N 14 Pruebas Inmunologicas

CENTRO BIOCLINICO L.
A
PROCEDIMIENTO 014
PROCEDIMIENTO
OPERATIVO ESTNDAR
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VERSION N 001
CENTRO
BIO-CLINICO
PRUEBAS INMUNOLOGICAS
OBJETIVO
Unificar la metodologa necesaria, en forma y contenido, para la realizacin de

las pruebas inmunolgicas: Prueba cualitativa hCG, Serologa, Antgeno
especifico para Streptocccus grupo A y Hemoclasificacin, segn lo establecido
en los Procedimientos Operativos Estndar de uso interno en el centro
Bioclinico.
2
ALCANCE
Este documento se tomar como referencia nica para la realizacin de las

pruebas inmunolgicas: Prueba cualitativa hCG, Serologa, Antgeno
especfico para Streptocccus grupo A y Hemoclasificacin en el centro
Bioclinico.
3
RESPONSABILIDAD
Es responsabilidad del Bacterilogo encargado controlar y verificar que el

Procedimiento Operativo Estndar para las pruebas inmunolgicas: Prueba
cualitativa hCG, Serologa, Antgeno especfico para Streptocccus grupo A y
Hemoclasificacin, se elabore con este formato nico y de los operarios
encargados de seguir al pie de la letra las instrucciones para su determinacin
en el centro Bioclinico.
4
FRECUENCIA
El presente documento deber tomarse como nica referencia, cada vez que
se requiera realizar las pruebas inmunolgicas: Prueba cualitativa hCG,
Serologa, Antgeno especifico para Streptocccus grupo A y Hemoclasificacin
en el centro Bioclinico. Si el profesional a cargo esta recin llagado a la Seccin
de Bacteriologa es necesario que lea este manual antes de empezar el
procesamiento de las muestras.
5
DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Diagnostico y tratamiento clinicos por el laboratorio. John Bernard Henry,

M.D. Novena edicin. Ediciones Cientficas y Tcnicas, S.A. 1993.
REALIZADO
POR:
OCT. 20 09
JOHANNA FIERRO
REVISADO POR:
NOV. 26.09
GRACIELA LOZANO
APROBADO POR:
DIC. 01.09
LEONOR ARIZA
REVISIN
ANUAL
La informacin contenida en el presente procedimiento es propiedad del Centro Bioclinico L.A BogotaColombia. Es SECRETA Y CONFIDENCIAL. Las personas que lo reciben son responsables por su seguridad y
prevencin del uso indebido.
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Manual de Pruebas Diagnosticas. Diana Nicoll. 1996.

Anlisis Clnicos: Mtodos E Interpretacin. Jhon Bauer
CONTENIDO
PRUEBA CUALITATIVA HCG
FUNDAMENTO
La Gonadotropina Corinica Humana (hCG) es una hormona glicoproteca
secretada por la placenta poco despus de la fertilizacin. Habitualmente est
presente en suero y orina a partir del sptimo da despus de la concepcin y
la mayora de las mujeres embarazadas tiene niveles de hCG en orina iguales o
superiores a 100 mUI/mL el da de la primera falta de menstruacin.
La prueba rpida hCG es un inmunoensayo cromatogrfico para la
determinacin cualitativa de la Gonadotropina Corinica humana en orina o
suero.
La prueba utiliza dos lneas para indicar los resultados. La lnea de la prueba
utiliza una combinacin de anticuerpos que incluyen un anticuerpo monoclonal
hCG para detectar selectivamente niveles elevados de hCG. La lnea de control
est compuesta por anticuerpos policlonales de cabra y partculas coloidales de
oro.
Una vez depositada la muestra en el pocillo correspondiente, un anti-hCG
marcado con oro coloidal se solubiliza y se une a la hCG presente en la
muestra. La mezcla fluye por capilaridad a travs de la tira. El complejo hCGanticuerpo marcado se une a un anti-hCG inmovilizado en la zona de reaccin
apareciendo una banda de color. El anticuerpo marcado que no se ha unido
genera una banda de color en la zona control, indicando el correcto
funcionamiento del ensayo.
PROCEDIMIENTO
1. Centrifugue la muestra tomada en tubo rojo por 5 minutos o solicite la
muestra de orina al paciente, preferiblemente que la tome en el laboratorio.
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2. Extraiga del empaque de almacenamiento el dispositivo hCG Cassette/tira a

