libre de Gibbs ( G) es igual a la diferencia en energa li-
(T) constantes, H es el cambio en la entalpa (conte- bre entre el estado de transicin y el sustrato (figura
nido de calor) del sistema, y S es el cambio en la entro- D2-1). Una enzima trabaja mediante la estabilizacin
pa del sistema. El cambio de entalpa est dado por: del estado de transicin de una reaccin qumica y por
reduccin de la G (figura D2-1). La enzima no altera
H = E + P V. los niveles de energa de los sustratos o los productos.
El cambio de volumen ( V) es escaso en casi todas las Por consiguiente, una enzima incrementa la velocidad
reacciones bioqumicas y por ello H es casi igual a E. a la cual sucede la reaccin, pero carece de efecto en el
Por consiguiente: cambio total de energa de la reaccin.

G = E T S. Cambio de energa libre


As, la G de una reaccin depende del cambio de ener- El cambio en la energa libre de Gibbs ( G) determina
ga interno y del cambio de la entropa del sistema. El si una reaccin ser favorable o no desde el punto de

Reaccin no catalizada
por una enzima Estado de transicin

S = sustratos
P = productos
+
Energa libre

G+
Reaccin catalizada
por una enzima
S

G
P

Progreso de la reaccin

Figura D2-1. Los cambios energticos tienen lugar durante el curso de una
reaccin bioqumica.
D2TERMODINMICA 89

vista energtico. La figura D2-1 muestra un ejemplo en transformando y formando de manera continua, el
el que el cambio en la energa total de la reaccin la hace cociente entre sustrato y producto se conserva en un
favorable desde el punto de vista energtico (esto es, los valor constante.
productos estn en un nivel de energa ms bajo que
Considrese la reaccin:
los sustratos y la G es negativa). Es necesario destacar
que la G no guarda relacin con la G. La G de una 104 s1
reaccin es independiente de la va de la reaccin y no A B
suministra informacin sobre la velocidad de la reaccin 106 s1
ya que sta depende de G. Una G negativa indica que
la reaccin es favorable desde la perspectiva termodin- donde la velocidad de reaccin hacia delante es de 104
mica y en que va en la direccin indicada (es decir, es por segundo (s1) y la velocidad de reaccin hacia atrs
probable que ocurra sin un aporte de energa), mientras es de 106 s1. En equilibrio, el cociente de las concen-
que una G positiva indica que la reaccin es desfavora- traciones del sustrato y el producto da un valor cons-
ble desde la perspectiva termodinmica y requiere un tante, conocido como constante de equilibrio (K). La
aporte de energa para proseguir en la direccin indi- constante de equilibrio para una reaccin determinada
cada. En los sistemas bioqumicos, este aporte de energa se define como:
se logra con frecuencia al acoplar una reaccin energ- [productos]eq [B]eq
ticamente desfavorable con otra ms favorable desde el K= =
[reactantes]eq [A]eq
punto de vista energtico (reacciones acopladas).
Suele resultar conveniente referirse a la G bajo un con- donde los corchetes indican concentracin. La cons-
junto estndar de condiciones, definidas como cuando tante de equilibrio tambin es dada por el cociente entre
los sustratos y productos de una reaccin estn presen- la velocidad de reaccin hacia delante (kf) y la velocidad
tes a concentraciones de 1.0 M y la reaccin tiene lugar de reaccin hacia atrs (kb):
a un pH constante de 7.0. Bajo estas condiciones, se
kf 104
encuentra un valor ligeramente favorable de G que K = k = 6 = 100
se denomina G. Un ejemplo de una reaccin favo- b 10
rable desde el punto de vista energtico, que tiene una Por consiguiente, para las reacciones en equilibrio de
gran G negativa y se usa de manera habitual para arriba, hay 100 veces ms de producto B que de sus-
dirigir reacciones menos favorables desde el punto de trato A, con prescindencia de que haya enzima presente
vista energtico, es la hidrlisis del trifosfato de adeno- o no. Lo anterior se debe a que las enzimas no alteran la
sina (ATP; figura D2-2) para formar difosfato de adenosi- posicin de equilibrio de una reaccin, porque aceleran
na (ADP) y fosfato inorgnico libre (Pi): las reacciones hacia delante y hacia atrs en la misma
extensin. En otras palabras, las enzimas aceleran la
ATP + H2O ADP + Pi G 0 = 30.5 kJ mol1 consecucin de la posicin de equilibrio, pero no des-
7.3 kcal mol1 van su posicin. En el caso de la reaccin hipottica que
se muestra arriba, en ausencia de la enzima aadida,
Equilibrios qumicos la reaccin puede tomar ms de una hora para alcan-
De manera habitual, una reaccin qumica existe en zar la posicin de equilibrio, mientras que en presencia
un estado de equilibrio dinmico, donde a pesar de de la enzima la posicin de equilibrio puede lograrse en
que nuevas molculas de sustrato y producto se estn menos de un segundo.

NH2

C N
N C
CH
O O O HC C
N N
O P O P O P OCH2 O

O O O H H
H H

HO HO
Adenosina
AMP
ADP
ATP

Figura D2-2. Estructura del ATP, ADP, AMP y la adenosina.


SECCIN D ENZIMAS

D3Cintica enzimtica
Notas clave
Velocidad enzimtica De manera habitual, la actividad enzimtica se expresa por la velocidad inicial
(V0) de la reaccin que est catalizando. Las unidades de V0 son mol min1, las
cuales tambin pueden representarse por la unidad (U) de la enzima, donde 1
mol min1 = 1 U. El trmino actividad (o actividad total) se refiere a las unida-
des totales de enzima en una muestra, en tanto que la actividad especfica es el
nmero de unidades por miligramo de protena (unidades mg-1).
Sustrato y concentracin A concentraciones de sustrato ([S]) bajas, una duplicacin de [S] conduce a
de la enzima duplicar V0, mientras que a [S] ms altas la enzima se satura y no se producen
incrementos adicionales de V0. Una grfica de V0 contra [S] da una curva hiper-
blica. Cuando [S] est saturada, una duplicacin de la concentracin de la
enzima lleva a una duplicacin de V0.
Temperatura La temperatura afecta la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima
al aumentar la energa trmica de las molculas de sustrato. Esto incrementa
la proporcin de molculas con energa suficiente para superar la barrera de
activacin y por consiguiente incrementa la velocidad de la reaccin. Adems,
la energa trmica de las molculas que componen la enzima aumenta, lo que
conduce a una velocidad mayor de desnaturalizacin de la protena enzimtica
debido a la rotura de las interacciones no covalentes que mantienen la estruc-
tura unida.
pH Cada enzima tiene un pH ptimo al cual la velocidad de la reaccin que cataliza
se encuentra al mximo. Pequeas desviaciones del pH desde el ptimo llevan
a una disminucin de la velocidad de la reaccin. Mayores desviaciones del pH
conducen a la desnaturalizacin de la enzima debido a cambios en la ionizacin
de los residuos de aminocidos y a la rotura de las interacciones no covalentes.
Modelo de El modelo de Michaelis-Menten usa el siguiente concepto de catlisis enzim-
Michaelis-Menten tica:
k1 k3
E+S ES E + P
k2

donde las constantes de velocidad k1, k2 y k3 describen las velocidades que


corresponden a cada paso del proceso cataltico. A una [S] baja, V0 es directa-
mente proporcional a [S], mientras que a una [S] alta la velocidad tiende a la
velocidad mxima (Vmx). La ecuacin de Michaelis-Menten:

Vmx [S]
V0 = Km + [S]

describe estas observaciones y predice una curva hiperblica de V0 contra [S].


La constante de Michaelis, Km, es igual a la suma de las velocidades de rotura del
complejo enzima-sustrato sobre su velocidad de formacin y es una medida
de la afinidad de una enzima por su sustrato.
Grca de Lineweaver- Vmx y Km pueden determinarse por medios experimentales si se mide V0 a dife-
Burk rentes concentraciones del sustrato y luego se grafica 1/V0 contra 1/[S] en una
doble grfica recproca de Lineweaver-Burk. La interseccin del eje y es igual
a 1/Vmx, la interseccin del eje x es igual a 1/Km y la inclinacin de la lnea es
igual a Km/Vmx.
D3CINTICA ENZIMTICA 91

Temas relacionados (B2) Estructura y funcin de las (D4) Inhibicin enzimtica


protenas (D5) Regulacin de la actividad
(D1) Introduccin a las enzimas enzimtica
(D2) Termodinmica

Velocidad enzimtica actividad (o actividad total) se refiere a las unidades


La tasa de una reaccin catalizada por una enzima se totales por miligramo de protena (unidades mg1). La
denomina con frecuencia su velocidad. Las velocidades actividad especfica es una medida de la pureza de una
de las enzimas se reportan de manera habitual como enzima; durante la purificacin de la enzima, su acti-
valores en tiempo cero (velocidad inicial, smbolo V0; vidad especfica se incrementa y se vuelve mxima y
mol min1), ya que la velocidad se acelera en el punto constante cuando la enzima es pura.
donde todava no hay producto presente. Esto es as
debido a que la concentracin de sustrato es mayor Sustrato y concentracin enzimtica
antes de que cualquier sustrato se haya transformado en El patrn normal de dependencia de la velocidad de la
producto, porque las enzimas pueden ser sujeto de inhi- enzima de la concentracin de sustrato [S] es tal que,
bicin por retroalimentacin por sus propios produc- a concentraciones bajas de sustrato, la duplicacin de
tos, porque con una reaccin reversible los productos [S] conduce a la duplicacin de la velocidad inicial (V0).
impulsarn la reaccin hacia atrs, o ambas cosas. De Sin embargo, a concentraciones ms altas del sustrato
manera experimental, V0 se mide antes de que alrededor la enzima se satura y los incrementos adicionales de [S]
de 10% del sustrato se haya convertido en el producto llevan a cambios escasos en la V0. Lo anterior sucede
con el fin de minimizar tales factores de complicacin. debido a que, a concentraciones saturantes de sustrato,
Una grfica de producto formado contra tiempo tpica todas las molculas de la enzima estn efectivamente
de una reaccin catalizada por una enzima muestra un unidas al sustrato. Ahora, la velocidad global de la
periodo inicial de formacin rpida del producto, la cual enzima depende de la velocidad a la cual el producto
da la porcin lineal de la grfica (figura D3-1). Esto es puede disociarse de la enzima y la aadidura adicio-
seguido por una inclinacin hacia abajo de la velocidad nal de sustrato no la modificar. La forma de la grfica
de la enzima a medida que el sustrato se usa o que la resultante cuando V0 se representa contra [S] se llama
enzima pierde actividad o ambas. La V0 se obtiene al curva hiperblica (figura D3-2).
dibujar una lnea recta a travs de la parte lineal de la
curva que comience en el punto temporal cero (figura En situaciones en las que concentracin de sustrato
D3-1). La inclinacin de esta lnea recta es igual a V0. es saturante (es decir, cuando todas las molculas de
enzima estn unidas al sustrato), una duplicacin de la
concentracin de la enzima conduce a duplicar la V0.
Unidades enzimticas
Esto produce una grfica de lnea recta, cuando V0 se
La actividad enzimtica puede expresarse en varias for-
representa contra la concentracin de la enzima.
mas. La ms comn es por la velocidad inicial (V0) de
la reaccin que est catalizando (es decir, mol de sus-
trato transformado por minuto; mol min1). Tambin Temperatura
hay una unidad estndar de actividad enzimtica, la La temperatura afecta la velocidad de las reacciones ca-
unidad enzima (U). Una unidad enzima es la cantidad talizadas por enzimas de dos formas. Primero, un au-
de enzima que cataliza la transformacin de 1 mol de mento de la temperatura incrementa la energa trmica
sustrato por minuto a 25 C bajo condiciones ptimas de las molculas del sustrato. Ello aumenta la propor-
para la enzima (es decir, 1 mol min1 = 1 U). El trmino cin de molculas del sustrato con energa suficiente

V0
Cantidad formada de
producto (mol)

Tiempo (min)
Figura D3-1. Interrelacin entre la formacin del producto y el tiempo para una
reaccin catalizada por una enzima.
92 SECCIN D ENZIMAS

Figura D3-2. Interrelacin entre [S] y V0.


para superar la energa libre de Gibbs de activacin Pequeas desviaciones del pH desde el valor ptimo lle-
( G) (seccin D2) y as incrementar la velocidad de la van a que la actividad disminuya debido a cambios en
reaccin. No obstante, un segundo elemento entra en la ionizacin de los grupos del sitio activo de la enzima.
juego a temperaturas ms altas. El aumento de la ener- Grandes desviaciones del pH conducen a la desnatura-
ga trmica de las molculas que forman la estructura lizacin de la protena de la enzima en s misma debido
protenica de la enzima en s mismo eleva las posibi- a la interferencia con los numerosos enlaces dbiles no
lidades de romper las mltiples interacciones dbiles covalentes que mantienen su estructura tridimensional.
y no covalentes (enlaces de hidrgeno, fuerzas de van Una grfica de V0 trazada contra el pH muestra por lo
der Waals, etc.), las cuales mantienen la estructura tri- general una curva en forma de campana (figura D3-3b).
dimensional de la enzima junta (seccin B2). En ltima Muchas enzimas tienen un pH ptimo de alrededor de
instancia, lo anterior lleva a la desnaturalizacin (des- 6.8, pero existe una gran diversidad en el pH ptimo
plegamiento) de la enzima, pero incluso pequeos cam- de las enzimas debido a los diferentes ambientes a los
bios en la forma tridimensional de la enzima pueden que se adaptan para trabajar. Por ejemplo, la enzima
alterar el sitio activo y conducir a una disminucin de digestiva pepsina est adaptada a trabajar en el pH
la actividad cataltica. El efecto total de un aumento en la cido del estmago (alrededor de pH 2.0).
temperatura en la velocidad de la reaccin de la enzima
es un balance entre estos dos efectos opuestos. Una gr-
Modelo de Michaelis-Menten
fica de la temperatura trazada contra la V0 mostrar en
consecuencia una curva, con una bien definida tem- El modelo de Michaelis-Menten usa el siguiente con-
peratura ptima (figura D3-3a). Para muchas enzimas cepto de catlisis enzimtica:
de los mamferos, sta ronda los 37 C, pero hay algu-
k1 k3
nos organismos que tienen enzimas adaptadas que tra-
bajan a temperaturas considerablemente ms altas o E+S ES E + P
ms bajas. Por ejemplo, la polimerasa Taq, que se usa k2
en la reaccin en cadena de la polimerasa (seccin I6),
La enzima (E) se combina con su sustrato (S) para for-
se encuentra en una bacteria que vive a altas tempera-
mar el complejo enzima-sustrato (ES). El complejo ES
turas en aguas termales y por tanto est adaptada para
puede disociarse para dar origen otra vez a E+S o pue-
trabajar de manera ptima a altas temperaturas.
de proceder de forma qumica para formar E y el produc-
to P. Las constantes de velocidad k1, k2 y k3 describen las
pH velocidades inherentes a cada paso del proceso catal-
Cada enzima tiene su pH ptimo al cual la velocidad tico. Se asume que no existe velocidad significativa para
de la reaccin que cataliza se encuentra al mximo. que la reaccin hacia atrs de enzima y producto (E+P)

a) b)

V0 V0 Enzima 2

Enzima 1

4 37 50 4 5 6 7 8 9
Temperatura (C) pH

Figura D3-3. Efecto de la a) temperatura y b) el pH sobre la actividad enzimtica.


D3CINTICA ENZIMTICA 93

los convierta en el complejo ES. El [ES] permanece aproxi- al sustrato dbil (k2 predomina sobre k1), una Km baja
madamente constante hasta que se consume casi todo el significa unin al sustrato fuerte (k1 predomina sobre
sustrato, por lo que la tasa de sntesis de ES se equipara k2). En la mayora de las enzimas, Km se ubica entre 101
con su tasa de consumo durante la mayor parte del curso y 107 M. La Km puede determinarse de forma experi-
de la reaccin, es decir que [ES] se mantiene en un estado mental por el hecho de que su valor equivale a la con-
estable. A partir de la observacin de las propiedades de centracin del sustrato a la cual la velocidad es igual a
muchas enzimas se supo que la velocidad inicial (V0) a la mitad de la Vmx.
bajas concentraciones de sustrato es directamente pro-
porcional a [S], en tanto que a concentraciones altas de
Grca de Lineweaver-Burk
sustrato la velocidad tiene a alcanzar su valor mximo,
que es la velocidad que se vuelve independiente de [S] Debido a que la Vmx se alcanza a infinitas concentra-
(figura D3-4a). Esta velocidad mxima se llama Vmx ciones de sustrato, es imposible estimarla (y en con-
(unidades de mol min1). La velocidad inicial (V0) es secuencia la Km) si se parte de una grfica hiperblica,
la velocidad medida de manera experimental antes de como se muestra en la figura D3-4a. Pese a ello, la Vmx
que ms de alrededor de 10% del sustrato se convierta y la Km pueden determinarse de manera experimental si
en producto con el fin de minimizar factores que com- se mide la V0 a diferentes concentraciones del sustrato
plican, como los efectos de las reacciones reversibles, la (figura D3-1). Por consiguiente, se hace una grfica rec-
inhibicin de la enzima por el producto y la inactivacin proca doble o grfica de Lineweaver-Burk de 1/V0 con-
progresiva de la enzima (vase antes). tra 1/[S] (figura D3-4b). De manera alternativa, puede
utilizarse un programa de computadora apropiado de
Michaelis y Menten elaboraron una ecuacin que des- ajuste de curvas con los datos de la figura D3-4a. La gr-
cribe estas observaciones, la ecuacin de Michaelis- fica de Lineweaver-Burk es una derivacin de la ecua-
Menten: cin de Michaelis-Menten:
Vmx [S]
V0 = K + [S] 1 1 Km 1
.
V0 = Vmx + Vmx
m
[S]
La ecuacin describe una curva hiperblica del tipo de la
la cual da una lnea recta, con la interseccin en el eje
que se muestra para los datos experimentales en la figura
de la y igual a 1/Vmx, y la interseccin en el eje de la x
D3-1. Mientras resolvan la ecuacin, Michaelis y Men-
igual a 1/Km. La inclinacin de la lnea es igual a Km/
ten definieron una nueva constante, Km, la constante de
Vmx (figura D3-4b). La grfica de Lineweaver-Burk es
Michaelis [unidad: Molar (es decir, por mol), M]:
tambin una forma til de determinar de qu manera
un inhibidor se une a una enzima (seccin D4). La Km y
k2 + k3
Km = la Vmx tambin pueden determinarse por medio de una
k1 grfica de Eadie-Hofstee de V0/[S] contra V0, donde la
interseccin en el eje de la x es igual a Vmx y la inclina-
La Km es una medida de la estabilidad del complejo ES,
cin de la lnea es igual a 1/Km.
que es igual a la suma de las velocidades de rotura del ES
sobre su velocidad de formacin. Para muchas enzimas, Aunque el modelo de Michaelis-Menten proporciona
k2 es mucho mayor que k3. Bajo esas circunstancias, Km un muy buen modelo de los datos experimentales de
se convierte en una medida de la afinidad de una muchas enzimas, unas pocas enzimas no satisfacen la
enzima por su sustrato ya que su valor depende de los cintica de Michaelis-Menten. Estas enzimas, como
valores relativos de k1 y k2 para la formacin y disocia- la transcarbamoilasa de aspartato, se llaman enzimas
cin de ES, respectivamente. Una Km alta significa unin alostricas (seccin D5).

a) b)
V0 Vmx 1/V0
Inclinacin = Km/Vmx

Vmx/2

Interseccin = 1/Km

Km Interseccin = 1/Vmx

[S] 1/[S]

Figura D3-4. Interrelacin entre [S] y V0: a) grca directa; b) grca doble
recproca de Lineweaver-Burk.
SECCIN D ENZIMAS

D4Inhibicin enzimtica
Notas clave
Inhibicin enzimtica Las molculas inhibidoras pueden reducir la velocidad cataltica de una enzima.
Existen muchos inhibidores, como los metabolitos normales del cuerpo, frma-
cos y toxinas externas. La inhibicin enzimtica puede ser de dos tipos princi-
pales: irreversible o reversible. La inhibicin reversible se puede subdividir en
competitiva y no competitiva.
Inhibicin irreversible Un inhibidor irreversible se une de forma estrecha, con frecuencia mediante
enlaces covalentes, a los residuos de aminocidos del sitio activo de la enzima,
y al hacerlo inactiva de modo permanente a la enzima. Son ejemplos de inhi-
bidores irreversibles el diisopropilfosfofluoridato (DIPF), la yodoacetamida, la
aspirina y la penicilina.
Inhibicin competitiva Un inhibidor competitivo le disputa el sitio activo de la enzima a las molcu-
reversible las de sustrato. A concentraciones altas del sustrato, puede superarse el efecto
de un inhibidor competitivo. En la grfica de Lineweaver-Burk, se puede ver
que un inhibidor competitivo incrementa la Km, pero deja la Vmx sin cambio.
Inhibicin no competitiva Un inhibidor no competitivo se une a la enzima en un sitio diferente al sitio
reversible activo, y no obstante disminuye su velocidad cataltica porque modifica la con-
formacin tridimensional de la enzima. El efecto de un inhibidor no competi-
tivo no puede superarse ni con altas concentraciones del sustrato. En la grfica
de Lineweaver-Burk, se puede ver que un inhibidor no competitivo disminuye
la Vmx, pero deja la Km sin cambio.
Temas relacionados (D1) Introduccin a las enzimas (D5) Regulacin de la actividad
(D3) Cintica enzimtica enzimtica

Inhibicin enzimtica con un residuo aminocido reactivo situado en el sitio


Existen muchos tipos de molculas que son capaces activo o cerca de ste, e inactivan en forma permanente
de interferir con la actividad de una enzima. Cualquier la enzima. Los residuos de aminocidos susceptibles
molcula que acte en forma directa sobre una enzima incluyen a los residuos de la Ser y la Cys, los cuales tie-
y disminuya la velocidad de su actividad cataltica se nen grupos reactivos OH y SH, respectivamente. El
denomina inhibidor. Algunos inhibidores enzimticos compuesto diisopropilfosfofluoridato (DIPF) y la sarina,
son metabolitos normales del cuerpo que inhiben una un compuesto de estructura similar y componente
enzima particular como parte del control metablico como el anterior de los gases nerviosos, reaccionan
normal de una va. Otros inhibidores pueden ser sustan- con un residuo de Ser en el sitio activo de la enzima
cias externas como los frmacos o las toxinas, de donde acetilcolinesterasa y la inhiben de manera irreversible
el efecto del inhibidor enzimtico puede ser terapu- y de esa manera impiden la transmisin de los impul-
tico o, en el otro extremo, letal. La inhibicin enzimtica sos nerviosos (figura D4-1a) (seccin E6). La yodoace-
puede ser de dos tipos principales: irreversible o rever- tamida modifica los residuos Cys y por consiguiente
sible. La variedad reversible puede a su vez subdividirse puede emplearse como herramienta diagnstica para
en inhibicin competitiva e inhibicin no competitiva. determinar si se requieren uno o ms residuos de Cys
La inhibicin reversible puede superarse si se remueve para la actividad enzimtica (figura D4-1b). La aspirina
al inhibidor de la enzima por dilisis, por ejemplo (sec- acta al modificar de forma covalente a la enzima sin-
cin C1), pero es imposible hacerlo en la inhibicin irre- tasa de prostaglandina H2, con lo cual reduce la snte-
versible, por definicin. sis de seales inflamatorias (seccin K1). El antibitico
penicilina inhibe de manera irreversible a la transpep-
tidasa de glucopptido, enzima que forma enlaces cru-
Inhibicin irreversible zados en la pared de la clula bacteriana, al fijarse por
Los inhibidores que se unen de modo irreversible a una enlaces covalentes a un residuo de Ser del sitio activo
enzima forman con frecuencia un enlace covalente de la enzima (seccin A1). La penicilina accede al sitio
D4INHIBICIN ENZIMTICA 95

a) H H
H3C C CH3 H3C C CH3
O O
Enzima CH2OH + F P O Enzima CH2 O P O + HF
O O
H3 C C CH3 H3C C CH3
H H
DIPF
b) O O

Enzima CH2SH + ICH2 C NH2 Enzima CH2 S CH2 C NH2 + HI

Yodoacetamida

Figura D4-1. Estructura y mecanismo de accin de: a) DIPF; b) yodoacetamida.

activo de la enzima debido a que imita a una parte de la La deshidrogenasa de succinato representa un buen
D-Ala-D-Ala del sustrato normal. En estas circunstancias, ejemplo de inhibicin competitiva. El succinato es el
la transpeptidasa une a la penicilina en forma covalente sustrato de la enzima, pero el malonato lo inhibe por
a su residuo de Ser del sitio activo. Por tanto, la penici- competencia y difiere del succinato por la presencia de
lina acta como un inhibidor suicida. un grupo metileno en lugar de dos (figura D4-3).
Muchos frmacos actan porque su estructura se
Inhibicin competitiva reversible parece mucho a la del sustrato de la enzima objetivo,
y por tanto actan como inhibidores competitivos de
De manera tpica, un inhibidor competitivo presenta
la enzima. Por ejemplo, el metotrexato, un anlogo
similitudes estructurales cercanas a las del sustrato
estructural de la coenzima tetrahidrofolato (seccin
normal de la enzima. En consecuencia, compite con las
D1), a la cual requiere la enzima reductasa de dihidro-
molculas del sustrato para unirse al sitio activo (figura
folato en la sntesis de purinas y pirimidinas, se usa en
D4-2a). La enzima puede unirse a la molcula del sus-
el tratamiento del cncer. Los inhibidores de la enzima
trato o a la molcula del inhibidor, pero no a las dos al
convertidora de angiotensina, como el captoprilo, se
mismo tiempo (figura D4-2a). El inhibidor competitivo
usan en el tratamiento de la hipertensin (presin arte-
se une en forma reversible al sitio activo. A concentra-
rial alta). Muchos de los frmacos usados para tratar el
ciones del sustrato altas, la accin del inhibidor com-
virus de inmunodeficiencia humana (HIV), el causante
petitivo es superada debido a que la concentracin lo
del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), son
suficientemente alta de sustrato elimina con xito a la
inhibidores competitivos de la transcriptasa inversa
molcula del inhibidor del sitio activo. Por tanto, no hay
(p. ej., AZT o cidovudina) o de la proteasa del VIH (p. ej.,
cambio en la Vmx de la enzima, pero la aparente afini-
saquinavir, ritonavir).
dad de la enzima por su sustrato decrece en presencia
del inhibidor competitivo y por consiguiente la Km se La inhibicin competitiva es el principio que se encuen-
incrementa. tra detrs del uso del etanol para tratar el envenenamien-

a) b) c)
Sustrato
Inhibidor
competitivo + Inhibidor competitivo

Sin inhibidor
Sitio
activo Enzima

Figura D4-2. Caractersticas de la inhibicin competitiva: a) un inhibidor competitivo


compite con el sustrato por la unin al sitio activo de la enzima; b) la enzima puede unir al
sustrato o al inhibidor competitivo pero no a los dos; c) grca de Lineweaver-Burk en la que
se muestra el efecto de un inhibidor competitivo sobre la Km y la Vmx.
96 SECCIN D ENZIMAS

COO COO COO


CH2 + FAD Deshidrogenasa CH + FADH2 CH2 Deshidrogenasa
No hay
CH2 de succinato CH COO de succinato reaccin
COO COO Malonato
Succinato Fumarato

Figura D4-3. Inhibicin de la deshidrogenasa de succinato por el malonato.

to con metanol. Aunque el metanol es en s mismo slo Inhibicin no competitiva reversible


ligeramente txico, la enzima heptica deshidroge-
nasa alcohlica lo convierte en el producto altamente Un inhibidor no competitivo se une en forma reversi-
txico formaldehdo, que incluso en pequeas cantida- ble a un sitio diferente al sitio activo (figura D4-4a) y
des causa ceguera y la muerte. El etanol compite con causa un cambio en la forma tridimensional total de la
el metanol por unirse al sitio activo de la deshidroge- enzima que lleva a reducir la actividad cataltica. Como
nasa alcohlica y de esa forma lentifica la conversin el inhibidor se une a un sitio diferente al del sustrato,
del metanol en formaldehdo (el etanol se convierte la enzima puede unir el inhibidor, el sustrato o ambos
en acetaldehdo, un producto fcil de metabolizar). juntos (figura D4-4b). Los efectos de un inhibidor no
En consecuencia, una gran proporcin de metanol es competitivo no pueden superarse mediante el aumento
excretada del cuerpo en la orina sin que cause dao tras de la concentracin de sustrato, de manera que se pro-
la administracin de etanol. El mismo principio subyace duce una disminucin de la Vmx. En la inhibicin no
al uso de etanol para tratar el envenenamiento por anti- competitiva, la afinidad de la enzima por el sustrato per-
congelante (etilenglicol). manece sin cambios y por ello Km se mantiene igual. Un
ejemplo de inhibicin no competitiva es la accin de la
La inhibicin competitiva puede reconocerse si se re- pepstatina sobre la enzima renina.
curre al uso de la grfica de Lineweaver-Burk. La V0 se
mide a diferentes concentraciones del sustrato en pre- La inhibicin no competitiva puede reconocerse en una
sencia de una concentracin fija de un inhibidor. Un grfica de Lineweaver-Burk ya que incrementa la incli-
inhibidor competitivo incrementa la inclinacin de la nacin de la lnea experimental y altera la interseccin
lnea en la grfica de Lineweaver-Burk y altera la inter- del eje de la y (ya que la Vmx disminuye), pero conserva
seccin en el eje de la x (ya que la Km se incrementa), pero la interseccin en el eje de la x sin cambio (ya que la Km
conserva la interseccin sobre el eje de la y sin modificar permanece constante; figura D4-4c).
(ya que la Vmx permanece constante; figura D4-2c).

a) b) c)
Inhibidor no
Sustrato + Inhibidor no competitivo
competitivo

Sin inhibidor
Enzima

Figura D4-4. Caractersticas de la inhibicin no competitiva: a) un inhibidor no competitivo


se une a un sitio diferente al sitio activo; b) la enzima puede unir el sustrato, el inhibidor no
competitivo o ambos; c) grca de Lineweaver-Burk en la que se muestra el efecto de un
inhibidor no competitivo sobre la Km y la Vmx.
SECCIN D ENZIMAS

D5Regulacin de la actividad
enzimtica
Notas clave
Regulacin por Los activadores e inhibidores, conocidos en conjunto como molculas efecto-
retroalimentacin ras, alteran la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas en los sis-
temas biolgicos. En las vas metablicas, el producto final suele inhibir por
retroalimentacin el paso anterior de la misma va para evitar la acumulacin
de productos intermedios y el uso innecesario de metabolitos y energa. En
las vas metablicas con ramas, suele funcionar un proceso de inhibicin por
retroalimentacin secuencial.
Enzimas alostricas Una grfica de V0 contra [S] para una enzima alostrica da una curva de forma
sigmoidea. Por lo regular, las enzimas alostricas son protenas de mltiples
subunidades con un sitio activo en cada subunidad, las cuales unen de forma
cooperativa molculas de sustrato, lo que implica que la unin de sustrato a un
sitio activo provoca un cambio conformacional en la enzima, que modifica la
afinidad de los restantes sitios activos por el sustrato. Se han propuesto dos
modelos para explicar el comportamiento alostrico de las enzimas, el modelo
concertado o simtrico y el modelo secuencial. Las molculas efectoras (activa-
dores o inhibidores) pueden controlar las enzimas alostricas al unirse a sitios
diferentes al sitio activo y alterar la velocidad de la actividad enzimtica. La
transcarbamoilasa de aspartato es una enzima alostrica que cataliza el paso
forzoso en la biosntesis de pirimidinas. La enzima consiste en seis subunida-
des reguladoras a las que se unen los efectores alostricos trifosfato de citosina
(CTP) y ATP. El producto final, CTP, de la va de la transcarbamoilasa la inhibe por
retroalimentacin y acta como un inhibidor alostrico. En contraste, el ATP, un
intermediario inicial de la va, acta como un activador alostrico.
Modicacin covalente El establecimiento y destruccin de un enlace covalente entre la enzima y un
reversible pequeo grupo no protenico altera la actividad de muchas enzimas. La ms
comn de tales modificaciones es la adicin y remocin de un grupo fosfato;
la fosforilacin y la desfosforilacin, respectivamente. Las cinasas de protena
catalizan la fosforilacin y con frecuencia recurren al ATP como el donador de
fosfatos, en tanto que las fosfatasas de protena se encargan de catalizar la
desfosforilacin. Un 30% de las protenas humanas es fosforilado.
Activacin proteoltica Algunas enzimas se sintetizan como grandes precursores inactivos llamados
proenzimas o cimgenos. La hidrlisis irreversible de uno o ms enlaces pep-
tdicos los activa. Las proteasas pancreticas tripsina, quimotripsina y elastasa
derivan todas de cimgenos precursores (tripsingeno, quimotripsingeno y
proelastasa, respectivamente) por activacin proteoltica. La activacin pre-
matura de estos cimgenos provoca pancreatitis aguda. En la cascada de la
coagulacin sangunea y en la apoptosis (muerte celular programada) tambin
participa una serie de activaciones de cimgenos que produce una gran ampli-
ficacin de la seal original.
Regulacin de la La cantidad de enzima presente representa un equilibrio entre las tasas de su
sntesis y destruccin sntesis y su degradacin. El grado de induccin o represin de la codificacin
de las enzimas gentica de la enzima y la tasa de degradacin de su mRNA modifican la tasa de
sntesis de la protena enzimtica. Cuando la protena enzimtica est sinteti-
zada, la tasa de su destruccin (vida media) tambin puede modificarse como
un medio de regular la actividad enzimtica.
98 SECCIN D ENZIMAS

