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Captulo 2 1
Algunas bacterias, por ejemplo Azotobacter que vive libre en el suelo, y Rhizobium que
crece como simbionte en los ndulos de la raz de leguminosas, as como
cianobacterias, pueden fijar el nitrgeno gaseoso de la atmsfera, es decir reducirlo
convirtindolo en nitrgeno orgnico. Por otra parte, las formas parsitas obligadas
obtienen del hospedador los complejos constituyentes de su materia viva (5).
En tanto que los sulfatos pueden ser utilizados por casi todas las bacterias y hongos,
los nitratos son a menudo menos adecuados como nutrientes. Sin embargo, la mayora
de los microorganismos hace uso del amonio como fuente nica o principal de
nitrgeno. Sin embargo, algunas bacterias requieren fuentes de azufre reducido, tal
como sulfuro o tiosulfato. Los organismos vivos necesitan tambin muchos otros
elementos, como fsforo, potasio, magnesio, manganeso, calcio, hierro, cobalto, cobre,
cinc y molibdeno (1)
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2. 4. Transporte de solutos
El transporte de nutrientes a travs de la membrana citoplasmtica es especfico
porque son captados por la clula solamente aqullos para los cuales existe un sistema
transportador. Existen dos tipos principales de transporte. El primario comprende los
procesos que conducen a la transferencia de iones (H +, Na+, K +) produciendo
alteraciones en el potencial electroqumico. Las fuerzas que intervienen son el
transporte de electrones respiratorio o fotosinttico, o las bombas inicas dependientes
del ATP o de la descarboxilacin de metabolitos. El transporte secundario est guiado
por gradientes en el potencial electroqumico (9).
La difusin pasiva o simple est gobernada por el tamao molecular y las
propiedades lipoflicas del material, permitiendo la entrada de agua, toxinas no-polares
y ciertos inhibidores. La difusin facilitada se lleva cabo debido a la presencia de una
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2.5.3. pH
El pH del medio puede influir sobre la expresin de genes y regular el transporte de
protones, la degradacin de los aminocidos, la adaptacin a condiciones acdicas o
bsicas y an la virulencia. Las clulas perciben los cambios del pH ambiente a travs
de diferentes mecanismos. La protonacn y desprotonacin de los aminocidos
inducida por el pH, puede alterar la estructura protenica secundaria y por lo tanto la
funcin que seala el cambio. La clula puede responder slo a una de las formas de las
molculas de seal. Por ejemplo, los cidos orgnicos atraviesan la membrana
citoplasmtica solamente en la forma protonada y un aumento de la concentracin
intracelular indicara un incremento en la acidez ambiental. El gradiente de protones a
travs de la membrana puede servir, por s mismo, como un sensor para ajustar los
procesos dependientes de la energa (8).
El pH intracelular puede ser mantenido sobre un valor crtico en el cual las protenas
internas se desnaturalizan irreversiblemente. En Salmonella typhimurium hay tres
mecanismos para mantener el pH interno compatible con la vida: la respuesta
homeosttica, la respuesta de tolerancia al cido y la sntesis de protenas de shock
acdico (14).
A pH ambiental mayor que 6,0 las clulas bacterianas ajustan su pH interno a travs
de la respuesta homeosttica modulando la actividad de las bombas de protones,
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antiportes y simportes, para aumentar la velocidad a la cual los protones son expelidos
del citoplasma. El mecanismo homeosttico es constitutivo y funciona en presencia de
inhibidores de la sntesis proteica.
La respuesta de tolerancia al cido es iniciada por un pH externo de 5,5 a 6,0. Este
mecanismo es sensible a los inhibidores de la sntesis proteica y puede mantener el pH
interno por sobre 5,0 teniendo el pH externo valores tan bajos como 4,0. La prdida de
la actividad ATPasa, causada por las mutaciones que desorganizan genes o los
inhibidores metablicos, anula la respuesta de tolerancia al cido pero no el mecanismo
homeosttico. Esta respuesta tambin puede conferir proteccin cruzada frente a otros
agentes ambientales de estrs.