utilizar.
3. Con ayuda del gotero deposite 3 gotas de la muestra de Suero/o orina en el
orificio absorbente del Cassette; si es tira introdzcala en el suero hasta donde
indique esta, hasta que evidencie que la prueba ha comenzado a correr.
4. Lea el resultado a los 5 minutos. Dependiendo de la concentracin de hCG
en la muestra, los resultados positivos pueden observarse incluso antes de 40
segundos.
Sin embargo, para confirmar los resultados negativos, se requiere el tiempo
completo de reaccin (5 Minutos).
** Los controles se montaran cada vez que se inicie un nuevo Kit de

pruebas.***
INTERPRETACION DE RESULTADOS
No interprete resultados despus de los 10 minutos de reaccin
Negativo: Aparece nicamente una banda de color en la regin de control (C).
No hay una banda visible en la regin de prueba (T).
Positivo: Aparecen dos bandas de color, una en la regin control (C) y otra en
la regin de prueba (T). La intensidad del color de la banda en la regin de
prueba (T) puede variar debido a que las concentraciones de hCG varan en las
diferentes etapas del embarazo.
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El resultado positivo indica que se ha detectado una concentracin de

hCG mayor o igual a 25 mUI/ml en la muestra.( Verificar la sensibilidad
con inserto de la prueba)
SEROLOGIA
FUNDAMENTO
Sero-Bacter USR es un reactivo utilizado en el diagnstico serolgico de sfilis.
Este reactivo tiene la misma sensibilidad y especificidad que el VDRL, pero con
la ventaja sobre este ltimo que la reaccin se puede realizar sobre suero no
calentado.
Este reactivo es el mismo VDRL, pero suspendido en un sistema tampn que
estabiliza el antgeno permitiendo de tal manera tenerlo disponible para
realizar la reaccin en forma inmediata; la ventaja de poder realizar la prueba
sobre suero sin calentar permite ahorrar tiempo y la posibilidad de conservar la
suspensin ya preparada hace un ahorro en el consumo de reactivo. La tcnica
de la reaccin sigue exactamente las mismas normas que la prueba VDRL.
Los sueros humanos de pacientes sospechosos de haber sufrido una infeccin
por
T.
pallidum,
contienen
anticuerpos
contra
componentes
del
microorganismo que pueden investigarse utilizando un antgeno artificial
conocido como USR, dando una aglutinacin microscpica en caso positivo.
La prueba se supone es positiva en caso de infeccin por T. pallidum y
negativa en ausencia de ella. Sin embargo existen algunas condiciones clnicas
especiales en las cuales la reaccin puede ser positiva en ausencia de infeccin
por T. pallidum, lo que se conoce como reacciones biolgicas falsas positivas
que el mdico debe conocer y evaluar.
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PROCEDIMIENTO PRUEBA CUALITATIVA

1. Centrifugue la muestra tomada en tubo seco por 5 minutos.
2. Agregue 10 ul de reactivo y 25ul de muestra en la lamina especifica para
floculacin.
3. Rotar las lminas durante 4 minutos en agitador mecnico a 180 rpm.
4. Leer las pruebas microscpicamente con un ocular 10X y un objetivo
10X, esta prueba debe leerse idealmente de forma inmediata y nunca
ms all de un tiempo limite de 1-3 minutos
5. Analizar la presencia o ausencia de aglutinacin.
** Los controles se montaran diariamente. ***
LECTURA
INFORME
Grumos grandes y medianos

Grumos pequeos
Reactivo (R)
Reactivo dbil (RD)
No grumoso o formacin
Ligeramente grumosa
No reactivo (NR)
Todo suero que presente reaccin dbil reactiva o ligeramente grumosa en la

prueba cualitativa debe someterse a prueba cuantitativa antes de dar el
informe.
PROCEDIMIENTO PRUEBA CUANTITATIVA
Realizar la prueba cuantitativa a todos aquellos sueros que en la prueba
cualitativa hayan sido Reactivos, Reactivos dbiles o no Reactivos (Grumosos)
hasta una dilucin en que no sean reactivos.
Se deben proceder a hacer diluciones dobles progresivas de cada uno de ellos
utilizando la solucin salina 0.85% para hacer las diluciones en tubo o
directamente en la placa con micropipeta de 25ul, procesar estas diluciones en
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la forma descrita
microscpicamente.
para
la
prueba
cualitativa
leer
los
resultados
LECTURA
INFORME
Grumos grandes y medianos

