Universidad Privada Antenor Orrego

Facultad de Medicina Humana

TITULO:
IDENTIFICACION Y AISLAMIENTO DE HONGOS AMBIENTALES DENTRO
DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE LA UNIVERSIDAD PRIVADA
ANTENOR ORREGO DE TRUJILLO , MARZO - JUNIO 2015
ASESORES:
DR. ARQUINO HUERTA, MARTHA
INTEGRANTES:

ARCE GUEVARA , MICHAEL

BARRIOS CHAFLOQUE , MILTON
CUBAS MELENDEZ PAOLA
DIAZ VERGARA FELIX
GARCIA ANHUAMAN , FRANCISCA
JACINTO MILLA ZOYLA
JUAREZ MOZO, VICTORIA
SALINAS GARCIA. DANIEL
RUIZ LIJAP , LUIS

FECHA:

01 de Julio del 2015

INDICE
I.

GENERALIDADES..........................................jError! Marcador no definido.

1.1................................................................................................ Trtulo del estudio

.............................................................................................jError! Marcador no
................................................................................................................definido.
1.2................................................................................................................. Autores
.............................................................................................jError! Marcador no
................................................................................................................definido.
1.3.

ASESOR...................................................................................................4

1.4.

Tipo de investigacion..............................................................................4

1.5.

Regimen de Investigacion......................................................................4

1.6.

Departamento y Seccion Academica....................................................4

1.7.

Institucion donde se desarrollara el proyecto.....................................4

1.8.

Duracion del proyecto............................................................................4

1.9.

FECHA PROBABLE DE INICIO Y TERMINACION.................................5

1.10.

CRONOGRAMA DEL PROYECTO.......................................................5

1.11.

HORAS DEDICADAS AL PROYECTO.................................................6

1.12.

RECURSOS DISPONIBLES.................................................................6

1.12.1.

Personal.........................................................................................6

1.12.2.

Material y equipo...........................................................................6

1.12.3.

Local...............................................................................................6

1.13.

PRESUPUESTO....................................................................................7

1.14.

Tipo de Financiamiento.......................................................................8

II.

INTRODUCCION.............................................................................................9

2.1.

Justificacion..........................................................................................65

2.2.

Formulacion del problema cientlfico..................................................65

III.

OBJETIVOS...............................................................................................65

3.1.

General...................................................................................................65

3.2.

Especificos.............................................................................................65

IV.

HIPOTESIS.................................................................................................66

V.

MATERIALES Y M ETODOS........................................................................66

5.1.

Poblacion diana o universo.................................................................66

5.2.

Poblacion de estudio............................................................................66

5.3.

Criterios de inclusion............................................................................67

5.4.

Criterios de exclusion...........................................................................67

5.5.

Muestra...................................................................................................67

5.5.1.

Tipo de muestreo............................................................................67

5.5.2.

Unidad de analisis..........................................................................67

5.5.3.

Unidad de muestreo...................

5.5.4.

Tamano Muestral........................

VI.

TECNICA DE ESTUDIO.........................

6.1.

Tipo de estudio..................................

6.2.

Diseno especifico..............................

6.3.

Operacionalizacion de variables.....

6.4.

Definiciones operacionales..............

VII.

ANTECEDENTES DE MICROCULTIVO

VIII. PROCEDIMIENTO..................................
IX.

RESULTADO..........................................

X.

CONCLUSIONES....................................

XI.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS......

ANEXO..............................................................

1.1 titulo de estudio

MICROCULTIVO DE HONGOS AMBIENTALES DENTRO DEL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE LA UNIVERSIDAD PRIVADA
ANTENOR ORREGO JUNIO 2015 - TRUJILLO
1.2 Autores
ARCE GUEVARA , MICHAEL ; BARRIOS CHAFLOQUE ,
MILTON ; CUBAS MELENDEZ , PAOLA ; DIAZ VERGARA ,
FELIX ; GARCIA ANHUAMAN , FRANCISCA ; JACINTO MILLA ,
ZOILA ; JUAREZ MOZO , VICTORIA ; RUIZ LIJAP , JOSE LUIS ;
SALINAS GARCIA , DANIEL . Alumnos del tercer ano de la
Escuela Profesional de Medicina Humana de la Universidad
privada Antenor Orrego
1.3 ASESORES:
Dra. ARQUINO HUERTA, MARTHA
1.4 Tipo de investigacion
S Aplicada
1.5 Regimen de Investigacion
S Libre
1.6 Departamento y Seccion Academica
S Laboratorio de Microbiologia ,Facultad de Medicina
Humana de la UPAO.
1.7 Institucion donde se desarrollara el proyecto:
S Universidad Privada Antenor Orrego ( UPAO ) - Trujillo
1.8 Duracion del proyecto
15 semanas.

1.9 FECHA PROBABLE DE INICIO Y TERMINACION

A. Fecha de inicio: 25 de Marzo del 2015.
B. Fecha de termino: 01 de Julio del 2015.

1.11.1
1.12 RECURSOS DISPONIBLES
Personal
PARTICIPANTE

ACTIVIDADES DE PARTICPACION

HORAS

(1), (2), (3), (4), (5)

320

(1), (2), (3)

28

Estadfstico

(4)

18

Personal de archivo

(3)

54

Investigador
Asesor

Material y equipo
S Material bibliografico S Material
Virtual impreso.
S Computadora e impresora personal
Local
Laboratorio de
microbiolog

fa

1.13 Presupuesto
Partida

Insumos para la investigacion

Insumos
Unidad

Cantidad

Costo($)

financiado

Papel bond A4

paquete

20.00

propio

Papelotes

unidad

1.50

Propio

Lapiceros

Unidad

3.00

Propio

Corrector

unidades

2.50

Propio

Cd

unidad

2.50

propio

1
1

SUBTOTAL

Material de Laboratorio
Partida
Insumos

29.50

Unidad

Cantidad

Costo($)

Financiado

Agar saborou

kg

100gr

120.00

Propio

Aguas
destiladas

Uniddes

25

25.00

Propio

Gasa esteril

paquetes

6.00

Propio

Jeringas

unidades

15

7.50

Propio

Lancetas

unidad

6.00

Propio

Estilete

unidades

6.00

Propio

Pinzas

unidades

6.00

Propio

Papel filtro

unidades

9.00

Propio

Tubos de ensayo
con tapa

unidades

20

15.00

Propio

Lamina Porta
objeto

paquete

15.00

Propio

Lamina Cubre
objeto

Docena

6.50

Propio

Placas Petri

Docena

150

Propio

Asa de digasqui

20

unidad

18.00

Propio

Asa
bacteriologica

unidad

25.00

Propio

Mascarillas

Unidad

10

80

Guantes

Caja

Lentes

Frasco

Varillas de vidrio
en forma de c

unidades

SUBTOTAL

Insumos: S/ 29.50

Material de Laboratorio : S/ 570.00

1.14

Total: S/ 599.50

Tipo de financiamiento
> Autofinanciamiento

15.00

10.0

16

50.00

Propio
Propio
Propio

Propio
S/ 570.00

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE LA UNIVERSIDAD PRIVADA

ANTENOR ORREGO MARZO-JUNIO 2015 - TRUJILLO
II. INTRODUCCION
1. MARCO TEORICO
En las dos ultimas decadas se ha observado un inexorable aumento de las
infecciones fungicas oportunistas,
en especial
en
pacientes
inmunocomprometidos, con enfermedades de base severas, terapias
prolongadas, o bien, con factores predisponentes al desarrollo de estas
infecciones y con riesgo de posterior infeccion fungica invasiva por lo que han
emergido como una importante causa de morbi-mortalidad. Los agentes
productores de este variado espectro de afecciones incluyen un amplio espectro
de generos y especies que ano a ano se va incrementado considerablemente.
Estos son saprofitos de suelo, agua, aire y vegetales, abundan en restos de
materia organica en descomposicion y anteriormente consideradas inocuos,
contaminantes de laboratorio, relegados a la fitopatologfa o a procesos
industriales. (1)
Las micosis oportunistas se definen como afecciones producidas por hongos
que se comportan como saprofitos o comensales del hombre, formando parte de
su flora normal de piel, mucosas, tracto digestivo o respiratorio, o bien, por
aquellos que integran la micotica ambiental (suelo, agua, aire). Estos hongos
ante determinadas oportunidades que les ofrece el hospedador, al disminuir su
capacidad defensiva, pueden colonizar, infectar y producir enfemedad. En
ocasiones y segun el estado inmunitario pueden invadir tejidos y producir
alteraciones que pueden llevar a la muerte. (1)
Dentro de las micosis oportunistas se encuadran:
Candidiasis

Formas mas frecuentes

Aspergillosis Hialohifomicosis Feohifomicosis Zigomicosis

Infecciones por otros hongos levaduriformes

Esta definicion lleva implfcita tres conceptos:

1. Los hongos productores de micosis oportunistas poseen una amplia
distribucion en la naturaleza y pueden ser cultivados frecuentemente de
materiales de personas sanas.
2. Su aislamiento per se no implica diagnostico seguro de enfermedad.
3. La disminucion de las defensas del hospedador, que se transforma
practicamente en un medio de cultivo y no el aumento de la virulencia del
microorganismo constituye la causa principal que determina la aparicion de la
enfermedad.
Las micosis oportunistas a diferencia de las micosis causadas por hongos
patogenos primarios son cosmopolitas y la edad, sexo y profesion no son causas
predisponentes de importancia. En general la aparicion de las micosis y las
diversas formas clfnicas que adoptan son consecuencia de las alteraciones de
los mecanismos de la inmunidad natural o innata y la inmunidad adquirida.
Cuando se produce la penetracion, los hongos son destruidos por factores
solubles de la lisozima y la fagocitosis con digestion intracelular. La captacion y
digestion de los propagulos fungicos son procesos asignados a dos tipos de
celulas: los neutrofilos y los macrofagos.

Deficiencias en el numero o funcion de las celulas fagocitarias estan

asociadas con una gran variedad de oportunistas levaduriformes y
filamentosos.
Deficiencias o desbalance en la funcion de los linfocitos T estan relacionadas a
afecciones por hongos dimorficos y hongos filamentosos oportunistas.

Los hongos productores de micosis oportunistas poseen una amplia distribucion

en la naturaleza y pueden ser aislados frecuentemente de personas sanas, ya
son comensales del hombre o contaminantes habituales de los medios de
cultivo. Por lo tanto, su aislamiento a partir de ciertos materiales clfnicos no
significa forzosamente enfermedad, puesto que puede tratarse de
contaminaciones o presentarse como germenes agregados a otros procesos
patologicos principales. (2)
Los signos clfnicos de una infeccion micotica en inmunocomprometidos estan
frecuentemente ausentes. No hay sfntomas distintivos y la fiebre es el signo mas
frecuentes y generalmente el unico. Luego de la recuperacion de neutrofilos,
algunos hallazgos clfnicos como lesiones hepatoesplenicas o pulmonares
pueden hacer sospechar una micosis invasiva. Es por ello que el diagnostico
depende de

una combinacion de manifestaciones clfnicas, aparicion de imagenes

radiologicas, resultados microbiologicos, histologicos y serologicos.(l)
Por lo tanto, los criterios para el diagnostico de estas enfermedades debe
basarse en:
1. Hallazgo repetido del mismo hongo en examenes microscopicos directos de
los materiales obtenidos de las lesiones con la maxima asepsia.
2. Confirmacion reiterada de su presencia en los cultivos.
3. Reconocimiento de factores predisponentes que faciliten la agresion del
hongo.
4. Cuadro clfnico compatible con el diagnostico presentado
Un gran numero de geofflicos y patogenos de plantas, de insospechada
capacidad patogenica para el hombre y los animales domesticos, estan siendo
hallados cada dfa con mayor frecuencia causando enfermedad en el hombre.
Estos criptopatogenos (hongos oportunistas) son capaces, en ciertas
circunstancias, de causar infecciones que van desde las cutaneas y
subcutaneas hasta aquellas que se inician en los pulmones y pueden
diseminarse a otros organos vitales.(2)
A. Aspergillus
En 1729 el Aspergillus fue catalogado por primera vez por el biologo italiano Pier
Antonio Micheli. Micheli uso el nombre "Aspergillum" por parecerse el hongo al
instrumento usado para dispersar agua bendita. La descripcion hecha por
Micheli de este genero de hongo en su obra Nova Plantarum Genera tiene
importancia historica, al ser reconocido como el punto inicial de la ciencia de la
micologfa. (2)
Las especies del genero Aspergillus se encuentran ampliamente distribuidas en
la naturaleza pudiendose aislar de una gran variedad de substratos. Gracias a la
facilidad de dispersion de sus conidios y a su pequeno tamano, estos pueden
permanecer en suspension en el ambiente durante un largo periodo de tiempo,
por lo que el hombre se encuentra expuesto constantemente a su inhalacion. (1)
En los ultimos anos se ha producido un notable incremento en las infecciones
fungicas nosocomiales. Diferentes especies del genero Aspergillus son una
causa frecuente de micosis invasivas, normalmente fatales, en pacientes
inmunocomprometidos en los paises desarrollados Aunque A. fumigatus es el
agente etiologico mas comun, otras especies del genero como A. flavus, A.
terreus, A. niger y A. nidulans (Emericella nidulans) se consideran tambien
responsables de infecciones invasivas. De forma mucho mas esporadica, se han
citado tambien otras especies como A. candidus, A. clavatus, A. restrictus, A.
sydowii y A. ustus entre otras. La identificacion hasta nivel de especie de estos

hongos es cada vez mas importante, ya que algunas especies de Aspergillus

pueden presentar una mayor virulencia y una respuesta distinta a la terapia
antifungica. (4)
A. 1. Taxonomia del genero Aspergillus

La taxonomia es una disciplina dinamica y esto conlleva la realizacion de

cambios en la nomenclatura que no siempre son de facil comprension.
Recientemente, se han producido importantes cambios en la taxonomia de
Aspergillus spp y sus teleomorfos. Desde 1965, el texto por excelencia sobre el
genero ha sido "The genus Aspergillus" de Raper y Fennell. Samson realizo una
recopilacion de las especies y variedades descritas posteriormente, con una
revision crftica sobre la validez de los taxones publicados.
La sistematica actual de Aspergillus se ha visto enormemente influida por los
trabajos presentados en dos reuniones cientfficas dedicadas exclusivamente a
los generos Penicillium y Aspergillus. En ellas se realizaron importantes
contribuciones multidisciplinares a la taxonomia del genero, y en especial se
reviso su nomenclatura siguiendo las normas del codigo internacional de
nomenclatura botanica (ICBN). Los nombres utilizados fueron tipificados por
Samson y Gams y Kozakiewicz. Ademas, la clasificacion infragenerica en grupos
no es aceptada por el ICBN, por lo que Gams et al. Reclasificaron el genero y lo
dividieron en 6 subgeneros, cada uno de los cuales dividido a su vez en una o
mas secciones (Tabla 1) que se corresponden con los grupos descritos por
Raper y Fennell.

Tabla i. Clarification actual del genera AspejgifliJK*.

Subgenera

Section

Snbnimo1

Eapacia 1ipo

TEleomorib

AspergiSijs

Aspergillus
Restnhi
Ftmgati
CantH

Grapo A. gtaucus
Grupo A. rastnctus
Grapo A.
furmgatus
Grupo A. cerwnus
Grapo A. omaltri
Grupo A. cieverae
Grupo A. nidulans
Grapo A versicolor
Grapo A. usrus
Grupo A. terreus
Grapo A. ftavipes
Grupo A. rwnbj
Grapo A. flaws
Grapo A. nigar
Grapo A.
Grapo A.
Grapo A.
cnemeus
Grapo A. sparsus

A. gtaucus
A. resirictus
A. (umigatus
A. oerwdus
A. ornatcflus
A. deiraiua

Eurotium

Fumigati
Omati
Clayati
Nidulantes

Clavati

Midubnfea
'/ersicoJone
Uati

Circumoaii

Terrei
Fiaopeda s
Vfentii
Flavi
Nign
Cmmdad
Candid
Crams
Sparer

* aupudj art Gara c: al|12J

b: grupos esuttcocot por fijpcr y Fcrndl (G|

A. nidulans
A. versicolor
A. ustus
A. terreus
A. ttavtpes
A. wenlii
A. Havus
A. ntger
A. octvaceus
A. canoidus
A. oremeus
A. sparsus

Heosartorya

LYancppipfla, Sclerocleista.

Emericella
-

FenneHia

Petromyces
-

Chaeosartorya

Algunos autores propusieron un cambio en la nomenclatura de las estructuras

morfologicas de Aspergillus. Asf, se recomienda sustituir los terminos "vesfcula",
"estipe" y celula pie" por "apice hinchado", "parte media" y "parte basal" del
conidioforo respectivamente, ya que se trata de tres partes de una misma
estructura. Los terminos "fialide" y metula" se recomienda que sean sustituidos
por "celula conidiogena" y "celula que soporta la celula conidiogena" o
simplemente "celula soporte", respectivamente. Aunque dichas propuestas se
recogen en la ultima edicion del Ainsworth and Bisby's Dictionary of the Fungi ,
no parecen haber tenido mucha aceptacion por parte de la nomenclatura
botanica.(3)
Aunque una de las normas de nomenclatura es que tengan prioridad los
nombres de los sinonimos mas antiguos, su estricta aplicacion en el genero
Aspergillus implicarfa sustituir algunos nombres que son ampliamente utilizados.
Con el fin de proteger los nombres en uso, la Comision Internacional de
Penicillium y Aspergillus, que depende de la Division de Micologfa de la
"International Union of Microbiological Societies" (IUMS), elaboro una lista de
186 especies de Aspergillus y 72 teleomorfos con el anamorfo Aspergillus , que
fue presentada en el "XV International Botanical Congress" celebrado en Tokio
en 1993. Aunque formalmente no pudo ser aprobada, se recomienda
encarecidamente a los taxonomos no adoptar nombres distintos a los de la lista.
(2)
A.2. Caracterfsticas morfologicas del genero Aspergillus

Aspergillus es un genero mitosporico que se caracteriza por la produccion de

hifas especializadas, denominadas conidioforos, sobre los que se encuentran las
celulas conidiogenas que originaran las esporas asexuales o conidios (Figura 1).
El conidioforo caracterfstico de Aspergillus, aunque es una estructura unicelular
posee tres partes bien diferenciadas: vesfcula (extremo apical hinchado), estipe
(seccion cilfndrica situada debajo de la vesfcula) y celula pie (seccion final, a
veces separada por un septo, que une el conidioforo con el micelio). Sobre la
vesfcula se disponen las celulas conidiogenas, denominadas habitualmente
fialides. En muchas especies, entre la vesfcula y las fialides se encuentran otras
celulas denominadas metulas. Las cabezas conidiales que solo presentan
fialides se denominan uniseriadas, y las que presentan fialides y metulas,
biseriadas.

