Escuela Profesional de Ingeniera en Industrias Alimentarias

Curso: Microbiologa de alimentos Prcticas

Dr. Elva Meja Delgado
Ing. Cynthia Bisso Muoz

PRACTICA N5
NUMERACIN DE ENTEROCOCCUS, PSEUDOMONAS Y STAPHYLOCOCCUS
NUMERACIN DE ENTEROCOCCUS
I.

COMPETENCIAS
Determinar si en la muestras de alimentos analizada se observo el
crecimiento enterococcus.

II.

FUNDAMENTO

Este gnero presenta clulas esfricas u ovoides en pares o cadenas cortas. No

forma esporas y son Gram positivas, algunas veces mviles con escasos flagelos.
Son anaerobios facultativos con metabolismo fermentativo sin produccin de gas
y con un pH final de 4.2 a 4.6. Pueden crecer en temperaturas de 10 a 45 C.
Toleran pH bsico de 9.6, 6.5 % de NaCl y 40% de bilis. Estos microorganismos
se encuentran de forma natural en la flora intestinal humana

y en aguas

servidas. As mismo son indicadores de contaminacin fecal en los alimentos,

para identificar los E. faecales requiere de una incubacin a temperatura de 42 a
45 C a pH 6. Otro tipo de enterococos crecen a pH 7. Su coloracin es rosada
rojiza. Son Gram positivos.

Enterococos en medio

III.

Enterococos en agar sangre azida

MATERIALES, EQUIPO Y METODOLOGIA

MATERIALES

Placas Petri
Muestra: aguas servidas o agua de cao
Caldo peptonado
Jeringas de 1 mL

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Ing. Cynthia Bisso Muoz

Contador de colonias
Agar nutritivo
Plumones marcadores
Agua destilada

EQUIPOS

Bao mara regulada a 42C

METODOLOGIA

Extraer 1 mL de agua proveniente del inodoro y aadirlo a 9 mL de caldo

peptonado

Homogenizar la muestra

Extraer 0.1 mL de muestra y sembrar en placa Petri con medio Agar

nutritivo a pH 6, se recomienda agar sangre azida

Extender la muestra utilizando la esptula de Digralsky

Incubar a temperatura de 42 C durante 48 horas

Sembrar en Realizar el conteo microbiano eligiendo placas que contengan

de 30 a 300 colonias. No olvidar multiplicar al resultado por el factor de
dilucin correspondiente.

Para el conteo utilizar la frmula:

UFC= (N/4)*A*D
Donde:
(N/4): nmero de microorganismos contados en 4 cuadrantes de la placa.
A: rea de la placa
D: Dilucin de la muestra
IV.
V.
VI.

VII.

RESULTADOS
DISCUSIN
Indicar resultados y comparar con normativas de alimentos
CONCLUSIONES
Indicar si hubo crecimiento, de ser satisfactorio detallar el nmero de
colonias por muestra
REFERENCIAS BILIOGRAFCAS

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Ing. Cynthia Bisso Muoz

Len, J., Quillama, E., Garca, R., Ramrez, P., Alvarado, D. Manual de
prcticas de bacteriologa, 2005. Universidad Nacional Mayor de San
Marcos.
NUMERACIN DE PSEUDOMONAS
I.

COMPETENCIAS
Realizar la siembra y el recuento de pseudomonas en muestras de
alimentos e indicar si existe crecimiento.

II. FUNDAMENTO
Este gnero comprende microorganismos rectos o curvos. Son Gram negativos, no
esporulados y mviles.
Su temperatura de crecimiento es variable, pudiendo desarrollarse

en

temperatura de 4 a 42C. Para su identificacin se debe determinar el nmero de

flagelos, el tipo de pigmento que producen, la hidrlisis de gelatina y almidn, as
como la formacin de arginina y la utilizacin no fermentativa de azcares.
Se encuentran en agua de mar, agua de regado, tierra, piel,

organismos

acuticos y en heridas de personas con quemaduras. La pseudomona presenta

una coloracin verdosa en agar TCBS.

