NORMAS GENERALES

PARA TRATAMIENTO
DE MUESTRAS BIOLGICAS

El anlisis clnico de las muestras biolgicas en las unidades de

cuidados intensivos peditricos y neonatales es una herramienta
fundamental en el diagnstico y tratamiento de los nios enfermos.
Estudiaremos las muestras biolgicas ms solicitadas en el mbito
hospitalario: sangre, orina, heces, LCR y esputo.

Tan importante como su obtencin es su manipulacin,

transporte y procesamiento en laboratorio. Existen unas normas que
facilitan el procedimiento.

NORMAS GENERALES PARA TRATAMIENTO DE

MUESTRAS BIOLGICAS
INTRODUCCIN
La calidad de los resultados de los anlisis clnicos de muestras
biolgicas de pacientes en unidad de cuidados intensivos peditricos y
neonatales comienza con la solicitud del facultativo y una correcta
obtencin de la muestra. Igual de importante es su manipulacin,
conservacin, transporte y procesado. Una buena metodologa de trabajo
por parte del personal de enfermera y el resto del equipo asegura la
fiabilidad de los datos obtenidos reduciendo al mnimo errores que
conllevan el rechazo de las muestras, repeticin de los anlisis y un
perjuicio para el paciente disminuyendo la calidad del servicio,
aumentando la exposicin del profesional y el gasto econmico.

DEFINICIN
Una vez obtenida la muestra, normas para la correcta manipulacin,
conservacin y transporte para un correcto procesamiento en laboratorio.

OBJETIVO
Tratamiento adecuado de las muestras biolgicas para obtener un
resultado fiable y de calidad de cara a la continuidad de los cuidados.

NORMAS GENERALES PARA EL TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE

SANGRE:
Introduccin
En la prctica clnica la sangre es la muestra biolgica ms solicitada
para el anlisis por la gran cantidad de informacin que ofrece sobre la
enfermedad. Se estudia de diversos mtodos y distintos objetivos.
PRUEBAS PARA ESTUDIO HEMATOLGICO Y BIOQUMICO
Introduccin
Las pruebas ms frecuentes que se solicitan para el estudio
hematolgico son:

Hemograma o hematimetra: donde se van a cuantificar los

diferentes grupos celulares de la sangre (hemates, leucocitos y
plaquetas) otros parmetros relacionados con su cantidad, forma y
contenido (hemoglobina, hematocrito, volumen corpuscular medio)

Estudio

de

Coagulacin:

que

consta,

adems

de

otros

parmetros, de tiempo de protrombina (T.P.) que mide la integridad

de la va extrnseca del sistema de coagulacin sangunea y el
tiempo de tromboplastina activada (APTT) que mide la va
intrnseca.

Velocidad de sedimentacin globular (VSG) de la 1 y 2

hora: Se mide para detectar procesos inflamatorios o infecciosos.

El estudio bioqumico de la sangre determina como estn las substancias

concentradas en la parte lquida de la sangre (suero)
Material
La sangre debe ser recolectada en tubos de vidrio o plstico,
preferiblemente cristal siliconado y barosilicatado irrompible,
sistema de vaco, estriles y hermticos.

con

En otro tipo de estudios se utilizan lminas portaobjetos de vidrio o

plstico comercial (extensiones para formula y recuento leucocitario,
parsitos en sangre, biopsia de la medula sea).
Es importante conocer si el bote debe llevar anticoagulante en polvo o
lquido y seleccionar el apropiado para el estudio que se quiere realizar.
Los ms utilizados son:

EDTA (ETILENDIAMINO TETRACETATO): Anticoagulante lquido

utilizado principalmente en el estudio de recuento de clulas.

CITRATO DE SODIO: Anticoagulante lquido, generalmente se

utiliza en estudios de coagulacin.

HEPARINA: Su presentacin puede incluir concentraciones de

sodio y litio. Normalmente la heparina con litio es utilizada para
estudios bioqumicos y la sdica en recuento celular.

OXALATO: Anticoagulante en polvo utilizado sobre todo en

determinacin de alcoholemia, estudios del metabolismo de la
glucosa.

Existen cdigos de colores estandarizados para las diferentes

presentaciones comerciales de los tubos,

TAPN ROJO CAPACIDAD 9 cc

Tubo seco sin anticoagulante, se obtiene suero tras
retraccin del cogulo. Se utiliza para pruebas
cruzadas en banco de sangre.

TAPN ROJO, MARRN, AMARILLO, CAPACIDAD 3,5

cc, 5 cc.
TAPN AMARILLO MICROMETODO, CAPACACIDAD
500 microlambdas.
Tubo con gelosa, se centrifuga y se separa el suero de
las clulas. Se utiliza para anlisis bioqumico de la
sangre.
TAPN VIOLETA: CAPACIDAD 2 cc, 2,5 cc, 3cc.
TAPN VIOLETA MICROMTODO, CAPACIDAD 250,
500 microlambdas.
Con anticoagulante EDTA. Se utiliza para hemograma.

TAPN VERDE O BLANCO, Capacidad hasta 4 cc

Con anticoagulante heparina sdica. Se utiliza para
cariotipo.

TAPN NEGRO, Capacidad 1 +/- 0,2 ml con

anticoagulante citrato, tubo de dos elementos utilizado
para VSG.

No confundir con el modelo de tapn negro para

pruebas de alcoholemia, capacidad 4 ml y con
anticoagulante oxalato potsico y fluoruro sdico

TAPN AZUL
Capacidad 1.8 cc, 2.5 cc, 4 cc con anticoagulante
citrato de sodio 3.8% se utiliza para estudio de
coagulacin.

NORMAS GENERALES:
La no consecucin de estas normas conlleva el rechazo de la muestra o
la no realizacin de una o varias determinaciones.

La muestra debe ir debidamente identificada con una etiqueta o

escrita a mano y acompaada de una peticin escrita por el
facultativo. Se rechaza si carece de identificacin o esta es
errnea, tambin si no es remitida o llega sin volante al
laboratorio.

El tubo debe estar ntegro, sin fracturas o grietas, sin defectos,

con vaco, dentro del periodo que indica la fecha de caducidad,
con la cantidad adecuada de aditivo o anticoagulante.

El tubo debe ser el indicado para el tipo de anlisis con el

aditivo o anticoagulante adecuado. Por ejemplo un hemograma
no se puede solicitar en un tubo con gelosa, no tiene
anticoagulante.

Volumen adecuado de sangre en el tubo. El volumen total

extrado debe ser suficiente para realizar el anlisis en su
totalidad. Para determinar un mayor nmero de parmetros
bioqumicos

se

extracciones

requiere

ms

peditricas

se

cantidad
utilizan

de

sangre.

microtubos

En
los

analizadores permiten realizar mltiples determinaciones con

volmenes pequeos de sangre. La muestra insuficiente debe
ser rechazada, pero tambin si se introduce ms cantidad de la
adecuada, como ocurre en los tubos de estudio de coagulacin o
hemograma

si

no

se

respeta

la

proporcin

sangre

con

el

anticoagulante

La

sangre

debe

mezclarse

inmediatamente

anticoagulante una vez que ha entrado en el tubo. Invertir

suavemente varias veces o colocarlo en rotores para obtener
muestras homogneas, nunca agitar enrgicamente.

Cumplir las condiciones de preparacin del paciente ya que la

ingesta de alimentos altera numerosos parmetros como la
concentracin de glucosa, colesterol o cido rico. Hay estudios
que requieren guardar ayuno. En el caso de los nios el tiempo
de ayuno se relaciona con el peso y la talla y no debe
prolongarse demasiado. A veces la muestra de ser obtenida en
un intervalo de tiempo preciso debido a que el paciente toma
alguna medicacin que altera el anlisis o hay alguna variacin
biolgica que queremos evitar.

Evitar la contaminacin de las muestras.

Las muestras contaminadas estn hemodiluidas o presentan

substancias que pueden alterar los valores del anlisis.

Esto puede ocurrir en diversas situaciones:

Pacientes sometidos a procedimientos teraputicos o diagnsticos
antes de realizar la extraccin. P. Ej. Contrastes, quimioterapia,
istopos radiactivos.
Pacientes portadores de catteres perifricos y que reciben una
solucin IV y en los que se ha realizado una extraccin en el mismo
brazo por encima del catter sin interrumpir la administracin y sin
esperar al menos dos minutos. O cuando se extrae del mismo catter
sin desechar sangre suficiente para lavar la va. Tambin ocurre con
las vas centrales y en reservorios heparinizados. Por ello los estudios
de coagulacin no deben extraerse del catter, porque incluso
cantidades mnimas de heparina pueden alterar resultados. Lo ideal
es que se extraigan individualmente mejor que como una parte de la
extraccin para varias muestras.
En general y sobre todo con las muestras obtenidas por puncin
capilar tener en cuenta si se ha utilizado povidona yodada, porque si
la sangre est contaminada pueden encontrarse niveles falsos
elevados de potasio, fsforo y cido rico.
Puede existir una contaminacin progresiva de la muestra de un tubo
a otro cuando no se respeta el orden de llenado:
Tubos o envases estriles para estudio bacteriolgico

(Hemocultivos) si los hubiere.