A'
B

Figura 1. Estructuras monolog icas del genera

(adaptadu
Aspergmusde hftitei ei al. [16] y Rilich y
A-B:
nmidioforos;
C-D: Cabezas
Samson
[19]).
conidiales.

Algunos autores propusieron un cambio en la nomenclatura de las estructuras

morfologicas de Aspergillus. Asf, se recomienda sustituir los terminos "vesfcula",
"estipe" y celula pie" por "apice hinchado", "parte media" y "parte basal" del
conidioforo respectivamente, ya que se trata de tres partes de una misma
estructura. Los terminos "fialide" y metula" se recomienda que sean sustituidos
por "celula conidiogena" y "celula que soporta la celula conidiogena" o
simplemente "celula soporte", respectivamente. Aunque dichas propuestas se
recogen en la ultima edicion del Ainsworth and Bisby's Dictionary of the Fungi no
parecen haber tenido mucha aceptacion, ya que la mayorfa de investigadores
continuan utilizando la terminologfa tradicional. (1)
UHiaic-rudn

Algunas de las especies pueden reproducirse sexualmente. Las formas perfectas

de Aspergillus se incluyen en los generos Chaetosartorya, Dichlaena, Emericella,
Eurotium, Fennellia, Hemicarpenteles, Neosartorya, Petromyces, Sclerocleista y
Warcupiella (Tabla 1). Estos estados teleomorficos se encuentran en la familia
Trichocomaceae, del orden de los Eurotiales, perteneciente al phylum
Ascomycota

La clasificacion del genero Aspergillus en subgeneros y secciones esta basada

fundamentalmente en cuatro caracterfsticas: presencia de teleomorfo, presencia
o ausencia de metulas; disposicion de las metulas o fialides sobre la vesfcula y
coloracion de las colonias.(l)

A.3. Ciclo de vida del genero Aspergillus

El ciclo de vida de Aspergillus productor de aflatoxinas varfa de una especie a

otra y depende del tipo de cosecha o alimento que este infectando. Su
prevalencia varfa en funcion de la region geografica y de los ciclos estacionales
de la misma, ya que son las lluvias y las sequfas prolongadas las que favorecen
de una manera o de otra, la presencia del hongo y la produccion de aflatoxinas.
El ciclo del hongo puede dividirse de forma general en dos fases: la colonizacion
de residuos de la planta en el suelo y la infeccion del tejido de cultivo. En un ciclo
estandar, al principio de la estacion lluviosa, cuando se tienen las condiciones
medioambientales ideales, comenzarfa la maduracion y se liberan esporas
ascosporas. Estas pueden ser diseminadas por el viento o mediante insectos.
Los cultivos recien plantados, son entonces colonizados e infectados por el
hongo.
Las aflatoxinas normalmente aparecen en estadios de la cosecha previos a la
recoleccion y preferiblemente en periodos de sequfa. La contaminacion postrecoleccion, puede darse durante el almacenamiento, siempre y cuando el grano
Tricogina
tarde en secarse mas de lo normal
y los Antendio
niveles de humedad alcancen
valores
Ascogonio
Plasmogami
a
crfticos para el crecimiento del hongo. En ocasiones tambien los insectos
y
roedores pueden colaborar en la transmision del moho a los productos
almacenados.
Desarrollo
La forma en que se
de hifas
ascogenas
manifieste la enfermedad,
(n-f n)
Formacidn de
dependera
de
la
concentracion de la dosis y
del tiempo de exposicion a
Ascocarp
o
la misma, pero normalmente
se traduce en enfermedad
hepatica.
Ascosporas
ascosporas

germinando

Paransis

Hrfa ascogenas
dicanoticas
(n + n)

scogo
n
spora

Los estudios realizados en animales de experimentacion muestran que ingestas

de concentraciones altas de aflatoxinas puede producir un efecto toxico agudo en
el hfgado bastante inmediato, sin embargo la ingesta en concentraciones
menores pero repetidas de manera cronica pueden tener un efecto
carcinogenico, teratogenico y genotoxico mas a largo plazo. Los datos indican
ademas, que las infecciones en humanos con Aspergillus son mas frecuentes
durante los meses frfos del ano, debido probablemente a la presencia de otros
microorganismos infecciosos estacionales,

variaciones de la dieta y estadios de los cultivos predominantemente contaminados

A.4 .Caracterfsticas utilizadas en la identificacion de las especies
Los criterios seguidos hasta el momento para clasificar las especies del genero
Aspergillus y sus teleomorfos son principalmente morfologicos. No obstante, en
algunas secciones se han realizado ademas estudios bioqufmicos o moleculares
encaminados a resolver algunos de los problemas planteados en su clasificacion. El
sistema de identificacion propuesto por Klich y Pitt , utiliza tres medios de cultivo y dos
temperaturas de incubacion. Cada cepa debe sembrarse en tres puntos en dos placas
de medio CYA (Czapek Yeast extract agar), una placa de CYA con 20% de sacarosa
(CY20S), y una placa de MEA (agar extracto de malta). Una de las placas de CYA se
incuba a 37C y las restantes a 25C. Tras siete dfas de incubacion se procede a la
observacion de las caracterfsticas morfologicas macroscopicas y microscopicas de los
cultivos.(3)

PRINCIPALES CARACTERISTICAS
MACROSCOPICAS

PRINCIPALES CARACTERISTICAS
MICROSCOPICAS

Diametro de las conidias

Disposicion de las metulas o fialides

sobre la vesicula

Coloracion del anverso y del reverso de

las colonias

longitud y anchura de los estipes

Presencia de esclerocios
Presencia de gotas de exudado

Forma y diametro de las vesiculas

Longitus y anchura de las metulas y
fialides

Presencia de pigmento difusible

Forma , diametro , ornamentacion y

color de los conidios

Textura de las colonias

Forma , tamano y color de las celulas

de Hulle
Forma , tamano y color de las
ascosporas

A.5 Patogenia
Aspergillus es un ejemplo de lo que denominamos "patogeno oportunista", es decir,
que suele afectar a pacientes con mecanismos de defensa comprometidos. Entre los
factores de patogenicidad de este hongo se encuentran:

El pequeno tamano de sus conidias que permite que sean aspiradas y que
pueda causar infeccion en el pulmon y en los senos paranasales.

Su capacidad de crecer a 37C, lo que le hace idoneo para afectar al humano.

Su capacidad de adherencia a superficies epiteliales y posiblemente

endoteliales y su gran tendencia a invadir los vasos sangufneos

La produccion de un gran numero de productos extracelulares toxicos para las
celulas de los mamfferos (elastasa, restrictocina, fumigatoxina, etc.).
A.6. Manifestaciones cilnicas
La clasificacion de las principales formas clfnicas producidas por Aspergillus spp. se
muestra en la tabla 1. Es esencial reconocer que Aspergillus puede ser un colonizador,
causar enfermedad alergica, infeccion local o ser responsable de cuadros invasivos de
gran gravedad. (5)
Es labor del microbiologo obtener la informacion clfnica necesaria para poder
diferenciar estas situaciones. Exponemos brevemente algunos ejemplos de las
diversas infecciones causadas por este microorganismo.

Onicomicosis: No es demasiado frecuente. Ciertas especies como A. fumigatus

y A. versicolor pueden afectar a unas distroficas, dando lugar a hiperqueratosis
y a un cambio en la coloracion de las mismas.

Otomicosis: Producidas principalmente por A. niger y A. fumigatus. Puede

aparecer prurito local y vertigo, con eliminacion de cerumen rico en masas de
micelio. Ciertas condiciones como el eczema y la seborrea favorecen la
colonizacion por Aspergillus.

Sinusitis alergica: Los senos paranasales estan ocupados por moco rico en
eosinofilos, cristales de Charcott-Leyden e hifas.

Aspergilosis broncopulmonar alergica: Suele deberse a la inhalacion de

conidias e hifas de Aspergillus. El paciente presenta eosinofilia, infiltrados
pulmonares hemorragicos, bronquiectasias centrales y una prueba cutanea
positiva para Aspergillus. Las IgE totales y las IgG anti-Aspergillus en suero
estan elevadas. En casos cronicos puede aparecer fibrosis pulmonar con
perdida gradual de la funcion pulmonar. En ocasiones, cuando se entra en
contacto con grandes cantidades de alergeno (trabajadores de molinos de
grano, de silos, etc.), puede producirse una alveolitis alergica extrfnseca por
Aspergillus. Los sfntomas aparecen varias horas despues de la exposicion y
consisten en tos seca, disnea y, en ocasiones, fiebre.

Aspergilomas: Producidos por colonizacion de cavidades previas (tuberculosis,

sarcoidosis, histoplasmosis o bronquiectasias) por Aspergillus. Pueden ser
asintomaticos o cursar con hemoptisis, sobreinfeccion bacteriana o invasion
tisular. El diagnostico es fundamentalmente radiologico, a partir de la
visualizacion de cavidades con una masa opaca rodeada de aire que se mueve
cuando el paciente cambia de postura. Las imagenes se observan mucho
mejor con tomograffa computarizada o resonancia magnetica que con
radiologfa simple. El diagnostico radiologico siempre ha de acompanarse de la
presencia de niveles altos de IgG frente a Aspergillus y la presencia,
generalmente intermitente, de tinciones y cultivos con Aspergillus de las
secreciones respiratorias. En ocasiones los aspergilomas pueden localizarse
en los senos maxilares dando lugar a cefalea, rinorrea y secrecion postnasal.

Aspergilosis pulmonar invasiva: En los ultimos anos la incidencia de

aspergilomas ha disminuido, mientras que la aspergilosis pulmonar invasiva
(API) ha ido en aumento. En pacientes con leucemia, la incidencia de API
oscila entre el 5-24%, y en trasplantados de organo solido entre el 1 y el 10%.
Los factores de riesgo mas importantes son la neutropenia (6)

As p e c l o m a c r o s e o p i c o
Mice No

As p e c t o m i c r o s c a p i c o

Conid i ado Fiaiidee

ro
Joisariadas
Cartes
sobra el lerda
Blanca a
(^ 3 0 0 p m )
ySuparidf de la
marrPn-rajizp
lisas
vesibula,
paralelps al
LPoisariadas o
bisariadas qua
LciiGiLud
Ddradd a
variable
ycubren
marrPn-rdjizp
oampletamanL
ruousos
a la vasidjla

A.
fumigatuS

Ab e r C t a p a l a d P 0
aspect de pclvc.
CdlCr bla'iquc'dro
qua- oambia a
verda oscucCigrii

A. f l m a

At a r c i o p e l a d P.
CdPr in la i ill j
verdosP marrfln

A. nigtr

Landed. CdlCr
blaiidcama'illcrilo que
cambia a negro

Blanca
ananllerdo

A.

Al a r c i c p e l a d P.
Cdpr canela

Cartes
Blanca a mar
(< 2 5 0 m )
rdf 1
lisas

Ab e r t i o p e l a d P.

Caiar bianco
qua carnbia a
arnarillo.
Larges
paranja.
m a r r P n - r p j i z P, l i s o s
verda o rose
Blanca.
amarillo,

A.
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Bisariadas qua

As p e e l p s i m i l a r

verde can zonas

amarillentas
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A. davdtuS a l f i e l l r o . C o l o i

verde-aziiadn

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Bisariadas
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Bisariadas y
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vesibulas

CleisteciPS
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de calor rpjizo.
Bisariadas
y
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Longitud
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(200x40 [an) y
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A. nidutinS C u a m d d p r o s a n l a
osturo
cleisiPteeios cjlor
similar al-del ante
A. gtewSuS a l l i e b r d . C o l o r

Comentarios

Reverse

Cartas
(4250pm).
Uses
marrones

INFORME
Se observan hifas hialinas tabicadas
Cultivo: Las muestras se siembran en medio de Sabouraud con antibiotico y se
incuban por lo menos 2 tubos a 25 - 28C y 2 a 35 - 37C, durante un tiempo
variable con cada especie estudiada. Hacer observaciones periodicas.
Diagnostico inmunologico:

Deteccion de anticuerpos por Inmunodifusion en gel de agar,

Contrainmunoelectroforesis,
Intradermorreacciones
con
antfgeno
especffico. Solo existen en el mercado un reducido espectro de especies
que pueden ser diagnosticadas.

Deteccion de galactomananos, polisacaridos constituyentes de la pared

celular (probado hasta ahora en Aspergillus). Mayor especificidad y
sensibilidad. Aglutinacion de partfculas de latex

La positividad de la antigenemia aparece con una media de 3 dfas antes de la

aparicion de los signos clfnicos - radiologicos . Sensibilidad del 30-40% ELISA
La positividad es mas precoz, 5-6 dfas antes. Sensibilidad del 50-60%,
Especificidad 84-95%.

Microscopia de
Aspergillus

Cultivo de Aspergillus ( agar Sabouraud

)

B. Penicillium
Penicillium es un genero del reino Fungi. Incluye mas de 300 especies, la mas
conocida es Penicillium chrysogenum, productora de penicilina. El Penicillium es
un genero grande que puede encontrarse casi por todas partes, siendo el genero
de hongos mas abundante en suelos. La facil proliferacion de los Penicillium en
los alimentos es un problema. (7)
Algunas especies producen toxinas, sin embargo muchas especies de
Penicillium son beneficiosas para los seres humanos. Los quesos tales como el
roquefort, brie, camembert, stilton, etc. se crean a partir de la accion de
diferentes especies de Penicillium sobre la leche, y son absolutamente seguros
de comer. El antibiotico penicilina es producida por el hongo Penicillium
chrysogenum, un moho ambiental.
B. 1. Taxonomia del genero Penicillium
La primera descripcion del genero penicillium en la literatura cientffica fue
realizada por Johann Heinrich Friedrich Link en el ano 1809. Link incluyo en su
trabajo 3 especies: Penicillium candidum, Penicillium expansum y Penicillium
glaucum. En 1979 una monograffa de John I. Pitt dividio el genero en 4
subgeneros:Aspergilloides, Biverticillium, Furcatum y Penicillium.
Con una sola excepcion (Penicillium marneffei, hongo termodimorfico), los
miembros del genero Penicillium son hongos filamentosos. Las especies de
Penillium estan ampliamente distribuidas en la naturaleza y se hallan en el suelo,
la vegetacion cafda, el aire y el suelo. A diferencia de las otras especies del
genero, Penicillium marneffei es endemico del Sudeste de Asia, donde infecta
ratas del bamboo, las cuales sirven como marcadores epidemiologicos y
reservorios para las infecciones humanas. (4)
El aislamiento de especies de Penicillium diferentes de Penicillium marneffei son
considerados contaminantes habituales en el laboratorio, pero pueden causar
infecciones, especialmente en huespedes immunocomprometidos. Penicillium
marneffei es patogeno, particularmente en los pacientes HIV positivos, y su
aislamiento de la sangre es considerado como un marcador de SIDA en las
areas endemicas.

Ademas de su potencial patogenicidad, Penicillium produce mycotoxinas. Algunas

especies de Penicillium tienen fase teleomorfa, incluida en los generos
Eupenicillium, Talaromyces, Hamigera y Trichocoma. Especies El genero Penicillium
posee una gran variedad de especies. Las mas comunes son Penicillium
chrysogenum, Penicillium citrinum, Penicillium janthinellum, Penicillium marneffei y
Penicillium purpurogenum.

C u a t l r o 5 . 1 . Tcm p c r n t u r a \ a c t n i t l a t l d e l a g u a n c c c s a r i a s p a r a c l c r c c i m i c n t n t i c
algunas especies tie Penicillium (Com- 1987, Lacey 1989)
TKMILRA ra
Acm I I J A D E L AC i l ' A
T
I'.MMUKS
RlAN ( K )
O P TI M O
M I N IMD
A
O I TI M A
P. t i u r u n t i o g r i s f i t m
P. b m v c o m p o c t H m

2 a 32
12-30

23
23

P. c i t r i n u m
P. c o m m u n e

<5-37
0-37

P.
P.
P.
P.
P.

6-37
-3 a 35
1(1 - 42
<5 -35
0 31

ditiiUttum
csfkmsnm
isktmbcnm
em/ur/briH
irrmcoium

0,98
0,99

26 - 30
25

0.81 - 0,83
0,8(1 - 0,82
(1,80 - 0,84
0,85

20-25
25 - 26
31
25

0,90
0,82 - 0,83
0,83 - 0,86
0,83

0,99
0,99

20

0,99

0,80

B.2. Caracterfsticas morfologicas del genero Penicillium

Es un hongo de crecimiento rapido dando colonias blancas aterciopeladas
inicialmente , las cuales se cubren con los esporos y van tomando diferentes colores
segun su especie , al final quedan completamente cubiertas de esporas con un
aspecto pulvurento . la colonia esta cosntituida por micelio de hifas delgadas
septadas .el verticilum es
fundamental en la clasificacion
dell hongo , asi pueden
clasificarse en cuatro grnades
grupos : monoverticilata .
asimetrica , biverticilatasimetrica
y polivercitillata

Este genero se caracteriza por

formar
conidios
en
una
estructura
ramificada
semejante a un pincel que
termina en celulas conidiogenas
llamadas
fialides. se esquematizan

los tipos de conidioforos del genero Penicillium, cuyas ramificaciones se ubican

formando verticilos. Si hay solo un verticilo de fialides el pincel es
monoverticilado. Las ramificaciones de un pincel poliverticilado son ramas,
ramulas, metulas y fialides. Los conidios generados en fialides suelen llamarse
fialoconidios para indicar su origen. En la fialide, al dividirse el nucleo, se
extiende simultaneamente el extremo apical que luego se estrangula separando
a la espora recien formada. Se llama conectivo a la porcion de pared que une
entre si a los conidios permitiendo la formacion de cadenas, y en algunas
especies se aprecia claramente con el microscopio optico (5)
B.3. Ciclo biologico del genero Penicillium

Presenta una reproduccion asexual llamada tambien , "Fase Conidica , por la

produccion de conidias y "ascas , presentan tambien reproduccion sexual por
isogamia o heterogamia.

