SET DE EXPERIMENTOS DE COLORACIN PARA BACILOSCOPIA

Integrantes:

Mirko Prraga
Rodrigo Loza

Tema: Tincin Ziehl Neelsen

Fecha de Realizacin: 22/06/2016

Introduccin
La tincin de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich para poner
de manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis en muestras
clnicas de pacientes.
Esta tcnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

La tcnica de ZN fuerza la penetracin de la fucsina bsica en la pared celular

mediante la accin combinada del fenol y el calor, que aumentan la fluidez de la
capa de cidos miclicos: el calor derrite el componente ceroso y el fenol acta a
modo de disolvente, permitiendo el paso del colorante bsico que se une a los
cidos miclicos con carga negativa. Cuando cesa la aplicacin de calor y/o se
elimina el exceso de fenol mediante un lavado con agua, la pared recupera su
consistencia cerosa, pero las molculas de fucsina quedan atrapadas en su espesor.
Con la coloracin de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos delgados,
ligeramente curvos, rojo fucsia, destacndose claramente contra el fondo azul.
Contextualizacin del problema
El problema a tratar en esta gua es el siguiente: una vez realizada la tincin ZN en
una placa se presenta la dificultad de tener un fondo de imagen (al ser observada la
placa en el microscopio) que vara en aspecto de acuerdo a diferentes factores
como ser el grosor de la muestra de esputo, la concentracin de los reactivos al
realizar la tincin, etc. Esto se considera un problema, especialmente para el
diagnstico computarizado de estas imgenes, ya que crea cierta dispersin o

incertidumbre con respecto a la claridad que se puede obtener como producto de

esta tcnica y tiene incidencia en la efectividad del resultado del diagnstico si es
que la imagen es muy distorsionada.
Objetivos
El objetivo principal de esta gua es realizar la tincin de Ziehl Neelsen haciendo
variar parmetros como ser pH de la muestra de esputo, concentracin de
reactivos, procedencia de reactivos, colorante secundario o de fondo (azul de
metileno, permanganato de potasio y rojo de tiazina) con el fin de encontrar qu
combinacin o magnitud de estos permite tener una imagen clara y de mnima
distorsin para un mejor procesamiento computarizado de la misma.
Desarrollo
A continuacin se detalla el procedimiento original para realizar la tincin Ziehl
Neelsen:

Coloracin:

- Disponer dos varillas de vidrio en forma paralela, a una distancia de

aproximadamente 5 cm entre una y otra, una sobre un soporte dentro del
lavabo/pileta de coloracin.
- Filtrar la cantidad de fucsina necesaria para las tinciones a realizar en la jornada.
Si el nmero de baciloscopia a colorear es pequeo, se puede filtrar la fucsina
directamente cuando se la deposita sobre el extendido a travs de un pequeo
embudo con papel de filtro.
- Colocar sobre el soporte las lminas fijadas conservando el orden numrico con el
extendido hacia arriba y manteniendo una separacin de al menos 1cm entre ellas.
- Cubrir totalmente la superficie del extendido con fucsina bsica fenicada recin
filtrada. Dispensar el colorante con suavidad, sin salpicar y sin tocar con el gotero o
con el embudo los extendidos.
- Con la llama de un hisopo embebido en alcohol calentar suavemente por debajo
de los extendidos, con movimientos de vaivn, hasta que observe que se
desprenden los primeros vapores blancos. No calentar con mechero.
- En caso de derrame del colorante, reponer la fucsina, no dejar secar el preparado.
- En el trmino de aproximadamente cinco minutos calentar tres veces hasta
emisin de vapores; esto es suficiente para que la fucsina penetre adecuadamente
en el bacilo y se fije a sus lpidos. No hervir la fucsina porque la pared de los bacilos
puede destruirse y colorearse mal.

- Con una pinza, levantar cuidadosamente la lmina portaobjetos desde el extremo

ms cercano al operador. Enjuagar con abundante agua a baja presin, con un
frasco o un grifo. Lavar muy suave y cuidadosamente la superficie eliminando
totalmente la solucin de fucsina. Girar el extendido y lavar con cuidado tambin la
parte posterior.
- Inclinar el portaobjetos para eliminar el exceso de agua y as evitar diluir los
reactivos que se utilizarn a continuacin.

Decoloracin:

- Cubrir la totalidad del extendido con solucin decolorante y dejar actuar

aproximadamente 3 minutos.
- Enjuagar con abundante agua a baja presin.
- Verificar que el extendido se ha decolorado (las partes ms gruesas del extendido
a lo sumo conservan un leve tinte rosado). Si se observan cmulos rojos o
coloracin rosada intensa, volver a cubrir con solucin decolorante, dejarla actuar
entre uno y tres minutos y enjuagar nuevamente.
- Eliminar el exceso de agua inclinando el portaobjetos

Coloracin de fondo:

- Cubrir todo el extendido con solucin de azul de metileno.

- Dejar actuar durante un minuto.
- Enjuagar las lminas en ambas caras con agua a baja presin y limpiar parte
inferior con un algodn si ha quedado coloreada.
- Observar si las lminas conservan la numeracin clara y visible. Si no es as
volver a numerarlas.
- Dejar secar las lminas a temperatura ambiente, apoyndolas en posicin vertical
en un soporte sobre un papel absorbente. No apoyar papel absorbente sobre el
extendido.
Para la experimentacin se harn variar los parmetros de este procedimiento
mencionados en la seccin de objetivos por medio de diferentes pruebas

Resultados
pH de la muestra:

Concentracin de reactivos:

Procedencia de reactivos:

Colorantes secundarios:

Bibliografa
http://demostraciondelbacilodekoch.blogspot.com/2011/06/metodo-de-coloracionde-ziehl-neelsen_03.html
http://www.elitechgroup.com/wpcontent/uploads/2015/01/aerospray_tb_series_21.pdf