Biotecnologia y Bioingenieria

Ao 2010
Volmen 14 Nmero
1 Vol. 14 No. 1
BioTecnologa,
Ao 2010,
ISSN 0188-4786
COMIT EDITORIAL
Dra. Mara Luisa Villarreal Ortega

Presidenta
Dr. Sergio Snchez Esquivel

Editor en Jefe
Instituto de Investigaciones
Biomdicas, UNAM
Dr. Alfredo Martnez Jimnez

VicePresidente
Dr. Luis Bernardo Flores Cotera

CINVESTAV
Dra. Maricarmen Quirasco Baruch

Secretaria
Dr. Fernando Luis Garca Carreo

CIBNOR
Dra. Mara Soledad Crdova Aguilar

Tesorera
Dr. Mariano Gutirrez Rojas

UAMI
Dra. Ana Carmela Ramos Valdivia

Subsecretaria
Dra. Romina Rodrguez Sanoja

Instituto de Investigaciones
Biomdicas, UNAM
MESA DIRECTIVA
Dr. Francisco Javier Cervantes Carrillo

Vocal
I.A. Alaide Jimnez Serna
Vocal Estudiante
Dra. Sara Sols Pereira

Instituto Tecnolgico de Mrida
Dra. Elizabeth Langley McCarron
Instituto Nacional de Cancerologa
COORDINADOR EDITORIAL
DISEO GRAFICO E IMAGEN
Q.A. Ofelia Edith Carren Rodrguez
Lic. Nayeli Quinto (SODIO NET)

ADSCRIPCIONES Y PUBLICIDAD
FORMACION EDITORIAL

Tel: (55) 5849 5859
Email: smbiotec@yahoo.com.mx
ISSN 0188-4786, revista cuatrimestral publicada por la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y

Bioingeniera, A.C. incluida en PERIDICA, ndice de Revista Latinoamericanas en Ciencias (CICHUNAM). Certificado de Licitud de Ttulo en trmite y Certificado de Licitud de Contenido en trmite.
Reserva de derechos de Ttulo04-1999-082516265000-101. Los Conceptos que en ella aparecen son
responsabilidad exclusiva de los autores. Se prohbe la reproduccin total o parcial de su contenido
sin previa autorizacin por escrito del Comit editorial. Toda correspondencia deber enviarse a Km.
23.5 Carretera Federal Mxico-Cuernavaca, Av. Cipreses s/n, Col. San Andrs Totoltepec, C.P.
14400, Del. Tlalpan, Mxico, D.F. Tiraje 500 ejemplares.
BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1
Editorial
Instrucciones para autores
ARTCULOS
Cultivo Monoxnico Sumergido del Nematodo Entomopatgeno,

Steinernema carpocapsae CABA01, en Biorreactor airlift con
Recirculacin Interna
11
Tcnica de PCR Como Estrategia Biotecnolgica Para Deteccin de

Helicobacter pylori en Placa Dental
25
La Bionanotecnologa y otras Estrategias de Neuroproteccin para

la Enfermedad de Parkinson
37
EDITORIAL
Biotecnologa y Bioingeniera: Tiempo de decisiones y acciones
A lo largo de los siglos, la especie a la que pertenecemos ha desarrollado distintos
mtodos para asegurar su permanencia en el mundo, tal como lo conocemos al da
de hoy. En este sentido, hemos buscado fuentes de alimento, tanto animal como
vegetal, y domesticado especies para estos fines; hemos localizado y modificado
recursos hdricos en nuestro beneficio, as como explotado fuentes naturales de
energa y desarrollado aplicaciones para aprovechar otras originalmente no
disponibles en abundancia en nuestro entorno, entre otras acciones que han dejado
huella permanente de nuestros pasos en el planeta. Estas acciones han estado
relacionadas con importantes avances cientficos y tecnolgicos en todas las reas
del conocimiento humano, as como han sido acompaadas de innegables beneficios
para la gente como la disponibilidad de alimentos procesados, antibiticos, vacunas y
otros medicamentos; ahora contamos con diversas mquinas y dispositivos
inconcebibles hace unos cuantos aos, etc. No obstante, los riesgos inherentes a
nuestras acciones al buscar la supervivencia y prevalencia de la especie han sido
importantes, as como en algunos casos el uso de los conocimientos adquiridos han
sido muy cuestionables (v. gr. tecnologas con fines militares).
Especficamente, en cuanto a las acciones realizadas que implicaron/implican
consecuencias negativas importantes, se pueden mencionar algunos casos. Por
ejemplo, el establecimiento de asentamientos humanos ha sido frecuentemente
acompaado de deforestacin, cobertura de grandes superficies con cemento y
asfalto, uso de grandes cantidades de agua para alimentacin y servicios, y consumo
de combustibles fsiles, as como la generacin de cantidades industriales de
basura, lo cual ha ocasionado un serio problema de contaminacin del agua, aire y
suelo, y contribuido al calentamiento global del planeta, de acuerdo con distintos
reportes cientficos. Por otra parte, con relacin a la produccin agrcola
determinante para la autosuficiencia alimentaria, entre otros aspectos, ha existido un
abuso histrico bien documentado, referente al uso de sustancias sintetizadas
qumicamente con distintos fines (v. gr. fertilizantes, herbicidas, fungicidas,
insecticidas, rodenticidas, etc.) con el fin ltimo de garantizar altas productividades y
rendimientos en la agricultura moderna. Estas prcticas tambin han generado una
serie de problemas, ya que diversos estudios sugieren la correlacin entre
concentraciones de los principios activos usados con la aparicin de enfermedades
en nuestra especie, daos al medio ambiente, as como afectacin de cadenas
alimentarias. Sobre estos ltimos aspectos, especficamente sobre control de plagas
agrcolas, una alternativa viable parece ser el llamado manejo integrado de plagas
que a su vez combina distintas estrategias, siendo una de ellas el control biolgico de
plagas, que se refiere al uso de enemigos naturales para controlar poblaciones de
organismos que afectan nuestros cultivos. Slo a travs de la bsqueda e
EDITORIAL
implementacin de alternativas adecuadas y funcionales para cada problemtica que
nos afecta es como podremos asegurar la permanencia de nuestra especie en
armona con las diversas especies con las que cohabitamos en este mundo, lo cual
incluye desde organismos unicelulares microscpicos hasta los multicelulares ms
evolucionados y complejos.
Es a propsito de estas ilustraciones generales que los biotecnlogos mexicanos
podramos meditar una vez ms acerca de nuestro papel como integrantes de esta
sociedad: Qu investigamos?, Por qu y para qu investigamos lo que
investigamos?; en este sentido, Qu enseanzas dejamos a nuestros jvenes
colaboradores y futuros investigadores?, Qu importancia puede tener el autntico
trabajo en equipo?, Cules pueden ser los beneficios de los enfoques
multidisciplinarios sobre nuestros objetos de investigacin?... Cualesquiera que sean
las conclusiones de nuestras reflexiones personales o aquellas que se generen de la
discusin formal o informal sobre los aspectos aqu resaltados, en lo que
probablemente estaremos de acuerdo es que no queda mucho tiempo para encontrar
alternativas y sobre todo, para llevarlas a la prctica. Por otra parte, no tenemos
duda de que contamos con las capacidades y creatividad suficientes para hacer
frente a estos retos, lo cual debemos demostrar cabalmente, a travs del trabajo
coordinado con otros actores involucrados (v. gr. Sector gubernamental e inversores
privados, entre otros), O alguien lo duda?
Dr. Norberto Chavarra Hernndez
Profesor Investigador Titular
Cuerpo Acadmico de Biotecnologa Agroalimentaria
http://biotecnologiauaeh.sitiosprodigy.mx
Instituto de Ciencias Agropecuarias,
Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo.
E-mail: norberto@uaeh.edu.mx
Gua de Autores
La revista puede recibir trabajos de investigacin original as como de revisin en los campos de la
biotecnologa y bioingeniera. Todos los manuscritos sern sujetos a revisin por al menos dos
miembros del Comit Editorial y debern contar con una recomendacin de aceptacin para ser
publicados.
Los idiomas de la revista son el Espaol y el Ingls.
Los trabajos se escribirn en hoja tamao carta (21.6 cm x 27.6 cm). Los mrgenes aplicados a
todo el manuscrito sern de 2.5 cm para los extremos superior e inferior, as como 3 cm de cada lado.
Las pginas debern estar numeradas en la parte inferior y central de cada hoja.
Se recomienda que los trabajos completos tengan un mximo de 25 pginas, escritas con un
interlineado de 1.5 renglones, incluyendo las tablas y figuras. Las publicaciones de trabajos originales
y revisiones en la revista Biotecnologa estn exentas de costo para los autores.
Cuando corresponda, se recomienda el uso de abreviaturas para referirse a unidades de tiempo (h,
min, s), de volumen (l, ml, l), de peso (kg, g, mg, g), DNA, RNA y otras comnmente aceptadas en
la literatura cientfica.
Los trabajos de investigacin original pueden tocar cualquiera de los diversos campos que cultivan
la biotecnologa y la bioingeniera, desde sus aspectos fundamentales hasta las aplicaciones de los
mismos, incluyendo: microbiologa, bioqumica y biologa molecular, procesos y proyectos, as como
biotecnologa marina y biotecnologa aplicada a la salud, alimentos, agricultura, veterinaria, enzimas y
ambiente.
Los trabajos de investigacin original sern divididos en las siguientes secciones: Introduccin,
Materiales y mtodos, Resultados, Discusin, Referencias y Agradecimientos. Las secciones de
Resultados y Discusin pueden presentarse combinadas.
Los trabajos de revisin incluirn el tema y subtemas que a juicio de los autores sean necesarios
para la mejor presentacin de la informacin. Estos trabajos pueden cubrir los siguientes contenidos:
1. Qu es y para qu sirve la Biotecnologa?. Es decir: descripciones que ilustren y divulguen los
distintos campos de la biotecnologa, sus alcances y limitaciones, su historia y sus perspectivas.
2. Las fronteras de la biotecnologa: revisiones de nuevos campos o nuevas aplicaciones de la
biotecnologa. Por ejemplo: las perspectivas del uso de los genomas para el desarrollo de nuevas
drogas o para el tratamiento de enfermedades metablicas. Las perspectivas de la genmica
(estudio sistemtico de los genes y sus aplicaciones), la protemica (prediccin de la expresin de
los genes en protenas funcionales) y la fenmica (prediccin de fenotipos o conductas de los
organismos, en base a sus genes y a sus protenas). El uso de la ingeniera gentica para hacer
ingeniera metablica. Los nuevos tipos de reactores biolgicos y los fenmenos de transporte
implicados. Los nuevos esquemas de reaccin, separacin y control en procesos biotecnolgicos.
3. Aplicaciones de la Biotecnologa para resolver problemas o atender necesidades de la sociedad,
con especial atencin a sus aplicaciones ya vigentes en Mxico. Esta seccin ser dedicada a
una empresa o institucin (pblica o privada) que desee difundir los logros obtenidos en algn
campo de la biotecnologa. Por ejemplo: empresas productoras de antibiticos o productos
biolgicos, empresas de ingeniera ambiental que usen procesos biotecnolgicos, empresas
agropecuarias, forestales o de acuacultura que usen tecnologas biolgicas avanzadas, o
empresas de transformacin de alimentos que utilicen enzimas, cultivos de microorganismos, etc.
Esta lista es indicativa pero no exhaustiva.
4. Problemas de bioseguridad, biotica y biodiversidad relacionados con las aplicaciones de la
biotecnologa a la sociedad. Por ejemplo: anlisis y comentarios sobre los debates acerca del uso
de semillas transgnicas, los problemas de conservacin y explotacin de la biodiversidad
mediante la biotecnologa, los riesgos del uso de organismos transgnicos en diversos campos de
la industria, los problemas de bioseguridad del uso de antibiticos y otros productos
biotecnolgicos.
5. La educacin, la cultura y la difusin tecnolgica en relacin con la biotecnologa. Por ejemplo:
comentarios de planes y programas, de estilos y necesidades de la enseanza, del enfoque
interdisciplinario, en carreras o planes de estudio directamente ligados con la biotecnologa.
Tambin necesidades y modalidades sobre programas de extensin educativa para la industria,
para el pblico consumidor o para grupos selectos de personas interesadas en la biotecnologa
(polticos, funcionarios de empresas, lderes de opinin). El uso de la informtica en la difusin de
la biotecnologa, y en general, el anlisis de necesidades, mtodos y alternativas para difundir los
conocimientos de la biotecnologa.
6. Oportunidades y propuestas para mejorar la cooperacin y el desarrollo biotecnolgicos. Por
ejemplo: Anlisis de las oportunidades vigentes de intercambio acadmico o comercial en
biotecnologa. Propuestas de nuevas formas de cooperacin entre los sectores de investigacin y
la industria biotecnolgica. Anlisis y propuestas del uso ptimo de recursos humanos, financieros
o materiales para mejorar la cooperacin o el desarrollo de la biotecnologa. En esta seccin se
dar espacio a los anlisis, crticas o propuestas de los aspectos legales y fiscales que afecten e
incluso puedan mejorar el desarrollo de la biotecnologa en Mxico. Tales como: la propiedad
industrial, el rgimen fiscal de las empresas, el costo del desarrollo biotecnolgico y los subsidios
o estmulos econmicos para el desarrollo de la biotecnologa.
Tanto los trabajos de investigacin original como las revisiones debern apegarse al siguiente
formato:
1. El ttulo del manuscrito ser puesto en negritas con letra Arial o equivalente tamao 14. El
ttulo deber estar centrado.
2. El nombre de los autores ocupar los siguientes renglones escribiendo el nombre y primer
apellido de cada participante. Se usar letra Arial o equivalente tamao 12. Los nombres de los
participantes debern estar centrados, sealando con un asterisco el autor responsable de la
publicacin. En el siguiente rengln con letra itlica Arial del mismo tamao, se incluir la
direccin postal de la institucin de adscripcin de los autores, as como el e-mail del autor
corresponsal.
3. Se deber aadir un Resumen de no ms de 250 palabras en Espaol y un Abstract en Ingls
de tamao similar.
4. Se incluirn entre 3 a 6 Palabras clave: que permitan clasificar el artculo en una base de
datos.
Estas palabras debern de incluirse en Espaol y en Ingls (Key words:).
5. Si el texto inicia con el nombre de algn subtema, ste de pondr como primera lnea en
cursivas con letra Arial o equivalente tamao 10. Despus en el siguiente rengln se iniciar el
texto descriptivo usando letra Arial o equivalente tamao 10. El texto deber ser escrito con un
interlineado de 1.5 renglones. Se deber dejar un espacio de un rengln al inicio de una seccin o
subtema nuevo. Los gneros y especies debern escribirse en letras itlicas.
6. Las figuras debern numerarse con arbigos, correlativamente en orden de aparicin en el
texto. No se integrarn al texto, sino al final del manuscrito. No obstante, para facilitar el trabajo
de edicin, se recomienda indicar la ubicacin de las mismas en el momento en que son
mencionadas por primera vez en el texto. Las figuras deben incluir un breve ttulo explicativo en la
parte inferior de la misma. Si es necesario incluir fotos, stas se debern designar como figuras.
La impresin de las figuras e imgenes se har en blanco y negro, por lo que se recomienda que
muestren un buen contraste, en especial las figuras con varias lneas. Segn el orden de aparicin
en el texto, las tablas tambin se numerarn con arbigos ubicados en la parte superior de las
mismas e incluirn un breve ttulo explicativo. Las notas en las tablas debern ser indicadas con
letras minsculas en superndice. La ubicacin de las tablas ser sealada en el texto pero se
anexarn en hojas separadas despus de las Referencias.
7. La informacin dada como referencias bibliogrficas deber permitir a los lectores llegar con
facilidad a tal fuente de informacin original, si ello fuera necesario. En el texto del trabajo, las
referencias se citan por autor y ao entre parntesis redondos. Por ejemplo: Martnez & Garca
(1999) han demostrado que..., o bien, Datos recientes (Martnez & Garca, 1999) han
demostrado que.... Si la cita posee varios autores se escribira como sigue: Gutirrez et al.
(2003), han demostrado. O bien: Datos recientes (Gutirrez et al., 2003) han mostrado Si
la cita es es una pgina de Internet, sta deber ponerse completa entre parntesis directamente
en el texto donde se mencione. La lista de Referencias se deber escribir con el mismo tipo de
letra del texto principal (Arial tamao 10) de acuerdo al siguiente formato:
Para revistas:
Garca-Carreo F, Cota K & Navarrete del Toro MA (2008) Phenoloxidase activity of hemocyanin in
whiteleg shrimp, Penaeus vannamei: conversion, characterization of catalytic properties, and role in
postmortem melanosis. J. Agric. Food Chem. 56: 6454-6459.
Para libros y captulos de libros:
(Libro)
Ullrich M (2009) Bacterial Polysaccharides: Current Innovations and Future Trends. Horizon Scientific
Press, Norwich.
(Captulo de libro)
Snchez S & Demain AL (2009) Metabolic regulation and overproduction of primary metabolites. In:
Encyclopedia of Industrial Biotechnology. Bioprocess, Bioseparation, and Cell Technology
(EIB). Flickinger MC (ed). John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. pp. 396-458.
Para patentes:
Fenical WH, Jensen PR & Kwon HC (2009) Polyol macrolide antitumor-antibiotics from the marine
actinomycete strain CNQ140. US patent 7,521,414.
Para congresos y reuniones: Se aceptarn un mximo de dos citas de este tipo.
Reyes N, Domnguez RM, Islas I & Solis S (2007) Induccin diferencial por pH y temperatura del
Complejo pectinoltico producido por clulas inmovilizadas de Aspergillus HL. XII Congreso
Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera. Morelia Mich. Mxico. OIII-12.
Para citas provenientes de internet: Se aceptar un mximo de dos citas de este tipo.
Van Deuren J, Wang Z & Ledbetter J (1997) Remediation Technologies Screening Matrix and
Reference Guide. 3 Ed. Technology Innovation Office, EPA. Disponible en:
http://www.epa.gov/tio/ remed.htm.
Revistas electrnicas:
Sun J, Lu X, Rinas U, & Zeng AP (2007) Metabolic peculiarities of Aspergillus niger disclosed by
comparative metabolic genomics. Genome Biol. 8: R182.
Para tesis de pre y posgrado:

Crdenas C (2009) Evaluacin del uso biotecnolgico de la semilla de Ditaxis heterantha para la
Produccin de safranal. Tesis de Maestra en Ciencias Bioqumicas. Universidad Nacional
Autnoma de Mxico. Mxico D.F. pp. 1-78.
Cada autor es responsable de la precisin de las citas que emplea. Las citas de internet,
congresos y reuniones, debern evitarse al mximo.
Una vez que ha sido revisado y aceptado su trabajo, los autores debern enviar una carta de
cesin de los Derechos de Autor, de manera que la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y
Bioingeniera pueda hacer uso del artculo aceptado, o parte de l, con fines de divulgacin y
difusin de la actividad cientfica y tecnolgica. En ningn caso, dichos derechos afectan la
propiedad intelectual que es propia de los autores, para usar la totalidad o parte de ese artculo
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Los trabajos solamente se reciben va correo electrnico en la direccin smbiotec@yahoo.com.mx
Al momento de recibirlo, se enviar un acuse de recibo al autor corresponsal, por lo que se pide
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con el editor sobre la evolucin de la revisin y sobre la aceptacin del mismo.
Una vez aceptados, los trabajos son editados y enviados a los autores para su correccin. En esta
condicin no se permitirn cambios sustanciales en el contenido de los mismos sin la aprobacin
del editor en jefe. Una vez aprobada la prueba, el trabajo se publicar en lnea y podr ser
consultado en la pgina de la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera AC
http://www.smbb.com.mx/ La publicacin en lnea preceder a la publicacin impresa.
10
Cultivo Monoxnico Sumergido del Nematodo Entomopatgeno,

Steinernema carpocapsae CABA01, en Biorreactor airlift con
Recirculacin Interna
Gabriela Maciel-Vergara, Adriana-Ins Rodrguez-Hernndez, Norberto ChavarraHernndez*
Cuerpo Acadmico de Biotecnologa Agroalimentaria. Centro de Investigaciones en
Ciencia y Tecnologa de los Alimentos del Instituto de Ciencias Agropecuarias,
Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo. Av. Universidad km 1, Rancho
Universitario, Tulancingo de Bravo, Hidalgo. CP 43600, Mxico.
E-mail: norberto@uaeh.edu.mx
RESUMEN
El presente artculo trata acerca del cultivo sumergido del nematodo entomopatgeno, Steinernema
carpocapsae CABA01, aislado en el estado de Hidalgo, Mxico, y su bacteria simbionte, Xenorhabdus
nematophila, en un biorreactor con agitacin neumtica, del tipo airlift con recirculacin interna, usando
un medio de cultivo complejo que contiene 10% (volumen/volumen, v/v) aguamiel de agave (Agave spp.),
2% v/v aceite de maz, 1% (peso/volumen, p/v) yema de huevo deshidratada, 0.5% p/v NaCl y 1% p/v
extracto de levadura. Se realizaron dos corridas de fermentacin, F1 y F2, expresndose las condiciones
de operacin en trminos del nmero adimensional de Reynolds (Re), como ndice de las condiciones
hidrodinmicas, y del coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, kLa, como indicador de las
condiciones de oxigenacin imperantes durante los bioprocesos. Los experimentos comenzaron con
aproximadamente 1,000 nematodos en fase infectiva juvenil (IJ) por mililitro (ml) de medio, alcanzndose
al da 16, 127,220 y 92,897 nematodos/ml con 99.7% y 96.5% en fase IJ, en las corridas F1 y F2,
respectivamente. Las propiedades reolgicas de los caldos de fermentacin evolucionaron del
comportamiento dilatante al inicio, a casi Newtoniano al final de los experimentos, y las condiciones de
operacin cambiaron notablemente, involucrando valores del nmero Re de 80 a 4,900 y del kLa en el
intervalo de 3.110-3 a 6.410-3 s-1. La mxima concentracin de fases IJ, 126,882 por ml, fue alcanzada
en la fermentacin F1.
Palabras
clave:
biorreactor
airlift,
hidrodinmica,
transferencia
de
oxgeno,
nematodos
entomopatgenos, biocontrol, variedades silvestres.
11
ABSTRACT
The present article reports on the submerged culture of the entomopathogenic nematode,
Steinernema carpocapsae CABA01, isolated within the state of Hidalgo, Mexico, and its symbiotic
bacterium, Xenorhabdus nematophila, in an internal-loop airlift bioreactor using a complex culture medium
containing 10% (volume/volume, v/v) agave sap from Agave spp., 2% v/v corn oil, 1% (weight/volume,
w/v) dried egg yolk, 0.5% w/v NaCl and 1% w/v yeast extract. Two fermentation runs, F1 and F2, were
carried out at operating conditions expressed in terms of the dimensionless Reynolds number (Re), as an
index of hydrodynamics, and the volumetric oxygen transfer coefficient (kLa), as an index of oxygen
transfer conditions, during the bioprocesses. Experiments initiated with 1,000 infective juvenile stage
nematodes (IJ) per millilitre (ml), approximately, and at the day 16, they achieved 127,220 and 92,897
nematodes/ml with 99.7% and 96.5% in IJ stage, corresponding to F1 and F2 runs, respectively. Culture
broth rheological properties evolved from the dilatant behaviour to nearly the Newtonian one at the end.
Also, operating conditions changed notably involving values of Re from 80 to 4,900, and kLa from 3.110-3
to 6.410-3 s-1. The maximum IJ concentration, 126,882 per ml, was achieved within F1 run.
Keywords: airlift bioreactor, hydrodynamics, oxygen transfer, entomopathogenic nematodes, biocontrol,
indigenous strains.
infectivas
INTRODUCCIN
Como consecuencia del uso excesivo de
juveniles
entomopatgenos
(IJ)
(NEP)
de
de
nematodos
los
gneros
sustancias qumicas en la agricultura, se han
Steinernema y Heterorhabditis, ha mostrado ser
reportado efectos ecolgicos negativos como
efectivo en ciertos sistemas agrcolas para
contaminacin de suelo y agua, impactos en las
controlar
cadenas alimentarias, as como efectos sobre la
escarabajos
salud humana (http://www.fao.org/ag/magazine/
Otiorhynchus
sulcatus
0205sp2test.htm;
Shapiro-llan
&
http://www.fao.org/ag/
larvas
en
de
insectos
viedos
y
Gaugler,
plaga
pastos
como
(i.
e.,
Pachnaeus
spp.;
2002).
Tanto
el
steinernemtidos como heterorhabdtidos han
abuso en el uso de sustancias con actividad
establecido relaciones evolutivas simbiticas
insecticida es preocupante. En este sentido, el
con bacterias Gram negativas de los gneros
control biolgico ha mostrado ser una alternativa
Xenorhabdus y Photorhabdus, respectivamente,
viable para el control de un amplio nmero de
las cuales pueden presentar dos fenotipos,
insectos plaga (Hajek, 2004). Especficamente,
siendo nicamente la llamada fase I, esencial
el uso de las llamadas fases
para la actividad entomopatognica as como
magazine/0504sp2.htm).
Particularmente,
12
para la reproduccin de los nematodos (Forst et
operacin. Ms an, son escasos los estudios
al., 1997). La bacteria es acarreada en el
relacionados con los efectos de las condiciones
intestino del IJ, el cual es el nico estadio de
hidrodinmicas y de transferencia de oxgeno
desarrollo de los NEP que puede vivir fuera del
durante la produccin de NEP (Chavarra-
insecto husped y tiene la habilidad de buscar a
Hernndez et al., 2007), aunque hay algunos
su presa e invadirla, liberando a su bacteria
reportes dedicados a otros aspectos durante su
simbionte en la hemolinfa del insecto, donde
produccin
sta prolifera produciendo toxinas y enzimas
biorreactores (Pace et al., 1986; Friedman et al.,
que son responsables de la muerte del insecto y
1991; Surrey & Davies, 1996; Ehlers et al., 1998;
su bioconversin en una sopa nutritiva ideal
Strauch & Ehlers, 2000; Neves et al., 2001;
para el crecimiento y reproduccin de los NEP,
Johnigk et al., 2004).
lo cual ocurre hasta que los nutrimentos se
usando
distintos
tipos
de
Por otra parte, en un afn de conservar o
agotan, momento en el que se induce una nueva
alterar
generacin de IJ que abandona la carcasa del
existente
insecto en bsqueda de nuevos huspedes
prctica
(Forst & Clarke, 2002). Por lo anterior, la
mediante el uso de NEP actualmente tiende a
produccin masiva de fases IJ de NEP es de
usar
inters actual. En este sentido, de acuerdo con
endmicos de las zonas geogrficas donde
distintos autores la mejor opcin tecnolgica
stos
para producir NEP es el cultivo monoxnico
(Campos-Herrera et al., 2007), en lugar de usar
sumergido usando biorreactores (Ehlers, 2001;
especies exticas aisladas de nichos ecolgicos
Chavarra-Hernndez et al., 2008) aunque los
diferentes, que por otra parte an contina
NEP de mayor calidad se obtienen mediante el
siendo la prctica ms ampliamente usada en
cultivo in vivo. Actualmente, aunque algunas
muchos agrosistemas. Ms an, se ha reportado
compaas en el mundo producen distintas
que el uso de especies nativas de NEP es
especies
frecuentemente
de
NEP
mediante
el
cultivo
lo
menos
en
del
los
posible
distintos
biocontrol
preferentemente
seran
aplicados
ms
la
biodiversidad
ecosistemas,
de
insectos
especies
para
eficaz
el
de
la
plaga
NEP
biocontrol
que
el
monoxnico sumergido (http://www.sipweb.org/
correspondiente a especies exticas, cuando los
DirectoryMCP/nematodes.htm), los resultados
especmenes han sido aplicados en igualdad de
obtenidos son muy variables por lo que esta
circunstancias.
tecnologa debe ser mejorada. En particular,
Con base en lo anterior, el presente estudio
para disponer de bioprocesos ms confiables
trata sobre la produccin masiva del NEP,
para la produccin de NEP, se requieren ms
Steinernema carpocapsae CABA01 aislado en el
estudios concernientes a la formulacin de
estado de Hidalgo, Mxico, mediante el cultivo
medios de cultivo, cintica del crecimiento
monoxnico sumergido usando un biorreactor
poblacional de los NEP, diseo de biorreactores
agitado neumticamente, del tipo airlift con
as como exploracin de mejores condiciones de
recirculacin interna a travs de un cilindro
13
concntrico. Uno de los intereses principales fue