Gametangio femenino : ascogonio

Gametangio masculino : anteridio

Reproduced

asexual
^iponidio
sl

Meiosisy
formaci6n
dc
ascasporas
Meiosi
s
C Asco
o joven

 Las ascas generalmente son cilfndricas , pero pueden ser ovaladas y hasta
circunferenciales , las ascas estan incluidas dentro de una estructura
denominada : ascocarpo
B.4 .Caracterfsticas utilizadas en la identificacion de las especies
Macroscopia . Las colonias de Penicillium (diferentes de Penicillium marneffei)
son de crecimiento rapido, filamentosas y vellosas, lanosas o de textura
algodonosa. Son inicialmente blancas y luego se convierten en verde azuladas,
gris verdosas, gris oliva, amarillentas o rosadas con el tiempo. El reverso de la
colonia es palido o amarillento. Penicillium marneffei es termodimorfico y produce
colonias filamentosas, lisas, con surcos radiales at 25C. Estas colonias son
azuladas - gris verdosas en el centro y blancas en la periferia. Un pigmento
soluble rojo, rapidamente difusible al medio, observado desde el reverso es muy
tfpico. A 37C, las colonias de Penicillium marneffei son cremosas a levemente
rosadas y con textura glabra y plegada.(4)
Microscopia . Las especies de Penicillium (excepto P. marneffei), hifas septadas
hialinas (1.5-5 p de diametero), con conidioforos simples o ramificadas, metulas,
fialides y conidias. Las metulas son ramificaciones secundarias que se forman
sobre los conidioforos. Las metulas acarrean fialides en forma de frasco. La
organizacion de las fialides en la punta de los conidioforos es tfpica (llamadas
"penicilli" o pincel). Las conidias (2.5-5p de diametro) son redondas, unicelulares
y observadas como cadenas no ramificadas en el extremo de las fialides. En su
fase filamentosa, Penicillium marneffei es microscopicamente similar a otras
especies de Penicillium. En su fase de levadura, Penicillium marneffei presenta
celulas globosas o elongadas con forma de salchicha (3-5 p) que se multiplican
por fision. Penicillium marneffei es facilmente inducido a producir artroconidias en
el estado de levadura por subcultivos en BHI e incubando a 35C, en los cuales
despues de una semana, se forman levaduras divididas por fision e hifas con
artroconidias.

B.5 Patogenia
Penicillium solo ocasionalmente causa infeccion en humanos (peniciliosis).
Penicillium ha sido aislado de pacientes con queratitis (post-traumatica),
endoftalmitis, otomicosis, esofagitis necrotizante, neumorna, endocarditis,
peritonitis e infecciones urinarias. La mayona de estas infecciones ocurren en
individuos immunocomprometidos. (7)
Penicillium verrucosum produce ochratoxin A, la cual es nefrotoxica y
carcinogenica y es producida en granos de cereales en climas fnos. Penicillium
marneffei infecta espedficamente paciente con SIDA en el sudeste de Asia,
donde el hongo es endemico. Tambien han sido comunicadas in pacientes noSIDA (enfermedades hematologicas y pacientes con
tratamientos
inmunosupresores). La infeccion por Penicillium marneffei, llamada peniciliosis
marneffei, se adquiere por inhalacion y produce una primoinfeccion pulmonar
seguida de fungemia y diseminacion. Los linfaticos, el dgado, el bazo y los
huesos son involucrados. En la piel del tronco, cara y extremidades se observan
lesiones moluscoides o acneiformes.(4)
Los mecanismos por los cuales este organismo Penicillium marneffei produce
enfermedad no estan perfectamente dilucidados. Pero, como sucede en cualquier
proceso infeccioso, es logico suponer que, tras la penetracion de las conidias, se
establece una relacion dinamica entre el organismo causal y el hombre mediada
por la expresion de los mecanismos de patogenicidad microbiana y su interaccion
con los sistemas de defensa inespecificos y especificos del hospedador, que
determinar- la curacion espontanea o la aparicion de la enfermedad. Los estudios
cllnico-epidemiologicos demuestran que el estado inmunitario de los pacientes
condiciona la evolucion de la infeccion y que la peniciliosis afecta, sobre todo, a
los pacientes con inmunodefiencia de celulas T, especialmente a los infectados
por el VIH con menos de 100 linfocitos CD4/mm3 . Penicillium marneffei, como
otros hongos dimorficos, es un organismo de baja virulencia, patogeno
oportunista, que experimentalmente es capaz de: a) interaccionar con 4 la celulas
del hospedador, b) captar hierro, y c) infectar a las celulas del sistema monocitico
- macrofagico. El primer evento que se produciria tras la inhalacion de las
conidias seria su fijacion sobre la laminina y la fibronectina de la matriz
extracelular, mediante un proceso dependiente del acido sialico. Tras lo cual, en
ausencia de anticuerpos, las conidias serian fagocitadas por los macrofagos
residentes e inducirian un estimulo menor que si hubiesen sido opsonizadas, sin
produccion de TNF-a, hecho que facilitaria la germinacion de las conidias y su
posterior multiplicacion intracelular, dependiente de los sideroforos. No obstante,
la actividad fungicida del anion superoxido macrofagico podria controlar la
infeccion. Por otro lado, los leucocitos neutrofilos, bajo el influjo de las citocinas
proinflamatorias (GM-CSF, G-CSF, IL-8, TNF-a) inhibirian la germinacion de las

conidias fagocitadas, pero no las destruirian. En circunstancias homeostaticas

optimas, la fagocitosis de las conidias inducirfa una respuesta inmunitaria Tdependiente que se traducirfa por la sfntesis de anticuerpos especfficos, que
opsonizarian las artroconidias y facilitarian los mecanismo de fagocitosis y la
sintesis de TNF-a macrofagico, y el desarrollo de una reaccion de tipo
granulomatoso que conducirfan a la curacion clfnica, pero no microbiologica, y a
la aparicion de fenomenos de latencia. De modo que la peniciliosis se producirfa
como consecuencia de una reactivacion, cuando el hospedador desarrollase una
inmunodefiencia de celulas T, o de una primoinfecciUn, sobre un terreno
adecuado. (8)
En la peniciliosis se han descrito tres tipos de reacciones inflamatorias:
granulomatosa, supurativa y necrosante. Las dos primeras se observan en
pacientes inmunocompetentes; la tercera es una respuesta anergica, propia de
pacientes inmunodeprimidos, localizada preferentemente en el hfgado, pulmon y
piel, y caracterizada por una infiltracion tisular difusa de macrofagos repletos de
artroconidias.
Otras patologfas que pueden ocasionar los hongos son las reacciones de
hipersensibilidad en el caso de penicillium spp., se han publicado casos de
pneumonia alergica en trabajaores de fabricas de queso expuestos a una gran
carga de conidios de p. roqueforti y p. verrucosum(4)
B. 6. Manifestaciones cilnicas

La peniciliosis ha sido descrita en pacientes con sida, en otros inmunodeprimidos

y en personas inmunocompetentes. Las manifestaciones cllnicas no son
especificas y en los pacientes infectados por el VIH pueden confundirse con otras
infecciones oportunistas. Comunmente, se presenta como una enfermedad
diseminada con fiebre, perdida de peso y anemia. Los pacientes presentan
lesiones cutaneas, semejantes al molluscum contagiosum, localizadas en la cara,
en los brazos y en la parte superior del tronco, y en muchos casos se observa
una linfadenopatla generalizada y una marcada hepato-esplenomegalia
En los pacientes no VIH, adems de la infecciUn diseminada con afectaciUn
multiorgnica, se han descrito infecciones de localizaciUn linfoganglionar, osteoarticular, pulmonar, bucal, nasal y cut nea, y procesos febriles de origen
desconocido. En un estudio comparativo sobre las manifestaciones cllnicas
observadas en ambas categorlas de pacientes ninfectados y no infectados por el
VIH- la afectaciUn pulmonar fue la manifestaciUn inicial ms comn, seguida por la
fiebre de origen desconocido y las manifestaciones cutneas

Tabla 2. Feme Miosis marneffer. manifestaciones clinicas3.

Manifestation

Manifestacion

Fiebre
98
Hepatomegalia
Anemia
75
Esplenomegalia
Perdida ponderal
71
Pericarditis
Lesiones cutaneas
70
Lesiones osteoliticas
Linfoadenopatia
52
Artritis
Tos
50
^Tornado de Doung, 1996 (ver bibliografia).

Tabla 1. Propiedades fenotipicas de P. marneffei.

Prueba
% Prueba

%
44
23
4
4
4

%
71.9 100,
0
100,0
100,0
96.9
84,4
65,6 0,0

100.1 Asimilacion de nitratos

100.1 Asimilacion de: glucosa
Inhibicion por la cicloheximida 12.5
oelobiosa
F erme ntacio na de: glucosa
12.5
maltosa
galactosa trealosa sacarosa
9,4 salitina 3,1 trehalosa 0,0
maltosa lactosa
xilosa
Actividad ureolitica Actividad
otrosb
p-galactosidasa
37.5
a
Femnentacibn sin production degas.
a
Arabinosa, lactosa, inositol, manitol, glicerol, melibiosa, rafinosa, ribosa y
ramnosa.
sacarosa : 0%

INFORM
E P.marneffei ) , hifas septadas hialinas ( 1.5
Las especies de Penicillium ( excepto
- 5 u de diametro ) , con conidioforos simples o ramificadas , metulas , fialides y
conidias. Las metulas son ramificaciones secundarias que se forman sobre los
conidioforos , acarrean fialides en forma de frasco . La organizacion de las
fialides en la punta de los conidioforos es tfpica ( llamadas penicilli ) Las
conidias ( 2.5 - 5 u de diametro ) son redondas , unicelulares y observadas como
cadenas no ramificadas en el extremo de las fialides

Hongo filamentoso , heterotrofo , aerobio facultativo

Temperatura optima de crecimiento : 22C - 30C

Ph optimo : 5.6 ( crecen en ph 2.0 - 9.0 )

Cultivo: Las colonias de Penicillium son de crecimiento rapido , filamentoso y

vellosos , lanosas o de textura algodonosa , son inicialmente blancas y luego se
convierten en verde azuladas , gris verdosas , gris oliva , amarillentas o rosadas
con el tiempo . El reverso de la colonia es palido o amarillendo(7)
Crecen facilmente en agar Sabouraund , agar Papa-dextrosa o agar Cromohagar

C. CLADOSPORIUM
Genero perteneciente a la familia-forma Demaciaceas (Orden forma Moniliales,
Subdivision Deuteromicotinas) que engloba a unas 40 especies, algunas de ellas
fitopatogenas y la mayorfa saprofitas sobre vegetacion o sobre el suelo; algunas de
sus especies son capaces de atacar celulosa, pectina y lignina. Es un genero de
distribucion cosmopolita, siendo uno de los taxones mas aislado y abundante en los
recuentos aerobiologicos de todo el mundo. (5)

Es ampliamente citado como productor de asma y esporosis, e incluso algunas de

sus especies actuan como oportunistas y son capaces de intervenir en ciertos
procesos micoticos pulmonares, atacar la piel, producir cromoblastomicosis y
lesiones neurotropicas(8)

Especies de Cladosporium en verano pueden representar hasta el 90% de moho en

el aire el aire exterior. Ellos son los hongos mas comunes de aire exterior y se
pueden encontrar en casi todas las partes del mundo, excepto para las regiones
polares. Mas de 50 especies son actualmente descritos para el genero
Cladosporium. Los tipos mas comunes son Cladosporium herbarum y Cladosporium
cladosporioides. (6)

En una prueba de tipo contra la alergia al moho Cladosporium es el problema (asf

como otros moldes) que los extractos estandarizados de casi la misma calidad estan
disponibles. En la actualidad, se conocen alrededor de 10 alergenos de
Cladosporium. Dado que los extractos se obtienen generalmente a partir de la
cultura, una composicion uniforme no se da. Las pequenas variaciones en nutrientes
para el cultivo de las culturas puedan expresarse en diferentes patrones de
alergenos. Por esta razon, una alergia a la sensibilizacion prueba negativa para
Cladosporium no excluye necesariamente. Encontrar puede proporcionar un
ambiente seguro en el suero de la sangre, solo el estudio de las inmunoglobulinas
especfficas del grupo de IgE-lfnea.(5)

C.1. Taxonimia del genero Cladosporium

El genero Cladosporium fue descrito por HF Enlace en 1816 con C. herbarum como
especie tipo. Encuestas de la historia generica de Cladosporium se llevaron a cabo
por De Vries en 1952 y David en 1997. Las primeras descripciones de Cladosporium
eran bastante vagos y las delimitaciones de generos similares oscura, por ejemplo,
Nees (1817), Corda (1837), Fries (1832) o Lindau (1907).

Desde su introduccion, mas de quinientos taxones se han atribuido a Cladospo- brio.

Debido a la circunscripcion imprecisa de Cladosporium, no es sorprendente que
numerosos hifomicetos superficialmente similares pero no relacionados han sido
asignados a este genero, lo que es muy heterogenea.(7)
Ahora, debido a los grandes cambios en Taxonomfa de hongos, este genero se
reconoce como Ascomycota phylum, clase Dothideomycetes, orden Capnodiales y
familiares Davidiellace-ae. Cladosporium spp. crecera moderadamente rapido en
medio PDA a 25 C y la forma aterciopelada, harinosa, gris-verde a las colonias
negro olivaceous verdes y atras. La mayorfa de las especies no crecen a
temperatura superior a 35 C. Los hongos de este genero hidrato de gelatina, que no
son thermotolerantes y aerosensitivos al benomilo. Las hifas de estos hongos se
arrastraba, tabicadas en la superficie o en el substrato. Los conidioforos casi
erigieron, ramificados y flocoso, a menudo forma un cesped, es de color oliva (7)
Blastosporas son de 1 o 2 celulas, a veces 3 unicelular, variable en forma y tamano
Generalmente, globoso conidios y ovadas cuando una sola celula, entonces por lo
general con una pared transversal, comunmente verdoso. En la determinacion de las
especies del genero Cladosporium, es importante para entender la etiologfa de estos
hongos y, lo que es mas, que la nocividad de cada especie es diferente. Por lo tanto,
el genero Cladoporium, que ocurre con mayor frecuencia en los cultivos, era colonias
herbarum characterized.Cladosporium alcanzan 3-7 cm de diametro en diez dfas en
MEA a 20C, olivaceous-verde a marron olivaceo, aterciopelado, invierta olivaceousnegro.(8)
Los conidioforos a 250 micras de largo y 3-6 micras de ancho, con terminal y
hinchazones intercalares (7-9 micras de diametro), geniculado y alargado. Terminal
de conidios, por extension de la punta falsamente lateral, en inflamaciones de la
rodilla como cortos, tiempos simples o en las cadenas, de diversas formas, elongated, oval, y luego por lo general de una sola celula, o cilfndrica-elipsoidal y luego con
uno - a cuatro tabiques, ahumado-marron o verde oliva, constrenida ligeramente en
los tabiques, con un granulado o espinosa pared fina, de muy diferentes diametros y
longitudes.(5)
Unicelular, alcanzando 5,5-13 x 3,8-6 micras. El C. similares murorum se ha
distinguido a partir de C. herbarum a causa de su terminal de conidios mas corto 3-7
micras de largo y tambien por lo general, la ausencia de septadas conidia
.Cladosporium cladosporioides colonias llegar a 3 - 4 cm de diametro ter en diez dfas
en MEA a 20 C, olivaceous-verde a marron olivaceo, aterciopelado, invierta
olivaceous-negro. Los conidioforos son 350 m de largo, pero por lo general mucho
mas corto, ancho ramas 2-6 micras, acropleurogenous que llevan numerosas
cadenas conidiales surgen de abajo tabiques, pero sin hinchazon y elongaciones
sympodial. Los conidios son elipsoidales a en forma de limon, la mayorfa de paredes
lisas, raramente Minu-tamente verrugoso, olivaceous-marron, unicelular

3-7 (-11) x 2-4 (-5) micras. Las especies mas similares a C. cladosporioides es C.
cucumerinum, que tiene lana, palido colonias de color verde grisaceo (5)
Caracterfsticas y taxonomfa de Cladosporium fungiAllergy es causada sobre todo
por C. herbarum y C. cladopsorioides. Estos hongos son muy diferentes en el hecho
de que las celulas de hifas y conidios de C. Cladosporium son generalmente 1 o
raramente, de 2 celulas y C. herbarum 2- o 4-unicelular. Los conidioforos de C.
fulvum se concentran en los mechones-colo rojo oscuro y se dividen en celulas.
Blastosporas se forman en las ramas superiores y laterales. Las esporas son 1247 x
4-10 micras de diametro y de 1 a 4 unicelular, generalmente incoloro o amarillomarron y tienen una pared celular gruesa. Cladosporium cucumerinum manchas son
de 3-4 mm de diametro y fuerza supurar una sustancia gomosa. Las manchas
pueden ser invadidas por bacterias en descomposicion secundarios que causan las
manchas a secretan olor.(7)
El conidioforo hongos se caracteriza por el color palido-oli vaceous marron, y de
longitud variable de alrededor de 3 ~ 5 m de ancho. El ramoconidium era en su
mayorfa unicelulares mostrando 9,0-27,5 x 2,5-5,0 m (valor medio, 15,2 x 4,3 m) de
largo, con 0-2 septos. Los conidios se formaron cadenas de larga ramificada, y conidium era elipsoidal, fusiforme o unicelular subesferica mayorfa sin tabique
(ocasionalmente con 1 tabique). La longitud de la conidio era 5-25 x 2-6 micras (valor
medio, 10,6 x 4,1 m). Las colonias en PDA fueron densas de color negro verdoso.
Estas caracterfsticas morfologicas de la cepa fueron casi identicos a C. cucumerinum
(7)

CLADOSPORIUM spp.

