PRCTICA 3: IDENTIFICACIN CUALITATIVA DE LPIDOS EN UN TEJIDO ANIMAL

Jairo Mejia
1
(25051801), Paula Ortiz
2
(2553910);
GRUPO 8

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
Palabras clave: biomolculas, soluble, solvente, cidos grasos, fosfolpidos y colesterol
Objetivos generales:
Identificar las diferencias existentes entre las molculas de CHOS, CHON, lpidos y
cidos nucleicos, y observar su comportamiento de solubilidad en solventes orgnicos a
una temperatura determinada.
Emplear las solubilidades diferenciales y la centrifugacin como mtodo para fraccionar
un tejido animal. Por medio de la observacin identificar los componentes lipdicos de la
muestra.
Analizar la accin de los cidos en las molculas de CHOS, CHON, lipidos y acidos
nucleicos y comprender el fundamento de sus diferencias por medio de la observacin de
cambios fsicos.
Objetivos especficos:
Comprender las propiedades de los lpidos, su comportamiento y clasificacin estructural,
e identificar las diferencias entre estos grupos ( grasas, fosfolpidos, ceras y esteroles)
Relacionar el comportamiento de los lpidos segn su estructura con la funcin que
desempea en el organismo.

INTRODUCCIN
Los lpidos son un grupo heterogneo de biomolculas. Se consideran lpidos molculas como
las grasas y los aceites, los fosfolpidos, los esteroides y los carotenoides, que se diferencian
mucho en estructura y funcin. A causa de su diversidad, el trmino lpido tiene una definicin
ms operativa que estructural (Mckee et al., 2003). Tienen la propiedad comn de ser: 1)
relativamente insolubles en agua y 2) solubles en los solventes no polares como el ter, el
cloroformo y el benceno (Harper, 2001).
Los lpidos pueden clasificarse de muchas formas diferentes. En el cuerpo humano se dividen en
cuatro clases diferentes de acuerdo a su estructura: grasas, fosfolpidos, ceras y esteroides como
el colesterol. A continuacin se considera cada una de estas clases.

1
Jairo E. Meja Benavides, jaemejiaben@unal.edu.co, UNAL-Bogot, Est. Ing. Agronmica.
2
Paula Andrea Ortiz Rubio, paaortizru@unal.edu.co, UNAL -Bogot, Est. Nutricin y diettica.
Las grasas o cidos grasos son cidos monocarboxlicos que contienen tpicamente cadenas
hidrocarbonadas de longitudes variables (entre 12 y 20 carbonos). Este tipo de lpidos son
componentes importantes de varias clases de molculas lipdicas. Se encuentran principalmente
en los triacilgliceroles y varias clases de molculas lipdicas unidas a las membranas. La mayor
parte de los cidos grasos naturales posee un nmero par de tomos de carbono que forma una
cadena sin ramificar (Mckee et al., 2003).
Los fosfolpidos son los primeros y ms importantes componentes estructurales de las
membranas. Adems, varios fosfolpidos son agentes emulsionantes y agentes superficiales
activos. (Un agente superficial activo es una sustancia que disminuye la tensin superficial de un
lquido, normalmente el agua, de forma que se dispersa por una superficie.) Los fosfolpidos
son muy adecuados para estas funciones ya que son molculas anfipticas. A pesar de sus
diferencias estructurales, todos los fosfolpidos poseen dominios hidrfobos e hidrfilos. El
dominio hidrfobo est formado en gran parte por las cadenas hidrocarbonadas de los cidos
grasos; el dominio hidrfilo, que se denomina grupo de cabeza polar, contiene fosfato y otros
grupos cargados o polares (Mckee et al., 2003).
Las ceras son mezclas complejas de lpidos apolares. Son cubiertas protectoras de las hojas, los
tallos y las frutas de los vegetales y la piel de los animales. Los steres formados por cidos
grasos de cadena larga y alcoholes de cadena larga son constituyentes destacados de la mayora
de las ceras (Mckee et al., 2003).
Los esteroides son derivados complejos de los triterpenos. Se encuentran en todos los eucariotas
y en un pequeo nmero de bacterias. Cada tipo de esteroide est formado por cuatro anillos
fusionados. Los esteroides se diferencian entre ellos por la posicin de los dobles enlaces
carbono-carbono y di versos sustituyentes (p. ej., grupos hidroxilo, carbonilo y alquilo). El
colesterol es un ejemplo de esteroide, este se encuentra ampliamente distribuido en todas las
clulas del organismo, pero especialmente en las del tejido nervioso. Es un constituyente de
mayor importancia de la membrana celular y de las lipoprotenas plasmticas. A menudo se
encuentra combinado con cidos grasos como ster de colesterilo, cuando se esterifica el grupo
hidroxilo de la posicin 3 con un cido graso de cadena larga, Existe en las grasas animales,
pero no en las vegetales (Harper, 2001).
En este trabajo se presentan una descripcin de los resultados obtenidos en la identificacin de
lpidos de un tejido animal (hgado de vaca), empleando las solubilidades diferenciales y de la
centrifugacin como mtodos para el fraccionamiento de tejido animal en sus principales
constituyentes.
CAMBIO EN EL PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
En la preparacin de la muestra, se trabaj con cido tricloroactico al 5% en lugar de
10%.
En la prueba cualitativa de fosfatos, hubo un derrame de la muestra de Lisina, por lo que
trabajamos con 0.5 ml y no con 1.0 ml de la sustancia. De igual forma manejamos las
adiciones del cido molbdico y ascrbico con la mitad de lo que debamos, es decir 5
gotas de cada sustancia para que fuese proporcional.