el establecer cmo cambian las condiciones del
Medios de cultivo
proceso con el tiempo, para lo cual el nmero de
Medio STB (Buecher & Popiel, 1989). 3% p/v
Reynolds (Re) y el coeficiente volumtrico de
caldo de soya tripticasa y 0.5% p/v extracto de
transferencia de oxgeno (kLa), fueron tomados
levadura. pH 7.
como
indicadores
de
condiciones
Agar NBTA (Akhurst, 1980). 2.3% p/v agar
hidrodinmicas y de transferencia de oxgeno
nutritivo, 0.0375% p/v azul de bromotimol y
imperantes
0.004% p/v cloruro de trifeniltetrazolio (TTC). pH
durante
las
las
fermentaciones,
respectivamente. Para lograr lo anterior, la

evaluacin de la viscosidad aparente (a) del
caldo de fermentacin fue de gran importancia.
8.5.
Medio MA10 (Modificado de Islas-Lpez et
al., 2005). 10% v/v aguamiel de Agave spp., 2%
v/v aceite de maz, 1% p/v yema de huevo
MATERIALES Y MTODOS
deshidratada, 0.5% p/v NaCl, 1% p/v extracto de
Especmenes biolgicos
levadura. Se us 0.3 ml de antiespumante A
Fases IJ de S. carpocapsae CABA01 fueron

mantenidas en suspensiones acuosas (300,000
[100% base silicn] (SIGMA-Aldrich) por cada

litro de medio. pH de 7.5.
IJ/ml) en botellas para el cultivo de clulas, a

4C y periodos de agitacin de 15 min cada 15 d
Cultivo monoxnico sumergido de Steinernema
para proporcionar el oxigeno requerido. Los
carpocapsae CABA01
NEP fueron aislados de muestras de suelo de
Un vial de conservacin de X. nematophila
Alcholoya, en el estado de Hidalgo, Mxico, e
se inocul en 420 ml de medio STB y se incub
identificados por mtodos de morfometra y
a 150 rpm y 30C durante 48 h. Muestras de
biologa molecular (Prez-Santos, 2009).
este cultivo fueron estriadas sobre placas de
X. nematophila en fase I, fue conservada en
NBTA para verificar la presencia de la fase I
viales de 2 ml en 25% p/v glicerol a -80C (109
bacteriana,
clulas por vial). La bacteria simbitica fue
bromotimol dando lugar a colonias azul oscuro,
aislada de cultivos en NBTA (Akhurst, 1980)
mientras que la fase II bacteriana no absorbe
estriados con hemolinfa de larvas del ltimo
este colorante, adems de reducir al TTC dando
instar
previamente
lugar a colonias rojas (Akhurst, 1980). El caldo-
infectadas con fases IJ de S. carpocapsae
STB fue posteriormente bombeado al biorreactor
CABA01 (Woodring & Kaya, 1988). La bacteria
airlift con recirculacin interna (Fig. 1) que
fue identificada mediante secuenciacin del
contena 3.8 l de medio MA10 estril. El
gene
biorreactor fue previamente sanitizado durante
de
16s
Galleria
rADN
mellonella
pruebas
bioqumicas
(Martnez-Rodrguez, 2008)
la
cual
absorbe
al
azul
de
1.5 h con vapor saturado a 98C. Luego, el

cultivo bacteriano fue incubado a 30C con
14
a)
b)
Fig. 1. Biorreactor airlift con recirculacin interna usado para el cultivo sumergido del nematodo
entomopatgeno, Steinernema carpocapsae CABA01, aislado en el estado de Hidalgo, Mxico, y su
bacteria simbionte, Xenorhabdus nematophila. El volumen de trabajo fue 4.2 l y las fermentaciones se
desarrollaron a 22C y aireacin variable (1 a 1.5 vvm) durante 16 das. a) Esquema del biorreactor
mostrando la seccin de flujo ascendente a travs del tubo concntrico interno, as como la seccin de
flujo descendente a travs del espacio anular entre los cilindros, crendose un patrn de flujo principal en
la direccin axial. Dimensiones principales: d1, 5.16 cm; d2, 6.25 cm; d3, 13 cm; h1, 2 cm; h2, 21 cm; h3, 54
cm. b) Fotografa del biorreactor.
aireacin de 1 volumen de aire por volumen de
concentracin
medio
por
Trascurrido
minuto
este
(vvm)
tiempo,
durante
fases
IJ
48
h.
Dependiendo
de
S.
nematodos,
de
de
las
nematodos
la
viables.
concentracin
muestras
de
de
caldo
-1
a 10
-3
de
con
carpocapsae CABA01 fueron inoculadas hasta
fermentacin fueron diluidas de 10
una
solucin salina isotnica. Muestras diluidas de
concentracin
de
1,000
IJ/ml
aproximadamente, cambindose la temperatura
0.1
ml
fueron
colocadas
en
portaobjetos
de proceso a 22C con aireacin variable de 1 a
excavados para la cuenta de NEP bajo el
1.5 vvm hasta el final de los experimentos. Se
microscopio de campo claro (aumentos, 40 y
realizaron dos corridas de fermentacin (i. e., F1
100). Los NEP mviles o inmviles pero de
y F2).
aspecto normal fueron considerados como

viables.
Concentracin
de
nematodos
viables
(nematodos/ml)
Propiedades reolgicas.
Cada 2 d se tom una muestra de 10 ml de
Cada 4 d se tom 30 ml de caldo para
caldo de fermentacin para determinar la
determinar las propiedades reolgicas de los
15
caldos de fermentacin. stas fueron evaluadas

en un remetro de esfuerzos controlados AR2000 TA Instruments usando la geometra vane
rotor. Las muestras fueron sometidas a cizalla
a sa = 5000 vsg
(3)
a sa = 5000 vsg0.5
(4)
de 50 a 600 s-1 (tanto en sentido ascendente

como
descendente
para
eliminar
posibles
dependencias con el tiempo) a 25C durante un

periodo
acumulado
de
37
min.
El
comportamiento reolgico fue descrito con el

modelo de Ostwald-de Waele (Ecuacin 1)
donde (Pa) es el esfuerzo de cizalla,
-1
(s ) es
la cizalla, y K (Pasn) y n (adimensional) son los

ndices de consistencia y comportamiento al
flujo, respectivamente.
= K
del sistema, el valor
a-sd
fue estimado con la
Ecuacin 5 (Al-Masry & Al-Ahmed, 2005) la cual

considera el valor vsg de la seccin de ascenso,
la razn de reas transversales al flujo (Asd/Asa)
(siendo Asd=6.40 cm2 y Asa=20.91 cm2) y la
altura de la seccin de descenso (hsd=35.3 cm).
asd
= 4800 vsg
1.86
Asd
1 +
Asa
0.14
(hsd ) 0.48
(5)
(1)
b) Seccin de descenso (sd). En esta seccin
Una vez contando con los valores de cizalla

promedio por seccin, los correspondientes
Determinacin de la viscosidad aparente del
valores
caldo de fermentacin, a (Pas)
determinados con la Ecuacin 6.
Primero, las componentes de velocidad en el

reactor fueron consideradas como v=vr=0 y
vz0. Luego, el valor promedio de
a)
a) Seccin de ascenso (sa). La velocidad

superficial del gas fue estimada con la Ecuacin
2, donde Q es el flujo de aire (l/s) y Asa es el
rea transversal al flujo (20.91 cm2)
(2)
a-sa
aparente
fueron
n 1
(6)
Determinacin
de
las
condiciones
hidrodinmicas durante las fermentaciones

El nmero de Reynolds (Re) fue usado como
un ndice de las condiciones hidrodinmicas
imperantes y fue calculado con la Ecuacin 7,
donde DH es el dimetro hidrulico igual a 4RH,
siendo RH el radio hidrulico igual a la razn
(rea transversal al flujo)/(permetro mojado)
El valor
a = K a

viscosidad
(i. e.,
fue estimado de acuerdo con lo siguiente:
Q
v sg =
Asa
de
fue determinado con la Ecuacin
3, si vsg0.04 m/s, o la Ecuacin 4, si vsg0.04

m/s (Li et al., 1995)
(Tilton, 1999).
Re =
DH v
(7)
16
Se consider la densidad del caldo de