Interiores

Exterior es

Aire

Polvo

C. cladosporioides
C. cue umerimun

X
X

X
X

X
X

C. elatum
C. herbarum

X
X

X
X

X
X

C. macrocarpum

C. oxysporum
C. sphaerospermum
C. spongiosum

X
X

C.2. Caracteristicas morfologicas del genero Cladosporium

Hongo filamentoso con conidioforos ( de hasta 250 x 3-6 um ) con cadenas

ramificadas de conidios elipsoides o cilfndricos de extremos redondeados ( 5.5-13 x
3.8-6 um ) , formados por gemacion sucesiva del conidio anterior

Colonias de crecimiento lento , planas , finamente vellosas , aterciopeladas o

lampinas , de color verde oliva a pardo oliva , reverso negro oliva
Cladosporium (teleomorfo: Mycosphaerella) forma en cultivo colonias de color
olivaceo y a veces grises o marrones; aterciopeladas, flocosas o pelosas; a
veces presenta estromas. Sus conidioforos son macronematosos o
semimacronematosos simples o poco ramificados, con una coloracion marron o
verdosa, y de superficie lisa o ligeramente granulosa en algunas especies.
Muchas de sus especies poseen ramoconidios con o sin septos. La celula
conidiogena es poliblastica, generalmente integrada y simpodial; da lugar a
conidios que generalmente quedan en cadenas acropetas, o a veces se
presentan solitarios. Pueden ser de forma variada (elipsoidales, limoniformes,
oblongos, esfericos, subesfericos, fusiformes), con una cicatriz en la base y
pueden ser unicelulares o poseer 1-3 septos transversales; poseen pared lisa,
verrugosa o equinada, hialina a pigmentada, de color olivaceo a marron obscuro.
(8)

C.3. Ciclo biologico del genero Cladosporium

Los conidios de Cladosporium se encuentran frecuentemente en el aire libre en
las zonas templadas del planeta . Produce abundantes conidios que pueden
encontrarse en la atmosfera a lo largo del ano , con mayores concentraciones en
las ultimas semanas del verano y primeras del otono

Coloniza frecuentemente hojas y plantas , especialmente gramineas , suelos y

alimentos . Cuando se siegra el cesped o se poden los arboles aumenta
considerablemente el numero de conideas (6)
C.4 .Caracterfsticas utilizadas en la identificacion de las especies

Las colonias son de crecimiento mas bien lento, sobre todo olivaceous-marron a
marron negruzco, pero tambien a veces gris, piel de ante o marron, ante-como a
flocoso, con frecuencia se vuelve polvo debido a la produccion de abundantes
conidios. Vegetativo hifas, conidioforos y conidios son igualmente pigmentados.
Los conidioforos son mas o menos distinta de la hifas vegetativas, son erectos,
lineal o flexuosa, no ramificado o ramificado solo en la region apical, con
geniculado alargamiento sympodial en algunas especies.(6)
Los conidios son de 1 a 4 unicelular, lisa, verrugosa o equinulada, con un hilo
oscuro distinto y se producen en ramificado acropetal cadenas. El termino
blastocatenate se utiliza a menudo para describir cadenas de conidios donde el
conidio mas joven esta en el extremo apical o distal de la cadena. Nota, los
conidios mas cercano a la conidioforo y donde estan "en forma de escudo la
rama cadenas, por lo general. La presencia de conidios en forma de escudo, un
hilio distinta, y las cadenas de conidios que desarticular facilmente, son
diagnosticos para el genero Cladosporium(7)
C.5. Patogenia

Cladosporium herbarum es el hongo que con mas frecuencia se encuentra

presente en el aire . Junto con Alternaria alternata es uno de los hongos
alergenicos respiratorios mas importante y se le ha implicado en casos de asma
y fiebre del heno . Este hongo se asocia a aquellos casos de rinitis en que los
sfntomas no parecen coincidir con la cantidad de polen de gramineas
La composicion antigenica de Cladosporium herbarum se ha estudiado en
profundidad y se ha observado que es muy variable entre los aislamientos
obtenidos de este hongo . Se conocen mas de 60 extractos antigenicos , los mas
importantes descritos son :

Aficn^cns syTiual Vldccjbr un ass >:JaJ Vii53

GTitfKtzVGttiJ i'kJATi1
i+VTiioi'alarpmu

frupenics

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13

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Atahim
tlahs

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Enokntr

11

Aiidic p'Dien Pi ftMOSne PI

tlahli

No es un agente infeccioso importante pero , en climas calidos , puede producir

infecciones cutaneas , subcutaneas ( feohifomicosis o cromomicosis ) y queratitis
Estas infecciones tienen un desarrollo lento y su tratamiento la exeresis
quirurgica de los tejidos afectados en combinacion con el empleo de anfotericina
B.
Cladosporium spp. puede causar reacciones alergicas en los seres
humanos,que a veces conduce al asma. En raras ocasiones, pueden causar
oportunista infecciones, esto se relaciona principalmente a las personas con
peligro sistemas inmunes tales como pacientes con enfermedades
hematologicas o SIDA. Tambien hay informes acerca de las infecciones en salud
personas por Cladosporium carrionii Trejos, que pueden causar lesiones, por
ejemplo Cromoblastomicosis Las infecciones oportunistas de personas causadas
por hongos de Cladosporium spp. son principalmente cromoblastomicosis y
Phaeohyphomycosis.(7)
Cromoblastomicosis es una infeccion cronica de la piel y el tejido subcutaneo.
Por primera vez, esta micosis era descrito por Rudolph en 1914. Esta
enfermedad puede ocurrir a cualquier longitud y la mayorfa de los casos
denunciados estan relacionados con los agricultores. por lo general cambios se
encuentran en las extremidades inferiores, a veces las extremidades superiores,
con menos frecuencia en otras areas del cuerpo. Los sfntomas primera
enfermedad son pequenos, papulas escamosas y nodulos. En el curso de las
ulceras cronicas de la enfermedad puede surgir, cubierto con costras secas. La
enfermedad es cronica y puede llevar a un estancamiento linfatico. (9)
Mientras Cladosporium cladosporioides (Fresen.) GA de Vries y bantianum
Cladosporium (Sacc.) Borelli puede causar Phaeohyphomycosis. Por primera
vez se introdujo el nombre de la enfermedad en 1974 por Ajello. La enfermedad
aparece como infecciones dermicas cambios subcutaneos y sistemicos en la
cornea del ojo. Los cambios superficiales se conocen como tina negra y pueden
ser causados por Cladosporium castellani Borelli y Marcano y Cladosporium

Wernecki Horta. Ese tipo de micosis esta presente principalmente en

temperaturas altas.(4)
Otras especies, como C. cladosporioides y C. bantianum, puede causar formas
subcutaneas y sistemicas de Phaeohyphomycosis
Pueden causar muchas enfermedades de los animales y los problemas de salud
en los seres humanos. Ellos penetran en el cuerpo, no solo a traves de la
sistemas gastrointestinales, sino tambien por inhalacion ya traves de la piel. Las
altas concentraciones de micotoxinas pueden causar fuertes danos en los
organos internos, lo que puede conducir a enfermedades clfnicas graves,
mientras que las bajas concentraciones de micotoxinas puede provocar su
acumulacion, que con el tiempo puede conducir a enfermedades cronicas en los
humanos y animales tales como rinon e hfgado cancer(6)

INFORM
E
Cladosporium (teleomorfo: Mycosphaerella) forma en cultivo colonias de color
olivaceo y a veces grises o marrones; aterciopeladas, flocosas o pelosas; a
veces presenta estromas. Sus conidioforos son macronematosos o
semimacronematosos simples o poco ramificados, con una coloracion marron o
verdosa, y de superficie lisa o ligeramente granulosa en algunas especies.
Muchas de sus especies poseen ramoconidios con o sin septos. La celula
conidiogena es poliblastica, generalmente integrada y simpodial; da lugar a
conidios que generalmente quedan en cadenas acropetas, o a veces se
presentan solitarios. Pueden ser de forma variada (elipsoidales, limoniformes,
oblongos, esfericos, subesfericos, fusiformes), con una cicatriz en la base y
pueden ser unicelulares o poseer 1-3 septos transversales; poseen pared lisa,
verrugosa o equinada, hialina a pigmentada, de color olivaceo a marron obscuro.
(5)

Al estudiar las preparaciones de los captadores tipo Hirst, los conidios de

Cladosporium pueden aparecer encadenados o solitarios. Poseen un tamano
aproximado de 3-7 x 2-4 micras, son reconocibles por las caracterfsticas de color
y forma comentadas en la descripcion anterior y por la presencia de una cicatriz
en la base.

A nivel de laboratorio, se caracteriza por un crecimiento rapido en los medios de

cultivo para hongos como Agar Extracto Malta, Agar Papa Dextrosa, Agar
Sabouraud, Agar Czapek y otros. Sus colonias son caracterfsticas porque tienen
una apariencia velvetica u algodonosa y un color que va desde el olivo grisaceo
hasta el olivo carmelitoso

Microscopia de Cladosporium

Cultivo de Cladosporium en agar

Sabouraund

D. Alternaria alternata
Es un hongo ascomiceto esto es, del filo de las Ascomycotas. Las diferentes
especies de este genero son uno de los mayores patogenos de plantas.

Son conocidas comunmente como alergenos en los humanos, y, dentro de casa,

pueden causar rinitis alergica o reacciones de hipersensibilidad que, en
ocasiones, pueden producir ataques de asma. Sus esporas son las causantes de
la alergia, y, al igual que los polenes, son transportadas por el aire hasta la nariz
o bronquios del alergico, causando la rinitis o asma. Existen esporas de
alternaria todo el ano y, por lo tanto, causan patologfa alergica perenne; aunque
varfe la intensidad segun las estaciones, suele haber mas en primavera y
verano. (5)

Tambien aparecen infrecuentemente entre las infecciones oportunistas en

personas inmunodeprimidos, como por ejemplo, en personas afectadas por el
sida.
Sus esporas estan en suspension en el aire, sobre el suelo, sobre los objetos y
en el agua, tanto fuera, como dentro de casa. Las esporas se pueden distribuir
de una en una, o en largas cadenas, y pueden crecer en colonias visibles, de
color negro o gris.(4)

D. 1. Taxonomia del genero Alternaria

Como se ha dicho, solo se conocen cuarenta y cuatro de los cientos de especies

que pueden formar este genero de hongos. Estas son algunas de las especies
conocidas y que tienen consecuencias sobre plantas y animales comunes:

Alternaria alternata - causa infecciones respiratorias en personas con

sida, asma en personas con hipersensibilidad, y esta relacionada con la
rino-sinusitis cronica. Tambien causa tizon temprano en la patata, y otras
plantas.
Alternaria arborescens - causa debilidad en el tallo del tomato.
Alternaria arbusti - causa lesiones en la hoja de la conocdida pera asiatica
o Nasi.
Alternaria blumeae - causa lesiones en la blumea aurita.
Alternaria brassicae - infecta muchos tipos de verduras, y a las rosas.
Alternaria brassicicola - Crece en la brassicaceae.
Alternaria brunsii - causa tizon en el comino.

Alternaria carotiincultae - causa tizon foliar en la zanahoria.

Alternaria conjuncta - crece en la pastinaca sativa parecida a la
zanahoria.
Alternaria carthami
Alternaria dauci - crece en la zanahoria.
Alternaria euphorbiicola - infecta los cultivos de col.
Alternaria gaisen - causa las manchas en la pera.
Alternaria infectoria - infecta el trigo.
Alternaria japonica - infecta los cultivos de col.
Alternaria molesta - puede causar lesiones en la piel de los phocoenidaes
una familia de cetaceos que incluye a las marsopas.
Alternaria panax - causa tizon en el ginseng.
Alternaria petroselini - causa tizon foliar en el perejil.
Alternaria selini - causa la cafda de la corona del perejil.
Alternaria solani - causa tizon temprano en patatas y tomates.4
Alternaria smyrnii - infecta el perejil, y el alexanders hierba parecida al
perejil y al apio.
ALTERRUAIA spp.

Interior es Exterior es

A. hiasslclcola
A. consoitlale
A. cxassa
A. chaxtaxum

XX

Aire

Polvo

X
X

XX

X
X

XX
XX

X
X

A. oleiacea
A. son chi

XX

X
X

A. tennis

XX

A. tenulsshna

XX

A. dsndiltlca
A. japonica

D.2. Caracteristicas morfologicas del genero Alternaria

Hongo filamentoso con conidioforos simples, tabicados, en cuyo extremo se

forman unos conidios muriformes, de color pardo, con septos transversales y
verticales de disposicion irregular (Figura 26). Por gemacion de la celula apical
se genera un nuevo conidio, formandose largas cadenas de 10 o mas conidios

Colonias de crecimiento rapido (tres o cuatro dfas), vellosas, al principio de color

gris, despues el centro se oscurece (tonos negros mas o menos intensos) pero
los bordes siguen siendo grisaceos. Reverso de color negro. Tolerante al
benomilo (6)

D.3. Ciclo bioioglco de Alternaria alternata

Es un hongo extremadamente comun en abonos, plantas (fresas, crisantemos,

tomates, zanahorias y esparragos), pulpa de madera y madera podrida, pero
tambien se encuentra en alimentos y tejidos, asf como en diferentes tipos de
suelo. En los invernaderos con cultivos de crisantemos y tomates, se afsla de las
plantas enfermas o muertas por su tendencia a habitar sustratos organicos en
descomposicion. Produce con frecuencia manchas negras en los tomates.
Dentro de las viviendas puede aislarse del aire, polvo y lugares con humedad
como los marcos de las ventanas, en las que se produce condensacion. Su
distribucion es universal y se considera que es un hongo de espacios abiertos(5)

Los conidios se afslan con frecuencia del aire libre durante el tiempo caluroso
(alcanzando el pico de
maxima concentracion en los
ultimos dfas de verano).
El rango de temperatura de
crecimiento varfa entre 2 y 32
C, con temperaturas optimas
entre 25 y 28 C.
Entre
los
metabolitos
producidos
por
Alternaria
alternata se encuentran varios
que pueden considerarse
como
micotoxinas. Destacan el
monometileter de alternariol,
altertoxinas I y II (toxinas
mutagenas),
altenueno,
altenusina
y
acido
tenuazonico (6)

D.4 .Caracterfsticas utilizadas en la identificacion de las especies

Alternaria en cultivo presenta unas colonias de colores obscuros, grises,

olivaceos, marrones o negros. Sus conidioforos son macronematosos,
mononematosos, simples o ramificados, de color marron claro a obscuro. La
celula conidiogena es integrada, terminal o intercalar, generalmente simpodial.
Los conidios, muy caracterfsticos por su tabicacion longitudinal, transversal u
oblicua, son del tipo dictiosporeo y presentan forma ovoide u obclavada, con
superficie lisa o rugosa y de coloracion marron claro a obscuro, generalmente se
forman en cadenas acropetas. Pleospora y Clathrospora engloban la mayorfa de
los teleomorfos de este genero. Al estudiar las preparaciones de los captadores
tipo Hirst, los conidios de Alternaria pueden aparecer solitarios o encadenados y
son facilmente reconocibles debido a su tamano (30-50 x 10-14 micras), color y
forma caracterfsticos, comentados anteriormente.(8)
D.5. Patogenia

Puede provocar lesiones cutaneas y subcutaneas despues de traumatismos en

personas con inmunosupresion. Tambien es causa de endoftalmitis
postquirurgica

y de onicomicosis. Se han observado infecciones invasoras sistemicas (como

encefalitis) en pacientes con sida. En China se ha sugerido una asociacion entre
el acido tenuazonico y el cancer esofagico que tambien ha sido implicado en
enfermedades hematicas endemicas, como el onyalai (trombocitopenia aguda
con lesiones hemorragicas orales), en Africa. Las lesiones cutaneas curan
espontaneamente con la mejora o la resolucion de los factores subyacentes del
enfermo. (9)
El tratamiento de las infecciones invasoras graves es mas complicado porque se
suman las enfermedades severas subyacentes del enfermo con la variable
sensibilidad a los antifungicos de Alternaria alternata. El tratamiento se basa en
la administracion intravenosa de concentraciones elevadas de anfotericina B
desoxicolato (o en formulaciones lipfdicas o liposomales, como alternativa)
durante varias semanas.(9)
Alternaria alternata es uno de los hongos mas extensamente distribuidos y uno
de los principales alergenos. La fraccion alergenica mas importante es
heterogenea y puede inducir reacciones de hipersensibilidad en concentraciones
muy bajas en personas sensibilizadas. Se ha comprobado que existe una gran
complejidad y variabilidad entre los aislamientos y cepas de esta especie: se han
determinado varias fracciones alergenicas (mas de 20 alergenos diferentes)
como Alt a 1 Alt a 2 (aldehido deshidrogenasa), Alt a 5 (enolasa), Alt a 6 (protefna
ribosomica), Alt a 7, Alt a 10, Alt a 11, Alt a 12 y Alt a 22 (enolasa, 47 kDa). Alt a 1
es un alergeno principal que es reconocido por los anticuerpos IgE del 80- 90%
de los pacientes alergicos a Alternaria alternata mediante estudios de
radioinmunoelectroforesis y el 86% presenta reaccion cutanea. Alt a 1 es un
dfmero con dos cadenas unidas por puentes disulfuro de un peso molecular de
alrededor de 30 kDa. Alt a 2 reacciona con los anticuerpos IgE del 60% de los
pacientes alergicos a Alternaria. La enolasa es reconocida por los sueros de la
mitad de los pacientes alergicos a Alternaria. Enolasas similares se han obtenido
de Cladosporium herbarum y Candida albicans. Alt a 6, Alt a 7 y Alt a 10
reaccionan con el suero de menos del 8% de los pacientes alergicos a Alternaria.
(6)
La abundancia relativa de los conidios de Alternaria alternata en el aire libre y su
presencia en las casas con humedad convierte a este microorganismo en una
fuente alergenica importante. La exposicion a esporas fungicas se diferencia de
la exposicion al polen y las cantidades de esporas fungicas por metro cubico son
mayores que las de granos de polen (incluso 10000 veces mas). Ademas, la
exposicion es mas duradera puesto que puede durar meses mientras que la
exposicion a polenes suele durar semanas. Esta exposicion intensa y prolongada
a Alternaria alternata se asemeja a la exposicion a restos epidermicos de
animales o a los acaros del polvo y contribuye a la cronicidad y severidad del
asma en las personas sensibilizadas a Alternaria.(7)

