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CARACTERISTICAS GENERALES
gnero Campylobacter familia Campylobacteriaceae
Campylobacter jejuni
Formas cocoides
Campylobacter jejuni
ESPECIES TERMOFILAS
Crecen a 42 - 43C; no crecen a 25C
*Campylobacter jejuni (subesp. jejuni y doylei). Agente causal de
diarrea (ms virulento, resistente a la fagocitosis)
*Campylobacter coli. Produce diarrea ms benigna.
(*)Comensales de intestino de: vacas, ovejas, cerdos, cabras,
perros, roedores domsticos y silvestres y aves.
Campylobacter lari. Aislado de intestino de gaviotas. No est
definido el rol patgeno para el hombre. Indoxil acetato (-) y R al ac.
Nalidxico.
Campylobacter upsaliensis. Raro aislarlo de diarreas.
Produce bacteriemias en HIC. No est definida la fuente de
infeccin. Relacionado con animales, especialmente perros y gatos,
alimentos como leche no pasteurizada y derivados
ESPECIES NO TERMOFILAS
Crecen a 25C y 37C
Campylobacter fetus (subespecie fetus y venerealis): importancia en
medicina veterinaria por producir aborto espordico en el ganado
ovino y bovino e infertilidad en bovinos.
C. fetus subesp. fetus: patgeno oportunista para el hombre
(infecciones sistmicas en pacientes inmunodeprimidos). Diferencia entre
ambas subespecies: glicina al 1%
C. fetus subesp. venerealis: aparato genital de vacas causando
infertilidad.
C. hyointestinalis: hisopados rectales en pacientes con proctititis, iletis
en cerdos. Pude crecer a 42C y produce SH2 en TSI.
FISIOPATOGENIA
Microorganismo ingresa por va digestiva de alimentos
contaminados contacto con animales.
Periodo de incubacin: 1 a 7 das.
Cepas con distinto grado de patogenicidad en diferentes pases.
MECANISMOS DE VIRULENCIA
Invasin de clulas epiteliales con abscesos en las criptas e infiltrados
inflamatorios en la lmina propia (sim. Shigella) Diarreas inflamatorias y
disentricas.
Atraviesan mucosa intestinal y proliferan a lmina propia y ganglios. Infecciones
extraintestinales (sim. Salmonella)
Pueden producir toxinas termolbiles provocando una diarrea secretora (simil a
E. coli y V. cholerae)
Puede observarse accin citotxica sobre clulas Hela y Vero , cytoletal
distending toxin, distensin y muerte celular.
Sndrome de Guillain-Barr
Carcteristicas de la enfermedad:
Poliradiculopatia aguda desmielinizante que se asocia a infeccin previa
10 das o 3 semanas por Campylobacter (1 de cada 2000 infecciones).
Cuadro autoinmune por produccin de IgG-AntiGM-1, Ac con
especificidad dirigida al LPS de serotipos de Campylobacter jejuni, (Ac
reaccionan en forma cruzada con ganglisidos de la vaina de mielina que
recubre el axn de la clula neuronal).
Para asociar Sndrome con infeccin previa se aconseja realizar:
Cultivo:
Coprocultivo seriado (3 muestras): con un aislamiento es suficiente
Pruebas serolgicas (ELISA):
IgG e IgM post infeccin por Campylobacter generalmente permanecen
elevadas 3 o 4 semanas.
Confirmar aumento de dos o ms ttulos en serologa seriada.
2- Atmosfera de incubacin
Reemplazo de una atmsfera normal por una mezcla de gases
apropiados 85% de N2, 10% de CO2 y 5% de O2
Sobres generadores de gases especiales para Campylobacter
BBL, Oxoid, Bio-Merieux 5-10% de O2 y 5-12% de CO2
Sobres generadores de hidrgeno y oxgeno para anaerobiosis :
precaucn por el hidrgeno
Jarra con vela
17-19% de O2 y de 2-4% de CO2 (usar suplemento FBP)
Generadores caseros
a.Una pastilla de boranato de sodio ( 0,8 gr para una jarra de 3 litros)
Una pastilla de Alka Seltzer o Yast
10 ml de agua destilada.