Temas relacionados (B3) Mioglobina y hemoglobina (D4) Inhibicin enzimtica


(D1) Introduccin a las enzimas (J7) Control del metabolismo del
(D3) Cintica enzimtica glucgeno

Regulacin por retroalimentacin la enzima en el punto de control en un sitio diferente al


En los sistemas biolgicos, la velocidad de muchas enzi- sitio activo. Tales enzimas son por lo regular enzimas
mas se altera por la presencia de otras molculas como alostricas.
los activadores e inhibidores (conocidos en conjunto
como los efectores). Un tema comn en el control de las Enzimas alostricas
vas metablicas es cuando una enzima resulta inhibida Una grfica de V0 contra [S] de una enzima alostrica da
al principio de la va metablica por un producto final una curva sigmoidea en lugar del trazado hiperblico
de la misma va en la que participa. Esto se llama inhi- predicho por la ecuacin de Michaelis-Menten (como
bicin por retroalimentacin y suele tener lugar en el se ve en la unin del O2 a la hemoglobina; seccin B3,
paso forzoso de la va (conversin de A en B en la figura figura B3-3). La curva tiene una seccin empinada en el
D5-1a). El paso forzoso es el primer paso en producir un medio del espectro de concentracin de sustrato, lo que
intermediario que es exclusivo para la va en cuestin y refleja el incremento rpido en la velocidad de la enzima
por consiguiente, en general, obliga al metabolito a un que ocurre durante un rango estrecho de concentracio-
metabolismo adicional a lo largo de la va. El control de nes del sustrato. Esto permite a las enzimas alostricas
la enzima que lleva a cabo el paso forzoso de una va ser particularmente sensibles a pequeos cambios en la
metablica conserva el aporte de energa metablica del concentracin de sustrato en el rango fisiolgico. En las
organismo y evita la acumulacin de grandes cantidades enzimas alostricas, la unin de una molcula de sus-
indeseables de intermediarios metablicos adicionales a trato a un sitio activo afecta la unin de las molculas
lo largo de la va. Una inhibicin por retroalimentacin de sustrato a otros sitios activos de la enzima; se dice
de este tipo se ve, por ejemplo, en la va de la biosnte- que los distintos sitos activos se comportan de manera
sis de los aminocidos (seccin M2). cooperativa en la unin y accin sobre las molculas
de sustrato (confrntese con la unin del O2 a las cua-
Como muchas vas metablicas tienen ramas, la inhibi-
tro subunidades de la hemoglobina; seccin B3). Las
cin por retroalimentacin debe permitir la sntesis de
enzimas alostricas suelen ser protenas con varias sub-
un producto de una va ramificada para avanzar incluso
unidades (es decir, oligomricas), con uno o ms sitios
cuando otro producto est presente en exceso. Aqu, un
activos en cada subunidad. La unin de un sustrato a
proceso de inhibicin por retroalimentacin secuencial
un sitio activo induce un cambio conformacional en
puede operar donde el producto final de una rama de
la protena que se transmite a los otros sitios activos, a
una va inhibir a la primer enzima despus del punto
los que altera su afinidad por las molculas del sustrato.
de ramificacin (la conversin de C en D o de C en E,
en la figura D5-1b). Cuando este punto de ramificacin Se han propuesto dos modelos para explicar los efec-
acumule intermediarios, stos a su vez inhibirn el pri- tos alostricos que se observan en las protenas. En el
mer paso forzoso de la va completa (conversin de A modelo simtrico o concertado, propuesto primero por
en B en la figura D5-1b ). Como es poco probable que el Jacques Monod, Jeffries Wyman y Jean-Pierre Changeaux
producto final de una va metablica que incluye ml- (a veces referido como el modelo de Monod-Wyman-
tiples reacciones metablicas se asemeje estructural- Changeaux (MWC]), las subunidades de una enzima alos-
mente al compuesto inicial, el producto final se unir a trica pueden existir en uno de slo dos estados, T y R

a) b)
E3* inhibido por el producto Y

E1 inhibido por el producto Z

E1 inhibido por C
E3 inhibido por el producto Z

Figura D5-1. Inhibicin por retroalimentacin a) e inhibicin por retroalimentacin


secuencial b) en las vas metablicas.
D5REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA 99

(figura D5-2a). Las subunidades del estado T se hallan y las interacciones cooperativas surgen merced a la
en un estado tenso que es compacto y relativamente influencia que tales cambios conformacionales tienen
inactivo, mientras que las subunidades del estado R se en las subunidades vecinas. La fuerza de estas interac-
encuentran en un estado relajado, expandido y activo ciones depende del grado de acoplamiento mecnico
con una afinidad ms alta por el sustrato; no se permi- entre las subunidades. En el modelo secuencial, la afi-
ten los estados intermedios. En ausencia de un sustrato nidad de la unin entre enzima y sustrato vara con el
unido, el equilibrio favorece el estado T. A medida que el nmero de molculas de sustrato enlazadas, en tanto
sustrato se une a cada sitio activo del estado T, el equi- que en el modelo concertado esta afinidad depende slo
librio se desva hacia el estado R. Todas las subunidades del estado cuaternario de la enzima. Los resultados de
cambian de conformacin de una manera concertada, los estudios en varias protenas alostricas sugieren que
lo cual implica que la conformacin de cada subunidad es la mayora se comporta de acuerdo con una combina-
constreida por su asociacin con las otras subunidades; cin de los modelos concertado y secuencial.
en otras palabras, hay formas oligomricas de la enzima
Las molculas efectoras (activadores e inhibidores)
que contienen subunidades en estado R y T de manera
pueden controlar a las enzimas alostricas, a las cua-
simultnea y la simetra molecular de la protena se con-
les se unen en sitios diferentes al sitio activo (sea en
serva durante el cambio conformacional (figura D5-2a).
la misma subunidad o en otra) y al hacerlo provocan
En el modelo secuencial alternativo, propuesto pri- un cambio conformacional de tal sitio, lo que termina
mero por Daniel Koshland, en una enzima oligomrica, por alterar la tasa de actividad de la enzima (confrn-
los cambios secuenciales en la estructura tienen lugar tese con la unin del CO2, H+ y 2,3-bisfosfoglicerato a la
a medida que se ocupan los sitios activos individuales hemoglobina; vase la seccin B3). Un activador alos-
(figura D5-2b). La unin de sustrato a un sitio influye en trico incrementa la tasa de actividad enzimtica, en
la afinidad por el sustrato de los sitios activos vecinos, tanto que un inhibidor alostrico la reduce.
sin que por fuerza induzca una transicin que abarque
a la enzima completa, de tal manera que la simetra Transcarbamoilasa de aspartato
molecular de la enzima completa no se conserva for- La transcarbamoilasa de aspartato (carbamoiltransfe-
zosamente (figura D5-2b). El modelo secuencial se basa rasa de aspartato; ATC-asa), una enzima clave en la sn-
en la hiptesis del ajuste inducido de la interaccin tesis de pirimidina (seccin F1), proporciona un buen
enzima-sustrato, mientras que el modelo concertado ejemplo de regulacin alostrica. La ATC-asa cataliza la
asume de forma implcita el modelo de llave y cerradura formacin de N-carbamoilaspartato a partir de aspar-
de la unin del sustrato al sitio activo de la enzima (sec- tato y de carbamoilfosfato, que representa el paso for-
cin D1). En el modelo secuencial, la unin del sustrato zoso en la biosntesis de pirimidinas (figura D5-3). La
induce un cambio conformacional en una subunidad unin de los sustratos aspartato y carbamoilfosfato es

a) Modelo concertado

Subunidades S S S S S S S S S S S
de estado T S S S

Subunidades S S S S S S S S S S S
de estado R
S S S

b) Modelo secuencial

S S S S S S S S S S S
S S S

Figura D5-2. Modelos de alosterismo: a) el modelo concertado o de simetra;


los cuadrados y los crculos representan los estados T y R, respectivamente; b)
el modelo secuencial; la unin del sustrato induce los cambios conformacionales
progresivos en las subunidades.
100 SECCIN D ENZIMAS

cooperativa, como lo muestra la curva sigmoidea de V0 intermedios iniciales de la va, acta como un activa-
contra la concentracin de sustrato (figura D5-4). dor alostrico, lo que hace al mejorar la afinidad de la
ATC-asa por sus sustratos que la lleva a incrementar su
La ATC-asa consiste en seis subunidades catalticas y actividad (figura D5-3). El ATP y el CTP compiten por el
seis subunidades reguladoras. El producto final de la mismo sitio de unin en la subunidad reguladora. Altos
va, el trifosfato de citosina (CTP; seccin F1), inhibe niveles de ATP le indican a la clula que hay energa dis-
a la enzima por retroalimentacin, por lo que el CTP ponible para la replicacin del DNA, por lo que la ATC-asa
acta como un inhibidor alostrico (figura D5-3). Esta se activa, lo que resulta en la sntesis de los nucletidos
molcula se une a las subunidades reguladoras y cau- de pirimidina requeridos. Cuando la pirimidina abunda,
sa una disminucin en la actividad cataltica de la ATC- los altos niveles de CTP inhiben a la ATC-asa, lo que evita
asa al reducir la afinidad de las subunidades catalticas la sntesis innecesaria de N-carbamoilaspartato y de los
por el sustrato. En contraste, el ATP, uno de los productos intermediarios subsecuentes de la va.

CO2 + glutamina + ATP

NH2 Activacin

C
COO O OPO32
CH2 Carbamoilfosfato
+
H3N CH COO
Aspartato ATC-asa

H2PO 4


COO
NH2 CH2
C CH COO
O N
H
N-carbamoilaspartato Inhibicin

CTP

Figura D5-3. La formacin de N-carbamoilaspartato por la ATC-asa es el paso


forzoso en la biosntesis de pirimidina y en un punto de control clave.

Efectores
no alostricos

Aspartato (mM)

Figura D5-4. Grca de velocidad inicial (V0) contra concentracin de sustrato de la


enzima alostrica transcarbamoilasa de aspartato.
D5REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA 101

Modicacin covalente reversible activacin de los cimgenos implica la hidrlisis irre-


La modificacin covalente reversible consiste en la ela- versible de uno o ms enlaces peptdicos.
boracin y degradacin de un enlace covalente entre un
Proteasas pancreticas
grupo no protenico y una molcula enzimtica. Aun-
Las enzimas digestivas tripsina, quimotripsina y elas-
que un buen nmero de grupos no protenicos puede
tasa (seccin D1) se producen como cimgenos en el
unirse en forma reversible a enzimas que afectan su
pncreas. Son transportadas al intestino delgado en su
actividad, la modificacin ms comn es la adicin y
forma de cimgeno y all se activan por la divisin de
remocin de un grupo fosfato (fosforilacin y desfos-
enlaces peptdicos especficos. De manera inicial, la
forilacin, respectivamente). Las cinasas de protena
tripsina se sintetiza bajo la forma del cimgeno trip-
se encargan de catalizar la fosforilacin y suelen usar
singeno. El cimgeno es dividido (y en consecuencia
ATP como donador de los grupos fosfato, mientras que
activado) en el intestino por la enzima enteropepti-
las fosfatasas de protena catalizan la desfosforilacin
dasa, la cual slo se produce en el intestino. Una vez
(figura D5-5). La adicin y remocin de un grupo fosfato
activada, la tripsina puede dividir y activar ms mo-
provoca cambios en la estructura terciaria de la enzima
lculas de tripsingeno as como otros cimgenos,
que alteran su actividad cataltica. Una clase de cinasas
como el quimotripsingeno y la proelastasa (figura
de protena transfiere el grupo fosfato de manera espe-
D5-6).
cfica al grupo hidroxilo de los residuos de Ser o Thr de
la enzima de inters (proteincinasas de serina/treonina, A medida que los cimgenos se sintetizan y secretan, el
tipificadas por ser cinasas de protena dependientes del pncreas tambin sintetiza una pequea (6 kDa) pro-
3,5-monofosfato de adenosina cclico [cAMP]), mien- tena inhibidora de la tripsina (inhibidor pancretico
tras que una segunda clase transfiere el grupo fosfato al de la tripsina). Esta protena inhibidora se une en forma
grupo hidroxilo del residuo de Tyr (cinasas de tirosina). muy estrecha al sitio activo de la tripsina, lo que evita
Las fosfatasas de protena catalizan la hidrlisis de los que el pncreas vaya a resultar destruido por la acti-
grupos fosfato de las protenas para regenerar el grupo vacin prematura de las molculas de tripsina. Si este
hidroxilo del aminocido y liberar Pi (figura D5-5). mecanismo de seguridad falla, por ejemplo, debido a un
bloqueo del conducto pancretico, los cimgenos pue-
Una enzima fosforilada puede ser ms o menos activa
den activarse y digerir al pncreas, una afeccin cono-
que su forma desfosforilada. La fosforilacin/desfosfori-
cida como pancreatitis aguda.
lacin pueden usarse para una desviacin rpida y rever-
sible con el fin de activar o desactivar una va metablica
segn las necesidades de la clula. Por ejemplo, la fosfo- Cascada de la coagulacin sangunea
rilasa de glucgeno, que participa en la degradacin del Otro ejemplo de la existencia de cimgenos inactivos lo
glucgeno, es activa en su forma fosforilada y la sintasa representan las enzimas que participan en la cascada de
de glucgeno, que interviene en la sntesis de glucgeno, la coagulacin sangunea. En sta, el proceso completo
es ms activa en su forma desfosforilada (seccin J7). de coagulacin de la sangre lo lleva a cabo una serie de
activaciones de cimgenos.
Otros tipos de modificaciones covalentes reversibles
que se usan para regular la actividad de ciertas enzimas Apoptosis
incluyen la adenilacin (la transferencia de adenilato Un grupo de proteasas denominado caspasas lleva a
desde el ATP, como se ve en la sintetasa de glutamina) y cabo la apoptosis, o muerte celular programada. En
la ribosilacin del ADP (la transferencia de una parte de respuesta a seales proapoptsicas especficas, las pro-
ribosilo al ADP desde el NAD+, como se ve en la polimerasa caspasas inactivas se activan a travs de su protelisis a
de RNA). su forma activa. A continuacin, estas caspasas activas
actan sobre otras procaspasas as como sobre otras
Activacin proteoltica protenas celulares para ocasionar la muerte celular.
Numerosas enzimas se sintetizan como grandes precur- La activacin de cimgenos puede producir una gran
sores inactivos llamados proenzimas o cimgenos. La amplificacin de la seal inicial ya que una sola enzima

Protena

Fosfatasa Cinasa de
de protena protena

Protena

Figura D5-5. La fosforilacin y desfosforilacin reversibles de una enzima.


102 SECCIN D ENZIMAS

activada puede actuar sobre muchos cientos de mol- Entre los factores que afectan la tasa de sntesis est el
culas de sustrato para que tenga lugar una activacin grado de induccin o represin del gen que codifica la
adicional. Como la activacin proteoltica no requiere enzima (secciones G3 y G4) y tambin la tasa de degra-
ATP, la escisin del cimgeno es un mecanismo muy dacin del mRNA producido por ese gen. Muchas enzi-
apropiado para la activacin de protenas fuera de las mas clave de los puntos de control de las vas metabli-
clulas. Sin embargo, a diferencia de la modificacin cas tienen mRNA de vida extremadamente corta y la tasa
covalente de una enzima (vase antes), la activacin de de sntesis de la enzima es en consecuencia controlada
un cimgeno no es reversible. Una vez activada, la con facilidad por factores que afectan la tasa de trans-
enzima permanece activa. cripcin gentica.
La vida media refleja la tasa de destruccin de una
Regulacin de la sntesis y destruccin enzima (la vida media es el tiempo que tarda en de-
de las enzimas gradarse 50% de la protena). La mayor parte de las
La cantidad de una enzima determinada presente en enzimas importantes en la regulacin metablica pre-
una clula o tejido cambia de acuerdo con sus tasas de sentan vidas medias cortas y se les denomina enzimas
sntesis y degradacin. lbiles.

Tripsingeno

Enteropeptidasa

Tripsina

Quimotripsingeno Proelastasa

Quimotripsina Elastasa

Figura D5-6. Papel central de la tripsina en la activacin de los cimgenos


pancreticos.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E1Lpidos de la membrana
Notas clave
Membranas Las membranas forman estructuras limitantes alrededor de la clula y alre-
dedor de los diferentes compartimientos subcelulares. Actan como barre-
ras selectivamente permeables y participan en los procesos de sealizacin.
Todas las membranas contienen cantidades variables de lpidos y protenas y
algunas contienen pequeas cantidades de carbohidratos.
Lpidos membranales En las membranas, las tres clases principales de lpidos son los glicerofosfol-
pidos, los esfingolpidos y los esteroles. Los glicerofosfolpidos tienen una co-
lumna vertebral de glicerol que une a dos cadenas hidrocarbonadas de cidos
grasos y a un grupo-cabeza fosforilado; incluyen a la fosfatidilcolina, fosfati-
diletanolamina y fosfatidilserina. Los esfingolpidos se forman a partir de la
esfingosina, a la cual est unida una cadena de cido graso simple y un grupo-
cabeza fosforilado (como en la esfingomielina) o uno o ms residuos de azcar
(cerebrsidos y ganglisidos, los glucoesfingolpidos). El principal esterol de la
membrana plasmtica animal es el colesterol, mientras que el estigmasterol y
el sitosterol , que guardan relacin estructural con el anterior, se encuentran
en plantas.
Cadenas de cidos Las cadenas de cidos grasos de los glicerofosfolpidos y los esfingolpidos con-
grasos sisten en cadenas largas de tomos de carbono, las cuales usualmente no estn
ramificadas y tienen un nmero par de tomos de carbono (p. ej., palmitato
C16, estearato C18). Las cadenas estn completamente saturadas con tomos
de hidrgeno o tienen uno o ms dobles enlaces insaturados que estn en
configuracin cis (p. ej., oleato C18:1 con un doble enlace).
Bicapa lipdica Los lpidos membranales son anfipticos, ya que contienen regiones hidrfilas
e hidrfobas. En los glicerofosfolpidos y los esfingolpidos, las cadenas hidro-
carbonadas de cidos grasos son hidrfobas, mientras que los grupos-cabeza
polares son hidrfilos. En solucin acuosa, los lpidos anfipticos se ordenan a
s mismos en hojas bimoleculares extensas (bicapas). La estructura de las bica-
pas se mantiene por mltiples interacciones no covalentes entre las cadenas
de cidos grasos vecinas y entre los grupos-cabeza polares de los lpidos. En
las membranas biolgicas, hay una distribucin asimtrica de lpidos entre las
monocapas interna y externa de la bicapa.
Fluidez membranal Los lpidos son relativamente libres para moverse dentro del plano de la bicapa
por movimiento rotatorio o lateral, pero no les resulta fcil atravesar de un
lado de la bicapa al otro (movimiento transversal). El incremento en la longi-
tud de las cadenas de cidos grasos o la disminucin en el nmero de enlaces
dobles insaturados en las cadenas de cidos grasos lleva a una disminucin en
la fluidez de la membrana. En las membranas animales, el incremento en la
cantidad de colesterol tambin disminuye la fluidez de la membrana.
Temas relacionados (A1) Clulas procariotas ((E5) Transduccin de seales
(A2) Clulas eucariotas (E6) Funcin nerviosa
(E2) Estructura de la membrana (K1) Estructura y funcin de los
(E3) Transporte de la membrana: cidos grasos
molculas pequeas (K5) Colesterol
104 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

Membranas son la fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidil-


Las membranas forman los lmites alrededor de las glicerol, fosfatidilinositol y fosfatidilserina (figura E1-1).
clulas (la membrana plasmtica) y alrededor de los El difosfatidilglicerol (o cardiolipina) (figura E1-1) se
diferentes compartimientos subcelulares (p. ej., ncleo, encuentra de manera predominante en la membrana
mitocondrias, lisosomas, etc.) (secciones A1 y A2). mitocondrial interna.
Actan como barreras selectivamente permeables y
permiten que el ambiente interno de la clula u orga- Esngolpidos
nelo se diferencie del lado externo (seccin E3). Las Las esfingomielinas, los esfingolpidos ms comunes,
membranas participan en los procesos de sealizacin; tienen una columna vertebral de esfingosina (figura
contienen receptores especficos para los estmulos E1-2a) en lugar de la de glicerol de los glicerofosfolpidos.
externos e intervienen en la generacin de seales qu- Como los glicerofosfolpidos, stas tienen un grupo ca-
micas y elctricas (secciones E5 y E6). Todas las mem- beza fosforilado (de colina o etanolamina) y dos cade-
branas contienen dos componentes bsicos: lpidos y nas hidrocarbonadas (figura E1-2a). Una de las cadenas
protenas. Algunas membranas tambin contienen car- hidrocarbonadas proviene de la molcula de esfingosina,
bohidratos. La composicin de lpidos, protenas y car- la otra es un cido graso como los que se encuentran en
bohidratos vara de una membrana a otra. Por ejemplo, los glicerofosfolpidos, excepto que est unida mediante
la membrana mitocondrial interna tiene una cantidad un enlace amida a los esfingolpidos. Las esfingomieli-
mayor de protena que de lpidos debido a la presencia nas estn presentes en la membrana plasmtica de la
de numerosos complejos proteicos que intervienen en mayora de las clulas y son particularmente abundan-
la fosforilacin oxidativa y en la transferencia de electro- tes en la vaina de mielina que rodea a las clulas ner-
nes (seccin L2), mientras que la membrana de la vaina viosas. Los glucoesfingolpidos, como los cerebrsidos
de mielina de las clulas nerviosas, la cual sirve para y los ganglisidos, tambin se derivan de la esfingosina,
aislar a la clula elctricamente, tiene una proporcin pero en lugar de un grupo cabeza fosforilado tienen uno
mayor de lpidos (seccin E6). o ms residuos de azcar. Los galactocerebrsidos tie-
nen un residuo de galactosa simple (figura E1-2a) y se
encuentran predominantemente en las membranas de
Lpidos membranales las clulas neuronales del cerebro. Los ganglisidos GM1,
De manera original, los lpidos se clasificaron como GM2 y GM3 tienen numerosos residuos de azcar y cuando
sustancias biolgicas insolubles en agua pero solubles menos un residuo de cido silico (cido N-acetilneu-
en solventes orgnicos como el cloroformo y el meta- ramnico), adems de que son un constituyente funda-
nol. De manera adicional, por tratarse de componen- mental de la mayora de las membranas plasmticas de
tes estructurales de las membranas, los lpidos tienen los mamferos y en particular son abundantes en las
varias funciones biolgicas. Sirven como molculas clulas del encfalo.
de combustible (seccin K2), como almacenes de ener-
ga concentrada (p. ej., triacilglicerol, seccin K4) y como
molculas de sealizacin (seccin E5). Dentro de las Esteroles
membranas, hay tres tipos principales de lpidos: los El esterol colesterol (figura E1-2b) es un constituyente
glicerofosfolpidos, los esfingolpidos y los esteroles. principal de las membranas plasmticas animales pero
est ausente en los procariotas. El sistema de anillos
fusionados del colesterol implica que es ms rgido que
Glicerofosfolpidos otros lpidos de la membrana. As como es un impor-
Los glicerofosfolpidos estn formados por tres com- tante componente de las membranas, el colesterol es
ponentes: un grupo cabeza fosforilado, una columna un precursor metablico de las hormonas esteroideas
vertebral de glicerol de tres carbonos y dos cadenas hi- (seccin K5). Las plantas contienen poco colesterol,
drocarbonadas de cidos grasos (figura E1-1). El grupo- pero tienen en su lugar varios esteroles diferentes, sobre
cabeza fosforilado est unido al carbono 3 de la columna todo estigmasterol y sitosterol, los cuales difieren del
vertebral de glicerol, mientras que las dos cadenas de ci- colesterol slo en sus cadenas laterales alifticas.
dos grasos estn unidas a los otros dos tomos de car-
bono. El ms simple de los glicerofosfolpidos es el fos-
fatidato (diacilglicerol 3-fosfato), el cual tiene slo un Cadenas de cidos grasos
grupo de cido fosfrico esterificado al carbono 3 del Las dos cadenas de cidos grasos de los glicerofosfol-
glicerol. Aunque el fosfatidato como tal est presente en pidos y la cadena de cidos grasos simple de los esfin-
pequeas cantidades en las membranas, los glicerofos- golpidos consisten en una larga cadena de tomos de
folpidos principales derivan del mismo. En esos otros carbono. De manera habitual, esas cadenas tienen un
lpidos el fosfato est esterificado de manera adicional al nmero par de tomos de carbono (p. ej., palmitato,
grupo hidroxilo de uno de numerosos alcoholes (colina, C16; estearato, C18) y carecen de ramificaciones. Las
etanolamina, glicerol, inositol o serina). Los principales cadenas estn completamente saturadas con tomos de
glicerofosfolpidos que se encuentran en las membranas hidrgeno o son insaturadas y tienen uno o ms enlaces
E1LPIDOS DE LA MEMBRANA 105

O O

R1 C O CH2 R1 C O CH2
R2 C O CH O R2 C O CH O H
+
O H2 C O P O O H2C O P O CH2 C NH3

O O COO
Fosfatidato Fosfatidilserina

O R1 C O CH2
R2 C O CH O
R1 C O CH2 OH OH

R2 C O CH O O H2C O P O H
H HH
+
H2 C O P O CH2 CH2 NH3 O H OH
O
H OH
O OH H
Fosfatidiletanolamina Fosfatidilinositol
O O

R1 C O CH2 R1 C O CH2
R2 C O CH O CH3 R2 C O CH O OH
+
O H2C O P O CH2 CH2 N CH33 O H2C O P O CH2 C CH2OH

O CH3 O H
Fosfatidiletanola Fosfatidiglicerol

O O

R1 C O CH2 H2C O C R3
R2 C O CH O H O HC O C R4

O H2 C O P O CH2 C CH2 O P O CH2 O



O OH O
Difosfatidiliglicerol

Figura E1-1. Estructuras de los glicerofosfolpidos de la membrana. R1 y R2 representan


cadenas hidrocarbonadas de cidos grasos. La columna vertebral de glicerol est
sombreada.

dobles, que estn por lo general en la configuracin cis grasos hidrfobas y de un grupo-cabeza polar hidrfilo.
(p. ej., oleato C18:1, el cual tiene dieciocho tomos de En los glicerofosfolpidos, las dos cadenas hidrocarbo-
carbono y un doble enlace; cido araquidnico C20:4, el nadas son hidrfobas, mientras que la columna verte-
cual tiene veinte tomos de carbono y cuatro enlaces do- bral de glicerol y el grupo-cabeza fosforilado son hidr-
bles (para mayores detalles vase la seccin K1). Las dos filos. En los esfingolpidos, la cadena de cido graso y la
cadenas de cidos grasos de un glicerofosfolpido no cadena hidrocarbonada de la esfingosina son hidrfo-
suelen ser idnticas (p. ej., 1-estearoil-2-oleoil-3-fosfa- bas, mientras que el grupo cabeza fosforilado o el az-
tidilcolina [figura E1-3]). En los esfingolpidos, la cadena car son hidrfilos. En el caso del colesterol, la molcula
hidrocarbonada sin ramas de la esfingosina tambin completa, exceptuando al grupo hidroxilo en el carbono
consiste en 18 tomos de carbono, pero tiene un doble 3, es de naturaleza hidrfoba.
enlace en la configuracin trans (figura E1-2a).
En solucin acuosa, las molculas anfipticas se orien-
tan a s mismas para evitar que sus regiones hidrfobas
Bicapa lipdica hagan contacto con las molculas de agua. En el caso
Las molculas anfipticas (o anffilas) contienen regiones de los lpidos que contienen slo una cadena hidrocar-
hidrfilas (amantes del agua) e hidrfobas (que recha- bonada (como el palmitato de sodio, un constituyente
zan el agua). Los lpidos de la membrana son molcu- del jabn), las molculas forman una estructura micelar
las anfipticas que estn hechas de cadenas de cidos esfrica (cuyo dimetro usual es > 20 nm), en la cual las
106 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

a)
H H H O CH3
H3C (CH2)12 C C C C CH2 O P O CH2 CH2 N+ CH3

Esngosina H OH N H O CH3
O C
R1 H H H
Esfingomielina H3 C (CH2)12 C C C C CH2 O Galactosa

Esngosina H OH N H
O C
R1
b) Galactocerebrsido
CH3 CH3
H C CH2 CH2 CH2 C CH3
CH3
CH3 CH3

3
HO Colesterol

Figura E1-2. Estructuras de a) los esngolpidos esngomielina y galactocerebrsido;


b) colesterol. R1 representa la cadena hidrocarbonada de los cidos grasos.

cadenas hidrfobas de los cidos grasos estn ocultas monocapas. Por ejemplo, en la membrana plasmtica de
dentro de la micela y sus grupos-cabeza hidrfilos inte- los eritrocitos, la esfingomielina y la fosfatidilcolina se lo-
ractan con las molculas de agua circundantes (figura calizan de preferencia en la capa externa, mientras que
E1-4a). Debido a que las dos cadenas de cidos grasos la fosfatidiletanolamina y la fosfatidilserina estn sobre
de los fosfolpidos son demasiado voluminosas para todo en la capa interna.
caber en el interior de la micela, la estructura que resulta
favorecida por la mayora de los fosfolpidos en solucin Las bicapas de lpidos se autoensamblan de forma
acuosa es una hoja bimolecular bidimensional o bicapa espontnea en solucin acuosa. La fuerza directriz prin-
de lpidos (figura E1-4b). Tales bicapas de lpidos, en las cipal detrs de esto es el efecto hidrfobo, por el que las
cuales las molculas de fosfolpidos se orientan con sus ca- cadenas de cidos grasos hidrfobas sean excluidas por
denas hidrfobas en el interior de la estructura y sus las molculas de agua. Una vez formada, la estructura
grupos-cabeza hidrfilos se exponen en las dos super- de bicapa se mantiene por mltiples interacciones no
ficies, pueden ser estructuras relativamente grandes covalentes que incluyen las interacciones hidrfobas y
de hasta alrededor de 1 mm de rea, pero son slo las fuerzas de van der Waals entre las cadenas hidrocar-
dos molculas gruesas (6 a 10 nm). Las dos capas de bonadas, las interacciones por cargas elctricas y puen-
lpidos en la bicapa se denominan como la mono- tes de hidrgeno entre los grupos-cabeza polares y entre
capa interna y la monocapa externa. En las membra- los grupos-cabeza y las molculas de agua circundantes
nas biolgicas, las especies de lpidos individuales (vase la seccin B2 para una descripcin ms completa
se distribuyen de manera asimtrica entre las dos de estas interacciones no covalentes).

H3C (CH2)16 C O CH2

H3C (CH2)7 C C (CH2)7 C O CH O CH3


+
H H O H2C O P O CH2 CH2 N CH3

O CH3

Figura E1-3. Estructura de la 1-estearoil-2-oleoil-3-fosfatidilcolina en la que se


muestran las cadenas hidrocarbonadas del estearolo saturado (C18:0) y el oleolo
monoinsaturado (C18:1). Los tomos de hidrgeno que rodean el enlace C=C estn
en la conguracin cis.
E1LPIDOS DE LA MEMBRANA 107

Grupos-cabeza
a) b) polares hidrlos

Cadenas hidrocarbonadas
hidrfobas

Figura E1-4. Estructura de a) una micela y b) una bicapa lipdica.

Fluidez de la membrana dos grasos y de su grado de insaturacin. Si la longi-


tud de las cadenas de cidos grasos se incrementa,
Debido a que no hay enlaces covalentes entre los lpidos
la fluidez de la bicapa disminuye debido a la mayor
que forman la bicapa, la membrana no es una estructura
propensin de interacciones no covalentes entre las
esttica sino fluida. Por lo general, los lpidos son libres
cadenas hidrocarbonadas. En contraste, si el grado de
de moverse dentro del plano de la monocapa interna o
insaturacin en las cadenas de cidos grasos se incre-
externa o de la bicapa ya sea por movimientos rotato-
menta, la fluidez de la bicapa tambin lo hace. Esto
rios o colaterales (figura E1-5). Sin embargo, las mol-
se debe a que los dobles enlaces con una configura-
culas de lpido no pueden cambiarse con facilidad de
cin cis doblan la cadena hidrocarbonada y rompen
una monocapa de la bicapa a la otra, el llamado movi-
el empacamiento fuertemente ordenado de las cade-
miento transversal, debido a la energa desfavorable
nas de cidos grasos y por tanto reducen el nmero de
que interviene en el movimiento de un grupo cabeza
interacciones entre los lpidos vecinos. Un importante
hidrfilo a travs del interior hidrfobo de la bicapa.
regulador de la fluidez de la membrana en los sistemas
La fluidez de la bicapa puede alterarse de numerosas de los mamferos es el colesterol. A temperatura fisio-
formas. Tras el calentamiento por arriba de una tem- lgica (37 C), incrementar la cantidad de colesterol en
peratura de transicin caracterstica, la bicapa lip- la bicapa llevar a una disminucin en la fluidez de la
dica cambiar de una consistencia similar al gel a una membrana ya que los sistemas de anillos esteroideos
consistencia de tipo ms lquido. Esta temperatura de rgidos interfieren con el movimiento lateral de las ca-
transicin depende de la longitud de las cadenas de ci- denas de cidos grasos.

