Efecto de la Calendula officinalis en la

proliferacin del fibroblasto gingival humano

Effect of Calendula officinalis on the Proliferation of Human
Gingival Fibroblast

Viviana Andrea Oviedo Pealoza

Odontloga, Pontificia Universidad
Javeriana, Bogot, Colombia.
Margarita Chaves Clavijo
Bacteriloga. Magistra en Microbiologa.
Docente, Pontificia Universidad
Javeriana, Bogot, Colombia.
Nelly Stella Roa Molina
Odontloga. Magistra en Microbiologa,
Pontificia Universidad Javeriana, Bogot,
Colombia. Candidata al Doctorado en
Inmunologa, Universidad Autnoma de
Mxico, Ciudad de Mxico, Mxico.
Dabeiba Adriana Garca Robayo
Bacteriloga. Magistra en
Microbiologa. Candidata al Doctorado
en Ciencias, Universidad Nacional de
Colombia, Bogot, Colombia.
Gloria Cristina Moreno Abello
Odontloga. Magistra en
Microbiologa. Docente, Pontificia
Universidad Javeriana, Bogot,
Colombia.

Trabajo de grado de los tres primeros autores

para optar al ttulo de odontlogos, Pontificia
Universidad Javeriana, Bogot, Colombia.
CMO CITAR ESTE ARTCULO
Madrid MA, Mahecha LC, Oviedo VA, Chaves
M, Roa NS, Garca DA, Moreno GC. Efecto de
la Calendula officinalis en la proliferacin del
fibroblasto gingival humano. Univ Odontol. 2010
Jul-Dic; 29(63): 107-112.
Recibido para publicacin: 25-05-2010
Aceptado para publicacin: 26-08-2010
Disponible en
http://www.javeriana.edu.co/
universitasodontologica

PALABRAS CLAVE
Calendula officinalis, cicatrizacin, enjuague fibroblasto, extracto etanlico, proliferacin
celular, tintura.
PALABRAS CLAVES DESCRIPTOR
Fibroblastos, microbiologa, proliferacin celular, cicatrizacin de heridas, calndula inmunologa, periodoncia
REA TEMTICA
Periodoncia.
ABSTRACT
Background: Calendula officinalis has multiple therapeutic properties such as improving
the process of cicatrization. Therefore, it is interesting its possible value and use to treat
oral pathologies. Objective: To observe the effect of three presentations of C. officinalis
in different concentrations on the proliferation of the human gingival fibroblasts. Methods:
Human Gingival Fibroblasts (FGH) in fifth pass were obtained from healthy donor explants
and exposed to stimuli with ethanolic extract of C. officinalis (EEC), tincture of C. officinalis
(TC) and K-Trix rinsing in concentrations of 750, 500, 150, 100 g/ml. Proliferation of the
FGH was observed at 12, 24 and 48 hours in relation with a group of cells without getting
any stimulation, using the MTA test with Cell Titer 96. Results: The major proliferative effect
was achieved by the EEC in concentrations of 750 and 500 g/ml at 12 hours. The tincture
of 100 and 150 g/ml C. officinalis at 48 hours generated inhibition in cell growth whereas
the rinsing K-Trix did not have effect on the proliferation of the FGH in any concentration
at any time. Conclusion: The proliferation of the FGH depends on the presentation of the
C. officinalis, time, and concentration.
KEY WORDS
Calendula officinalis, cell proliferation, dyeing, ethanol extract, fibroblast, rinse, wound healing.
KEY WORDS PLUS
Fibroblasts, Microbiology, Cell Proliferation, Wound Healing, Calendula, Inmunology,
Periodontics
THEMATIC FIELD
Periodontics.

CIENCIAS BSICAS, BIOTECNOLOGA Y BIOINFORMTICA

Luis Carlos Mahecha Donato

Odontlogo, Pontificia Universidad
Javeriana, Bogot, Colombia.