Tubos sin aditivos para anlisis del suero.
Tubos con citrato para pruebas de coagulacin.
Tubos con citrato para VSG.
Tubos con EDTA.
Resto de los tubos

Transporte adecuado de la muestra

El tiempo excesivo o la temperatura inadecuada de la muestra

hacen que se deteriore y sea rechazada o aporte datos
errneos.

Hay determinaciones que han de enviarse de forma inmediata

para su anlisis o conservacin en el laboratorio hasta que este
se realice, por ejemplo el amonio o las catecolaminas.

Otras necesitan refrigerarse inmediatamente despus de la

extraccin, por ejemplo la gastrina o actividad de renina.

A veces es necesaria la congelacin de la muestra como en la

determinacin de ACTH (hormona adenocorticotropa).

Hay anlisis como los de las crioglobulinas o el de cido lctico

donde la muestra necesita una temperatura de 37 y un
transporte rpido al laboratorio.

Con la correcta conservacin y rpido transporte de la muestra

se evita formacin de amoniaco, gliclisis, degradacin de las
protenas, alteracin de las substancias por la luz y otros
procesos que alteran los resultados.

Hay otros factores relacionados con el rechazo de la muestra

que aun siendo evitables dependen mas de la tcnica del
profesional y de la propia muestra que de los protocolos.

Muestra hemolizada.

La hemlisis es la ruptura de los hemates que libera hemoglobina y otras

substancias en el plasma y este adquiere un color entre rosa y rojo. Esto
afecta a varias determinaciones por el aumento en el suero de la
sustancia a medir por ejemplo sodio o potasio o tambin por interferencia
ptica o qumica durante la fase analtica

Hay varias causas:

Relacionadas con la extraccin sangunea:
Aguja demasiado fina, hay que elegir calibre 22G, 20G.
Se aspira demasiado fuerte durante la extraccin.
Desplazar el embolo suavemente.
Se fuerza el paso de la sangre al tubo a travs de la aguja.
Es mejor quitar el tapn y dejar resbalar la sangre por las
paredes del tubo.
Evitar venas muy pinchadas para no extraer sangre de un
hematoma.
Relacionadas con la manipulacin en el laboratorio.
La

muestra

debe

completamente

centrifugarse

coagulada

si

antes
el

bote

de
no

que

este

contiene

anticoagulante, como el tubo con gelosa. Hay que centrifugar

las muestras a las revoluciones adecuadas y en aparatos
bien calibrados.
Relacionados con el paciente:
Reaccin antgeno anticuerpo, reaccin postransfusional,
anemia hemoltica, enfermedades hepticas.

Muestra coagulada, Debido a una extraccin difcil de larga

duracin, por no mezclar la sangre en los tubos adecuadamente o
por las caractersticas del paciente.

Muestra con ictericia, La presencia de bilirrubina en la sangre

puede alterar algunas determinaciones pero no se considera error
dado que no esta relacionado con la extraccin o el tratamiento de
la muestra.

Muestra lipemica. Son las que tienen alto contenido en grasa y

aspecto lechoso y se pueden presentar en pacientes que no han
guardado el ayuno recomendado y con una ingesta copiosa de
alimentos. Tambin en muestras contaminadas de pacientes
sometidos a nutricin parenteral.
10

HEMOCULTIVOS
Introduccin
El cultivo de sangre es el estudio microbiolgico ms importante y
utilizado para la determinacin del agente etiolgico de algunas
patologas.
En las bacteriemias intermitentes el momento idneo para la
obtencin de la muestra es lo ms cerca posible del pico febril y despus
de aparecer los sntomas como escalofros.
Siempre que sea posible obtener la muestra antes de instaurar el
tratamiento antibitico.
En caso de bacteriemias resistentes al tratamiento como la
endocarditis cualquier momento es adecuado para tomar la muestra.
Material
Los

frascos

disponibles

para

Hemocultivos

en

el

servicio

microbiologa son:
Pareja de frascos de uso habitual en
adultos y nios grandes. Frasco aerobio
volumen del inoculo 5 a 10 cc tapn azul.
Frasco anaerobio volumen del inoculo 5 a
10 cc tapn rojo.

Frasco

nico

peditrico

volumen

del

inoculo 1 a 4 cc tapn amarillo. A veces

en nios pequeos neonatos, prematuros
y lactantes es suficiente con 0.5 cc.

11

de

Normas generales
El nmero de muestras de sangre depende del cuadro clnico. En
general se considera idneo la obtencin de tres hemocultivos
seriados aerobio y anaerobio con un intervalo de 30 minutos entre
las extracciones.
El volumen de sangre a cultivar y el intervalo entre tomas son un
factor importante en la determinacin de microorganismos pero a
veces estos sern menores por las caractersticas del paciente
porque urge instaurar tratamiento antibitico.
Inocularemos el volumen recomendado por el fabricante en cada
tipo de frasco.
Mantener asepsia estricta durante todo el proceso para que los
resultados sean fiables, obteniendo cada muestra de lugares de
venopuncin diferentes implicando a otro profesional sanitario si es
necesario para que la tcnica sea lo ms estril posible.
No extraer muestras de Hemocultivos de catteres intravenosos
permanentes colocados con anterioridad mas de 48 horas pues
existen muchas posibilidades de estn colonizados por bacterias y
contaminan la muestra.
Se puede obtener la muestra si la extraccin coincide con la
insercin del catter con tcnica asptica.
Si se obtiene la muestra con jeringa transferir la sangre a los
frascos con la misma aguja de la venopuncin. Diferentes estudios
demuestran que el cambio de aguja no disminuye la contaminacin
de la muestra y aumenta el riesgo de pinchazo accidental.
Tambin podemos utilizar el sistema de recogida directa por vaco
de doble aguja que nos permite la introduccin de la sangre
directamente en los frascos y al no existir manipulacin disminuye
el riesgo de contaminacin.

12

 Examine los frascos de hemocultivo antes de usarlos por si

presentan indicios de deterioro. Deseche aquel frasco en el que se
observe turbidez, decoloracin, fugas, tapn hinchado o hundido y
en general cualquier alteracin que nos haga sospechar de su buen
estado.
Desinfecte el tapn de caucho del bote de hemocultivo con
antisptico povidona yodada, dilucin de clorhexidina o alcohol 70
y esperar a que se evapore para evitar la entrada en interior del
frasco. No es necesario tapar los frascos con gasas y antisptico
pues quedan sellados tras la extraccin de la aguja.
Llenar los frascos suavemente haciendo resbalar la sangre para
que no se produzca hemlisis pero sin demora para evitar que se
coagule.
Introducir la sangre atravesando el tapn con la aguja en posicin
vertical primero el bote anaerobio y despus el aerobio, de forma
que las burbujas de aire queden junto al embolo evitando as su
paso al frasco.
Remita la muestra al laboratorio de microbiologa acompaada de
un volante debidamente cumplimentado por el facultativo con el
nombre del paciente, servicio, fecha y hora de la extraccin,
numero de orden de la muestra 1, 2 o 3 y si el paciente ya esta
sometido a terapia antimicrobiana haga constar tipo de antibitico,
dosis y hora de la ultima administracin.
Identificar las muestras segn protocolo rotulando los frascos o con
etiquetas adhesivas.
Utilizar el espacio disponible

para la identificacin evitando

escribir sobre el cdigo de barras o taparlo con las etiquetas. Esto

impide su lectura y retrasa el procesamiento de la muestra.
Adems hay sistemas que disponen de cdigos de barras

13

duplicados adhesivos que se extraen de los frascos y se pegan en

las peticiones para relacionarlas y que no haya confusin.
Enviar al laboratorio de microbiologa lo antes posible para su
procesamiento y cada vez que se obtiene una muestra.
Si no se pudiera enviar en ese momento o hubiera que esperar la
otra toma seriada proteger de la luz pues la deteccin de
microorganismos en algunos casos es por fluorescencia y podra
falsear los resultados.
Las muestras deben conservarse incubando en una estufa a 3538C.