Rotacin

Hojuela
externa Movimiento
3.5 a 4.0 nm
transversal
Hojuela
interna

Movimiento lateral

Figura E1-5. Movimiento de los lpidos en las membranas.


SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E2Estructura de la membrana
Notas clave
Protenas integrales Las protenas integrales de la membrana se insertan en la regin hidrfoba
de la membrana de la bicapa lipdica. La mayora de las protenas integrales de la membrana
tienen una (p. ej., la glicoforina) o ms (p. ej., la bacteriorodopsina) regiones de
la cadena polipeptdica que atraviesan la bicapa lipdica. Estas regiones trans-
membranales contienen sobre todo aminocidos con cadenas laterales hidr-
fobas que forman una hlice  e interactan de manera no covalente con los
lpidos circundantes. Unas pocas protenas transmembranales atraviesan la
membrana con una estructura formada por hebras . Algunas protenas inte-
grales de la membrana no atraviesan la membrana, pero estn asociadas a
ella mediante un enlace covalente a un lpido de la membrana. Las protenas
integrales de la membrana se distribuyen de manera asimtrica a travs de la
bicapa y estn en general libres para moverse en el plano de la bicapa, pero
no para atravesar de un lado al otro de la membrana.
Protenas perifricas Ninguna parte de una protena perifrica de la membrana interacta con el
de la membrana interior hidrfobo de la bicapa. En su lugar, las protenas perifricas de la
membrana estn asociadas a la superficie de sta por enlaces inicos no cova-
lentes y puentes de hidrgeno y pueden removerse por lavado de la membrana
con una solucin de fuerza inica alta o de pH extremo. El citoesqueleto que
cubre la superficie citoslica de la membrana plasmtica est formado por
varias protenas perifricas y es importante en el mantenimiento y alteracin
de la forma de las clulas.
Modelo de mosaico El modelo de mosaico fluido describe la estructura de las membranas biolgi-
uido de la estructura cas, en el cual las membranas se consideran como soluciones bidimensiona-
de la membrana les de lpidos y protenas globulares orientados. Muchas protenas son libres
de moverse lateralmente en el plano de la bicapa y este movimiento puede
rastrearse usando la tcnica de recuperacin de la fluorescencia despus de
fotoblanqueo (FRAP).
Dominios lipdicos Dentro de las membranas biolgicas, lpidos y protenas se pueden agrupar
juntos en dominios discretos. Las balsas de lpidos son dominios de la mem-
brana plasmtica que estn enriquecidos con colesterol, esfingomielina y glu-
coesfingolpidos, as como con protenas modificadas por lpidos.
Puricacin y El primer paso en la purificacin de las protenas integrales de la membrana
reconstitucin de es la perturbacin de la estructura de la membrana mediante su solubilizacin
las protenas con un detergente (p. ej., Triton X-100). Una vez solubilizada, la regin hidr-
de la membrana foba de la protena es recubierta con una capa de molculas anfipticas del
detergente, lo que permite que la protena permanezca en solucin acuosa y
sea purificada, como sucede en una protena globular soluble. Una vez purifi-
cadas, las protenas integrales de la membrana pueden reconstituirse dentro
de vesculas artificiales de lpidos (liposomas) con el fin de estudiar su funcin.
Carbohidratos de la Los residuos de azcar se encuentran slo en el lado extracelular de las mem-
membrana branas biolgicas, fijos a los lpidos para formar glucolpidos o a las protenas
para formar glucoprotenas. Los carbohidratos forman una cubierta protec-
tora sobre la superficie externa de la clula y estn comprometidos en el reco-
nocimiento intercelular.
Temas relacionados (A2) Clulas eucariotas (C1) Purificacin de las protenas
(A4) Imgenes celulares (E1) Lpidos de la membrana
(B2) Estructura y funcin de (E5) Transduccin de seales
la protena (H5) Glucosilacin de protenas
E2ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA 109

Protenas integrales de la membrana la membrana ya que puede aislarse con facilidad de


Las protenas de membrana se clasifican en perifricas otras membranas y componentes intracelulares. Una
(extrnsecas) o integrales (intrnsecas) dependiendo de de las principales protenas de la membrana plasmti-
su grado de asociacin a la membrana. Las protenas ca de los eritrocitos es la glicoforina A, una protena de
integrales de la membrana estn estrechamente uni- 131 aminocidos que fue la primera protena integral
das a la misma a travs de interacciones con el centro de la membrana en secuenciarse (seccin C3). sta
hidrfobo de la bicapa (vase la figura E2-4) y pueden revel que la cadena polipeptdica de la glicoforina
extraerse de ella slo mediante el uso de agentes que consta de tres dominios:
destruyan la estructura de la membrana, como los sol- 1. Una regin N terminal en el lado extracelular de la
ventes orgnicos (p. ej., cloroformo) o los detergentes membrana rica en residuos polares y cargados que
(vase ms adelante). La mayor parte de las protenas contienen todos los sitios de glucosilacin ligados
integrales de la membrana tiene una o ms regiones de a N y O (seccin H5).
la cadena polipeptdica que atraviesan la bicapa lip-
dica e interactan de forma no covalente con las cadenas 2. Una regin central rica en residuos apolares que
hidrfobas de cidos grasos. No obstante, algunas pro- est oculta en el centro hidrfobo de la bicapa.
tenas estn fijas en la membrana por una unin cova- 3. Una regin C terminal rica en residuos polares y
lente a una cadena de un cido graso o a una cadena cargados que est expuesta en el lado citoslico de
hidrocarbonada (vase ms adelante). Como los lpidos, la membrana (figura E2-1a).
las protenas integrales de la membrana son anfipticas,
tienen regiones hidrfobas e hidrfilas y se distribuyen Como en la mayora de las protenas transmembranales,
de manera asimtrica a travs de la bicapa (seccin E1). la regin hidrfoba que atraviesa la membrana consiste
sobre todo en residuos de aminocidos con cadenas
laterales hidrfobas que estn plegadas en una configu-
Glucoforina, una protena transmembranal racin de hlice  (seccin B2). Ya que cada residuo de
Debido a que los eritrocitos (glbulos rojos) no contie- aminocidos agrega 0.15 nm a la longitud de una hlice
nen ningn organelo intracelular (en esencia, son un , una hlice de 25 residuos debera tener una lon-
saco membranoso para transportar hemoglobina; sec- gitud de 3.75 nm, slo lo suficiente para atravesar el cen-
cin B3), su membrana plasmtica es un sistema modelo tro hidrfobo de la bicapa. Las cadenas laterales hidr-
conveniente para realizar estudios de la estructura de fobas de los residuos de la hlice protruyen hacia fuera

+
a) NH3
Oligosacridos ligados al O
Dominio
hidrlo
extracelular +
+ + + Oligosacrido ligado a N

Bicapa Hlice hidrfoba


lipdica central

+ + +
Dominio
hidrlo
citoslico
COO

Asas hidrlas
+
NH3
b) EXTRACELULAR

Bicapa
lipdica Hlices
hidrfobas

CITOSOL
COO

Figura E2-1. Protenas integrales de la membrana: a) regin donde la protena


atraviesa por nica vez la membrana (p. ej., glucoforina); b) mltiples regiones
donde la protena atraviesa la membrana (p. ej., la bacteriorrodopsina).
110 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

desde el eje de la hlice para interactuar mediante inte- Unas pocas protenas transmembranales, por ejemplo
racciones hidrfobas con las cadenas de cidos grasos. la protena porina de la membrana externa de la bacte-
En cualquier lado de esta hlice  hidrfoba hay grupos ria E. coli, no contienen hlices  y en su lugar atraviesa
de aminocidos con cadenas laterales cargadas que in- la membrana con una estructura formada de hebras .
teractan de manera no covalente con las cargas opues- Cada hebra  est unida al hidrgeno de la hebra vecina
tas de los principales grupos polares de los lpidos de la en una disposicin antiparalela que forma una hoja 
membrana. simple (seccin B2). La hoja  se enrolla para formar un
cilindro hueco que funciona como un canal a travs de
Protenas que atraviesan la membrana la bicapa.
muchas veces
Algunas protenas transmembranales tienen hlices  Protenas ancladas a lpidos
que atraviesan la membrana muchas veces. La bacterio- Un nmero significativo de protenas integrales de
rodopsina, una protena encontrada en una bacteria la membrana en los eucariotas carece de regiones trans-
fotosinttica, capta energa de la luz y la usa para bom- membranales, pero estn ancladas a una u otra mono-
bear protones a travs de la membrana bacteriana. capa de la bicapa a travs de uniones covalentes entre
Como numerosas protenas integrales, como las de los la protena y una cadena lipdica hidrocarbonada. Varias
receptores acoplados a la protena G (seccin E5), la protenas, incluida la protena prinica (el agente cau-
cadena polipeptdica de las asas de la bacteriorrodop- sal de la enfermedad de las vacas locas), estn fijas de
sina cruzan de regreso y de salida la bicapa lipdica siete manera estable a la superficie celular a travs de un enla-
veces (figura E2-1). Cada una de las siete hlices  trans- ce covalente de su aminocido del C terminal al grupo
membranales est unida a la siguiente por una breve cabeza de un fosfatidilinositol mediante un puente de
regin hidrfila de la cadena polipeptdica que est etanolamina-fosfato-trimanosa, las llamadas prote-
expuesta sobre el lado extracelular o el citoslico de la nas ancladas al glucosilfosfatidilinositol (GPI) (figura
membrana. Otras protenas que atraviesan la mem- E2-2a). Esta estructura compleja est construida por la
brana por mltiples trechos tienen de dos hasta 14 hli- adicin secuencial de residuos individuales de azcar y
ces transmembranales. Por ejemplo, la protena de la fosfato de etanolamina al fosfatidilinositol. Un pptido
banda 3 del intercambiador aninico de la membrana con seal hidrfoba en el C terminal es eliminado de
plasmtica del eritrocito que transporta cloro y bicarbo- la protena en la luz del RER y la GPI preformada fija se
nato a travs de las asas de la membrana, cruza la bicapa aade al nuevamente expuesto aminocido del C termi-
lipdica de regreso y de salida hasta 14 veces. nal (vase la seccin H4 para mayores detalles).

a) Cadena polipeptdica b)
EXTRACELULAR
M EtP Bicapa
M lipdica
N Gly CITOSOL
M
G I Miristato
EXTRACELULAR
C
Bicapa
lipdica
CITOSOL

c) d)

EXTRACELULAR EXTRACELULAR
Bicapa Bicapa
lipdica lipdica
Cys CITOSOL CITOSOL
Farnesilo -Hlice
C
N Palmitato

Figura E2-2. Protenas modicadas por lpidos: a) una protena ja al glucosilfosfatidilinositol


(I, inositol; G, glucosamina; M, manosa; EtP, fosfato de etanolamina); b) una protena
miristoilada; c) una protena prenilada; d) una protena palmitoilada.
E2ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA 111

Otras protenas se anclan de manera transitoria a la cara Citoesqueleto


citoslica de la membrana mediante ligaduras amida o La superficie citoslica de la membrana plasmtica eri-
por medio de una molcula de miristato (C14:0) a un troctica est cubierta por una red de protenas perif-
residuo Gly N terminal (protenas miristoiladas; figura ricas de la membrana que constituyen el citoesqueleto
E2-2b), o mediante un enlace tioter de un farnesilo de (figura E2-3) (seccin A2). El componente principal de
15 carbonos o de un hidrocarburo poliinsaturado gera- tal citoesqueleto es la espectrina, la cual se pliega en
nilgeranilo de 20 carbonos a un residuo Cys C termi- una espiral enrollada helicoidal  de triple hebra para
nal (protenas preniladas; figura E2-2c). El farnesilo y formar cadenas largas. Las cadenas de espectrina se fijan
el geranilgeranilo son sintetizados a partir de pirofos- a la membrana plasmtica a travs de interacciones con
fato de isopentenilo, el precursor del colesterol (sec- dos protenas perifricas, la anquirina y la protena de
cin K5). Algunas protenas tambin son modificadas banda 4.1. La anquirina forma un enlace cruzado entre
en los residuos Cys con palmitato fijo de manera cova- la espectrina y el dominio citoslico del intercambia-
lente (C16:0) (protenas palmitoiladas). stas incluyen dor de aniones integral, la protena de banda 3, mientras
algunas con polipptidos que atraviesan la membrana que la banda 4.1 promueve la unin de los filamentos
(figura E2-2d), algunas protenas preniladas y algunas de actina (seccin A2) a las cadenas de espectrina que
protenas miristoiladas. Muchas de las protenas que la ligan con el dominio citoslico de la glicoforina. El
intervienen en la sealizacin celular, como las prote- citoesqueleto otorga a la membrana plasmtica del eri-
nas G y la familia de protenas Ras, son modificadas por trocito mayor fuerza y flexibilidad y es importante en
los lpidos (seccin E5). el mantenimiento y alteracin de la forma de la clula.
En otras clulas de los mamferos, el citoesqueleto tiene
Protenas perifricas de la membrana una funcin similar pero consiste en otras numerosas
protenas que se entrecruzan a travs del citoplasma
Las protenas perifricas de la membrana estn uni- (seccin A2).
das menos estrechamente a la bicapa lipdica que las
protenas integrales y pueden removerse con facilidad
mediante lavado de las membranas con una solucin de
alta fuerza inica (p. ej., NaCl 1 M) o de pH extremo.
Modelo de mosaico uido de la
Estos procedimientos dejan a la bicapa lipdica intacta, estructura de la membrana
pero destruyen las interacciones inicas y los puentes En 1972, S. Jonathan Singer y Garth Nicholson propu-
de hidrgeno que mantienen a las protenas perifricas sieron el modelo del mosaico fluido para la estructura
en la superficie de la membrana. Ninguna parte de una completa de las membranas biolgicas, en la cual las
protena perifrica de la membrana interacta con el membranas pueden verse como soluciones bidimensio-
centro hidrfobo de la bicapa. Las protenas perifricas nales de lpidos y protenas globulares orientados (figura
de la membrana pueden encontrarse en la superficie E2-4). Las protenas integrales de la membrana pueden
externa o interna de la bicapa y pueden relacionarse con considerarse como icebergs que flotan en un mar
la membrana a travs de interacciones no covalentes lipdico bidimensional. Ellos propusieron que la orga-
con el grupo lipdico principal, con otras protenas de la nizacin en bicapa de los lpidos podra actuar como
membrana o con ambos (vase la figura E2-4). Una vez un solvente para las protenas integrales de la mem-
removidas de la membrana, las protenas perifricas se brana anfipticas y como una barrera de permeabi-
comportan como protenas globulares solubles en agua lidad. Tambin propusieron que algunos lpidos pue-
y pueden ser purificadas como tales (seccin C1). den interactuar con ciertas protenas de la membrana,

Banda 3 Glicoforina
EXTRACELULAR

Bicapa lipdica

CITOSOL Espectrina
Anquirina
Actin
Actina
Banda 4.1

Figura E2-3. Citoesqueleto del eritrocito.


112 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

Protena
perifrica
Oligosacridos Glucolpidos

Glucoprotena

Hojuela externa

Hojuela interna

Cadenas de cidos
grasos hidrfobas

Centro
Cabeza polar hidrla
hidrfobo
Protenas
integrales Protena perifrica

Figura E2-4. Modelo de mosaico lquido de la estructura membranosa.

que dichas interacciones podran ser esenciales para el la membrana debido a que interactan con el citoesque-
funcionamiento normal de la protena y que las pro- leto del interior de las clulas (vase ms adelante).
tenas de la membrana podan ser libres de difundirse
El movimiento lateral de las protenas en una mem-
en direccin lateral en el plano de la bicapa, a menos
brana tambin puede visualizarse por microscopia de
que estuvieran restringidas de alguna forma, pero que
fluorescencia (seccin A4) a travs del uso de la tcnica
no seran capaces de atravesar de un lado al otro de la
de recuperacin de la fluorescencia despus del foto-
bicapa. Ahora este modelo cuenta con el soporte de una
blanqueamiento (FRAP). Primero, la protena de la mem-
amplia variedad de observaciones experimentales.
brana se marca de manera especfica con un compuesto
Movimiento y distribucin de la protena fluorescente (seccin A4) y luego, mientras se visualiza
integral de la membrana la superficie celular a travs de un microscopio de fluo-
rescencia, las molculas fluorescentes de una pequea
Muchas protenas son libres de moverse hacia los lados
regin son destruidas (blanqueadas) mediante un pulso
en el plano de la bicapa. Un experimento usado para
intenso de luz de un lser. La fluorescencia de esta regin
mostrar esto incluy la fusin de clulas de ratn cul-
blanqueada se inspecciona en funcin del tiempo en una
tivadas con clulas humanas cultivadas bajo condicio-
etapa posterior en funcin del tiempo, a medida que otras
nes apropiadas para formar una clula hbrida conocida
protenas marcadas con fluorescencia se mueven hacia
como heterocarin (figura E2-5a). Las clulas de ratn
dentro de la regin blanqueada de la membrana. La tasa
fueron marcadas con anticuerpos especficos contra pro-
de recuperacin de la fluorescencia depende de la movi-
tenas de ratn a las cuales se fij el colorante fluorescen-
lidad lateral de las protenas marcadas con fluorescencia.
te verde fluorescena de manera covalente, mientras que
las clulas humanas fueron marcadas con el coloran- La distribucin de las protenas en las membranas puede
te fluorescente rojo rodamina (seccin A4). Tras la fusin revelarse por microscopia electrnica mediante la tc-
celular, al observarlas con el microscopio de fluorescen- nica de criofractura (figura E2-5b). En esta tcnica, un
cia (seccin A4), las protenas de ratn y humana fueron espcimen de membrana se congela con rapidez a la
segregadas en las dos mitades del heterocarin (figura temperatura del nitrgeno lquido (196 C) y luego se
E2-5a). Despus de 40 minutos a 37 C, sin embargo, las fractura mediante un impacto fuerte. La bicapa se divide
protenas de ratn y humanas estaban completamente con frecuencia en las dos monocapas, lo que revela el
entremezcladas. La reduccin de la temperatura por interior. La superficie expuesta se recubre entonces
abajo de 15 C inhibi este proceso, lo que indic que con una pelcula de carbono y se sombrea con pla-
las protenas son libres para difundirse lateralmente tino con el fin de que sea visualizada en el microscopio
en la membrana y que este movimiento se lentifica a electrnico (seccin A4). La superficie fracturada de la
medida que la temperatura se reduce. Debe hacerse membrana ha revelado la presencia de numerosas pro-
notar, sin embargo, que algunas protenas integrales de tuberancias distribuidas al azar que corresponden a las
la membrana no son libres de moverse lateralmente en protenas integrales transmembranales.
E2ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA 113

Protenas de ratn Protena humana


a) b)
Protena integral
de la membrana

Clula de ratn Clula humana


Fusin

Heterocarin

37 C 15 C

Direccin de
la fractura

Figura E2-5. a) Movimiento y b) distribucin (como se muestra por microscopia


electrnica de criofractura) de las protenas integrales de la membrana.

Dominios lipdicos suele conseguirse al aadir un detergente, que solubi-


Las membranas biolgicas no son slo una mezcla liza la membrana. Con el fin de solubilizar la membrana
homognea de lpidos y protenas. Dentro de ellas hay pero sin desnaturalizar las protenas, se usan deter-
dominios acotados en los cuales ciertos lpidos y pro- gentes suaves como el Triton X-100 o el octilglucsido
tenas se agrupan juntos para formar unidades estruc- (figura E2-6), en lugar de detergentes ms fuertes como
turales y funcionales. Por ejemplo, el agrupamiento el SDS. Como las molculas del detergente son en s mis-
conjunto de colesterol, esfingomielina y glucoesfingo- mas anfipticas, se intercalan con facilidad dentro de la
lpidos en la cara externa de la bicapa, ms otros lpidos bicapa lipdica y rompen las interacciones hidrfobas.
de la cara opuesta interior, da origen a las balsas lipdi- Una vez que se solubiliza, la regin hidrfoba de la pro-
cas. Varias protenas modificadas por lpidos, como las tena integral es revestida por una capa de molculas
protenas de la monocapa externa ancladas al GPI y las del detergente, las cuales le permiten a la protena per-
protenas miristoiladas y palmitoiladas de la monocapa manecer en solucin (figura E2-7a). La protena solubi-
interna, se asocian con balsas de lpidos mismas que lizada est entonces en condiciones de ser purificada
han sido implicadas en varios procesos celulares como como una protena globular soluble en agua (seccin
la sealizacin celular (seccin E5) y el transporte de C1), en tanto el detergente se mantenga en el amortigua-
protenas y lpidos desde el aparato de Golgi a la mem- dor para evitar la agregacin y la prdida de la protena.
brana plasmtica. Una vez purificada, una protena integral de membrana
puede reincorporarse (reconstituirse) dentro de vescu-
las artificiales de lpidos (liposomas) con el propsito
Puricacin y reconstitucin de las de estudiar su funcin (figura E2-7b). Si se aaden fos-
protenas membranales folpidos a la protena en la solucin con detergente y el
El primer paso en la purificacin de una protena inte- detergente se dializa hacia afuera, se forman de manera
gral de la membrana es destruir sus interacciones con espontnea vesculas de fosfolpidos que contienen a la
otras protenas y lpidos de la membrana. Lo anterior protena. A partir de stas, puede estudiarse la funcin de

a) b)
CH3 CH3 CH2OH
H3C C CH2 C O (CH2 CH2 O)10 H H O O (CH2) 7 CH3
H H
CH3 CH3 OH H
HO H
H OH

Figura E2-6. Estructuras del a) Triton X-100 y b) del octilglucsido.


114 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

Protena integral
a)

Bicapa Detergente
lipdica

Protena integral solubilizada


por el detergente

ATP

Ca2+

b) ADP
+Pi

Dilisis
+
Ca2+

Protena de Fosfolpidos
transporte
solubilizada
por el detergente

ATP-asa de Ca2+ funcional reconstituida


dentro de la vescula articial de lpidos

Figura E2-7. a) Solubilizacin con detergente y b) reconstitucin de una protena


integral de membrana dentro de vesculas articiales de lpidos.

la protena. Por ejemplo, si se reconstituye la ATP-asa de o integrales de la membrana. Estos glucolpidos y gluco-
Ca2+ dentro de las vesculas lipdicas, su funcin (esto protenas son abundantes en la membrana plasmtica de
es, el transporte de calcio durante la hidrlisis del ATP) las clulas eucariotas, pero estn prcticamente ausentes
puede estudiarse si se mide el calcio del interior de la de la mayora de las membranas intracelulares, en particu-
vescula al agregar calcio y ATP por fuera de ella (figura lar de la membrana mitocondrial interna y de las lmi-
E2-7b). nas del cloroplasto. En las glucoprotenas, los residuos
de azcar pueden fijarse a la cadena polipeptdica a tra-
vs del grupo hidroxilo de la cadera lateral de residuos
Carbohidratos de la membrana de Ser o Thr como oligosacridos unidos al oxgeno, o
La superficie extracelular de la membrana plasmtica a travs de un grupo amida de la cadena lateral del Asn
est cubierta con frecuencia con una capa protectora como oligosacridos ligados al nitrgeno (seccin H5).
de carbohidratos. Los residuos de azcar de tal reves- El carbohidrato de la cara extracelular de la membrana
timiento de carbohidratos pueden encontrarse unidos a no slo desempea un papel protector sino que tam-
ciertos lpidos como los glucoesfingolpidos (seccin E1) bin interviene en el reconocimiento intercelular y en
o a las cadenas polipeptdicas de las protenas perifricas el mantenimiento de la asimetra de la membrana.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E3Transporte de membrana:
molculas pequeas
Notas clave
Permeabilidad de la La membrana plasmtica es una barrera selectivamente permeable. Algunas
membrana molculas pequeas, lipfilas pueden pasar directamente a travs de la bicapa
sin ayuda (transporte no-mediado), mientras que las molculas hidrfilas/car-
gadas requieren la presencia de protenas de transporte integrales de la mem-
brana (transporte mediado).
Transporte pasivo El movimiento de las molculas a travs de una membrana por transporte
pasivo no requiere ningn aporte de energa metablica. Las molculas se mue-
ven desde una concentracin alta a una concentracin ms baja.
Difusin simple El transporte pasivo por difusin simple (es decir, de agua, gases, urea, hormo-
nas esteroideas) no requiere la presencia de protenas integrales de la mem-
brana y la velocidad del movimiento es directamente proporcional al gradiente
de concentracin de las molculas a travs de la membrana.
Difusin facilitada El transporte pasivo por difusin facilitada requiere la presencia de protenas
integrales de la membrana especficas (canales, transportadores) para facilitar el
movimiento de la molcula (p. ej., glucosa, otros azcares, aminocidos) a travs
de la membrana. La protena transportadora (p. ej., el transportador de glucosa
del eritrocito) es una molcula especfica para una molcula particular. En algu-
nas clulas, el agua pasa a travs de protenas con canales llamadas acuaporinas.
Transporte activo El transporte activo de una molcula contra su gradiente de concentracin a
travs de una membrana requiere el aporte de energa metablica.

Transporte activo En el caso del transporte activo impulsado por el ATP, la energa requerida para
impulsado por el ATP el transporte de la molcula o ion (Na+, K+, Ca2+ o H+) a travs de la membrana se
(transporte activo deriva de la hidrlisis acoplada del ATP (p. ej., ATP-asa de Na+/K+, un ejemplo de
primario) una ATP-asa de tipo P). Los glucsidos cardiacos digitalina y ouabana, los cuales
se usan ampliamente en el tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva,
inhiben a la ATP-asa de Na+/K+.
Transporte activo En el transporte activo impulsado por iones, el movimiento de la molcula a
impulsado por iones transportar a travs de la membrana se acopla al movimiento de un ion (p. ej.,
(transporte activo Na+, H+) a favor del gradiente de concentracin. Si la molcula a transportar y
secundario) el ion se mueven en la misma direccin a travs de la membrana, el proceso se
llama simporte (p. ej., el transportador de Na+/glucosa); si la molcula y el ion
se mueven en direcciones opuestas, se llama antiporte (p. ej., el intercambiador
de Na+/Ca2+).
Transporte de glucosa El transporte de glucosa a travs de las clulas del revestimiento del epitelio
dentro de las clulas polarizados del intestino incluye su transporte a travs de la membrana api-
epiteliales intestinales cal por el simportador de Na+/glucosa; la energa para el movimiento de la glu-
cosa procede del movimiento del sodio a favor de su gradiente de concentra-
cin. La concentracin de los iones Na+ en el interior de la clula se mantiene a
un nivel bajo por la accin de la ATP-asa de Na+/K+ de la membrana basolateral.
Entonces, la glucosa abandona la clula a travs de la membrana basolateral
por difusin facilitada con la mediacin del transportador de glucosa. El movi-
miento del Na+ y la glucosa a travs de la clula establece una diferencia de
presin osmtica que causa su seguimiento por parte del agua por difusin
simple, lo cual constituye la base de la terapia de rehidratacin oral.
116 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

Temas relacionados (E1) Lpidos de la membrana (E6) Funcin nerviosa


(E2) Estructura de la membrana

Permeabilidad de la membrana luego se disuelve dentro de la solucin acuosa del lado


Una capa pura de fosfolpidos, con sus grupos hidrfo- opuesto. La velocidad de difusin es directamente pro-
bos internos (seccin E1), es permeable al agua, gases porcional al gradiente de concentracin de la molcula
(O2, CO2, N2), pequeas molculas polares sin carga (p. ej., a travs de la membrana y el proceso no es saturable
urea, etanol) y grandes molculas lipfilas (p. ej., hor- (figura E3-1a).
monas esteroideas). Sin embargo, es impermeable a
las grandes molculas polares sin carga (p. ej., glucosa), Difusin facilitada
iones (Na+, K+, Cl, Ca2+) y a molculas polares con carga A diferencia de la difusin simple, la difusin facilitada
(p. ej., aminocidos, ATP, glucosa 6-fosfato). El primer (o mediada por transportador) de una molcula a travs
grupo de molculas puede cruzar una membrana bio- de una membrana biolgica depende de las protenas
lgica sin ayuda y sin aporte de energa (transporte sin especficas integrales de las membranas (seccin E2),
mediacin), mientras que el ltimo grupo requiere la que se denominan indistintamente canales, acarrea-
presencia de protenas de transporte integrales de la dores, permeasas y transportadores. La molcula a
membrana y, en algunos casos, un aporte de energa transportar se une a la protena integral en un lado de la
para viajar a travs de la barrera de otro modo imper- membrana; la protena entonces sufre un cambio con-
meable de la membrana (transporte mediado). Por formacional, transporta la molcula travs de la mem-
tanto, la membrana plasmtica y las membranas de los brana y luego la libera en el otro lado. Las molculas
organelos internos son barreras selectivamente per- as transportadas a travs de las membranas pueden ser
meables, que mantienen un ambiente interno diferente. hidrfilas como la glucosa, otros azcares y aminoci-
dos. Las protenas transportadoras son especficas para
Transporte pasivo una molcula o un grupo particular de molculas con
similitudes estructurales. Las protenas de transporte
El transporte pasivo de molculas a travs de la mem- pueden saturarse, muestran la cintica de unin tipo
brana no requiere un aporte de energa metablica. La Michaelis-Menten (Km y Vmx) (figura E3-1b) y son influi-
velocidad de transporte (difusin) es proporcional al das por la temperatura, el pH y molculas inhibidoras
gradiente de concentracin de la molcula a travs de de una forma similar a lo que le sucede a las enzimas
la membrana. Hay dos tipos de transporte pasivo: difu- (secciones D1 y D3).
sin simple y difusin facilitada.
Un ejemplo de difusin facilitada es la captacin de la
glucosa en los eritrocitos por el transportador de glu-
Difusin simple cosa. El transportador de glucosa de eritrocitos o uni-
Slo las molculas pequeas sin carga o hidrfobas (H2O, portador (GLUT1) es una protena integral de la mem-
O2, CO2, otros gases, urea y etanol) o las molculas lipfi- brana de 45 kDa de masa que est orientada de manera
las ms grandes (p. ej., hormonas esteroideas, las cuales asimtrica en la membrana plasmtica. Esta protena
derivan del colesterol; seccin K5) cruzan la bicapa lip- uniportadora tiene una estructura que atraviesa la
dica por difusin simple, sin intervencin de protenas membrana con 12 hlices  (seccin E2), la cual forma
de membrana, de manera que no hay especificidad. La un poro central a travs del cual pasa la molcula de
molcula en solucin acuosa en un lado de la mem- glucosa tras los cambios conformacionales de la pro-
brana se disuelve dentro de la bicapa lipdica, la cruza y tena (figura E3-2). Todos los pasos en el transporte de

a) b) Vmx
Tasa de captacin (V)
Tasa de captacin

Difusin facilitada
DIfusin
simple Vmx

Km
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Concentracin externa de O2 Concentracin externa de glucosa (mM)

Figura E3-1. Cinticas de la difusin a) simple y b) facilitada.