RESUMEN
Antecedentes: la Calendula officinalis tiene mltiples propiedades teraputicas, dentro de
las que se encuentra su capacidad para mejorar procesos de cicatrizacin. Por ello resulta
interesante estudiar su posible valor para tratar patologas orales. Objetivo: observar los
efectos que producen tres presentaciones de C. officinalis en diferentes concentraciones
en la proliferacin de los fibroblastos gingivales humanos. Mtodo: a fibroblastos gingivales humanos (FGH) en quinto pase, obtenidos de explantes de donantes sanos, se les
realizaron estmulos con extracto etanlico de C. officinalis (EEC), tintura de C. officinalis
(TC) y enjuague K-Trix en concentraciones de 750, 500, 150, 100 g/ml y se observ la
proliferacin de los FGH a las 12, 24 y 48 horas en relacin con un grupo de clulas sin
estimular, utilizando la prueba MTA con Cell Titer 96. Resultados: el mayor efecto proliferativo se logr con el EEC en concentraciones de 750 y 500 g/ml a las 12 horas. La TC
a 100 y 150 m/ml a las 48 horas inhibi el crecimiento, mientras que el enjuague K-Trix
no tuvo efecto en la proliferacin de los FGH en ninguna concentracin en ningn tiempo.
Conclusin: la proliferacin de los FGH depende de la presentacin de la C. officinalis, del
tiempo y de la concentracin.

Univ Odontol. 2010 Jul-Dic; 29(63): 107-112. ISSN 0120-4319

Mara Alejandra Madrid Ahumada

Odontloga, Pontificia Universidad
Javeriana, Bogot, Colombia.

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INTRODUCCIN

los de la C. officinalis tienen propiedades antibacterianas y antivirales, antiinflamatorias, astringentes y

antispticas, y pueden incluso ofrecer acciones in-

de alternativas naturales provenientes de las plantas,

munoestimulantes y propiedades antiespasmdica y

utilizadas como antibiticos, antiinflamatorios y, ms

antiulcerosa.11-13

recientemente, como cicatrizantes. La cicatrizacin

Univ Odontol. 2010 Jul-Dic; 29(63): 107-112. ISSN 0120-4319

Madrid MA, Mahecha LC, Oviedo VA, Chaves M, Roa NS, Garca DA, Moreno GC

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La bsqueda por mejorar estilos de vida incluye el uso

no es un fenmeno aislado y su evolucin est con-

Tambin se han demostrado efectos de la C. offici-

dicionada por factores bioqumicos locales, cambios

nalis en clulas como el linfocito TCD4. Un extracto

en las estructuras tisulares y ciertos procesos que

acuoso de la planta inhibi la transcriptasa reversa

determinan la formacin de la cicatriz.

en linfocitos de sangre perifrica humana; adems, se

encontraron efectos inhibitorios y actividad antiinflaLos fibroblastos son clulas que participan activa-

matoria.12 En fibroblastos gingivales no se conocen

mente en los procesos de cicatrizacin cuando proli-

investigaciones sobre el efecto de la C. officinalis. Por

feran y depositan fibrina y tropocolgeno e inician la

ello, el objetivo de la presente investigacin fue ob-

reparacin de la herida.2 Los fibroblastos se originan

servar los efectos que producen tres presentaciones

localmente y a travs de las clulas mesenquimti-

de la C. officinalis en diferentes concentraciones en la

cas pluripotenciales, que comienzan la produccin de

proliferacin de fibroblastos gingivales humanos para

tropocolgeno al tercer o cuarto das despus de la

aportar informacin que sustente el efecto de esta

lesin.2 El fibroblasto presenta caractersticas parti-

planta en los procesos de cicatrizacin periodontal.

culares de acuerdo con el tejido en el que se encuentre.3 El de tipo gingival desempea un papel importante
durante los procesos de cicatrizacin y regeneracin
periodontal, por medio de una respuesta proliferativa activa, adems de otros fenmenos celulares y

MATERIALES Y MTODOS
Obtencin de fibroblastos gingivales humanos

moleculares.4 Esta respuesta proliferativa es inducida

por diferentes factores de crecimiento presentes en el

Previo cumplimiento de las normas ticas para la in-

plasma y en los grnulos plaquetarios.5

vestigacin sobre seres humanos, que incluyeron el

diligenciamiento del consentimiento informado, se ob-

En medicina popular, la Calendula officinalis se usa

tuvo una muestra de tejido gingival producto de una ci-

para mejorar la cicatrizacin. La palabra calndula vie-

ruga realizada por fines estticos en un paciente joven

ne de las calendas del latn, que designaban el primer

sin afectaciones sistmicas ni presencia de inflamacin

da del mes. Es as porque la C. officinalis florece todos

gingival. Los autores no tienen ningn tipo de conflicto

los meses del ao, incluso los de invierno, siempre y

de intereses en la elaboracin de este estudio. Los

cuando el invierno sea leve. Tambin es conocida

fibroblastos fueron obtenidos a partir de explantes del

como maravilla y se ha usado extensamente en la

tejido gingival. Los ensayos de proliferacin se rea-

piel para tratar heridas pequeas, infecciones de la

lizaron con fibroblastos gingivales humanos (FGH) en

piel, quemaduras, picaduras de abeja, quemaduras de

quinto pase. La prueba se realiz por triplicado.