La alergia al hongo Alternaria alternata es una causa comun de asma segun

diferentes estudios epidemiologicos. Un 70% de los pacientes alergicos a
antfgenos fungicos tiene pruebas cutaneas positivas con Alternaria alternata,
aunque se han descrito reacciones inmunologicas cruzadas con otros hongos
como Stemphylium y Curvularia. La alergia a Alternaria se presenta clfnicamente
como reacciones asmaticas de tipo inmediato mediadas por IgE. El asma del
panadero se considera conectada con la inhalacion de conidios de Alternaria
presentes en la harina, igual que lo que ocurrirfa con el pulmon del trabajador de
la pulpa de madera y la inhalacion de esporas presentes en la madera. Se han
descrito algunos casos de alergia mediada por IgG (pulmon de granjero) en
ninos que vivfan en granjas. Hopkins, en 1930, describio que una inhalacion
deliberada de esporas de Alternaria produjo un ataque de asma en una persona
con historia de respuesta asmatica en ambientes humedos. La presencia de
reaccion cutanea a los antfgenos de Alternaria alternata se asocia con un
elevado riesgo de cuadros respiratorios alergicos en presencia de esporas de
este hongo, principalmente en ninos y adultos jovenes(10)

INFORME
Cadenas de conidias de color marron palido y en forma de frasco. Tienen
tabiques transversos y longitudinales. Caractensticas de las conidias: Ovoides,
marron palido, 20-63 x 9-18 pm. Se visualizan cadenas largas, con tabiques
transversales, longitudinales y oblicuos. La mayona tienen un pico terminal en el
extremo distal
La celulas conidiogena es integrada , terminal o intercalar , generalmente
simpodial. Los conidios con muy caracterisiticos por su tabicacion longitudinal ,
transversal u oblicua , son del tipo dictiosporeo y presentan forma ovoide u
obclavada , con superficie lisa o rugosa y de coloracion marron claro a oscuro
generalmente se forma en cadenas acropetas. Los conidios pueden aparecer
solitarios o encadenados y son facilmente reconocibles debido a su tamano ,
color y forma caraceristicos(11)
En cultivo presenta colonias de colores oscuros , grises , olivaceos , marrones o
negros . Sus conidioforos son macronematosos , mononematosos , simples o
ramificados , de color marron a oscuro .
Crecen a temperatura de 28C y sus esporas facilmente transmisibles por el
aire.

Microscopia de Alternaria sp.

Cultivo de Alternaria sp en agar Saboureaud

E. FUSARIUM
Fusarium es un genero de hongos de distribucion universal, ubicuos y con gran
importancia economica ya que son habituales fitopatogenos. En ocasiones
causan infecciones en el paciente normal (queratitis, onicomicosis, etc.). Sin
embargo, cada vez se describen mas infecciones graves en los pacientes
inmunodeprimidos, de ahf que su importancia haya crecido exponencialmente.
Las infecciones por el genero Fusarium se incluyen dentro de las
hialohifomicosis, esto es, las causadas por hongos oportunistas que presentan
hifas hialinas septadas. Su amplia distribucion se atribuye a su capacidad para
crecer en gran numero de substratos y a su eficaz mecanismo de dispersion; el
viento y la lluvia juegan un importante papel en su diseminacion. Se ha
demostrado que el aire puede llevar las esporas hasta 400 km de distancia.(6)
En 1973 se describe la primera infeccion diseminada en un paciente con
leucemia aguda. Desde entonces se han descrito muchos casos, especialmente
en pacientes con alteraciones de la respuesta inmune, diabeticos, quemados,
con heridas abiertas y contaminadas con tierra, con trastornos inmunologicos o
con tratamiento inmunosupresor. Se han detectado concentraciones elevadas de
anticuerpos frente a polisacaridos extracelulares en los sujetos sanos, lo que
sugiere que existe un contacto frecuente con el hongo. Al igual que ocurre con el
genero Aspergillus, es probable que este contacto se produzca por inhalacion de
las esporas, que se encuentran de forma habitual en el aire.(8)
E. 1. Taxonomia del genero Fusarium
La taxonomia del genero se basaba principalmente en criterios morfologicos y
en el tipo de planta huesped. Muchas especies presentaban diferentes formae
specialis las cuales no siempre se correspondfan con grupos naturales.
Recientemente, diversos autores han utilizado criterios moleculares en la
taxonomia de Fusarium, basados en la secuenciacion de diversos genes, lo que
les ha permitido demostrar que las clasicas especies patogenas del genero,
como son F. verticillioides (F. moniliforme), F.oxysporum y F. solani, constituyen
en realidad complejos de especies.
Asf se han podido diferenciar unas 70 especies involucradas en infecciones
humanas, la mayorfa de las cuales sin nombre especffico ya que al no poder ser
reconocibles fenotfpicamente se ha preferido no asignarles binomios especfficos.
Considerando la dificultad de identificar morfologicamente muchas de las cepas
de especies filogeneticas implicadas en casos clfnicos, con el objeto de permitir
reconocer dichas cepas y poder realizar estudios epidemiologicos, ODonnell et

al.32 han establecido una nomenclatura particular de secuencias tipos o

haplotipos obtenidas mediante la secuenciacion de los genes EF-1t, RPB1 y
RPB2. Utilizando este procedimiento, la identificacion de los aislados clmicos se
puede llevar a cabo comparando las secuencias obtenidas con las depositadas
en la base de datos Fusarium-ID disponible en http://isolate.fusariumdb.org. La
identificacion de los aislados clmicos a nivel de especie o de haplotipos sin duda
tiene un gran interes cientffico y epidemiologico, pero desde un punto de vista
practico con respecto al tratamiento del enfermo su interes disminuye ya que se
ha demostrado que en general la mayona de especies filogeneticas suelen ser
resistentes a los antifungicos utilizados en clmica

TABLJ 4
CWNPLEJC* DE ESPEUET DE- HJI-A/IJ.-I; QUE PGMPAJI ESPECJES DE MCCRE &
COMPLEJO DE ESPECIES

USPECJES HJOGEJ-.E:
ICJS

HUARIMN DDAINYDASPOREI/N
F-ASI.-I.IL U DJNWRZIIN

3
S

ANURBNG AX|SPARUMFKNARTUNI ILINRIUCDNUFN

F-DIILI.B U ioiam
F-IISLI.L'M RRICJFICFIRM
(. I.'IUL'RII'.'.J $u}\k\inii

20
20

2]
A
N

E.2. Caracteristicas morfologicas del genero Fusarium

Al microscopio, la fialide es generalmente fina, con forma de botella; simple o
ramificada; cortas o largas; monofialfdica (que emergen esporas de un poro de la
fialide) o polifiairdica (de varios poros). Los macroconidios presentan forma de
medialuna, hialinos y septados. Para su correcta clasificacion es importante el
largo, ancho, curvatura, septos, agrupaciones mucoides (esporodoquios) y
detalles de las celulas de los extremos (celula apical y pie) Los microconidios,
ausentes en algunas especies, poseen variadas formas (fusiformes, ovales,
clavadas, entre otras), agrupaciones (estructuras mucoides llamadas "falsas
cabezas), en cadenas largas o cortas; todas observables a la lupa. Otro tipo de
conidios son los mesoconidios, que son similares pero de menor tamano que los
macroconidios y nunca forman estructuras mucoides. Por ultimo, pueden
observarse las clamidosporas caractensticas con doble pared gruesa, lisa o
rugosa; de manera aislada, en pareja o en grupo.(9)

Las caracterfsticas microscopicas que ayudan a la identificacion son:

Conidioforos. Es la zona de la hifa fertil simple o ramificada que soporta la

celula conidiogena.

Celulas conidiogenas. Son fialides simples o ramificadas, a menudo finas

y afiladas o con forma de botella. Las esporas pueden salir de un solo
orificio (monofialides) o de varios (polifialides).

Conidias. Son inmoviles y de reproduccion asexual. No todas las especies

producen todos los tipos de conidias. Hay varios tipos:
S Macroconidias, con forma de canoa, hialinas y septadas. La celula
apical es alargada y la basal tiene forma de pie. Se producen en
sucesion basipetal a partir de las monofialides. Tambien pueden ser
producidas en esporodoquias, que pueden tener monofialides o
polifialides. En ocasiones recuerdan a un racimo de platanos. Su
morfologfa es la clave de la identificacion de las distintas especies, ya
que su forma es relativamente constante y estable cuando el hongo
crece en substratos naturales y condiciones estandar.
S Microconidias, son pequenas, generalmente unicelulares y con forma
variable (ovoides, elipsoidales, subglobosas, piriformes, etc.).
Ocasionalmente tienen un tabique y la base puede ser redondeada,
apiculada o truncada. Se producen en el micelio aereo a partir de
monofialides o polifialides. Se pueden ver aisladas, en masas o en
cadenas. La forma en la que son producidas se observa mejor en un
medio con substrato natural como el agar-clavel
S Clamidosporas, se originan por modificacion de un segmento de la
hifa. Tienen pared gruesa, lisa o rugosa. Se observan aisladas, en
parejas, en grupos o en cadenas. Son formas de resistencia ante
ambientes adversos que garantizan la propagacion y supervivencia
del hongo.
S Mesoconidias. Son otro tipo de conidias que tienen forma y tamano
similar a las macroconidias pero les falta la celula basal en forma de
pie. Pueden ser rectas. Se producen siempre en polifialides y son
individuales. Nunca forman masas mucosas.

Esporodoquia. Es una masa de conidioforos cortos y estrechamente

ramificados que nacen directamente de una marana de hifas. Se
producen mas frecuentemente en la naturaleza que en los cultivos de
laboratorio.

Esclerotia. Es una masa de celulas dura (diffcil de aplastar entre porta y

cubre) e inactiva bajo condiciones ambientales desfavorables.

Estroma. Es una estructura vegetativa compacta dentro de la que se

desarrollan cuerpos de fructificacion

Figura 1, Caracteristicas morfologicas microseopicas del genero Fusanum.

MONOFIALIDES
CON
f-1 I'RCirUNIDIR 3.

CBJJLA APICAL
MUM. 4ML LE I.Li . LV<JBE"'

D E MICROCO Nl
DIAS
* 1-, irnr, rn-=:

_EUJLAEiAi-l

I -M m i'.n IF..-:
M L FI J'-UPI
LL''1':

E.4. Caracteristicas utilizadas en la identificacion de especies

Fusarium solani
Es un hongo cosmopolita y causa infecciones superficiales (queratitis,
onicomicosis), localizadas (endoftalmitis, sinusitis) y diseminadas. Es toxigenico.
En cultivo es bastante estable, aunque puede sufrir algunas mutaciones hacia
formas con micelio aereo abundante, sin esporodoquias y sin color. En el medio
APD el crecimiento es rapido: 30 mm en una semana. La colonia presenta un
aspecto liso y algodonoso de color blanco grisaceo, crema, ocre o rosa purpura.
Generalmente el reverso no es coloreado o es de color crema palido. (12)

Las microconidias son abundantes y ovoides. Pueden tener un tabique. Su

tamano oscila entre 8-16 x 2-4,5 pm y son producidas en monofialides alargadas
y finas que suelen medir 40-80 x 2,5-3 pm. Las monofialides nacen lateralmente
de la hifa y a veces son ramificadas. Hacia la punta se afilan y presentan
collaretes poco definidos. Las macroconidias, cuyo tamano aproximado es de 2865 x 4-6 pm, se observan en menor cantidad que las microconidias y nacen de
conidioforos cortos y ramificados que frecuentemente forman esporodoquias, que
son las que

producen el color crema, azul o azul-verdoso, pero nunca naranja. Presentan

entre tres y cinco tabiques y tienen forma de media luna, con las superficie
ventral y dorsal paralelas en la mayor parte de su longitud. La celula apical es
corta y redondeada y la celula basal redondeada o claramente con forma de pie.
Las clamidosporas son frecuentes, con una pared lisa o rugosa. (13)
Se observan aisladas o en parejas, terminales o intercalares y tienen un tamano
de 6-10 pm de 0. Su estado sexual recibe el nombre de Nectria haematococca
var brevicona. Es una especie heterotalica. In vitro muestran CMI elevadas a la
5- fluorocitosina y a los azoles y solo un 25% de las cepas tienen CMI bajas
frente a la anfotericina B.

Figura 2. Caractensticas microscopicas de Fusanum solani.

MhI.R iJUJ NIC11 AS

MONOFIALIDE
S
E: PL RLE JL JIM

Ml CROC ON ID I AS

CLAMIDOSPORA
S

Fusarium oxysporum
Se trata de un hongo de distribucion universal. Se afsla como saprofito del suelo
y de numerosas plantas (cereales, soja, algodon, platanos, cebolla, patatas,
manzanas, etc.). Como fitopatogeno causa grandes perdidas economicas. En el
hombre puede causar queratitis, infecciones cutaneas y diseminadas. Tiene una
gran variedad morfologica y sufre frecuentes mutaciones en cultivo, apareciendo
progresivamente mas micelio y desapareciendo las esporodoquias y la
coloracion. En APD presenta un crecimiento rapido: 50 mm en una semana. Al
principio la colonia es lisa y algodonosa. Con el tiempo toma un aspecto como el
fieltro, de color blanco o salmon palido, tinendose de purpura en su zona central.
El reverso es purpura o azul oscuro. Produce un pigmento purpura-violeta que
difunde al medio. La esporodoquia, presente en algunas cepas, da una
coloracion crema anaranjada al cultivo. Algunas cepas tienen un caracterfstico
olor a lilas. Las microconidias son ovoides o en forma de rinon, con un tamano de
5-12 x 2,3-3,5 pm y, ocasionalmente, con uno o dos tabiques. Nacen de
monofialides laterales, cortas y anchas, afiladas hacia la punta, con collaretes
poco definidos, solitarias o ramificadas. Las microconidias pueden formar masas
(simulan cabezas) pero nunca cadenas. (12)

Las macroconidias tienen de uno a cinco septos. Su tamano es de 23-54 x 3-4,5

pm. Tienen forma de media luna, ligeramente curvadas, con pared fina y
delicada. Su celula apical es afilada y la celula basal con forma de pie pero
pueden tener ambos extremos afilados. En la mayorfa de los cultivos las
clamidosporas son abundantes. Son grandes, hialinas, de pared lisa o rugosa y
pueden observarse aisladas o en parejas, intercalares o terminales. Algunos
aislamientos presentan masas de esclerotia de color claro, azul o violeta. El
estado sexual no se ha descrito. In vitro presenta CMI elevadas a los azoles y a
la 5-fluorocitosina. Un 50 % de las cepas tienen CMI bajas a la anfotericina B.
Figura 3. Caracteristicas microscopicas de Fusarium
oxysporum.

M ft CROC
n Ml DIAS

CLPMIuOSPORA
S

i~>
MO
NOFIRLIDES

MICROCONIDIA
S

Fusarium verticillioides
Es un hongo cosmopolita, pero con cierto predominio en zonas tropicales y
subtropicales. Como los dos anteriores puede causar queratitis, endoftalmitis,
infecciones cutaneas y en ocasiones infecciones diseminadas. El crecimiento en
APD o en OA es rapido, unos 40 mm en una semana con abundante micelio
aereo algodonoso, de color blanco a melocoton o rosa salmon que se tine de
color azulado o purpura en pocos dfas. El color del reverso varfa de crema a lila,
vino tinto o purpura. (15)

Las microconidias son ovoides o en forma de maza con base truncada. Su

tamano es de 7-10 x 2,5-3,2 pm y pueden tener uno o dos tabiques. En algunos
medios forma cadenas que pueden observarse en la placa de cultivo con
objetivos de bajo aumento. La presencia de abundantes microconidias
condiciona el aspecto polvoriento de la colonia. Los conidioforos nacen
lateralmente de la hifa y son escasamente ramificados. Las celulas conidiogenas
son monofialides, habitualmente delgadas y largas, pero menos que la de F.
solani (20-30 x 2,3 pm). Las macroconidias no se forman en todas las cepas.
Cuando existen son

ligeramente fusiformes, casi rectas, con superficies dorsal y ventral casi

paralelas, de pared fina y delicada. Las celulas basal y apical son alargadas y
ligeramente curvadas. Pueden tener entre tres y siete tabiques y su tamano es
de 31 -58 x 2,73-6 pm. No forma clamidosporas. Puede presentar esclerotia azul
oscura lo que produce un cultivo de tono azulado. La esporodoquia se forma
raramente. Es capaz de producir toxinas, la mayorfa alrededor de los 18 C.
Pueden crecer bajo condiciones anaerobias y toleran medios con
concentraciones de NaCl de un 15%. La formacion de cadenas se favorece
utilizando el medio con KCl. (13)
La produccion de macroconidias puede estimularse incubando los medios con
luz negra. Tras varios subcultivos puede variar hacia formas con escaso micelio
que ha sido sustituido por laminas de macroconidias lo que da al cultivo una
coloracion amarillenta y una apariencia humeda. Tambien aparecen formas
exclusivamente miceliales sin color. Su estado sexual es Gibberella fujikuori. Es
heterotalico. No se han comunicado datos sobre su sensibilidad in vitro a los
antifungicos.
Figura 4. Caractensticas microscopicas de Fusarium
verticilhoides.