Grumos pequeos
Reactivo (R)
Reactivo dbil (RD)
No grumoso o formacin
Ligeramente grumosa
No reactivo (NR)
Si la prueba da reactiva en las diluciones posteriores debe informarse como

reactiva, reportando adems el ttulo de la dilucin correspondiente,
informando los resultados en trminos de la mayor dilucin que produce un
resultado reactivo segn los siguientes ejemplos:
Si en todas las diluciones de los sueros se produce un resultado reactivo

preparar la dilucin 1:64 del suero en solucin salina 0.85%, simplemente
mezclando 0.1 ml de la dilucin 1:8 en 0.7 ml de solucin salina. Mezclar bien y
realizar la prueba con esta dilucin 1:64, haciendo tres diluciones progresivas
en la misma forma realizada originalmente con la dilucin 1:8, esto equivaldr
a diluciones 1:64,1:128,1:256.
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ANTGENO ESPECIFICO PARA STREPTOCCCUS GRUPO A

FUNDAMENTO
La prueba STREPTOCOCCUS GRUPO A Tira es un inmunoensayo cualitativo
de flujo lateral para la deteccin del antgeno carbohidrato Strep A en frotis de
garganta. En esta prueba, el anticuerpo especifico para el antgeno
carbohidrato Strep A esta recubierto sobre la regin de la lnea de prueba zona
T. Durante la prueba las muestras extractadas de frotis de garganta reaccionan
con un anticuerpo para Strep A que est recubierto sobre partculas. La mezcla
migra hacia la membrana para reaccionar con el anticuerpo del Strep A sobre
la membrana y generar una lnea coloreada en la regin de la lnea de prueba.
La presencia de esta lnea coloreada en la regin de la lnea de prueba indica
un resultado positivo, mientras que la ausencia indica un resultado negativo.
Una banda coloreada en la zona C de Control, indica que el ensayo se ha
realizado correctamente. De no aparecer esta banda, los resultados del ensayo
no son vlidos.
PROCEDIMIENTO
OBTENCION DE LA MUESTRA:
Toda muestra debe ser manipulada con la suficiente precaucin como si fuera
potencialmente infecciosa.
La muestra debe obtenerse utilizando el escobilln estril.
Frote la faringe posterior, amgdalas y otras reas inflamadas. Evitar
tocar la lengua, la
parte interna de los pmulos y los dientes con el
escobilln.
Preferiblemente la muestra debe ser analizada el da de su recoleccin.
EXTRACCION
1. Identifique el tubo de extraccin para cada paciente y colquelo en un
soporte o gradilla.
2. Agregue 4 gotas (240l Aprox) del reactivo A (de color rojo) y 4 gotas
(160l Aprox) del reactivo B (incoloro) a cada tubo de extraccin.
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3. Mezcle la solucin agitando varias veces el tubo de extraccin. La
adicin del Reactivo B al Reactivo A cambia el color de la solucin de