3
gradualmente sugiriendo un cambio bacteriano a
fermentacin como =1,000 kg/m .
la fase II (Akhurst, 1980). Por otra parte, la Fig. 2
a) Seccin de ascenso. En esta seccin, el valor
presenta el aspecto exhibido por distintos
de
estadios de desarrollo de los nematodos durante
Re
fue
determinado
considerando
la
velocidad v igual a vsg (m/s).
las fermentaciones
b) Seccin de descenso. Aqu, el nmero Re fue

calculado usando la velocidad promedio de
descenso
v=Q/Aad,
la
cual
fue
estimada
considerando que el gas inyectado bombea

aproximadamente un flujo volumtrico de medio
de cultivo similar a Q, el cual luego de
desgasificarse cuando abandona la zona de
ascenso, se mueve hacia la base del reactor a
travs del nulo.
Estimacin de las condiciones de oxigenacin
durante las fermentaciones
El coeficiente volumtrico de transferencia
de oxgeno, kLa, fue considerado como un ndice
de la eficiencia de oxigenacin lograda durante
los bioprocesos y fue estimado mediante la
Ecuacin 8 (Li et al., 1995). Los valores
empleados de vsg fueron a su vez determinados
mediante
las
Ecuaciones
4,
segn
correspondiese.
k L a = 0.0343 vsg
a 0.255
0.524
(8)
Fig. 2 Fotografas de campo claro de distintos

estadios de desarrollo de Steinernema
carpocapsae CABA01, durante su cultivo
sumergido en presencia de su simbionte
bacteriano, Xenorhabdus nematophila, en un
biorreactor airlift con recirculacin interna. a)
Hembra adulta de primera generacin a t=4 d
(longitud, 3,800 m; 40); b) Macho adulto de
primera generacin a t=4 d (longitud, 1,600 m;
100); c) juvenil de primera etapa a t=4 d
(longitud, 200 m; 400); d) juvenil de segunda
etapa a t=6 d (longitud, 320 m; 200); e)
hembra adulta de segunda generacin a t=12 d
(longitud, 1,200 m; 40); f) fases infectivas
juveniles a t=8 d (longitud, 630 m; 40)
Evolucin de la concentracin de nematodos
RESULTADOS Y DISCUSIN
En principio, durante el desarrollo de las
fermentaciones, X. nematophila, permaneci
principalmente en fase I, lo cual fue sugerido por
el desarrollo abundante de colonias azules al
crecer en NBTA. Sin embargo, a partir del da 8,
el crecimiento de colonias rojas se increment
Las Figuras 3a y 3b presentan la evolucin

de las concentraciones de nematodos totales y
de fases IJ durante las corridas realizadas en el
presente
trabajo.
Las
correspondientes
concentraciones iniciales fueron 1,330 IJ/ml

(Desviacin estndar, DE=63) y 1,064 IJ/ml
(DE=146),
para
las
corridas
F1
F2,
17
respectivamente. Por otra parte, la mxima
resultados correspondientes al experimento F2
concentracin total de NEP de 127,220 por ml
fueron 92,897 NEP/ml (DE=24,061) con 96.5%
(DE=16,330) con 99.7% IJ al final (126,882
IJ (i.e., 89,667 IJ/ml). Este es el primer
IJ/ml) se alcanz en el experimento F1. Los
Fig. 3 Evolucin de las concentraciones del total de nematodos viables (cuadros) y de fases infectivas
juveniles (tringulos) durante el cultivo sumergido de Steinernema carpocapsae CABA01 y su bacteria
simbitica, Xenorhabdus nematophila, en un biorreactor airlift con recirculacin interna. a) Corrida F1; b)
corrida F2. Las barras de error representan la desviacin estndar de 3 conteos independientes.
reporte
sobre
la
propagacin
masiva
de
reportes
acerca
de
la
produccin
de
steinernemtidos aislados en Mxico, mediante
steinernemtidos usando biorreactores agitados
el uso de biorreactores del tipo airlift con
neumticamente.
recirculacin interna. De hecho, existen pocos
Hernndez et al. (2007) reportaron la produccin
Anteriormente,
Chavarra-
18
de hasta 193,140 IJ/ml trabajando con S.
con los reportes de Young et al. (1998) quienes
carpocapsae
reportaron el comportamiento pseudoplstico
All
mediante
el
uso
de
un
biorreactor airlift con recirculacin interna a

travs de tubos internos modificados. Pace et al.
(1986) y Friedman et al. (1991) usaron tanques
agitados mecnicamente para la produccin de
NEP, pero desprovistos de sus impulsores para
que funcionasen como columnas burbujeadoras,
de tal manera que lograron concentraciones de
90,000 IJ/ml y 95,000 IJ/ml al propagar S. feltiae
y Neoaplectana (Steinernema) carpocapsae,
respectivamente.
Por
otra
parte,
en
la
propagacin de S. carpocapsae-Az 20, estirpe

aislada en las Azores, Portugal, Neves et al.
(2001) obtuvieron de 38,000 a 64,000 IJ/ml
mediante el uso de un biorreactor airlift de 1 l
con recirculacin externa.
Cambios en el comportamiento reolgico de los
caldos de fermentacin
En
principio,
se
observaron
cambios
importantes en las propiedades reolgicas de

los caldos de fermentacin (Fig. 4a), que
involucraron cambios en la viscosidad aparente
(a) de 2 mPas al inicio de los cultivos, hasta 12
mPas a los 16 das de las fermentaciones. Por
otra parte, el comportamiento de los caldos de
fermentacin fue no Newtoniano (i.e., viscosidad
variable dependiente de las condiciones de
deformacin), evolucionando especficamente
del comportamiento dilatante al inicio, hasta
cercano al comportamiento Newtoniano al final
de
los
experimentos.
Anteriormente,
con
relacin a las propiedades reolgicas de caldos
Fig. 4. Cultivo sumergido de Steinernema

carpocapsae CABA01 y su bacteria simbitica,
Xenorhabdus nematophila, en un biorreactor
airlift con recirculacin interna. Evoluciones de:
a) viscosidad aparente (a) del caldo de
fermentacin; b) condiciones hidrodinmicas en
trminos del nmero de Reynolds (Re), y c)
condiciones de oxigenacin en trminos del
coeficiente volumtrico de transferencia de
oxgeno (kLa). Clave: smbolos negros, corrida
F1; smbolos blancos, corrida F2; seccin de
ascenso, ; seccin de descenso, .
de fermentacin durante la produccin de

nematodos entomopatgenos, slo se contaba
19
durante la produccin de S. feltiae, y los
relativamente similar al usado en el presente
reportes de Chavarra-Hernndez et al. (2003,
trabajo (i.e., standard draft tube airlift bioreactor)
2007)
los
tanto en la zona de ascenso (19 < Re
comportamientos dilatante como pseudoplstico
(adimensional) < 425) como en la de descenso
durante la produccin de S. carpocapsae All al
(3 < Re (adimensional) < 129) en el trabajo
propagarlo en matraz agitado orbitalmente as
mencionado.
como en biorreactor airlift con recirculacin
implicaciones
interna, usando medios de cultivo relativamente
condiciones hidrodinmicas tienden hacia la
similares a los empleados en el presente
laminaridad (i.e., involucrando menores valores
estudio.
trabajos
de Re) el proceso de apareamiento de los
mencionados se emplearon distintas geometras
nematodos se puede ver favorecido (recordar
para
que
quienes
Por
la
otra
determinaron
parte,
evaluacin
en
tanto
los
reolgica
(Cilndros
los
Lo
anterior
puede
interesantes.
adultos
machos
tener
Cuando
hembras
las
de
concntricos: Young et al., 1998, y Chavarra-
steinernemtidos
Hernndez et al., 2003; impulsor helicoidal:
reproducirse). En este sentido, un incremento
Chavarra-Hernndez et al., 2007; impulsor de
del nmero Re como consecuencia de la mayor
paletas vane rotor: presente trabajo) lo que
prevalencia de las fuerzas inerciales por sobre
pudiese tener alguna relacin con la variabilidad
las fuerzas viscosas durante el mezclado en el
entre los resultados mencionados, adems de
biorreactor airlift, podran traducirse en una
los posibles efectos causados por usar medios
disminucin de la eficiencia del apareamiento
de cultivo distintos, especmenes biolgicos
entre steinernemtidos, originndose a su vez
distintos as como sistemas de fermentacin
una disminucin de la productividad de fases IJ
diferentes.
lograda durante estos procesos. Esto parece
deben
copular
para
tener relacin con el hecho de que en el

Cambios en las condiciones hidrodinmicas
presente trabajo, partiendo aproximadamente de
durante las fermentaciones
1,000 NEP/ml se lograron producir de 90,000 a
Con
relacin
las
condiciones
130,000
S.
carpocapsae
CABA01-NEP/ml,
hidrodinmicas existentes durante el desarrollo
mientras que Chavarra-Hernndez et al. (2007),
de
S.
usando un sistema relativamente similar al aqu
implicaron
reportado pero propagando S. carpocapsae All,
menores valores del nmero de Reynolds en la
lograron producir 207,000 individuos/ml en
seccin de ascenso (150 < Re (adimensional) <
condiciones de operacin que involucraron
1,320) que lo determinado en la seccin de
menores
descenso (80 < Re (adimensional) < 4,900) (Fig.
calculados para los experimentos reportados en
4b), y fueron notablemente mayores que lo
este
trabajo,
como
reportado por Chavarra-Hernndez et al. (2007)
anteriormente.
Otros
autores
al producir S. carpocapsae All en un sistema
sugerido
influencia
de
las
fermentaciones
carpocapsae
CABA01,
para
stas
producir
nmeros
la
de
Reynolds
ya
fue
las
que
los
mencionado
tambin
han
condiciones
20
de
2.810-4 s-1 a 0.0447 s-1, Chavarra-Hernndez
steinernemtidos, como Neves et al. (2001)
et al., 2007). Mehrnia et al. (2005) reportaron
quienes
hidrodinmicas
en
durante
carpocapsae
Az
apareamiento
la
reproduccin
la
produccin
de
S.
valores de kLa en el intervalo de 0.004 s-1 a 0.03
20
sugirieron
que
el
s-1
mezclas
de
favorecido a travs de la creacin de una zona
airlift con tubo concntrico involucrando valores
de baja velocidad del fluido lo cual puede
de vsg de 0.01 m/s a 0.075 m/s.
apareamiento,
puede
con
queroseno/agua y diesel/agua en un biorreactor
mejores
nematodos
experimentar
ser
generar
de
al
oportunidades
tomando
Para
realizar
un
balance
de
oxgeno
conveniente durante la produccin de NEP, es
diferencias de densidades entre hembras y
deseable contar con datos acerca de la
machos
autores.
demanda especfica de oxgeno de los NEP y
Desafortunadamente en la literatura relacionada
cmo sta puede cambiar con el estadio de
se cuenta con muy pocos reportes sobre la
desarrollo;
produccin de NEP mediante biorreactores, que
publicados sobre esto, excepto para fases IJ de
involucren un seguimiento de los cambios en las
algunos
condiciones hidrodinmicas y sus posibles
diferentes
implicaciones en la productividad de fases IJ.
produccin en biorreactores. En este sentido,
Por lo tanto, son escasas las comparaciones de
Lindegren et al. (1986) reportaron la rapidez de
los resultados aqu presentados con otros
respiracin de fases IJ de S. feltiae a distintas
trabajos.
temperaturas de almacenamiento.
por
cuenta
el
las
reportadas
en
para
estos
no
obstante,
especmenes
Por
otra
las
no
y
existen
en
condiciones
imperantes
parte,
los
datos
durante
resultados
la
aqu
Cambios en las condiciones de transferencia de
presentados slo pueden ser comparados con
oxgeno durante las fermentaciones
muy pocos reportes ya que las implicaciones de
Por otra parte, la Fig. 4c muestra la
las
condiciones
de
oxigenacin
han
sido
evolucin de las condiciones de transferencia de
escasamente exploradas durante la produccin
oxgeno
de nematodos entomopatgenos con potencial
durante
las
fermentaciones
desarrolladas en la presente investigacin. La
aplicacin en el biocontrol de plagas.
eficiencia de oxigenacin fue expresada en base

al coeficiente volumtrico de transferencia de
CONCLUSIONES
oxgeno, kLa, el cual fue calculado para la
Fue posible lograr la propagacin masiva del
seccin de ascenso en el biorreactor airlift. Los
nematodo
valores de kLa determinados se ubicaron en el
carpocapsae CABA01, aislado en el estado de
intervalo de 3.110-3 s-1 a 6.410-3 s-1 los cuales
Hidalgo, Mxico, usando un biorreactor tipo airlift
estn en concordancia con lo previamente
con
reportado
S.
concentraciones de 127,000 IJ/ml en procesos
carpocapsae All en biorreactor airlift (i.e.,
de 16 das de duracin. Por otra parte, fue
durante
la
produccin
de
entomopatgeno,
recirculacin
interna,
Steinernema
logrando
21
posible
determinar
la
evolucin
de
las
condiciones hidrodinmicas imperantes durante

las
fermentaciones,
correspondiente
as
como
las
estimar
condiciones
de
reproduccin de nematodos fue posible an

cuando se alcanzaron condiciones de franca
en
algunas
biorreactor,
de
zonas
acuerdo
con
dentro
los
del
valores
calculados para el nmero de Reynolds. Esto es

de gran importancia ya que abre la posibilidad
de optimizar las condiciones de proceso para
maximizar
productividades
biorreactores
airlift,
de
usando
NEP
en
enfoques
de
ingeniera bsica. Adems, este estudio muestra

que es posible lograr la produccin masiva de
nematodos
Mxico,
entomopatgenos
con
potencial
aislados
aplicacin
para
U.
Prez-Santos
A.
Martnez-
Rodrguez.
la
transferencia de oxgeno, destacndose que la
turbulencia
Morales,
en
el
biocontrol de insectos plaga y as contribuir al

acceso hacia una agricultura sustentable.
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.
24
Tcnica de PCR Como Estrategia Biotecnolgica Para Deteccin de

