EXPLOTANDO

R LA ALELOPATA EN LA
BSQUEDA DE BIOHERBICIDAS NATURALES DE
ORIGEN VEGETAL

Lorena
lvarez-Iglesias*, Alberto Garabatos, Carolina G. Puig,
Manuel J. Reigosa y Nuria Pedrol#

Laboratorio de Ecofisioloxa Vexetal.

Departamento de Bioloxa Vexetal e Ciencia do Solo.
Universidade de Vigo.
g
*lorena.alvarez@uvigo.es; #pedrol@uvigo.es
Toda esta diversidad de compuestos naturales es una fuente
de nuevos bioherbicidas

Origen, tipos y funciones ecolgicas de los metabolitos secundarios de

origen vegetal. Adaptado de Hartmann (2007)
 Dnde buscar herbicidas naturales?

Estrategia fitoqumica
Estrategia ecolgica
 Dnde buscar herbicidas naturales?

mica
PLANTA
Esttrategia fitoqum

EXTRACTO

BIOENSAYO

FRACCIONES

BIOENSAYO

COMPUESTOS PUROS

Etapas b
Et bsicas
i en ell aislamiento
i l i t biodirigido
bi di i id de
d metabolitos
t b lit
secundarios.
 Dnde buscar herbicidas naturales?

mica
PLANTA
Esttrategia fitoqum

EXTRACTO

BIOENSAYO

FRACCIONES

BIOENSAYO

COMPUESTOS PUROS

Etapas b
Et bsicas
i en ell aislamiento
i l i t biodirigido
bi di i id de
d metabolitos
t b lit
secundarios.

Especie, fenologa, parte u rgano

 Dnde buscar herbicidas naturales?

mica
PLANTA
Esttrategia fitoqum

EXTRACTO

BIOENSAYO

FRACCIONES

BIOENSAYO

COMPUESTOS PUROS

Etapas b
Et bsicas
i en ell aislamiento
i l i t biodirigido
bi di i id de
d metabolitos
t b lit
secundarios.

Especie, fenologa, parte u rgano, ELUYENTE

 Dnde buscar herbicidas naturales?

mica
PLANTA
Esttrategia fitoqum

EXTRACTO

BIOENSAYO

FRACCIONES

BIOENSAYO

COMPUESTOS PUROS

Podemos encontrar compuestos producidos por cualquier

planta que resulten fitotxicos, pero que no cumplan un
papel
p p ecolgico
g en las interacciones entre p
plantas p
porque
q
no estn disponibles de forma natural.
Cmo se obtienen los extractos y las fracciones?

Extractor Soxhlet
Cmo se aslan e identifican los compuestos?

Aislamiento de compuestos:
cromatografa en columna
Cmo se aslan e identifican los compuestos?

Aislamiento de compuestos: HPLC

Cmo se aslan e identifican los compuestos?

Espectrmetro de
masas (MS):
( )
determinacin
estructural
Cmo se aslan e identifican los compuestos?

Cromatgrafo de gases (GC) acoplado a espectrmetro de masas (MS):

tcnica en tndem
 Cmo se aslan e identifican los compuestos?
Determinacin estructural:
tndem UV-NMR-MS 100%
m/z=182
DIBOA Standard seedling extract
75%

50%

25%

200 225 250 275 300 0%

Wavelength (nm)
 Dnde buscar herbicidas naturales?

gica
Mecanismos de
a ecolg liberacin de
sustancias fitotxicas
al medio por las
Esttrategia

plantas productoras.
 Dnde buscar herbicidas naturales?

gica
Mecanismos de
a ecolg liberacin de
sustancias fitotxicas
al medio por las
Esttrategia

plantas productoras.

Cultivo
Cultivo precedente
Rotacin
Abono verde
Flora acompaante
 Dnde buscar herbicidas naturales?

gica
Mecanismos de
a ecolg liberacin de
sustancias fitotxicas
al medio por las
Esttrategia

plantas productoras.

Cultivo
Cultivo precedente
Rotacin
Abono verde
Flora acompaante*

El cctel dinmico
Cmo probar que los herbicidas naturales funcionan?

Estrategias fitoqumica //ecolgica

Necesitamos herramientas que nos permitan seleccionar de forma

p , fiable y reproducible
rpida, p los extractos/compuestos
/ p con inters
como herbicidas naturales: los BIOENSAYOS.
Cmo probar que los herbicidas naturales funcionan?

Necesitamos herramientas que nos permitan seleccionar de forma

rpida fiable y reproducible los extractos/compuestos con inters
rpida,
como herbicidas naturales: los BIOENSAYOS.

ACTIVIDAD GENERAL
1
FITOTOXICIDAD
2
MODO

3
DE
ACCIN
Cmo probar que los herbicidas naturales funcionan?

1
BIOENSAYOS DE ACTIVIDAD GENERAL
Ejemplo: El bioensayo de elongacin de coleptilos etiolados de trigo evala la
elongacin de las clulas indiferenciadas del meristemo apical de trigo cuando se
incuban en un medio lquido con los extractos/compuestos evaluados.
Cmo probar que los herbicidas naturales funcionan?

2
BIOENSAYOS DE FITOTOXICIDAD
Evalan el efecto de los compuestos sobre parmetros macroscpicos. Los ms
comunes miden la germinacin de semillas, y la elongacin de los primordios
de raz y tallo en plntulas.

(a) Semillas de la especie diana

(b) Sustrato de papel
(c) Solucin
con las molculas
de ensayo
Cmo probar que los herbicidas naturales funcionan?