MICRO
CONDIAS

VluNuFIAUD
Eo

MACRJUJNDIAO

E.5. Patogenia

La puerta de entrada de las infecciones localizadas son las pequenas lesiones

producidas por traumatismos. Las infecciones sistemicas se pueden producir por
la diseminacion del microorganismo desde la puerta de entrada. En la mayorfa
de las ocasiones, esta diseminacion esta condicionada por el estado
inmunologico del huesped, aunque tambien se han barajado otros factores de
virulencia, como la produccion de toxinas y enzimas, cuyo papel en el desarrollo
de las infecciones humanas esta por determinar. Uno de los factores de
virulencia mas estudiados

es su capacidad para adherirse al material plastico, como cateteres y lentes de

contacto. (14)
Esta interaccion se
Mitochondria
Peroxisomes
ha
determinado
Acetyl-CoA
P-oxidation (long
mediante
la
chain fatty acids)
t
observacion
con
p-oxidation (short
Acctvl-CoA
. - PKS
chain fatty acids)
microscopio
Sucros
Early reactions^
FAS
e
Nucleus
electronico. El hongo
Y
AF cene cluster'
Norsolorinic acid
se adhiere a los
cateteres, pero no
invade la pared de
Vbs
estos.
Por
el
Free
Nor-l-rf.ribosomes
Aflatoxisomes
contrario,
se
,-Ver-lA' ,
Late reactions
adhieren, penetran y
A
OmtA
proliferan dentro de
Light
las
lentes
de
contacto. Tanto los
macrofagos como los
Vacuole
CYTOPLASM
leucocitos
Cell interior
polimorfonucleares
juegan un papel esencial en la eliminacion de estos microorganismos. Asf, los
polimorfonucleares inhiben el crecimiento de las hifas, mientras que los
macrofagos tambien son capaces de impedir la germinacion de las conidias.(11)

E. 6. Manifestaciones
clinicas
Infecciones relacionadas con cuerpos extranos
Queratitis. Se puede producir tras la colonizacion de lentes de contacto, por
conidias aerosolizadas en ambientes particularmente contaminados, o por
traumatismos con ramas de arboles o plantas. Otros factores de riesgo
importantes son la presencia de patologfa previa en la cornea y los
tratamientos topicos con corticoides o antibioticos. El tratamiento de eleccion
es la natamicina al 5% por via topica, dada su buena actividad in vitro,
excelente penetrabilidad en la cornea y escasos efectos secundarios.
Tambien se puede utilizar la anfotericina B local. No suelen responder a los
azoles. Se recomienda la extirpacion quirurgica del tejido afectado y la
supresion de cualquier tratamiento con corticoides, locales o sistemicos. La
infeccion puede progresar hasta llegar a causar una endoftalmitis, lo que
ensombrece el pronostico. Este cuadro clfnico requiere un rapido diagnostico
y tratamiento, para evitar la perdida de la vision. (16)

Peritonitis y dialisis peritoneal cronica ambulante. La infeccion sigue un curso

insidioso, con fiebre, dolor abdominal y disminucion del flujo de drenaje, por
obstruccion progresiva de la luz del cateter. Para resolver la infeccion es
imprescindible eliminar el cateter y tratar con antifungicos.(16)

Infeccion del cateter venoso central. En los pacientes inmunocompetentes, o

en aquellos con episodios de neutropenia transitoria, puede ser suficiente la
eliminacion del cateter. En los neutropenicos, hay que instaurar tratamiento
antifungico y, si es posible, recuperar la cifra de neutrofilos.(17)

Infecciones de un solo organo

Onicomicosis. Se caracteriza por la aparicion de manchas blancas en la

base de la una que se extienden hacia el extremo libre, pudiendo
ocasionar opacidad total de la una, engrosamiento de su borde y, si
progresa, destruccion de una parte o la totalidad de esta. Se asocia
generalmente con pequenos traumatismos en personas que trabajan con
plantas, tierra, etc. En los pacientes inmunodeprimidos puede ser la
puerta de entrada de una infeccion diseminada.

Piel. Se establece por inoculacion directa o por diseminacion sangufnea.

Tras colonizar la piel, la presencia de factores predisponentes, como una
humedad excesiva, quemaduras, traumatismos o inmunodepresion,
pueden favorecer el desarrollo de la infeccion. Las lesiones son muy
variadas e incluyen granulomas, ulceras, necrosis, queratosis con eritema,
nodulos subcutaneos indurados con zona de necrosis central, micetomas,
paniculitis, etc.

Hueso y articulaciones. El primer caso descrito afecto a un nino de 7 anos

que, tras clavarse una espina en la rodilla, desarrollo tres semanas
despues una osteomielitis de tibia, que curo completamente tras una
limpieza quirurgica y tratamiento con anfotericina B intravenosa. Otros
casos descritos tuvieron una puerta de entrada parecida (traumatismo con
o sin fractura abierta) y evolucionaron bien con un tratamiento similar.

Otros organos. Se afectan en muy raras ocasiones. Se han publicado

casos de otitis externa, una infeccion intranasal en una mujer diabetica, un
absceso cerebral en un paciente con infeccion por el virus de EpsteinBarr, una neumonfa en un nino con enfermedad hematologica, que
requirio lobectomfa inferior derecha y anfotericina B, se han descrito
meningitis, etc.

Infeccion diseminada
Supone la afectacion de dos o mas organos no contiguos. Desde el primer caso
descrito en 1973, se ha producido un incremento en el diagnostico de estas
infecciones. Aunque pueden producirse en cualquier epoca del ano, parecen mas

frecuentes en epocas humedas, debido a que el aire y la lluvia son un metodo

eficaz de diseminacion de las esporas. El mecanismo de adquisicion de la
infeccion en ocasiones es desconocido. Es probable que el paciente este
colonizado antes de ingresar en el hospital y posteriormente, con la presencia de
neutropenia, desarrolle la infeccion. Tambien se ha postulado que las macetas
con plantas o el agua pueden actuar como reservorios del hongo en el hospital.
Estas infecciones ocurren principalmente en pacientes con enfermedades
hematologicas, en tratamiento quimioterapico y en trasplantados de medula
osea. Se han descrito algunos casos en grandes quemados, y un solo caso
asociado a un neuroblastoma. La mayorfa de los pacientes estaban recibiendo
profilaxis antifungica con ketoconazol, nistatina oral o incluso anfotericina B.
Como en otras infecciones fungicas el principal factor de riesgo es la
neutropenia. Su recuperacion mejora claramente el pronostico. Los casos
descritos hasta ahora muestran una mayor incidencia en varones que en mujeres
(2,6:1), sin diferencias entre razas.
Patoqenia. Las dos vfas de adquisicion de la infeccion mas probables son la
respiratoria y la cutanea. Las conidias se inhalan y, en el paciente
predispuesto, causan una infeccion pulmonar. Por via cutanea, el paciente
puede estar colonizado, tener onicomicosis, celulitis en relacion con
quemaduras, infeccion del cateter, etc. Desde estas localizaciones el
hongo se puede diseminar por via hematogena a otros organos. La
posibilidad de entrar por el tracto gastrointestinal es rara. Se ha
especulado con que las toxinas producidas por los Fusarium pueden
aumentar el dano tisular, facilitando su entrada en la circulacion.
Manifestaciones clinicas. El cuadro clasico es el de un paciente con fiebre
persistente, profundamente neutropenico, que no responde al tratamiento
antibiotico de amplio espectro. La infeccion puede afectar a cualquier
organo, siendo los mas frecuentes pulmon, rinon, bazo, hfgado, medula
osea, tracto gastrointestinal, senos maxilares con o sin afectacion
rinocerebral, endoftalmitis o miositis. Una caracterfstica llamativa es la
existencia previa o concomitante de lesiones cutaneas en las
extremidades, fundamentalmente en las piernas, dedos de pies y manos,
y en la cara. Estas lesiones estan presentes en mas de las dos terceras
partes de los pacientes, y se caracterizan por nodulos subcutaneos
eritematosos multiples, maculas y papulas eritematosas, con necrosis
central progresiva y lesiones "en diana" (zona central necrotica rodeada
de eritema). Tambien puede aparecer celulitis, con o sin fascitis.
La evolucion de la infeccion esta directamente relacionada con la neutropenia, y
la recuperacion de la cifra de neutrofilos mejora el pronostico. Un pequeno
numero de pacientes portadores de un cateter central, con aislamiento de
Fusarium en el

hemocultivo y sin afectacion especifica de ningun organo, se han recuperado

satisfactoriamente tras la retirada del cateter y la recuperacion de la neutropenia.
Una vez recuperada esta, la infeccion puede resolverse completamente o
hacerse cronica y localizada en senos, pulmon, ojo, articulaciones, etc., con
posibilidad de recafda y diseminacion al restituirse la quimioterapia con la
consiguiente disminucion del numero de neutrofilos.
Tratamiento. Hay que realizar, cuando se pueda, una adecuada y extensa
limpieza quirurgica de todo el tejido infectado y tratar de disminuir la
duracion de la neutropenia al mfnimo posible, incluso administrando
factores estimulantes de granulocitos. Asimismo, es imprescindible el
tratamiento con antifungicos activos frente a Fusarium.
En ese tipo de pacientes, las onicomicosis son un importante factor de riesgo de
diseminacion, por lo que deben ser tratadas energicamente. En general,
requieren la extirpacion de la una o unas afectadas, ademas del tratamiento
antifungico. La recuperacion de la neutropenia y el control de la enfermedad de
base se asocian en muchos pacientes con la resolucion de la infeccion.
El tratamiento antifungico consiste en la administracion de anfotericina B
convencional a las dosis mas altas posibles, o formulaciones lipfdicas cuando el
paciente no responde o esta contraindicada la anfotericina convencional. La
mayorfa de las cepas se muestran, en estudios in vitro, sensibles a la anfotericina
B y resistentes a la 5-fluorocitosina y a los azoles, aunque en general la
sensibilidad o resistencia in vitro a los antifungicos no predice la respuesta
clfnica.

INFORM
E
En medios habituales las colonias presentan un crecimiento rapido, que suele
ocupar toda la placa (8-9 cm de 0 en 1 semana). El color que desarrollan
depende de la especie y puede ser blanquecino, crema, anaranjado, rosa, rojizo,
purpura, etc. Estas coloraciones tambien pueden variar segun los diferentes
medios de cultivo.
El micelio aereo suele ser abundante y de aspecto algodonoso. La velocidad de
crecimiento, la morfologfa y la pigmentacion de la colonia son datos importantes
para la identificacion.
Los medios de cultivo utilizados habitualmente y que se encuentran disponibles
en el mercado son:

Agar extracto de malta (MEA). Se pueden valoran aspectos morfologicos

macroscopicos y microscopicos. Se consigue una buena esporulacion.
Agar patata dextrosa (APD). Es un medio util para valorar el aspecto
morfologico y la coloracion de la colonia. Su alto contenido en
carbohidratos condiciona un mayor crecimiento, en detrimento de la
esporulacion que suele retrasarse hasta un mes. Las conidias pueden ser
atfpicas.
Agar harina de avena (OA). Se utiliza para valorar la velocidad de
crecimiento, el color, el aspecto de la colonia y las caracterfsticas
microscopicas.

Otros medios de cultivo como agar clavel (CLA), medio con KCl, agar arena,
agar nutriente sintetico (SNA), medio de Komada, etc., se suelen utilizar en
laboratorios especializados. La temperatura habitual de incubacion de estos
hongos es entre 25 y 28 C.
La formacion de conidias puede estimularse incubando los diferentes medios
bajo luz negra (300-400 nm) y tambien alternando luz y temperatura (25 C
dfa/20 C noche). Las caracterfsticas microscopicas que ayudan a la
identificacion son:

Conidioforos. Es la zona de la hifa fertil simple o ramificada que soporta la

celula conidiogena. Celulas conidiogenas. Son fialides simples o
ramificadas, a menudo finas y afiladas o con forma de botella. Las
esporas pueden salir de un solo orificio (monofialides) o de varios
(polifialides).

Conidias. Son inmoviles y de reproduccion asexual. No todas las especies

producen todos los tipos de conidias. Hay varios tipos:

Macroconidias, con forma de canoa, hialinas y septadas. La celula apical

es alargada y la basal tiene forma de pie. Se producen en sucesion

55

basipetal a partir de las monofialides. Tambien pueden ser producidas en

esporodoquias, que pueden tener monofialides o polifialides. En
ocasiones recuerdan a un racimo de platanos. Su morfologfa es la clave
de la identificacion de las distintas especies, ya que su forma es
relativamente constante y estable cuando el hongo crece en substratos
naturales y condiciones estandar.
S Microconidias, son pequenas, generalmente unicelulares y con
forma variable (ovoides, elipsoidales, subglobosas, piriformes, etc.).
Ocasionalmente tienen un tabique y la base puede ser redondeada,
apiculada o truncada. Se producen en el micelio aereo a partir de
monofialides o polifialides. Se pueden ver aisladas, en masas o en
cadenas. La forma en la que son producidas se observa mejor en
un medio con substrato natural como el agar-clavel.
S Clamidosporas, se originan por modificacion de un segmento de la
hifa. Tienen pared gruesa, lisa o rugosa. Se observan aisladas, en
parejas, en grupos o en cadenas. Son formas de resistencia ante
ambientes adversos que garantizan la propagacion y supervivencia
del hongo.
S Mesoconidias. Son otro tipo de conidias que tienen forma y tamano
similar a las macroconidias pero les falta la celula basal en forma
de pie. Pueden ser rectas. Se producen siempre en polifialides y
son individuales. Nunca forman masas mucosas. o Esporodoquia.
Es una masa de conidioforos cortos y estrechamente ramificados
que nacen directamente de una marana de hifas. Se producen mas
frecuentemente en la naturaleza que en los cultivos de laboratorio.
Esclerotia. Es una masa de celulas dura (difrcil de aplastar entre porta y cubre) e
inactiva bajo condiciones ambientales desfavorables.
Estroma. Es una estructura vegetativa compacta dentro de la que se desarrollan
cuerpos de fructificacion

Microscopia de Fusarium sp.

Cultivo de Fusarium sp. en agar

Saboureaud

Se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza sobreviviendo de manera

saprofita en el suelo y en residuos organicos con el potencial de invadir tejidos
vegetales. Entre sus caractensticas particulares, se encuentran la formacion de
micelio aereo carente de septos y la produccion de esporangioforos que
presentan en sus puntas esporangios esfericos donde se alojan las esporangios
oras, las cuales muestran diferentes formas: globosas, elipsoidales y angulares
con superficies lisas o estnas distintivas (Hernandez-Lauzardo et al., 2006;
Schipper, 1984). Las esporas de R. stolonifer pueden sobrevivir largos penodos
sin agua y soportar temperaturas elevadas, germinando sobre tejidos vegetales
danados y generando rapidamente la maceracion de los tejidos y la pudricion de
los frutos
R. stolonifer puede sobrevivir durante meses en los suelos, sus esporas se
diseminan en el aire y al encontrar las condiciones favorables germinan y se
desarrollan. Los frutos maduros y danados son mas susceptibles a la infeccion;
se ha observado una alta correlacion entre el numero de esporas y la incidencia
de la enfermedad
F, 2. Caracteristicas morfologicas del genero Rhizopus
Hongo filamentoso que presenta esporangioforos sin ramificar (de hasta 2 mm x
20 pm), de color pardo oscuro que nace de un nudo de rizoides bien
desarrollados Esporangios esfericos
negros (de hasta 275 pm de diametro)
con
columela
Esporangiosporas
negras de 8 a 15 pm. Abundantes
rizoides y zigosporas esfericas de
pared gruesa, desnuda (de hasta 200
pm de diametro). Clamidosporas
ausentes. (4)
Colonias de crecimiento rapido
(cubren
practicamente
toda
la
superficie de la placa en tres dfas a
25 C) de aspecto consistente, con
denso micelio aereo, algodonosas, al
principio blancas, despues gris oscuras (micelio rojizo, grisaceo o marron) (Figura
72). Se reconoce facilmente por sus espolones hialinos o parduzcos, sus rizoides
numerosos y pardos y sus esporangios negros y lustrosos (brillantes).

Las especies de Rhizopus producen esporas asexuales y sexuales. Las

esporangiosporas asexuales se producen dentro de una estructura aguzada, el
esporangium, y son geneticamente identicas a su padre. En Rhizopus, el
esporangio es soportado por una gran columela apofisada, y el esporangioforo
asoma entre rizpodes distintivos. Zigosporas negras se producen despues de dos
fusiones compatibles de micelios durante la reproduccion sexual. Y hacen
colonias que pueden ser geneticamente diferentes de sus padres.
Algunas spp. de Rizopus son agentes oportunistas de zigomicosis humana.
Pueden causar serias (y con frecuencia mortales) infecciones en humanos y en
animales debido a su rapido crecimiento a relativamente altas temperaturas.
Algunas especies son patogenos vegetales. Dos son usados en fermentacion:
Rhizopus oligosporus, en la produccion de tempeh, un alimento fermentado
derivado de grano de soja; R. oryzae se usa en la produccion de bebidas
alcoholicas, en partes de Asia y de Africa. Hongo filamentoso que presenta
esporangioforos sin ramificar (de hasta 2 mm x 20 pm), de color pardo oscuro
que nacen de un gran nudo de rizoides bien desarrollados. Esporangios esfericos
negros (de hasta 275 pm de diametro) con columela. Esporangiosporas negras
de 8 a 15 pm. Abundantes rizoides y zigosporas esfericas de pared gruesa,
desnuda (de hasta 200 pm de diametro). Clamidosporas ausentes. Colonias de
crecimiento rapido (cubren practicamente toda la superficie de la placa en tres
dfas a 25 C) de aspecto consistente, con denso micelio aereo, algodonosas, al
principio blancas, despues gris oscuras (micelio rojizo, grisaceo o marron Se
reconoce facilmente por sus espolones hialinos o parduzcos, sus rizoides
numerosos y pardos y sus esporangios negros y lustrosos (brillantes).