DATOS OBTENIDOS
Saponificacin.
Muestra proveniente del tejido animal.
Luego de adicionar, NaOH se forma un anillo rojo de slidos en la superficie. Al filtrar en el
papel qued adherido un slido color rojo, el cual deducimos representa los jabones. En el tubo
queda una sustancia amarillenta.
Muestra de patrn de lecitina:
Al agregar NaOH no hubo mayor cambio, pero al agregar ter, este se separa y queda en la parte
superior por diferencia de densidad. Al filtrar en el papel queda un resultante similar a un jabn,
este es de color blanco. En el tubo queda una sustancia incolora.

Prueba de fosfatos (reaccin de Fiske-Subbarow):
Muestra proveniente del tejido animal:
Al agregar cido molibdico, la solucin no tiene cambios fsicos, al colocar la sustancia a bao
de mara la sustancia no tiene un cambio intenso en color, pues toma un color ligeramente
amarillento.
Muestra de patrn de lecitina:
Al agregar cido molibdico la solucin toma un color ligeramente azul. Al colocar a bao de
mara la coloracin de la solucin no cambia ni se intensifica.

Prueba de colesterol (prueba de Salkowski):
Muestra proveniente del tejido animal:
Al agregar cloroformo la solucin presenta dos fases; en la superficie en la superficie una
porcin de pequeos slidos blancos y en la parte inferior una coloracin amarillenta.
Al agregar cido sulfrico la parte inferior toma un color rojizo y la superior sigue igual.
Muestra de patrn de lecitina:
Al agregar cloroformo, la solucin no presenta un cambio fsico. Pero al adicionar cido
sulfrico la solucin toma una coloracin roja y lentamente se va formando una divisin, en la
parte inferior se ve un color rojo ms intenso que en la superior.
RESULTADOS Y CLCULOS.
DISCUSIN Y ANLISIS DE RESULTADOS:
Preparacin de la muestra
La muestra de lpidos se obtuvieron tras haber agregado a la muestra de tejido animal (hgado
de vaca) en primera instancia cido tricloroactico 10%, este ltimo permite a los carbohidratos
se suspende sobre solucin, debido a que estos son solubles sobre ATA, y los lpidos por
definicin son poco solubles en soluciones acuosas de tal forma al pasar por la centrifuga estos
se depositan en la base del tubo. En cambio al tomar el residuo que contiene los lpidos,
protenas y cidos nucleicos y agregarles la solucin de etanol-ter-cloroformo se suspenden los
lpidos, mientras que las protenas y cidos nucleicos quedan en el residuo.
Prueba de saponificacin
La prueba de saponificacin consiste en una hidrlisis alcalina de una preparacin lipdica (en
este caso con NaOH).Los lpidos derivados de los cidos grasos dan lugar a sales de cidos
grasos y alcohol (glicerol) como se muestra en la figura 1. La lecitina es un fosfolpido que entra
en la clasificacin de los glicerofosfolpidos, los cuales a su vez son derivados de los cidos
grasos. Por lo tanto al realizar la hidrlisis por accin de NaOH con la muestra patrn de lecitina
resulta positiva la formacin de sales de cido graso, pero en esta caso el resultado es una
emulsin: formadas por lpidos no polares en un medio acuoso y se estabilizan por medio de
agentes emulsificantes, como lpidos anfipticos, que forman una capa superficial que separa la
masa principal del material no polar de la fase acuosa.
La explicacin a este proceso es la disociacin de las grasas en un medio alcalino. La prueba nos
permiti observar el proceso de formacin de jabones al realizar la filtracin luego de la adicin
de ter a las muestras. Los jabones que quedaron en el papel de filtro son las sales metlicas de
los cidos grasos que se formaron cuando se produjo la hidrlisis alcalina del diacilglicerol. El
proceso anterior finaliza en la separacin del glicerol y las sales de cido graso o jabones,
entendiendo la reaccin dada as:

Figura 1: reaccin de saponificacin
Prueba de fosfatos (reaccin de Fiske-Subbarow)
Para la prueba de fosfatos se observaron cambios en la muestra de lecitina como se observa en la
figura 2. Este comportamieto se debe a que os fosfolpidos por accin de NaHO se hidrolizan,
produciendo fosfatos orgnicos, que con el cido molibdico dan fosfomolibdatos, y estos por
accin de reductores como el cido 1, 2, 4 aminonaftolsulfonico o cido ascrbico, producen
complejos de xidos de molibedeno de color azul.
A





B











Figura 3: A) reaccin de prueba de fosfatos B) coloracin de las muestras utilizadas: derecha filtrado de la
muestra de la saponificacin de lecitina e izquierda filtrado de la muestra de la saponificacin del tejido
animal.
Prueba de colesterol (prueba de salkowski)
En cuanto a la determinacin de colesterol se obtuvo que al adicionar un volumen de cido sulfrico y se
mezclan suavemente, se desarrolla un color rojo caracterstico en la capa clorofrmica, ver figura 3. La
coloracin observada se debe a la accin deshidratarte del cido sulfrico, formndose un doble enlace en
posicin 3.
A





B












Figura 4: A) reaccin de Reconocimiento de colesterol B) coloracin de las muestras utilizadas: derecha
filtrado de la muestra de la saponificacin del tejido animal e izquierda muestra de colesterol.
CONCLUSION
Como ya sabemos los lpidos son un conjunto de molculas orgnicas, la mayora biomoleculas,
compuestas principalmente por carbono e hidrogeno y en menor medida por oxgeno, aunque
tambin pueden contener fsforo, azufre y nitrgeno, que tienen como caracterstica principal el
ser hidrofbicas o insolubles en agua y s en disolventes orgnicos como la bencina, el alcohol, el
benceno y el cloroformo. Estos se pueden clasificar de diversas maneras de acuerdo a su
estructura y por ende para identificarlos existen diferentes mtodos como la saponificacin,
prueba de fosfatos y colesterol, que se basan en criterios cualitativos.

CUESTIONARIO:
Por qu la lecitina forma una emulsin en presencia de agua?
Las emulsiones son partculas de tamao mucho mayor por lo general, formadas por lpidos no
polares en un medio acuoso y se estabilizan por medio de agentes emulsificantes, como lpidos
anfipticos (p. ej., lecitina), que forman una capa superficial que separa la masa principal del
material no polar de la fase acuosa, como se muestra en la figura 2 (Harper, 2010).

Figura 5: Emulsin de aceite en agua
Es el colesterol saponificable? Explique su respuesta
No. La saponificacin se basa en la hidrlisis de un diacilglicerol, es decir a partir de cidos
grasos. En la clasificacin de lpidos el colesterol se encuentra dentro del grupo de los esteroides,
por lo que su estructura es diferente.
Los esteroides contienen cuatro anillos fundidos y se identifican por tener un grupo hidroxilo en
el carbono 3, es su nico componente polar. (Horton, 2008). Adems su estructura no presenta
grupos ster a comparacin de los cidos grasos (Figura 6). Observando la reaccin de
saponificacin, cuando el NaOH reacciona con el cido graso, toma el grupo ster del cido
graso y en su lugar deja un hidrgeno. Al no tener grupo ster el colesterol no puede participar
en la reaccin de saponificacin.