E3TRANSPORTE DE MEMBRANA: MOLCULAS PEQUEAS 117

Glucosa

LADO
EXTERNO
MEMBRANA
PLASMTICA

CITOSOL
Unidad de El transportador La glucosa
Transportador glucosa El transportador
sufre un cambio difunde hacia
de glucosa recupera su
conformacional el citosol
conformacin original

Figura E3-2. Difusin facilitada de la glucosa en los eritrocitos.

la glucosa hacia dentro de la clula son completamente el aporte de energa metablica. sta puede derivarse
reversibles y la direccin del movimiento de la glucosa desde el acoplamiento directo a la hidrlisis del ATP o
depende de las concentraciones relativas de la gluco- mediante el acoplamiento al movimiento de un ion a
sa a ambos lados de la membrana. Con el fin de mantener favor de su gradiente de concentracin.
el gradiente de concentracin a travs de la membrana,
la hexocinasa fosforila con rapidez a la glucosa dentro
Transporte activo impulsado por el ATP
de la clula para convertirla en glucosa 6-fosfato (sec-
cin J3), la cual no es un sustrato demasiado grande (transporte activo primario)
para el transportador de glucosa. El transportador de la En este caso, la energa requerida para el transporte de la
glucosa de eritrocitos es altamente especfico para la D-glu- molcula a travs de la membrana deriva de la hidrlisis
cosa (Km = 1.5 mM), mientras que el L-ismero no biol- acoplada del ATP. Se han identificado numerosas fami-
gico es transportado a una velocidad apenas medible. La lias de transportadores dependientes del ATP, como las
D-manosa y la D-galactosa, las cuales difieren de la D-glu- ATP-asas de tipo P y los transportadores ABC. Un ejemplo
cosa en la configuracin en el tomo de carbono 1 (sec- de un buen estudio de ATP-asa de tipo P es el de la ATP-
cin J1), son transportadas a velocidades intermedias. asa de Na+/K+ que interviene en el movimiento de los
En consecuencia, el transportador tiene una afinidad iones de Na+ y de K+ a travs de la membrana plasmtica
ms alta por la glucosa que por los otros azcares. de los eucariotas. Todas las clulas mantienen una con-
centracin interna alta de K+ y una concentracin interna
Aunque el agua atraviesa con facilidad las membranas
baja de Na+. El gradiente de Na+/K+ resultante a travs
debido a su pequeo tamao, su alta concentracin y
de la membrana plasmtica es importante para el trans-
la falta de una carga elctrica formal, muchas clulas,
porte activo de ciertas molculas y el mantenimiento
como los eritrocitos y las del rin, contienen protenas
del potencial elctrico de la membrana (seccin E6). El
con canales para el agua, las acuaporinas, que aceleran
regulador de la conductancia transmembranal en la
el flujo osmtico del agua. Cada protena acuaporina es
fibrosis qustica (CFTR) es un ejemplo de un transporta-
un tetrmero de subunidades idnticas de 28 kDa, con
dor ABC. Esta protena, que es defectuosa en individuos
seis hlices  transmembranales en cada subunidad. Las
con la fibrosis qustica hereditaria, transporta Cl fuera
molculas de agua se mueven a travs del poro central
de la clula. El movimiento a travs de la membrana de
de cada subunidad. Las acuaporinas permiten que las
Na+, K+, Ca2+ e H+, as como de varias otras molculas, se
clulas muevan grandes cantidades de agua con rapidez
acopla directamente a la hidrlisis del ATP.
a travs de su membrana plasmtica.
Estructura y accin de la ATP-asa de Na+/K+
Transporte activo La ATP-asa de Na+/K+ es una protena integral de la mem-
El transporte activo, en el cual una molcula es transpor- brana que consiste en una subunidad  de 110 kDa que
tada desde una concentracin baja a una alta, requiere contiene los sitios de unin de iones y una subunidad 

LADO 3 Na
+
K+ bajo
Na+ alto
EXTERNO

MEMBRANA
PLASMTICA
CITOSOL ATP ADP+Pi K+ alto
2 K+ Na+ bajo
Figura E3-3. ATP-asa de Na+/K+.
118 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

de 55 kDa de funcin desconocida, que forma un hete- Transporte de glucosa en las clulas
rotetrmero ()2 (figura E3-3). Despus de la hidrlisis epiteliales intestinales
de una molcula de ATP a ADP y Pi (el Pi se une de mane-
ra transitoria a un residuo aspartilo en la protena), la Las clulas que revisten la luz del intestino estn pola-
protena sufre un cambio conformacional y se bombean rizadas, lo que significa que tienen dos lados o domi-
tres iones Na+ fuera de la clula a travs de la membra- nios diferentes que tienen asimismo composiciones
na plasmtica y dos iones K+ en la direccin opuesta, distintas en lpidos y protenas. La membrana apical o
hacia dentro de la clula. Ambos iones se mueven en el borde en cepillo que mira hacia la luz est altamente
contra de sus gradientes de concentracin a travs de plegado en microvellosidades que incrementan el rea
la membrana; por consiguiente, requieren de un aporte de superficie disponible para la absorcin de nutrientes.
de energa. No se produce transporte a menos que el ATP El resto de la membrana plasmtica, la superficie baso-
se hidrolice y ste no se hidroliza si no hay Na+ y K+ para lateral, est en contacto con las clulas vecinas y con los
transportar (es decir, se trata de un sistema acoplado). capilares sanguneos (figura E3-5). El movimiento entre
Los glucsidos cardiacos o los esteroides cardiotnicos, las clulas epiteliales adyacentes se evita mediante la
digitalina (encontrado en extractos de hojas de digital formacin de uniones estrechas alrededor de las clu-
prpura) y ouabana, inhiben a la ATP-asa de Na+/K+. La las cerca del dominio apical. En consecuencia, cualquier
resultante disminucin del gradiente de sodio inhibe al molcula de nutriente que se encuentra en la luz del
intercambiador de Na+-Ca2+ (vase ms adelante), lo que intestino tiene que pasar a travs del citosol de la clula
resulta en un incremento del calcio intracelular, el cual epitelial para que pueda ingresar a la sangre.
mejora la contractilidad del msculo cardiaco. Estos fr- La glucosa (o los otros azcares y aminocidos) se trans-
macos se usan en forma amplia en el tratamiento de la porta a travs de la membrana apical desde una concen-
insuficiencia cardiaca congestiva. tracin relativamente baja en la luz del intestino a una
concentracin relativamente alta en el citosol de la clula
Transporte activo impulsado por iones epitelial por medio de un simportador de Na+/glucosa
(figura E3-5). Esto es una forma de transporte activo
(transporte activo secundario) impulsado por un ion (secundario); la energa para el
En este caso, el movimiento de la molcula a transportar movimiento de la glucosa en contra de su gradiente de
a travs de la membrana se acopla al movimiento de un concentracin procede del movimiento del sodio a favor
ion, en general Na+ o H+. La energa para el movimiento de su gradiente de concentracin. El flujo sanguneo a
de la molcula en contra de su gradiente de concentra- travs de los capilares en el lado basolateral de la clula
cin a travs de la membrana procede del movimiento epitelial mantiene un gradiente de concentracin de la
del ion a favor de su gradiente de concentracin (elec- glucosa a travs de esta membrana, lo que permite que
troqumico). Si la molcula y el ion se mueven en la la glucosa se mueva fuera de la clula por difusin faci-
misma direccin, se denomina simporte y la protena litada a travs de un transportador de glucosa (un uni-
participante en el proceso se denomina un simportador portador), el cual es similar al transportador de la glu-
(p. ej., el transportador de Na+/glucosa; figura E3-4a); si cosa de eritrocitos (vase antes). La relativamente baja
la molcula y el ion se mueven en direcciones opuestas, concentracin del Na+ dentro de las clulas epiteliales se
se denomina antiporte y la protena participante en el mantiene gracias a una ATP-asa de Na+/K+ (vase antes)
proceso se llama antiportador (p. ej., el intercambiador en la membrana basolateral, un ejemplo de transporte
de Na+-Ca2+; figura E3-4b). activo impulsado por ATP (primario) (figura E3-5).

2+
a) b) Ca
LADO
EXTERNO
MEMBRANA
PLASMTICA
CiTOSOL
Na
+
Glucosa 3Na+

Figura E3-4. Mecanismos de cotransporte impulsados por iones.


a) Proceso de simporte que incluye un simportador (p. ej., el
transportador de Na+/glucosa; b) proceso de antiporte que incluye
un antiportador (p. ej., el intercambiador de Na+-Ca2+).
E3TRANSPORTE DE MEMBRANA: MOLCULAS PEQUEAS 119

LUZ CLULA EPITELIAL SANGRE


INTESTINAL + +
Na baja Na alta
+ +
+
Na alta K alta K baja

Transportador
de glucosa
Glucosa Glucosa Glucosa
ATP
+ +
Na Na+ Na+ Na

+
Transportador K+ K
+
de Na /glucosa
ADP+Pi ATP-asa de Na+/K+
H 2O
H2O H 2O
Unin
estrecha
Membrana Membrana
apical basolateral

Figura E3-5. Transporte de glucosa, Na+ y agua a travs de las clulas del epitelio
intestinal.

Terapia de rehidratacin oral glucosa, el cual a su vez mejora el movimiento del agua
En la terapia de rehidratacin oral (ORT), se administra por smosis a travs de las clulas del epitelio intestinal
una solucin de glucosa y sal (NaCl) al paciente para hacia la sangre. Tomar slo agua es ineficaz ya que el in-
remediar su deshidratacin. ste es un importante tra- testino grueso usualmente secreta en vez de absorber
tamiento que adems es simple, no caro, pero de suma agua y iones Na+, los cuales despus son reabsorbidos.
importancia, el cual ha salvado la vida de muchos lac- Sin embargo, en sujetos con diarrea, el lquido secre-
tantes en los pases en desarrollo, quienes por otra parte tado dentro del intestino pasa a travs del intestino
hubieran muerto bajo los efectos de la deshidratacin, grueso tan rpido que se reabsorbe muy poco Na+, lo
por lo regular asociada a diarrea. La glucosa mejora que conduce a niveles muy bajos de este catin en el
la captacin del Na+ a travs del simportador de Na+/ cuerpo.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E4Transporte de membrana:
macromolculas
Notas clave
Exocitosis La exocitosis es el movimiento de macromolculas (protenas, hormonas, neu-
rotransmisores) fuera de la clula, a travs de la membrana plasmtica, hacia
el espacio extracelular. Todas las clulas secretan protenas en forma continua
mediante vas secretorias constitutivas, aunque muchas clulas (p. ej., las del
pncreas y las clulas nerviosas) tambin secretan protenas a travs de una va
secretoria regulada en respuesta a ciertos estmulos. Las protenas destinadas a
secretarse se sintetizan en los ribosomas unidos a la membrana del RER y luego
son transportadas en vesculas unidas a la membrana hasta el aparato de Golgi,
donde son distribuidas y empacadas en vesculas secretorias. Las vesculas
recubiertas transportan material por toda la clula, siendo los revestimientos
de protenas como clatrina, COPI o COPII. Las protenas SNARE median la fusin de
las vesculas con sus membranas blanco.
Endocitosis La endocitosis es la captacin de macromolculas desde el espacio extracelu-
lar hacia la clula a travs de la membrana plasmtica, mediante la formacin
de una vescula intracelular que se pellizca y se proyecta desde la membrana
plasmtica.
Fagocitosis La fagocitosis es la captacin de partculas grandes (p. ej., bacterias y dese-
chos celulares). Las partculas se unen a la superficie de las clulas fagocticas y
la membrana plasmtica, que entonces las ingiere mediante la formacin de
una gran vescula endoctica, el fagosoma. La mayora de los protozoarios utiliza
la fagocitosis como una forma de alimentacin, mientras que en los organismos
multicelulares slo unas pocas clulas especializadas (p. ej., macrfagos y neu-
trfilos) pueden realizar fagocitosis.
Endocitosis mediada por La endocitosis mediada por receptores, una forma de pinocitosis, es la cap-
receptores tacin selectiva de macromolculas extracelulares a travs de su unin a
receptores especficos de la superficie celular. Luego, el complejo receptor-
macromolcula se acumula en pequeas cavidades revestidas de clatrina, que
son endocitadas mediante una vescula revestida por clatrina. Los polippti-
dos de clatrina forman una estructura de tres patas conocida como triesque-
lin, el cual se ensambla dentro de un marco convexo similar a un cesto que
causa que la membrana se imagine en ese punto, y que acabe por pellizcarla
para formar una vescula (endosoma). Estas vesculas revestidas de clatri-
na migran dentro de la clula, donde la clatrina del revestimiento se pierde para
formar endosomas iniciales. A medida que los endosomas maduran y acaban
por fusionarse con los lisosomas, su contenido se acidifica y los receptores de
la superficie celular son reciclados hacia la membrana plasmtica. El colesterol,
en la forma de lipoprotenas de baja densidad, es captado dentro de las clulas
de los mamferos por endocitosis mediada por receptor.
Temas relacionados (E2) Estructura de la membrana (H4) Direccionamiento de protenas
(E5) Transduccin de seales (K6) Lipoprotenas
(E6) Funcin nerviosa
E4TRANSPORTE DE MEMBRANA: MACROMOLCULAS 121

Exocitosis de secrecin son dirigidas hacia la membrana plasm-


Con frecuencia, una clula necesita secretar molculas tica, y aquellas que contienen protenas lisosmicas se
ms grandes que las que pueden acomodarse en los sis- dirigen hacia los lisosomas.
temas de transporte que se estudiaron en la seccin E3. Pese a todo lo anterior, en ciertas clulas existe una va
Exocitosis se refiere al movimiento de macromolculas secretoria adicional, la va secretoria regulada (figura
como las protenas, hormonas, neurotransmisores, etc., E4-1). Esta va se encuentra en particular en clulas
a travs de la membrana plasmtica, hacia el espacio que se especializan en secretar rpidamente produc-
extracelular. Las vesculas unidas a las membranas que tos en respuesta a la demanda de un estmulo parti-
contienen la molcula a secretarse se fusionan con la cular. Por ejemplo, la hormona insulina y las enzimas
membrana plasmtica para liberar su contenido en el digestivas son secretadas por el pncreas, en tanto que
espacio extracelular. En la va secretoria constitutiva los neurotransmisores son secretados por las neuronas
(figura E4-1), las vesculas destinadas a la membrana (seccin E6). En tales clulas secretorias, las sustancias
plasmtica abandonan el aparato de Golgi en un flujo secretadas se almacenan de forma inicial en vesculas
constante. Las protenas y lpidos de la membrana de secretorias, las cuales se forman por brotes emitidos
estas vesculas proveen nuevo material para la mem- por la red trans-Golgi.
brana plasmtica, mientras que las protenas solubles,
neurotransmisores, etc., dentro de las vesculas se secre-
tan hacia el espacio extracelular. Todas las clulas tie- Vesculas revestidas y protenas
nen esta va constitutiva secretora. de revestimiento
Las vesculas que transportan materiales alrededor de
Las protenas destinadas a secretarse por la clula se la clula se conocen como vesculas revestidas debido
traducen en ribosomas fijos al RER (seccin H4). Las a que tienen protenas especficas que cubren su super-
vesculas que contienen estas protenas geman desde el
ficie externa (citoslica). Estas protenas de revesti-
RER, migran a travs del citosol y se fusionan con la mem-
miento actan como andamios flexibles y promueven
brana del aparato de Golgi (figura E4-1). Otras vesculas
la formacin de vesculas. Los tres tipos conocidos de
geman y mueven las protenas a travs de los diferentes
vesculas revestidas se caracterizan por sus revestimien-
compartimientos del aparato de Golgi, donde se efec-
tos protenicos:
tan varias modificaciones postraduccionales en las
protenas, como la glucosilacin O-ligada (seccin H5). 1. La clatrina forma un marco polidrico alrededor
Las protenas se empacan dentro de vesculas discretas de las vesculas que transportan material desde el
vesculas que geman de la red trans-Golgi y entonces aparato de Golgi hacia la membrana plasmtica, as
son dirigidas a las partes apropiadas de la clula (seccin como desde la membrana plasmtica hacia dentro
H4). Por ejemplo, las vesculas que contienen protenas de la clula (vase ms adelante).

ESPACIO
EXTRACELULAR Membrana plasmtica
Secrecin Estmulo
Secrecin
regulada
constitutiva
Vesculas
secretorias

Lisosoma

Golgi

Ribosomas
ER rugoso

Figura E4-1. Exocitosis de protenas por las vas secretorias constitutiva


y regulada.
122 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

2. La COPI reviste vesculas que participan en el trans- Fagocitosis


porte hacia delante (antergrado) y hacia atrs La fagocitosis es la endocitosis de grandes partculas
(retrgrado) entre compartimientos sucesivos del como las bacterias, desechos celulares o incluso clulas
aparato de Golgi. intactas a travs de grandes vesculas endocticas deno-
3. La COPII reviste vesculas que se mueven desde el RER minadas fagosomas. Para que sea posible ingerirla, pri-
hacia el aparato de Golgi. mero la partcula debe unirse a la superficie del fagocito,
por lo general a travs de receptores especializados de la
Fusin de vesculas mediada por protenas superficie celular. Una vez que se une a la superficie celu-
Cuando arriban a sus membranas de destino, las vescu- lar, el fagocito es estimulado para que comience a ingerir
las se fusionan con ellas y liberan sus contenidos en el la partcula con su membrana plasmtica, encerrndola
lado opuesto de la membrana blanco (figura E4-1). Este dentro del fagosoma (figura E4-2). Despus, el fagosoma
proceso de fusin es mediado por protenas integrales de se fusiona con un lisosoma (seccin A2) y la partcula
la membrana o ligadas a lpidos conocidas como SNARE. ingerida es degradada. El material utilizable ser trans-
La R-SNARE o v-SNARE (la cual contiene residuos conserva- portado por el citosol, mientras que las sustancias indi-
dos de Arg e incluye a la sintaxina) suele asociarse con geribles permanecern en los lisosomas, donde forman
la membrana de la vescula, mientras que la Q-SNARE o cuerpos residuales. En los protozoarios, la fagocitosis es
t-SNARE (la cual contiene residuos de Gln conservados e una forma de alimentacin, donde el material ingerido
incluye a la sinaptobrevina y a la SNAP-25), se asocian es destruido en los lisosomas y utilizado como alimento.
con sus membranas blanco. Diferentes SNARE Son escin- En los organismos multicelulares, slo unas pocas clu-
didas protedticamente por las toxinas tetnica y botu- las especializadas son capaces de realizar fagocitosis. Los
lnica, que son las causantes de las fatales enfermedades macrfagos y los neutrfilos (glbulos blancos) usan la
infecciosas ttanos y botulismo, respectivamente. fagocitosis para proteger al organismo contra la infeccin
por ingestin de microorganismos invasores. Los macr-
fagos tambin intervienen en la eliminacin de las clulas
Endocitosis muertas y daadas y de los desechos celulares.
La endocitosis es la captacin de macromolculas extra-
celulares a travs de la membrana plasmtica hacia el
interior de la clula. Una pequea porcin de la mem- Endocitosis mediada por receptores
brana plasmtica encierra progresivamente el material La endocitosis mediada por receptores, una forma de
que se capta, la cual primero se invagina y luego se des- pinocitosis (ingesta lquida de la clula), es la captacin
prende para formar una vescula intracelular que con- selectiva de macromolculas desde el lquido extracelu-
tiene a la molcula ingerida. lar, la cual requiere receptores de superficie especficos

Bacteria

Membrana
plasmtica

Lisosoma Fagosoma

Figura E4-2. Fagocitosis.


E4TRANSPORTE DE MEMBRANA: MACROMOLCULAS 123

de la clula y por lo regular incluye cavidades y vesculas Cavidades y vesculas revestidas de clatrina
revestidas de clatrina. Este proceso, que tiene lugar en la La microscopia electrnica (seccin A4) ha revelado
mayora de las clulas animales, incluye la unin espe- que las pozas revestidas de clatrina son invaginacio-
cfica de macromolculas a un receptor de la superficie nes de la membrana plasmtica que estn recubiertas
celular (en general, una protena integral de membrana; en su superficie citoslica con un material densamente
Secciones E2 y E5). Cuando se une al receptor, el com- empacado elaborado predominantemente con la pro-
plejo receptor-macromolculas se acumula dentro una tena clatrina (figura E4-3). Esta protena, que ha sido
cavidad revestida de clatrina. Con la colaboracin de altamente conservada a travs de la evolucin, consiste
la protena de unin de GTP asociada a la membrana, la en tres cadenas polipeptdicas grandes y tres pequeas
dinamina, estas cavidades brotan desde la membrana que se juntan para formar una estructura de tres pa-
para formar pequeas vesculas revestidas de clatrina tas llamada trisquelin. Los trisqueliones de clatrina
que contienen a los receptores y sus macromolculas se ensamblan formando un revestimiento a manera de
unidas (ligandos) (figura E4-3). marco convexo similar a un cesto de hexgonos y pen-
La endocitosis mediada por receptores proporciona una tgonos para formar cavidades as revestidas. Se piensa
forma de concentrar de manera selectiva macromo- que el ensamblaje del revestimiento de clatrina impulsa
lculas particulares que estn a bajas concentraciones a la membrana a invaginarse en ese punto. A medida que
en el lquido extracelular y de ese modo incrementa se aaden ms trisqueliones de clatrina a la estructura,
la eficiencia de su captacin sin tener que incorporar forman una caja completa que pellizca una regin de la
grandes cantidades de lquido extracelular. Uno de los membrana y forma una vescula revestida de clatrina.
procesos endocticos mediados por receptores mejor En la endocitosis, esas vesculas migran hacia el interior
estudiados y comprendidos es la captacin de coleste- de la clula y esparcen su revestimiento de clatrina para
rol en la forma de partculas de lipoprotenas de baja formar endosomas iniciales, los cuales a su vez maduran
densidad (LDL) por el receptor de LDL (seccin K6) de las y se convierten en endosomas tardos (figura E4-3). El pH
clulas de los mamferos. del interior de los endosomas disminuye debido a bom-
bas de protones situadas en su membrana, mismas que
Muchos virus y otras toxinas ingresan a las clulas ani- acidifican la luz de la vescula. Este cambio en el pH pro-
males mediante endocitosis mediada por receptores. mueve con frecuencia la disociacin de la molcula (el
Aunque las clulas no tienen receptores de la superficie ligando) del receptor, lo que permite que los receptores
celular que reconozcan a la partcula viral de manera sean reciclados hacia la membrana plasmtica. Luego,
deliberada, los virus evolucionaron hasta expresar una los endosomas se fusionan con los lisosomas, donde el
protena de superficie que imita al ligando correcto que contenido es degradado y las partes componentes, como
reconoce el receptor Fc y que por tanto les permite a los aminocidos y azcares, pueden ser tomadas por el cito-
virus unirse y ser internalizados. sol para ser usadas por la clula.

ESPACIO EXTRACELULAR
Receptores Ligando
Membrana plasmtica

Clatrina
Cavidad revestida
CITOSOL

Reciclamiento
de receptores Vescula revestida

Trisqueliones
de clatrina

Endosoma inicial
Endosoma tardo
Lisosoma

Figura E4-3. Endocitosis mediada por receptor que incluye cavidades y vesculas
revestidas de clatrina.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E5Transduccin de seales
Notas clave
Sealizacin de las En los organismos multicelulares, las clulas se comunican unas con otras a
clulas travs de molculas u hormonas de sealizacin extracelular. La hormona es
secretada por la clula sealizante y se une a un receptor en la clula blanco,
con lo cual se inicia una respuesta en esta clula. En la sealizacin endocrina,
la hormona acta en un sitio distante del sitio del cual es producida, en la sea-
lizacin paracrina la hormona acta sobre clulas cercanas y en la sealizacin
autocrina la hormona acta en la misma clula que la secret.
Molculas de Algunas hormonas lipfilas (p. ej., las hormonas esteroideas) se difunden a tra-
sealizacin con vs de la membrana plasmtica e interactan con receptores intracelulares de
receptores intracelulares la familia del receptor nuclear en el citosol o en el ncleo. El gas xido ntrico
(NO) es una molcula de sealizacin que atraviesa la membrana plasmtica y
estimula a la enzima intracelular guanililciclasa para que produzca monofos-
fato cclico de guanosina (cGMP).
Molculas de Otras hormonas lipfilas (p. ej., las prostaglandinas) e hidrfilas (p. ej., las
sealizacin con hormonas peptdicas insulina y glucagon y las aminas biognicas adrenalina
receptores en la e histamina) se unen a receptores de la superficie celular. stas son protenas
supercie celular integrales de la membrana que se localizan en la membrana plasmtica y que
unen la hormona (ligando) con alta afinidad y especificidad. En la unin del
ligando, el receptor puede someterse a un cambio conformacional o dimeri-
zarse y transmitir la informacin a la clula (transduccin de la seal).
Receptores ligados Los receptores ligados a enzimas (p. ej., el receptor de insulina) tienen actividad
a enzimas intrnseca enzimtica. La unin del ligando causa autofosforilacin de los resi-
duos de tirosina en el dominio citoplsmico de los receptores de las cinasas de
tirosina. Estas tirosinas modificadas son entonces reconocidas por otras prote-
nas del citosol. Otros receptores tienen actividad de cinasa de serina/treonina,
mientras que algunos carecen de la actividad intrnseca de cinasa y se asocian
con las cinasas de tirosina citoplsmicas (p. ej., las cinasas de la familia Src).
Muchos receptores ligados a enzimas interactan a travs de pequeos domi-
nios de unin (p. ej. SH2) con protenas de andamiaje dentro de las clulas, las
cuales organizan grupos de protenas en complejos de sealizacin.
Receptores ligados El cambio en la conformacin de los receptores ligados a canales inicos per-
a canales inicos mite a los iones fluir a travs de la membrana y en esa medida alterar el poten-
cial de membrana.

Receptores acoplados Los receptores acoplados a la protena G (GPCR) contienen siete hlices alfa
a la protena G transmembranales y activan a las protenas trimricas G [unin-trifosfato de
guanosina (GTP)], que a su vez llevan a la produccin de un segundo mensajero
intracelular. Las protenas trimricas G contienen tres subunidades: ,  y .
Diferentes GPCR interactan con diferentes protenas trimricas G que condu-
cen a diferentes acontecimientos de sealizacin intracelular. Hay dos clases
principales de protenas que encienden a la GTP-asa: la subunidad G  de las
protenas trimricas G y las protenas monomricas G (p. ej., Ras). Se encuen-
tran ancladas a la superficie citoslica de la membrana plasmtica por un lpido
unido en forma covalente y hacen un ciclo a travs de una forma inactiva enla-
zada al GDP y una forma activa enlazada al GTP.
E5TRANSDUCCIN DE SEALES 125

Segundos mensajeros Las molculas de sealizacin intracelular (segundos mensajeros) se producen


en respuesta a la activacin de varios receptores de la superficie celular. La
adenilciclasa y la guanililciclasa producen los segundos mensajeros cAMP y cGMP,
respectivamente. La activacin de la fosfolipasa C conduce a la produccin
de los segundos mensajeros 1,4,5-trisfosfato de inositol (IP3) y 1,2-diacilglicerol,
los cuales a su vez causan la liberacin de Ca2+ de los almacenes intracelulares
y activan a la cinasa C de protenas, respectivamente.
Iones calcio Muchas seales extracelulares inducen un incremento en el nivel de los iones
calcio en el citosol. Cuando se activan los canales de calcio, como los canales
de calcio dependientes de voltaje en la membrana plasmtica, los canales de cal-
cio con compuertas de IP3 y los receptores de la rianodina en el ER y en el retcu-
lo sarcoplsmico, los iones calcio fluyen hacia el citosol. El aumento del calcio
citoslico resulta en la alteracin de eventos celulares a travs de protenas que
unen calcio, como la troponina C en el msculo y la calmodulina.
Protelisis regulada Algunos receptores de la superficie celular sufren protelisis intramembranosa
regulada por la unin del ligando, liberando el dominio citoplsmico, el cual
se transloca hacia el ncleo.

Temas relacionados (E2) Estructura de la membrana (J7) Control del metabolismo del
(E6) Funcin del nervio glucgeno

Sealizacin de las clulas la sealizacin endocrina, la molcula de sealizacin


En los organismos multicelulares, hay necesidad por (p. ej., insulina) acta sobre clulas blanco distantes del
parte de las clulas de comunicarse unas con otras con sitio de su sntesis en clulas de un rgano endocrino
el fin de coordinar su crecimiento y metabolismo. La (p. ej., el pncreas; figura E5-1a). Las clulas endocrinas
principal forma por la cual las clulas se comunican secretan la molcula de sealizacin a la corriente san-
con las otras es por medio de las molculas de seali- gunea (si es un animal) o a la savia (si es una planta),
zacin extracelular llamadas hormonas. Las clulas de la cual transporta la sustancia a las clulas blanco, que
sealizacin sintetizan y secretan estas molculas, que se hallan en otro sitio del organismo. En la sealizacin
producen una respuesta especfica en las clulas blanco paracrina, la molcula de sealizacin slo afecta clu-
(o destino) que tienen receptores especficos para la las blanco cercanas a la clula desde la cual la molcula
molcula de sealizacin. Diferentes clulas pueden res- es secretada (figura E5-1b). La comunicacin desde una
ponder de modo distinto a la misma molcula de seali- clula nerviosa a otra mediante neurotransmisores qu-
zacin segn el tipo de receptor y la reaccin intracelu- micos es un ejemplo de sealizacin paracrina (seccin
lar iniciada (vase ms adelante). La sealizacin celular E6). El tercer tipo de sealizacin celular es la sealiza-
puede clasificarse en tres tipos diferentes basados en la cin autocrina, donde una clula responde a la molcula
distancia a la cual acta la molcula de sealizacin. En que ha sido producida por ella misma (figura E5-1c).

a) Clula endocrina Molculas de sealizacin

Vaso sanguneo
Receptor

Clulas blanco distantes

b) c)

Clula secretoria Clula blanco cercana Receptores objetivo en la misma clula

Figura E5-1. Sealizacin celular: a) endocrina; b) paracrina; c) autocrina.


126 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

Molculas de sealizacin con receptores partir del cido araquidnico (un cido graso de 20 car-
intracelulares bonos con cuatro dobles enlaces insaturados) (seccin
K1) y actan como molculas de sealizacin paracrina.
Pequeas hormonas lipfilas (solubles en lpidos)
La aspirina y otros agentes antiinflamatorios inhiben
difunden a travs de la membrana plasmtica y luego
la sntesis de las prostaglandinas (seccin K1).
interactan con receptores intracelulares en el citosol
o el ncleo. Todos los receptores guardan relaciones Los receptores de la superficie celular son protenas
estructurales y son parte de la superfamilia de recep- integrales de la membrana situados en la membrana
tores nucleares. El complejo hormona-receptor resul- plasmtica (seccin E2) que unen la molcula de sea-
tante se une con frecuencia a regiones del DNA y afecta lizacin (ligando) con alta afinidad. El ligando se une a
la transcripcin de ciertos genes (seccin G6). Entre las un sitio especfico del receptor de una forma similar
pequeas hormonas lipfilas con receptores intracelu- a como un sustrato se une a una enzima (seccin
lares estn las hormonas esteroideas, las cuales se sin- D1). La unin del ligando al receptor puede causar un
tetizan a partir del colesterol (seccin K5) (p. ej., las hor- cambio conformacional en ste o promover la dime-
monas sexuales femeninas estrgeno y progesterona), la rizacin de dos receptores, que desencadenan una
tiroxina, la cual es producida por las clulas tiroideas secuencia de reacciones (con frecuencia referida como
y es el principal compuesto yodado de los animales, el transduccin de la seal), en la clula blanco, lo cual
cido retinoico, que deriva de la vitamina A y la vita- conduce a un cambio en la funcin celular. La distribu-
mina D, la cual se sintetiza en la piel en respuesta a la cin de los receptores vara entre las diferentes clulas
luz solar (seccin K5). y hay con frecuencia ms de un tipo de receptor para
un ligando en especial, lo que permite que diferentes
Un ejemplo importante y destacable de una pequea
clulas blanco respondan de manera distinta a la misma
molcula de sealizacin que atraviesa con facilidad la
molcula de sealizacin. Los receptores de la superfi-
membrana plasmtica de la clula objetivo es el gas xido
cie celular pueden clasificarse en tres clases principales
ntrico (NO). ste se usa en los animales y en las plantas.
segn cmo transfieren la informacin desde el ligando
El NO es sintetizado por desaminacin de la arginina,
al interior de la clula: receptores ligados a enzimas,
catalizada por la enzima sintasa de NO (seccin M3).
receptores ligados a canales inicos y receptores aco-
El NO difunde con rapidez fuera de la clula que lo pro-
plados a la protena G.
duce e ingresa en las clulas cercanas. Este gas slo
acta en forma local ya que tiene una vida media corta,
de alrededor de 5 a 10 segundos. En muchas clulas Receptores ligados a enzimas
blanco, el NO se une al sitio activo de la guanililciclasa Numerosos receptores tienen actividad enzimtica
y la estimula para que produzca el pequeo mediador intrnseca o estrechamente asociada. Tras la unin del
intracelular cGMP (vase ms adelante). La nitroglice- ligando a su cara extracelular, tales receptores sufren un
rina, la cual se usa para tratar a pacientes con angina de cambio conformacional y ponen en marcha una activi-
pecho (dolor que resulta de un flujo sanguneo inade- dad enzimtica. En el caso del receptor de la insulina,
cuado hacia el msculo cardiaco), es convertida en NO, el cual es un complejo de dos subunidades  y dos subu-
el cual relaja los vasos sanguneos y por tanto reduce la nidades que se mantienen juntas por enlaces disulfuro,
carga de trabajo del corazn. El monxido de carbono la hormona polipeptdica insulina (el ligando o seal) se
(CO) es otro gas que se usa como una molcula de sea- une a la cara extracelular de las subunidades  (figura
lizacin, lo que hace al estimular la guanililciclasa. E5-2). Acto seguido, el receptor sufre un cambio confor-
macional que lo lleva a la autofosforilacin del domi-
Molculas de sealizacin con receptores nio citoslico de la subunidad . De manera especfica,
en la supercie celular se fosforilan los grupos hidroxilo de las cadenas latera-
les de ciertos residuos de tirosina, donde el ATP funge
Las molculas hidrfilas (solubles en agua) (las cuales
como el donador de fosfato. El receptor fosforilado es
no pueden difundirse a travs del interior de la bicapa
reconocido por otras protenas del citosol, que a su vez
lipdica hidrfoba) se unen a receptores de la superfi-
modulan diversos eventos celulares, lo que permite a
cie celular. stos incluyen a las hormonas peptdicas,
la clula responder a la hormona de manera apropiada
como la insulina y el glucagon y a pequeas molculas
(seccin J7). En adicin, la subunidad puede fosforilar
cargadas, con frecuencia aminas biognicas, como la
de manera directa otras protenas objetivo dentro de la
adrenalina (adrenalina) y la histamina, que se derivan
clula.
de aminocidos y funcionan como hormonas y neuro-
transmisores (seccin E6). Algunas hormonas lipfilas El receptor de insulina es un ejemplo de un receptor
(solubles en lpidos) tambin se unen a receptores de de cinasa de tirosina, mientras que el factor de creci-
la superficie celular. Entre stas se incluyen las prosta- miento transformador (TGF-) pertenece a una familia
glandinas, una familia de compuestos con similitudes de receptores que tienen actividad de cinasa de serina/
estructurales que se encuentran en los vertebrados y en treonina en su dominio citoslico. Otros receptores con
los invertebrados. Las prostaglandinas se sintetizan a actividad enzimtica estrechamente asociada incluyen
E5TRANSDUCCIN DE SEALES 127

Insulina
I
I I

EXTRACELULAR

MEMBRANA

CITOSOL ATP ATP

ADP P P ADP
P P

Figura E5-2. Transduccin de la seal a travs de un receptor ligado a una enzima


como el receptor de insulina.

a varios receptores de citocinas que unen interfero- una variedad de dominios de unin pequeos y con-
nes, hormona del crecimiento, algunas interleucinas y servados, como los dominios con homologa 2 Src (SH2)
otras citocinas. En el caso de muchos receptores liga- y los dominios de unin de fosfotirosina (PTB), que se
dos a enzimas, la unin del ligando induce la oligome- unen a residuos de tirosina fosforilados, los dominios
rizacin (formacin de dmeros o de oligmeros ms con homologa 3 Src (SH3), que se unen a secuencias de
grandes), y es este rearreglo de los dominios citosli- aminocidos cortas ricas en prolina y los dominios
cos el que permite a los dominios vecinos de cinasa de de homologa con la pleckstrina (PH), que se unen a los
las cadenas del receptor la fosforilacin cruzada entre grupos-cabeza de los fosfolpidos de inositol que han
ellos en el proceso de autofosforilacin. sido fosforilados de manera adicional por la cinasa-3
de fosfatidilinositol (PI 3-cinasa). Algunas protenas de
Algunos receptores ligados a enzimas, as como otros
andamiaje contienen mltiples dominios PDZ, cada uno
receptores, interactan con protenas de andamiaje
de los cuales se une a un motivo especfico en un recep-
dentro de la clula, los cuales organizan grupos de pro-
tor o protena de sealizacin. La unin de estas prote-
tenas en complejos de sealizacin (figura E5-3).
nas al receptor activado puede ayudar a liberar la seal
Las protenas del interior de estos complejos de sea- hacia delante o puede disminuir el proceso de seali-
lizacin se ensamblan a travs de las interacciones de zacin, lo que implica una retroalimentacin negativa.