14

GASOMETRA ARTERIAL
Introduccin
Este anlisis tiene como objetivo medir los valores en condiciones
prefijadas de parmetros sanguneos y gases presentes en sangre
arterial. Esto ayuda a los profesionales sanitarios a valorar el estado
respiratorio del paciente as como el estado de los rganos reguladores
del organismo como los pulmones o los riones y el equilibrio cido-base.
Los parmetros que se miden normalmente son pH, presin de O2,
presin de CO2, concentracin de ion bicarbonato, saturacin de O2 y
exceso de bases.
El correcto tratamiento de la muestra y la consecucin de unos
resultados fiables son de suma importancia ya que los lmites tolerados
fisiolgicamente son muy estrechos y cualquier desviacin debe ser
corregida de inmediato con oxigenoterapia o terapia intravenosa.
Material
El material de eleccin es el vidrio o cualquier estructura similar que
impide la difusin de gases a travs de la jeringa.
En neonatos, prematuros, lactantes y nios muy pequeos se utilizan
ms los capilares de vidrio.
El anticoagulante mas utilizado es la heparina sdica ya que el oxalato
tiende a aumentar el pH y el citrato y EDTA tienden a disminuirlo. Con
una cantidad mnima de heparina sdica se
anticoagula proporcionalmente

un

mayor

volumen de sangre con un mnimo efecto

sobre los resultados de la gasometra, pero
su exceso puede acidificar en gran medida
la muestra y aumentar el pH.
Este problema se corrige con jeringas de
polmero plstico con aguja 22G, capacidad para 3 cc de sangre y como
conservante 200 UI de heparina de litio en polvo. Estas jeringas estn
disponibles en la mayora de los servicios hospitalarios y por ello las

15

extracciones en jeringas de plstico estndar deben ser desechadas ya

que tienen que prepararse con 0.1 cc de heparina sdica y esta operacin
es delicada. La excesiva dilucin y la difusin de gases a travs de la
jeringa alteran substancialmente los valores de la gasometra.
Normas generales
Enviar la muestra correctamente identificada acompaada de una
peticin

rellenada

por

el

facultativo

segn

el

protocolo

especificando en que condiciones se haya el paciente en el

momento de la extraccin: basal, oxigenoterapia, ventilacin
mecnica, tipo y concentracin de O2 administrada.
La presencia de burbujas de aire en la jeringa altera o invalida los
resultados siendo estas muestras rechazadas por riesgo de avera
del gasmetro. Si la muestra recin extrada con jeringa contiene
aire hay que expulsarlo antes de 20 segundos y la jeringa debe
quedar hermticamente cerrada con un tapn eliminando la aguja.
Cuantas ms pequeas son las burbujas mayor ser la superficie
de contacto con la sangre y como consecuencia, ms rpido vara
la presin de O2.
Durante la extraccin es importante dejar que el pulso contribuya
al llenado de la jeringa ya que de este modo se reduce la presencia
de aire.
Para purgar la jeringa colquela en posicin vertical y golpela
suavemente con el dedo empujando el embolo expulsando el aire y
un poco de sangre que puede retirar con una gasa.
Si la muestra se recoge con capilar heparinizado y contiene aire,
este y la heparina sobrante sern desplazados al exterior por la
sangre y despus se sellaran ambos extremos.
Ha de admitirse el error incluso obviando el inherente al analizador
de gases ya que desde los primeros momentos de la extraccin el
aumento de unos valores y la disminucin de otros es inevitable. A
esto debemos unir que en el medio hospitalario el transporte al
laboratorio se demora tanto como para desconfiar de los resultados
si las muestras no han sido conservadas a temperatura ptima y
16

transportada

convenientemente.

Remita

inmediatamente

la

muestra coordinando con el laboratorio para que no coincida el

envo con el momento de la calibracin.
La muestra obtenida en jeringa debe ser enviada para su anlisis
antes de 15 minutos despus de su obtencin si va a permanecer a
temperatura ambiente. A partir de 27 C los cambios en el pH son
ostensibles. Si la muestra se obtiene en capilar el traslado debe ser
inmediato a temperatura ambiente. Basta con sellar los extremos
con material tipo plastilina o llevarlo con guantes entre los dedos
ndice y pulgar.
Hay factores que se relacionan con el paciente que pueden causar
resultados errneos en la medicin de gases.
Si no registramos o tenemos en cuenta las condiciones en
que la muestra ha sido obtenida: cuando el nio se acaba de
despertar o esta llorando, en cuyo caso hiperventila.
Cuando el paciente hipoventila o esta mal oxigenado porque
ha

dejado

de

recibir

aporte

de

O2

por

accidente,

inmediatamente despus de la aspiracin de secreciones o

durante el destete del respirador.
Cuando cambian las condiciones del paciente y esto no se
refleja en la peticin: 20-30 minutos tras el inicio de la
oxigenoterapia o un cambio en la concentracin de O2 y tras
un cambio de parmetros de la ventilacin asistida.
En nios muy pequeos, neonatos, prematuros y lactantes donde
se obtiene una muestra de sangre capilar del taln este debe
calentarse para que se arterialice la sangre. Es necesario tenerlo
en cuenta porque los valores de gasometra pueden diferir de las
muestras de sangre arterial de nios mayores.

17

NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE ORINA

Introduccin
La orina es uno de los fluidos resultantes del metabolismo y su
anlisis aporta mucha informacin de forma rpida y econmica. Su
obtencin es relativamente fcil, lo que hace que sea una prueba
fundamental al alcance de cualquier servicio sanitario y est muy
extendida.
El estudio de la orina es muy til en el diagnstico de la enfermedad
renal y del tracto urinario y en la deteccin de enfermedades metablicas
o sistmicas no relacionadas directamente con el sistema urinario.
Las muestras de orina se analizan de varias maneras y con diversos
objetivos:
Exmenes sistemticos de sustancias anormales y de sedimento, con
tiras reactivas, urocultivos, triage de drogas de abuso y medicamentos y
anlisis de orina 12-24 horas.
Adems al ser una biopsia lquida de los tejidos del tracto urinario nos
aporta datos anatomopatolgicos.

ANLISIS SISTEMTICO DE ORINA

Cuando obtenemos una muestra de orina primero realizamos un examen
macroscpico directo del color, turbidez olor, que en algunos casos nos
oriente sobre su composicin y alteracin.
Esto se complementa con el anlisis sistemtico de orina, sustancias
anormales y sedimento de orina, que consiste en la medicin por mtodos
fsicos y qumicos de diferentes parmetros para diagnosticar la
presencia de infecciones urinarias, enfermedades renales y otras
enfermedades generales que producen metabolitos en orina.
Tambin para evaluar la funcin renal de las diferentes hormonas y
situacin de la regulacin homeostsica.

18

La orina normalmente est compuesta por urea, creatinina, sodio,

potasio y cloro. El estudio de anormales detecta su exceso o no, y la
presencia de otras como glucosa, hemoglobina, bilirrubina, leucocitos,
cetonas, nitritos, protenas y densidad alta de solutos que determinan
diversas alteraciones.
El estudio del sedimento de orina se hace al microscopio una vez
centrifugada. En la orina normal no deben aparecer bacterias, cilindros,
cristales,

grasas,

hemates,

leucocitos,

clulas

epiteliales,

clulas

tubulares renales. El hallazgo de estas substancias es patolgico.

Material
Envase de plstico irrompible, boca
ancha,
hermtico

seco,

limpio

estril,

tapn

de

rosca,

con

capacidad 50 cc o tubos de boca

estrecha capacidad 10 cc.

Tiras reactivas para anlisis de orina. Este mtodo nos permite un

anlisis de algunos componentes de la orina rpido, sencillo y
econmico a veces previo a otros ms especficos. Consiste en unas
tiras reactivas que se sumergen en la
orina y producen una reaccin qumica
colorimtrica que describe la alteracin
de las diferentes substancias. A veces
es suficiente con unas gotas de orina y
es ideal cuando la muestra es escasa.
Este sistema tiene una fiabilidad del
99% a la hora de rastrear hemates,
nitritos,

aumento

de

la

densidad,

pH,

glucosa,

protenas,

bilirrubina, hemoglobina y cuerpos cetnicos. Los leucocitos se leen

a los dos minutos de iniciada la prueba.