3
ESTUDIOS FISIOLGICOS (MODO DE ACCIN)
Determinan el proceso o procesos afectados por el extracto/compuesto evaluado,
desde el nivel de la planta completa hasta el nivel molecular, que sern
responsables de las alteraciones macroscpicas en las plantas diana.
Cmo probar que los herbicidas naturales funcionan?

3
ESTUDIOS FISIOLGICOS (MODO DE ACCIN)
Determinan el proceso o procesos afectados por el extracto/compuesto evaluado,
desde el nivel de la planta completa hasta el nivel molecular, que sern
responsables de las alteraciones macroscpicas en las plantas diana.

control g p L1
5,6gps , g p L1
3,3gps
Cmo probar que los herbicidas naturales funcionan?

3
ESTUDIOS FISIOLGICOS (MODO DE ACCIN)
Determinan el proceso o procesos afectados por el extracto/compuesto evaluado,
desde el nivel de la planta completa hasta el nivel molecular, que sern
responsables de las alteraciones macroscpicas en las plantas diana.
 El camino ecolgico / agroecolgico

Cules son los mecanismos subyacentes a

los efectos alelopticos/bioherbicidas
observados en el agroecosistema?

Cul es la va de liberacin de los compuestos?

Qu compuestos se liberan?
Cul es su destino una vez liberados?
Qu consecuencias tienen en los elementos del
agroecosistema?
Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?
Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?
Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?
Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?

Planta de
estudio

Soporte para
el cultivo

20 g Amberlite

Bomba Obtencin de exudados radiculares.

Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?

Planta de
estudio

Soporte para
el cultivo

20 g Amberlite

Bomba Obtencin de exudados radiculares.

Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?
 Cules son los
mecanismos
subyacentes a los
efectos observados?

Pluviotrn: simulador de lluvia.

Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?
 Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?
A

Bioensayo B
de voltiles
(Barney et
al. 2005)

C D
Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?

Aislamiento de
voltiles
l il Likens-
Lik
Nickerson
 Cules son los mecanismos subyacentes a los
efectos observados?

IRa IRb Compound %

870 1376 cis-3-Hexen-1-ol 13.0
957 1441 1-Octen-3-ol 11.8
973 1340 Hept-5-ene-6-methyl-2-one 1.6
980 1286 n-Octanal 0.4
1006 1680 Phenylacetaldheyde 1.5
1048 1637 2-Octenol 1.7
1048 1548 Octanol 1.7
1069 1466 trans-Linalool oxide 0.2
1086 1393 N
Nonanal
l 44
4.4
1086 1541 Linalool 11.4
1132 1340 Hexylisobutirate 1.1
1158 1597 Terpinene-4-ol 0.3
1170 1692 -Terpineol 1.8
1183 1494 Decanal 0.2
1194 1614 -Cyclocitral 0.5
1210 1788 Nerol 1.8
1235 1836 Geraniol 3.5
1272 1590 2-Undecanone 0.5
1327 2156 Eugenol 2.1
1358 1810 E--Damascenone 1.7
1367 2009 Methyleugenol 2.9
1408 1590 E-Caryophyllene 1.6

Cromatgrafo de gases (GC) acoplado a 1461 1687 -Acoradiene 2.4

1476 1800 2-Tridecanone 0.8
espectrmetro de masas (MS): 1546 2029 E-Nerolidol 1.2

tcnica en tndem
1618 2186 -Muurolol 0.4
1629 2216 -Cadinol 0.4
1765 n.d. Tetradecanoic acid 1.4
1832 n.d. Hexahydrofarnesylacetone 2.8
2101 n.d. Phytol 1.0
Oxygen containing monoterpenes 21.2
Sesquiterpene hydrocarbons 40
4.0

Volatile compounds Oxygen containing sesquiterpenes 2.0

Compounds listed in order to their elution on the SPB-1 column. Aliphatic compounds 41.4
a Retention indices on the SPB-1 column relative to C8C23 n-alkanes. Other compounds 7.5
b Retention indices on the SupelcoWax-10 column relative to C8 to C23 n-alkanes.
Total identified 76.1
BSQUEDA DE BIOHERBICIDAS NATURALES DE ORIGEN VEGETAL

Concluyendo
y

La bsqueda de bioherbicidas de origen natural est

ntimamente ligada
g al desarrollo de las tcnicas de
aislamiento e identificacin de compuestos.
Las metodologas de anlisis acopladas en tndem han
aumentadod enormemente lla eficiencia
f d
de este tipo d
de
estudios.
BSQUEDA DE BIOHERBICIDAS NATURALES DE ORIGEN VEGETAL

Concluyendo

Las plantas sintetizan una enorme variedad de

productos naturales que representan una fuente casi
inagotable de compuestos con potencial bioherbicida.
En algunos casos, las molculas aisladas son
responsables de fenmenos alelopticos que ocurren en
la naturaleza.
naturaleza Pero que una especie produzca un
determinado metabolito no quiere decir que ste sea
liberado al medio en condiciones naturales para ejercer
un papel ecolgico.
ecolgico
Creemos que el uso de plantas, extractos
vegetales, o compuestos bioherbicidas en
Agricultura Ecolgica debe estar ligada a su
naturaleza aleloptica.
 BSQUEDA DE BIOHERBICIDAS

EN LA RUTA AGROECOLGICA DE LA S.E.D.A.

Nuevas
herramientas
herramientas
de Biodiversidad
Tradicin investigacin vegetal
Cultivares
Cultivares
locales

Soberana
Bioherbicidas
(cultivos/extractos/
/
/compuestos) )

Otrasventajas
OMGs d l
deloscultivos
lti
SNTESIS decoberteray
MODIFICACIN
abonosverdes

Sustentabilidad Resiliencia