BIORREACTORES

En la actualidad se encuentran desarrollados a

escala industrial de produccin los procesos para
obtencin de shikonina por cultivo de clulas de
Lithospermun erythrohizon, puesto a punto por la
Industrias Petroqumicas Mitsui,

as como la produccin de berberina

O

O
OCH

OCH

O-Glc-Glc
OH

y biomasa de ginseng en otras industrias.

Glc-Glc-O

In order to cultivate
plant cells in a largescale, fermentors with
different sizes are
useful.
Various types of fermentors
have been designed by many
researchers since the end of
1950's.

Pero no siempre ha sido fcil

Los procesos industriales requieren de tres puntos

fundamentales:

Crecimiento eficiente en grandes volmenes

Acumulacin de metabolitos secundarios en el cultivo
Si el proceso implica bioconversin o produccin de
enzimas, que esto ocurra en las condiciones de
operacin del proceso

Es necesario ajustar algunos parmetros :

tensin de oxgeno
dixido de carbono
pH
Agitacin
Mezclado
densidad del cultivo

Caractersticas

clulas
microbianas

clulas vegetales
dediferenciadas

consecuencias en el
biorreactor

Tamao

2-10 m

10-200 m

Rpida sedimentacin,
mayor sensibilidad al corte

Clulas
individuales

pueden
obtenerse

forman agregados

Rpida sedimentacin

Velocidad de
crecimiento

Alta
td 1-2 horas

Baja
td 2-5 das

Largos procesos,
problemas para mantener
esterilidad

Densidad del
inculo

pequeo

5-20 %

Problemas de manipuleo.
Dificulta la posibilidad de
escalado

Sensibilidad al
esfuerzo de
corte

no sensitivo

sensitivo/tolerante

Disminucin de la
velocidad de agitacin

Aireacin

alta

baja

Baja demanda de oxgeno,

bajo KLa

Diseos bsicos de biorreactores para mltiples

propsitos

aire
Tanque agitado

aire
Columna de
burbujas

aire
air lift

agitacin

transferencia de oxgeno

Aumenta el rea de transferencia de oxgeno por la

formacin de pequeas burbujas
Retarda el escape de burbujas desde el lquido
Previene la coalescencia de las burbujas de aire
Disminuye el grosor de la interfase gas/lquido al crear
un flujo turbulento

La agitacin como factor de transferencia de masa

Asegurar el suministro de nutrientes a nivel celular

Prevenir la sedimentacin
Asegurar la transferencia de callos
Solubilizar componentes menos solubles de los medios

Dalton en 1978 dise un reactor de bajo esfuerzo

de corte denominado air lift

Draft tube
Bubble

Aire

Airlift - uses air sparging to pneumatically mix the media

Bolsas descartables

Comparison of Yield and Productivity for Cell Mass and Anthraquinones in

Varoius Reactor Systems
3. perforated disk impeller

5. air-lift reactor
1. Shake flask

2. flat blade turbine

4. draft tube reactor

Wagner, F. In "Plant Tissue Culture and Its Bio-technological application"

Ed. Barz, W. et al., p. 250 (1977). Springer-Verlag, Berlin Heidelberg.t reactor

PROCESS MONITORING AND CONTROL

PROCESS MONITORING AND CONTROL

Que parmetros controlar?

Temperatura
pH
Presin parcial de O2
Formacin de espuma

Ej. Produccin de alcaloides monoterpenoindlicos con cultivos celulares de

Uncaria Tomentosa ua de gato en tanque agitado

Reactor

Batch

Biorreactores para el cultivo de races

Bioreactor de lecho de goteo
con malla para inmovilizar a las races
Entrada de medio

Salida de aire

Malla de
inmovilizacin
Adicin de nutrientes

Aire

Reservorio

Aire

Bomba

Biorreactores para el cultivo de races

Bioreactor de lecho de niebla
(nutrient mist reactor)

Bomba
peristltica

Filtro de aire

Bomba de aire

Generador de niebla
Intensidad
On

Condensador
de niebla

Off

Controlador

Cmara
de cultivo

A nutrient mist reactor is substantially the same as

aeroponic growth of plants as proposed by botanists

Growth of hairy roots in the 3 L

MTR on the 16th day

Biorreactores para cultivo de otros rganos

Para cultivo de rganos

MTB

Centaurium erythraea shoot culture in mist trickling bioreactor after 21 days.

Modelos para clulas inmovilizadas

Operacin de Biorreactores

1.Batch:
Son sistemas cerrados que se caracterizan por cambiar las
condiciones fisiolgicas y ambientales.
No hay entrada ni salida de medio de cultivo.