Helicobacter pylori en Placa Dental.
Roba Izzeddin 1*, Rubn Toro 2, Rula Izzeddin3
1*
Departamento de Prostodoncia y Oclusin. Facultad de Odontologa. Universidad de

Carabobo, Valencia, Venezuela.
E-mail: rubaizzeddin@gmail.com
Unidad de Investigaciones Morfopatolgicas. Facultad de Odontologa. Universidad de

Carabobo, Valencia, Venezuela.
3
Department of Bioscience Technologies, Jefferson School of Health Professions,

Thomas Jefferson University. Philadelphia, PA 19107-5587
RESUMEN
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es una herramienta biotecnolgica muy til para el
diagnstico de bacterias o virus de difcil cultivo in vitro. El objetivo del estudio es reafirmar la efectividad
de dicha tcnica en el diagnstico de Helicobacter pylori (Hp), en este caso en placa dental y su relacin
especfica con afecciones gstricas, adems difundir los beneficios y futuras aplicaciones en el rea de
la odontologa. En consecuencia, se realiz una investigacin tipo descriptivo de diseo no experimental y
transversal; para el cual se seleccion una muestra de setenta (71) individuos que presentaban
sintomatologa a nivel gstrico. A cada paciente se le tom muestra de placa dental de la regin
subgingival y se llev a un tubo Eppendorf. Del ADN de las bacterias presentes en placa dental se
amplific el gen
ureC para identificar el microorganismo a travs de PCR. De las 71 muestras
examinadas, 18
(25.35%) resultaron positivas para el ADN de Hp. Se evidencio la coincidencia entre los resultados
positivos y los pacientes con reflujo gastroesofgico, y adems se logr estandarizar la tcnica de PCR
en la deteccin de H. pylori en la Facultad de Odontologa de la Universidad de Carabobo.
Palabras clave: Reaccin en Cadena de Polimerasa, Helicobacter pylori, placa dental
ABSTRACT
The polymerase chain reaction (PCR) is a useful biotechnological tool for the diagnosis of viruses or
bacteria difficult to culture in vitro. The study's objective is to reaffirm the effectiveness of this technique in
the diagnosis of Helicobacter pylori (Hp), in this case in dental plaque, and its specific relationship with
25
gastric symptoms, further spreading the benefits and future applications in the field of dentistry.
Consequently, a descriptive, non-experimental and transversal investigation was conducted using a
sample of seventy one (71) individuals who had symptoms at the gastric level. Each patient sample was
taken from dental plaque in the subgingival region and put in an Eppendorf tube. The ureC gene was
amplified via PCR from the bacterial DNA in dental plaque to identify the organism. Of the 71 samples
examined, 18 (25.35%) were positive for Hp DNA. There was agreement between positive results and
patients with gastroesophageal reflux, and the standardization of the PCR technique for detecting H. pylori
in the Faculty of Dentistry, University of Carabobo was successful.
Keywords: PCR, Helicobacter pylori, dental plaque
del resto del ADN por medio de
INTRODUCCIN
La reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR)
es
considerada
una
tcnica
electroforesis en geles de agarosa.
La cantidad de material que hace falta
biotecnolgica cuya finalidad es la amplificacin
para el inicio de la reaccin es muy
o reproduccin in vitro de un nmero de copias
pequea y solo es necesario la cantidad
de una regin especfica de ADN, en este caso
de ADN contenida en una sola clula,
bacteriano, para su respectiva evaluacin. La
esto le ofrece una alta sensibilidad a la
mencionada tcnica es de gran utilidad en una
prueba.
variedad de campos, incluidas la biologa
La
reaccin
de
PCR
es
llevada
molecular, la biotecnologa, la gentica, la
completamente in vitro y requiere para
epidemiologa,
su
forestales,
las
microbiologa,
el
siguientes: 2 oligonucletidos sintticos
diagnstico de enfermedades infecciosas, entre
o cebadores (primers), que deben ser
otras, es decir con multiples ventajas que se
complementarios a la regin de inters y
mencionan a continuacin:
generalmente
ciencias
las
forenses,
ciencias
la
de
los
nicos
elementos
para
el
La tcnica de PCR ha demostrado ser
microorganismo de estudio, lo que
muy til en el diagnstico de virus,
proporciona la alta especificidad; una
parsitos y bacterias de difcil cultivo;
enzima termoestable, Taq polimerasa,
porque ofrece un diagnstico confiable,
proveniente de la bacteria Thermus
ms rpido y menos laborioso que los
aquaticus y 4 desoxyribonucletidos
cultivos normales de este tipo de
(dATP, dGTP, dCTP, dTTP).
microorganismos.
desarrollo
Este procedimiento, permite obtener una
La secuencia especfica de inters no
duplicacin exponencial de la secuencia
necesita estar aislada del resto de su
de inters por medio de 3 pasos
genoma, pero una vez completada su
fundamentales en un proceso cclico; es
reproduccin, esta puede ser separada
decir, cada ciclo consta de un proceso
26
de desnaturalizacin (95oC) que permite
bajo grado, originado en tejido linfoide asociado
la apertura de las dobles cadenas; luego
a la mucosa. Por ende, dicho microorganismo
viene
de
esta vinculado a la alta incidencia mundial de las
anillamiento (40-65 C), que consiste en
patologas mencionadas con un promedio de Hp
la unin o el apareamiento de los
del 60%, siendo una de las infecciones humanas
oligonucletidos o cebadores que se
mas diseminadas a nivel mundial (Kabris, 2004);
encuentran en la mezcla de reaccin
As, dicho autor ha mencionado el posible
con los extremos 3 de la secuencia
contagio por va oral, ya que la saliva representa
especfica del ADN, formando una unin
una
ayudada por enlaces inicos (primers y
microorganismo
hebra de ADN); en donde la enzima Taq
encontrada tambin, en surco gingival o en
polimerasa se pueda unir y comenzar en
placa dental (Dowsett et al., 1999).
seguido
por
un proceso
va
potencial
y
de
por
transmisin
tanto
pudiera
del
ser
presencia de los 4 nucletidos trifosfatos
Bajo esta premisa, Manson & Eley (1993)
con la tercera etapa que es la fase de
afirman que la placa dental constituye un
sntesis (72 C), la cual se refiere al
reservorio de reinfecciones postratamiento. Por
copiado del templado que se van
tal motivo, diversos autores se han abocado a
uniendo por enlaces inicos dando
estudiar la presencia de dicho microorganismo
como resultado una nueva molcula del
en la cavidad bucal. Asi, la presencia del Hp a
fragmento de ADN de inters en este
nivel dental ocurre inmediatamente despus de
caso de Helicobacter pilory (hp) (Premoli
una limpieza dental, restauraciones y protesis,
et al., 2004)
donde
se
deposita
una
fina
capa
de
glucoprotenas salivales sobre la superficie

En este sentido, Leontiodys en el 2000
dental,
adhirindose
firmemente
refiere que Hp es un bacilo Gram-negativo, de
posteriormente es colonizada por bacterias. En
forma espiral y con gran motilidad conferida por
pocas horas, algunas especies de Streptococcus
sus flagelos, responsable del 90% de las
y, posteriormente, de Actinomyces se adhieren a
gastritis
ulceras
la pelcula, dando inicio as a la etapa de
duodenales, 70-75% de las ulceras gstricas; y
colonizacin microbiana y a la formacin de la
por
placa
crnicas,
estar
85-90%
asociado
con
de
la
las
evolucin
de
dental.
Posteriormente,
otros
metaplasia a cncer gstrico. En 1994 fue
microorganismos se establecen sobre los que ya
clasificado por la Organizacin Mundial de la
se encuentran, incrementando el espesor de la
Salud
I.
placa dental y del nmero de microorganismos,
Adicionalmente, se ha asociado de manera
por multiplicacin y por agregacin bacteriana.
concluyente a distintas formas de gastritis,
Al mismo tiempo, surge la formacin de la matriz
ulcera
duodeno,
de la placa, que ayuda a mantener estable la
adenocarcinoma gstrico y linfoma gstrico de
comunidad de microorganismos que conforman
(OMS),
pptica
como
de
carcingeno
estomago
tipo
27
en si la estructura de la misma entre los cuales

se encuentra Hp. Debido a esto se han originado
Toma de la muestra.
diversos estudios, con el objeto de aislar esta
Para la toma de muestra se utiliz una
bacteria en restauraciones, prtesis y superficies
cureta de Gracey Hu-friedy removiendo la
dentales, utilizando metodologas tradicionales
misma de la regin subgingival e interdental de
de cultivo o bien por el mtodo de la PCR, la
la placa dental. La muestra se llev a un tubo
cual se basa en la amplificacin de una
Eppendorf conteniendo 50 l de solucin salina
secuencia de ADN bacteriano para constatar la
al 0.9% y se congel a -20oC, hasta la posterior
presencia del microorganismo. Dicho aspecto es
extraccin del ADN bacteriano.
de suma relevancia para el desarrollo del

presente estudio, cuyo objetivo es reafirmar la
efectividad
de
dicha
tcnica
en
el
diagnstico de Hp, en este caso en placa

dental
su
relacin
especfica
Centrifugado.
Previa
la
extraccin
de
ADN,
se
descongelaron las muestras y se sometieron a

centrifugacin a 7000 rpm durante 10 min.
con
afecciones gstricas, adems de difundir los
Extraccin del ADN bacteriano de la placa dental
beneficios y futuras aplicaciones en el rea
Se descart el sobrenadante y se inici la

extraccin de ADN con el kit Wizard Genomic
de la odontologa
DNA Purification de Promega, para lo cual al

pellet se le agreg 600 l de solucin de lisis
MATERIALES Y MTODOS
Se presenta un estudio enmarcado dentro
de un diseo no experimental, transeccional y de
campo, cuya muestra fue de setenta y un (71)
pacientes
criterios
mayores
seleccionados
de
inclusin
de
gastrointestinales
35
utilizando
utilizados
aos,
y
sin
con
como
pacientes
sntomas
tratamiento
con
antibiticos; al menos durante tres meses

previos a la toma de muestra. Se informo a cada
paciente el propsito del estudio y previo
consentimiento para su participacin en el
mismo, todos estos aspectos en base a las
normas de biotica que protegen a los seres
humanos. Una vez finalizada esta fase se
procedi de la siguiente forma:
nuclear e incub 5 min a 80oC; se descart el

sobrenadante, se llev a temperatura ambiente y
se agreg 3 l de RNasa e incub durante 40
min a 37oC. Seguidamente se aadi 50 l de
solucin precipitante de protenas (proteinasa K,
a concentracin de 2 g/l);
y se incub en
hielo durante 5 min; se centrifug 13000 rpm por

3 min; se transfiri el sobrenadante a otro tubo
Eppendorf,
se
centrifug,
se
descart
el
sobrenadante y se precipito el ADN aadiendo

600 l de etanol al 70%, despus se centrifug,
se descart el sobrenadante y se rehidrat el
ADN con 60 l de agua libre de nucleasas.
Seguidamente, se determin la concentracin de
ADN, colocando en un tubo Eppendorf 72 l de
agua libre de nucleasas + 8 L del ADN (dilucin
28
1:10). Esta mezcla se llev al espectrofotmetro
final de 2.2 ng/L. Luego, en el termociclador
Gene Quant y se obtuvo la concentracin en
marca
ng/l, y se ajust a 110 ng/l, a partir de
MJ Research, se programo el equipo con un
absorbancias de 260 y 280.
ciclo de: 95oC por 5 min; treinta y cinco ciclos

de 95oC por 1 min, 56oC por 1 min y 72oC por 1
Deteccin de Hp con Reaccin en Cadena de la
min. Obtenido el producto amplificado de PCR.
Polimerasa.
La preparacin de la mezcla se realiz en
Electroforesis y captura de imagen.
campana de flujo laminar, previa limpieza con
Para observar la calidad del producto se
etanol al 70% y aplicacin de UV durante 15
realiz electroforesis en gel de agarosa al 2%
min, utilizando cebadores del gen ureC, cuyas
durante 90 min a 70 voltios y se expuso a luz
secuencias
ultravioleta
son
Forward:
5-
para
evidenciar
bandas
GGATAAGCTTTTAGGGGTGT TAGGGG- 3 y
cromosmicas
Reverse:
GCTTACTTTC
captur y document la imagen para el anlisis
TAACACTAACGCGC-3, los cuales amplifican
pertinente, utilizando el transiluminador UVP,
un fragmento de 294 pares de bases del gen. Es
modelo M-15, el cual est incorporado al
de hacer notar, que para la mezcla de reaccin
sistema de fotodocumentacin Photo Doc-It.
5-
amplificadas.
las
Finalmente,
se
se us el kit GoTaq Gren Master Mix de