b.Lana de acero
Solucin cida de sulfato cprico: SO4Cu2 5gr, H2O 100 ml, H2SO4
0,33ml y Tween80 0,2 ml
Sistema de cambio de
gases en jarra
Bomba de vaco
Jarra con manmetro
Tubo con mezcla de gases
85% de N2, 10% de CO2 y 5% de O2
Para procesar
alimentos
3- Suplementos antibiticos
Suplemento Caldo Bolton: Cefoperazona,vancomicina,
trimethoprim,cicloheximide
Suplemento Agar Skirrow
Vancomicina, trimethoprim, polimixina B
Suplemento Agar CCDA
Cefoperazona, Amphotericina B
PREPARACION ARTESANAL DE SUPLEMENTOS ANTIBIOTICOS
Epidemiologa de Campylobacter
Las especies de Campylobacter que causan infeccin entrica se
Aislamiento directo
Enriquecimiento
Caldo Bolton (24 h a 42 - 43 C)
Incubacin 24 - 48 h a 42 - 43 C
En condiciones de microaerofilia
Identificacin presuntiva:
-examen microscpico directo
(contraste de fase)
(tincin de Gram)
- prueba de oxidasa
- prueba de catalasa
Pruebas bioqumicas:
- Hidrlisis del hipurato
- Hidrlisis del indoxil acetato
- Sensibilidad a NAL y CEF
Identificacin final
PCR
Nombre
comercial
Blanco
Mtodo
Tipo de muestra
Requerimientos
(tiempo de
procesamiento)
Sensibilidad /
Especificidad
Remel ProSpecT*
Campylobacter
Microplate Assay
C. jejuni y C. coli
ELISA directo
Materia fecal
fresca o en medio
Cary Blair.
3h
S: 89,1%
E: 97,7%.
SafePath
Campylobacter
assay
Campylobacter
spp. termoflicos
ELISA
Alimentos
medio de
enriquecimiento
(24 h / 42C)
36 h
Inmunoensayos
visuales 3M
Tecra para
deteccin de
Campylobacter
Campylobacter
spp. termoflicos
ELISA
Alimentos.
Hisopados
ambientales
medio de
enriquecimiento
(24 h / 42C)
36 h
RIDASCREEN
Campylobacter
C. jejuni, C. coli y
C. lari
ELISA directo
Materia Fecal
fresca o congelada
a -20C.
3h
S: 100 %
E: 99,6 %
Limite de deteccin
en alimentos
104 UFC / 25 g
alimento
Especificidad 100%
Especificidad 100%
Present reaccin
cruzada con
Arcobacter en
aislamientos.
Aislamientos.
Alimentos
PCR Mltiple
C. jejuni / coli
PCR Gnero
Campylobacter
PCR Campylobacter
Limite de deteccin
en alimentos
105 UFC / 25 g
alimento
Aislamientos
Alimentos
Aislamientos
Alimentos
lari
Aislamientos
PCR Campylobacter
Aislamientos
fetus
Especificidad 100%
Especificidad 100%
Pre-Enriquecimiento
9 x ml de Caldo Bolton con
suplemento antibitico (dil1/10)
Incubacin del caldo
4 -6 h a 37 C1 C
TAMIZAJE
1 ml extraccin de
ADN por hervido,Chelex
Enriquecimiento
PCR -16S rDNA
Campylobacter spp.
Incubacin por 24 44 h 4h
a 41,5 C 1C en microaerofilia
Incubacin por 18 h 3h
37 C 1 C
Continuacin
del Flujograma
de aislamiento
Resultado
positivo
Resultado
negativo
Identificacin presuntiva y
Subcultivo en medio Agar sangre
Incubacin por 18 h 2h
41,5 C 1 C en
microaerofilia
Confirmacin
bioqumica
EXPRESION DE
RESULTADOS
10 M
Campylobacter spp.