19

Normas generales
El recipiente de la muestra deber ir debidamente identificado y
acompaado de la peticin rellenada por el facultativo.
Las muestras deben estar libres de contaminacin fecal o de
papel higinico. Si hay posibilidad de contaminacin con
secrecin vaginal o menstruacin puede ser necesario taponar
la vagina o posponer la prueba. La contaminacin por bacterias
alcaliniza la orina y provoca turbidez y cambios de color y olor.
Tener en cuenta que hay medicamentos como la rifampicina que
modifican el color y olor de la orina y esto no debe ser tomado
como anormal.
El volumen de orina necesario depende del numero de pruebas
que se van a realizar en el laboratorio. En general bastan 2 cc
en nios pequeos pero es recomendable obtener un volumen
superior a 15 cc. Si el volumen es inferior se puede hacer un
examen con tiras reactivas. Entre 3 y 10 cc ya se puede
centrifugar para estudiar el sedimento.
En general una orina mas concentrada es preferible a una mas
diluida para el anlisis, por tanto si el anlisis no es urgente la
primera orina de la maana es la mas adecuada ya que el
paciente no ha bebido agua durante las horas del sueo.
Si la orina se recoge por miccin espontnea desechar el primer
chorro y recoger la orina intermedia. Para recoger muestras de
lactantes, neonatos, prematuros y nios pequeos que no
controlan sus esfnteres se dispone de bolsas colectoras de
orina con anillo adhesivo que rodea los genitales. Si no se
obtiene la orina en 20-30 minutos, la bolsa se despega o se
ensucia hay que cambiarla.
Si estos mtodos son intiles la muestra se obtendr por
sondaje vesical continuo o intermitente. A veces se utilizan
tcnicas ms agresivas como la aspiracin suprapbica o
cateterizacin ureteral.
20

 Si el exterior del recipiente se contamina limpiarlo para evitar la

transferencia de grmenes a los dems.
Realizar el anlisis durante los 15 minutos posteriores a la
obtencin de la muestra ya que los eritrocitos, leucocitos y
cilindros se descomponen cuando la muestra permanece varias
horas a temperatura ambiente y varia la composicin de la
orina. Por ello las muestras deben refrigerarse si no pueden
estudiarse de inmediato. Si se utilizan tiras reactivas es
necesario que la orina este a temperatura ambiente, nunca
refrigerada.
A veces es necesario no exponer la muestra a la luz porque
algunas substancias se alteran como la bilirrubina que
disminuye.
Cubrir el bote con papel de aluminio.

21

ORINA DE 24 HORAS PARA ANLISIS CUANTITATIVO

Introduccin
La concentracin de la orina varia en un periodo de 24 horas y por ello
solutos como hormonas, clulas, protenas y electrolitos aparecen en
mayor o menor cantidad en determinadas horas del da dependiendo de
la ingesta y actividad del paciente entre otros factores.
La mejor manera de realizar un estudio fiable cuantitativo de estas
substancias es analizar muestras recogidas durante 12-24 horas como
en el caso de patologas nefrolgicas donde es necesario conocer la
funcin renal y establecer que substancias se eliminan y como o en el
estudio de la formacin de clculos renales.
Material
Recipientes de plstico con capacidad suficiente 1000-2000 cc, limpios,
estriles

secos,

hermticos

con

tapn

de

rosca,

irrompibles,

preferiblemente opacos. Tambin podemos cubrir con papel de aluminio si

es preciso proteger la muestra de la luz.

Normas generales
En el periodo de recogida unas horas antes hay que restringir la
ingestin de lquidos y evitar la ingesta de alcohol, ciertos
alimentos y frmacos.
Se indica al paciente que vace la vejiga a las 8 de la maana al
levantarse y deseche esta primera orina. Todas las dems
muestras deben recogerse sin perder ninguna incluso la eliminada
a las 8 de la maana del da siguiente cuando termina la prueba.

22

 Cada cantidad de orina eliminada se recoge en un recipiente

pequeo limpio o estril y se vaca en el contenedor grande. A
continuacin se mezcla la orina del contenedor con una varilla y se
extrae una muestra de unos 50 cc que se enva al laboratorio
previamente identificada y con un volante cumplimentado por el
facultativo segn protocolo que indique adems el total de la orina
recogida.
En caso de orina perdida, extrada del contenedor o desechada por
error y cuando se olvida recolectar parcial o totalmente alguna
muestra debe ser registrado y debemos plantearnos iniciar de
nuevo el estudio sobre todo en nios.
El transporte al laboratorio ser inmediato. Si no disponemos de
conservante se guardara el frasco en el refrigerador hasta su
traslado. Lo ideal es refrigerar a 4C en nevera todo el volumen de
la muestra durante todo el periodo de recogida. Esto impedir la
descomposicin bacteriana. La congelacin es til para retrasar la
perdida de substancias labiles o cuando se quiera fraccionar la
muestra para su estudio.
Muchos protocolos necesitan que aadamos conservantes qumicos
y agentes antibacterianos y antimicticos a los recipientes antes de
comenzar la recogida. El fin de estos es asegurar la integridad de
la muestra. Estas substancias disminuyen la oxidacin y el
crecimiento bacteriano y evitan cambios en el pH mantenindolo
cido. Los mas utilizados son el cido brico, benzoico, los fenoles,
timol, tolueno, formol y compuesto de mercurio.
Hay determinaciones que requieren instrucciones especiales para
la recogida de orina de 24 horas, por ejemplo el cido 5hidroxiindalactico donde no se pueden comer aguacates, ciruelas,
nueces y berenjenas, no administrar jarabes para la tos que
contengan guayacolato de glicerino y paracetamol 24 horas antes
de la prueba y durante su obtencin.

23

UROCULTIVO
Introduccin
El cultivo de orina es un anlisis para determinar si existe o no
infeccin de orina y en caso que exista identificar con exactitud el germen
responsable y cual es el antibitico mas adecuado. A veces la infeccin
ya esta evidenciada por el anlisis de anormales con presencia de
nitritos y de leucocitos y presencia de bacterias en el sedimento y el
cultivo nos sirve de confirmacin.
Consiste en sembrar la muestra de orina recogida con tcnica estril en
un medio de cultivo y esperar a que crezcan las bacterias. No es una
prueba inmediata y a veces hay que esperar das incluso semanas como
el cultivo de Lowestein para el diagnostico de la tuberculosis.
Con un buen recuento de colonias se confirma el cultivo positivo
identificando exactamente el microorganismo y con el antibiograma
sabemos cual es el antibitico al que no tiene resistencias y va a
eliminarlo.
Material
Envase de plstico irrompible, estril, de boca
ancha, seco, hermtico con tapn de rosca y
capacidad 50 cc.
Normas generales
Identificar la muestra correctamente segn protocolo. Se debe
acompaar de un volante debidamente rellenado por el
facultativo.
La muestra debe obtenerse antes de administrar tratamiento
antibitico. Si ya se ha iniciado hacer constar en la peticin tipo,
dosis y hora de la ltima toma.
Utilizar siempre que sea posible la primera miccin de la
maana porque las bacterias deben incubarse en la vejiga al
menos 3-4 horas antes de obtener un recuento de colonias de
calidad con significado diagnostico.

24

 Extremar la asepsia evitando la contaminacin fecal, vaginal,

menstrual o partculas de papel higinico.
Evitar en lo posible que la muestra tenga contacto con los
genitales externos. Normalmente se encuentran bacterias en la
porcin distal de la uretra y el perineo. Estos microorganismos
son contaminantes de la orina. Lavar los genitales con agua y
jabn sin utilizar antispticos de dentro a fuera. Desechar la
primera parte de la miccin y recoger la orina que se emite a
continuacin directamente en un frasco estril.
No tocar el interior del frasco ni del tapn.
En nios mayores la orina se recoge igual que en los adultos
bajo supervisin del profesional.
En nios pequeos, neonatos, prematuros, lactantes se utiliza
una bolsa colectora de orina estril con anillo adhesivo que se
coloca despus de lavar los genitales. Si no se consigue orina en
20-30 minutos, se despega la bolsa o se ensucia, hay que
sustituirla por otra.
Cuando las circunstancias no nos permiten obtener la orina por
miccin espontnea recurriremos al sondaje vesical continuo o
intermitente obteniendo la orina con tcnica asptica evitando
llevar una infeccin donde antes no la haba. Si el sondaje es
continuo y el catter vesical lleva instalado mas de 24 - 48
horas puede estar colonizado por mltiples cepas bacterianas y
la prueba se falsea.
La aspiracin de orina por puncin suprapbica evita que esta
se contamine por los grmenes de la uretra y perineales,
adems evita la contaminacin inherente al sondaje vesical.
Esta indicada cuando hay dificultad para obtener la muestra,
cuando hay sospecha de infeccin por anaerobios en pacientes
peditricos y cuando existe contaminacin o resultados dudosos
despus

de

tres

urocultivos

condiciones.

