UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL ESCUELA PROFESIONAL DE LABORATORIO Y ANATOMA PATOLGICA LABORATORIO Y ANATOMA PATOLGICA

ALUMNA: FTIMA KATHERINA CHAUCA DEL GUILA

Es una tcnica inmunolgica que utiliza enzimas como marcadores inmunoqumicos de los complejos Ag Ac.

Una pequea cantidad de enzima puede catalizar una gran cantidad de sustrato que permite amplificar la reaccin Ag-Ac. Gracias a esta tcnica es posible detectar nfimas cantidades de Ag o Ac en las muestras estudiadas.

Posee gran sensibilidad, menor riesgo en el manejo de los reactivos y un tiempo de conservacin mayor.

Procedimientos tcnicos rpidos y sencillos. Alta precisin y exactitud.

Reactivos relativamente baratos y de larga vida. Procesos estandarizados.

Con propsitos mdicos se han aplicado en la determinacin de hormonas, protenas plasmticas, antgenos tumorales, drogas, Ag de microoragnismos y Ac inducidos por la presencia de estos.

La enzima utilizada debe estar altamente purificada y obtenerse de manera econmica, debe poseer una actividad especfica asociada.

La enzima necesita para conjugarse con el Ag o el Ac un reactivo bifuncional, que en la mayora de los casos es el glutaraldehdo.

La enzima no debe estar presente en los lquidos biolgicos en cantidades suficientes como para interferir en la determinacin.

Solubles en agua, incoloros, inodoros, no mutagnicos, atxicos Coeficientes de absorcin molar elevado con mximo de absorbancia 340-600 nm. Gran estabilidad en el almacenamiento

EIA

EIA

HOMOGNEOS

EIA HETEROGNEOS

EMIT

ELISA

ELISA
SANDWICH

ELISA DE
CAPTURA

ELISA COMPETITIVO

Es un mtodo sencillo y rpido, aunque su sensibilidad es menor que la de los EIA heterogneos.

Se utilizan fundamentalmente en la determinacin de hormonas y medicamentos.

La reaccin Ag Ac es el modulador de la actividad enzimtica, que se puede medir sin necesidad de separar los componentes marcados de los no marcados.

Segn tcnica de unin no competitiva (clsicas)

Segn tcnica de unin no competitiva

EMIT
(ENZYME MULTIPLIED IMMUNOASSAY TECHNIQUE)

ECIA (ENZYME CHANNELING IMMUNOASSAY)

EEIA
(ENZYME ENHANCEMENT IMMUNOASSAY)

SLFIA (SUBSTRATE LABELED FLUORESCENT IMMUNOASSAY)

CEDIA (CLONED ENZYME DONOR IMMUNOASSAY)

EIA HOMOGNEO CON Ac BIOESPECFICO

PGLIA (PROSTETIC GROUP LABELED IMMUNOASSAY)

EMMIA (ENZYME MODULATOR MEDIATED IMMUNOASSAY) EIA HOMOGNEO CON SUSTRATO INSOLUBLE

UTILIZA UNA ENZIMA PARA MARCAR EL HAPTENO BUSCADO (HORMONAS MEDICAMENTOS O DROGAS). FRENTE A ESTA CONJUGADO SE UTILIZA UN Ac ESPECFICO DEL HAPTENO QUE, AL UNIRSE A L, INHIBE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA.

Un hapteno es la parte de un antgeno que por s sola no dispara la respuesta inmune, pero s posee especificidad.

SE PRODUCE UNA COMPETENCIA ENTRE EL HAPTENO LIBRE PRESENTE EN LA MUESTRA ANALIZADA Y EL HAPTENO MARCADO ENZIMTICAMENTE POR LOS SITIOS DE UNIN DEL Ac ANTI- HAPTENO.

POSTERIORMENTE SE MIDE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA QUE PERSISTE DESPUS DE ESTA UNIN DEL HAPTENO A SU Ac , QUE SER DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DEL HAPTENO LIBRE EN LA MUESTRA.

LAS ENZIMAS MS UTILIZADAS SON B- GALACTOSIDASA LA MALATO-DESHIDROGENASA Y LA GLUCOSA-6-FOSFATODESHIDROGENASA.