Figura 6: Estructura del Colesterol

A qu se debe la solubilidad de los lpidos en solventes orgnicos?
Los lpidos tienen gran solubilidad en solventes orgnicos no polares, ya que estos son
hidrofbicos (no polares) o bien son anfipticos (contienen regiones polares o no polares al
mismo tiempo) (Horton, 2008). Los lpidos se describen mejor a travs de sus propiedades fsicas
que en trminos estructurales precisos, debido a su baja polaridad (que se debe
fundamentalmente a su estructura hidrocarbonada) los lpidos slo pueden solubilizarse en
disolventes que tambin tengan baja polaridad y la mayora de solventes orgnicos como el
cloroformo, tetracloruro de carbono, ter dietlico y benceno la tienen (Petrucci, 2003).
Cmo se puede identificar los cidos grasos que no se encuentran esterificados?
La cromatografa de gases revolucion el estudio de los lpidos, haciendo posible determinar la
composicin completa de los cidos grasos de un lpido en muy corto tiempo. Para este propsito, los
cidos grasos son convertidos al derivado ms simple voltil, usualmente metilster, aunque otros esteres
pueden ser preferidos para diferentes propsitos. La preparacin de tales esteres se ha vuelto el tipo de
reaccin ms comn entre los analistas de lpidos. Aunque los cidos grasos pueden estar en la naturaleza
en estado libre (no esterificado), en su mayora se encuentran como steres unidos a glicerol, colesterol o
alcoholes alifticos de cadenas largas; en los casos cuando los cidos grasos estn en estado de esteres,
se debe trans-esterificar el cido graso (Montesinos, 2013).
Qu tejido vegetal podra utilizar en esta prctica para determinar los lpidos presentes?
Explique su respuesta. Indique cules son las grasas principales presentes en el tejido
vegetal seleccionado?
Los cidos grasos en las plantas se encuentran distribuidos en todos los rganos ya que son parte
estructural de la clula y tambin se generalmente cidos carboxlicos de cadena lineal con un nmero par
de tomos de carbono. Las cadenas de carbono pueden ser tan cortos como 12 unidades hasta 20, pero es
ms frecuente que sean 16 o 18 tomos de carbono. Los aceites son lquidos a temperatura ambiente,
principalmente debido a la presencia de enlaces insaturados en sus cidos grasos componentes; grasas,
que tienen una mayor proporcin de cidos grasos saturados, son slidos a temperatura ambiente. Los
principales cidos grasos en los lpidos de plantas se muestran en la Tabla 1. La composicin de cidos
grasos en los lpidos de la planta vara con la especie. Por ejemplo, el aceite de cacahuete contiene cido
palmtico 9%, cido oleico 59%, y cido linoleico 21%, o la semilla de algodn contiene cido palmtico
20%, cido oleico 30%, y cido linoleico 45% (Taiz, 2006).

Tabla 1: cidos grasos comunes en los tejidos de plantas superiores
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.
Harper, H. 2001. Bioqumica de Harper. 14 Edicin. El Manual Moderno.
Harper, H. 2010. Harper, Bioquimica ilustrada 28 edc.pdf. 28 edicion. McGRAW-HILL
INTERAMERICANA, Mxico, D.F.
Mckee, T., J.R. Mckee, and M. Hiu. 2003. Bioqumica, La Base Molecular de la Vida. 3 ed.
McGRAW-HILL INTERAMERICANA, Madrid.
Phillips, J., Strozak,V.,Wistrom.C., Zike.D., 2012. Quimica. Conceptos y aplicaciones.3 edicion.
McGRAW-HILL INTERAMERICANA, Mexico.D.F pg. 682
Horton.R., Moran. L., Gray.K., Perry.M., Rawn.J., 2008 Principios de bioqiomica. Cuarta
edicion. PEARSON EDUCACIN. Mexico. pg 264
Petrucci.R., Harwood.W., Geofrey.S., 2003. Quimica general. Octava edicion. PEARSON
EDUCACIN,S.A. Madrid
Montesinos, R. 2013. Especificacin cromtica de gamas de colores usadas en la industria del calzado.
Univ. Alicant. (Trabajo de de Investigacin): 1120.
Taiz, L. Zeiger, E. 2006. Plant physiology. 4 ed. Sinuer Associates, sunderland, MA,USA.