sol, verrugas y cncer. La mayor parte de la evidencia

cientfica, en cuanto a su efectividad como agente
para curar heridas, se basa en estudios con animales,

Soluciones de C. officinalis

mientras que las investigaciones en seres humanos

son pocas.6-9

La frmula magistral del extracto etanlico de C. officinalis (EEC) 1:1 (50%) fue provista por el laboratorio

Las flores de C. officinalis constituyen la parte de la

Labfarve. Para los ensayos se extrajo el componente

planta ms utilizada. Los compuestos activos prima-

alcohlico con un rotavapor. La frmula magistral

rios de la planta incluyen triterpenos (antiinflamato-

de la tintura de C. officinalis (TC) al 20% se obtuvo

rios) y flavonoides, aceites esenciales, saponinas,

igualmente del laboratorio Labfarve, lote 37708200.

muclagos y sustancias amargas como la calendina.

Estos componentes son algunos de los principios

El enjuagueWomercial que contiene extracto de C.

activos que le confieren a la C. officinalis sus pro-

officinalis al 0,20%. Para los estmulos se realizaron

piedades antiinflamatoria, antisptica, cicatrizante,

las diluciones de 750, 500, 150, 100 g/ml de cada

desintoxicante y fungicida.10 Recientes estudios de

presentacin de C. officinalis en medio de cultivo sin

investigacin en laboratorio indican que los pta-

suero fetal bovino.

Estmulos de C. officinalis

Figura 1
Efecto de C. officinalis sobre FGH a las 12 horas

En placas de 96 pozos se sembraron 5.000 clulas por

c microscpicamente. Las clulas se estimularon con

cada una de las presentaciones EEC, TC y enjuague,

en cada una de las concentraciones de C. officinalis

te el reactivo CellTiter 96 AQueous (Promega). Se

adicionaron 10 l de CellTiter ms 50 l del medio
basal de Eagle (MEM) modificado por Dulbeco (DMEM)
sin suplementar a cada pozo, y despus de 2 horas
de incubacin a 37 C, las placas fueron ledas en un

500 g/ml

150 g/ml

100 g/ml

Tintura
Enjuague

clulas sin estmulo.

realizadas a las 12, a las 24 y a las 48 horas median-

750 g/ml

Extracto etanlico

(750, 500, 150, 100 g/ml). Como control se tuvieron

Las lecturas de proliferacin celular y viabilidad fueron

109

50

Los resultados a las 24 horas no mostraron cambios

en la proliferacin celular en ninguna de las presentaciones ni en ninguna concentracin al ser comparada
con el grupo control de FGH (figura 2). Los resultados
del EEC y del enjuague a las 48 horas mostraron una
leve inhibicin de la proliferacin, comparados con el
grupo control. La TC en las concentraciones de 150

microlector de ELISA a 490 nm.

y 100 g/ml inhibi el crecimiento celular, al com-

El efecto de las diferentes presentaciones de C. offi-

presentaciones (figura 3).

cinalis en distintas concentraciones sobre los cultivos

de FGH fue comparado con la proliferacin celular de
los fibroblastos del grupo sin estmulo. Se determin

pararla con las dems concentraciones y las dems

Figura 2
Efecto de C. officinalis sobre FGH a las 24 horas

que el 100% de proliferacin equivala a la absorbanproliferacin de cada pozo segn la frmula:

TP = DO problema 100 / DO control =
(% sobre el control)

Proliferacin

cia de las clulas del grupo control, y se calcul la

Donde:

200
150
100
50
0

750 g/ml

500 g/ml

TP: tasa de proliferacin.

Extracto etanlico

DO: densidad ptica.

Enjuague

150 g/ml

100 g/ml

Tintura

Para el anlisis de los datos de proliferacin se utiliz

estadstica descriptiva que incluy promedios y des-

Figura 3
Efecto de C. officinalis sobre FGH a las 48 horas

RESULTADOS
Los resultados a las 12 horas mostraron un aumento
del 61% en la proliferacin celular con el uso del EEC
a una concentracin de 500 g/ml, y con una concentracin de 750 g/ml el aumento correspondi

Proliferacin

viacin estndar.

