I.

- INTRODUCCIN

La tcnica de precipitacin en Geles donde la reaccin Antigeno

anticuerpo no se produce sobre una clula o una partcula inerte , es
decir el antigeno se encuentra soluble.
La precipitacin en fase solida (inmunodiifusin) se lleva acabo sobre un
soporte de Agar Agar, donde se colocan al antigeno (E. coli) y anticuerpo
ambos emigran en todas direcciones formando en su lugar de encuentro
bandas de precipitacin.
La inmunodifusin radial simple se realiza incorporando el antisuero en
una delgada capa de Agar y colocando el Antigeno de posillos perfordos
sobre el agra. El antigeno difunde radicalmente alrededor del posillo de
forma de un anillo de precipitacin y en un momento se hace
estacionario.
En el punto de equilibrio el dimetro del rea del anillo est relacionado
con la concentracin antigenica en el pocillo.

II.- OBJETIVOS.
- Observar la formacin del complejo Ag Ac.

III.- MARCO TERICO.

Los conejos.
Son mamferos de la familia de los lepridos, en general no miden
ms de 40 a 50 centmetros, y no sobrepasa los 3 kilos de peso; pero ahora
estn ms difundidas como mascotas las variedades miniaturas, las cuales
se desarrollan hasta aproximadamente, los 20 cms., y pesan en promedio,
1 Kilo. viven alrededor de 6 a 9 aos. El conejo salvaje vive en bosques y
campos por lo general son de color gris y bastantes parecidos a la liebre,
es prolfico y voraz, vive en pareja en madrigueras; en cambio el conejo
domstico deriva del anterior y se han seleccionado ya ms de 50
variedades, con pelaje y dimensiones variadsimas. Se lo explota
industrialmente como objeto de aprovechar la carne, la piel y el pelo. Entre
las razas productoras de carne se puede nombrar la Flandes, la
Normanda, la de Borgoa y otras; entre las productoras de piel se destaca
el conejo Chinchilla, la de Champaa, y las distintas razas de conejos
blancos; la raza de Angora es la nica productora de pelo. Los conejos
tardan poco en domesticarse, se aburren rpido, necesitan hacer mucho
ejercicio y tener siempre algo para roen Las orejas del conejo deben
moverse hacia los pequeos ruidos, la nariz debe estar en constante
movimiento y los bigotes son rganos tctiles. Sus dientes son afilados y
crecen constantemente, su alimento es de hierbas, hojas de rbol,
zanahoria y coles, se le deber dar dos veces por da, tambin necesitan
paja fresca cada tanto, y su comida se puede mezclar con leche o agua, su
organismo se hidrata a travs de los alimentos

Escherichia Coli
Escherichia coli

Clasificacin cientfica

Reino: Bacterias
Phylum: Proteobacteria
Clase: Proteobacteria Gamma
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
 Gnero: Escherichia
Especie: E. coli
Nombre binomial
Escherichia coli
T. Escherich, 1885

Los escherichia coli (abreviado generalmente a E. coli ) son uno de la

especie principal de las bacterias que vivas en los intestinos ms bajos de
animales de sangre caliente (pjaros incluyendo y los mamferos ) y son
necesarios para la digestin apropiada del alimento. Su presencia en agua
subterrnea es un indicador comn de la contaminacin fecal. ("entrico
"es el adjetivo que describe los organismos que viven en los intestinos.
"fecal" es el adjetivo para los organismos que vivo en heces, as que l es a
menudo un sinnimo para "entrico.") El nombre viene de su descubridor,
Theodor Escherich . Pertenece entre los enterobacteriaceae , y se utiliza
comnmente como organismo modelo para las bacterias en general.

