Cromatografa de Intercambio inico

a) Fundamento:
El principio bsico de la cromatografa de intercambio inico es que las
molculas cargadas se adhieren a los intercambiadores de forma reversible de
modo que dichas molculas pueden ser asociadas o disociadas cambiando el
ambiente inico. La separacin mediante intercambiadores inicos se realiza
por lo general, en dos fases: en la primera las sustancias a separar se unen al
intercambiador utilizando condiciones que originan una unin fuerte y estable;
a continuacin, se eluye de la columna con buffers de diferentes pH o diferente
fuerza inica, compitiendo los componentes del buffer con el material por los
sitios de unin. R+ A- es un intercambiador aninico en la forma A - y Brepresenta a los aniones en la disolucin.
R+A- + B- R+B- + ACon R simbolizamos la macromolcula insoluble en agua y A y B son los
contraiones mviles.
Los intercambiadores inicos son redes tridimensionales de macromolculas
con un determinado nmero de cargas electrostticas fijas por unidad
estructural.
La Fase Estacionaria consta de una matriz (R) con grupos funcionales cargados
y contraiones de carga opuesta (M), susceptibles de intercambiarse con
especies de la misma carga contenidas en la Fase Movil (X):
R- A- M+ + X+ R- A- X+ + M+ (intercambio catinico)
R- A+ M- + Y- R- A+ Y- + M- (intercambio aninico)
b) Indique las variantes que existen. Ejemplos.
Segn su composicin qumica pueden ser: inorgnicos u orgnicos.
Entre los intercambiadores inorgnicos se encuentran zeolitas naturales y
sintticas, hidrxidos de Cr (III) y de zirconilo (IV), fosfato de zirconio, sales
de heteropolicidos, etc. Se los emplea principalmente en procesos
relacionados con la energa nuclear, ya que son estables a la radiactividad.
Los intercambiadores orgnicos pueden ser naturales o sintticos.
o Los naturales son derivados de polisacridos, poseen tamaos de
poro grandes y menor densidad de grupos cargados. Entre ellos se
encuentran la celulosa y el dextrano. Por sulfonacin u oxidacin
parcial de sustancias celulsicas, se obtienen intecambiadores
catinicos con grupos OH, -COOH, -SO3H. Otros intercambiadores
macroporosos son los basados en la agarosa y en la poliacrilamida.

Las sintticas son las denominadas Resinas los cuales son los
intercambiadores ms empleados.

c) Sus aplicaciones en cada caso. Ejemplos.

Deionizacin del agua: Las impurezas inicas del agua se pueden
remover pasando el lquido a travs de una resina aninica en su forma OH y una resina catinica en su forma H+

Interconversin de sales:

Concentracin de trazas: a veces es necesario concentrar un

componente para poder hacer su determinacin. Por ejemplo, si se hace
pasar un gran volumen de agua a travs de una resina catinica en su
estado H+, se podrn concentrar iones metlicos presentes en el agua.
Medicin de la hemoglobina glicosidica.
Determinacin de Porfobilingeno (PBG) y Acido deltaaminolevulinico (ALA) en orina.
Extraccin y purificacin de cidos nucleicos
d) Proponga y resuelva un problema donde se vea la aplicacin de estos
conceptos.
1. Suponga que desea purificar por cromatografa de intercambio inico una
enzima del metabolismo del ADN, cuyo sustrato es precisamente ADN.
Seleccionara una resina de intercambio aninico o catinico? Por qu?
Repuesta: Se seleccionara una Resina de intercambio catinico. Porque al pH
que se trabaja se podra suponer que el sitio activo de la enzima tiene carga
neta positiva.
2. Escriba el orden de elucin de las siguientes protenas al aumentar el
gradiente salino. Se utilizan columnas de intercambio inico: a) citocromo c
(pI= 10,5), lisozima (pI= 11,0), albmina de huevo (ovoalbmina, pI= 4,6), 2
mioglobina (pI= 7,0), de una columna de intercambio aninico. b) citocromo c
(pI= 10,5), pepsina (pI= 1,0), ureasa (pI= 5,0) y hemoglobina (pI= 6,8) de una
columna de intercambio catinico. Explique sus respuestas.
Repuesta:
a) lisozima- citocromo C- mioglobina- ovoalbmina.

b) pepsina- ureasa- hemoglobina- citocromo C.