25

realizados

en

las

mejores

 Enviar rpidamente la muestra al laboratorio ya que la orina es

un excelente caldo de cultivo que favorece el desarrollo de los
grmenes y falsea el recuento.
Es necesario que el cultivo se realice dentro de la primera hora
posterior a su recoleccin y si esto no es posible debe
mantenerse la muestra refrigerada a 4 C hasta el momento de
su procesamiento durante un periodo no superior a 24 horas.
Nunca han de emplearse conservantes convencionales en las
muestras para estudio bacteriolgico.
DETECCIN DE DROGAS DE ABUSO Y MEDICAMENTOS EN ORINA.
TRIAGE.
Consiste en la deteccin en orina de sustancias especificas cuya
presencia

continua

eliminacin

en

el

tiempo

determina

altas

concentraciones de las mismas.

En

el

paciente

peditrico

se

puede

presentar intoxicacin accidental y consumo

voluntario o inducido de estas sustancias.
El

mtodo

triage

rastrea

tetrahidrocarbaminol, cocana, barbitricos,

benzodiacepinas, metadona, antidepresivos
tricclicos, opiceos y anfetamina. Consiste
en una placa con un deposito donde se mezcla la orina y los reactivos.
Extendemos la muestra sobre un tampn donde aparecen los nombres de
las sustancias a determinar y un control positivo de la prueba. En unos
minutos aparecer una lnea de positividad en la sustancia detectada y
en el control.
MUESTRAS DE ORINA EN ANATOMA PATOLGICA.
Consiste en el estudio de las clulas que se eliminan por la orina sobre
todo

aquellas

malignas

procedentes

de

tumores,

lesiones

malformaciones de la va urinaria desde el rin hasta la vejiga y uretra.

Se recoge la primera miccin matinal para obtener clulas frescas y
cilindros durante tres das.

26

NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE HECES

Introduccin
El anlisis de las heces abarca el estudio macroscpico y microscpico
de sustancias anormales, el coprocultivo para determinar presencia de
microorganismos patgenos, el estudio parasitolgico de las heces,
sangre oculta y substancias anormales en heces de 24 horas.
ESTUDIO COPROLGICO
El examen macroscpico consiste en la observacin directa de las
caractersticas de la muestra. Se examina la cantidad, color, olor, forma y
consistencia as como fragmentos de fcula, grasas no digeridas, moco,
pus, sangre, etc. que pueden variar segn la dieta, medicacin o proceso
patolgico del paciente. Por ejemplo, en las hemorragias la sangre
digerida produce heces pastosas negras malolientes llamadas melenas.
El examen microscpico de las heces determina la presencia de
sustancias como protenas de la carne y carbohidratos como el almidn
por un defecto en la digestin o trnsito acelerado a travs del colon. Si
aparecen leucocitos es muy til en el diagnostico diferencial de la diarrea
de origen infeccioso. Tambin detecta pigmentos biliares anormales como
la bilirrubina, enzimas como la tripsina, coproporfirinas y podemos
determinar el pH.
Material
Envase estril o limpio capacidad 50 cc, boca ancha, de plstico
irrompible, hermtico con tapn de
rosca, con o sin medio de transporte. A
veces es preciso que sea opaco para
proteger de la luz o lo cubrimos con
papel de aluminio.
Depresor de madera.

27

Normas generales
Envase correctamente identificado segn protocolo acompaado de
peticin rellenada por el facultativo.
Son suficientes cantidades pequeas de heces, en general 2.5cc de
heces formadas o 15-30 cc de heces liquidas.
La muestra se traslada al frasco con depresor o tira de cartn.
Evitar la contaminacin con orina, sangre, agua o papel higinico.
En nios pequeos aislar los genitales con bolsa colectora de orina.
No llenar el envase demasiado. Liberar el gas aflojando la tapa.
Evitar contaminar el exterior del envase con la muestra y vigilar
perdidas, derrames o roturas durante el transporte.
Las muestras deben ser remitidas lo antes posible al laboratorio
para su procesamiento en las 1-2 horas siguientes a la recogida y
si esto no es posible guardar en nevera.
En funcin del tipo de anlisis el paciente a veces deber seguir
una dieta determinada y evitar o restringir algunos alimentos o
frmacos previa consulta medica los das previos a la toma de la
muestra. Solicite instrucciones al laboratorio.
Tras la obtencin de la muestra reanudar la dieta habitual y el
tratamiento.
Evitar la ingestin de antidiarreicos o catrticos as como aceites
minerales para lubricar las heces porque su composicin altera los
resultados.
Hay pruebas en las que se precisa proteger la muestra de la luz
como en la determinacin de coproporfirinas y cubriremos el frasco
con papel de aluminio.

28

COPROCULTIVO
Introduccin
Estudio bacteriolgico de las heces cuyo objeto es evidenciar la
existencia de un germen no habitual por microscopia directa o bien por
cultivo especifico.
Material
Envase estril de plstico irrompible, capacidad 50 cc, estril, de
boca ancha y tapn de rosca, hermtico.
Depresor de madera estril.
Escobilln estril con medio de transporte.

Normas generales
Envase correctamente identificado segn protocolo acompaado
de peticin rellenada por el facultativo.
Siempre que sea posible se tomaran las muestras antes de
administrar cualquier tratamiento antibitico o antisptico
intestinal. En caso contrario se har constar en la peticin tipo
de antibitico, dosis y hora de la ltima toma.
Tomar una pequea porcin de heces recin emitidas eligiendo,
si las hay, las zonas mucosas, hemorrgicas o purulentas. No
cultivar muestras de heces duras o compactas.
Introducir la muestra con un depresor estril evitando tocar el
interior del frasco o la tapa. Evitar la contaminacin con orina y
otras substancias. En nios pequeos aislar los genitales con
bolsa colectora de orina. No llenar el envase demasiado. Liberar
el gas aflojando la tapa.

29

 Evitar contaminar el exterior del frasco con la muestra y vigilar

perdidas, derrames o roturas en el transporte.
Si la muestra es tomada con escobilln este debe ser estril con
medio de transporte. Se introducir a travs de la ampolla rectal
apareciendo claramente manchado de heces. No es valido el
simple frotado de la regin anal.
Enviar siempre dos escobillones tomados adecuadamente. En
estudios con muestras diarreicas no utilizar escobilln y enve
un solo frasco.
Una vez obtenida la muestra enviar inmediatamente al
laboratorio de bacteriologa en las 1-2 horas siguientes. Si no es
posible, conservar en nevera. Si se conserva mas de 4-5 horas
en nevera pueden obtenerse falsos negativos como en la
shigellosis y algunas salmonellas.
Si se estn administrando antibiticos, el cultivo es negativo y
el cuadro clnico no cede hay que suspender el tratamiento dos
o tres das y volver a enviar una nueva muestra.
Es frecuente que en algunas muestras no se asle el germen
patgeno responsable por lo que deben enviarse al laboratorio
tres muestras correspondientes a das distintos o al menos de
tres deposiciones diferentes.

30

ESTUDIO DE SANGRE EN HECES

Introduccin
La sangre procedente del estomago o de las partes altas del intestino
suele llegar a las heces digerida recibiendo el nombre de sangre oculta o
hemorragia oculta en heces. Este estudio es muy til cuando se sospecha
hemorragia digestiva subclnica que no que no cursa visiblemente con
melenas.
Este anlisis consiste en el examen qumico del pigmento hemtico de
las deposiciones con tintura de guayaco. Actualmente se comercializan
test en tabletas, tiras de papel y otros soportes que utilizan la reaccin
de guayaco. Seguir las instrucciones del fabricante.
Existen otras pruebas como la de la bencidina y el piramidn que
verifican la existencia de sangrado y su magnitud.
Si la muestra se enva al laboratorio debe ir debidamente identificada
acompaada del volante de la solicitud cumplimentado por el facultativo.
Material
Envase estril o limpio, boca ancha, de plstico irrompible, boca
ancha, capacidad 50 cc, hermtico con tapn de rosca.
Depresor de madera.
Normas generales
Hay que tener al paciente tres das a dieta rigurosa libre de carne,
embutidos y otros productos que contengan hemoglobina o un
exceso de clorofila como los vegetales verdes tipo espinacas. Se
puede comer carbohidratos como patatas, cebolla, arroz, leche y
pan. Se debe suprimir la medicacin que contenga hierro, nitritos,
bismuto o cobre.
Conviene repetir el examen varias veces en das distintos tanto
para cerciorarse de la negatividad como para comprobar en su
caso el carcter crnico de la hemorragia.
Los resultados negativos no excluyen el sangrado ya que este
puede ser intermitente por lo que se aconseja la recogida de tres
muestras procedentes de tres movimientos intestinales distintos.
31

ESTUDIO DE HECES DE 24 HORAS

Introduccin
Este estudio determina la excrecin fecal de una sustancia cualquiera
en 24 horas, como el nitrgeno y las grasas fecales, que en exceso puede
obedecer a un transito acelerado, dficit enzimtico, dficit de absorcin u
obstruccin del conducto biliar. Con este estudio se pueden diagnosticar
procesos como colitis ulcerosas y sndromes de mala absorcin.
Material
Envase de plstico irrompible, capacidad 1000-2000 cc, hermtico con
tapn de rosca, seco y limpio sin conservante.