El nmero de las bacterias individuales del E. coli en las heces que un ser
11
humano pasa en un da hace un promedio de 10 (= uno con once ceros
13
despus de l) a 10 . Todas las clases diferentes de bacterias fecales de
coli y de todas las bacterias muy similares que vivan en la tierra (en el
suelo o las plantas que se decaen, de los cuales el ms comn es
enterobacteria aergenos ) se agrupan juntas bajo el nombre de bacterias
del " coliform" (significado " como coli"). Tcnico, el "grupo de coliform" se
define para ser todo el anaerobio aerobio y facultativo , no-espora-
formando, las bacterias gram-negative, barra-formadas que fermentan la
lactosa con la produccin del gas en el plazo de 48 horas en 35C (en el
cuerpo, este gas se lanza como flatulencia ).

En los campos de la purificacin del agua y del tratamiento de las aguas

residuales , el E. coli fue elegido muy temprano en el desarrollo de la
tecnologa como "indicador" del nivel de la contaminacin del agua,
significando la cantidad de materia fecal humana en l. Las razones
principales de usar E. coli son que hay mucho ms coliforms en heces
humanas que hay patgeno (tales como tifus de las salmonelas , que causa
tifoideo ), y el E. coli es generalmente inofensivo, as que no puede
"conseguir flojamente" en el laboratorio y lastimar cualquier persona.
Puede ser engaoso utilizar E. coli como indicador de la contaminacin
fecal humana porque hay otros ambientes en los cuales el E. coli crece
bien, por ejemplo los molinos de papel .

Hay, sin embargo, tres situaciones donde el E. de otra manera inofensivo

coli puede causar enfermedad:

1. Cuando las bacterias salen de la zona intestinal y en la zona

urinaria , pueden causar una infeccin designada a veces " cistitis
de la luna de miel " porque la cpula puede conducir a la
introduccin de bacterias en la vejiga. La infeccin de la zona al
menos urinaria se considera en varones y hembras y en
proporciones spero iguales si usted toma todas las edades. Puesto
que las bacterias incorporan invariable la zona urinaria a travs de
la uretra que la higiene pobre del tocador puede predisponer a la
infeccin pero otros factores son tambin importantes ( embarazo en
mujeres, la ampliacin de la prstata en hombres) y en muchos
casos el acontecimiento que inicia es confuso.
2. Cuando las bacterias salen de la zona intestinal con una perforacin
(= un agujero o el rasgn, que se podra causar por una lcera , por
ejemplo) y en el abdomen, l causa generalmente una infeccin
llamada la " peritonitis " que puede ser fatal, aunque el E. coli es
extremadamente sensible a los antibiticos tales como
estreptomicina , tratamiento con los antibiticos es generalmente
eficaz.
 3. Ciertas tensiones de E.coli son toxigenitcos (algo de producto una
toxina muy similar a sa vista en disentera ) y pueden causar la
intoxicacin alimenticia se asociaron generalmente a comer la carne
contaminada (contaminada durante o poco despus matanza o
durante el almacenaje o la exhibicin). La severidad de la
enfermedad vara considerablemente; puede, raramente, ser fatal,
pero es ms a menudo suave.

El Ciclo De Vida De E Coli

Una "tensin" de E. coli es una familia con algunas caractersticas

particulares que la hagan reconocible de otras tensiones del E. coli, la
manera que los poodles son reconocibles de otras tensiones (o de "castas")
de perros, y diversas tensiones de E. coli viven en diversas clases de
animales , as que es posible decir si el material fecal en agua vino de seres
humanos o de pjaros, por ejemplo. Las nuevas tensiones de E. coli se
presentan toda la hora del proceso biolgico natural de la mutacin , y
algunas de esas tensiones tienen caractersticas que puedan ser daosas a
un animal del anfitrin. Aunque en la mayora de los seres humanos sanos
del adulto tal tensin no causara probablemente no ms que un combate
de la diarrea , y no pudo producir ningn sntoma en todos, en nios
jvenes, o en la gente que es o ha sido recientemente enferma, o en la
gente que toma ciertas medicaciones, una tensin desconocedora puede
causar enfermedad e incluso muerte serias. Un ejemplo particularmente
virulento de tal tensin de E. coli es E.coli O157:H7 .