La sntesis de protenas de shock acdico es la tercera va por la que la clula regula
el pH interno. Esta sntesis es generada por un pH ambiental de 3,0 a 5,0 proveyendo
un conjunto de protenas reguladoras distintas de las protenas de la respuesta de
tolerancia al cido.
2.5.4. Oxgeno
El metabolismo de los microorganismos est fuertemente infludo por el oxgeno
molecular. Los organismos que dependen de la respiracin aerbica, para los cuales el
oxgeno es el aceptor final de electrones, se conocen como aerbicos estrictos. Un
ejemplo de stos es la actinobacteria Streptomyces. Por el contrario para los organismos
anaerbicos estrictos el oxgeno es generalmente txico. Las clulas somticas de las
bacterias del gnero Clostridium son muy sensibles al oxgeno mientras que los
endosporos estn protegidos de su efecto letal. Un grupo intermedio de organismos,
los anaerbicos facultativos, pueden crecer en presencia o ausencia de oxgeno
molecular, por ejemplo la levadura Saccharomyces cerevisiae que puede obtener su
energa tanto de la fermentacin como de la respiracin. Por otro lado estn los
organismos que nicamente toleran al oxgeno, como algunas bacterias lcticas que
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2.5.6. Temperatura
En muestras de agua recogidas en las proximidades inmediatas a las surgencias
termales se han hallado hasta 108 - 109 clulas bacterianas por mL. Las bacterias
adaptadas a elevadas presiones hidrostticas (250260 bares o sea 25-26 MPa) muestran
adems una notable adaptacin a las altas temperaturas, por ejemplo unas bacterias
metanognicas tenan tiempos de duplicacin entre 37 y 65 minutos a 100C bajo tales
presiones (16).
en los recipientes de vidrio que los contienen. Cuando el oxgeno es necesario para el
metabolismo, la fuente usual de suministro es el aire filtrado (5).
La mayora de los mohos, as como unas pocas bacterias y levaduras, cuando crecen
sin alteraciones, forman una pelcula fuerte y contnua en la superficie del medio. En
cambio, si crecen bajo el efecto de una agitacin vigorosa, originan bolitas de una pulpa
fibrosa dispersadas por todo el medio fludo (20).
Los requerimientos nutritivos de los mohos son muy parecidos a los de las levaduras,
salvo que los mohos presentan ms diversidad en los tipos de substratos orgnicos que
pueden asimilar (5). En el laboratorio un medio corriente es el extracto de malta, con o
sin extracto de levadura y agar. Para el crecimiento de algunos mohos se utiliza un
medio definido constitudo por sacarosa y sales minerales conocido como agar Czapek,
a veces adicionado de extracto de levadura. Cuando se desea aislar hongos osmfilos se
le agrega 20 a 50% de sacarosa (18).
Un medio con cloruro de amonio y otras sales, sin ninguna fuente de carbono, cuando
se incuba aerbicamente tendr disuelto CO2 atmosfrico y en presencia de luz
permitir el crecimiento de algas y cianobacterias. Pero si se incuba en la obscuridad
facilitar el desarrollo de bacterias que obtienen energa por oxidacin del amonio (20).
Sea cual fuere la composicin qumica del medio, es necesario que todos los
componentes estn perfectamente mezclados, de modo que el microorganismo tenga
acceso a todos los nutrientes. La mayora de las bacterias y algunas levaduras crecen
comnmente como clulas individuales o como agregados de varias de ellas, y
permanecen suspendidas en el medio. Cuando se trata de una poblacin densa o las
clulas secretan polmeros, el medio fludo se vuelve viscoso y adems, pueden formar
grandes agregados o crecer como una pelcula mucosa sobre la superficie.
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2. 7 Esterilizacin
2.7.1. Accin del calor
Con el fin de evitar el crecimiento de microorganismos extraos introducidos por la
contaminacin, se esterilizan con vapor de agua a presin todos los materiales que
integran el medio de cultivo. El vapor tambin se suele emplear para esterilizar
recipientes y otras superficies con las que el medio est en contacto (20).