800 pb
3 4
5 6 7
8 9 10 11 12 13 14 M
816 pb
500 pb
sin Chelex
6 7
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 M
con Chelex
800 pb
10 102 104 108 0 10 102 104 108
Fig. 5 . Electroforesis en gel de agarosa de los productos amplificados por PCR- gnero a
partir de muestras de ciegos inoculadas experimentalmente con Campylobacter jejuni
Calle M: marcador de peso molecular DNA 100 pb, Calles2 5: Muestras de ciego (1 g) inoculadas con 1-10,
100, 104, y 108 UFC/ ml de la cepa de referencia WHO 6.1 Campylobacter jejuni;, Calles 6 - 9 extraccin de
ADN con Chelex: calle 6: Muestra de ciego sin inocular, calles 7-10: Muestra de ciego inoculada con 1-10 ,
100, 104 y 108 UFC/ ml de la cepa de referencia WHO 6.1 Campylobacter jejuni , Calle 10 y 13 : Cepa de
referencia WHO 6.1 Campylobacter jejuni, calle 11: C. coli, calle 12: C. lari,, calle 14: C. fetus, calle 15::control
del sistema (mezcla de reaccin sin templado), calles 16, 17 y 18 cepa referencia WHO 6.2 Campylobacter coli,
calle 19: cepa Referencia Salmonella Enteritidis.
Morfologa tpica
Movimiento en espiral
(en contraste de fase o
campo oscuro)
Gram
(bacilo gram (-) curvo)
Oxidasa (+)
Catalasa (+)
PROBABLE CAMPYLOBACTER
Confirmar con pruebas bioqumicas
IDENTIFICACION FINAL
Crecimiento a 42-43C y a 25C
Sensibilidad al cido nalidxico y cefalotina
Hidrlisis del hipurato
Hidrlisis del indoxil acetato
Produccin de cido sulfhdrico
(Medio de Lior)
CEFALOTINA
Resistente
ACIDO
NADLIXICO
Sensibilidad variable
37C
42C
C. coli
C. lari
C. upsaliensis
C. hyointestinalis
C. curvus
C. rectus
C. showae
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-/d
S
R
+
S/d
+
S
V
+
-/d
S
R
+
S
+
+
R
R
S
+
S
S
+
PRUEBAS BIOQUIMICAS
PCR
Test de Exclusividad
M
9 10
773 pb C. jejuni
364 pb C. coli
Calle M: marcador de peso molecular DNA 100 pb , calle: 1 : aislamiento de
Salmonella spp.; calle 2: aislamiento de Pseudomona aeruginosa, calle 3 :
aislamiento de Enterococo spp., calle 4 : aislamiento de Escherichia coli,
calle 5 : aislamiento de
Klebsiella spp., calle 6: aislamiento de
Staphylococcus spp, calle 7: cepa control Campylobacter jejuni, calle 8:
cepa control Campylobacter coli, calle 9: cepas controles Campylobacter
jejuni / coli, calle 10: mezcla de reaccin sin templado.
10 11 12
13 14
C.jejuni
773 pb
C.coli
364 pb
4- Mtodos de conservacin
Suspender una ansa de cultivo puro en:
Medio con glicerol: en 0.5 ml de caldo triptosa -fosfato
con 5 % de suero equino estril y 17 % de glicerol, llevar
a -70 C antes de los 20 minutos.
85 ml de caldo Brucella + 15 ml de glicerol. Llevar a -70
C (3 aos) o -20 C (1 ao).
Medio Wang: Caldo Brucella con 0.5 % de agar y 10 %
de sangre, inocular por puncin e incubar 24 hs 42 C
en microaerofilia. Guardar a -20C hasta 4 meses.
476
74
1
relacin
gentica
de
aislamientos
de
Campylobacter spp. de origen humano, de
mascotas y aves de corral por PFGE. Se
detectaron patrones relacionados
80
2008 (n=199)
60
2009 (n=142)
40
2010 (n=246)
20
0
TET
ERI
CIP
CHL
NIT
AZI
Antibitico
Campylobacter spp:
spp: porcentaje de resistencia, 2011
Dice (Op t:1 .5 0%) (Tol 1 .5% -1.5% ) (H >0 .0% S>0.0%) [0.0% -100 .0 %]
PFGE-SmaI
PFGE- SmaI
Fecha aisl.