Debido a su ubicuidad, el E. coli se estudia con frecuencia en biologa

celular . Su estructura es clara, y l las marcas para una blanco excelente
para el principiante y los estudiantes intermedios de las ciencias de vida.

IV.- MATERIALES Y MTODOS.

MATERIALES.
- Placas petri (2)
- Matraz
- Estufa
- Peachimetro
- Agar al 2% en tampn (Agar noble)
- Tampn barbital
- PBS
- Taladrador para geles
- Cmara hmeda
1.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL PARA LA PRUEBA DE INMUNO
DIFUSIN RADIAL SIMPLE

a.- preparacin del antigeno para la inoculacin

cepa de E.coli caldo nutritivo

1.-INOCULACIONES

Fecha Dosis Sntomas del conejo Peso

Jueves 13 de enero 0.25ml Sin sntomas anormales 2.300kg
Domingo 16 de enero 0.5 ml Sin sntomas anormales 2.300kg
Viernes 21 de enero 1.0 ml Inapetencia 2.200kg
Lunes 24 de enero 1.5ml normal 1.950kg
1.800KG
Jueves 27 de enero 2.0ml normal
Domingo 30 de enero 2.5 ml normal 2.110KG

OBSERVACIN.
- Dejar dos semanas para luego despus de la ultima inoculacin
para que alcance la concentracin optima de anticuerpos.

a.- Preparacin del tampn barbital

Composicin
- Barbital sdico (cido 5,5 dietilbarbitanico, sal sdica) (1)
- Barbital sdico (cido 5,5 dietilbarbiturico (2)
- Hidroxido de sodio 5N
- Mertiolate
- Agar agarosa
Preparacin
- Pesar gr de barbital sdico y diluir en 32ml de H2O destilada
solucin (1)
- Pesar gr de barbital y diluir en 6ml de H2O destilada solucin
(2)
- Pesar gr agarosa y diluir en40ml de H2O destilada.
- Mezclar uno y dos.
- Agregar hidrxido de sodio 5N, para llevar el pH a 8.2
- Agregar 6 gotas de mertiolate.
 - Posteriormente agregar 2ml de H2O destilada.
- Agregar agarosa a la mezcla 1 y 2.
- Llevar a bao mara a 45C

Disolver ------- g de barbital sdico en _______ ml de agua destilada

(1) disolver g de barbital en de agua destilada en 95 C

b.- Preparacin de la Agarosa

- Pesar g de agarosa en ml de agua destilada

c.- OBTENCIN DEL ANTICUERPO

_ Por sangra.
- Depilar la zona del corazn
- Desinfectar con alcohol al 70%
- Buscar el tercer espacio intercostal
- Buscar el latido ms fuerte del corazn (ventriculo)
- Penetrar la aguja en un ngulo de 90
- Poner la aguja sin tocar el embolo hasta que la sangre suba,
luego aspirar 10ml.
- Poner en un tubo de prueba la sangre aspirada
- Centrifugar a 3000rpm x5 minutos
- Obtencin del plasma (anticuerpo)
D.- OBTENCIN DEL ANTIGENO PARA EL MEDIO DEL GEL AGAROSA

E. coli

Antigeno

Dilusiones

- 100 hechar uan gota de ag puro en el posillo

- 50% 0.5ml de ag + 0.5 ml de SSF ___ 0.5ml de ag ; 0.5ml de agua destilada
- 25% 0.25ml de ag + 0.75 ml de SSF ------0.25ml de Ag ; 0.75 de Agua
destilada

f. A la mezcla de gel agarosa , el cual contiene plasma , en los posillos se le agrega una
gota con las diferentes diluciones de antgeno ( E.coli)

RESULTADOS

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA

Channing Rodgers, MD Mtodos de laboratorio Clnico

Espaa 1965.
JAWETZ, MELNICK y ADELBERG 2002 Microbiologa Mdica Dcimo
sptimo Edicin Editorial El Manual Moderno Mxico D.F
www.google .com.pe