Protena Ligando
receptora
EXTRACELULAR

MEMBRANA

Y CITOSOL
SH2 P
SH3

PPP Protena
adaptadora

Seal corriente
abajo

Figura E5-3. Un complejo de sealizacin hipottico. La unin del ligando a la


cara extracelular del receptor de la supercie celular resulta en la fosforilacin de
un residuo de tirosina en su dominio citoslico. El residuo de tirosina fosforilado
es reconocido por un dominio SH2 en la protena adaptadora. Por otro lado, en
la protena adaptadora, es un dominio SH3 el que se une a una secuencia rica
en prolina (PTP) de otra protena de sealizacin, de manera tal que la seal se
retransmite dentro de la clula.
128 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

EXTRACELULAR

Ligando Ion

MEMBRANA

CITOSOL

Figura E5-4. Transduccin de la seal a travs de un receptor asociado a un canal


inico.

Algunos receptores de la superficie celular requieren de sus N terminales hacia la cara extracelular de la mem-
la fosforilacin de la tirosina para su actividad, pero care- brana plasmtica y sus C terminales hacia la cara cito-
cen de un dominio de cinasa de tirosina. Estos recepto- plsmica de la membrana (figura E5-5). La familia GPCR
res actan a travs de cinasas de tirosina citoplsmicas incluye receptores para numerosas hormonas y neuro-
(o cinasas de tirosina sin receptor), las cuales se asocian transmisores, receptores activados por la luz (rodopsi-
con el receptor y fosforilan varias protenas blanco. La nas) del ojo y miles de receptores odorantes en la nariz
familia ms grande de cinasas de tirosina citoplsmicas de los mamferos. Al unirse su ligando, los GPCR activan a
es la familia Src, entre las cuales se incluyen la Src, Yes, las protenas G trimricas transductoras de seal [pro-
Fyn y Lck, que en todos los casos contienen dominios tenas de unin-trifosfato de guanosina (GTP)], las cua-
SH2 y SH3, y se localizan sobre la superficie citoplsmica les a su vez activan o inhiben a una protena efectora.
de la membrana plasmtica. Las protenas trimricas G constan de tres subunidades:
,  y . La subunidad G es la protena interruptora de
Receptores ligados a canales inicos la GTP-asa que se alterna entre un estado activo (encen-
Los receptores ligados a canales inicos (canales inicos dido) y un estado inactivo (apagado) (vase ms ade-
con compuertas transmisoras o receptores ionotrficos) lante). En el genoma humano hay mltiples copias de
intervienen en la sealizacin sinptica rpida entre cada una de las subunidades ,  y , que proveen diver-
clulas que se excitan en forma elctrica. Aqu, la unin sidad en la sealizacin a travs de los GPCR.
del ligando causa un cambio conformacional tal en la Las subunidades G y G estn asociadas a la superfi-
protena que se abre un canal inico especfico (figura cie citoslica de la membrana plasmtica por medio de
E5-4). Esto permite que un determinado ion fluya a su lpidos de anclaje a los que se unen de manera cova-
travs y que subsecuentemente altere el potencial elc- lente (seccin E2). En el estado de reposo, cuando no
trico transmembranal. Por ejemplo, en la unin neu- hay ligandos unidos a los GPCR, la subunidad G est
romuscular, el neurotransmisor acetilcolina se une a unida al GDP y en complejos con G (figura E5-6).
receptores especficos, que permiten que los iones Na+ La unin del ligando a los GPCR cambia su conforma-
fluyan hacia dentro y los iones K+ fluyan hacia fuera de la cin, lo que determina que se unan a la subunidad G
clula blanco (vase la seccin E6, para mayores detalles). y de esta forma que el GDP sea desplazado y remplazado
por el GTP. De inmediato, la subunidad G se disocia
Receptores acoplados a la protena G de G, pero ambas permanecen fijas a la membrana.
Los receptores acoplados a la protena G (GPCR) forman La subunidad G con el GTP unido interacta y activa a
un grupo muy grande de receptores de la superficie celu- una protena efectora asociada, como la adenilciclasa,
lar que estn acoplados a protenas trimricas G trans- o en algunos casos regula la abertura de un canal inico
ductoras de seal. Todos los GPCR contienen siete regio- que causa cambios en el potencial de membrana. Sin
nes helicoidales  que atraviesan la membrana con embargo, esta activacin es de vida corta, ya que el GTP

H3 N+
EXTRACELULAR

MEMBRANA 1 2 3 4 5 6 7

CITOSOL
COO

Figura E5-5. Los GPCR contienen siete regiones de hlice transmembranales


(cilindros 1-7), con su N terminal en el lado extracelular de la membrana y su C
terminal en el citosol.
E5TRANSDUCCIN DE SEALES 129

Ligando
EXTRACELULAR

MEMBRANA

Receptor G Adenilil-
G ciclasa
CITOSOL GDP
GTP
GDP

GTP

cAMP
ATP
Pi GTP +PPi

GDP

Figura E5-6. Transduccin de seal a travs de un receptor acoplado a una


protena G (vase texto para mayores detalles).

es rpidamente hidrolizado, en segundos, a GDP por la lares de encendido y apagado), de las cuales hay dos
actividad de la GTP-asa intrnseca de la subunidad G clases principales: la subunidad G de las protenas tri-
(vase ms adelante). La subunidad G, ahora con GDP mricas G (vase antes) y las protenas monomricas
unido, se disocia de la protena efectora, la desactiva, y G, como las familias Ras, Rho y Rab. Las protenas Ras,
se reintegra con G, lista para otra ronda de activacin Rho y Rab, que se acoplan al receptor activado a travs
y de intercambio de nucletidos (figura E5-6). de protenas adaptadoras de andamiaje (vase antes),
actan como transductores y en la bifurcacin de la
La hormona adrenalina se une a numerosos GPCR dife-
sealizacin por protenas, ya que cambian la natura-
rentes. Cuando se une a receptores adrenrgicos 
leza de la seal y la envan a lo largo de mltiples vas
localizados sobre la superficie de las clulas hepti-
corriente abajo. En el caso de Ras, se activa una cascada
cas y adiposas, promueve la glucogenlisis y la lipli-
de fosforilacin de serina/treonina corriente abajo, que
sis, respectivamente (secciones J7 y K4). En las clulas
incluye a las cinasas de protena activadas por mitge-
del msculo liso que revisten los vasos sanguneos del
nos (MAP-cinasa). Como las subunidades G, las prote-
intestino, la piel y los riones, la adrenalina se une al
nas Ras estn fijas a la cara citoslica de la membrana
receptor adrenrgico 2 y determina que las arterias se
plasmtica mediante un enlace covalente con un grupo li-
contraigan. Los receptores adrenrgicos  estn aco-
pdico (seccin E2). Cuando la GTP-asa tiene difosfato de
plados a una protena G estimulante (Gs) que activa a
guanosina (GDP) unido, se encuentra en el estado apa-
la adenilciclasa unida a la membrana, mientras que el
gado. La activacin, a travs de un receptor de la super-
receptor adrenrgico 2 est acoplado a una protena
ficie celular o factor de intercambio del nucletido gua-
G inhibidora (Gi) que inhibe a la adenililciclasa. Por lo
nina (GEF), lleva a que el GDP sea intercambiado por GTP,
tanto, a travs de la unin a diferentes receptores y a la
lo que conduce a la GTP-asa al estado encendido (figura
activacin de diferentes protenas G, un ligando puede
E5-7). La GTP-asa activada con su GTP unido se disocia del
desencadenar una variedad de diferentes acciones en
receptor y se une y activa una enzima efectora (p. ej., la
distintas clulas blanco.
adenilciclasa), la cual a su vez cataliza la formacin de
un segundo mensajero (p. ej., cAMP). La GTP-asa hidro-
Protenas GTP-asa interruptoras liza el GTP unido y causa su reversin al estado apagado
La familia GTP-asa de protenas es un grupo de prote- (figura E5-7). La toxina del clera acta por inhibicin
nas interruptoras intracelulares (o de botones molecu- de la actividad intrnseca de GTP-asa (figura E5-7), lo que
130 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

Activacin
GTP GDP

Forma Forma
inactiva activa
GDP GTP

Pi Toxina
del clera
La actividad intrnseca de GTP-asa
hidroliza al GTP a GDP y Pi

Figura E5-7. La ciclizacin de la GTP-asa modica a las protenas entre las formas
activa e inactiva.

resulta en que, una vez activada al estado de GTP-unido, a alteraciones de una diversidad de procesos celulares
la GTP-asa no puede apagarse otra vez. (figura E5-8).

Segundos mensajeros Iones calcio


La unin de ligandos a la mayora de los receptores lleva Numerosas seales extracelulares inducen un incre-
a un incremento de vida corta en la concentracin de mento en el nivel de los iones Ca2+ en el citosol. Por
ciertas molculas de sealizacin intracelulares deno- ejemplo, en las clulas musculares, el Ca2+ desencadena
minadas segundos mensajeros. (La hormona/ligando la contraccin. De manera habitual, la concentracin
puede considerarse como el primer mensajero.) Los del Ca2+ en el citosol se mantiene en valores muy bajos
principales segundos mensajeros son el 3,5-AMPcclico (alrededor de 0.1 M), en tanto que su concentracin
(cAMP), 3,5-GMP cclico (cGMP), 1,4,5-trisfosfato de ino- en el lquido extracelular y en la luz del ER es alta (cer-
sitol (IP3), 1,2-diaciglicerol (DAG) y el Ca2+. La elevacin cana a 1 mM). Por consiguiente, hay un gradiente de los
en el nivel de uno u otro de estos segundos mensajeros iones de Ca2+ a travs de la membrana plasmtica y de
lleva a una rpida alteracin de la funcin celular. la membrana del ER, de manera que cuando los canales
de Ca2+ en estas membranas reciben estmulos para que
El cAMP y el cGMP derivan del ATP y el GTP por las acciones
se abran, los iones de Ca2+ fluyen con celeridad hacia el
de la adenilciclasa y la guanililciclasa, respectivamente.
citosol, donde su concentracin aumenta hasta en 10 a
Por ejemplo, la accin de la adrenalina y el glucagon en
20 veces y activa protenas de respuesta al Ca2+ dentro
el metabolismo del glucgeno es mediada a travs del
de la clula. Existen tres tipos principales de canales de
segundo mensajero cAMP, el cual a su vez activa a la pro-
calcio: canales de calcio dependientes de voltaje en la
tena cinasa dependiente de cAMP y a la protena cinasa
membrana plasmtica, que se abren en respuesta a la
A (figura J7-3 en la seccin J7). El cAMP y el cGMP son de
despolarizacin de la membrana, por ejemplo en las c-
vida corta, ya que resultan rpidamente degradados por
lulas nerviosas (seccin E6); canales de calcio con com-
las fosfodiesterasas.
puertas de IP3 en el ER (vase antes), y receptores de la
El IP3 y el DAG derivan del lpido 4,5-bisfosfato de fosfa- rianodina (as llamados debido a que el alcaloide vege-
tidilinositol de la membrana, que es un lpido, (el cual tal rianodina los inhibe), que liberan Ca2+ desde el re-
es un derivado fosforilado del fosfatidilinositol; seccin tculo sarcoplsmico de las clulas musculares (seccin
E1) por la accin de la fosfolipasa C, la cual tambin B5) o desde el ER de otras clulas. Bombas de Ca2+, como la
se localiza en la membrana plasmtica y, como la ade- ATP-asa de Ca2+, en el ER y la membrana plasmtica ayu-
nilciclasa, es activada a travs de las protenas G por los dan a mantener la concentracin baja de los iones de
GPCR (figura E5-8). Una de las principales acciones del IP3 Ca2+ en el citosol de las clulas en reposo. Las protenas
polar es difundirse a travs del citosol e interactuar con que unen Ca2+ sirven como transductoras de la seal del
los canales de Ca2+ de la membrana del ER (figura E5-8), lo Ca2+ citoslico. Estas protenas que unen Ca2+ incluyen
que causa la liberacin de los iones Ca2+ almacena a la troponina C del msculo esqueltico (seccin B5) y a
dos, los cuales a su vez median varias respuestas celula- la calmodulina, una protena ubicua que se encuentra
res. El DAG producido por la hidrlisis del 4,5-bisfosfato en las clulas eucariotas. La calmodulina funciona como
de fosfatidilinositol, junto con los iones calcio liberados un receptor intracelular de Ca2+ para mltiples propsi-
desde el ER, activa a la protena cinasa C, una cinasa tos, en la mediacin de muchos procesos regulados por
de protenas de serina/treonina unida a la membrana, el Ca2+, y sufre un cambio conformacional tras la unin
que fosforila varias protenas blanco, y otra vez conduce al Ca2+. Una vez que sucede esto, la calmodulina puede
E5TRANSDUCCIN DE SEALES 131

Fosfolipasa C Protena cinasa C


Ligando

EXTRACELULAR

MEMBRANA

CITOSOL
Protena
Receptor ligado a
la protena G Protena G IP3

P -Protena

Retculo
endoplasmtico Respuesta
celular

4,5-Bisfosfato de
fosfatidilinositol Canal del Iones Ca2+
Ca2+

Figura E5-8. Generacin de los segundos mensajeros intracelulares IP3, DAG y Ca2+.

unirse a varias protenas blanco diferentes, como la y desempean papeles cruciales en el desarrollo ani-
familia de las protenas cinasas dependientes de Ca2+/ mal. En el caso del receptor transmembranal Notch, la
calmodulina (CaM cinasas), las cuales son entonces unin a su ligando Delta en la cara extracelular lleva
capaces de fosforilar serinas o treoninas de otras pro- primero a un corte proteoltico en la regin adyacente
tenas. de la membrana y luego a un segundo corte dentro de
la regin transmembranal hidrfoba (figura E5-9). El
dominio citoplsmico liberado migra despus hacia el
Protelisis regulada ncleo, donde activa la transcripcin de varios genes
Existen varias vas de sealizacin inusuales para el blanco (figura E5-9). El rompimiento proteoltico den-
relevo de seales que parten desde los receptores de la tro de la regin transmembranal hidrfoba es inusual,
superficie celular hasta el interior de la clula que invo- pero se han identificado ms y ms protenas que son
lucran la protelisis regulada. Entre estas vas est la sujeto de esta protelisis intramembranal regulada
mediada por la protena receptora Notch y la va acti- (RIP). En este proceso, a medida que los enlaces pept-
vada por las protenas secretadas Hedgehog, que han dicos de la protena receptora son cortados, el receptor
sido altamente conservadas a lo largo de la evolucin no puede ser reutilizado.

Ligando

Receptor

1 EXTRACELULAR

2 MEMBRANA

CITOSOL

Forma complejos y
activa la transcripcin
gentica

Figura E5-9. Sealizacin de la clula a travs del receptor Notch. La unin del
ligando resulta en el corte proteoltico del receptor 1) en la cara extracelular de
la membrana. El segmento unido a la membrana resultante es entonces cortado
dentro del dominio transmembranal 2), donde libera la cola citoslica, la cual forma
un complejo con otras protenas y activan la transcripcin de genes en el ncleo.
SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

E6Funcin nerviosa
Notas clave
Clulas nerviosas Las clulas nerviosas o neuronas consisten en un cuerpo celular a partir del
cual se extienden las dendritas y el axn. Las dendritas reciben informacin de
otras clulas; el axn pasa su informacin a otra clula, la clula postsinptica.
El axn est cubierto por una vaina membranosa de mielina excepto en los
nodos de Ranvier. El axn acaba en la terminal nerviosa, donde se almacenan
neurotransmisores qumicos en vesculas sinpticas para ser liberados en la
hendidura sinptica.
El potencial de accin Existe un potencial de membrana elctrico a travs de la membrana plasmtica
debido a la distribucin desigual de iones Na+ y K+, el cual es generado por la
ATP-asa de Na+/K+. Despus de la estimulacin, las neuronas despolarizan su
potencial de membrana desde el estado de reposo (60 mV) a +40 mV, lo que
genera un potencial de accin. El potencial de accin es causado por iones Na+
que fluyen hacia el interior de la clula a travs de canales de Na+ sensibles al
voltaje. Los iones K+ que fluyen hacia fuera de la clula a travs de canales de
K+ sensibles al voltaje restauran el potencial de membrana en reposo. El veneno
tetradotoxina acta por bloqueo del canal de sodio.
Neurotransmisores Los neurotransmisores, la acetilcolina, las aminas biognicas y los pptidos
pequeos se almacenan en la terminal nerviosa presinptica, dentro de las ve-
sculas sinpticas. Cuando el potencial de accin alcanza la terminal nervio-
sa, determina que las vesculas sinpticas se fusionen con la membrana plas-
mtica de una manera dependiente del Ca2+ y que liberen su contenido por
exocitosis. A continuacin, el neurotransmisor fluye a travs de la hendidura
sinptica, se une a receptores especficos de la membrana celular postsinptica
y se inicia una respuesta en esa clula.
Temas relacionados (E2) Estructura de la membrana (E4) Transporte de membrana:
(E3) Transporte de membrana: macromolculas
molculas pequeas (E5) Transduccin de seales

Clulas nerviosas de 1 m, en los animales ms grandes. Cada milmetro


o ms a lo largo del axn, la vaina de mielina es in-
En los eucariotas, probablemente la sealizacin ms terrumpida por regiones desmielinizadas denominadas
rpida y compleja es mediada por los impulsos nervio- nodos de Ranvier (figura E6-1). El extremo del axn, la
sos. Las clulas nerviosas (neuronas) constan de un terminal nerviosa, est lleno de vesculas sinpticas que
cuerpo celular con numerosas proyecciones de la mem- almacenan a los neurotransmisores qumicos, como la
brana plasmtica denominadas dendritas (figura E6-1). acetilcolina. Cuando un impulso nervioso alcanza la
stas interactan con otras clulas y reciben informa- terminal nerviosa, las vesculas sinpticas liberan su
cin de ellas bajo la forma de impulsos nerviosos. Enton- contenido en la hendidura sinptica, el espacio entre
ces, el cuerpo celular asimila la informacin derivada de las clulas presinptica y postsinptica. Acto seguido, el
varios contactos dendrticos y pasa la informacin como neurotransmisor fluye a travs del espacio e interacta
otro impulso nervioso hacia el gran axn (figura E6-1). con receptores de la superficie de la clula postsinp-
El axn termina en la sinapsis, donde hace contacto tica, donde origina una seal que ser transducida por
con la clula postsinptica (clula objetivo o destino). esa clula.
El axn es mantenido en su lugar por la vaina membra-
nosa de mielina, compuesta principalmente del lpido
esfingomielina (seccin E1), la cual acta como un ais- El potencial de accin
lante elctrico y permite que los impulsos nerviosos se Existe un potencial de accin elctrico (el potencial de
transmitan por largas distancias, en ocasiones mayores membrana) a travs de la membrana plasmtica de
E6FUNCIN NERVIOSA 133

Dendritas

Ncleo Cuerpo celular

Montculo
del axn

Sinapsis
Vaina de
mielina Clula
postsinptica

Nodos de
Ranvier
Receptores
Axn
postsinpticos
Vesculas
sinpticas

Figura E6-1. Diagrama esquemtico de una clula nerviosa tpica.

todas las clulas. La mayor parte de las clulas son inac- que se genera un potencial de accin. Con el fin de que
tivas desde el punto de vista elctrico, ya que su poten- lo anterior suceda, el potencial de membrana se despo-
cial de membrana no vara con el tiempo. No obstante, lariza ms all de un nivel umbral crtico (aproximada-
las neuronas y las clulas musculares son elctrica- mente 40 mV). Con el tiempo, el potencial de mem-
mente activas ya que su potencial de membrana puede brana recupera el potencial de reposo. El potencial de
variar con el tiempo. En todas las clulas, el potencial accin se propaga a lo largo del axn, comenzando en
de membrana se genera a travs de la accin de la ATP- el montculo axnico (figura E6-1).
asa de Na+/K+ (seccin E3), con una alta concentracin
de K+ dentro de la clula y una alta concentracin de El potencial de accin se origina por cambios transito-
Na+ fuera de ella. Las neuronas varan su potencial elc- rios pero grandes en la permeabilidad de la membrana
trico por cambios controlados en la permeabilidad de plasmtica de la neurona a los iones Na+ y K+. Estn pre-
la membrana plasmtica a los iones Na+ y K+. Durante sentes dos tipos de canales inicos sensibles al voltaje
la estimulacin, el potencial de membrana de una neu- en la membrana: uno presenta permeabilidad selectiva
rona aumenta con rapidez desde el potencial de reposo a los iones Na+ y el otro a los iones K+ (figura E6-3a). Estas
de 60 mV (milivoltios) a cerca de +40 mV (figura E6-2a); protenas integrales de membrana (seccin E2) son
en este punto, se dice que la membrana se despolariza y sensibles al potencial de membrana y sufren cambios

a) b)
+40
de membrana (mV)

Potencial de accin
Permeabilidades
Potencial

0 40
Na+
30
inicas

40 20 K+
Potencial 10
80 de reposo
1 2 3 4 0 1 2 3 4
Tiempo (ms) Tiempo (ms)
Estmulo

Figura E6-2. El potencial de accin: a) despolarizacin del potencial


de membrana; b) cambios en la permeabilidad de la membrana plasmtica
al Na+ y el K+.
134 SECCIN E MEMBRANAS Y SEALIZACIN CELULARES

a) [Na+] alto
EXTRACELULAR [K+] bajo
+ve

MEMBRANA Estado de
reposo
ve
Canal de Na+ Canal de K+
CITOSOL
[Na+] bajo
[K+] alto

b)
ve

Despolarizacin

+ve
Na+

K+
c)
+ve
Retorno al estado
de reposo
ve

Figura E6-3. Mecanismo de despolarizacin de la membrana nerviosa por la


abertura y cierre de los canales inicos selectivos al Na+ y al K+.

conformacionales a medida que los potenciales se alte- un milisegundo. Entonces los canales de Na+ se cierran
ran. Primero, cambia la conductancia de la mem- de manera espontnea y los canales de K+ se abren,
brana al Na+. La despolarizacin de la membrana ms lo que permite que los iones de potasio salgan de la
all del nivel umbral causa un cambio conformacio- clula y restauren el potencial de reposo negativo en
nal en el canal de Na+, lo que permite que los iones unos pocos milisegundos (figura E6-3c). La onda de
Na+ fluyan a favor de su gradiente de concentracin despolarizacin se propaga a lo largo del axn por la
desde el exterior al interior de la clula (figura E6-3b). abertura de los canales de Na+ en el lado de la termi-
La entrada de sodio despolariza an ms la membrana, nal nerviosa de la regin despolarizada inicial (figura
lo que causa la abertura de ms canales de Na+, de lo E6-4). El potencial de accin slo puede moverse en
que resulta un influjo rpido de Na+ y un cambio en una direccin, ya que los canales de Na+ tienen un
el potencial de la membrana de 60 mV a +40 mV en periodo refractario durante el cual son insensibles a

Estado de reposo
+ + +++++++++ + Membrana
Fin del Axn
cuerpo
celular + + +++++++++ + Interior
+ + + + + + + + +
+ + + Extremo
+ + + terminal
Regin de
+ + + + + + + + + del nervio
despolarizacin
+ + + + + + + + +
+ + +
+ + +
+ + + + + + + + + Direccin en
que se mueve
+ + + +++ +++
el impulso
+++
+++
+ + + +++ +++
Estado de reposo
restablecido

Figura E6-4. Propagacin del potencial de accin a lo largo de un axn.


E6FUNCIN NERVIOSA 135

cualquier estimulacin adicional. Slo alrededor de aminocidos glutamato y glicina, acetilcolina, aminas
uno en un milln de iones de Na+ y K+ de una neurona biognicas como la adrenalina y la dopamina y una
fluyen a travs de la membrana plasmtica durante el variedad de pptidos pequeos como las encefalinas.
potencial de accin. Por tanto, sta es una forma muy Por ejemplo, la acetilcolina es almacenada en vesculas
eficiente de sealizacin para distancias largas. Puede sinpticas, una forma especializada de vescula secreto-
medirse la actividad de un solo canal por medio de la ria y es liberada en la hendidura sinptica por exocito-
tcnica del parche fijo, en la cual una pipeta de vidrio sis (seccin E4) a travs de un mecanismo dependiente
limpio con un dimetro en su punta de alrededor de 1 del Ca2+ (figura E6-5). Luego las molculas de acetilco-
m es presionada contra una clula intacta para formar lina difunden a travs de la membrana plasmtica de la
un sello. clula postsinptica, donde se unen a receptores espe-
cficos. El receptor de acetilcolina es un complejo de
La neurotoxina tetrodotoxina, un veneno muy potente
250 kDa de cuatro cadenas polipeptdicas que forman
extrado del pez globo, bloquea la conduccin de los
canales con compuerta a travs de la membrana (sec-
impulsos nerviosos a lo largo de los axones y de esa
cin E5). Cuando se produce la unin de dos molculas
manera produce una parlisis respiratoria al unirse
de acetilcolina, el canal se abre y permite que los iones
de manera muy estrecha al canal de sodio y bloquear
Na+ y K+ fluyan hacia dentro y fuera de la clula, res-
su accin.
pectivamente. La despolarizacin resultante de la mem-
brana postsinptica inicia un nuevo potencial de accin
Neurotransmisores en la clula. La enzima acetilcolinesterasa degrada con
Cuando el potencial de accin alcanza la terminal rapidez a la acetilcolina de la hendidura sinptica, por
nerviosa, causa la liberacin de un neurotransmisor lo cual es el objetivo de compuestos como el diisopro-
qumico desde las vesculas sinpticas. El sistema ner- pilfosfofluoridato (vase la seccin D4 para revisar su
vioso de los mamferos emplea numerosas sustancias estructura y el mecanismo de accin), usado como un
como neurotransmisores. Entre stas se incluyen los componente de algunos gases nerviosos.

Potencial de accin
Terminal
presinptica
del nervio Vesculas sinpticas

Acetilcolina
Sinapsis K+ K+
Receptor de acetilcolina

Na+ Na+
Clula
Potencial de accin
postsinptica

Figura E6-5. Liberacin de un neurotransmisor en la hendidura sinptica.


SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F1Introduccin al DNA
Notas clave
Bases En el DNA hay cuatro bases: adenina (se abrevia A), guanina (G), timina (T)
y citosina (C). La adenina y la guanina son purinas; la timina y citosina son
pirimidinas.
Nuclesidos Un nuclesido es una molcula formada por una base pirimidnica o prica
unida en forma covalente a un azcar. En el DNA, el azcar es desoxirribosa y
por eso es un desoxirribonuclesido. Hay cuatro tipos de desoxirribonucle-
sidos en el DNA: desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxitimidina y desoxi-
citidina.
Nucletidos Un nucletido est compuesto por una base, ms un azcar, ms un fosfato,
unidos todos de manera covalente. En el DNA, donde el azcar es desoxirribosa,
esta unidad es un desoxirribonucletido.
Enlaces 3'5' fosfodister En el DNA, los nucletidos estn unidos de manera covalente por enlaces 35
fosfodister para formar una cadena repetitiva de azcar-fosfato, que es el
esqueleto a la cual se fijan las bases.
Secuencia del DNA La secuencia del DNA es la secuencia de A, C, G y T a lo largo de la molcula del
DNA, la cual es portadora de la informacin gentica.

La doble hlice del DNA En una hlice doble de DNA, las dos cadenas de DNA estn enrolladas una alre-
dedor de la otra con las bases en el interior y el esqueleto de azcar-fosfato
expuesto hacia el exterior. Las dos cadenas de DNA se mantienen juntas por
puentes de hidrgeno entre pares de bases; la adenina (A) siempre se parea
con la timina (T), y la guanina (G) siempre se parea con la citosina (C).
Temas relacionados (F3) Replicacin del DNA en las bacterias (G2) Trascripcin en
(F4) Replicacin del DNA en los procariotas
eucariotas (G4) Transcripcin en
(G1) Introduccin al RNA eucariotas: descripcin

Bases es desoxirribosa (figura F1-1b) (es decir, el grupo 2OH


Las bases del DNA tienen estructuras de anillo forma- de la ribosa es reemplazado por un tomo de hidrgeno;
dos por tomos de carbono y nitrgeno; debido a los por eso desoxi) y de esta manera los nuclesidos son
tomos de nitrgeno, se llaman bases nitrogenadas. desoxirribonuclesidos. En el DNA, stos son desoxiade-
Hay dos tipos de estructuras anulares. La adenina y nosina, desoxiguanosina, desoxitimidina y desoxici-
la guanina son purinas (figura F1-1a), cada una de las tidina. En cada caso, el C-1 del azcar est unido a la
cuales tiene dos anillos de carbono y nitrgeno fusio- base por medio de uno de sus tomos de nitrgeno. Si
nados pero con diferentes sustituyentes. La timina y la la base es una pirimidina, el nitrgeno de la posicin
citosina son pirimidinas (figura F1-1a); cada una tiene 1 (es decir, N-1) participa en la unin del azcar. Si la
slo un anillo de carbono y nitrgeno y adems difieren base es una purina, la unin es con la posicin N-9 de
en sus sustituyentes. la base (figura F1-1b).