Especie
Cj145/11 La Pampa
201 1-05-11
C. jeju ni
A RDBRS16.0022 ave
Cj376/10 La Pampa
201 0-11-10
C. jeju ni
A RDBRS16.0022 canino
Cj379/10 La Pampa
201 0-11-10
C. jeju ni
A RDBRS16.0022 hu ma no
Cj49/11
201 1-02-01
C. jeju ni
A RDBRS16.0104 hu ma no
Cj375/10 La Pampa
201 0-10- 07
C. jeju ni
A RDBRS16.0130 canino
Cj324/10 La Pampa
201 0-10-04
C. jeju ni
A RDBRS16.0132 hu ma no
Cj129/11 La Pampa
201 1-04-25
C. jeju ni
A RDBRS16.0128 hu ma no
Cj130/11 La Pampa
201 1-04-25
C. jeju ni
A RDBRS16.0128 canino
Cj111/11 La Pampa
201 1-04-14
C. jeju ni
A RDBRS16.0080 ave
Cj112/11 La Pampa
201 1-04-14
C. jeju ni
A RDBRS16.0080 ave
Cj116/11 La Pampa
201 1-04-11
C. jeju ni
A RDBRS16.0080 hu ma no
Cj144/11 La Pampa
201 1-05-11
C. jeju ni
A RDBRS16.0080 felino
Cj332/10 La Pampa
201 0-10-07
C. jeju ni
A RDBRS16.0101 hu ma no
100
80
60
Aislamiento Provincia
La Pampa
N patrn
PFGE-SmaI
PFGE-SmaI
Provincia
Fecha aisl.
Especie
N patrn
Origen
10 0
80
60
Aislamiento
Perfil de
Resistencia
CIP TET
121
jejuni
coli
fetus
1115
Pases que reportaron datos: Argentina, Brasil, Chile, Colombia, Paraguay y Per
CAMPYLOBACTER spp
spp.:
.: PRIMEROS ESTUDIOS DE SUBTIPIFICACIN DE AISLAMIENTOS
CIRCULANTES EN ARGENTINA Y PARAGUAY (COMIC,2009) (BDR Pulse Net)
Dendrograma de relacin gentica entre los aislamientos de C. jejuni de Paraguay y
Argentina
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SmaI
100
50
PFGE-SmaI
Origen
ao aisl.
especie
Cj 82/08
Cepa
Argentina
Pais
Resistencia
Ciudad
Human
2008-08-07
C. jejuni
ALDBRS16.0001
Cj12/09
Argentina
Neuquen
Human
2009-01-27
C. jejuni
ALDBRS16.0002
Cj121/08
Argentina
Rosario
Animal
2008
C. jejuni
ALDBRS16.0003
Cj21/08
Argentina
Rosario
Human
2008-05-20
C. jejuni
ALDBRS16.0004
Cj132/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-12-23
C. jejuni
ALDBRS16.0005
Cj 35/08
Argentina
Neuquen
Human
2008-06-01
C. jejuni
ALDBRS16.0006
Cj23/08
Argentina
Rosario
Human
2008-05-24
C. jejuni
ALDBRS16.0007
Cj51/06
Argentina
Santa Fe
Human
2005-12-01
C. jejuni
ALDBRS16.0008
Cj121/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-11-19
C. jejuni
ALDBRS16.0009
Cj122/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-11-19
C. jejuni
ALDBRS16.0009
Cj 38/08
Argentina
Neuquen
Human
2008-07-01
C. jejuni
ALDBRS16.0010
Cj120/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-11-19
C. jejuni
ALDBRS16.0011
Cj73/06
Argentina
Human
2006
C. jejuni
ALDBRS16.0011
Cj85/06
Argentina
Santa Fe
Human
2006-01-25
C. jejuni
ALDBRS16.0011
CjP25/07
Paraguay
San Lorenzo
Human
2007-03-03
C. jejuni
ALDBRS16.0011
Cj209/08
Argentina
Cordoba
Human
2008-11-05
C. jejuni
ALDBRS16.0012
Cj102/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-07-14
C. jejuni
ALDBRS16.0013
CjP27/07
Paraguay
Asuncin
Human
2007-03-07
C. jejuni
ALDBRS16.0014
CjP43/07
Paraguay
San Lorenzo
Human
2007-05-18
C. jejuni
ALDBRS16.0015
Cj115/06
Argentina
Santa Fe
Human
2006-04-04
C. jejuni