Promega, el cual es una solucin que contiene:
RESULTADOS Y DISCUSION.
taq DNA polimerasa, desoxinucletidos a una
Da a da, se hace evidente la discrepancia
concentracin de 400 M, cloruro de magnesio a
de resultados reflejados por diversos autores en
3 mM de concentracin y buffer a pH 8.5.
lo que a Hp se refiere, ya que, existen estudios
Adicionalmente a esto, fue usada la cepa
con una alta prevalencia de positividad a
bacteriana de Hp 26695, como control positivo.
diferencia de otros que muestran escasos
En este sentido, para un protocolo de 25 L de
resultados positivos. En lo referente al presente
volumen final en cada tubo de reaccin, se
estudio, de las setenta y un (71) muestras
requiri de 12.5 L de Gotaq Gren master Mix a
examinadas, 18 (25.35%) resultaron positivas
una concentracin final de 1X; 0.25 L de
para el gen ureC de Hp, tal como se observa en
primers positivo directo y 0.25 L de primers
la Tabla 1, lo que corroborara lo antes expuesto
reverso a una concentracin final de 0.1 pmol/l
por
cada uno; 11.5 L de agua libre de nucleasas y
posibilidades de reinfeccin del microorganismo.
otros autores
en lo
referente
las
0.5 L de ADN que qued a una concentracin
29
Tabla 1 Resultado de la expresin del gen ureC de Hp en placa dental

Pacientes
Cantidad
Porcentual
Positivos
18
25.35
Negativos
53
74.64
Total
71
100
Por ende, se evidencia la sensibilidad y

especificidad
del
mtodo
de
PCR
en
autores en el ao 2006. En este sentido,
la
Martinez & Noa (2009), refieren que Hp es una
identificacin de esta bacteria en placa dental.
bacteria que coloniza e infecta la mucosa del
Este aspecto concuerda con el reporte de Song
epitelio gstrico del hombre, condicionando la
et al. (2000), quienes lo consideran el mtodo de
aparicin de una gastritis que puede evolucionar
eleccin para detectar ADN de Hp en la cavidad
hacia lcera pptica, adenocarcinoma gstrico o
bucal; al igual que Brooks et al., (2004) los
linfoma tipo MALT. En otros casos, la infeccin
cuales detectaron ADN de Hp partiendo de
se presenta de forma silente. Dichos autores
concentraciones mnimas de placa dental.
mencionan la presencia de Hp en pacientes con
Adems de esto, con el presente estudio se
gastritis y en otros con mucosa sana que
evidenci que 13 de los 18 pacientes positivos
acudieron a la Consulta de Endoscopia, del
para
Hospital
Hp,
tambin
presentaban
reflujo
Clinicoquirrgico
"Hermanos
gastroesofgico. Confirmando estos resultados,
Ameijeiras", por desrdenes en las vas del
Perrone & Berroteran (1999) afirman que la
tracto digestivo superior. Asi, Martinez & Noa
presencia de este microorganismo en la cavidad
(2009) estudiaron 50 pacientes, de ellos 30
bucal surge como una consecuencia de dicho
tenan gastritis erosiva y 20 la mucosa sana,
reflujo,
una
confirmado histolgicamente. Se detect Hp por
microbiota transitoria, que se convierte en un
amplificacin de un fragmento del gen Urec A en
microorganismo permanente de la cavidad
el 90% de los casos con gastritis erosiva y el 75
bucal. Estos aspectos, confirman la estrecha
% de los sujetos con mucosa sana mediante
relacin existente entre la infeccin por Hp y el
PCR. Por ende, llegan a la conclusin que la
desarrollo de enfermedades gastrointestinales,
infeccin por Hp es tan elevada en los pacientes
este aspecto resalta la sugerencia de que la
con gastritis como en aquellos con mucosa
placa dental y la saliva pueden ser responsables
gstrica sana, lo cual pudiera tener relacin con
para la transmisin de la bacteria y posiblemente
la colonizacin de dicho microorganismo en
funciona como va de reinfeccin despus de la
placa dental.
es
decir,
como
miembro
de
terapia de erradicacin. Dicho aspecto, fue
En este orden de ideas, Nguyen et al. (1995)
mencionado por segunda vez por los mismos
agregan que la deteccin de Hp en placa dental
30
indica que la colonizacin de esta bacteria no se
estudio la presencia de Hp en la placa dental
limita a la mucosa gstrica y que el nicho bucal
supragingival de molares, premolares e incisivos
puede servir como una posible fuente de
de 20 pacientes. Dichos autores, evidenciaron
reinfeccin de la mucosa gstrica.
que todas las muestras fueron positivas para el
Bajo esta perspectiva, diversos autores se
ADN de Hp, llegando as a la conclusin de que
han abocado a estudiar la presencia de Hp en
la placa dental realmente acta como reservorio
placa dental, entre ellos Perrone & Berroteran
de esta bacteria y advierten que los ensayos con
(1999) que exponen en su publicacin, que de
PCR demuestran ser un mtodo muy sensible y
las 69 muestras de placa dental evaluadas, solo
especifico. Por lo tanto, lo consideran el mtodo
una (1.4 %) fue positiva para la amplificacin del
de eleccin para detectar el ADN de Hp en la
gen ureC; en discrepancia con este estudio.
cavidad bucal. A diferencia de dichos autores, el
Mientras Jang-Jih et al. (1999) obtuvieron un
presente estudio evidencia la presencia de dicho
36% de resultados positivos utilizando cinco
microorganismo en algunas muestras de placa
mtodos para la deteccin de Hp por PCR.
dental lo cual se aprecia en las figuras 1 y 2.
Profundizando en este tema, el mismo autor,
L1
L2
L3
L4
L5
L6
L7
L8
1000 pb
750 pb
500 pb
300 pb
150 pb
50 pb
Figura 1 Imagen donde se aprecia el marcador de peso molecular (lnea 1), el control negativo (lnea 2),
el control positivo (lnea 3) y cinco muestras con resultado negativo (lnea 4, 5, 6, 7 y 8).
31
L1
L2
L3
L4
L5
L6
L7
L8
1000 pb
750 pb
500 pb
300 pb
150 pb
50 pb
Figura 2.Imagen donde se aprecia el marcador de peso molecular (lnea 1), control negativo (lnea 2),
control positivo (lnea 3), dos resultados positivos (lnea 5 y 7) y tres resultados negativos (lnea 4, 6 y 8)
Cheng et al. (1996) refieren que an cuando
Entre los ms nombrados figuran el uso de
la placa dental presenta una microbiota bastante
prtesis dental y la frecuencia de tratamiento
compleja, podra actuar como uno de los
odontolgico. Dicho aspecto fue estudiado en la
principales reservorios de Hp y posiblemente
presente investigacin observndose que de los
desempea
un
la
71 pacientes estudiados y referidos en la Tabla
instauracin
de
1, 9 eran portadores de prtesis dental y todos
gstrica. Por tal motivo, se han relacionado
presentaron positividad para Hp (Fig. 3 y 4).
varias condiciones bucales que predisponen a la
Dicho aspecto fue confirmado por Hirchl et al.
presencia del microorganismo en la placa dental.
(1994) que refiere que pacientes que reciben
papel
la
importante
infeccin
en
periodontal
32
L1
L2
L3
L4
L5
L6
L7
L8
1000 pb
750 pb
500 pb
300 pb
150 pb
50 pb
Fig. 3.. Imagen donde se aprecia el marcador de peso molecular (lnea 1), control negativo (lnea 2),
control positivo (lnea 3), un resultado positivo (lnea 6) los cuales son portadores de prtesis dental y tres
resultados negativos (lnea 4, 5 y 8)
L1
L2
L3
L4
L5
L6
L7
L8
1000 pb
750 pb
500 pb
300 pb
150 pb
50 pb
Fig. 4. Imagen donde se aprecia el marcador de peso molecular (lnea 1), control negativo (lnea 2),
control positivo (lnea 3), dos resultados positivos (paciente portador de prtesis dental, lnea 5 y 8) y tres
resultados negativos, pacientes no presentan prtesis dental (lnea 4, 6 y 7)
33
tratamiento odontolgico presentan niveles mas
el 100% de los pacientes con sntomas de reflujo
bajos de seropositividad para Hp, mientras
gastroesofgico arrojaron resultados positivos
aquellos
dental
en cuanto a Hp se refiere. En contraparte, en
altos
otro estudio el mismo ao, result que 100%
portadores
permanente
presentan
de
prtesis
niveles
ms
demostrados por lo la tcnica de PCR.
(n=48) de los pacientes presentaron positividad
No obstante, debido a la gran variabilidad
para Hp en placa dental, independientemente de
gentica del Hp demostrada por estudios de
la presencia de lesin en la mucosa gstrica
genotipificacin y secuenciacin, la mayora de
(Jang-jih et al., 1999).
las investigaciones basadas en PCR, se han

dirigido hacia la identificacin de algunos genes
CONCLUSIONES.
especficos, dentro del cual destacan el vacA, el
Los resultados presentados en este trabajo
cagA y el ureC; sin embargo, cabe destacar que
revelan la importancia de la aplicacin del
el
una
mtodo de PCR en placa dental, el cual, podra
fosfoglucosamin mutasa (GlmM), la cual es
servir como recurso auxiliar de diagnostico en la
esencial y exclusiva en el genoma del Hp para
infeccin por Hp en pacientes con gastropatas.
su crecimiento constituye el gen ms empleado
En este sentido, diversos autores afirman que la
para
reportndose
deteccin de dicho microorganismo en placa
buenos valores de sensibilidad y especificidad
dental, indica que la colonizacin del mismo no
(Perrone et al., 2006),. De esta manera, los
se limita a la mucosa gstrica y que el nicho
referidos antecedentes marcaron las pautas
bucal podra servir como posible fuente de re
fundamentales para realizar esta investigacin,
infeccin para la misma. Dicho aspecto se
con la finalidad de determinar la presencia de Hp
evidencia a nivel medico; por el fracaso de
en placa dental a travs de PCR con la
tratamientos erradicadores, lo cual es justificado
utilizacin del gen ureC empleado para un buen
con una posible resistencia bacteriana de Hp
diagnostico.
ante el antimicrobiano indicado. Por otro lado,
gen
que
ureC
realizar
el
expresa
diagnstico,
para
Por otra parte, Scarano et al. (2005) en la
cabe resaltar, que existe mayor predisposicin
Universidad Central de Venezuela, opinan que la
de positividad de Hp en pacientes portadores de
presencia de lesin en la mucosa gstrica
prtesis, en este caso prtesis fija, ya que las
favorece la proliferacin de Hp en el medio y
mismas pueden actuar como nicho para el
consecuentemente aumenta la colonizacin de
microorganismo antes mencionado. A travs del
la mucosa gstrica por el patgeno y refiere
estudio se logr estandarizar y demostrar la
adems que la infeccin de la mucosa gstrica
eficiencia de la metodologa de PCR en la
por Hp frecuentemente ocurre con presencia
deteccin de Hp en muestras proveniente de
simultnea del patgeno en la placa dental.
placa dental, en UNIMPA de la Facultad de
Dicha hiptesis llam la atencin, pues pudo
Odontologa de la Universidad de Carabobo.
confirmarse a travs del presente estudio donde
34
RECOMENDACIONES.
Hirschl AM, Ritcher M, Makristhatis PM, Pruckl
Existe la necesidad de profundizar las
B, Willinger K, Schutze K & Rotter M (1994)
investigaciones enfocadas en la deteccin del
Single and multiple strain colonization in
Hp en placa dental, para poder determinar as la
patients with Helicobacter pylori-associated
aplicacin de la tcnica PCR como recurso
gastritis: detection by macrorestriction DNA
auxiliar de diagnostico de Hp en pacientes con
analysis. J. Infect. Dis.170: 473-475.
gastropatas.
Jang-Jih L, Cherng-Lih P, Rong-Yaun S, ChiHsiang C & Qinyuan L (1999) Comparison of
AGRADECIMIENTOS
Para la materializacin del presente trabajo
ha sido significativo el aporte del Fondo de
five
PCR
methods
for
detection
of
Helicobacter pylori DNA in gastric Tises. J.