Nuclesidos Nucletidos
En el RNA, el azcar de los nuclesidos es la ribosa (seccin Un nucletido es un ster fosfato de un nuclesido.
G1) y por eso son ribonuclesidos. En el DNA, el azcar Consiste en un grupo fosfato unido a un nuclesido en
F1INTRODUCCIN AL DNA 137

a) NH2 O NH2 O

6 N H 6 N 4
HN 4 CH3
N1 5 7 N1 5 7 N3 5 3 5
8 8
2 4 2 4 2 6 2 6
9 9
3 3 1 1
N N H2 N N N O N O N
H H H H
Adenina (A) Guanina (G) Citosina (C) Timina (T)

NH2 NH2

N N N
b)
1 9
5' O N 5' N
5' N
HOCH2 HOCH2
HOCH2 O OH O O
4 4 4
4' 1' 1' 1'
4' 4'
H H H H H H
H H H 3' 2' H H 3' 2' H
3' 2'

HO H HO H HO H
Desoxirribosa Desoxicitidina Desoxiadenosina

NH2

c) N N

O O O

5' N N
O P O P O P O CH2
O
O O O 4
4' 1'
H H
H 3' 2' H

HO H
Desoxiadenosina 5'-trifosfato; dATP

Figura F1-1. a) Las purinas, adenina y guanina, y las pirimidinas, timina y citosina;
b) desoxirribosa y dos desoxirribonuclesidos, desoxicitidina y desoxiadenosina;
c) un desoxirribonucletido, desoxiadenosina 5 trifosfato (dATP).

el grupo hidroxilo del C-5 del azcar, que es lo que lo con- Enlaces 35 fosfodister
vierte en un nuclesido 5-fosfato o un 5-nucletido. El
nmero prima () denota el tomo del azcar al cual est En una molcula de DNA, los diferentes nucletidos
unido el fosfato. En el DNA, los nucletidos tienen desoxi- estn unidos mediante enlaces covalentes entre los
rribosa como su azcar y por eso se denominan deso- fosfatos y los azcares para formar un polmero largo.
xirribonucletidos. Los desoxirribonucletidos pueden En cada uno de los nucletidos, el fosfato enlazado
tener un grupo fosfato (desoxirribonuclesido 5-mono- al grupo hidroxilo en la posicin 5 del azcar est
fosfato, dNMP), dos grupos fosfato (desoxirribonucle- unido a su vez al hidroxilo del carbono 3 del azcar
sido 5-difosfato, dNDP) o tres grupos fosfato (desoxi- del siguiente nucletido. Como cada enlace fosfato-
rribonuclesido 5-trifosfato, dNTP). Estos ltimos son hidroxilo es un enlace ster, la ligadura entre los dos
los precursores para la sntesis de DNA. stos son la desoxirribonucletidos es un enlace 35 fosfodister
desoxiadenosina 5-trifosfato (dATP) (figura 1c), desoxi- (figura F1-2). Por consiguiente, en una cadena de DNA,
guanosina 5-trifosfato (dGTP), desoxicitidina 5-trifos- todos los grupos hidroxilo 3 y 5 participan en los
fato (dCTP) y desoxitimidina 5-trifosfato (dTTP). En cada enlaces fosfodister, excepto el primero y el ltimo
caso, la d en la abreviatura (p. ej., el dATP) indica que el ribonucletido de la cadena. El primer nucletido
azcar del nucletido es desoxirribosa. Durante la snte- tiene un fosfato libre en la posicin 5, que no se une
sis del DNA (secciones F3 y F4) se separan dos de los fos- a ningn otro nucletido, y el ltimo nucletido tiene
fatos de cada desoxirribonucletido (como pirofosfato) un hidroxilo libre en la posicin 3. Por lo tanto, cada
de manera que slo un fosfato (el fosfato ) se incorpora cadena de DNA tiene polaridad, puesto que tiene un
al DNA. extremo 5 y un extremo 3.
138 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA


O P O
O
H2C 5' O Base
4
1'

H H H H
3'
O H

O P O

O
5'
H2 C O Base

H H H H

3'
O H

O P O

O
5'
H2C O Base

H H H H

O H

Figura F1-2. Enlaces 35 fosfodister formados entre nucletidos en una molcula


de DNA.

Secuencia del DNA dedujeron que el DNA est arreglado como dos cadenas
Cada nucletido puede considerarse como una letra que giran una en torno a la otra para formar una doble
de un alfabeto que slo tiene cuatro letras, A, G, C y T. hlice, con las bases en el lado interno y el esqueleto
Diferentes genes tienen distintas secuencias de estos de azcar-fosfato en el lado externo. En la doble hlice
cuatro nucletidos y de esa manera codifican mensajes (figura F1-3), las dos cadenas de DNA estn organizadas en
biolgicos especficos. Como los desoxirribonucletidos
del DNA difieren slo en las bases que contienen, esta 5 3
secuencia de desoxirribonucletidos puede registrarse A T
simplemente como una secuencia de bases. Por ejem-
plo, ACTTTCAGACC es parte de la secuencia de bases de Par de bases
C G
un gen y codifica parte de una protena, en tanto que A T
TGGAACCGTCA es parte de la secuencia de bases de un gen G C
diferente que codifica una protena distinta. Por con- T A
Surco Surco
vencin, la secuencia de bases se escribe en un orden menor mayor
que parte del extremo 5 de la cadena de DNA al extremo
C G
3, es decir, se escribe en la direccin 5 3. Dado que A T
hay cuatro tipos de nucletidos, el nmero de diferentes C G
G C
secuencias posibles (o mensajes) en una cadena de DNA Esqueleto de
Puentes de
de n nucletidos de largo es 4n. De manera tpica, las mo- hidrgeno azcar-fosfato
lculas de DNA son de muchos miles de nucletidos de C G
A T
largo, de manera que el nmero de mensajes posibles
T A
es enorme.
C G

La doble hlice del DNA C G


En 1953, Watson y Crick resolvieron la estructura tri- A T
3 5
dimensional del DNA a partir de fotografas de difrac- G C

cin con rayos X obtenidas por Franklin y Wilkins. Ellos Figura F1-3. La doble hlice del DNA.
F1INTRODUCCIN AL DNA 139

una disposicin antiparalela (es decir, las dos cadenas demasiado grande para una pareja de pirimidinas pues
corren en direcciones opuestas, una est orientada en la se mantendran demasiado alejadas para interactuar. El
direccin 5 3 y la otra est orientada en la direccin pareamiento de bases G:C y A:T tambin maximiza el
3 5). Las bases de las dos cadenas forman puentes nmero de puentes de hidrgeno efectivos que pueden
de hidrgeno una con la otra; la A se parea con T, y G se formarse entre las bases; hay tres puentes de hidrgeno
parea con C. Esto se llama complementaridad de bases entre cada par de bases G:C y dos puentes de hidrge-
(figura F1-4). En consecuencia, dos grandes anillos de no entre cada par de bases A:T. Por lo tanto, los pares
una purina se parean con un anillo ms pequeo de una de bases A:T y G:C dan lugar a la conformacin ms
pirimidina y las dos bases se acomodan en el espacio estable tanto desde cuestiones estricas como desde
que separa a las dos cadenas de azcar-fosfato y mantie- el hecho de maximizar la formacin de puentes de hi-
nen la distancia correcta. Este espacio resulta pequeo drgeno.
para que dos purinas voluminosas puedan parearse, y

H
CH3
N
H O H
H O
N
N N N
N N
H H
N dR
N dR
O N N O
N
N H
N N
dR
dR
H

Adenina : timina Guanina : citosina

Figura F1-4. Los pares de bases del DNA. Los puentes de hidrgeno se muestran
como lneas entrecortadas. dR, desoxirribosa.
SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F2Genes y cromosomas
Notas clave
Concepto de gen El concepto original de un gen fue el de una regin del DNA que codifica un poli-
pptido (o RNA). Sin embargo, ahora se sabe que los mecanismos postranscrip-
cionales de los eucariotas pueden generar mltiples polipptidos (relacionados
en secuencia) a partir de un solo transcrito de RNA, de manera que esta definicin
necesita actualizarse.
Cromosomas procariotas El DNA en una bacteria es una molcula circular de doble cadena, superenro-
llada, que est empacada en la regin del nucleoide de la clula. El DNA est
superenrollado de manera negativa, forma complejos con numerosas protenas
tipo histonas (sobre todo protenas HU, HLP-1 y H-NS) y est organizado en alre-
dedor de 50 dominios unidos a un andamio de protenas.
Cromosomas eucariotas Las clulas eucariotas contienen mucho ms DNA que las procariotas. En el
ncleo, el DNA est empacado en cromosomas, que consisten sobre todo en DNA
y protenas llamadas histonas, aunque tambin estn presentes otras protenas
que no son histonas (NHP). Cada cromosoma contiene una molcula de DNA de
cadena doble lineal.
Nucleosomas El DNA cromosomal forma complejos con cinco tipos de histonas (H1, H2A, H2B, H3
y H4). stas son protenas muy bsicas, ricas en arginina y lisina. Las secuencias
de aminocidos de las histonas estn muy conservadas a lo largo de la evolu-
cin. El DNA est enrollado alrededor de un octmero de histonas (dos molculas
de cada una de H2A, H2B, H3 y H4) para formar un nucleosoma. El DNA situado
entre nucleosomas vecinos (DNA conector) se une a la histona H1. El cociente
de empacamiento de los nucleosomas es cercano a 7.
La bra de 30 nm Los nucleosomas estn organizados en una fibra de 30 nanmetros (nm). El
ordenamiento exacto de los nucleosomas en la fibra de 30 nm es poco claro; las
posibilidades son de una hlice muy ordenada (denominada solenoide) o una
disposicin en zigzag. El cociente de empacamiento total es de alrededor de 40.
Estructuras de orden Durante la interfase, los cromosomas estn dispersos y se supone que se pre-
ms elevados sentan sobre todo como fibras de 30 nm. Durante la divisin celular, los cro-
mosomas se compactan y condensan mucho, pero se sabe poco acerca de cmo
sucede esto. Sin embargo, una estructura de orden ms elevado es que la fibra
de 30 nm est fija a un andamio protenico central en cada cromosoma en una
serie de asas radiales.
Genomas de los La mayora de los genomas mitocondriales y de los cloroplastos son molcu-
organelos las de DNA circulares de doble cadena, pero el genoma puede distribuirse en va-
rias molculas circulares en lugar de una sola molcula. En algunos eucariotas
unicelulares, el genoma mitocondrial es lineal, mientras que en otros eucario-
tas el genoma del organelo tiene forma circular y lineal. Los organelos tambin
pueden tener mltiples copias del genoma.
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (F4) Replicacin del DNA en los eucariotas

Concepto de gen existencia de operones en los procariotas (seccin G3)


no pone en duda este concepto ya que, aunque numero-
Para 1960, el gen se defini con claridad como la regin sos genes agrupados producen un mRNA policistrnico,
del DNA que da origen a un polipptido (o a un RNA, en se pueden todava identificar regiones individuales del
el caso de los genes cuyo producto final es RNA y no DNA como genes basados en los diferentes polipptidos
una protena, p. ej., los genes del RNA ribosomal). La que codifican. Este concepto de gen incluye tambin
F2GENES Y CROMOSOMAS 141

el descubrimiento de que muchos genes que codifican est superenrollado negativamente, esto es, se retuerce
protenas en los eucariotas contienen regiones codi- sobre s mismo (figura F2-1b). El DNA superenrollado es
ficantes (exones) separadas por secuencias no codifi- ms compacto que el DNA circular abierto, de manera
cantes (intrones; vase la seccin G5) ya que, otra vez, que el superenrollamiento es un buen recurso para el
slo un polipptido resulta de esa regin del DNA. No empacamiento del cromosoma bacteriano dentro de
obstante, en tiempos ms recientes, se han descubierto una clula bacteriana pequea, la cual tiene slo 1 2
otros mecanismos en las clulas eucariotas, como el m de tamao.
de que una sola secuencia de DNA puede producir una
El DNA superenrollado se localiza en una regin de la
variedad de polipptidos diferentes; por ejemplo, el
clula denominada nucleoide (seccin A1), donde est
empalme alternativo del RNA, los sitios de poliadeni-
organizado en 50 o ms asas o dominios unidos a un
lacin alternativos y la edicin del RNA (seccin G7).
centro o andamio protenico central, fijo a la mem-
Pese a esto, en cada uno de los casos mencionados, los
brana celular. La figura F2-1c ilustra esta organizacin,
productos protenicos se tienen secuencias similares y
aunque slo se muestran seis asas para mayor claridad.
todos derivan de la misma regin individual del DNA. Por
Dentro de esta estructura, el DNA forma complejos con
lo tanto, la definicin original quiz necesite enmen-
cuando menos cuatro protenas de unin del DNA, que
darse para indicar que un gen codificador de protena es
desempean un papel en su empacamiento, y entre las
una regin del DNA que codifica un solo polipptido o un
cuales estn las protenas HU, HLP-1 y H-NS. La ms abun-
conjunto de polipptidos similares, pero por otro lado
dante de stas es la HU. Su estructura es muy diferente de
la definicin se mantiene intacta. El escenario alterna-
las histonas (las cuales intervienen en el empacamiento
tivo a considerar que una secuencia de DNA da origen,
del DNA eucariota; vase despus) pero empacan al DNA
por ejemplo, a 10 polipptidos que guardan una rela-
bacteriano de una forma similar ya que forman un tetr-
cin cercana por el procesamiento postranscripcional
mero alrededor del cual se enrollan aproximadamente
como representativos de 10 genes no parece razonable.
60 pares de bases (bp) de DNA.
El genoma de un organismo incluye a todos los genes de
En aos recientes se ha descubierto que no todos los
ese organismo. Incluso en una clula bacteriana como
procariotas tienen un DNA organizado a la manera cl-
Escherichia coli (E. coli), la cantidad de DNA requerido es
sica de E. coli.
sustancial (4.6 millones de pares de bases) y por eso
es que el DNA debe estar empacado. En una clula euca-  Un segundo grupo de procariotas, denominado ar-
riota, el problema es mayor. Una clula humana tpica, quea, no contiene la protena HU, pero tiene protenas
por ejemplo, contiene cerca de mil veces ms DNA que con mayor similitud a las histonas, las cuales forman
una clula de E. coli. El resto de esta seccin describe un tetrmero alrededor del cual se enrollan cerca de
cmo se empaca el DNA en clulas procariotas y euca- 80 bp de DNA.
riotas.
 La mayora de los genomas bacterianos y arqueos
son molculas de DNA circulares como el de E. coli
Cromosomas procariotas descrito antes, pero algunas bacterias con genomas
lineales tambin se conocen en la actualidad, como
El concepto clsico, basado en estudios de Escherichia
los de Streptomyces coelicolor, Agrobacterium tume-
coli, es que el DNA bacteriano es una molcula circular de
faciens y Borrelia burgdorferi.
cadena doble (con frecuencia referido como el cromo-
soma bacteriano). Si fuera un crculo abierto, medira  Algunos procariotas tienen genomas que estn divi-
alrededor de 1.6 mm de circunferencia, pero en realidad didos en varias molculas, es decir, tienen genomas

Complejo
a) b) c) protenico
Asa o
dominio

Figura F2-1. a) Una molcula de DNA de doble cadena circular; b) DNA


superenrollado; c) asociacin de DNA bacteriano circular con un complejo protenico.
142 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

multipartitas. Por ejemplo, el genoma de Vibrio cho- evolucin. Las ms conservadas son las histonas H3 y
lerae, la bacteria que causa el clera, tiene sus genes H4; por ejemplo, la H3 y la H4 de los chcharos y las
esenciales distribuidos en dos molculas circulares vacas difieren slo en cuatro y dos aminocidos, res-
de DNA. pectivamente. La histona H1 es la menos conservada
de todas, lo cual refleja de alguna forma un papel dife-
rente en el empacamiento del DNA comparada con las
Cromosomas eucariotas otras histonas (vase ms adelante). En las cabezas de
La gran cantidad de DNA genmico en una clula eucariota los espermatozoides, el DNA est particularmente muy
se halla estrechamente empacado en cromosomas den- condensado y aqu pequeas protenas bsicas denomi-
tro de un organelo especializado, el ncleo. Con excep- nadas protaminas reemplazan a las histonas.
cin de los cromosomas sexuales, los organismos euca-
Cuando los cromosomas se descondensan de manera
riotas diploides como los seres humanos tienen dos
discreta y se observan bajo el microscopio electrnico,
copias de cada cromosoma, uno heredado del padre y
tienen el aspecto de cuentas en un collar (figura F2-2).
otro de la madre.
Las cuentas se denominan nucleosomas y consisten
Los cromosomas contienen DNA y protena. Si se toma en complejos de DNA con histonas. El collar es DNA
como base el peso, la mayor parte de la protena es lineal de doble cadena entre nucleosomas adyacentes
de histonas, pero tambin hay muchos miles de otras y se denomina DNA conector (figura F2-2). La distan-
protenas que son mucho menos abundantes y que se cia entre los nucleosomas, que es la longitud del DNA
denominan de manera colectiva protenas no histonas conector, vara de alrededor de 50 a 70 pares de bases
(NHP). Este complejo nuclear de DNA-protena se deno- (bp) entre los diferentes organismos. Incluso en un solo
mina cromatina. ncleo, la distancia entre los nucleosomas adyacentes
vara en relacin con, por ejemplo, la presencia de otras
En el ncleo, cada cromosoma contiene una molcu-
protenas de unin de DNA con secuencias especficas.
la de DNA de doble cadena lineal. La longitud de la molcula
de DNA empacada vara. En los seres humanos, la mo- Si una preparacin de cromatina se incuba con nucleasa
lcula de DNA ms corta de un cromosoma es de alrede- de Micrococcus sp., una enzima que degrada el DNA, el
dor de 1.6 cm y la ms larga es cercana a 8.4 cm. Durante DNA conector se destruye y quedan partculas centra-
la metafase de la mitosis, cuando los cromosomas se les del nucleosoma en las cuales las histonas protegen
alinean en el huso mittico listos para la segregacin, al DNA asociado de la digestin. Cada partcula central
estn en su estado ms condensado y su tamao es de del nucleosoma contiene un fragmento de DNA de doble
slo 1.3 m a 10 m de largo. Por lo tanto, el cociente cadena de 140 a 150 bp de longitud (segn la especie)
de empacamiento, que es la relacin de la longitud de unido a un complejo de ocho histonas, el octmero de
la molcula lineal de DNA con la longitud del cromosoma histonas, que consiste en dos molculas de cada una
en metafase, es de alrededor de 104. En el lapso temporal de las histonas H2A, H2B, H3 y H4 (figura F2-3). El DNA
entre el final de una mitosis y el comienzo de la siguiente se enrolla alrededor del octmero de histonas en cerca
(es decir, la interfase), la cromatina est ms dispersa. de 1.65 vuelta, en un superserpentn con giro hacia la
Aqu, la relacin de empacamiento est entre valores izquierda. Los contactos entre el DNA y las histonas se
de 102 y 103. En total, el empacamiento ms extenso del
DNA en los cromosomas resulta de tres niveles de plega-
miento que incluyen a los nucleosomas, a los filamentos
de 30 nm y a las asas radiales.
DNA conector Nucleosoma

Nucleosomas
El primer nivel de empacamiento incluye la unin del
DNA cromosmico a las histonas. En general, en los cro-
mosomas, la relacin entre DNA e histonas con base en el
peso es de alrededor de 1:1. Hay cinco tipos principales Digestin por la nucleasa
de histonas denominados H1, H2A, H2B, H3 y H4. Las del DNA conector
histonas son protenas muy bsicas; alrededor de 25%
de sus aminocidos son lisina o arginina, de manera que
las histonas tienen un nmero muy alto de aminocidos
cuyas cadenas laterales tienen carga positiva. En conse-
cuencia, estos grupos con carga positiva se unen a los Nucleosomas liberados
(partculas centrales)
grupos fosfato con carga negativa del DNA. No es de sor-
prenderse, dada su importancia en el empacamiento del
DNA, que las secuencias de aminocidos de las histonas Figura F2-2. Estructura de la cromatina
muestren un grado tan alto de conservacin durante la similar a cuentas en un collar.
F2GENES Y CROMOSOMAS 143

DNA central Sin embargo, algunos datos experimentales sugieren que


la histona conectora puede localizarse entre el octmero
Histona de histona y el DNA y no sobre la superficie.
Octmero H1
de histonas
(2A, 2B,3,4)
La bra de 30 nm
Si los ncleos se lisan con delicadeza, se observa que la
cromatina existe como una fibra de 30 nm de dimetro.
El dimetro es mucho mayor que el de un nucleosoma
11 nm aislado (el cual es de alrededor de 11 nm) y sugiere que
los nucleosomas forman parte de una estructura supe-
DNA
conector rior. Se desconoce la manera exacta en cmo los nucleo-
somas se organizan para formar la fibra de 30 nm; una
posibilidad es que los nucleosomas se enrollen en una h-
Figura F2-3. Diagrama esquemtico de un lice muy ordenada de seis nucleosomas por vuelta y for-
nucleosoma, que consiste en la doble hlice de DNA men un solenoide (figura F2-4). Esto generara una fibra
enrollada alrededor de un octmero de histonas (dos de tres nucleosomas de ancho, lo que corresponde al
molculas de cada una de las histonas H2A, H2B, H3 dimetro observado. En un solenoide de estas caracte-
y H4). rsticas, la longitud lineal del DNA ha sido reducida por
un factor adicional de 6 (equivalente a seis nucleoso-
mas por vuelta del solenoide). Acoplado a la relacin de
empaque de 7 para el nucleosoma en s (vase antes),
producen a lo largo de la cara interna de esta superh- esto da una relacin de empacamiento para el sole-
lice. En total, la relacin de empacamiento es cercana noide de aproximadamente 6 7 (es decir, cercana a 40).
a 7, que significa que la longitud del DNA se acorta alre- Un modelo alternativo es el modelo en zigzag (figura
dedor de siete veces por el enrollamiento alrededor del F2-4b). Tambin existen otros modelos, incluido uno
nucleosoma. llamado listn helicoidal.
La histona H1 se denomina histona conectora. Hay una Es importante entender que no toda la protena del
histona conectora fija a cada nucleosoma, pero su posi- octmero de histona est contenida dentro del cuerpo
cin exacta no se conoce. Se pens que se une al lado del nucleosoma. Cada molcula de histona tiene una
externo del octmero de histona, en la regin del DNA co- cola N terminal flexible que se extiende fuera del oct-
nector, y que su funcin consiste en mantener el DNA mero. Estas colas desempean un papel importante
enrollado en el nucleosoma (figura F2-3), quiz inclu- en el control del gen, de modo que, cuando se modi-
so en mantener a los nucleosomas adyacentes juntos. fican qumicamente, la fibra de 30 nm puede volverse

a) b)

30 nm

30 nm

Figura F2-4. a) Modelo de solenoide propuesto de la estructura de la cromatina


para producir una bra de 30 nm. La estructura consta de seis nucleosomas por
vuelta de la hlice y por lo tanto tendra tres nucleosomas de ancho. En el diagrama
slo son visibles tres nucleosomas de cada vuelta; los otros tres nucleosomas que
le corresponderan a cada vuelta quedan atrs. b) Modelo del zigzag. En cada
nucleosoma, el DNA se enrolla alrededor del lado externo (1.65 vueltas de una
espiral dirigida a la izquierda). Sin embargo, en este diagrama simple, debido a la
orientacin de algunos nucleosomas, no se muestra todo el DNA superenrollado.
144 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

ms accesible para la transcripcin de los genes en los nuclear, la mayora de los genomas mitocondriales y
nucleosomas asociados. cloroplsticos son molculas de DNA circular de doble
cadena que se parecen a los cromosomas bacterianos.
Estructuras de orden ms elevado Sin embargo, la situacin es ms compleja que esto.
Durante la interfase (es decir, entre las divisiones nu-  El genoma del cloroplasto puede distribuirse en varias
cleares), los cromosomas estn dispersos en el ncleo molculas de DNA circular; en los dinoflagelados (algas
y presumiblemente como fibras de 30 nm. A pesar de marinas), el genoma del cloroplasto est presente en
ello, durante la mitosis o meiosis, los cromosomas se crculos mltiples, cada uno conteniendo aparente-
condensan mucho. Poco se sabe acerca de cmo ocurre mente slo un gen.
esta condensacin. Cuando los cromosomas se disocian
 Los genomas mitocondriales de Paramecium, Chla-
de las histonas, se observa que tienen un andamio pro-
mydomonas y algunas levaduras (es decir, todos los
tenico fibroso central (o matriz nuclear) al cual el DNA
eucariotas unicelulares) son molculas lineales.
se fija en asas (figura F2-5). Por consiguiente, in vivo se
ve que el siguiente orden de empacamiento incluye la  En algunos eucariotas hay versiones lineales del
fijacin de la fibra de 30 nm a mltiples localizaciones genoma de los organelos que coexisten con formas
de este andamio protenico central en una serie de asas circulares.
radiales.
Adems de esta complejidad est el hecho de que los
genomas de los organelos pueden contener mltiples
Genomas de los organelos copias del genoma; por ejemplo, las mitocondrias hu-
Las mitocondrias y los cloroplastos de las clulas euca- manas contienen cerca de 10 copias idnticas.
riotas tambin contienen DNA pero, a diferencia del DNA

~1 m

300 nm
Telmero

Centrmero

Andamio protenico
(matriz nuclear)
en el centro del
cromosoma
Fibra de 30 nm plegada dentro de las asas

Figure F2-5. Fijacin de la bra de 30 nm al andamio protenico central con las


asas dispuestas en forma radial alrededor del andamio. El diagrama de la derecha
muestra la representacin de un corte transversal de un cromosoma.
SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F3Replicacin del DNA en


las bacterias
Notas clave
Polimerasa de DNA La polimerasa I de DNA de E. coli requiere los cuatro desoxirribonuclesidos
5-trifosfato (dNTP) como precursores, Mg2+, una plantilla de DNA y un ceba-
dor con un extremo terminal 3OH. La sntesis del DNA ocurre en la direccin
5 3. La polimerasa I de DNA tambin tiene una actividad de exonucleasa
3 5 (correccin de errores) y una actividad de exonucleasa 5 3. Las poli-
merasas de DNA II y III de E. coli carecen de la actividad de exonucleasa 5 3.
La polimerasa III de DNA de E. coli es la principal enzima que sintetiza DNA durante
la replicacin, mientras que la polimerasa I de DNA llena el espacio vaco entre
los segmentos de DNA generados por la polimerasa III de DNA. La polimerasa II
de DNA interviene sobre todo en la reparacin del DNA.
Horquillas de replicacin La replicacin comienza en un solo sitio, es bidireccional y semiconservativa.
Cada burbuja (u ojo) de replicacin consiste en dos horquillas de replicacin.
Fragmentos de Okazaki La sntesis del DNA avanza en una direccin 5 3 en cada cadena del DNA
parental. En la cadena con la orientacin 3 5 (la cadena adelantada), el
nuevo DNA se sintetiza de manera continua. En la cadena que tiene la orienta-
cin 5 3 (la cadena retrasada), el DNA se sintetiza en forma discontinua como
una serie de pequeos fragmentos de Okazaki, que luego son unidos.
Cebadores del RNA La replicacin del DNA requiere un cebador de RNA que sintetiza una polimerasa
de RNA denominada primasa. Este cebador es extendido por la polimerasa III de
DNA, la cual produce el DNA para ambas cadenas: la adelantada y la retrasada. La
polimerasa I de DNA degrada el cebador y lo reemplaza con DNA. A continuacin,
la ligasa de DNA junta los extremos del DNA.
Protenas accesorias Una helicasa desenrolla la doble hlice de DNA y la protena de unin al DNAmo-
nocatenario (SSB) estabiliza las regiones de cadena sencilla durante la replica-
cin. La topoisomerasa I de DNA permite que la hlice se desenrolle sin causar
una rotacin extensa del cromosoma. La topoisomerasa II de DNA separa las dos
molculas circulares de DNA, productos de la replicacin.

Temas relacionados (F1) Replicacin del DNA en bacterias


(F4) Replicacin del DNA en eucariotas

Polimerasas de DNA  Un cebador con un 3OH libre que la enzima pueda


extender.
La polimerasa I de DNA de E. coli cataliza la adicin por
pasos de desoxirribonucletidos al extremo 3OH de La polimerasa I de DNA es una enzima dirigida por la plan-
una cadena de DNA: tilla que reconoce al siguiente nucletido de la planti-
lla de DNA y aade un nucletido complementario al
(DNA)residuos n + dNTP (DNA)n+1 + PPi 3 OH del cebador, con lo que forma un enlace 3 5 fos-
fodister y libera un pirofosfato. La reaccin se mues-
La enzima presenta los siguientes requerimientos:
tra en la figura F3-1. sta incluye el ataque nuclefilo
 Los cuatro dNTPs (dATP, dGTP, dTTP y dCTP) deben estar del 3 OH del cebador en el grupo fosfato del nucle-
presentes para ser usados como precursores; tam- tido siguiente. El cebador se extiende en la direccin
bin se requiere ms Mg2+. 5 3 .
 Es esencial una plantilla de DNA para que la polime- La polimerasa I del DNA tambin corrige errores en el
rasa de DNA la copie. DNA al eliminar los nucletidos equivocados (es decir,
146 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

5' 5'
3' 3'
Cadena plantilla Cadena plantilla
O de DNA O de DNA

H 2C O G C H2C O G C
4 4

H H H H
H H H H
PPi
O O HO
.. O H O H


O P O P O P O P O

O

O
O O
O
H2C T A H2C O T A
O

H H H H H H H H

HO H 5' HO H 5'

Figura F3-1. Sntesis del DNA. En este diagrama esquemtico se muestran los puentes de
hidrgeno y un enlace 35 fosfodister que se est formando entre la dTTP con la adenina de
la cadena de la plantilla de DNA, con liberacin de un pirofosfato.

tiene una actividad de correccin de errores). Por con- el espacio entre las regiones del DNA sintetizado por la
siguiente, durante la polimerizacin, si el nucletido polimerasa III de DNA. La polimerasa II de DNA participa
que acaba de incorporarse es incorrecto (equivocado), sobre todo en la reparacin del DNA, no en la replicacin
es removido mediante la actividad de una exonucleasa del genoma.
3 5. Esto incrementa la fidelidad y se reduce la tasa
de error a menos de 10-8 por par de bases. La polimerasa Horquillas de replicacin
I de DNA tambin exhibe una actividad de exonucleasa
Cuando el cromosoma circular bacteriano se replica,
5 3, es decir que puede hidrolizar un cido nucleico
la replicacin se inicia en un origen nico. En E. coli,
comenzando desde el extremo 5 de la cadena. Esta
ste se llama locus oriC y contiene cinco copias de
actividad desempea un rol clave en la remocin del
una secuencia de DNA que acta como un sitio de unin
cebador de RNA usado al inicio de la replicacin (vase
para la protena de reconocimiento del origen DnaA.
despus). Por lo tanto, en general, la polimerasa I de DNA
Esta interaccin facilita la unin de otras protenas,
tiene tres sitios activos diferentes en su cadena polipep-
como DnaB, una helicasa de DNA. Las regiones locales
tdica: polimerasa 5 3, exonucleasa 3 5 y exonu-
del oriC se desenrollan y quedan listas para que ambas
cleasa 5 3.
cadenas sirvan de plantillas en la sntesis del nuevo DNA.
E. coli tambin contiene otras dos polimerasas de DNA, Luego, la sntesis del DNA avanza en ambas direcciones
la polimerasa II de DNA y la polimerasa III de DNA. Como desde el origen nico (es decir, es bidireccional; figura
sucede con la polimerasa I de DNA, estas enzimas catali- F3-2). Los productos de la reaccin son dos molculas
zan asimismo la sntesis de DNA dirigida por una plantilla de DNA de cadena doble hijas, cada una de las cuales
desde desoxirribonucleotidil 5trifosfato, necesitan un tiene una cadena de la plantilla original y una cadena
cebador con un grupo 3OH libre, sintetizan DNA en la del DNA que acaba de sintetizarse. En consecuencia, la
direccin 5 3 y presentan actividad de exonucleasas replicacin es semiconservativa. La regin de replica-
3 5. Ninguna enzima tiene actividad de exonucleasa cin del DNA asociada con el origen nico se denomina
5 3. burbuja de replicacin y consiste en dos horquillas
de replicacin que se mueven en direcciones opuestas
Aunque la polimerasa I de DNA fue la primera polimera-
alrededor del crculo de DNA (figura F3-2).
sa de DNA bacteriana aislada (en 1957, por Arthur Korn-
berg), de hecho es la polimerasa III de DNA (aislada en
1972) la principal enzima replicativa responsable de Fragmentos de Okazaki
copiar la mayor parte de la plantilla del DNA. Sin embargo, La doble cadena del DNA es antiparalela (seccin F1);
la polimerasa I de DNA desempea una funcin impor- una cadena corre en direccin 5 3 y la cadena
tante en la replicacin; como se describe despus, llena complementaria lo hace en direccin 3 5 . Como la
F3REPLICACIN DEL DNA EN LAS BACTERIAS 147

a) Burbuja de replicacin b) Horquillas de la replicacin

Figura F3-2. Replicacin del cromosoma circular bacteriano. La replicacin inicia


en un origen nico y avanza en dos direcciones, a) movindose alrededor del
cromosoma en el transcurso del tiempo. b). Las dos horquillas de replicacin
acaban por encontrarse y unirse. Cada una de las dos molculas hijas de DNA
circular producidas tiene una cadena del DNA plantilla original (lnea delgada) y una
nueva cadena (lnea gruesa).

doble cadena original del DNA se abre en una horquilla Cebador de RNA
de replicacin, el nuevo DNA se sintetiza contra cada
cadena plantilla. De manera superficial, por tanto, se La polimerasa de DNA no puede iniciar la sntesis del DNA
puede esperar que el nuevo DNA sea 5 3 para una sin un cebador. Incluso en la cadena retrasada, cada
cadena hija y 3 5 para la otra cadena hija. Pese a fragmento de Okazaki requiere un cebador de RNA antes
ello, todas las polimerasas de DNA slo producen DNA de que se pueda iniciar la sntesis del DNA. El cebador
en la direccin 5 3 y nunca en la direccin 3 5 . usado en cada caso es un fragmento corto de RNA [alre-
En realidad lo que sucede es que en la cadena plantilla dedor de 4-15 nucletidos (nt) de longitud] y los sintetiza
con orientacin 3 5 , el nuevo DNA se hace en un una polimerasa de RNA llamada primasa (figura F3-4a).
fragmento continuo en la direccin correcta 5 3 . La primasa puede sintetizar RNA directamente usando
Este DNA nuevo se denomina la cadena adelantada como plantilla DNA monocatenario debido a que, como
(figura F3-3). En la otra cadena plantilla (que tiene todas las polimerasas de RNA, no requiere un cebador
orientacin 5 3 ), la polimerasa III de DNA sinte- para comenzar la sntesis. El cebador de RNA produci-
tiza piezas cortas de nuevo DNA (de alrededor de 1 000 do por la primasa (figura F3 4b) es extendido luego por
a 2 000 nucletidos de largo) en la direccin 5 3 la polimerasa III de DNA (figura F3-4c). La polimerasa III
(figura F3-3) que luego son unidos. Estos fragmentos de DNA sintetiza DNA para las cadenas adelantada y retra-
pequeos se llaman fragmentos de Okazaki en honor sada (figura F3-4d). Despus de la sntesis del DNA por la
a su descubridor. La nueva cadena de DNA, la cual se polimerasa III de DNA, la polimerasa I de DNA, a travs de
elabora mediante este mtodo discontinuo, se llama su actividad de exonucleasa 5 3 hidroliza el cebador
cadena retrasada. de RNA y sintetiza DNA para rellenar el espacio que qued

3
5 Cadena adelantada

5
Fragmentos de Okazaki
3

3 Cadena retrasada
5

Figura F3-3. Sntesis de DNA en una horquilla de replicacin. A medida que el


DNA parental (lnea delgada) se abre, cada una de las dos cadenas parentales
acta como una plantilla para la sntesis de nuevo DNA (lneas gruesas). La cadena
adelantada se sintetiza en forma continua, pero la cadena retrasada se sintetiza
bajo la forma de pequeos fragmentos de DNA (Okazaki), que luego se unen.
148 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

3 Plantilla de DNA parental 5


a)

Primasa

b)
5 3
Cebador de RNA Sntesis de nuevo DNA
para la polimerasa III
de DNA
c)
5 3

d)
Cebador de RNA removido
y espacio vaco llenado con
DNA por intermedio de la
polimerasa I de DNA
e)

f)
Fragmentos de DNA
unidos por la
ligasa de DNA
g)

Figura F3-4. Detalles de la replicacin del DNA: a) la primasa se une a la cadena


plantilla de DNA (lnea delgada) y b) sintetiza un cebador corto de RNA (lnea
entrecortada); c) la polimerasa III de DNA extiende el cebador de RNA mediante la
sntesis de nuevo DNA (lnea gruesa); d) durante la sntesis de la cadena retrasada,
los fragmentos de Okazaki adyacentes son separados por los cebadores de RNA; e)
a su vez, los cebadores de RNA son removidos y los espacios vacos llenados con DNA
mediante la polimerasa I de DNA f ), lo que genera fragmentos de DNA adyacentes a
que son unidos por la ligasa de DNA g).