2. 8. Desinfeccin
Los desinfectantes son substancias qumicas que matan a las clulas somticas
adheridas a las superficies inanimadas, pero no necesariamente a las formas
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2. 9. Interacciones microbianas
2.9.1. Antibiosis
Un microorganismo puede producir metabolitos que hagan el ambiente desfavorable
para el desarrollo de otros o que perturben su metabolismo hasta el punto de que
mueran o sean incapaces de reproducirse. El fenmero recibe el nombre de antibiosis o
antagonismo.
Los antibiticos constituyen un grupo heterogneo de molculas orgnicas
relativamente pequeas, producidas por unos microorganismos para inhibir a otros a
una concentracin muy baja. La mayora de los microorganismos notoriamente
productores de antibiticos se alojan en el suelo (8).
Otro grupo se molculas antagonistas son las bacteriocinas. Constituyen un grupo
relativamente heterogneo de pequeas protenas sintetizadas en los ribosomas
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dao ni provecho para la otra, por ejemplo cuando los microbios colonizan la superficie
externa de una planta obteniendo energa de la metabolizacin de exudados
producidos por el hospedador. Otro ejemplo es la influencia favorable de un microbio
facultativo sobre el desarrollo de uno anaerobio, el primero reduce la tensin de
oxgeno y crea un ambiente adecuado para que prospere el segundo (27).
Las comunidades microbianas estn caracterizadas por siete diferentes mecanismos
biolgicos:
a) provisin de nutrientes especficos por los diferentes miembros de la comunidad,
b) moderacin de la inhibicin del crecimiento,
c) interacciones que causan la alteracin de los parmetros de crecimiento de las
poblaciones individuales, produciendo un desempeo de la comunidad ms
eficiente y/o competitivo,
d) actividad metablica combinada no expresada por las poblaciones individuales
aisladas,
e) cometabolismo,
f) reacciones de transferencia de hidrgeno,
g) interaccin entre varias especies dominantes (28).
2.9.2.1. Fijacin simbitica del nitrgeno
Una particularidad de las plantas leguminosas es su capacidad para asociarse con
bacterias fijadoras de nitrgeno pertenecientes a los gneros Rhizobium, Sinorhizobium,
Bradyrhizobium y Azorhizobium. Esta simbiosis se traduce en el desarrollo del ndulo en
cuyo interior las bacterias se multiplican y transforman el nitrgeno del aire en amonio
(ver 3.10). La asimilacin de ese amonio por parte
de las plantas les permite crecer en suelos pobres
en nitrgeno.
En la primera etapa, la planta secreta en su
exudado radicular unos flavonoides que atraen a
los rizobios por quimiotactismo y activan en la
bacterias la expresin de ciertos genes que
determinan la produccin, en los rizobios, de
molculas fundamentales para el reconocimiento
y la infeccin de la planta hospedadora
induciendo la formacin de los ndulos. Las
bacterias se adhieren a los pelos absorbentes de la
raz e inducen la curvatura del extremo de los
mismos (29).
Los rizobios infectan la planta mediante un filamento de infeccin que avanza hacia
la base del pelo y el interior de la raz, simultneamente las clulas de la corteza interna
de la raz se dividen y forman el primordium nodular. La multiplicacin muy intensa
de estas clulas provoca la aparicin del ndulo, que es un verdadero rgano
especializado en el intercambio metablico entre ambos asociados.
Las simbiosis entre rizobios y leguminosas son muy especficas, por ejemplo R.
leguminosarum induce la nodulacin en el poroto pero no en la alfalfa (30). Las bacterias
no se mezclan con los orgnulos citoplasmticos, sino que se mantienen confinadas en
los simbiosomas que son vesculas protegidas por membranas. Los simbiosomas del
lupino tienen una sola bacteria, los de la soja varias. La figura 4 muestra el corte de un
ndulo.