Fotos de pseudomona en verduras

III. MATERIALES, EQUIPO Y METODOLOGIA

MATERIALES

Placas Petri
Muestra: verduras malogradas si lavar
Jeringas de 1.0mL
Contador de colonias
Caldo peptonado
Agar GSP ( medio selectivo)
Plumones marcadores
Agua destilada

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Dr. Elva Meja Delgado
Ing. Cynthia Bisso Muoz

EQUIPOS

Incubadora o estufa regulada a 37C

METODOLOGIA PARA MUESTRA DE ALIMENTO

Extraer 1 g de verdura malograda y aadirlo a 9 mL de caldo peptonado

Homogenizar la muestra

Extraer 0.1 mL de muestra y sembrar en placa Petri con medio Agar GSP

Extender la muestra utilizando la esptula de Digralsky

Incubar a temperatura de 37 C durante 48 horas

Contar las colonias que producen piorrubina o pigmento verde azulado y

marrn rojizo, y las que emiten fluorescencia bajo luz UV. Se confirma que
son Pseudomonaaeruginosa.

Para el conteo utilizar la frmula:

UFC= (N/4)*A*D
Donde:
(N/4): nmero de microorganismos contados en 4 cuadrantes de la placa.
A: rea de la placa
D: Dilucin de la muestra
IV. RESULTADOS
V.
DISCUSIN
Indicar resultados y comparar con normativas de alimentos
VI.
CONCLUSIONES
Indicar si hubo crecimiento, de ser satisfactorio detallar el nmero de
colonias por muestra
VII. REFERENCIAS BILIOGRAFCAS
Roberts, D., Hooper, W. y Greenwood, M. 1995. Microbiologia prctica de
los alimentos. Editorial Acribia S.A. Zaragoza, Espaa.

NUMERACIN DE STAPHYLOCOCCUS

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Curso: Microbiologa de alimentos Prcticas
Dr. Elva Meja Delgado
Ing. Cynthia Bisso Muoz

I.

COMPETENCIAS
Realizar la siembra y el recuento de staphylococcusen muestras de
alimentos.
Realizar el muestreo y anlisis de staphylococcus en una muestra de
saliva de manipulador de alimentos.

II.

FUNDAMENTO
El microorganismo ms comn de este gnero es el Staphylococcusaureus.
Para su aislamiento se requiere de medios selectivos que contengan
concentraciones altas de sal. El recuento en agar manitol salado es selectivo
y el microorganismo origina colonias caractersticas.
Este microorganismo tiene forma de cocos de 0.8 a 1 m de dimetro, se
agrupan

generalmente

en

racimos.

Son

inmviles,

fermentan la glucosa y son anaerobios facultativos.

S. aureus en agar manitol salado

III.

MATERIALES, EQUIPO Y METODOLOGIA

MATERIALES

Placas Petri
Muestra: pasteles
Jeringas de 1.0 mL
Contador de colonias
Caldo peptonado
Agar manitol salado
Plumones marcadores
Agua destilada

EQUIPOS

Incubadora o estufa regulada a 37C

METODOLOGIA PARA MUESTRA DE ALIMENTO

Gram

positivas,

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Curso: Microbiologa de alimentos Prcticas
Dr. Elva Meja Delgado
Ing. Cynthia Bisso Muoz

Extraer 1 g de muestra de pastel y aadirlo a 9 mL de caldo peptonado

Homogenizar la muestra

Extraer 0.1 mL de muestra y sembrar en placa Petri con medio Agar

manitol salado

Extender la muestra utilizando la esptula de Digralsky

Incubar a temperatura de 37 C durante 48 horas

Sembrar en Realizar el conteo microbiano eligiendo placas que contengan

de 30 a 300 colonias. No olvidar multiplicar al resultado por el factor de
dilucin correspondiente.

Para el conteo utilizar la frmula:

UFC= (N/4)*A*D
Donde:
(N/4): nmero de microorganismos contados en 4 cuadrantes de la placa.
A: rea de la placa
D: Dilucin de la muestra
IV.
RESULTADOS
V.
DISCUSIN
Indicar resultados y comparar con normativas de alimentos
VI.
CONCLUSIONES
Indicar si hubo crecimiento, de ser satisfactorio detallar el nmero de colonias
VII.
VIII.

IX.

por muestra
DISCUSION
CONCLUSIONES

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Roberts, D., Hooper, W. y Greenwood, M. 1995. Microbiologia prctica
de los alimentos. Editorial Acribia S.A. Zaragoza, Espaa.