Un grupo prosttico es el componente no aminoacdico que forma parte de la estructura de las heteroprotenas o protenas conjugadas, estando unido covalentemente a la apoprotena

DETERMINACIN DE FERRITINA Y AFP.

Este tipo de anlisis son los que presentan mayor sensibilidad .

Para medir la actividad de la enzima es necesario la separacin de los componentes marcados, que puede ser por precipitacin o por la fijacin del Ac o Ag a una fase slida.

ELISA (ENZYME LINKED IMMUNO SORBENT ASSAY), tcnica que permite detectar tanto Ag como Ac y consiste en una enzima conjugada a un Ac que reacciona con el sustrato adecuado produciendo color.

Las enzimas ms utilizadas son la peroxidasa de rbano picante, la fosfatasa alcalina y la glucosa oxidasa.

UTILIZAREMOS UN
Ac ESPECFICO FIJADO A UNA FASE SLIDA.

INCUBAMOS EL SUERO PROBLEMA QUE CONTIENE EL Ag BUSCADO, DESPUS PROCEDEMOS AL LAVADO PARA ELIMINAR LOS COMPONENTES DEL SUERO PROBLEMA QUE NO HAN REACCIONADO.

AADIMOS Ac MARCADO ENZIMTICAMENTE QUE SE UNE AL Ag DEL SUERO POR OTRO DETERMINANTE ANTIGNICO, FORMANDO AS EL SANDWICH. LAVAMOS Y AADIMOS EL SUSUTRATO CROMOGNICO ESPECGICO DE LA ENZIMA Y SE PRODUCE COLOR.

ESTA TCNICA SE UTILIZA FUNDAMENTALMENTE EN LA DETECCIN DE Ac. SE UTILIZA UNA ANTI INMUNOGLOBULINA HUMANA FIJADA A LA FASE SLIDA.

LOS Ac PRESENTES EN LA MUESTRA SE UNIRN AL Ac ANTIGAMMAGLOBULINA HUMANA, SE PROCEDE AL LAVADO

POSTERIORMENTE SE AADE UN Ag ESPECFICO PARA EL Ac BUSCADO . SE INCUBA Y DESPUS SE HACE OTRO LAVADO. AHORA SE AADE UN Ac ESPECFICO PARA EL Ag DE LA FASE ANTERIOR, PERO MARCADO ENZIMTICAMENTE. EL LTIMO PASO ES LA EDICIN DE UN SUSTRATO CROMOGNICO ESPECFICO DE LA ENZIMA.

ESTA TCNICA DETERMINA PRINCIPALMENTE EL Ag. UTILIZAREMOS UN Ac ESPECFICO FIJADO A UNA FASE SLIDA.

EL PRIMER PASO ES AADIR AL POCILLO CON EL Ac FIJADO, LA MUESTRA PROBLEMA CON EL Ag BUSCADO

Y ESE MISMO Ag MARCADO ENZIMTICAMENTE. AL INCUBAR SE PRODUCE UNA COMPETENCIA POR LOS SITIOS E UNIN DEL AC . SE LAVA Y SE AADE EL SUSTRATO ESPECFICO DE LA ENZIMA. EL COLOR SER INVERSAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DEL ANTGENO PRESENTE EN LA MUESTRA.

Simplicidad Reactivos empleados en pequeos volmenes. La separacin de reactante libres y ligados es hecha por un simple procedimiento de lavado La adsorcin pasiva de protenas al plstico es fcil El equipo especializado es de fcil disponibilidad Lectura El producto final coloreado puede ser ledo a simple vista para evaluar como ha sido trabajado el test (evitando esperar los resultados como en el RIA) Espectrofotmetros multicanal cuantifican los resultados Sensibilidad Niveles de deteccin de 0.01 a 1.0 ug/ml Niveles ideales para la mayora de diagnsticos Reactivos Comercialmente disponibles Ofrecen diseos bastante flexibles Costo Aceptabilidad (Estandarizados) Seguridad Reactivos no mutagnicos La eliminacin de los desechos no es problemtica Disponibilidad Elisa puede ser desarrollado en cualquier lugar aun en laboratorios de baja complejidad