UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA Centro de ciencias exactas e ingenierías

CROMATOGRAFIA DE
INTERCAMBIO IONICA
 INTRODUCCION:
La cromatografía iónica (ic) se
refiere a los métodos modernos y
eficientes para separar y determinar
iones en columnas con relativamente
baja capacidad de intercambio iónico
o anionico.
 QUE ES??
Es un proceso que permite la separación de iones y
moléculas polares basado en las propiedades de
carga de las moléculas. Puede ser usada en casi
cualquier tipo de molécula cargada, incluyendo
grandes proteínas, pequeños nucleótidos y
aminoácidos.
 PARA QUE SIRVE??

Esta técnica nos sirve para determinar bajas

concentraciones de iones y es especialmente útil
en estudios sobre el medio ambiente y la calidad
del agua, entre otras aplicaciones.
 PRINCIPIOS:

Las partículas cargadas negativamente se

unen a la matriz solida cargada
positivamente, y son retenidas.
Las partículas cargadas positivamente son
rechazadas por la matriz solida cargada
positivamente y son eluidas.
La elución de las partículas cargadas
negativamente se consigue cambiando el
pH del solvente hasta igualarlo a su punto
isoeléctrico o hasta invertir su carga neta
El proceso de adsorción es afectado por:

• Constituyentes de la fase móvil

• La fase estacionaria
• El soluto
Generalmente la fase móvil es un poco
conductiva.

La adsorción de las moléculas al soporte

solido es debida a la interacción entre los
grupos iónicos (residuos de aminoácidos) en
la molécula de muestra y el ligando en el
soporte
La cromatografía de intercambio iónico
conserva los analitos basándose en las
interacciones de coulomb. La fase
estacionaria muestra en la superficie grupos
funcionales iónicos que interactúan con iones
de carga opuesta del analito.
 Clasificación
Retiene cationes
cargados positivamente
debido a que la fase
intercambio estacionaria muestra un
catiónico grupo funcional cargado
negativamente como un
Cromatografía
ac. fosfórico
de
intercambio
iónico

intercambio Retiene aniones usando

anionico grupos funcionales
cargados positivamente,
como un catión de
amonio cuaternario.
 Intercambiadores Iónicos

Existen 3 tipos de intercambiadores iónicos:

RESINAS (MATRICES ORGÁNICAS)

GELES (MATRICES ORGÁNICAS)
INTERCAMBIADORES
INORGÁNICOS
 RESINAS

Tienen como base una matriz orgánica de

polímeros entrecruzados.
Comúnmente se emplea el poliestireno,
obtenido por copolimerización de estireno y
divinil benceno.
Se modifican los anillos de benceno para
poder obtener resinas capaces de retener
iones.
 Intercambiadores Iónicos

Se dividen en fuertes o debiles, anionico o

cationico
Tipo Grupo activo Rango de pH de Eje. De aplicacion
operacion
Intercambiador cationico --SO3 1-14 Aminoacidos,
fuertemente acido separaciones
inorganicas
Intercambiador cationico --COO- 5-14 Elementos de
Debilmente acido transicion, bases
organicas
Intercambiador anionico Eje. –N+(CH3) 1-12 Alcaloides, acidos
fuertemente basico grasos
Intercambiador anionico Eje. – 1-9 Acidos organicos
debilmente basico C2H4N(C2H5)2 y aminoacidos
DEAE
 GELES:

Se emplean compuestos análogos del

dextrano ya que son más blandos que las
resinas.
Son empleados en casos específicos
dependiendo la naturaleza de la muestra y
fase móvil.
 Variables
pH del buffer

• Como regla el pH de la fase móvil debe de estar entre el punto isoeléctrico

o el pKa de la molécula cargada y el pKa del grupo funcional en el soporte
solido.

Gradiente de Concentración de Sales

• Como en casi todos los métodos de cromatografía una muestra de proteína

se inyecta en la columna bajo condiciones donde sea fuertemente retenida.
• Después se aplica un incremento de gradiente lineal de concentración de
sales para eliminar los componentes de la columna.

pH variante

• El incremento no necesariamente un gradiente lineal

• Puede ser por incrementos
 Aplicaciones

◦ La concentración de elementos radiactivos o la eliminación de radiactividad por

medio de resinas de intercambio iónico es otra aplicación importante de este
método y es de mucho interés en el tratamiento de desperdicios radiactivos.
◦ Medición de la hemoglobina glicosilada. El método de cromatografía de
intercambio iónico se basa en la elusión diferencial de la hemoglobina glicosilada
por el cambio de carga que se produce en la molécula debido a la glicación del
grupo amino terminal de la cadena. Para realizar el procedimiento se utiliza
carboximetil celulosa cargada (-).
◦ Extracción y purificación de ácidos nucleicos. la principal aplicación de esta
cromatografía es la purificación de ADN plasmídico para transfección
(introducción de material genético externo en células eucariotas mediante
plásmidos). Esta técnica incluye un pretratamiento de la muestra que consiste en
una lisis bacteriana en condiciones alcalinas que ocasiona una desnaturalización
del ADN cromosómico y plasmídico. Antes de la introducción de la muestra en la
columna se trata con acetato potásico, lo que ocasiona que el ADN cromosómico
precipite junto con el resto de componentes de la muestra, mientras que el ADN
plasmídico se renaturaliza y permanece en disolución.
 Otras Aplicaciones

 Purificación de agua
 Purificación del fibrinógeno de la leche
 Determinación de anticonvulsantes en el suero después de
la extracción de la fase sólida.
 Análisis de antibióticos de poliéter
 Determinación de pesticidas.
 Identificación de ácidos orgánicos en la fruta y en el jugo.
 Detección de derivación-fluorescencia post-columna para
análisis para varios tipos de pesticidas agrícolas .
 Determinación de metabolitos de Triptofan en el suero
umbilical.
 Equipos en la Industria

Los primeros kits basados en cromatografía

de intercambio iónico los desarrollaron hace
25 años dos empresas alemanas llamadas
DIAGEN (DIAgnostic GENetic) y
MACHEREY-NAGEL
En la actualidad podemos encontrar
empresas como BIO-RAD, MERCK,
BioSystems entre otras, las cuales
proporcionan tanto equipos como
suplementos para cromatografía de
intercambio iónico
 VENTAJAS Y
DESVENTAJAS
 Ventajas:
 Alta capacidad
 Alta resolución
 Paso concentrador: se puede sembrar un gran
volumen para luego eluirlo en un menor volumen. Con
una misma columna se puede utilizar a diferentes pH
y obtener diferentes perfiles de elución.

 Desventajas:
 Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser
aplicadas a este tipo de cromatografía.