Normas generales
Muestra debidamente identificada segn protocolo acompaada
de peticin rellenada por el facultativo.
Se guardan todas las deposiciones que el paciente realice en un
periodo de 24 horas. Remitir deposicin completa incluyendo
sangre, moco, pus, etc.
Esta cantidad de heces no se corresponde con la cantidad de
comida ingerida en el mismo periodo de tiempo y que el aparato
gastrointestinal no se vaca a voluntad. Por ello para que el
estudio sea ms exacto se guardaran las heces durante tres
das y se harn los clculos sobre la muestra completa
dividiendo entre tres.

32

 La exactitud de este mtodo puede aumentarse haciendo ingerir

al paciente un colorante de carmn o carbn vegetal antes del
periodo de recogida empezando esta con la aparicin del
colorante hasta que ya no aparezca en las heces.
En general debe seguirse la alimentacin habitual siempre que
contenga

grasas,

protenas

almidn.

Si

falta

algn

componente de la dieta debe aadirse para que sea equilibrada.

En

otras

alimentos

determinaciones
o

frmacos.

Por

debern
ejemplo

restringirse
en

la

algunos

investigacin

cuantitativa de grasa en heces el paciente deber llevar una

dieta estricta durante seis das exenta de grasas exceptuando
una yema de huevo cocida y tres cucharadas rasas de
mantequilla al da en el nio.
La muestra de heces de 24 horas se debe mantener refrigerada
en nevera a 4 C durante todo el periodo de recogida.
La muestra para determinacin de grasa en heces se
mantendr congelada hasta su envo a laboratorio.
El anlisis se realiza dentro de las 12 horas siguientes a la
ltima deposicin.

33

EXAMEN PARASICOLGICO DE LAS HECES

Introduccin
Los parsitos se alojan en el aparato digestivo sobre todo en el
intestino y una porcin de ellos, las larvas o los huevos son eliminados
con las heces, de ah la importancia de esta muestra en el estudio
parasitolgico.
Los parsitos ms frecuentes en las heces son de tres tipos:

helmintos, gusanos tipo scaris o tenia.

protozoos, como la giardia lambia y las amebas.

oxiuros o lombrices, muy frecuentes en nios pequeos.

Los signos de enfermedad por parsitos son muy variados por lo que el
medico solicitar el estudio en base a la sospecha clnica y que la tcnica
es diferente segn el parsito a estudiar.
Es aconsejable realizar varios anlisis simultneamente para
aumentar la fiabilidad.
Primero realizamos el examen macroscpico de la muestra de heces en
el cual observamos directamente parsitos enteros si los hubiere y la
consistencia.
A continuacin en el examen microscpico se buscan huevos de
helmintos y quistes de protozoos mediante tcnicas de concentracin por
flotacin o sedimentacin, tricroma, cuantificacin de huevos, tinciones
permanentes, etc.
Material
Envase estril o limpio, de plstico irrompible, boca ancha, hermtico
con tapn de rosca. A veces hay que aadir conservante o medio de
transporte.
Normas generales
Muestra debidamente identificada acompaada de solicitud de
estudio rellenada por el facultativo.
La cantidad de parsito que se elimina en cada deposicin puede
ser variable. Si estos no se encuentran en gran nmero en el

34

intestino tambin sern escasos en las muestras, por ello no

siempre que el resultado sea negativo se puede descartar la
existencia de parsitos.
Normalmente para descartarlos debe repetirse el examen al menos
tres veces en tres das distintos con intervalos entre tomas de unos
cinco das. Si son todos negativos se puede afirmar que no hay
parsitos.
Tres das antes de la recogida someter al paciente a una dieta donde
se eliminan o restringen los hidratos de carbono sobre todo vegetales
y fculas.
No tomar medicamentos a base de bismuto o carbn

pues las

muestras son muy opacas y no se analizan bien.

Los medios de contraste como sales de bario y los antibiticos pueden
disminuir la cantidad de parsitos en las heces sobre todo los
protozoos.
Las heces no deben calentarse porque se acelera la destruccin del
parsito. Hay que mantenerlas a temperatura ambiente.
La muestra debe enviarse inmediatamente al laboratorio. Si no es
posible fijarla con un conservante tipo alcohol polivinlico o fenol a
temperatura ambiente.
Si las heces son diarreicas la muestra debe enviarse sin demora antes
de que se enfre. Si las heces son pastosas o con huevos o larvas su
envo no es tan urgente. En el caso de muestras de protozoos
procesar antes de 30 minutos despus de la recogida. Si el paciente
elimina gusanos enviar en un frasco con suero salino.
En el caso de oxiuros tipo enterovirus vermicularis las hembras ponen
los huevos en los pliegues perianales produciendo picor en la zona.
Estos huevos no aparecen en las heces y su anlisis no sirve para el
diagnstico. En estos casos realizamos el test de Graham que consiste
en presionar con una cinta de celofn adhesivo sujeta por un depresor
en la zona perianal sin sobrepasar el esfnter anal, a primera hora de
la maana sin aseo previo y antes de defecar.

35

NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE

ESPUTO
Introduccin
El esputo es una mezcla de secreciones pulmonares y bronquiales
compuesta de plasma, mucina, agua y electrolitos y las partculas que se
adhieren a su paso por la va area como los restos celulares, secreciones
bronquiales y salivales y la flora bacteriana normal de la cavidad oral.
Se expulsa con la tos profunda y puede infectarse, teirse de sangre o
contener clulas anormales que puedan llevar al diagnostico de una
patologa.
El objetivo del examen de esputo es analizar la mucosidad a fin de
realizar un estudio citolgico

o de

determinar la presencia de

microorganismos patgenos en el cultivo o parasitosis.

EXAMEN MACROSCOPICO Y MICROSCPICO DEL ESPUTO
Para el examen macroscpico del esputo la muestra debe transferirse a
una placa de Petri esterilizada colocada sobre un fondo oscuro. Consiste
en la observacin directa de la consistencia y aspecto.
En las muestras normales el aspecto es claro y acuoso y cualquier
opacidad procede de material celular.
Hay enfermedades especficas que presentan aspectos caractersticos,
por ejemplo en el edema pulmonar el esputo es seroso, espumoso y teido
de sangre y en los procesos neumnicos el color amarillo indica pus y
clulas epiteliales.
En los esputos normales y patolgicos no se detecta ningn olor pero en
enfermedades como abscesos pulmonares y cuando hay pseudomonas
aparecen olores ptridos.
Una vez realizado el examen macroscpico todas las partculas
sospechosas se transfieren a un portaobjetos limpio para su examen
microscpico.
Cualquier sustancia, clula o bacteria puede observarse mejor
mediante tincin.
El resto de la muestra se cultiva.

36

CULTIVO DE ESPUTO
El cultivo de esputo identifica el agente causante de las infecciones en
las vas areas inferiores: traquea, bronquios y pulmn.
Sirve para confirmar el diagnostico de infeccin, saber de que germen se
trata y cual es el antibitico mas adecuado para su tratamiento. Es muy
til cuando la infeccin no ha respondido al tratamiento inicialmente
pautado, se esta convirtiendo en un proceso muy largo o se trata de
pacientes inmunodeprimidos.
Una vez obtenida la muestra realizaremos una serie de tcnicas
dirigidas a detectar un germen determinado segn la sospecha clnica.
Analizar el frotis de una muestra pequea de esputo al
microscopio.
Hacer una tincin de Gram para distinguir grmenes Gram + de
los Gram lo cual supone una valiosa informacin sobre los
antibiticos ms idneos en un principio.
Hacer una tincin BAAR baciloscopia cido alcohol resistente
especial para detectar micobacterias en especia el bacilo causante
de la tuberculosis. Se recomienda recoger esputo seriado durante
tres das consecutivos y refrigerar.
El resto de la muestra se siembra en varios medios de cultivo
segn el germen del que se sospeche con nutrientes suficientes a
una temperatura adecuada y se deja incubar un tiempo variable.
Despus se procede a su lectura en el microscopio. Se observa
cada 24 horas y solo si al cabo de seis semanas no ha crecido
nada se considera que es negativo. Esto quiere decir que el
paciente puede estar varias semanas sin un resultado definitivo.
Normalmente si hay grmenes suelen crecer y dar un resultado
positivo,

sin

embargo

veces

pesar

de

que

existen

microorganismos el resultado es negativo. Esto se debe a que

algunos son extremadamente sensibles y mueren en cuanto salen
del organismo por lo que cuando se procede a la siembra en
laboratorio ya es tarde y no crece nada.
37

 En otras ocasiones el resultado se demora de manera importante.