Operacin de Biorreactores

2.Batch alimentado:
Estos sistemas operan adicionando medio fresco,
pero sin remocin del existente.
Son muy tiles cuando se requiere una elevada
densidad celular en la etapa de iniciacin del
proceso que implica un alto consumo de nutrientes,
especialmente de fuente hidrocarbonada que suele
funcionar como sustrato limitante.

Variante del batch alimentado:

2.1-Draw-fill o semicontnuo:
Consiste en remover, al final de la operacin entre
un 80 y un 90 % del cultivo y reemplazarlo por
medio fresco.

De esta manera puede eliminarse el perodo lag,

satisfacerse
sencillamente la necesidad de
contar con inculos de gran tamao y a su vez
evitar la esterilizacin del reactor entre dos ciclos.

Operacin de Biorreactores
3.Continuo:

el caudal de entrada de medio fresco es igual al de salida de medio

utilizado.

Son utilizados en cultivos donde la velocidad de crecimiento celular es

constante por lo que existe un suministro constante de nutrientes o para
la remocin permanente de producto sobre todo en sistemas
inmovilizados.

Este tipo de operacin presenta grandes inconvenientes con respecto al

mantenimiento de las condiciones de asepsia del proceso, y se dificulta
debido a la tendencia a formar agregados de las clulas vegetales en
cultivo, la formacin de merengue y el lento crecimiento celular.

Para su buena aplicacin se requiere del diseo de sistemas que

permitan suplementar continuamente el medio de cultivo evitando la
remocin de las clulas y as minimizar lo que se denomina lavado del
cultivo.

Una variante es la Perfusin que implica la remocin y suministro de

medio dejando la biomasa ocluda en una malla.

Continuous Culture

Growth
Batch Culture

10

15

20

Time (days)

25

Remocin
de producto
in situ

Lquido-lquido:
Compuestos inmiscibles en agua, como solventes
orgnicos o lpidos (sistemas de dos fases agua-orgnico).
Ejemplos: migliol, hexadecano, dodecano.

Slido-lquido:
La segunda fase es un material slido como resinas u otros
absorbentes. Generalmente resinas como XAD, RP18, etc.

Requerimientos:
- Autoclavables
- No txicos
- Fcil separacin del producto de inters
de la segunda fase
- No modificacin del medio de cultivo
- Permanencia de las clulas en la fase acuosa

Adaptaciones para la extraccin in situ del producto

Diagrama de un tanque de agitacin mecnica

modificado para operar con remocin in situ
del producto.
1: tanque;
2: malla de acero inoxidable para inmovilizar
races;
3: sensor de oxgeno;
4: malla acero inoxidable;
5: medidor DO; 6: agitador;
7: lana de vidrio;
8: resina XAD-2;
9: filtro de vidrio;
10: generador de aire;
11: condensador;
12: marco de la malla

Tomado de: Hairy Roots, Culture and Application, 1997.

Adaptaciones para la extraccin in situ del producto

Un bioreactor de agitacin por lquido

con loop externo

Ejemplo integrado

Ejemplo integrado

Produccin de shikonina por suspensiones celulares

de Lithospermum erythrorhizon

Shikonina
Yamasaki Plant Photo Gallery

Planta entera
- La extraccin se realiza en plantas de aproximadamente 3 aos.

Suspensiones celulares
- 2,4-D estimula el crecimiento pero no la produccin.
- Las bajas concentraciones de nitrgeno y la elicitacin inducen
la produccin de shikonina.

Proceso para la produccin de shikonina a partir de clulas

de Lithospermum erythrorhizon por Mitsui Petrochemical Ind.

Tomado de: Scraag. Plant

Biotechnology, 1992.

Se utilizan fermentadores de agitacin mecnica y tambor rotatorio.

La productividad de shikonina es 840 veces superior a la de planta entera.

Secuencia en la
optimizacin de
un proceso para
la produccin
de metabolitos
secundarios

Seleccin de la planta por su contenido de

metabolitos secundarios para iniciar cultivos in
vitro
Establecimiento de cultivos in vitro

Estabilizacin y seleccin de cultivos

in vitro: velocidad de crecimiento, niveles de
producto, liberacin al medio

Optimizacin de medio de cultivo para produccin

por diseo factorial: nutrientes, precursores,
elicitacin, liberacin y remocin in situ

Optimizacin en bioreactores: escalado

Sistema de cultivo: batch, continuo, fed-batch,
perfusin, en dos etapas.
Extraccin y purificacin del producto

Esquema de un proceso completo para la produccin de un

metabolito secundario por cultivo in vitro de clulas y rganos
vegetales