MTODO DE COLORACIN DE ZIEHL NEELSEN

La tincin de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich para
poner de manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis en
muestras clnicas de pacientes.
Esta tcnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).
La tcnica de Z-N fuerza la penetracin de la fucsina bsica en la pared celular
mediante la accin combinada del fenol y el calor, que aumentan la fluidez de la
capa de cidos miclicos: el calor derrite el componente ceroso y el fenol acta
a modo de disolvente, permitiendo el paso del colorante bsico que se une a los
cidos miclicos con carga negativa. Cuando cesa la aplicacin de calor y/o se
elimina el exceso de fenol mediante un lavado con agua, la pared recupera su
consistencia cerosa, pero las molculas de fucsina quedan atrapadas en su
espesor.
Con la coloracin de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos delgados,
ligeramente curvos, rojo fucsia, destacndose claramente contra el fondo azul.
MATERIALES:

Portaobjetos
Mechero o encendedor individual
Asa de siembra
Pipetas
Pinzas de madera
Microscopio ptico (12 Microscopios como mnimo)
Equipo de tincin (barras paralelas)

REACTIVOS:

Fucsina fenicada bsica

Alcohol acido 3,0 %
Azul de metileno
Muestra de esputo
Aceite de inmersin.
Tinta China

OTROS:

Guantes granel
Mascarilla

Jabn papel toalla

PROCEDIMIENTO:

Lavarse las manos.

Colocarse los materiales de proteccin personal
Preparacin del material
Ordenar las muestras.

Coloracin:

Disponer dos varillas de vidrio en forma paralela, a una distancia de

aproximadamente 5 cm entre una y otra, una sobre un soporte dentro del
lavado/pileta de coloracin.
Filtrar la cantidad de fucsina necesaria para las tinciones a realizar en la
jornada. Si el nmero de baciloscopia a colorear es pequeo, se puede
filtrar la fucsina directamente cuando se la deposita sobre el extendido a
travs de un pequeo embudo con papel de filtro.
Colocar sobre el soporte las lminas fijadas conservando el orden
numrico con el extendido hacia arriba y manteniendo una separacin de
al menos 1cm entre ellas.
Cubrir totalmente la superficie del extendido con fucsina bsica fenicada
recin filtrada. Dispensar el colorante con suavidad, sin salpicar y sin tocar
con el gotero o con el embudo los extendidos.
Con la llama de un hisopo embebido en alcohol calentar suavemente por
debajo de los extendidos, con movimientos de vaivn, hasta que observe
que se desprenden los primeros vapores blancos. No calentar con
mechero.
En caso de derrame del colorante, reponer la fucsina, no dejar secar el
preparado.
En el trmino de aproximadamente cinco minutos calentar tres veces hasta
emisin de vapores; esto es suficiente para que la fucsina penetre
adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lpidos. No hervir la fucsina
porque la pared de los bacilos puede destruirse y colorearse mal.
Con una pinza, levantar cuidadosamente la lmina portaobjetos desde el
extremo ms cercano al operador. Enjuagar con abundante agua a baja
presin, con un frasco o un grifo. Lavar muy suave y cuidadosamente la
superficie eliminando totalmente la solucin de fucsina. Girar el extendido
y lavar con cuidado tambin la parte posterior.
Inclinar el portaobjetos para eliminar el exceso de agua y as evitar diluir los
reactivos que se utilizarn a continuacin.

Decoloracin:

Cubrir la totalidad del extendido con solucin decolorante y dejar actuar

aproximadamente 3 minutos.
Enjuagar con abundante agua a baja presin.
Verificar que el extendido se ha decolorado (las partes ms gruesas del
extendido a lo sumo conservan un leve tinte rosado). Si se observan
cmulos rojos o coloracin rosada intensa, volver a cubrir con solucin
decolorante, dejarla actuar entre uno y tres minutos y enjuagar
nuevamente.
Eliminar el exceso de agua inclinando el portaobjetos

Coloracin de fondo:

Cubrir todo el extendido con solucin de azul de metileno.

Dejar actuar durante un minuto.
Enjuagar las lminas en ambas caras con agua a baja presin y limpiar
parte inferior con un algodn si ha quedado coloreada.
Observar si las lminas conservan la numeracin clara y visible. Si no es as
volver a numerarlas.
Dejar secar las lminas a temperatura ambiente, apoyndolas en posicin
vertical en un soporte sobre un papel absorbente. No apoyar papel
absorbente sobre el extendido.