(figuras F3-4e y F3-4f). La polimerasa III de DNA no puede de DNA sea accesible para la replicacin. En principio,
llevar a cabo esta actividad debido a que carece de la para que una horquilla de replicacin se mueva a lo
actividad de exonucleasa 5 3 de la polimerasa I de largo de una regin de DNA, la hlice de DNA necesitara
DNA. Para finalizar, la ligasa de DNA une los extremos desenrollarse en la misma direccin, lo que determina
de los fragmentos de DNA (figura F3-4g). que el DNA rote con rapidez. No obstante, como el cro-
mosoma bacteriano es circular carece de extremos que
Protenas accesorias roten libremente. La solucin al problema consiste en
que una enzima denominada topoisomerasa I rompa
Las polimerasas I y III de DNA, la primasa y la ligasa de
un enlace fosfodister en una de las cadenas del DNA
DNA no son las nicas protenas necesarias para la repli-
(ruptura de una cadena) una pequea distancia por
cacin del cromosoma bacteriano. La plantilla de DNA es
delante de la horquilla, lo que permite que el DNA rote
una doble hlice con cada cadena enrollada de manera
con libertad (giratoria) alrededor de la otra cadena (la
estrecha alrededor de la otra y por lo tanto las dos cade-
intacta). Luego, la topoisomerasa reconstituye el enlace
nas deben desenrollarse durante la replicacin. Cmo
fosfodister.
es que se resuelve el problema del desenrrollamiento?
La helicasa DnaB se usa para desenrollar la doble hlice Despus que el DNA circular bacteriano ha sido repli-
en un evento que requiere ATP como fuente de energa cado, el resultado es de dos molculas de DNA circular
y la protena SSB (de unin a una cadena de DNA) evita de cadena doble que estn entrelazadas. La topoiso-
que las bases de una regin de una cadena se pareen merasa II las separa como sigue. Esta enzima trabaja de
otra vez, de manera que cada una de las dos cadenas una manera similar a la topoisomerasa I, pero causa una
F3REPLICACIN DEL DNA EN LAS BACTERIAS 149

Dos molculas de DNA


hijas entrelazadas

Unin de la topoisomerasa II

La topoisomerasa causa la ruptura


de las dobles cadenas, lo que permite
que el otro crculo de DNA pase a travs de
la ruptura; luego se unen las cadenas
de DNA para regenerar el crculo de 6

Figura F3-5. La topoisomerasa II separando las molculas circulares hijas de DNA.

ruptura transitoria en cada cadena (ruptura de las dos en las dos cadenas que acta como una abertura a tra-
cadenas) de una molcula de DNA de cadena doble. Por vs de la cual puede pasar el otro crculo de DNA (figura
consiguiente, la topoisomerasa II se une a un crculo de F3-5). A continuacin, la misma topoisomerasa II repara
DNA de cadena doble y determina una ruptura transitoria las cadenas rotas.
SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

F4Replicacin del DNA en los


eucariotas
Notas clave
Replicones mltiples La replicacin del DNA slo ocurre en la fase S. Sucede en muchos orgenes
cromosmicos, es bidireccional y semiconservativa. Conjuntos de 20 a 80
replicones actan como unidades de replicacin que se activan en secuencia.
A diferencia de los orgenes de la replicacin bacteriana, la de los mamferos
est menos bien definida.
Cuando menos, nueve La polimerasa de DNA es la principal enzima responsable de la replicacin del
polimerasas de DNA DNA cromosmico. La polimerasa de DNA sintetiza el cebador en el proceso.
Las polimerasas y de DNA reparan el DNA, y la polimerasa de DNA replica el
DNA mitocondrial.

Cadena adelantada y Las polimerasas de DNA y sintetizan la cadena retrasada a travs de los
retrasada fragmentos de Okazaki. La polimerasa de DNA sintetiza los cebadores de RNA
pues tiene una subunidad primasa. La polimerasa de DNA es la principal poli-
merasa de replicacin y sintetiza DNA usando el cebador de RNA producido por
la polimerasa de DNA.
Replicacin del telmero Las regiones que se encuentran en los extremos de los cromosomas (telme-
ros) contienen mltiples copias de un hexanucletido rico en G. La telomerasa
se encarga de replicar el DNA del telmero. Es una transcriptasa reversa con una
subunidad de RNA que contiene una secuencia que es el complemento inver-
tido de la repeticin del telmero. Extiende el extremo del telmero copiando
la plantilla de RNA en mltiples rondas de sntesis y luego de translocacin.
Replicacin de la Los nucleosomas no se disocian del DNA durante la replicacin de ste. En su
cromatina lugar, deben abrirse para permitir que el aparato de replicacin pase. Ambas
molculas de DNA hijas tienen histonas unidas a ellas, pero tambin deben sin-
tetizarse nuevas histonas para permitir que todo el DNA se empaque en forma
correcta en los nucleosomas.

Temas relacionados (A3) Crecimiento celular (F3) Replicacin del DNA en las bacterias
(F1) Introduccin al DNA

Replicones mltiples una clula diploide humana debe copiar alrededor de 6


billones de pares de bases comparado con slo los alre-
En los eucariotas, la replicacin del DNA cromosmico dedor de 4.6 millones de pares de bases que necesita E.
slo ocurre en la fase S del ciclo celular (seccin A3). coli para replicarse. No es de sorprenderse que cada cro-
Como en el caso de DNA bacteriano (seccin F3), el DNA mosoma en una clula humana tenga varios cientos de
eucariota se replica en forma semiconservativa. La orgenes de replicacin. A diferencia de E. coli, los or-
replicacin de cada molcula de DNA lineal en un cro- genes de la replicacin en los mamferos no parecen
mosoma comienza en muchos orgenes, uno cada 30 a tener secuencias claramente definidas de protenas de
300 kilobases (kb) de DNA segn la especie y el tejido, y unin que inician la replicacin, pero se forman regio-
avanza en ambas direcciones desde cada origen. nes ms generales ricas en AT en las cuales se forman los
El uso de mltiples orgenes es esencial con el fin de ase- complejos de replicacin (ORC). Cada ORC contiene seis
gurar que la gran cantidad de DNA cromosmico de una protenas diferentes, cada una de las cuales es hom-
clula eucariota se replique dentro del lapso necesario; loga a la protena DnaA de E. coli.
F4REPLICACIN DEL DNA EN LOS EUCARIOTAS 151

Figura F4-1. Replicacin del DNA cromosmico eucariota. La replicacin comienza


en muchos orgenes y avanza en ambas direcciones en cada localizacin. Al nal,
las burbujas de replicacin conuyen para producir dos molculas hijas de DNA,
cada una de las cuales consiste en una cadena de DNA parental (lnea delgada) y una
cadena del DNA que acaba de sintetizarse (lnea gruesa).

En cada origen, se forma una burbuja de replicacin La polimerasa de DNA es codificada por un gen nuclear,
que consiste en dos horquillas de replicacin que se pero la enzima es dirigida a la mitocondria, donde
mueven en direcciones opuestas. El DNA replicado bajo replica el DNA mitocondrial.
el control de un solo origen se llama un replicn. La
Las polimerasas y de DNA intervienen sobre todo en
sntesis del DNA avanza hasta que las burbujas de repli-
la reparacin del DNA, como lo son otras polimerasas de
cacin confluyen (figura F4-1).
DNA que no se consideran aqu.
No todas las regiones de un cromosoma se replican
en forma simultnea. En una parte del cromosoma se
pueden encontrar muchas burbujas de replicacin y
Cadenas adelantada
ninguna en otra seccin. Por lo tanto, los orgenes de y retrasada
replicacin se activan en grupos, denominados unida- El esquema bsico de la replicacin de las dos cadenas
des de replicacin, que consisten en 20 a 80 orgenes. del DNA cromosmico en los eucariotas es similar al de
Durante la fase S, las diferentes unidades de replica- la replicacin del DNA bacteriano (seccin F3); se sinte-
cin se activan en un orden establecido hasta que al tizan una cadena adelantada y una retrasada, la ltima
final se replica todo el cromosoma. El DNA activo para bajo la forma de una sntesis discontinua a travs de los
la transcripcin parece replicarse al principio de la fase fragmentos de Okazaki. La polimerasa de DNA sinte-
S, mientras que la cromatina que est condensada y tiza los cebadores de RNA (8 a 12 nt de longitud) que se
no es activa para la transcripcin se replica ms tarde. requieren, la cual cuenta con una subunidad primasa.
La polimerasa de DNA inicia la sntesis de la cadena
retrasada, para lo cual primero elabora el cebador de
Cuando menos, nueve polimerasas RNA y luego lo extiende con una regin corta de DNA. A
de DNA continuacin, la polimerasa de DNA sintetiza la parte
Las clulas eucariotas contienen cuando menos nueve restante del fragmento de Okazaki. De manera similar,
polimerasas de DNA diferentes, que se denotan por las la polimerasa de DNA sintetiza la cadena adelantada. La
letras griegas , , , , , etc. La principal enzima que enzima presenta actividad de exonucleasa 3 5 y de
participa en la replicacin del DNA cromosmico es la esta manera puede corregir errores del DNA elaborado,
polimerasa de DNA. La polimerasa de DNA tambin algo que la polimerasa de DNA est impedida de hacer
desempea un papel importante en la replicacin dado porque carece de esa actividad.
que ceba el proceso (vase ms adelante).
152 SECCIN F ESTRUCTURA Y REPLICACIN DEL DNA

Replicacin del telmero telmero mediante puentes de hidrgeno. Por lo tanto, al


La replicacin de una molcula de DNA lineal en un cro- usar el RNA como una plantilla, la telomerasa (que es una
mosoma eucariota genera un problema que no existe con transcriptasa reversa; seccin I4) copia la plantilla de RNA
la replicacin de las molculas de DNA circular bacteriano. y agrega desoxirribonucletidos al extremo del telmero
El mecanismo normal de la sntesis de DNA (vase antes) de DNA. Por consiguiente, la telomerasa se transloca a lo
implica que el extremo 3 de la cadena retrasada no se largo de la cadena hacia el nuevo extremo del telmero y
replica. Esto genera una brecha en el extremo del cromo- repite el proceso de extensin. Esto puede hacerse ciento
soma y por lo tanto un acortamiento de la porcin repli- de veces antes de finalizarlo a travs de su disociacin.
cada de la doble cadena. El efecto sera que el DNA cro- Este mecanismo de accin de la telomerasa se confirma
mosmico debera hacerse ms corto cada vez despus al encontrar que en otras especies el telmero repetido
de cada replicacin. Varios mecanismos evolucionaron difiere en secuencia del de los humanos (por ejemplo, en
para resolver este problema. En muchos organismos, la Tetrahymena, es 5-TTGGGG-3), pero la correspondiente
solucin es usar una enzima llamada telomerasa para telomerasa siempre contiene una secuencia de RNA que
replicar los extremos (telmeros) del cromosoma. es el complemento invertido del de la secuencia repetida
de cada especie.
Cada telmero contiene muchas copias de una secuen-
cia de hexanucletido repetida rica en G; en los huma- Todava no est claro cmo se extiende la otra cadena
nos, sta es 5 -TTAGGG-3 . La telomerasa contiene una (la cadena rica en C) en el extremo del telmero, pero
protena y, como parte integral de su estructura, una mo- posiblemente se debe a que la cadena de DNA que acaba
lcula de RNA de alrededor de 450 nt de longitud. Cerca de extenderse acta como una plantilla para la replica-
del extremo 5 de este RNA est la secuencia 5 -CUAACC- cin normal del DNA (sntesis de la cadena retrasada por
CUAAC3 , que es el complemento inverso del telmero la polimerasa de DNA) para formar DNA cromosmico
humano repetido (5 -TTAGGG-3 ). de cadena doble.
El mecanismo de accin de la telomerasa se muestra en la En los mamferos, la telomerasa es activa en las etapas
figura F4-2. El RNA de la telomerasa se une al extremo del tempranas del desarrollo embrionario, pero despus del

Telmero
5 TTAGG GT T AGGG 3
3 5 CAAUCCC AAUC
RNA de la Telomerasa
3 5
Sntesis de DNA por
la telomerasa
copiando la plantilla de RNA
5 TTAGGG T T A GGG T T AG 3
3 5 CAAUC C CAA UC

3 5
Translocacin

5 TTAGGGTTAGGGTTA G 3
3 5 CAAUCCCA AUC

3 5
Sntesis de DNA por
la telomerasa
copiando la plantilla de RNA
5 TTAGGGTTA GGG TTA GGG TTA G 3
3 5 CAAUCCCAAUC

3 5

Figura F4-2. Replicacin del DNA telomrico. La telomerasa es una transcriptasa


reversa con una molcula de RNA integral que usa como plantilla para dirigir la
sntesis del DNA y en esa medida extender los extremos del DNA cromosmico.
F4REPLICACIN DEL DNA EN LOS EUCARIOTAS 153

nacimiento es activa slo en las clulas madre y en las todava no se comprende del todo. Las dos molcu-
clulas reproductivas, de manera que en las otras clu- las de DNA hijas que resultan de la replicacin tienen
las de los mamferos el DNA cromosmico se acorta cada histonas viejas unidas al mismo, pero en total, ya que
vez que la clula se divide. la cantidad de DNA result duplicada, se necesitan ms
histonas para empacar al DNA correctamente dentro de
los nucleosomas. No debe sorprender, por lo tanto,
Replicacin de la cromatina que la fase S del ciclo celular es tambin el momen
Cuando un cromosoma se replica, la maquinaria de to en el cual se sintetizan grandes cantidades de his-
replicacin pasa a travs de los nucleosomas sin remo- tonas.
ver las histonas del DNA. La manera como esto ocurre
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G1Introduccin al RNA
Notas clave
Estructura covalente El RNA es una cadena polimrica de ribonucletidos unidos por enlaces 35
fosfodister. La estructura covalente es muy similar a la del DNA, excepto que
el uracilo reemplaza a la timina y la ribosa reemplaza a la desoxirribosa.
Estructura secundaria Las molculas de RNA son en gran medida de una sola cadena, pero hay regio-
del RNA nes de complementariedad donde la cadena de RNA forma regiones internas
de doble cadena.
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G5) Transcripcin de genes
(G2) Transcripcin en procariotas codificantes de protenas en
(G3) Operones eucariotas
(G4) Transcripcin en eucariotas: (G6) Regulacin de la transcripcin de
descripcin la polimerasa II de RNA

Estructura covalente  El azcar del RNA es la ribosa, en sustitucin de la des-


Como el DNA (seccin F1), el RNA es un largo polmero oxirribosa del DNA (figura G1-1b).
que consiste en nucletidos unidos por enlaces 35 Los ribonuclesidos correspondientes son adenosina,
fosfodister. Sin embargo, hay entre ellos algunas dife- guanosina, citidina y uridina. Los ribonucletidos corres-
rencias. pondientes son adenosina 5-trisfosfato (ATP), guanosi-
 Las bases del RNA son adenina (se abrevia A), guanina na 5-trifosfato (GTP), citidina 5-trifosfato (CTP) y uridina
(G), uracilo (U) y citosina (C). Por lo tanto, la timi- 5-trifosfato (UTP).
na del DNA es reemplazada por el uracilo en el RNA, Como en el DNA, la secuencia de nucletidos del RNA
una pirimidina diferente (figura G1-1a). No obstante, tambin se escribe como una secuencia de bases en la
como la timina (seccin F1), el uracilo puede formar direccin 5 3. Por consiguiente, GUCAAGCCGGAC
pares de bases con la adenina. es la secuencia de una molcula corta de RNA.

a) b)
O
HOCH2 O OH

HN 4
3 5 H H
2 6 H H
1
O N
HO OH
H
Uracilo (U) Ribosa

Figura G1-1. a) Uracilo; b) ribosa.


G1INTRODUCCIN AL RNA 155

Estructura secundaria del RNA De esta manera, el RNA tendr algunas regiones de doble
cadena. El RNA ribosmico (rRNA) y el RNA de transferencia
La mayor parte de las molculas de RNA son cadenas sim- (tRNA) (secciones G8 y G9, respectivamente) exhiben
ples, pero una molcula de RNA puede contener regiones estructura secundaria sustancial, como lo hacen algunos
que forman pares de bases complementarias donde la RNA mensajeros (mRNA).
cadena de RNA forma asas sobre s misma (figura G1-2).

U
C A
G G
G C
G C
U A
A U
C G
C
U A
G C
G C
A U
G G
G G
C A
G U

Figura G1-2. Un ejemplo de autocomplementariedad en el RNA, con la formacin


de una regin interna de doble cadena; los puentes de hidrgeno entre las bases
TFNVFTUSBODPOFMTNCPMPt
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G2Transcripcin en procariotas
Notas clave
Tres fases de la La transcripcin por la polimerasa de RNA de E. coli sucede en tres fases: inicia-
transcripcin cin, elongacin y terminacin. La iniciacin incluye la unin de la enzima a
un promotor corriente arriba del gen. Durante la elongacin, la cadena de DNA
antisentido se usa como la plantilla, de manera que el RNA se hace con la misma
secuencia de bases que la cadena con sentido (codificacin), excepto que U
reemplaza a T. Al final, se encuentra una seal de terminacin que detiene la
sntesis y causa la liberacin del RNA completo.
Promotores e iniciacin La holoenzima polimerasa de RNA (que contiene las subunidades 2)
inicia la transcripcin mediante la unin a una regin de 40-60 pb que con-
tiene dos elementos promotores conservados, la secuencia 10 (caja de Pri-
bnow) con el consenso TATAAT, y la secuencia 35 con el consenso TTGACA. El
factor es esencial para la iniciacin. No se requiere cebador. Los promotores
varan hasta en 1 000 veces en su eficiencia de iniciacin, la cual depende de la
secuencia exacta de los elementos del promotor clave as como de secuencias
de los flancos. Algunos genes que se expresan mucho cuentan tambin con
un elemento que se localiza 40 a 60 nucletidos (nt) corriente arriba del sitio
donde se inicia la transcripcin que incrementa la eficiencia de la iniciacin
al actuar como un sitio de unin adicional de la polimerasa de RNA.
Elongacin Despus de la iniciacin, la subunidad se disocia de la polimerasa de RNA
para dejar al centro enzimtico (2) que contine la sntesis de RNA en la
direccin 5 3 usando los cuatro ribonuclesidos 5-trifosfato como precur-
sores. La doble hlice del DNA est desenrollada para la transcripcin, y forma
una burbuja de transcripcin, y luego vuelve a enrollarse despus que pasa el
complejo de transcripcin.
Terminacin Una seal de terminacin comn es una estructura en horquilla formada por
una regin palindrmica rica en GC, seguida por una secuencia rica en AT. Tam-
bin se usan otras seales, que requieren la asistencia de la protena rho ()
para que exista una terminacin efectiva.
Procesamiento del RNA En los procariotas, los transcritos de RNA mensajero de genes que codifican pro-
tenas requieren pequeas modificaciones antes de la traduccin o ninguna.
El RNA ribosmico (rRNA) y el RNA de transferencia (tRNA) se sintetizan como
molculas precursoras que requieren el procesamiento por parte de ribonu-
cleasas especficas para que liberen las molculas de RNA maduras.
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-MRNA
(G1) Introduccin al RNA eucariota
(G3) Operones (G8) Transcripcin y procesamiento
(G4) Transcripcin en eucariotas: del RNA ribosmico
descripcin (G9) Transcripcin y procesamien-
(G5) Transcripcin de genes codificantes to del RNA de transferencia
de protenas en eucariotas
(G6) Regulacin de la transcripcin de la
polimerasa II de RNA
G2TRANSCRIPCIN EN PROCARIOTAS 157

Tres fases de la transcripcin secuencias comunes de 6 bp que encierran una particu-


La transcripcin gnica por la polimerasa de RNA de E. lar importancia para la funcin promotora y por lo cual
coli tiene lugar en tres fases: iniciacin, elongacin han sido muy conservadas en las especies. Si se usa la
y terminacin. Durante la iniciacin, la polimerasa convencin de llamar +1 al primer nucletido de una
de RNA reconoce un sitio especfico del DNA, corriente secuencia transcrita, sus dos elementos promotores se
arriba del gen que ser transcrito, denominado sitio encuentran en las posiciones 10 y 35, que estn alrede-
promotor, al cual se une. Este complejo de polimerasa dor de 10 y 35 bp, respectivamente, corriente arriba
de RNA unida al promotor de cadena doble se denomina de donde debe iniciar la transcripcin (figura G2-1).
complejo promotor cerrado. A continuacin, el DNA se  La secuencia 10 tiene la secuencia de consenso (es
desenrolla en forma local y crea un complejo promo- decir, la secuencia promedio de muchos promotores)
tor abierto, al mismo tiempo que la polimerasa de RNA TATAAT. Debido a que este elemento fue descubierto
comienza la transcripcin de la cadena simple planti- por Pribnow, ahora tambin se la conoce como caja
lla de DNA. Durante la elongacin, la polimerasa de RNA de Pribnow. Representa un sitio de reconocimiento
usa la cadena antisentido () del DNA como plantilla y importante que interacta con el factor de la poli-
sintetiza una molcula de RNA complementaria a travs merasa de RNA.
de ribonuclesidos 5-trifosfato como precursores. El
RNA producido tiene la misma secuencia de la cadena
 La secuencia 35 tiene la secuencia de consenso
TTGACA y es importante en el desenrollamiento del DNA
que no funge como plantilla, denominada cadena con
sentido (+) (o cadena de codificacin), excepto que el durante la iniciacin transcripcional.
RNA contiene U en lugar de T. En diferentes localiza- La secuencia entre la secuencia 10 y la secuencia 35
ciones del cromosoma bacteriano, a veces una cadena no se conserva (es decir que vara de promotor en pro-
se usa como plantilla y en otras ocasiones la otra, lo motor), pero la distancia entre estos dos sitios es de
que depende de cul cadena es la codificadora del gen extrema importancia para el funcionamiento correcto
en cuestin. La polimerasa de RNA identifica la cadena del promotor debido a que coloca a los dos elementos
correcta a usar como plantilla debido a la presencia en el mismo lado de la doble hlice, donde son accesi-
del sitio promotor. Para terminar, la polimerasa de RNA bles para unirse con la polimerasa de RNA.
encuentra una seal de terminacin y concluye la trans-
cripcin, con liberacin del RNA transcrito y su disocia- Los promotores difieren hasta en 1 000 veces en su efi-
cin del DNA. ciencia de iniciacin de la transcripcin, de manera
que los genes con promotores fuertes son transcritos
con mucha ms frecuencia que los genes con promoto-
Promotores e iniciacin res dbiles. Las secuencias 10 y 35 de los promotores
En E. coli, una polimerasa de RNA grande y nica se fuertes corresponden muy bien a las secuencias de con-
encarga de transcribir todos los genes con la subunidad senso que se muestran en la figura G2-1, mientras que
de estructura 2. Esta enzima completa, llamada los promotores dbiles tienden a diferir de las secuen-
holoenzima, se necesita para iniciar la transcripcin cias de consenso en numerosos nucletidos. La natura-
ya que el factor es esencial para el reconocimiento leza de las secuencias vecinas al sitio de iniciacin de la
del promotor; este factor disminuye la afinidad de la transcripcin tambin puede influir en la eficiencia de
enzima central por los sitios inespecficos de unin al la iniciacin.
DNA e incrementa su afinidad por el promotor.
Es comn que los procariotas tengan varios factores
La holoenzima se une a una regin promotora de alre- que reconocen diferentes tipos de promotores. En E.
dedor de 40 a 60 bp de tamao y despus inicia la coli, el factor ms comn es 70 (as llamado debido
transcripcin a una corta distancia corriente abajo (es a que tiene una masa de 70 kDa), el cual reconoce las
decir, de 3 al promotor). Dentro del promotor hay dos secuencias de consenso promotoras descritas antes.

+1
16 a 18 bp 5 a 8 bp
T TG A C A TATA A T

35 secuencia 10 secuencia Sitio de inicio


(caja de Pribnow) de la transcripcin

Figura G2-1. Se muestran la secuencia 10 y 35 del promotor procariota. Por


convencin, el primer nucletido de la plantilla de DNA que se transcribe dentro del
RNA se denota como +1, el sitio de inicio de la transcripcin.
158 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Pese a ello, bajo otras condiciones ambientales, como Elongacin


el agotamiento del nitrgeno o temperaturas elevadas
(choque por calor), se expresan otros factores , los cua- Despus de iniciarse la transcripcin, el factor es libe-
les se unen a los promotores con diferentes secuencias rado del complejo de transcripcin y deja a la enzima
de consenso. Esto conduce a la transcripcin preferen- central (2 ), la cual contina la elongacin del
cial de aquellos genes que portan a los diferentes pro- transcrito de RNA. Por consiguiente, la enzima central
motores de consenso. En consecuencia, el factor juega contiene el sitio cataltico para la polimerizacin. El
un papel importante en el direccionamiento con el cual primer nucletido del transcrito de RNA suele ser pppG
la polimerasa de RNA transcribe los genes. o pppA. Despus, la polimerasa de RNA sintetiza RNA
en la direccin 5 3, y para ello utiliza los cuatro
De la misma manera que el promotor central, algunos
ribonuclesidos 5-trifosfato (ATP, CTP, GTP, UTP) como
genes de E. coli que se expresan mucho tambin tie-
precursores. El 3OH del final de la cadena de RNA
nen otra secuencia (llamada elemento UP del elemento
en crecimiento ataca al grupo fosfato del siguiente
corriente arriba) localizada 40 a 60 nucletidos (nt)
ribonuclesido 5-trifosfato entrante para formar un
corriente arriba del sitio de iniciacin transcripcional.
enlace 35 fosfodister (figura G2-2). La regin del DNA
ste incrementa la eficiencia de la iniciacin al actuar
desenrollado que se est transcribiendo se denomina
como un sitio de unin adicional de la polimerasa de
burbuja de transcripcin (figura G2-3). El transcrito de
RNA, para lo cual se une la subunidad de la polimerasa
RNA forma una hlice hbrida transitoria de RNA-DNA con
de RNA.
su cadena plantilla, pero luego se desprende del DNA
Cuando la polimerasa de RNA se une a un promotor, no a medida que la transcripcin avanza. El DNA se des-
necesita cebador para comenzar la transcripcin (con- enrolla hacia delante de la burbuja de transcripcin y
frntese con las polimerasas de DNA, secciones F3 y F4); despus que el complejo de transcripcin pasa vuelve
la polimerasa de RNA comienza la transcripcin direc- a enrollarse.
tamente.

5 5
3 3
O Cadena O Cadena
plantilla plantilla
H2C O C G de DNA H2C O C G de DNA

H H H H
H H H H
PPi
O O HO
.. OH O OH
O
-O P O
P O P O P
O-
O- O- O O

H2C O U A H2C O U A

H H H H
H H 5 H H 5

HO OH HO OH

Figura G2-2. Transcripcin por la polimerasa de RNA. En cada paso, el


ribonucletido entrante seleccionado es el que puede formar un par de bases
con la base siguiente de la cadena plantilla del DNA. En el diagrama, el nucletido
entrante es rUTP para parearlo con el residuo A del DNA plantilla. Se form un
enlace 35 fosfodister, que extendi la cadena del RNA en un nucletido, al tiempo
que se liber un pirofosfato. En general, la molcula de RNA crece en la direccin 5
a 3.
G2TRANSCRIPCIN EN PROCARIOTAS 159

Cadena con sentido


Polimerasa de RNA Direccin de la
transcripcin
Reenrollamiento
3 Desenrollamiento 5

5 3 3

Transcripcin con
elongacin
5ppp
Cadena de RNA Cadena
que acaba de antisentido
sintetizarse

Figura G2-3. Burbuja de transcripcin. La doble hlice de DNA es desenrollada


y entonces la polimerasa de RNA sintetiza una copia de RNA a partir de la cadena
plantilla de DNA. De manera transitoria, el RNA naciente forma una hlice hbrida de
RNA-DNA, pero luego se separa del DNA, el cual de manera subsecuente se vuelve a
enrollar en una hlice otra vez.

Terminacin quieren una protena adicional, denominada rho (),


La transcripcin contina hasta que se alcanza una que ayude a reconocer el sitio de terminacin y detenga
secuencia de terminacin. En ese punto, la transcrip- la transcripcin.
cin cesa, el transcrito de RNA y la polimerasa de RNA se
disocian del DNA y la regin de una cadena de DNA vuelve Procesamiento del RNA
a enrollarse y as reintegra la hlice doble. En los procariotas, el RNA transcrito de genes codifica-
La seal de terminacin ms comn es una regin rica dores de protenas (RNA mensajero, mRNA) requiere
en GC que es un palndromo, seguida por una secuencia pocas modificaciones o ninguna modificacin antes de
rica en AT. El RNA elaborado a partir del palndromo de la traduccin. De hecho, muchas molculas de mRNA
DNA es asimismo autocomplementario y de esa manera comienzan a traducirse incluso antes que la sntesis
los pares de bases forman hacia el interior una estruc- de RNA haya terminado. No obstante, el RNA ribosmico
tura en horquilla rica en pares de bases GC seguida por (rRNA) y el RNA de transferencia (tRNA) se sintetizan
cuatro o ms residuos U (figura G2-4). Sin embargo, no como molculas precursoras que requieren procesa-
todos los sitios de terminacin tienen esta estructura miento postranscripcional (secciones G8 y G9, respecti-
en horquilla. Aquellos que carecen de esa estructura re- vamente).