200
150
100
50
0

750 g/ml

500 g/ml

al 31%, al ser comparados con el grupo control. Las

Extracto etanlico

otras presentaciones TC y enjuague no mostraron

Enjuague

ningn cambio en las diferentes concentraciones sobre la proliferacin del FGH (figura 1).

Tintura

150 g/ml

100 g/ml

Proliferacin fibroblasto en Calendula

durante 12 horas para lograr adherencia, que se verifi-

150
100
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completo suplementado con SFB 10%. Se incubaron

200

Proliferacin

pozo, a las cuales se le aadieron 200 l de medio

Los resultados obtenidos mostraron que el enjua-

quienes muestran que temperaturas de 80 C y 120 C

gue de C. officinalis en general no mostr efectos

para esterilizar el extracto acuoso de C. officinalis tu-

proliferativos sobre los FGH con las diferentes con-

vieron un efecto inhibitorio en la proliferacin celular.

centraciones, a las 12 y 24 horas. A las 48 horas se

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produjo una inhibicin que no super el 10% tanto en

Ms recientemente se ha estudiado un nuevo mtodo

concentraciones como en tiempos.

de extraccin acuosa que utiliza el lser para potenciar la extraccin de los metabolitos activos de la
C. officinalis y mejorar significativamente los efectos

DISCUSIN

proliferativos de la planta.12 Valdra la pena utilizar

este mtodo con C. officinalis cultivada en Colombia,

La C. officinalis es una planta muy usada en la medi-

considerando que la concentracin y el tipo de meta-

cina popular de Centroamrica, Suramrica, Europa y

bolitos en la planta pueden variar por las condiciones

Asia occidental, y est contenida en medicamentos de

ambientales.8

origen vegetal que incluyen enjuagues orales, cremas

dentales, ungentos, entre otros. Dentro de las activi-

En este estudio, todas las presentaciones de la C. offi-

dades biolgicas de la C. officinalis se ha probado su

cinalis se evaluaron en dosis entre 100 y 750 g/ml

efecto inmunomodulador,11,12 antitumoral,8 antibacte-

sobre cultivos de FGH. Estas concentraciones tomaron

riano, antiinflamatorio

y antiviral. Este estudio tuvo

como punto de partida el estudio de Matysik y colabo-

como objetivo observar los efectos que producen

radores, quienes reportaron efectos proliferativos del

tres presentaciones de la C. officinalis en diferentes

extracto metanlico de C. officinalis sobre fibroblastos

concentraciones en el proceso de proliferacin de los

de piel humana de diferentes extractos de C. officinalis

fibroblastos gingivales humanos. Las tres presenta-

(etanlicos, etilacetato y heptano), en concentraciones

ciones fueron EEC, TC y enjuague K-Trix.

entre 25 y 250 g/ml. Dicho estudio mostr un efecto

8,12

diferencial asociado con la concentracin y con el pico

La obtencin de extractos de C. officinalis vara en

de mayor efectividad a los 125 g/ml. Otras investiga-

los procesos de extraccin que puede lograrse por

ciones han probado un efecto diferencial al usar con-

trituracin, maceracin o una mezcla de los dos, y la

centraciones entre 15,52 g/ml y 2 mg/ml, asociado al

separacin de los componentes se realiza utilizando

tipo celular sobre el que se genere el estmulo.8,12

agua o alcoholes, principalmente etanol y metanol

en diferentes concentraciones. En consecuencia, se

La presente investigacin permiti observar el mayor

obtienen extractos acuosos,12 etanlicos,11 metanli-

efecto proliferativo del EEC en una concentracin de

cos8 o hidroalcohlicos. En la presente investigacin

500 g/ml. En concentraciones menores no tuvo nin-

el extracto de C. officinalis fue obtenido con etanol,

gn efecto proliferativo. Jimnez-Medina y colabora-

y para retirar el componente alcohlico sin perder la

dores reportan que la concentracin de mayor efec-

solubilidad de los metabolitos de la planta se realiz

tividad antitumoral correspondi al extracto acuoso

un proceso de evaporacin con rotavapor. La tintura

de lser activado Calendula Extract, que fue de 250

utilizada fue una preparacin magistral al 20%; entre

g/ml, al estimular seis lneas celulares diferentes.12

tanto, el enjuague K-Trix, cuyo componente activo

Tambin encontraron que los linfocitos proliferaron

es EEC, se obtuvo comercialmente.