Esto ocurre porque todos los grmenes no crecen con la misma
velocidad y se requiere un nmero determinado de ellos para que
se detecte el positivo. A veces pueden necesitarse varias semanas
para obtener un resultado. Lo normal son 7-15 das.
Cuando crece algn germen patgeno se realiza el antibiograma
que consiste en exponer los grmenes a diversos antibiticos y ver
a cuales son resistentes y cuales van a hacer que no crezca o lo
haga ms lentamente. As sabemos que tratamiento es ms
efectivo.
Con el estudio parasitolgico del esputo podemos encontrar fases
larvarias de scaris, estrongyloides, amebas, huevos de gusanos
criptosporidium.
Material
Bote de plstico irrompible, boca ancha, capacidad mxima 50 cc,
hermtico con tapn de rosca, estril, seco y desechable.

Puede estar adaptado a una sonda de aspiracin controlada y a

una conexin de aspirador.

38

Placas de Petri.

Normas generales
Muestra identificada correctamente con nombre completo del paciente,
servicio, fecha y hora de la obtencin. Debe ir acompaada de una
peticin rellenada por el facultativo segn protocolo, donde adems
reflejaremos tipo de muestra y estudio que se solicita.
La muestra para cultivo debe obtenerse antes de iniciar tratamiento
antibitico si es posible. En caso de haber comenzado se debe hacer
constar en la peticin tipo de antibitico, dosis y hora de la ltima
administracin.
La colaboracin del paciente es esencial para obtener una muestra de
calidad para el estudio. En los nios grandes que no colaboran se
puede estimular la tos y poner el bote o una placa de Petri junto a la
boca. En los nios pequeos, neonatos, prematuros y lactantes se
opta por la recogida con aspiracin controlada.
La recogida de la muestra se har con tcnica lo ms asptica posible
sin tocar el interior del recipiente ni la parte interna de la tapa.
El esputo se obtiene tras expectoracin profunda. En posicin erguida
de pie o sentado hacer dos o tres respiraciones profundas y lentas
que ayudan a provocar la tos. As se consigue obtener secreciones del
tracto respiratorio inferior. Repetirlo tantas veces como sea necesario
para obtener la cantidad deseada.
Las muestras de esputo se contaminan con saliva, secreciones
nasofaringeas, bacterias, alimentos, pasta de dientes, etc. La
obtencin en ayunas y el preenjuague de la boca con agua sin

39

antisptico eliminara la mayora de estos contaminantes sin afectar al

resultado del anlisis.
La recogida debe ser preferentemente matinal. Las secreciones
bronquiales se acumulan durante el sueo por lo que puede ser ms
sencillo para el paciente obtener la muestra a primera hora de la
maana.

Otro

momento

adecuado

para

hacerlo

es

tras

la

administracin de un broncodilatador o una sesin de clapping y

drenaje postural.
Si las mucosidades son escasas o densas y cuando no podemos
obtener una expectoracin espontnea se puede inducir el esputo
mediante el aumento del flujo de la secrecin bronquial y estimulacin
de la tos. Se puede administrar jarabe expectorante sin antibitico y
nebulizaciones de aerosoles de suero fisiolgico hipertnico estril a
37 C. Puede estar contraindicado administrar estos aerosoles a
pacientes

asmticos

con

bronquitis

porque

hay

riesgo

de

broncoespasmo.
Si es imprescindible tomar la muestra de secreciones del la va
respiratoria baja y los mtodos reseados no son efectivos existen
diversas tcnicas ms agresivas encaminadas a la obtencin del
esputo: aspiracin traqueal a travs de boca, nariz, tubo orotraqueal y
traqueostomia, aspiracin a travs de broncoscopio, aspiracin
transtraqueal y transtoracica. Estas muestras son mas apropiadas
que las anteriores para identificar el agente etiolgico de la
enfermedad porque se obtiene en condiciones de asepsia. Utilice estos
mtodos cuando la infeccin no esta siendo controlada o cuando se
sospeche infeccin por anaerobios, en pacientes difciles, agitados,
comatosos o intubados.
Tras la obtencin de la muestra debe remitirse inmediatamente al
laboratorio. Si no fuese posible puede conservarse en frigorfico a 4 C
durante varias horas aunque no es aconsejable el cultivo de muestras
ms all de las 24 horas despus de su recogida.

40

NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE

LQUIDO CEFALORAQUIDEO (LCR)
Introduccin
El LCR baa el cerebro y la medula espinal y amortigua junto con las
meninges los traumatismos que pueda sufrir este tejido.
Es el vehculo de transporte de los nutrientes al cerebro, elimina los
desechos y compensa los cambios en el volumen y presin de la sangre
intracraneal.
Cuando se produce cualquier alteracin tanto en las meninges como en
el sistema nervioso central se liberan substancias o clulas anormales en
el LCR de modo que obteniendo unas gotas podemos estudiar estas
estructuras y generalmente aportan la informacin suficiente para llegar
al

diagnostico

preciso

de

diversas

patologas

como

infecciones

menngeas, enfermedades desmielinizantes del sistema nervioso central

y perifrico.
Adems podemos medir la presin de salida del LCR muy til por
ejemplo para confirmar hemorragia.
El examen del LCR consiste en el estudio macroscpico, conteo de
clulas, cultivo, estudio bioqumico con determinacin de protenas
totales, cloruros y glutamina, estudio de hongos, serologa infecciosa,
citologa, inmunofijacin.

EXAMEN MACROSCOPICO DEL LCR

El aspecto macroscpico del LCR es claro y transparente. El cambio de
color y opacidad denotan alteraciones como presencia de leucocitos que
enturbian la muestra, sangre mas o menos hemolizada que da un color
rosado o ictrido por una hemorragia reciente o de varias horas de
evolucin. Protenas y coagulacin espontnea son indicativas de
obstruccin por encima de la zona de puncin.

41

RECUENTO CELULAR DEL LCR

El conteo de clulas del LCR es una prueba que mide la cantidad de
hemates y leucocitos y puede ayudar a diagnosticar hemorragias,
infecciones, tumores, inflamaciones, abscesos y muerte por infarto de un
rea del sistema nervioso central.
Si se encuentran hemates puede ser indicio de hemorragia pero
tambin puede ser ocasionado por una puncin lumbar traumtica.
Se procede al recuento de los hemates en los tres tubos y si estn en
cantidad decreciente apoyan un origen puncional de la sangre. Tambin
se hace un recuento leucocitario.
Centrifugamos el LCR, extendemos el sedimento y lo teimos para el
recuento celular diferencial que tambin nos ayuda en el diagnostico de
la enfermedad. Un aumento de polinucleares sugiere enfermedad
infecciosa bacteriana. Un aumento de las clulas mononucleadas sugiere
una enfermedad viral, fngica o inmunolgica.
ANLISIS BIOQUMICO DE LCR
El estudio bioqumico del LCR es complementario de los anteriores. Las
variaciones

en

los

niveles

de

diversas

substancias

orientan

el

diagnostico. Las protenas y la glucosa son los parmetros ms

significativos sobre todo cuando se conoce su presencia en sangre. Por
ejemplo en las enfermedades infecciosas bacterianas o por hongos los
niveles de glucosa disminuyen y en las infecciones vricas y en las
inmunolgicas varan muy poco.
CULTIVO DE LCR
Con el cultivo se pretende identificar los microorganismos causantes de
infecciones del sistema nervioso.
Cuando se sospecha una infeccin se llevan a cabo los siguientes
estudios:
Tincin especial de Gram para realizar una distincin inicial del
germen Gram + o Gram - e instaurar el tratamiento antibitico ms
idneo sobre todo en situaciones de urgencia.
42