Clin. Microbiol. 37: 772.
Subvencin de la Facultad de Odontologa de la
Kabris S (2004) Detection of Helicobacter pylori
Universidad de Carabobo; adems, el apoyo
DNA in feces and saliva by Polimerase
incondicional de la Profa. Flor Herrera y del TSU
Chain Reaction: a review. Helicobacter. 9:
Jos Rivero, del Centro de Investigaciones
115- 123.
Biomdicas (BIOMED-UC); de igual manera
Leontiadis GI, Sharma VK, Howden CW (2000)
cabe resaltar, el cordial agradecimiento a la Dra
Infeco por Helicobacter pylori fora do Trato
Mnica Contreras, del Instituto Venezolano de
Gastrointestinal. JAMA Brasil. 4: 3413-28.
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36
La Bionanotecnologa y otras Estrategias de Neuroproteccin para la

Enfermedad de Parkinson
Jos L. Calderon1, Paulo Silva2, Eric Avila3, Rodrigo Bolaos3 y Gerardo Rivera1,3*
1
Institute for BioNanotechnology in Medicine, Northwestern University, Chicago, IL.

60611, USA
2
Faculdade de Medicina da Universidad de So Paulo, 01246-000, Brazil
3
Laboratorio de Neurociencias y Biotecnologa, Escuela de Medicina, Universidad
Panamericana, Mxico, D.F., 03920, MEX.
*g-rivera@northwestern.edu
RESUMEN
La enfermedad de Parkinson constituye un reto para numerosos cientficos que en la actualidad buscan
encontrar un tratamiento que sea capaz de detener la progresin de ste debilitante proceso
neurodegenerativo. Las estrategias utilizadas al momento para curar el padecimiento se han visto
empaadas por resultados ambiguos. El reciente desarrollo de bionanomateriales que promueven la
reparacin, proteccin y regeneracin neuronal representan no solo una posibilidad teraputica para esta
enfermedad; si no que consolidan el trabajo cientfico interdisciplinario que es donde reside el futuro de la
ciencia.
Palabras clave: Neuroproteccin, Enfermedad de Parkinson, Bionanotecnologa.
ABSTRACT
Parkinsons disease constitutes a challenge for many scientists who are nowadays searching for a
treatment to stop the progression of the neurodegenerative process. Current strategies to find a curative
treatment have been discouraged because of ambiguous results. Bionanotechnology and the recent
development of bionanomaterials that promote neural repair, protection and regeneration, represent not
only a therapeutic possibility for the treatment of this disease, they will also consolidate the interdisciplinary
scientific work, which is where the future of science resides.
Keywords: Neuroprotection, Parkinsons disease, Bionanotechnology
INTRODUCCIN
personas que sufran de ste mal se duplique en
La enfermedad de Parkinson (EP) es el
los prximos 10 a 15 aos debido al incremento
segundo padecimiento neurodegenerativo ms
de la poblacin en el estrato de los adultos
frecuente despus del Alzheimer (Nussbaum &
mayores. Segn datos del Instituto Nacional de
Ellis, 2003), afecta aproximadamente a 1.5
Neurologa en Mxico, 50 de cada 100,000
millones de norteamericanos y cerca de 500,000
habitantes la padecern (GonzlezTorres &
nuevos casos se reportan anualmente (De Lau &
ArmendrizBorunda,
Breteler, 2006). Se espera que el nmero de
prevalencia en hombres y se presenta en sujetos
2005).
Tiene
mayor
37
de todas las razas y grupos tnicos, aunque se
activarn las endonucleasas que producen una
ha demostrado que la poblacin de raza hispana
condensacin y fragmentacin de la cromatina
y raza blanca son ms propensos a padecerla.
nuclear, pero la membrana celular se conserva
Los sntomas de la EP estn asociados con la
integra aunque con un aspecto de tipo globuloso.
degeneracin
neuronas
La mitocondria se encuentra bajo la accin
dopaminrgicas localizadas en la pars compacta
equilibrada entre elemento antiapoptsicos (Bclw,
de la sustantia nigra (SNpc) y est caracterizada
Bcl-2, Bcl-xl, A-1, bFGF, GDGF, NT 4/5, etc.) y
por cuatro signos cardinales: temblor, rigidez
elementos proapoptsicos (Bad, Bak, Bik, Bax,
muscular, bradicinesia (lentitud en el movimiento)
HrK, y Mtd/Bok). Gracias a este equilibrio se
y alteraciones de la postura (Jankovic, 2008).
mantiene protegido el factor Apaf-1, pero cuando
muerte
de
Este trastorno an no tiene cura, ya que se
se pierde como consecuencia de una seal
desconoce la causa que genera la muerte
intracelular o extracelular,
neuronal. Sin embargo, se tienen pruebas
consigue la activacin de la cadena de las
suficientes
la
caspasas. Existen tambin ligandos especficos
neurodegeneracin progresiva est relacionada
que activan una familia de receptores de
a una serie de mecanismos en los que se
membrana que tienen el dominio de muerte,
encuentran
cuya activacin facilitar la accin de Apaf-1
para
admitir
involucrados
que
anomalas
mitocondriales, estrs oxidativo, aminocidos

2+
excitadores y el incremento de calcio (Ca )

intracitoplsmatico
(Youdim
col.,
ste queda libre y
sobre la cadena de caspasas (Bredesen, 1995).

La sucesin de eventos que se presentan en
2006:
la necrosis comienza con la ausencia de oxgeno
Schapira, 2008; Palacino y col., 2004), el
(O2), que provoca una fuerte cada del potencial
problema radica en que resulta incierto si stos
de membrana neuronal debido a cambios en la
mecanismos son primarios o secundarios. Dado
conduccin de potasio (K+).
lo anterior, la nocin de neuroproteccin aparece
liberacin del neurotransmisor glutamato (Glu),
como una necesidad de obtener el resguardo de
que al activar los receptores N-metil-D-aspartato
las neuronas dopaminrgicas situadas en la SNc
(NMDA) provoca la apertura de canales de calcio
para impedir su degeneracin progresiva.
(Ca2+). Lo anterior genera: 1. Imposibilitar la
Esto origina la
funcin mitocondrial haciendo descender los

MUERTE DE LA NEURONA
El anlisis de la muerte neuronal necesita de
niveles de adenosin-trifosfato (ATP), afectando

varios procesos mediados por Ca2+ que son
la distincin entre apoptosis y necrosis, ya que
ATP-dependientes;
aunque son procesos que finalizan con el cese
concentraciones citoplasmticas de radicales
de la vida celular, tienen rumbos diferentes que
libres de oxgeno (O2); y 3. Activar enzimas Ca2+-
es necesario conocer e identificar. En el proceso
dependientes del tipo fosfolipasas (PLD, PLA2,
de la muerte por apoptosis, un componente clave
etc.), que originan mensajeros de heterognea
es la mitocondria, en la que los cambios de
categora y funcin (cinasas, leucotrienos y cido
permeabilidad en sus membranas provocan la
araquidnico). Tambin es estimulada la enzima
activacin de las caspasas; stas enzimas
oxido ntrico sintetasa (NOS) con la consiguiente
2.
Aumentar
las
38
acumulacin
de
su
estrategias que puedan regular estos sistemas,
contribucin a la produccin de ms radicales
no debe extraarnos el que haya irrumpido con
libres.
fuerza el trmino de tratamiento neuroprotector.
Estas
oxido
ntrico
variaciones
(NO)
neuroqumicas
producen edema, destruccin de los organelos

intracelulares,
membranas
prdida
externas
de
con
continuidad
la
de
TRATAMIENTO ANTIOXIDANTE
consecuente
En estudios de investigacin realizados con
expulsin del contenido interno y reacciones
cultivos de neuronas dopaminrgicas se ha
inflamatorias (Goldstein & Kroemer, 2006).
comprobado
que
la
dopamina
(DA)
es
Los dos tipos de muerte celular pueden
generadora de estrs oxidativo (Gille y col.,
coexistir y se ha demostrado que la aparicin de
2006); de la misma manera se ha demostrado en
uno u otro depende de la eficacia del estmulo
estudios post mortem de pacientes con EP que
desencadenante; es decir, la calidad del estmulo
la SNpc se encuentra en un estado de estrs
no es factor obligatoriamente condicionante del
oxidativo y que la lesin causada por radicales
tipo de muerte celular que aparece. Existen otros
libres favorece a la patogenia de la muerte
factores que tambin influyen, un ejemplo
celular. Son bien conocidas dos vas que pueden
caracterstico es la isquemia cerebral, en la que
generar radicales libres muy citotxicos (Figura
la proporcin de apoptosis y de necrosis vienen
1): a) la propia DA, por medio de su metabolismo
determinadas por la intensidad y duracin de la
oxidativo por monoamino-oxidasa tipo B (MAO-
agresin tisular, as como la localizacin del
B) o de su autooxidacin (Finberg y col., 2000), y
tejido.
las
b) la va del radical libre oxido ntrico (NO), que
neuronas mueren ms rpidamente por efecto de
puede convertirse en peroxinitrito (ONOO-) en
necrosis; mientras que en la zona de penumbra,
presencia de O2- (Iravani y col., 2002). La DA
la muerte celular aparece ms tardamente por
puede generar perxido de hidrgeno (H2O2) por
apoptosis. Sin embargo, es habitual que en el
dos
striatum impere la apoptosis (Nicotera & Leist,
autooxidacin. El H2O2 es un elemento oxidante
1997).
pero adems, en combinacin con hierro (Fe2+),
En
la
zona
isqumica
nuclear
vas:
metabolismo
oxidativo
por
La duracin de los estmulos nocivos, su
forma el radical hidroxilo libre (OH), uno de los
intensidad y la especificidad de las neuronas
radicales ms citotxicos (Chen y col., 2002). En
daadas son factores que establecen el tipo de
circunstancias normales el glutatin reducido
respuesta que lleva a la muerte. En este sentido
(GSH), neutraliza el H2O2, pero si su produccin
hay que destacar la riqueza de los factores de
est aumentada o los niveles de GSH estn
proteccin o antimuerte que pueden existir en
disminuidos,
un sitio determinado, como son: sistemas
produciendo neurotoxicidad. En la Fig. 1 se
depuradores de radicales libres (superxido
muestra cmo el radical NO interacta con el
dismutasa, glutatin, etc.), intensidad y eficiencia
superxido O2 para formar ONOO-, que es
de sistemas transportadores de Ca2+, protenas
protonado y genera el radical hidroxilo (OH). El
2+
se
desequilibra
la
reaccin
fijadoras de Ca , inhibidores intracelulares de
ONOO- produce la nitracin de molculas de
proteasas, etc. Con la finalidad de elaborar
tirosina que pueden modificar la fosforilacin de
39
Fig. 1. Reacciones oxidativas que se llevan acabo en las neuronas dopaminrgicas de la sustancia negra
pars compacta, donde se generan radicales libres muy citotxicos. A. Estructura qumica de la Dopamina
(DA). B. Frmula qumica de la arginina.
receptores de tirosina kinasa (Trk), con los que
revelado en sistemas neuronales en los que no
habran de interactuar las neurotrofinas (NT). Lo
hay
anterior se ha definido por un aumento de
desmetildeprenilo (Mytilineou y col.,1997; Ju y
nitrotirosina en el ncleo de los cuerpos de Lewy
col., 1994), puede inhibir la serie de reacciones
en la sustancia negra de pacientes con EP. La
que producen apoptosis mediante la induccin
eficacia de la selegilina como antioxidante ha
de eventos transcripcionales que favorecen la
sido evidenciada en ensayos clnicos realizados
sntesis de nuevas protenas; concretamente, se
en pacientes. La selegilina inhibe la MAO-B e
ha demostrado su capacidad de alterar la
incrementa la concentracin de DA cerebral, por
expresin de diversos genes implicados en la
lo tanto, disminuye la capacidad de generar
apoptosis (SOD, bcl-2, bclxl, NOS y c-jun) (Beal,
H2O2;
1996). Por lo que a su accin antioxidante se
esto
es,
podra
actuar
de
manera
simultnea como frmaco que restituye la falta
MAO-B
ni
DA.
Su
metabolito
podra aadir una accin antiapoptsica.
de DA y como protector frente a la accin de
En los pacientes con EP se ha demostrado
agentes oxidantes (Dewey, 2004). Es posible
incremento de hierro, en su forma ferrosa, que
que cumpla otras acciones adems de inhibir la
tiene la capacidad de originar radicales libres en
MAO-B, ya que su accin neuroprotectora se ha
la sustancia negra y reduccin de su principal
40
protena fijadora, la ferritina, que lo mantiene en
(Ebselen) o por tcnicas de ingeniera gentica
una forma estable (Griffiths y col., 1999; Kienzi y
que induzcan su sntesis (Moussaoui y col.,
col., 1999). El agente quelante del hierro, la
2000).
desferoxamina,
no
pasa
bien
la
barrera
hematoenceflica por lo que es complicado que
FACTORES NEUROTRFICOS
pueda manifestar un buen efecto clnico.
La eliminacin de los factores de crecimiento
La fenilbutilnitrona y los salicilatos reaccionan
en
los
medios
de
cultivo
de
neuronas
con radicales OH, a los que atrapan. Se han
dopaminrgicas induce apoptosis, mientras que
iniciado con ellos ensayos clnicos para ver su
la adicin del factor de crecimiento derivado del
posible accin preventiva en la evolucin de la
hueso (BDNF), factor de crecimiento derivado de
enfermedad. Por ltimo, se est estudiando la
la gla (GDNF), neurotrofinas 4/5, el factor de
posibilidad de incrementar los niveles de GSH
crecimiento de fibroblasto tipo a y b (FGF-a y
que pueden estar disminuidos en la sustancia
FGF-b), y el factor de crecimiento epidrmico
negra de estos pacientes, ello se puede
(EGF)
conseguir con frmacos que sean anlogos
diferenciacin neuronal (Tabla 1) (Apfel, 1997).
favorecen
su
supervivencia
como el 2-fenil-1,2-benzisoselenazol-3(2H)-uno
Tabla 1. Factores de crecimiento de utilizacin posible, como agentes neuroprotectores en la EP.
El GDNF es el factor que ha mostrado tener