C
U G
U G
G C
A U
C G
C G
G C
C G
C G
G C
5 A U U U U U U U U OH 3

Figura G2-4. Estructura tpica en horquilla formada por el extremo 3 de una


molcula de RNA durante la terminacin de la transcripcin.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G3Operones
Notas clave
Descripcin general Los operones son grupos de genes estructurales bajo el control de un sitio ope-
rador y un gen regulador, los cuales aseguran que la expresin de los genes
estructurales se controle en forma coordinada.
El opern lac El opern lac contiene los genes lacZ, lacY y lacA que codifican a la galactosidasa
beta, a la permeasa de galactsido y a la transacetilasa de tiogalactsido, respec-
tivamente, precedido por un sitio operador (Olac) y un sitio promotor (Plac). La
polimerasa de RNA transcribe el opern y produce un mRNA policistrnico que
es traducido para generar las cuatro enzimas. Cuando la lactosa est presente,
el nivel restante de galactosidasa beta convierte parte de la lactosa en alolac-
tosa, la cual induce la transcripcin del opern lac. El isopropiltiogalactsido
(IPTG) tambin puede actuar como un inductor. La transcripcin del opern es
controlada por la protena represora lac codificada por el gen lacI.
El represor lac En ausencia de un inductor, la polimerasa de RNA se une al promotor del gen lacI
(PlacI) y transcribe el gen, lo que produce la protena represora lac, que se une
al sitio operador lac, Olac, y evita la transcripcin del opern lac. En presencia
de un inductor (por ejemplo, alolactosa o IPTG), el inductor se une al represor y
cambia su conformacin, con lo cual reduce su afinidad por el operador lac. El
represor se disocia y permite que la polimerasa de RNA transcriba al opern lac.
CRP/CAP Cuando hay glucosa presente, la transcripcin del opern lac es inhibida (repre-
sin por catabolito). La protena activadora de catabolitos, CAP (tambin deno-
minada protena de respuesta al cAMP, CRP), es requerida para la transcripcin
de alto nivel del opern lac. sta se asocia con 3,5-cAMP para formar el complejo
CRP-cAMP que se une al promotor lac e incrementa la unin de la polimerasa de
RNA, que a su vez estimula la transcripcin del opern lac. Cuando la glucosa est
presente, el nivel intracelular de cAMP cae, la CRP sola no puede unirse al pro-
motor lac y el opern lac apenas se transcribe. Cuando la glucosa est ausente,
el nivel del cAMP intracelular asciende, se forma el complejo CRP-cAMP y se es-
timula la transcripcin del opern lac, lo que permite que la lactosa se use como
una fuente de carbono alternativa.
Regulacin positiva En la regulacin negativa de la expresin gnica procariota, la unin de repre-
y negativa sores evita la transcripcin de los genes estructurales. En la regulacin positiva
de la expresin gnica, un activador se une al DNA e incrementa la tasa de trans-
cripcin. El opern lac es sujeto de control negativo y positivo.
El opern trp El opern trp contiene cinco genes estructurales que codifican enzimas para la
biosntesis de triptfano, un promotor trp (Ptrp) y una secuencia del operador
trp (Otrp). El opern se transcribe slo cuando el triptfano escasea.
El represor trp Cuando falta triptfano, se sintetiza la protena represora trp (codificada por el
opern trp), pero no puede unirse al operador trp y de esta manera se transcribe
el opern trp para producir la enzima sinttica del triptfano. Cuando el tript-
fano est presente, se une al represor y lo activa, de manera que el represor se
une al operador trp y detiene la transcripcin del opern trp.
G3OPERONES 161

Atenuacin Una secuencia adelantada en el mRNA policistrnico transcrito a partir del ope-
rn trp puede formar varias estructuras secundarias posibles tallo-asa, una de
las cuales puede actuar como un terminador de la transcripcin. Un tallo-asa
diferente puede actuar como un antiterminador. En presencia de triptfano, los
ribosomas se unen al mRNA policistrnico trp que est siendo transcrito, para lo
cual se instalan en la proximidad de la polimerasa de RNA y comienzan a traducir
la secuencia adelantada. La posicin de los ribosomas unidos evita la formacin
del tallo-asa antiterminadora, pero permite que se forme el asa terminadora,
la que de esta forma inhibe de manera adicional la transcripcin del opern
trp. Si el triptfano es escaso, el ribosoma se detiene cuando intenta traducir
los dos codones trp de la secuencia adelantada, la cual lleva a que la secuencia
adelantada disponible forme el tallo-asa antiterminadora y la transcripcin del
opern trp contine.
Atenuacin contra El opern trp es regulado por represin (la cual determina si habr transcrip-
represin cin o no) y por atenuacin (la cual adecua la transcripcin). La represin y la
atenuacin o slo la atenuacin regulan otros operones de las vas biosintticas
de aminocidos.
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-mRNA
(G1) Introduccin al RNA eucariota
(G2) Transcripcin en procariotas (G8) Transcripcin y procesamiento
(G4) Transcripcin en eucariotas: del RNA ribosmico
descripcin (G9) Transcripcin y procesamiento
(G5) Transcripcin de genes del RNA de transferencia
codificantes de protenas en eucariotas
(G6) Regulacin de la transcripcin de
la polimerasa II de RNA

Descripcin general lactosa est disponible provoca un incremento grande y


Muchos genes codificadores de protenas de las bac- coordinado de la cantidad de cada una de las enzimas a
terias estn agrupados juntos en operones, los cuales sintetizarse. Por consiguiente, cada enzima es inducible
sirven como unidades de transcripcin que estn regu- y el proceso se denomina induccin. El mecanismo
ladas de manera coordinada. Fueron Jacob y Monod, en consiste en que las pocas molculas de galactosidasa
el ao 1961, quienes propusieron el modelo de opern de las clulas antes de la induccin convierten la lactosa
para la regulacin de la transcripcin. El modelo de ope- en alolactosa, la cual a su vez activa la transcripcin de
rn propone tres elementos: estos tres genes en el opern lac. En consecuencia, la
alolactosa es un inductor. Otro inductor del opern
 Un conjunto de genes estructurales (es decir, genes lac es el isopropiltiogalactsido (IPTG). A diferencia de
codificadores de las protenas a regular) la alolactosa, E. coli no metaboliza este inductor, que
 Un sitio operador, el cual es una secuencia de DNA de esta manera es til en estudios experimentales de
que regula la transcripcin de los genes estructurales induccin.

 Un gen regulador, el cual codifica una protena que En el opern lac (figura G3-1), los genes estructurales
reconoce la secuencia operadora son los genes lacZ, lacY y lacA, que codifican la galac-
tosidasa , la permeasa y la transacetilasa, respectiva-
mente. Son transcritos para que produzcan un mRNA
El opern lac policistrnico, que a su vez es traducido para produ-
Uno de los operones ms estudiados es el opern lac de cir las tres enzimas (figura G3-1). La existencia de un
E. coli. ste codifica enzimas clave que intervienen en mRNA policistrnico asegura que las cantidades de
el metabolismo de la lactosa: permeasa de galactsido los productos de los tres genes se regulan de manera
(tambin conocida como permeasa de lactosa, trans- coordinada. La transcripcin se produce a partir de un
porta galactosa hacia el interior de las clulas a travs de la promotor (Plac) situado cadena arriba de estos genes
membrana celular) y la galactosidasa  (la cual hidroliza estructurales (figura G3-1) que une a la polimerasa de
la lactosa a glucosa y galactosa). Tambin codifica una RNA (seccin G2). Sin embargo, entre los genes promo-
tercera enzima, la transacetilasa de tiogalactsido. De tor y estructurales, tambin estn presentes un sitio
manera habitual, las clulas E. coli producen muy pocas operador (Olac) y el gen lacI, que codifica la protena
de cualquiera de estas tres protenas, pero cuando la represora lac.
162 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

PlacI Plac Olac


lacI lacZ lacY lacA

lacI lacZ lacY lacA mRNA


mRNA

Galactosidasa Permeasa Transacetilasa

Monmero Tetrmero
represor lac represor lac

Figura G3-1. Estructura del opern lac.

El represor lac el cual puede unirse estrechamente al sitio operador lac,


Olac. La secuencia Olac es palindrmica, lo que significa
El gen lacI tiene su propio promotor (PlacI), que une a que tiene la misma secuencia de DNA cuando una cade-
la polimerasa de RNA y la conduce a la transcripcin del na se lee en direccin 5 a 3 y la cadena complementaria
mRNA represor lac y as a la produccin de monmeros tambin se lee en direccin 5 a 3. Esta simetra del sitio
de la protena represora lac. Cuatro monmeros represo- operador es compartida por la simetra del tetrmero
res idnticos se renen para formar un tetrmero activo, represor.

Polimerasa
PlacI de RNA Olac

lacI Plac lacZ lacY lacA

lacI No hay transcripcin de


mRNA
genes estructurales

Monmero Tetrmero
represor lac represor lac
(activo)

Figura G3-2. Represin de la transcripcin por parte del represor lac en ausencia
del inductor.

Polimerasa
PlacI Olac de RNA
lacI Plac lacZ lacY lacA

lacI lacZ lacY lacA


mRNA Tetrmero mRNA
represor lac
inactivo
Galactosidasa Permeasa Transacetilasa
Monmero
represor lac
Inductor
(por ejemplo, alolactosa
IPTG)

Figura G3-3. El inductor inactiva al represor lac y de esta manera permite la


transcripcin de los genes estructurales.
G3OPERONES 163

En ausencia de un inductor como la alolactosa o el IPTG, con fuerza slo si la glucosa est ausente y la lactosa
el gen lacI es transcrito y la protena represora resultante est presente.
se une al sitio operador del opern lac, Olac, lo que evita la
transcripcin de los genes lacZ, lacY y lacA (figura G3-2).
Durante la induccin, el inductor se une al represor. Esto
Regulacin positiva y negativa
causa un cambio en la conformacin del represor que El opern lac es un buen ejemplo de control negativo
reduce en gran medida su afinidad por el sitio opera- (regulacin negativa) de la expresin gnica en que la
dor lac. El represor lac se disocia a continuacin del unin del represor evita la transcripcin de los genes
sitio operador y permite que la polimerasa de RNA (que estructurales. El control positivo (regulacin positiva)
ya estaba en el sitio promotor adyacente) comience la de la expresin gnica se presenta cuando la protena
transcripcin de los genes lacZ, lacY y lacA (figura G3-3). reguladora se une al DNA e incrementa la tasa de trans-
Esto produce muchas copias del mRNA policistrnico y, cripcin. En este caso, la protena reguladora se deno-
despus de la traduccin, grandes cantidades de las tres mina activador. El CAP/CRP que interviene en la regula-
enzimas. cin del opern lac representa un buen ejemplo de un
activador. En consecuencia, el opern lac es sujeto tanto
Si el inductor se remueve, el represor lac se une con de control negativo como positivo.
prontitud al sitio operador lac y la transcripcin se
inhibe casi de inmediato. El transcrito de RNA, lacZYA,
es muy inestable y por eso se degrada con rapidez, de El opern trp
manera que la sntesis adicional de galactosidasa , per- El opern del triptfano (trp) (figura G3-4) contiene
measa y transacetilasa cesa. cinco genes estructurales que codifican enzimas para la
biosntesis del triptfano con un promotor trp corriente
CRP/CAP arriba (Ptrp) y una secuencia operadora trp (Otrp). La
regin operadora trp se superpone parcialmente con el
Cuando E. coli crece con glucosa, no tiene necesidad
promotor trp. La regulacin del opern est diseada
de las enzimas que se requieren para metabolizar otros
para que la transcripcin se produzca cuando la exis-
azcares como la lactosa. En efecto, sintetizar tales enzi-
tencia de triptfano en la clula sea baja.
mas bajo estas condiciones constituira un dispendio
energtico. De esta manera, cuando la glucosa est pre-
sente, la transcripcin del opern lac est inhibida, un El represor trp
fenmeno que se denomina represin por catabolito. En ausencia de triptfano (figura G3-4a), se sintetiza una
De qu forma los catabolitos reprimen el trabajo? La protena represora trp en un opern diferenciado, trpR,
transcripcin de niveles altos del opern lac requiere que codifica y forma un dmero. Sin embargo, es inac-
la presencia de una protena activadora especfica lla- tivo y de esta manera es incapaz de unirse al operador
mada protena activadora de catabolito (CAP), tambin trp y los genes estructurales del opern trp continan
conocida como protena de respuesta al cAMP (CRP). siendo transcritos. Cuando el triptfano est presente
Esta protena, que es un dmero, no puede unirse al (figura G3-4b), las enzimas para la biosntesis del tript-
DNA a menos que forme un complejo con el 3,5-cAMP fano no son necesarias y de esta manera la expresin de
(cAMP). El complejo CRP-cAMP se une al promotor lac estos genes se detiene. Esto se logra mediante la unin
justo corriente arriba del sitio de unin de la polime- del triptfano al represor para activarlo, de manera que
rasa de RNA. Esto incrementa la unin de la polimerasa ste se una al operador para que detenga la transcrip-
de RNA y de esta manera estimula la transcripcin del cin de los genes estructurales. En esta forma, se dice
opern lac. que el triptfano es un correpresor. ste es un con-
trol negativo debido a que la unin al represor evita la
La glucosa inhibe a la ciclasa de adenilato, la enzima transcripcin, pero ntese que el opern lac y el opern
que sintetiza cAMP a partir del ATP. En consecuencia, trp muestran dos formas a travs de las cuales puede
en presencia de glucosa, el nivel intracelular de cAMP lograrse el control negativo; esto es (como en el opern
desciende, de manera que la CRP no puede unirse al lac) al tener un represor unido activo que es inactivado
promotor lac, y el opern lac es slo dbilmente activo por un ligando unido (el inductor) o (como en el opern
(incluso en presencia de lactosa). Cuando la glucosa trp) al tener un represor que suele ser inactivo pero que
est ausente, la ciclasa de adenilato no es inhibida, el se activa por la unin del ligando. Como en el caso del
nivel de cAMP intracelular aumenta y se une a la CRP. operador lac, el sitio de unin central para el represor
Cuando la glucosa est ausente pero la lactosa est pre- trp en el operador trp es palindrmico.
sente, el complejo CRP-cAMP estimula la transcripcin
del opern lac y permite que la lactosa se utilice como
una fuente alternativa de carbono. En ausencia de lac- Atenuacin
tosa, desde luego, el represor lac asegura que el opern Un segundo mecanismo, llamado atenuacin, tambin
lac permanezca inactivo. Estos controles combinados se usa para controlar la expresin del opern trp. El
aseguran que los genes lacZ, lacY y lacA se transcriban extremo final 5 del mRNA policistrnico transcrito por
164 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

Atenuador
a)
P O
Opern trpR trp trp Lder
trpE trpD trpC trpB trpA

trpE trpD trpC trpB trpA


mRNA

Dmero Enzimas para la


represor de sntesis del triptfano
trp (inactivo)

Atenuador
b)
P O
Opern trpR trp trp Lder
trpE trpD trpC trpB trpA

No hay transcripcin
Represor trp de genes estructurales
activo

Dmero represor
de trp
Triptfano

Figura G3-4. Regulacin del opern trp: a) transcripcin en ausencia de


triptfano; b) no hay transcripcin en presencia de triptfano.

el opern trp tiene una secuencia adelantada corriente del ribosoma evita que la secuencia 2 interacte con
arriba de la regin codificadora del gen estructural trpE la secuencia 3. En su lugar, los pares de bases de la
(figura G3-4). Esta secuencia adelantada codifica un secuencia 3 con la secuencia 4 forman un tallo-asa 3:4,
pptido adelantado de 14 aminocidos que contiene que acta como un terminador de la transcripcin. Por
dos residuos triptfano. La funcin de la secuencia lder lo tanto, cuando el triptfano est presente, se evita la
es ajustar la expresin del opern trp basada en la dispo- transcripcin adicional del opern trp.
nibilidad de triptfano dentro de las clulas. Esto sucede
Si, en cambio, hay poca cantidad de triptfano (figura
como se menciona a continuacin.
G3-5b), el ribosoma se detiene en los dos codones trp
La secuencia adelantada contiene cuatro regiones (figu- contenidos dentro de la secuencia 1, lo que deja a la
ra G3-5, nombradas 1-4) que pueden formar una varie- secuencia 2 sin unirse al ribosoma y por lo tanto libre
dad de estructuras secundarias tallo-asa (horquilla) para que el par de bases forme con la secuencia 3 una
de bases pareadas. Considrense las dos situaciones estructura 2:3 (tambin denominada antiterminador).
extremas: la presencia o ausencia de triptfano. La Debido a que se forma el tallo-asa 2:3, la secuencia 3
atenuacin depende del hecho de que, en las bacterias, no est disponible para la formacin del tallo-asa 3:4
los ribosomas se fijan al mRNA a medida que se sintetiza y la transcripcin contina hasta el final del opern
y de esa manera la traduccin comienza incluso antes de trp. As, la disponibilidad del triptfano controla si
que la transcripcin del mRNA se complete. Cuando el la transcripcin del opern se detendr temprano
triptfano es abundante (figura G3-5a), los ribosomas se (atenuacin) o continuar sintetizando un mRNA poli-
unen al mRNA policistrnico trp que se est transcribiendo cistrnico completo.
y comienzan a producir la secuencia adelantada. Acto
Desde el punto de vista histrico, la atenuacin fue
seguido, los dos codones trp para el pptido adelantado
descubierta cuando se advirti que la delecin de una
yacen dentro de la secuencia 1 y el codn de detencin de
secuencia corta de DNA entre el operador y el primer
la traduccin (seccin H1) se sita entre las secuencias
gen estructural, trpE, incrementaba el nivel de trans-
1 y 2.
cripcin. Esta regin se denomin el atenuador (figura
Durante la traduccin, los ribosomas permanecen muy G3-4) y corresponde al DNA que codifica la parte de la
cerca de la polimerasa de RNA y sintetizan el pptido secuencia adelantada que forma el tallo-asa terminador
adelantado, con la detencin de la traduccin final de la transcripcin.
entre las secuencias 1 y 2. En este punto, la posicin
G3OPERONES 165

a) Triptfano abundante Terminador de


1 la transcripcin
3 4
Ribosoma

2
Transcripcin
detenida

b) Triptfano escaso 4
1

2 3
Antiterminador

La transcripcin
contina

Figura G3-5. Atenuacin del opern trp: a) cuando la cantidad de triptfano es


satisfactoria, los pares de bases de las secuencias 3 y 4 forman una estructura 3:4
que detiene la transcripcin; b) cuando la cantidad de triptfano es insuciente, el
ribosoma se sita en la secuencia 1 de los codones trp, lo que deja a la secuencia 2
disponible para interactuar con la secuencia 3. Por lo tanto, no puede formarse una
estructura terminadora de la transcripcin 3:4 y la transcripcin contina.

Atenuacin contra represin que codifican enzimas para las vas biosintticas de
En general, para el opern trp, la represin a travs del aminocidos. En algunos casos, como el del opern
represor trp determina si la transcripcin suceder o no y trp, la represin y la atenuacin regulan la expresin.
si la atenuacin ajustar la transcripcin. La atenuacin En contraste, en algunos otros operones, como el his, thr
se produce en cuando menos seis operones diferentes y leu, slo la atenuacin regula la transcripcin.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G4Transcripcin en eucariotas:
descripcin
Notas clave
Tres polimerasas de RNA En eucariotas, tres polimerasas de RNA se encargan de sintetizar este cido: la
polimerasa I de RNA es una enzima nucleolar que transcribe rRNA; la polime-
rasa II de RNA se localiza en el nucleoplasma y transcribe mRNA, la mayora del
snRNA, snoRNA y miRNA; la polimerasa III de RNA es tambin nucleoplsmica
y transcribe tRNA, 5S rRNA, U6 snRNA, y el 7S RNA de la partcula de reconoci-
miento de seal (SRP).
Sntesis de RNA Cada polimerasa de RNA transcribe slo una cadena, la cadena antisentido (),
de una plantilla de DNA de cadena doble, dirigida por un promotor. La sntesis
ocurre en la direccin 5 3 y no requiere un cebador.
Subunidades de la Cada una de las tres polimerasas de RNA contiene 12 o ms subunidades, algunas
polimerasa de RNA de las cuales son similares a las de la polimerasa de RNA de E. coli. Sin embargo,
cuatro de las siete subunidades de cada enzima son exclusivas de una enzima.
Organelos Los cloroplastos y las mitocondrias contienen cada uno un tipo de polimerasa
de RNA. La enzima del cloroplasto es similar a la polimerasa de RNA bacteriana,
mientras que la enzima mitocondrial tiene similitudes con algunas polimerasas
de RNA del bacterifago.
Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-mRNA
(G1) Introduccin al RNA eucariota
(G2) Transcripcin en los procariotas (G8) Transcripcin y procesamiento del
(G3) Operones RNA ribosmico
(G5) Transcripcin de los genes que (G9) Transcripcin y procesamiento
codifican protenas en los eucariotas del RNA de transferencia
(G6) Regulacin de la transcripcin
por la polimerasa II de RNA

Tres polimerasas de RNA  La polimerasa III de RNA (RNA Pol III) se localiza asi-
A diferencia de los procariotas, en los que todo el RNA es mismo en el nucleoplasma. Transcribe a los genes
sintetizado por una sola polimerasa de RNA, el ncleo de de tRNA, rRNA 5S, y snRNA U6 y al RNA 7S asociado
la clula eucariota tiene tres polimerasas de RNA respon- con la partcula de reconocimiento de seal (SRP),
sables de la transcripcin de los diferentes tipos de RNA. que interviene en la translocacin de protenas a
travs de la membrana del retculo endoplsmico
 La polimerasa I de RNA (RNA Pol I) se localiza en el (seccin H4).
nucleolo y transcribe los genes rRNA 28S, 18S y 5.8S.
 La polimerasa II de RNA (RNA Pol II) se localiza en el Sntesis del RNA
nucleoplasma y transcribe a los genes que codifican
El mecanismo bsico de la sntesis del RNA por parte
protenas para producir pre-mRNA y genes de los
de las tres polimerasas de RNA eucariotas es el mismo
RNA nucleares pequeos (snRNA) que participan en
que el de la enzima procariota (seccin G2), que consis-
el procesamiento del mRNA (seccin G7) (excepto
te en:
en el snRNA U6). Tambin sintetiza el RNA nucleo-
lar pequeo (snoRNA) que interviene en el pro-  La iniciacin de la sntesis del RNA por la polimerasa
cesamiento del rRNA (seccin G8), y el microRNA de RNA es dirigida por la presencia de un sitio promo-
(miRNA) (seccin G7). tor en el lado 5 del sitio de inicio de la transcripcin
G4TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS: DESCRIPCIN 167

 La polimerasa de RNA transcribe una cadena, la cadena de cada polimerasa de RNA eucariota son exclusivas y no
antisentido (), de la plantilla de DNA muestran ninguna similitud con las subunidades de la
polimerasa de RNA bacteriana ni con las subunidades de
 La sntesis del RNA no requiere un cebador
las otras polimerasas de RNA eucariotas.
 La sntesis del RNA ocurre en la direccin 5 3,
cuando la polimerasa de RNA cataliza un ataque
nuclefilo por parte del 3-OH de la cadena de RNA en
Organelos
crecimiento sobre el tomo de fsforo del nuclesido En general, se acepta que las mitocondrias y los cloro-
de 5-trifosfato entrante plastos fueron bacterias de manera original, por lo cual,
durante la evolucin inicial, formaron una interrelacin
simbitica con una clula eucariota primitiva (la teora
Subunidades de la polimerasa de RNA endosimbitica). En apoyo de ello, en estos organe-
Cada una de las tres polimerasas de RNA eucariotas con- los, muchas de las caractersticas de la organizacin y
tienen 12 o ms subunidades y por eso son grandes expresin gnica son similares a lo que sucede en las
complejos enzimticos. Los genes de codificacin de bacterias. Por ejemplo, los cloroplastos contienen un
algunas de las subunidades de cada una de las enzimas solo tipo de polimerasa de RNA similar en estructura al
eucariotas muestran similitudes en la secuencia del DNA de la polimerasa de RNA bacteriana. Las mitocondrias
con los genes que codifican las subunidades de la enzi- tambin contienen un solo tipo de polimerasa de RNA,
ma central (2) de la polimerasa de RNA de E. coli (sec- la cual tiene similitudes con algunas polimerasas de RNA
cin G2). Sin embargo, cuatro de las siete subunidades del bacterifago.
SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

G5Transcripcin de los genes que


codifican protenas en los eucariotas
Notas clave
Organizacin genrica La mayora de los genes que codifican protenas en los eucariotas consiste en
secuencias de codificacin llamadas exones interrumpidas por secuencias no
codificantes llamadas intrones. El nmero de intrones y sus tamaos varan de
gen en gen. El transcrito primario (pre-mRNA) se somete a reacciones de pro-
cesamiento que producen mRNA maduros, los cuales tienen de manera tpica
un casquete o caperuza 5 y una cola poli(A) 3, con una regin de codificacin
central flanqueada por una regin no traducida 5 (UTR) y una 3.
Promotores de la polime- La transcripcin de los genes de codificacin de protenas eucariotas est con-
rasa II de RNA trolada por una combinacin de elementos de secuencia en el promotor cen-
tral, cerca del sitio de inicio de la transcripcin, y por elementos de control
corriente arriba. Las dos principales secuencias de consenso en el promotor cen-
tral son la caja TATA y la secuencia iniciadora (Inr). Los genes transcritos por la
polimerasa II de RNA pueden tener ambos elementos, slo uno o ninguno. Los
genes que carecen de una caja TATA tienen con frecuencia un elemento promotor
corriente abajo (DPE). Los genes que carecen de una caja TATA y de un elemento
Inr tienden a ser transcritos a tasas bajas y no en un sitio de inicio transcripcio-
nal definido.
Iniciacin de la La unin de la polimerasa de RNA al promotor requiere la formacin de un
transcripcin complejo de iniciacin de la transcripcin que incluye numerosos factores
de transcripcin generales (basales), los cuales se ensamblan en un orden
estricto. En los genes que tienen una caja TATA en su promotor central, el evento
inicial clave es la unin del complejo de protenas del factor de transcripcin
IID (TFIID) a la caja TATA.

Elongacin y terminacin Despus que el TFIIH fosforila el dominio C terminal (CTD) de la polimerasa II de
RNA, esta enzima comienza a moverse a lo largo de la plantilla de DNA, al tiempo
que sintetiza RNA. La elongacin contina hasta que la transcripcin llega a su
fin despus que se sintetiza una secuencia con la seal poli(A).

Temas relacionados (F1) Introduccin al DNA (G7) Procesamiento del pre-mRNA


(G1) Introduccin al RNA eucariota
(G2) Transcripcin en los (G8) Transcripcin y procesamiento
procariotas del RNA ribosmico
(G3) Operones (G9) Transcripcin y procesamiento
(G4) Transcripcin en los eucario- del RNA de transferencia
tas: descripcin
(G6) Regulacin de la transcrip-
cin por la polimerasa II de RNA

Organizacin gnica Secciones no codificantes del DNA (llamadas intrones;


En marcado contraste con los genes procariotas, donde figura G5-1) interrumpen las secciones codificantes del
las protenas son codificadas por una secuencia conti- gen (denominadas exones). No obstante, los codones
nua de codones tripletes, la vasta mayora de los genes tripletes dentro de los exones y el orden de los exones
que codifican protenas en los eucariotas es discontinua. en s mismo en el gen son todava colineales con la
G5TRANSCRIPCIN DE LOS GENES QUE CODIFICAN PROTENAS EN LOS EUCARIOTAS 169

secuencia de aminocidos del polipptido codificado. el correspondiente polipptido del gen. Las regiones
El nmero de intrones en un gen que codifica protenas situadas entre el casquete o caperuza 5 y la regin
vara y sus lmites oscilan entre alrededor de 80 bp a codificante y entre la regin codificante y la cola poli(A)
ms de 10 000 bp. 3 no se traducen y de esta manera se denominan regin
no traducida 5 (5 UTR) y regin no traducida 3 (3 UTR),
El transcrito primario de un gen eucariota que codifica
respectivamente (figura G5-1).
protenas es una molcula pre-mRNA que debe proce-
sarse para producir mRNA maduros listos para la tra-
duccin; el pre-mRNA recibe un casquete o caperuza 5 Promotores de la polimerasa II de RNA
(en general pero no siempre) y una cola poli(A) de alre-
La transcripcin de los genes eucariotas que codifican
dedor de 200 residuos de AA, en tanto que las secuencias
protenas es controlada por una variedad de elemen-
intrnicas son removidas por el corte y empalme del
tos de secuencia. Algunos de stos son cercanos al sitio
RNA. Estas reacciones de procesamiento del RNA se des-
de inicio transcripcional y tienen secuencias conser-
criben en detalle en la seccin G7, pero se debe destacar
vadas; se llaman el promotor central. Sin embargo, si
que las mismas estn ligadas de manera muy cercana
actan solos, carecen de la eficiencia necesaria y por
al proceso de transcripcin. Por ejemplo, la adicin de
ello requieren interactuar con elementos de control
un casquete o caperuza sucede muy pronto despus
corriente arriba para dirigir la iniciacin eficiente de la
que el extremo 5 del pre-mRNA ha sido sintetizado y
transcripcin. Por lo tanto, para estos genes, el promo-
mientras la elongacin de la transcripcin contina. Del
tor es una combinacin de secuencias cercanas al sitio
mismo modo, la poliadenilacin es una parte integral
de inicio de la transcripcin y de secuencias localizadas
del proceso de terminacin de la transcripcin para la
ms corriente arriba.
mayora de los genes que codifican protenas.
En el promotor central se encuentran dos secuencias de
De manera tpica, la molcula de mRNA maduro tiene
consenso principales (figura G5-2).
un casquete o caperuza 5 y una cola poli(A) 3 con los
diferentes exones (es decir, exones 1, 2 y 3 de la figura  La mayor parte de los sitios promotores de la polime-
G5-1) unidos para formar una regin codificante rasa II de RNA incluye una secuencia muy conservada
central. Durante la sntesis de las protenas (seccin que se localiza alrededor de 25-35 bp corriente arriba
H3), la regin codificante es traducida para producir (es decir, en el lado 5) del sitio de iniciacin (aunque

Exn 1 Exn 2 Exn 3

Sitio de inicio Regin donde


de la Intrn 1 Intrn 2 termina la
transcripcin transcripcin
Transcripcin por
la RNA Pol II

Transcrito 5 ppp
primario de
RNA
Separacin por
la endonucleasa
Casquete 5 y adicin de una
aadido poli (A) cola poli (A)
3 aadida

5 AAAAA200 3

5 cap Cola poli (A)


Corte y empalme
del RNA

5 UTR Exn 1 Exn 2 Exn 3 3 UTR

mRNA AAAAA200

Transporte al citoplasma a
travs de un poro nuclear

Figura G5-1. Estructura y expresin de un gen que codica protenas en un


eucariota.
170 SECCIN G SNTESIS Y PROCESAMIENTO DEL RNA

+1

Elementos control corriente arriba Caja TATA Inr

+1

Elementos control corriente arriba Inr DPE

Figura G5-2. Ejemplo de promotores centrales de la polimerasa II de RNA. Cuando


se presenta, la caja TATA se localiza alrededor de 25 a 35 bp corriente arriba del sitio
de inicio de la transcripcin (que se denota como +1), mientras que las secuencias
Inr se dispersan en el sitio de inicio de la transcripcin debido a que se localiza
entre 3 y +5. El DPE se localiza corriente abajo del sitio de inicio, en la regin +28 a
+32.

tambin puede ocurrir tan lejos corriente arriba DNA (alrededor de 200 bp o ms) en lugar de hacerlo en
como en 100). Esta secuencia tiene el consenso un sitio de inicio definido de la transcripcin.
5-TATA (A/T)AA(A/G)-3 y se llama caja TATA (figura
Como se menciona antes, la transcripcin tambin es
G5-2). Como el sitio de iniciacin se denota como la
regulada por elementos de control corriente arriba;
posicin +1, se dice que la posicin de la caja TATA se
stos se describen en la seccin G6.
localiza en alrededor de 25 a 35. La secuencia de
la caja TATA recuerda a la secuencia 10 (seccin G2)
de los procariotas (TATAAT), pero se localiza ms lejos Iniciacin de la transcripcin
corriente arriba. Ambos elementos tienen en esencia Con el fin de iniciar la transcripcin, la polimerasa II
la misma funcin, designada reconocimiento por la de RNA requiere la asistencia de varias otras protenas o
polimerasa de RNA, con el fin de posicionar la enzima complejos protenicos denominados factores de trans-
en la localizacin correcta para iniciar la transcrip- cripcin general (o basal), los cuales deben ensamblarse
cin. La secuencia alrededor de la caja TATA tambin dentro de un complejo en el promotor con el fin de que
es importante porque influye en la eficiencia de la la polimerasa de RNA se una e inicie la transcripcin
iniciacin. (figura G5-3). Todas stas tienen el nombre genrico de
TFII (factor de transcripcin de la polimerasa II de RNA).
 Una secuencia iniciadora (Inr) se encuentra con fre-
cuencia en el sitio de inicio de la transcripcin en la En los genes que tienen una caja TATA, el primer evento
regin 3 a +5. sta tiene el consenso (en genes de en la iniciacin es la unin del complejo protenico del
mamferos) de 5-YCANTYY-3, donde N es cualquiera factor de transcripcin IID (TFIID) a la caja TATA a travs de
de los cuatro nucletidos estndar y Y representa a una de sus subunidades llamada TBP (protena de unin
C o T. de la caja TATA). Tan pronto como el complejo TFIID se
une, TFIIA se une y estabiliza la interaccin TFIID-caja
Los genes transcritos por la polimerasa II de RNA suelen
TATA. A continuacin, TFIIB se une a TFIID. Sin embargo,
tener una caja TATA y una secuencia Inr, pero otros slo