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INTRODUCCIN
Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas
constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los
procesos biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de
molculas (Berg et al, 2008).
Determinar la concentracin de protenas en una muestra biolgica es una tcnica
de rutina bsica cuando se aborda un esquema de purificacin de una protena
concreta, cuando se quiere conocer la actividad especfica de una preparacin
enzimtica, para el diagnstico de enfermedades, as como para muchos otros
propsitos. Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de protenas. Muchos
de estos mtodos se basan en: a) la propiedad intrnseca de las protenas para
absorber luz en el UV, b) para la formacin de derivados qumicos, o c) la
capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes (Segal, 2005).
La reaccin de biuret es una reaccin coloreada (violeta) debida a la formacin de
un complejo de Cu en un medio alcalino en compuestos que poseen ms de un
enlace peptidico, como las proteinas (Cambell et al, 2006):
colorimtricos.
Aprender el empleo de una curva patrn para la determinacin de la
cantidad de molculas presentes en una muestra, en este caso de
protenas.
HIPTESIS
Si se mide la absorbancia a 540 nm de una muestra coloreada con el reactivo de
Biuret sta ser proporcional a la concentracin de protena de dicha muestra.
MATERIAL Y MTODO
Primero, se dispuso a tomar la casena y macerar con ayuda de un mortero con
pistilo, despus se peso para ocupar 0.1g
RESULTADOS
Los valores de absorbancia obtenidos con el espectrofotmetro a 540 nm para
cada una de las 12 soluciones se muestran a continuacin (solamente se
muestran los tubos A y no los duplicados):
Tabla 1: Valores de absorbancia de cada una de las muestras.
Tubo No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Solucin *
Protena
(mg)
Absorbanci
a
a 540 nm
Blanco
0.034
0.071
0.142
0.277
0.345
0.079
0.198
0.221
3 ml NaCl,
0
0.1 ml BSA y 2.9 ml NaCl
1
0.2 ml BSA y 2.8 ml NaCl
2
0.4 ml BSA y 2.6 ml NaCl
4
0.8 ml BSA y 2.2 ml NaCl
8
1 ml BSA y 2 ml NaCl
10
0.25 ml casena y 2.75 ml NaCl
?
0.5 ml casena y 2.5 ml NaCl
?
0.25 ml sabrenadante y 2.75 ml
?
NaCl
0.5 ml sobrenadantey 2.5 ml NaCl
?
0.240
0.25 ml leche diluida y 2.75 ml NaCl
?
0.044
0.5 ml leche diluida y 2.5 ml NaCl
?
0.068
*A todas las soluciones se agregaron 3 ml del reactivo de Biuret.
Con los valores de la tabla anterior, tubos dos a seis, se realiz la grfica 1, de la
curva patrn de protena, obtenida por el mtodo de regresin lineal de mnimos
cuadrados; donde las abscisas (x) representan la concentracin en mg de
protena, y las ordenadas (y) los valores de la absorbancia de cada concentracin.
0.35
f(x) = 0.03x + 0
R = 1
0.3
0.25
0.2
Absorbancia a 540 nm
0.15
0.1
0.05
0
0
10
Proteina (mg)
y0.0017
0.0344
Tabla 2: determinacin de la cantidad de protena utilizando
la ecuacin de recta.
Tubo No.
7
8
9
10
11
12
Protena (mg)
2.218
5.706
6.375
6.927
1.229
1.927
Protena (mg)
7
8
9
10
11
12
2.218
5.706
6.375
6.927
1.229
1.927
Factor de disolucin
Protena (mg/ml)
4x100
2x100
4x10
2x10
4x20
2x20
887.2
1141.2
225
138.54
98.32
77.08
Absorbanci
a
a 540 nm
Blanco
0.034
0.071
0.142
0.277
0.345
0.079
0.198
0.221
0.240
0.044
0.068
DISCUSIN
De acuerdo a los resultados finales (tabla 4) obtenidos en la determinacin de la
concentracin de protena en las muestras de casena, sobrenadante y leche
diluida, que aunque no son los esperados, pues, la concentracin de protenas
tendra que ser mayor en la leche diluida que en el sobrenadante y los valores de
la concentracin de cada muestra problema iguales entre s, no se descarta este
BIBLIOGRAFA
Berg, J.M.; John, L.T.; Lubert, S. (2008) Bioqumica. 2 ed. Revert, Barcelona.
Segal, C. (2005) Manual de prcticas de biologa molecular de la clula. Editorial
publidisia.
Cambell, P.N.; Smith, A.d.; Peters, T.J. (2006) Bioqumica ilustrada:
bioqumica y biologa molecular en la era posgenmica . Masson, Espaa.
Harris, D.C. (2003). Quantitative chemical analysis. San Francisco: W.H. Freeman.
ANEXO (CUESTIONARIO)
1.- describa que es el espectrofotmetro y para que sirve.
Sirve para calcular las concentraciones de las distintas sustancias en funcin de la
absorcin del color. Tcnicas de bioqumica y biologa moleculas.freifelder
David. Editorial reverte.2003
2.- mencione que es un espectro de absorcin y las diferentes longitudes de onda
del espectro.
La espectroscopia de absorcin es la medida de la cantidad de luz absorbida por
un compuesto en funcin de la longitud de onda de la luz. En general, se irradia
una muestra con una fuente de luz y se mide la cantidad de luz transmitida a
se
esta
trabajando.
Tcnicas
de
bioqumica
biologa