Tincin BAAR baciloscopia alcohol resistente y tincin de Ziehl para

detectar micobacterias.
Tincin de tinta china cuyo resultado positivo aporta informacin en
el estudio de hongos.
El resto de la muestra se siembra para su cultivo y al cabo de
cierto tiempo se consigue afinar mas y llegar a saber no el grupo
sino el germen concreto de que se trate. El crecimiento en el cultivo
se observa cada 24 horas. El nmero de grmenes que hay en una
muestra extrada del organismo es escaso y esto hace que sea
difcil verlos al microscopio. Por eso se siembra en varios medios de
cultivo segn el germen del que se sospeche con nutrientes y
temperatura adecuada un tiempo variable. Despus se procede a
su lectura al microscopio. Normalmente si hay grmenes suelen
crecer y dar un resultado positivo. Sin embargo a veces a pesar de
existir grmenes el resultado es negativo porque algunos son
extremadamente

sensibles

mueren

en

cuanto

salen

del

organismo. En muchas ocasiones el facultativo debe orientar la

teraputica en base a la clnica, tiempo de evolucin y otros datos
del LCR. Otras veces el resultado se demora mucho porque todos
los grmenes no crecen a la misma velocidad y como se requiere un
nmero determinado para detectar resultados positivos pueden
necesitarse a veces varias semanas. Lo habitual son 7-15 das.
Despus realizaremos antibiograma.
Material
Tres tubos de plstico transparente esteriles, secos,

irrompibles y

desechables, hermticos con tapn de rosca, capacidad 10 cc.

43

Normas generales
El mtodo ms comn para recolectar una muestra de LCR es
por puncin lumbar con tcnica asptica y aguja espinal en el
interespacio vertebral L3-L4 en nios grandes y L4-L5 en nios
ms pequeos. En este nivel el espacio esta lleno de lquido y
hay menos tejido nervioso siendo el riesgo de lesin menor. Si
se presentan contraindicaciones como hernias medulares,
deformidad o infeccin en la zona que imposibilitan la puncin o
invalidan los resultados recurriremos a mtodos alternativos
quirrgicos como la puncin cisternal o ventricular.
Identificacin de los tubos rotulados o etiquetados con nombre,
servicio, fecha y hora, tipo de muestra y numero de orden de
extraccin 1, 2 o 3.
Peticin rellenada por el facultativo segn protocolo. La muestra
se obtendr antes de administrar tratamiento antibitico al
paciente. Si existe tratamiento antibitico previo indicar en la
peticin tipo, dosis y hora de la ultima administracin.
El LCR se recoger con tcnica asptica por separado en tres
tubos estriles para los distintos estudios.
Evitar tocar el interior del tubo o del tapn.
Tras la puncin se medir la presin de salida del LCR.
Se obtendrn de 3 a 6 cc de lquido para evitar accidentes por
descompresin. Cada bote se intentara llenar secuencialmente
con al menos 1 cc.
El tubo 1 se destinara preferentemente al examen bioqumico.
El tubo 2 se enviara al servicio de anatoma patolgica para el
examen citolgico. El tubo 3 necesariamente estril se enviara
al laboratorio de microbiologa para su tincin, cultivo y
antibiograma. Se procurara no llenar este tubo el primero ya que

44

es ms fcil que este contaminado con grmenes de la piel o

una mala tcnica asptica.
El envo debe ser rpido y se deber sembrar y teir
inmediatamente. Si esto no fuera posible hay que conservar la
muestra hasta su procesamiento en estufa a 35-37 C. Nunca a
temperatura ambiente ni refrigerada. Debemos evitar la perdida
de viabilidad de los microorganismos sensibles a bajas
temperaturas.
Cuando el volumen de LCR obtenido sea pequeo y no sea
suficiente para los tres tubos debemos establecer prioridades en
el procesamiento en funcin del agente etiolgico ms probable
en el cuadro clnico. Si se sospecha infeccin se enviara al
laboratorio de microbiologa. Si se sospechan otros problemas se
har estudio macroscpico, bioqumico, etc.

45

BIBLIOGRAFA
CASTILLO DE LA ROSA, E.:Obtencin de muestras de esputo.
Tcnicas y procedimientos en revista metas. Marzo 2000.n 23.
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K.:Microbiologa mdica, 2 Edicin Editorial Hardcourt Mosby
ao 2000. Pginas 161-162-442-443-544.
RUIZ GONZLEZ, M.D. MARTNEZ BARELLAS, MR. GONZALEZ
CARRIN, P.: Enfermera del nio y del adolescente Editorial
Difusin de avances de enfermera. Ao 2000 Pginas 629 a 636.
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LOZA

FERNNDEZ

RODRIGUGEZ
clnica.

DE

BOBADILLA,

CREIXEMS

Recomendaciones

E.

PLANES

M.Procedimientos
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la

de

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REIGA

microbiologa
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de

enfermedades infecciosas y microbiologa clnica. Hemocultivos

2003.
JUSTICIA DEL RIO, A. Errores en la toma de muestras para
anlisis, en revisa metas. Septiembre 2003. Nmero 58, Pginas
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MESA PREZ, CA: Muestras de gases sanguneos y tiempos para
cuantificar valores exactos, en revista metas. Diciembre de 2000
Enero 2001. nmero 3 Pginas 41 a 43.
LENO GONZLEZ, D: LENO GONZALEZ, JL. CASTRO ACEDO, M.
LOZANO GERRERO, MJ, MARCOS HORTELANO, A.Extraccin de
sangre arterial para gasometra en revista metas, noviembre
2003. n 60 Pginas 18 a 22.

46

NORMAS GENERALES ............................................................................. 1

DE MUESTRAS BIOLGICAS .................................................................. 1
INTRODUCCIN ........................................................................................ 2
DEFINICIN .............................................................................................. 2
OBJETIVO ................................................................................................. 2
Introduccin ............................................................................................ 3
PRUEBAS PARA ESTUDIO HEMATOLGICO Y BIOQUMICO ............... 3
Introduccin ............................................................................................ 3
Material .................................................................................................... 3
NORMAS GENERALES: ............................................................................ 6
Esto puede ocurrir en diversas situaciones:....................................... 8
Relacionadas con la manipulacin en el laboratorio. .................... 10
Relacionados con el paciente: ............................................................ 10
HEMOCULTIVOS ..................................................................................... 11
Introduccin .......................................................................................... 11
Material .................................................................................................. 11
Normas generales ................................................................................. 12
GASOMETRA ARTERIAL ...................................................................... 15
Introduccin .......................................................................................... 15
Material .................................................................................................. 15
Normas generales ................................................................................. 16
NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE ORINA
................................................................................................................. 18
ANLISIS SISTEMTICO DE ORINA .................................................... 18
Introduccin .......................................................................................... 22
Material .................................................................................................. 22
Normas generales ................................................................................. 22
UROCULTIVO .......................................................................................... 24
Introduccin .......................................................................................... 24
Material .................................................................................................. 24
Normas generales ................................................................................. 24
MUESTRAS DE ORINA EN ANATOMA PATOLGICA. ........................ 26

47

NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE HECES

................................................................................................................. 27
Introduccin .......................................................................................... 27
ESTUDIO COPROLGICO....................................................................... 27
Material .................................................................................................. 27
Normas generales ................................................................................. 28
COPROCULTIVO ...................................................................................... 29
Introduccin .......................................................................................... 29
Material .................................................................................................. 29
Normas generales ................................................................................. 29
ESTUDIO DE SANGRE EN HECES ........................................................ 31
Introduccin .......................................................................................... 31
Material .................................................................................................. 31
Normas generales ................................................................................. 31
ESTUDIO DE HECES DE 24 HORAS .................................................... 32
Introduccin .......................................................................................... 32
Material .................................................................................................. 32
Normas generales ................................................................................. 32
EXAMEN PARASICOLGICO DE LAS HECES ...................................... 34
Introduccin .......................................................................................... 34
Material .................................................................................................. 34
Normas generales ................................................................................. 34
NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE
ESPUTO ................................................................................................... 36
Introduccin .......................................................................................... 36
EXAMEN MACROSCOPICO Y MICROSCPICO DEL ESPUTO .............. 36
El resto de la muestra se cultiva. ............................................................. 36
CULTIVO DE ESPUTO ............................................................................ 37
Material .................................................................................................. 38
Normas generales ................................................................................. 39
Introduccin .......................................................................................... 41
EXAMEN MACROSCOPICO DEL LCR .................................................... 41
RECUENTO CELULAR DEL LCR ............................................................ 42

48

ANLISIS BIOQUMICO DE LCR .......................................................... 42

CULTIVO DE LCR.................................................................................... 42
Material .................................................................................................. 43
Normas generales ................................................................................. 44
BIBLIOGRAFA ........................................................................................ 46

49