ALDBRS16.0016
Cj115/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-11-07
C. jejuni
ALDBRS16.0017
Cj123/06
Argentina
Santa Fe
Human
2006
C. jejuni
ALDBRS16.0018
Cj26/09
Argentina
Bariloche
Human
2009-01-06
C. jejuni
ALDBRS16.0019
Cj120/08
Argentina
Rosario
Human
2008
C. jejuni
ALDBRS16.0020
Cj38/06
Argentina
Cordoba
Human
2005-09-20
C. jejuni
ALDBRS16.0020
Cj9/07
Argentina
Santa Fe
Human
2007
C. jejuni
ALDBRS16.0020
CjP18/07
Paraguay
Asuncin
Human
2007-02-05
C. jejuni
ALDBRS16.0020
Cj81/08
Argentina
Resistencia
Human
2008-08-06
C. jejuni
ALDBRS16.0021
Cj1/09
Argentina
Neuquen
Human
2009-01-05
C. jejuni
ALDBRS16.0022
Cj122/06
Argentina
Neuquen
Human
2006-05-22
C. jejuni
ALDBRS16.0022
Cj3/09
Argentina
Rosario
Human
2009-01-06
C. jejuni
ALDBRS16.0022
Cj39/06
Argentina
Cordoba
Human
2006-09-20
C. jejuni
ALDBRS16.0022
Cj56/08
Argentina
Capital Federal
Human
2008-07-08
C. jejuni
ALDBRS16.0022
Cj72/08
Argentina
Junin
Human
2008-07-29
C. jejuni
ALDBRS16.0022
Cj79/08
Argentina
Resistencia
Human
2008-07-04
C. jejuni
ALDBRS16.0022
CjP32/07
Paraguay
Asuncin
Human
2007-03-26
C. jejuni
ALDBRS16.0022
Cj 87/08
Argentina
Lanus
Human
2008-08-21
C. jejuni
ALDBRS16.0023
Cj150/08
Argentina
Gral Pico
Human
2008
C. jejuni
ALDBRS16.0024
CjP31/07
Paraguay
Asuncin
Human
2007-03-21
C. jejuni
ALDBRS16.0025
Cj4/07
Argentina
Santa Fe
Human
2007-04-24
C. jejuni
ALDBRS16.0026
Cj53/07
Argentina
Cordoba
Human
2007
C. jejuni
ALDBRS16.0027
Cj109/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-10-01
C. jejuni
ALDBRS16.0028
Cj65/07
Argentina
Santa Fe
Human
2007-12-13
C. jejuni
ALDBRS16.0028
Cj35/06
Argentina
Cordoba
Human
2005-09-05
C. jejuni
ALDBRS16.0029
CjP28/07
Paraguay
Asuncin
Human
2007-03-09
C. jejuni
ALDBRS16.0030
Cj40/06
Argentina
Cordoba
Human
2005-09-21
C. jejuni
ALDBRS16.0031
Cj16/06
Argentina
Neuquen
Human
2005-07-21
C. jejuni
ALDBRS16.0031
Cj82/06
Argentina
Santa Fe
Human
2006-01-04
C. jejuni
ALDBRS16.0031
Cj4/09
Argentina
Rosario
Human
2009-01-08
C. jejuni
ALDBRS16.0032
Cj 111/08
Argentina
Cordoba
Human
2008-08-09
C. jejuni
ALDBRS16.0033
Cj25/09
Argentina
Bariloche
Human
2008-12-29
C. jejuni
ALDBRS16.0034
Cj98/09
Paraguay
Asuncion
Human
2008-05-13
C. jejuni
ALDBRS16.0035
C 73/08
Argentina
Neuquen
Human
2008-04-01
C. jejuni
ALDBRS16.0036
-Clusters compartidos entre Argentina y Paraguay, indicados con crculos rojos y las letras
Paraguay y con crculo azul el cluster F Argentina.
** Perfil electrofortico de un aislamiento de C. jejuni recuperado de un caso de SGB
NPatrn
Regional
Cluster A
Cluster B
Cluster C
**
Cluster D
*
*
Cluster E
Cluster F
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
La implementacin de la reaccin de PCR en el laboratorio para
la identificacin de Campylobacter spp. y a nivel de especie
representa una herramienta diagnstica y de caracterizacin
genotpica, como ensayo complementario y factible de ser transferible
a otros laboratorios.