F. 3. Ciclo de vida del genero Rhizopus

El ciclo de vida del genero Rhizopus que se muestra en la figura da inicio cuando
las esporas asexuales son liberadas por el esporangio y transportadas por el
aire.(1)
La reproduccion sexual ocurre cuando hifas de diferentes tipos se unen
formando un gametangio el cual da lugar al cigoto. El cigoto sufre meiosis y
germina produciendo un nuevo esporangio (1).

eproauccion
asexua
por
esporas (tipo
)

Esporangioj
Reproduccidn asexua
por esporas (tipo +)

Esporangio
s

Rcproduccion

asexua
l

Esporangioforo
Esporangiosporas
Plasmogamia

Esporangi6foro

Gametangios

Bnonp
gioi

Haploidc

aooeporangi
joven
o

Micelio
Germinacion
Zigosporangio
maduro

Estolon

Ciamctangios

Progametangios'
Nuclei)

Meioai
(durante la
germinacion)

Haploidc
Fecundacion
Rcproduccion sexual

ZaOBWIttgKI
con nucleos
diploides

Diploidc

N lid cos
diploidc

F. 4. Caracteristicas utilizadas en la identificacion de especies

Rhizopus stolonifer es uno de los mucorales mas frecuentes y tiene una
distribucion amplia en todo el planeta. Su temperatura de crecimiento va desde
los 10 hasta los 33 C, con una temperatura optima de 25 C. Se encuentra con
frecuencia en suelos con arena, en el compost, en el polvo de las casas, en la
pulpa de la madera, estiercol, panales de abejas, nidos y plumas de aves y en
diferentes frutos y semillas. Las esporas de estos hongos no son abundantes en
el aire libre, aunque su frecuencia aumenta en lugares donde hay humedad y se
acumula vegetacion muerta.
La exposicion a concentraciones elevadas de esporangiosporas de Rhizopus se
ha descrito como causa de alveolitis alergica extrfnseca (pulmon de serrador) en
serrerfas suecas. Se ha observado una pequena proporcion de pacientes con
reactividad cutanea a Rhizopus stolonifer. Puede ser un patogeno oportunista en
personas inmunosuprimidas y se han descrito casos de micosis rinocerebrales en
diabeticos

F.5. Patogenia
La infeccion se adquiere por inhalacion de esporas, las que colonizan los senos
paranasales y el nasofarinx; ocasionalmente se puede adquirir por ingestion

inadvertida o inoculacion cutanea de esporas. No se ha documentado

transmision persona a persona. Estos hongos muestran alta afinidad por las
zonas aireadas del cuerpo, por su metabolismo aerobico; ello explicana, en parte,
su predileccion por el tracto respiratorio y su afinidad por las arterias.
Entre los factores que aparecen constantemente citados como favorecedores de
la enfermedad estan: la acidosis metabolica, la cetoacidosis diabetica y el uso de
desferoxamina; condiciones todas en que se produce un incremento del ion Fe +++
libre en el plasma que, como fuera senalado, actua como factor estimulante del
crecimiento y multiplicacion de los hongos de esta familia. En la acidosis
metabolica y diabetes descompensada, la disminucion del pH permite la
liberacion del Fe+++ acoplado a la transferrina plasmatica. Tambien se ha
invocado para explicar la mayor incidencia de esta enfermedad durante episodios
de cetoacidosis diabetica, la presencia de una enzima ketoreductasa en el
hongo, enzima que permitina la utilizacion de los cuerpos cetonicos circulantes
durante la descompensacion diabetica-A su vez, la desferoxamina, utilizada
como agente quelante del Fe+++ en sujetos que tienen depositos tisulares
patologicos del metal (por ejemplo pacientes con hemocromatosis,
politransfundidos o hemodializados), desprende y captura este Fe +++ para
eliminarlo por vfa fecal y urinaria, lo que expone al paciente colonizado a
desarrollar enfermedad. Ademas el hongo es capaz de utilizar la desferoxamina
como un sideroforo en su propio beneficio incrementando su viabilidad. No se
han descrito toxinas propias para este grupo de hongos.(11)
La capacidad fagodtica de neutrofilos y macrofagos es un factor defensivo
primordial contra la enfermedad; asf, en personas con neutropenia prolongada se
facilita la invasion de mucosas y tejidos. Los macrofagos alveolares inhiben
tambien la esporulacion habiendose comprobado que en los pacientes con
cetoacidosis diabetica este mecanismo defensivo esta inhibido. Por otra parte, en
sujetos con deficiencias del sistema inmune celular (por ejemplo linfomas), existe
mayor susceptibilidad que en la poblacion general para contraer mucormicosis;
no se conoce bien como la inmunidad celular protege contra la invasion por estos
hongos.
La mucormicosis ocasiona inflamacion aguda o cronica de los tejidos. Las hifas
invaden los tejidos y especialmente las paredes de los vasos sangumeos y su
lumen "en busca de oxfgeno", con propension a producir trombosis y necrosis;
ademas, del foco primario se pueden desprender embolos septicos hacia
cualquier parte del organismo En la forma rinocerebral la enfermedad puede
progresar hacia el cerebro a lo largo de las rafces nerviosas, o por extension
directa, a traves del fondo de la orbita. El traumatismo de piel y mucosas es un
factor casi constante en los reportes de infecciones cutaneas, de la vfa
respiratoria alta e intestinal.(16)

Otras enfermedades
y/o condiciones que
se han asociado con
mucormicosis son
leucemia en fase de
neutropenia
prolongada, linfoma
y
sfndrome
mielodisplasico
, tratamiento
inmunosupresor,
terapia
corticoesteroidal,
trasplante
de
organos solidos y de
precursores
hematopoyeticos,
pacientes quemados
(en los que mucor
generalmente compromete la piel), prematurez e infeccion por VIH

F. 6. Manifestaciones cilnicas
Se describen seis formas clfnicas de mucormicosis: cutanea, gastrointestinal,
puimonar, rinocerebrai, diseminada y una forma misceianea, que engloba
localizaciones como endocarditis, miocarditis, meningitis, absceso cerebral,
endoftalmitis, cistitis, peritonitis, osteomielitis, artritis, miositis y pielonefritis.

En ninos se han descrito principalmente las formas cutanea e intestinal en

neonatos y las formas pulmonar y rinocerebral en pacientes diabeticos e
inmunocomprometidos.(15)

Mucormicosis cutanea primaria

Bajo el concepto de primario se excluyen las infecciones metastasicas de piel.
Se han descrito dos formas de presentacion: superficial y gangrenosa o
subcutanea.
Mucormicosis
superficial.
Se presenta en pacientes
inmunocompetentes, en quienes un traumatismo facilita la penetracion del
hongo a traves de la piel, donde se replica en forma lenta causando un
area

de necrosis relativamente circunscrita; se inicia como vesfculas o pustulas

que pronto se transforman en ulceras o escaras. Se ha descrito en
neonatos con venopunciones, cateteres umbilicales intravasculares, en
asociacion con uso de monitores cutaneos, en pacientes quemados,
heridas operatorias e intubacion endotraqueal prolongada. En estos casos
la humedad local y el calor ambiental propio del medio hospitalario
favorecen la proliferacion del hongo.
Mucormicosis gangrenosa o subcutanea. Se inicia en forma semejante a la
anterior pero la ulceracion y la extension regional son rapidas
comprometiendo musculos, tendones y hueso; pueden diseminarse por
via sangufnea teniendo un curso fulminante. Se ha descrito
preferentemente en pacientes inmunocomprometidos y diabeticos1.
Mucormicosis gastrointestinal
Se presenta en pacientes desnutridos, aclorhfdricos o inmunocomprometidos.
Puede manifestarse como un cuadro de abdomen agudo de inicio insidioso y en
el examen ffsico o por imagenologfa percibirse una masa abdominal; se ha
descrito invasion de otras vfsceras y perforacion intestinal con peritonitis
secundaria. La mucormicosis gastrointestinal deberfa plantearse en neonatos con
enterocolitis necrosante que no mejora con las medidas medicas y quirurgicas
habituales.(11)
Mucormicosis pulmonar
Es mas frecuente en pacientes con las siguientes condiciones clfnicas:
inmunocomprometidos, neoplasias hematologicas o trasplantes de precursores
hematopoyeticos y neutropenia severa, corticoterapia prolongada. Menos
frecuentemente se ha reportado en pacientes diabeticos, sometidos a trasplante
renal, infectados por VIH, e incluso en huespedes inmunocompetentes. La
zigomicosis pulmonar puede ocurrir tambien como parte de una infeccion
diseminada y raras veces despues de una enfermedad rinocerebral. Se produce
por inhalacion de esporas del medio ambiente, el hongo suele colonizar
inicialmente las cavidades perinasales en forma silenciosa y luego descender
hacia el tracto respiratorio inferior. Allf dana las paredes bronquiales, el tejido
peribronquial y provoca trombosis e infarto pulmonar, determinando extensa
necrosis e invasion del tejido vascular, infartos con diseminacion al resto de los
pulmones y tejidos extra pulmonares; puede invadir por vecindad al pericardio,
miocardio, vena cava superior y diafragma, lo que explica la hemoptisis masiva,
manifestacion caracterfstica de esta enfermedad.(15)

Las manifestaciones clfnicas son inespecfficas, fiebre moderada, tos productiva,

hemoptisis, disnea y dolor toracico.

Existe una amplia gama de presentaciones morfologicas: nodulo solitario,

consolidacion lobar, segmentaria, cavitaria o bronconeumoda, absceso pulmonar,
mediastinitis fibrosante, obstruccion de vena cava superior y linfadenopatfa
cervical. La radiografia de torax muestra infiltrados pulmonares o masas
nodulares, que se localizan de preferencia en los lobulos superiores. Puede
tambien mostrar consolidacion y lesiones cavitarias. La presencia del signo de
"aire en creciente" (aire entre una lesion parenquimatosa radiodensa y tejido
pulmonar normal) parece asociarse significativamente a un riesgo mayor de
hemoptisis masiva. Las efusiones pleurales son infrecuentes, (6-8%).(11)
El diagnostico de zigomicosis pulmonar se basa frecuentemente en la morfologfa
de los elementos micoticos debido al bajo rendimiento de los cultivos, siendo la
muestra obtenida por fibrobroncoscopia con lavado broncoalveolar la mas
utilizada. El examen histopatologico de biopsias o piezas quirurgicas confirma el
diagnostico en la mayona de los casos y permite diferenciar zigomicosis de otras
infecciones fungicas.(11)

La letalidad en series que incluyen ninos es alrededor de 50%, teniendo mejor

pronostico los pacientes tratados en forma combinada medico_ quirurgica.
Mucormicosis rinocerebral
En la poblacion adulta es mas frecuente en pacientes diabeticos mal
controlados, con cetoacidosis- En ninos la pesquisa de reportes en la literatura
medica es escasfsima y en su mayona corresponden a pacientes con cancer.

En esta localizacion se comprometen los vasos y nervios orbitarios y,

eventualmente, los senos cavernosos. La infeccion se extiende a lo largo de las
estructuras vasculares y neuronales e infiltra las paredes de los vasos
sangumeos. La infeccion horada las paredes oseas de las cavidades
paranasales (CPN), extendiendose hacia la orbita y el area retro orbitaria,
pudiendo comprometer el cerebro. Es comun la invasion de nervios, vasos
sangumeos, cartflago, hueso y meninges y la trombosis por invasion directa del
hongo. En etapas avanzadas de la infeccion se puede producir trombosis del
seno cavernoso, arteria carotida y vena yugular.(11)

El termino rinocerebral, que implica compromiso de senos paranasales, se

emplea cuando se detecta compromiso de este espacio, haya ocurrido o no la
invasion del SNC, por el eminente riesgo de que asf ocurra.

Los smtomas iniciales son inespedficos lo que dificulta el diagnostico precoz1.

Las formas mas frecuentes de presentacion son: dolor de la cara (maxilar,
periorbitario

o retro orbitario), rinorrea purulenta, epistaxis e hipoestesia nasal; cefalea y

letargia en casos avanzados. Son signos acompanantes la vision borrosa,
diplopia, proptosis, amaurosis uni o bilateral, ulcera del paladar y convulsiones o
alteracion de conciencia1. Una vez instalado el cuadro, se describe una trfada
clasica constituida por: ceguera, oftalmoplejfa y celulitis periorbitaria1.

Al examen ffsico el paladar y los cornetes pueden tener un aspecto gris o

eritematoso, compromiso que puede progresar hacia la formacion de una masa
necrotica o ulceracion; pese a ello, la mucosa sangra muy escasamente por la
trombosis vascular antes referida. El compromiso neurologico se expresa como
paralisis de los nervios craneanos: II, III, IV y VII y compromiso de conciencia en
grado variable, desde letargia a coma, causado por el edema cerebral y
compromiso vascular.(11)

La radiograffa de cavidades paranasales (CPN) revela velamiento de los senos,

pudiendo evidenciarse un nivel hidroaereo. La TAC confirma el compromiso
sinusal y puede documentar la destruccion osea e invasion de la orbita. Ademas
puede revelar trombosis del seno cavernoso, cerebritis y edema cerebral. La RM
muestra estas alteraciones en forma mas precoz que la TAC teniendo mayor
sensibilidad para definir el compromiso vascular.El LCR habitualmente es normal.
Las complicaciones son: trombosis de vasos intracraneanos (seno cavernoso,
arteria carotida interna, vena yugular); infarto y necrosis de tejido cerebral;
secuelas esteticas post cirugfa y neurologica (16)

2. DEFINICION Y DELIMITACION DEL PROBLEMA

2.1.

Justificacion
Los hongos son capaces de causar infecciones muy variadas que van
desde afecciones leves superficiales hasta infecciones fungicas invasoras
(IFIs) que afectan a organos profundos y que comprometen la vida de los
pacientes.
Es frecuente observar a pacientes inmunodeprimidos infectados por
hongos como Candida spp. o Aspergillus spp.; sin embargo, otros
pacientes con menores grados de inmunosupresion como aquellos
portadores de cateteres intravasculares o enfermos que reciben
corticoides por diversas razones son tambien proclives a padecer IFIs.
(Dermatol Rev Mex 2014;58:134-141.)
Tomando en cuenta lo anterior, se decide desarrollar el proyecto de
investigacion, como una necesidad al problema, que siendo los futuros
medicos del Peru, debemos saber sobre los diversos metodos de cultivos
de hongos oportunistas, y asf conocer sus caracterfsticas, ya que ellos
son los responsables afectando a personas inmunodeprimidas en la
sociedad.

2.2.

formulacion del problema cientifico

Reconocimiento y descripcion microscopica de los tipos de hongos
encontrados en el laboratorio de practica de MICROBIOLOGIA
utilizando la tecnica del microcultivo durante el periodo Abril 22 (2015) Junio 24 (2015)

2.3.

pregunta del trabajo de investigacion

I Que hongos ambientales se encuentran en el laboratorio de microbiologfa

de la Universidad Privada Antenor Orrego , periodo 2015 I ?
3. OBJETIVOS
3.1.

General
Identificar mediante microcultivos la presencia de hongos ambientales
encontrados en el laboratorio de microbiologfa , UPAO , periodo 2015 I

3.2.

Especificos
Describir la morfologfa macroscopica de cada tipo de hongo
encontrado.

Describir la morfologfa microscopica de cada tipo de hongos

encontrado.

Describir mecanismos de transmision de los hongos

Comparar y descartar los microcultivos de otros reinos : algas ,

bacterias , virus

4. HIPOTESIS
Hipotesis nula:

No es factible hacer microcultivos de hongos ambientales dentro

del laboratorio de microbiologfa de la Universidad Privada Antenor
Orrego de Trujillo 2015

Hipotesis verdadera:
Si factible identificar y aislar los hongos ambientales mediante
microcultivos dentro del laboratorio de microbiologfa de la
Universidad Privada Antenor Orrego de Trujillo 2015

5. MATERIALES Y METODOS
5.1.
Poblacion diana

5.2.

El estudio se llevo a cabo en el laboratorio de microbiologfa de la

Universidad Privada Antenor Orrego - Trujillo, departamento de La
Libertad, La poblacion asegurada que en lugares de laboratorio se
crean hongos ambientales, pasando a conformar la muestra por
conveniencia al estudio, el total de usuarios que acuden a los
laboratorios cuyo diagnostico es el de una enfermedad infecciosa
respiratoria y que cumplan los criterios de inclusion para el grupo
de estudio en el lapso de cuatro meses.
Poblacion de estudio

Hongos ambientales que cumplan con los criterios de inclusion y

exclusion

5.3
.

Criterios de inclusion:

Laboratorio con las medidas de bioseguridad adecuadas.

Los materiales utilizados para el cultivo de hongos, deben estar
previamente esterilizados.
Asesor especializado, para la orientacion de cultivo de hongos
ambientales del proyecto de investigacion.
Alumnos del proyecto de investigacion, con previo conocimiento
para evitar errores en el cultivo de hongos.
Hongos hallados en el ambiente dentro del laboratorio de
microbiologfa de la Universidad Privada Antenor Orrego - Trujillo
Area segura en la que puedan crecer los hongos, sin intervencion
de otro personal que no sea los alumnos y el asesor del proyecto
de investigacion, para evitar que se contamine el cultivo.

5.4.

Criterios de exclusion:

Muestras contaminadas por otros microorganismos ambientales.

Muestras recolectadas en placas sin esterilizar.
Muestras sin medio nutritivo, necesaria para el crecimiento de
hongos.
Mal control en la aplicacion de agua destilada diariamente.
Alumnos con problemas de salud, como un bajo recuento de
leucocitos necesario para combatir cualquier infeccion.
Laboratorio que no cuente con medidas de bioseguridad
necesarias para el microcultivo de estos hongos.

Microorganismo de otros reinos algas , bacterias y virus

5.5 Muestra
5.5.1TIPO DE MUESTREO: Aleatorio
5.5.2. UNIDAD DE ANALISIS Y DE MUESTREO: laboratorio de
microbiologfa que presentan hongos ambientales cumplen con los
criterios de inclusion y exclusion
5.5.3.

TAMANO
MUESTRAL: DISENO
TRANSVERSAL

DESCRIPTIVO,
aplicamos la formula:

N=Z2~pqd2

N=1.642 x 0.30 x 0.700.05

N= 9
N: Tamano poblacional
Z: Grado de confiabilidad
p: Proporcion de la poblacion
q: 1 - p

6. TECNICA DE ESTUDIO
La tecnica de recoleccion de datos es de tipo fuente secundaria por medio de
extraccion de muestras
6.1.

Procesamiento y analisis datos:

Los datos registrados por medio del instrumento de recoleccion

de datos seran procesados utilizando el paquete estadfstico
SPSS V 22.0.

6.2.