rojo a amarillo.
4. Inmediatamente introduzca el escobilln que contiene la muestra en el
tubo y agite vigorosamente el escobilln 10 veces en el tubo.
5. Deje el escobilln en el tubo por 1 minuto, entonces presione el
escobilln contra el lado interno del tubo para exprimir la parte inferior
mientras se va retirando el escobilln, deseche el escobilln.
6. Coloque la tapa gotero a cada tubo de extraccin
REALIZACION DE LA PRUEBA
1. Extraiga la tira reactiva del empaque e identifquela de acuerdo a los
procedimientos de su laboratorio.
2. Con las flechas apuntando hacia la muestra, coloque la tira
verticalmente en la solucin de muestra extractada y empiece a
cronometrar.
3. Si el procedimiento se sigue correctamente la solucin de extraccin no
debe pasar ms de la lnea mxima (MAX) sobre la tira cuando la franja
est inmersa. Deje la tira en el tubo de extraccin
4. Espere 5 minutos e intrprete los resultados.
5. No interpretar los resultados despus de los 10 minutos.
Negativo: Aparece nicamente una banda de color en la regin de control (C).
No hay una banda visible en la regin de prueba (T). El resultado negativo
indica que no se ha detectado la presencia del Antgeno de Streptococcus
Beta- hemoltico del grupo A en la muestra.
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Positivo: Aparecen dos bandas de color, una en la regin control (C) y otra en
la regin de prueba (T). La intensidad del color de la banda en la regin de
prueba (T) puede variar y en algunos casos puede ser extremadamente clara
(es proporcional al nivel de Antgeno presente en la muestra).
El resultado positivo indica que se ha detectado la presencia de antgeno de
Streptococcus Beta-hemoltico del grupo A en la muestra
Prueba Invlida: No se visualiza bandas en absoluto o aparece una banda de
color en la regin de prueba (T) pero ninguna banda de color en la regin de
control (C). Repita de nuevo el procedimiento utilizando una nueva prueba
reactiva.
HEMOCLASIFICACION SANGUINEA DIRECTA

FUNDAMENTO
ANTI-A MONOCLONAL Y ANTI-B MONOCLONAL
Estos reactivos son basados en la aglutinacin de las clulas rojas, que tienen
un antgeno especfico, en presencia del anticuerpo especfico correspondiente.
Estos reactivos de grupo sanguneo contienen anticuerpos monoclonales de
ratn IgM. Estos reactivos provocan aglutinacin directa de las clulas rojas
que tienen el antgeno especfico.
ANTI-D MONOCLONAL
Este suero esta basado en el principio de aglutinacin de las clulas rojas que
poseen un antgeno D en presencia de anticuerpo IgM Anti D.
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PROCEDIMIENTO
1. Tomar una muestra de sangre total o venosa. (muestra capilar o por
venopuncin)
2. Poner tres gotas de sangre en una lamina portaobjetos.
3. Adicionar a la primera gota, reactivo anti-A
4. Adicionar a la primera gota, reactivo anti-B
5. Adicionar a la primera gota, reactivo anti-D
6. Mezclar suavemente por 1 minuto e interpretar.

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BIO-CLINICO
ANTI D:
AGLUTINACION: POSITIVO
AUSENCIA DE AGLUTINACION: NEGATIVO
7.
Anexos
No Aplica: Este procedimiento no posee anexos

8. REGISTRO DE REVISIONES
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REVISIN
001
002
PROCEDIMIENTO 014
PROCEDIMIENTO
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VERSION N 001
FECHA
RESPONSABLE
AA MM
DD
09 11 26 LEONOR ARIZA
10 12 16 DRA. JOHANNA FIERRO
Motivo del Cambio

001
Elaboracin y descripcin del procedimiento en el nuevo formato
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** Los controles se montaran cada vez que se inicie un nuevo Kit de

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El resultado positivo indica que se ha detectado una concentracin de

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PROCEDIMIENTO PRUEBA CUALITATIVA

Grumos grandes y medianos

Todo suero que presente reaccin dbil reactiva o ligeramente grumosa en la

CENTRO BIOCLINICO L.A

Grumos grandes y medianos

Si la prueba da reactiva en las diluciones posteriores debe informarse como

Si en todas las diluciones de los sueros se produce un resultado reactivo

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ANTGENO ESPECIFICO PARA STREPTOCCCUS GRUPO A

CENTRO BIOCLINICO L.A

3. Mezcle la solucin agitando varias veces el tubo de extraccin. La

adicin del Reactivo B al Reactivo A cambia el color de la solucin de

CENTRO BIOCLINICO L.A

HEMOCLASIFICACION SANGUINEA DIRECTA

CENTRO BIOCLINICO L.A

6. Mezclar suavemente por 1 minuto e interpretar.

CENTRO BIOCLINICO L.A

No Aplica: Este procedimiento no posee anexos

CENTRO BIOCLINICO L.A

Motivo del Cambio

Elaboracin y descripcin del procedimiento en el nuevo formato

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