dos y tres veces ms en concentraciones de 150, 250

y 500 g/ml, al observar una proliferacin del 36%

Los resultados mostraron que el EEC fue el nico

en concentraciones de 250-500 g/ml y del 17% en

producto que produjo efectos proliferativos; por el

concentraciones de 15,62 g/ml.12

contrario, el enjuague mostr inhibicin a las 48 horas,

y la TC no alter el crecimiento de los fibroblastos

Con referencia al tiempo, en esta investigacin se

gingivales en cultivo. Esto sugiere que los procesos de

observ un efecto proliferativo del EEC a 500 y 750

obtencin de la tintura (frmula magistral) y el enjua-

g/ml sobre FGH a las 12 horas, efecto que se perdi

gue K-Trix (produccin industrial) pudieron afectar

a partir de las 24 horas. Este hallazgo es interesante,

los metabolitos activos de la planta. Aunque en el

si se considera que los objetivos de base de este pro-

proceso de extraccin del etanol con el rotavapor se

yecto son mejorar los procesos de cicatrizacin pe-

utiliza una temperatura de 60 C, la obtencin indus-

riodontal con el uso de la C. officinalis, cuyo proceso

trial del extracto para el enjuague probablemente usa

de obtencin no altere la actividad de los metabolitos,

temperaturas que degradan estos metabolitos, tal

e identificar el efecto de estmulos consecutivos del

como lo sealan Jimnez-Medina y colaboradores,12

extracto de C. officinalis.

glicosilados, carotenoides,13 triterpenos,14 polisacridos arabinogalactanos14 y betaamilinas,8 aunque no

es claro en la literatura cul o cules metabolitos son
responsables del efecto proliferativo. Se ha mostrado que el extracto acuoso de C. officinalis favorece
la entrada de linfocitos de sangre perifrica al ciclo
celular (efecto proliferativo) y que en lneas celulares
tumorales inhibe el crecimiento, al controlar el ciclo
celular por activacin de la caspasa-3, que favorece
que las clulas tumorales entren en apoptosis.12
El estudio farmacolgico de plantas se constituye en un
campo de investigacin interesante que se basa en sus
propiedades teraputicas y la facilidad de obtencin.
Este estudio da comienzo a una serie de trabajos que
buscan profundizar en los efectos teraputicos en
odontologa de la calndula obtenida en Colombia.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
El EEC mostr accin proliferativa en FGH a las 12
horas en las concentraciones ms altas establecidas
para esta investigacin (750 y 500 g/ml), sin comprometer la viabilidad en las concentraciones menores. La actividad proliferativa en FGH se asoci con la
presentacin, con la concentracin y con el tiempo
de exposicin.
Se recomienda estudiar el efecto de la C. officinalis
en el ciclo celular de FGH, al igual que el efecto de
estimulaciones repetidas de C. officinalis en el FGH.

AGRADECIMIENTOS

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1255-60.

A la doctora Sandra Gutirrez, directora del Centro de

Investigaciones odontolgicas (CIO) de la Pontificia
Universidad Javeriana, por facilitar el desarrollo de la
investigacin.

CORRESPONDENCIA
Gloria Cristina Moreno Abello
Pontificia Universidad Javeriana

REFERENCIAS

Facultad de Odontologa

1. Peterson LJ, Hupp J, Ellis E, Tucker R. Contemporary of

oral and maxillofacial surgery. St. Louis: Mosby; 1988.
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potential significance for wound healing and the progression of periodontal disease. Oral Dis. 1996 Jun; 2(2):
155-66.

Bogot, Colombia

Carrera 7 # 40-62
gcmoreno@javeriana.edu.co
Nelly Stella Roa Molina
nelly.roa@javeriana.edu.co

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Proliferacin fibroblasto en Calendula

cia con metabolitos como flavonoides, flavonoides

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Univ Odontol. 2010 Jul-Dic; 29(63): 107-112. ISSN 0120-4319

La actividad farmacolgica de la C. officinalis se aso-

Margarita Chaves Clavijo

margarita.chaves@javeriana.edu.co
Dabeiba Adriana Garca Robayo
garciad@javeriana.edu.co
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Mara Alejandra Madrid Ahumada

maleja_86@hotmail.com
Luis Carlos Mahecha Donato
d_mahec@hotmail.com
Viviana Andrea Oviedo Pealoza
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