Estadistica descriptiva:

Para variables cuantitativas se usara formulas matematicas. En

cuanto a las medidas de tendencia central se calculara la media,
mediana y la moda. En cuanto a las medidas de variabilidad
calcularemos el rango, la desviacion estandar o varianza. Para
variables cualitativas como en el caso de la distribucion de
frecuencias realizaremos nuestros analisis de datos mediante
graficas circulares.

Para la presentacion final de resultados se hara uso de

herramientas como graficas circulares y cuadros simples.

6.3.

Operacionalizacion de las variables

Variable dependiente: MICROCULTIVO DE HONGOS

AMBIENTALES

6.4.

Definiciones operacionales
1. Microcultivo: Un microcultivo es un cultivo con muy poca cantidad
del medio que permite la observacion de las estructuras
microscopicas de los hongos, en particular las esporas asexuales,
sin alteracion de las mismas. Para realizarlo se corta y dispone un
cubo de agar esteril sobre un portaobjetos. En los laterales del agar

se siembra el hongo a estudiar, se pone el bloque de agar un

cubreobjetos, y se coloca todo ello en una placa de petri en camara
humeda. Tras incubacion de unos dfas, segun el hongo, para su
posterior observacion al microscopio.

2. Hongos ambientales: Son organismos microscopicos de

distribucion universal, dispersos en el aire, la superficie terrestre, y
aguas marinas, lacustres yfluviales, desde los helados casquetes
polares hasta los aridos desiertos de nuestro planeta, que estan
frecuentemente en contacto, para beneficio o perjuicio, con el
hombre, animales y vegetales.

3. Laboratorio de microbiologfa: Un laboratorio de Microbiologfa es un

lugar habilitado para manejar y estudiar microorganismos.

Los procedimientos deben realizarse de acuerdo con los estandares

tecnicos y de seguridad propios de un laboratorio de Microbiologfa.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos
presentes en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones
para evitar contaminaciones que den lugar a resultados erroneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaucion por su potencial
patogenicidad.

7. ANTECEDENTES DEL MICROCULTIVO

Se hiso las observaciones de las diferentes placas y se encontro lo
siguiente :
PLACA 5 :
Presencia de estructuras propias de hongos sistemicos
Hifas que se fragmentaban en diferentes tamanos y
formas Esporas en todo el campo
Este tipo de hongo es peligroso , por ende , nuestro asesor
nos sugirio que no se trabaje con este hongo debido al riesgo
que puede ocasionar en nuestra salud

Este tipo de hongo debe trabajarse en un laboratorio con

bioseguridad nivel III

PLACA 2 :
Se sospecha presencia de bacterias ( bacilos )
No se trabajara debido a que la placa esta contaminada

PLACA 4 :
Las estructras que presentan no son suficientes para su
identificacion ademas de ausencia de fragmentacionn de micelos
Se sospecha de placa contaminada debido ala presencia de
elementos formes dentro de la placa y coloracion no identificada

8. PROCEDIMIENTO
Proyecto de investiqacion : Microcultivo de hongos ambientales en el
laboratorio de microbiologfa de la Universidad Privada Antenor Orrego
- marzo 2015
1. PREPARACION DEL AGAR SABOROU:
Se le emplea para el aislamiento primario, identificacion y
mantenimiento de la mayorfa de los hongos patogenos. Para
mejorar la inhibicion bacteriana se puede adicionar clorafenicol 0,5
g/l
Pesar :
Peptona------------------10g
Glucosa------------------20g

Agar-----------------------20 g

Agua destilada 1000ml Disolver los ingredientes en el

agua destilada Controlar el PH a 5,6
Esterilizar a 121c por 15 minutos .
Verter en tubos o placas

2. PROCEDIMIENTO
1 ASEPSIA DE LA ZONA DE TRABAJO :
Despejar el area de trabajo para su mejor procedimiento.
Limpiar con detergente y algodon humedo.
Luego pasar con alcohol y algodon , previamente
protegidos.
Volver a pasar con alcohol y algodon.
2. CAPTURA POR SEDIMENTACION
2.1.

Autoclave (area de trabajo). Hora :9:20 am

2.2.

Gabinete donde esta ubicado el material del proyecto.

Hora: 9:21 am
2.3.

Cajon de la mesa de trabajo del Dr. Nicanor (staff de

docentes) hora : 9:25 am

2.4.

Staff de personal tecnico hora : 9:23 am

2.5 Mesa de trabajo del grupo hora :9:25 am

2.6 Refrigerador hora 9:26 am
3. ROTULACION DE PLACAS:
Considerando:

Fecha y lugar

Ambiente :
a. Abierto
b. cerrado

Hora

N de trabajo

3. ARMADO DE PLACAS
1. Se ordena el area de trabajo , con los siguientes materiales : placas
Petri Laminas porta objetos Laminillas cubreobjetos Varillas de vidrio
en forma de V Papel filtro ( previamente cortado al tamano de la placa

Papel bulki ( previamente cortado al tamano de la laminilla

cubreojeto )
2. Dentro de cada placa se ingresan los aditamentos segun el
siguiente orden:
Papel filtro - varilla de vidrio - lamina portaobjetos laminilla cubrobjetos ( previamente envuelta en papel )
3. Se procede al envolvimiento de las placas en papel bulki para
su psoterior esterilizacion
4. El numero de placas envueltas , son alrededor de 9 ( nueve )
4. ESTEILIZACION
Luego del armado de placas , se procede a esterilizar en horno
MEMMERT a temperatura 180C , por alrededor de 2 horas
5. SIEMBRA
1. Despejar el area de trabajo
2. Ordenar lo que se necesita
3. Tener encuenta las medidas de bioseguridad

Guantes

Anteojos

Mascarillas

Gorro

4. Sacar el estilete con mucho cuidado.

5. Esterilizar el mango con alcohol en el mechero.
6. Sacar el hongo la muestra con el estilete.
7. Colocar la muestra a la placa Petri (previamente
esterilizada).
8. Sacar el agar previamente preparado con mucho cuidado
y colocarlo en el porta objeto.
9. Esterilizar previamente al asa de bacteriologica con
alcohol al mechero.
10. Sacar la muestra con la asa de bacteriologica y colocarlo
en la porta objeto encima del agar en diferentes puntos.
11. Colocar el cubre objeto con mucho cuidado.

12. Cerrar la placa Petri con mucho cuidado y dejar en las

gavetas acondicionadas
Para estos pasos se recomienda mucha tranquilidad, concentracion y silencio
MICROCULTIVO EN CAMARA HUMEDA (METODO MAH)
Para esto se debe acondicionar un sistema de camara humeda, el cual
consistira de una placa Petri esteril que en su interior contenga una gaza
esteril o papel filtro esteril y una varilla en forma de V, que servira de apoyo
para la lamina portaobjetos, una lamina cubre objetos. Sobre la lamina
portaobjetos se colocara un pequeno trozo de agar Sabouraud en estado
solido, para esto se prepara una placa Petri con agar Sabouraud de 1mm de
altura luego este es cortado con un bisturf esteril en forma de cuadrado de
1cm x 1cm y con la hoja del bisturf colocarla sobre la lamina portaobjetos.
A partir del medio de cultivo, utilizando una aguja de kolle o estilete esteril,
picas una colonia y extraer una fraccion minima de la colonia, en forma
aseptica sembrar la fraccion obtenida de las muestras previamente obtenidas
sobre las 4 esquinas de la porcion de agar dispuesta en la lamina
portaobjetos de la camara humeda luego de lo cuan con la ayuda de una
pinza esteril cubrir cuidadosamente la preparacion con la lamina cubre
objetos. Finalizando el armado del sistema se procede a humedecer el papel
filtro o la gaza esteril de la placa con agua destilada esteril para proporcionar
una adecuada humedad evitando que se seque el medio de cultivo debido a
lo prolongado de la incubacion.
Se procede a Incubar la placa a temperatura ambiente (20 - 25 C) luego de
pasado 5 dfas cuando el crecimiento sobre el bloque sea evidente, se recoge
el cubreobjetos con una pinza esteril y se coloca sobre un portaobjetos donde
previamente se ha colocado una gota de azul de lactofenol para darle
coloracion y una mejor observacion de las estructuras cultivadas
Si se desea, se sella la preparacion para su mejor conservacion y se observa
al microscopio.

Este metodo se utiliza para observar en la claridad del tubo ambas caras de la
siembra, haz y enves, lo que nos permite diferenciar e identificar al hongo
cultivado y sus caractensticas propias; tales como: textura, color, y forma.
Como primer paso se procedio a tomar las medidas de bioseguridad necesarias
para el proceso luego se llevaron a esterilizar los tubos con sus respectivos
tarugos de algodon para que no se contamine la muestra y crezca sin ninguna
complicacion.
Se procedio a calentar el medio de cultivo, el agar Sabouraud, a bano mana para
llevarlo a una temperatura optima en la que el medio se encuentre en un estado
lfquido para asf poder servirlo en los tubos y proceder con la siembra. Luego de
obtener el agar en un medio lfquido se sirve en los tubos y estos son llevados
con la ayuda de una superficie inclinada a su reposo para que se enfnen y se
encuentren en medio solido, luego de encontrarse en consistencia solida se
procedera con la siembra procedente de las muestras previamente obtenidas.
Con la ayuda de el mechero se esteriliza el area de trabajo (5-10cm) para evitar
la contaminacion de la muestra en el momento del sembrado.
Al igual que en el metodo anterior se utiliza una de kolle o estilete esteril para la
recoleccion, trabajando en conjunto con el mechero se apertura la placa Petri con
la muestra la cual sera inoculada en el tubo de ensayo previamente preparado
con lo explicado anteriormente, siempre trabajando en el campo esteril
comprendido alrededor del mechero.
Posterior del sembrado en los tubos de ensayo se lleva a incubacion a
temperatura ambiente y con el pasar de los dfas se va observando el crecimiento
de la muestra para su observacion e identificacion. (ANEXO 2)

Se utiliza:

1PlacaPetriesteril
1Lamina
porta objetos
1Lamina
cubre objetos
1Varilladevidrio
Gasa esteril humedecida

Agar Sabouraud

Con la ayuda de un bisturf

se secciona una porcion del
agar de
aproximadamente 1 ml x
1 ml
Se coloca en la lamina
portaobjetos

En el sistema completo nos

permite ya la adicion de la
muestra para el cultivo
De la muestra se extirpa una
porcion en forma de
pinchazo con ayuda de un
estilete esteril que tiene una
punta en angulo recto

 Se inocula la muestra en los vertices de nuestra

porcion de Agar Sabouraud y se deja incubar
Muestra obtenida

Muestra en sistema humedo

El metodo de siembra a emplear dependera de los objetivos que se pretendan

alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del
microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta
indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del
metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxfgeno, los
metodos de siembra mas empleados son los siguientes:
1.
2.
3.
4.

Siembra por estrfas.

Siembra por puncion.
Siembra volumetrica.
Siembra masiva.

Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicron, deben ser

calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo, antes y despues de
realizar la siembra, con el objetivo de destruir a los microorganismos
contaminantes de la superficie del instrumento.
Con independencia del tipo de medio y el metodo de siembra a emplear esta
debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor
emanado reduce el numero de microorganismos presentes en sus
inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder
aseptico.
Siembra por estrfas
Este metodo de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo
solidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en
forma de cuna.(Slam)
Instrumentos de siembra a emplear.
Para la siembra por estrfa se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas
ocasiones, como explicaremos mas adelante, se utilizan ambos instrumentos en
la misma siembra.
Procedimientos
Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicron.
1. Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lapiz
para escribir.
2. Introduzca el asa de alambre de platino o nicron directamente en la zona
de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo.
Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para
lograr el mismo efecto.
3. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el
objetivo de que el asa se enfrfe.

4. Con el asa esteril y frfa tome el volumen o fragmento de la muestra que

sera sembrado y trasladelo de inmediato para el medio del cultivo
seleccionado.
5. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de
cuna en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo:
a. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porcion
inferior.
b. Con el dedo menique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el
tapon de algodon o la tapa de rosca y retengala(no colocar el tapon o
la tapa sobre la mesa de trabajo)
c. Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasandola una o dos
veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por
incineracion, los microorganismos contaminantes que se encuentran
en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta accion calorica,
provoca ademas una conveccion del movimiento del oxfgeno presente
en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo
cual favorece que decrezca el riesgo de contaminacion.
d. Introduzca el asa con el volumen o fraccion de la muestra en el tubo,
hasta el fondo de la cuna. A partir de este momento, la siembra puede
realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de
microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de
cultivo:

Fig. 119: Siembra microbiologica en medios de cultivos distribuidos en tubos de

ensayo: 1) y 2) Retirar el tapon del tubo; 3) Flamear la boca del tubo; 4)
Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 5)
Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo; 6) Taponar el
tubo.

Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la

cuna, trazando una lfnea longitudinal.
Deslizando el asa por la superficie de la cuna desde el fondo hacia arriba,
imprimiendole un movimiento de zigzag.
Motiando toda la superficie de la cuna con hisopo.
Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero
adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeno corte
longitudinal.

Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo

procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Fig. 120: Siembra en medios solidos en cunas (tubos de ensayo): a) Trazando

una lfnea perpendicular desde el fondo hacia arriba; b) Deslizando el
instrumento con el inoculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag; c)
Roturando el medio
Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa
de Petry, proceda de la siguiente manera:
a. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de
Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo
pulgar abra parcialmente la placa.

Fig. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo.

b. Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en
forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio
de toda la superficie.
c. Cierre la placa y gfrela varios cm, en contra de las manecillas del reloj,
procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento.

d. Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de

manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean
removidas para el segundo.
e. Repita esta operacion una o dos veces mas.

Fig. 122 : Metodo de siembra por estrias en medios de cultivo solidos distribuidos
En placas de Petri
f. Finalmente cierre la placa y coloquela sobre la mesa de trabajo boca
abajo. Cuando la muestra es tomada con hisopo.
1. Si la siembra se va a producir en una cuna de agar, se procede en forma
similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo.
2. Si la siembra se fuera a producir en medios solidos en placas, el primer
segmento se hace con el mismo hisopo con que se tomo la muestra y los
restantes se realizan con asa esteril, para lograr una diseminacion por
agotamiento, que posibilite el desarrollo aislado en los ultimos segmentos
del microorganismo en estudio. Otra variante es la diseminacion cruzada,
en este caso, en lugar de hacer un primer segmento en zig zig con el
hisopo, se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a
continuacion con el asa esteril se procede a deslizarse con un movimiento
ondulatorio sobre la "Z".

Fig. 123: Siembra por diseminacion cruzada: a) Trazar con el hisopo que
contiene el inoculo una "Z"en la superficie del medio; b) Completar la
siembra con un asa de platino esteril, imprimiendo movimientos
ondulatorios sobre la "Z"

Siembra por puncion

Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear sera la aguja de platino y el
medio de cultivo solido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y
la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se
utiliza el asa. La particularidad que tiene este metodo, es que la aguja (con el
inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.

Fig. 124: Siembra por puncion

Siembra volumetrica
Este metodo de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen
no puede ser predeterminado, en medio de cultivo solidos o lfquidos. Por
ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur,
no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala
de graduacion, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para
el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el
volumen que sera sembrado.
Siembra masiva
Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espatula de
Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espatula por
toda la superficie del medio de cultivo solido imprimiendo un movimiento en
espiral. La siembra masiva tambien se puede realizar con un hisopo grueso
embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la
superficie de una placa de agar.

Fig. 125: Siembra masiva con espatula de Drigalski

10. CONCLUSIONES

Los hongos se desarrollan con rapidez en la oscuridad debido a que

ningun factor impide su desarrollo , cumpliendo con el problema
planteado y la hipotesis

Gracias a este proyecto se logro observar mas de cerca las diferencias

microscopicas entre diversos hongos ambientales EN NUESTRO
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

En este proyecto de investigacion realizamos cultivos de hongos que

se encuentran en nuestro medio ambiente universitario, por lo que
diariamente estamos expuestos a ellos. Asf determinamos cuales son
los hongos y si ellos pueden influir en problemas de salud.

Gracias a este proyecto pudimos aprender a realizar una tecnica

sencilla de microcultivo de hongos ambientales y asi comprender aun
mejor cualrs son los beneficios de una buena bioseguridad en un
laboratorio de microbiologfa

La identificacion de los hongos se dieron en su mayorfa sobre las

mesas de trabajo de los estudiantes, esto se atribuye a diferentes
factores entre ellos a que es ahf donde se exponen las diferentes
muestras a ser estudiadas y asf estas pueden quedar contaminadas
por una mala manipulacion de dichas muestras, tambien se le atribuye
a la deficiente desinfeccion de las mesas de trabajo por parte del
personal de limpieza lo que al final representa un peligro latente para
los

estudiantes

que

dfa

dfa

estan

expuestos

dichos

microorganismos y que pueden representar una potencial amenaza.

Por medio de esta practica se lograron apreciar distintos tipos de

hongos, se manejaron las tecnicas de cultivo e identificacion de
hongos para su posterior estudio y de esta forma reconocer las
caracterfsticas

estructurales y morfologicas de los hongos ; asf mismo se puede

concluir que los microcultivos son la mejor tecnica de siembra si se
desea observar las estructuras de los hongos de una forma mas clara
y precisa ya que esta tecnica nos permitio tener una mayor claridad de
las formas que poseen los hongos. Por lo tanto es muy importante
conocer todas estas tecnicas si se desea realizar un estudio adecuado
de este tipo de microorganismos.

11. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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17. 17Hernandez Sampieri R.; Frenandez C.; Baptista P.; Metodologfa de la
Investigacion 5a ed. Mexico: McGraw-Hill

ANEXOS
ASESORIA : Dra. ARQUINO HUERTA , MARTHA

RECOLECCION DE DATOS :

ASEPSIA DEL LUGAR DE TRABAJO:

CAPTURA POR SEDIMENTACION:

AUTOCLAVE

GABINETE CON MATERIAL

DEL PROYECTO

CAJON DE LA MESA
DE TRABAJO
DR.
NICANOR

STAFF DEL
PERSONAL TECNICO

MESA DEL TRABAJO DEL

GRUPO

SIEMBRA

HIDRATACION DE LAS PLACAS SEMBRADAS

ANALISIS DE LAS PLACAS

MATERIALES DE TRABAJO