una
accin
dopaminrgicas
protectora
en
sobre
varios
expresan
en
mesencfalo
mejoran
las
neuronas
condiciones para el crecimiento y supervivencia
modelos
de las neuronas trasplantadas en este sitio en
experimentales in vivo de EP (Gash y col., 1996).
animales
De hecho, el GDNF se produce en el cuerpo
(Commissiong y col., 1997). La dificultad radica
estriado, por lo que se considera un factor de
en el modo de lograr que dichos factores de
crecimiento de las neuronas dopaminrgicas.
crecimiento se liberen de forma continua, til y
Tambin
prctica.
los
factores
de
crecimiento
de
de
experimentacin
(Tabla
1)
transformacin 2 y 3 (TGF-2 y el TGF-3) se
41
BIONANOTECNOLOGA
APLICADA
LA
medicamentos
ENFERMEDAD DE PARKINSON
La
dificultad
que
representa
polmeros que son capaces de encapsular
el
protenas,
secuencias
lograr
peptdicas ancladas a estructuras que permitan
concentraciones estables de medicamentos en el
presentar eficazmente las seales a las clulas,
tejido cerebral o incluso lograr que atraviesen la
micelas o microcpsulas con la habilidad de
barrera hematoenceflica, ha representado un
contener medicamentos o clulas productoras de
serio obstculo a superar para el tratamiento de
factores de crecimiento que favorezcan procesos
la EP. Por lo anterior es necesario el desarrollar
regenerativos y nanofibras que por su estructura
medios a travs de los cuales estos fines puedan
provean soporte mecnico y sealizacin intensa
ser alcanzados.
a las clulas vecinas.
El campo de la ingeniera biomdica en
En
el
caso
de
la
EP
el
abordaje
conjuncin con las ciencias de la salud, ha
biotecnolgico ms exitoso al momento ha sido
llevado a cabo investigacin para el desarrollo de
la implantacin de microesferas cargadas de
biomateriales que sean capaces de permitir y
GDNF en el cuerpo estriado de ratas lesionado
aumentar la entrega de medicamentos dirigida a
con 6-hidroxidopamina (6-OHDA). Posterior a la
sitios especficos as como mantenerlos en
intervencin fue observada la recuperacin
concentraciones
funcional,
constantes,
para
tener
los
crecimiento
de
fibras
tirosina-
efectos deseados. Lo anterior ha permitido la
hidroxilasa positivas (TH ) y reaparicin de los
creacin de la bionanotecnologa que se encarga
transportadores de dopamina. Sin embargo, tras
de la formacin, identificacin y aplicacin de
el seguimiento de la evolucin de las ratas, se
biomateriales a escala nanomtrica; que estn
hicieron evidentes recadas en la funcin motora,
siendo utilizados para regeneracin y reparacin
probablemente debidas al agotamiento de GDNF
del tejido neuronal en combinacin con el
y la degradacin de las microesferas (Deierborg
implante de clulas madre para potenciar y/o
y col., 2008).
favorecer la detencin del proceso degenerativo
Estudios an no publicados por Rivera y col., que
(Orive y col., 2009).
se llevan a cabo con la insercin de nanofibras
Para
el
desarrollo
de
materiales
que
presentan
pptidos
bioactivos
en
su
neuroprotectores es necesario comprender los
superficie y que promueven la elongacin de
mecanismos moleculares por los cuales ocurre la
dendritas y axones (mediante la activacin del
muerte celular, ya que lo que se busca al
receptor 1 de integrinas), en un modelo de
elaborar dichos sistemas es reducir el proceso
deplecin aguda de dopamina, ha demostrado
inflamatorio, la excitotoxicidad generada por el
promover la recuperacin funcional (Fig. 2). Sin
2+
Glu o el desbalance de Ca , intervenir en el
embargo, hubo variaciones relevantes en las
cese de la cascada apopttica o algunas otras
conductas
causas secundarias de muerte por agresiones
referencia a ello, puede deberse a la estabilidad
intra o extracelulares.
mecnica
de
del
los
individuos
complejo,
su
tratados.
tiempo
En
de
Entre los materiales potencialmente utilizables
degradacin, la calidad de la sealizacin o las
para lograr estos cometidos se encuentran
interacciones desconocidas que pueda tener con
42
Fig. 2. Efecto neuroprotector observado en la sustancia negra pars compacta de un ratn con deplecin
severa de dopamina tras la inyeccin intracerebral de un nanomaterial bioactivo derivado de la laminina.
A. Tincin de Nissl de la sustancia negra pars compacta de un ratn tratado con reserpina a razn de 5
mg kg-1, intraperitoneal por 5 das consecutivos, lo que produce un dficit severo de dopamina cerebral,
una disminucin en la sinapsis glutamatrgicas y en las espinas de las neuronas estriatoplidas medias
(134x). B. Despus de 30 das de la administracin del bionanomaterial, se observa una recuperacin de
la regin de estudio (134x).
receptores
celulares,
enzimas
neurotransmisores.
microesferas o bombas de infusin externas. Sin

embargo, el riesgo de utilizarlos es que pueden
Otro abordaje que resulta interesante y que
desencadenar una reaccin inmunolgica severa
involucra la produccin constante de GDNF
y as comprometer el resultado teraputico que
dentro del parnquima cerebral, es la insercin
se espera (Tabla 2).
de virus por diseo con ADN recombinante que

sean capaces de transferir genes in situ y as
lograr la estabilidad de liberacin del compuesto,
que
no
puede
ser
alcanzado
con
las
CONCLUSIN
La comprensin de los principios bsicos del
funcionamiento
biolgico
permitir
los
43
Tabla 2. Eficacia de diferentes vectores transportadores de GDNF (lentivirus, adeno-virus asociados y

adenovirus) para inducir la tirosina hidroxilasa (TH) en el mesencfalo de diferentes modelos animales de
EP.
dedicados a la ingeniera biomdica desarrollar

mecanismos
de
neuroproteccin
que
Beal MF (1996) Therapeutic effects of nitric oxide
eventualmente tendran un potencial teraputico.
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Deber tomarse en cuenta que la elaboracin de
Neurodegeneration and Neuroprotection in
bionanomateriales que sean aptos para tratar o
Parkinsons Disease. Olanow CW, Jenner P,
prevenir la EP debe cumplir los siguientes
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requisitos: ser biocompatible, biodegradable,
pp. 91-101.
qumica y mecnicamente estable, no txico,
Bensadoun JC, Deglon N, Tseng JL, Ridet JL,
maleable y controlable. Creemos que el camino
Zurn AD & Aebischer P (2000) Lentiviral
que se presenta frente a nosotros, depara
vectors as a gene delivery system in the
grandes retos para poder lograr los efectos
mouse
neuroprotectores deseados para la EP.
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neuron
Mandel RJ, Spratt SK, Snyder RO & Leff SE
and
striatum
survival
promotes
and
axonal
(1997) Midbrain injection of recombinant
sprouting but not striatal reinnervation or
adeno-associated virus encoding rat glial cell
functional recovery in the partial 6-OHDA
line-derived neurotrophic factor protects nigral
lesion model. Exp. Neurol. 161: 503516.
neurons in a progressive 6-hydroxydopamine-
Schapira
AHV
(2008)
Mitochondria
in
the
induced degeneration model of Parkinsons
aetiology and pathogenesis of Parkinson's
disease in rats. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.
disease. Lancet Neurol. 7: 97-109.
94: 408314088.
Youdim MBH, Edmondson D & Tipton KF (2006)
Moussaoui S, Obinu MC, Daniel N, Reibaud M
The
therapeutic
potential
of
monoamine
& Blanchard V (2000) The antioxidant ebselen
oxidase inhibitors. Nat. Rev. Neurosci. 7: 295-
prevents neurotoxicity and clinical symptoms
309.
in a primate model of Parkinsons disease.

Exp. Neurol. 166: 235-245.
Mytilineou C, Radcliffe PM & Olanow CW (1997)
L-()-Desmethylselegiline, a metabolite of L-(
)-selegiline, protects mesencephalic dopamine
neurons
from
excitotoxicity
in
vitro.
J.
Neurochem. 68: 434-436.
46

Biotecnologia y Bioingenieria

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Ao 2010

Dra. Mara Luisa Villarreal Ortega

Dr. Sergio Snchez Esquivel

Dr. Alfredo Martnez Jimnez

Dr. Luis Bernardo Flores Cotera

Dra. Maricarmen Quirasco Baruch

Dr. Fernando Luis Garca Carreo

Dra. Mara Soledad Crdova Aguilar

Dr. Mariano Gutirrez Rojas

Dra. Ana Carmela Ramos Valdivia

Dra. Romina Rodrguez Sanoja

Dr. Francisco Javier Cervantes Carrillo

Dra. Sara Sols Pereira

DISEO GRAFICO E IMAGEN

Q.A. Ofelia Edith Carren Rodrguez

Lic. Nayeli Quinto (SODIO NET)

Q.A. Ofelia Edith Carren Rodrguez

ISSN 0188-4786, revista cuatrimestral publicada por la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

Instrucciones para autores

Cultivo Monoxnico Sumergido del Nematodo Entomopatgeno,

Tcnica de PCR Como Estrategia Biotecnolgica Para Deteccin de

La Bionanotecnologa y otras Estrategias de Neuroproteccin para

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

Para tesis de pre y posgrado:

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

Cultivo Monoxnico Sumergido del Nematodo Entomopatgeno,

entomopatgenos, biocontrol, variedades silvestres.

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

sustancias qumicas en la agricultura, se han

Steinernema y Heterorhabditis, ha mostrado ser

reportado efectos ecolgicos negativos como

efectivo en ciertos sistemas agrcolas para

contaminacin de suelo y agua, impactos en las

cadenas alimentarias, as como efectos sobre la

salud humana (http://www.fao.org/ag/magazine/

steinernemtidos como heterorhabdtidos han

abuso en el uso de sustancias con actividad

establecido relaciones evolutivas simbiticas

insecticida es preocupante. En este sentido, el

con bacterias Gram negativas de los gneros

control biolgico ha mostrado ser una alternativa

Xenorhabdus y Photorhabdus, respectivamente,

viable para el control de un amplio nmero de

las cuales pueden presentar dos fenotipos,

insectos plaga (Hajek, 2004). Especficamente,

siendo nicamente la llamada fase I, esencial

el uso de las llamadas fases

para la actividad entomopatognica as como

BioTecnologa, Ao 2010, Vol. 14 No. 1

para la reproduccin de los nematodos (Forst et

operacin. Ms an, son escasos los estudios

al., 1997). La bacteria es acarreada en el

relacionados con los efectos de las condiciones

intestino del IJ, el cual es el nico estadio de

hidrodinmicas y de transferencia de oxgeno