La membrana del simbiosoma acta a modo de
barrera que controla el flujo de cidos carboxlicos
(malato, succinato, fumarato). stos constituyen la
fuente de carbono para los bacteroides. Tales cidos
proceden de la oxidacin de azcares sintetizados en
las hojas por la fotosntesis. Durante el proceso de
formacin de los simbiosoma s, las bacterias se van
transformando en bacteroides que expresan diversas
protenas especficas como la enzima nitrogenasa y
algunos citocromos. Las clulas intersticiales sin
infectar intervienen en las ltimas etapas de la sntesis
de ureidos, asparagina o glutamina, por incorporacin
del nitrgeno fijado. stos se exportan hacia la parte
area a travs de los vasos del xilema.
Para que los ndulos de las leguminosas fijen
nitrgeno es imprescindible que contengan
leghemoglobina cuyo grupo hemo es sintetizado por el
vegetal (32). La fijacin de nitrgeno requiere gran
cantidad de energa que se produce en los bacteroides
durante la oxidacin de los cidos dicarboxlicos y la
leghemoglobina transporta el O2 a una concentracin
baja pero estable que permite mantener una elevada
actividad respiratoria sin afectar la nitrogenasa, pues
esta enzima se inactiva en presencia de oxgeno (30).
La rizsfera de algunas plantas contienen acumulaciones de bacterias fijadoras, tal
como Azotobacter paspali sobre la superficie de la raz de Paspalum notatum y
Azospirillum brasilense en la de caa de azcar. Las bacterias se hallan en el espacio
intercelular del crtex radical, en una simbiosis donde se benefician los dos
participantes de la asociacin. Por otra parte, el helecho de agua Azolla contiene a la
cianobacteria Anabaena azollae en las cavidades de las hojas. Nostoc vive
simbiticamente en el lquen Peltigera y sobre las races areas de Cycas y Gunnera (29).
Varias dicotiledneas que no pertenecen a las leguminosas, tambin contiene ndulos
en las races capaces de fijar N2 . En la mayora de los casos se trata de actinomicetos del
gnero Frankia. En la figura 5 se esquematiza la forma en que los filamentos penetran a
las clulas de la raz y produce ndulos donde tambin se encuentra una hemoglobina
que facilita la provisin de O2 al endfito (32).
Un inoculante para enriquecer el suelo con la bacteria simbitica deseada, contiene
altas concentraciones celulares en un substrato que favorece largos perodos de
supervivencia sin prdidas de las caractersticas fisiolgicas del microorganismo. Los
pasos a seguir comprenden:
a) seleccin de las cepas convenientes por su mayor eficiencia;
b) cultivo del microorganismo en un medio lquido;
c) eleccin, preparacin y esterilizacin del material de soporte;
d) impregnacin del soporte con el cultivo lquido que posee un alto nmero de clulas,
e) control del nmero de bacterias vivas en el producto terminado (34).
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2.9.2.3. Biopelculas
Las biopelculas que se forman en el forraje ingerido
por el ganado vacuno y otros rumiantes, estn
inicialmente formadas por microorganismos que
digieren la celulosa del material vegetal y producen
cidos grasos y otros metabolitos. Luego las clulas de
otras especies invaden la pelcula y comienzan a usar
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2.9.3. Predacin
Algunos microorganismos predadores se alimentan de las bacterias, como los
protozoos, mixobacterias, acrasiomicetos y varios flagelados fotosintetizantes que no
siempre estn clasificados como algas.
Siempre que existen protozoos en estado trfico hay una poblacin bacteriana que le
sirve de presa. Debido a que una sola clula de protozoo consume entre divisiones 10 3 a
10 4 bacterias, una comunidad con 103 protozoos por mL g est caracterizada por una
predacin activa. Un suelo suele tener 109 bacterias/cm3, pero en solucin los
protozoos reducen el nmero de clulas a 106 /cm3
Sin embargo, a pesar de su abundancia y actividad, los protozoos no suelen eliminar
sus presas porque esto acarreara la desaparicin consecuente del predador. Con una
baja densidad de presas el protozoo debe utilizar gran cantidad de energa para llegar a
las pocas clulas que le sirven de alimento y puede morir cuando se acaben o bien
enquistarse (27).
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