BIO-REMEDIACION DE SUELO CONTAMINADO CON PETROLEO

CRUDO EN LOTES PETROLEROS DE LA SELVA NORTE DEL PERU.

Autor: C. Olea
1
, M. Mauricio
1
y G. Prudencio
2

1
Pluspetrol Norte S.A.
2
CAREC Perupetro


SINOPSIS


En el Lote 8 de Per, debido a la actividad extractiva del petrleo crudo, ha ocurrido contaminacin
de suelo y agua a causa de derrames o fugas de petrleo crudo, como por ejemplo la plataforma
57X, donde existe contaminacin de suelos con petrleo crudo que data del periodo del anterior
operasdor del lote y que hasta ese momento no haba sido remediada.
Debido a esta circunstancia, el Departamento de Asuntos Ambientales y Seguridad Industrial de
Pluspetrol auspici un trabajo de tesis de remediacin por bacterias para que estas sean usadas en la
remediacin de reas contaminadas con petrleo crudo como la plataforma 57XC.
Para la tesis se efectu un estudio y trabajo de investigacin en laboratorio para determinar el mejor
mtodo de solucin. El resultado fue aislar 6 cepas bacterianas bioremediadoras que luego fueron
usadas en la remediacin in-situ de la plataforma 57X.
El impacto de los derrames de petrleo crudo en tierra tuvo una extensin de 1200 m
2
y un volumen
estimado de 540 m
3
, procedindose a efectuar la limpieza del rea retirando un volumen
aproximado de 168 m
3
en material orgnico (hojas, tallos, races, maderas, etc.) manchado con
petrleo crudo.
Se caracteriz el contaminante determinndose el nivel de TPH inicial de 22% en peso,
posteriormente se estimul el crecimiento de algas autctonas que proporcionaron el oxgeno
necesario a las bacterias, luego se agreg el nutriente nitrogenado (rea) y, finalmente, se inocul
540 litros de cultivo bacteriano, que se haba preparado en un bio reactor tipo air lift.
Despus de un periodo de 6 meses de bioremediacin, se obtuvo una disminucin en la
concentracin de hidrocarburos de 45,45% y obtenindose un TPH final de 12%.
Despus de 6 meses se procedi a re vegetar el rea, transplantando especies autctonas y adems
que tuvieron un potencial remediador, no se observ ningn problema en su desarrollo.

INTRODUCCION


La Bio-remediacin, definida como el uso de microorganismos vivos para reducir, o eliminar,
riesgos ambientales como resultado de la acumulacin de desechos peligrosos, est basada en el uso
natural de microorganismos para restaurar sitios contaminados y proteger el ambiente.
Objetivo
Restaurar los terrenos contaminados con petrleo crudo temporizado, proveniente de los pasivos
ambientales originados por de derrames de petrleo, utilizando la tcnica de bio remediacin.

DESARROLLO


1.- Trabajo de laboratorio
La existencia de bacterias que se alimentan de petrleo crudo fue conocida por la industria petrolera
durante mas de 50 aos. En 1947 el Instituto Scripps de Oceanografa describi los primeros
mtodos bacterianos para recoger petrleo crudo. Fue en los aos cincuenta cuando la industria
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petrolera comenz a experimentar utilizando microorganismos para eliminar aguas de desecho de
refineras y de las operaciones en campos petroleros.
Los procesos principales que remueven los hidrocarburos del petrleo son la evaporacin y la
biodegradacin, esta ltima puede degradar entre el 40 % y el 90% del petrleo, dependiendo de la
composicin del petrleo y de la mezcla bacteriana utilizada.
Debido a que el petrleo crudo es una mezcla de hidrocarburos, que pueden ser clasificados como
saturados y aromticos, se utiliza una mezcla de microorganismos que tienen la capacidad de
metabolizar las diferentes fracciones hidrocarbonadas, produciendo, como material de desecho,
cidos grasos, CO2, agua y biomasa, los cuales son inofensivos para el medio ambiente.
Esta biomasa hidrocarburoltica dismuye su poblacin despus de concluir su labor de
descontaminacin, debido a que ya no cuenta con su fuente principal de carbono que son los
hidrocarburos.
Por ello la tecnologa de la bioremediacin es la medida ms eficaz que se debe perseguir para la
descontaminacin de derrames petroleros, pues no producen efectos negativos en el ecosistema.

El objetivo de esta tcnica es, bsicamente:
- Aislar e identificar cepas bacterianas bio remediadoras.
- Evaluar cepas bacterianas bio remediadoras sobre suelo contaminado con petrleo crudo.

Material y Mtodos

Poblacin y muestra en estudio:
Para el presente trabajo la poblacin estuvo representada por todas las cepas bacterianas bio
remediadoras (degradadoras y emulsificantes de petrleo crudo), aisladas de muestras de agua y
borra de las pozas API, de suelos contaminados con petrleo crudo, de desechos slidos base aceite
(lodo de perforacin) y petrleo crudo de pozos petroleros del lote 8.

Material, instrumento y equipo de laboratorio y campo.
Material Biolgico:
Muestras de agua y de borra de las pozas API, suelos contaminados con petrleo crudo, desechos
slidos base aceite (lodo de perforacin) y petrleo crudo.

Material de Laboratorio:
- Frascos de vidrio de 100 cc.
- Muestreador - Placas petri
- Matraces de 1 lt. - Pipetas de 1ml y 10ml
- Tubos con tapones de jebe de 13x100 - Anzas, mechero
- Parafina - Agua destilada estril
- Tubos de prueba - Cinta de pH
- Petrleo crudo del pozo 57X (Corrientes) - Nutrientes tipo NPK

Equipos de laboratorio:
- Estufa de 40C Centrfugas
- Microscopio Balanza
- Horno Autoclave

Medios de cultivo:
- Agar tryptosa soya
- Medio nitrogenado
- Caldo extracto de levadura- etanol

Metodologa:
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Toma de Muestra:
Para la toma de muestra se preseleccionaron tres reas del lote 8 tales como: Yanayacu, Pavayacu y
Corrientes.

Los lugares de cada una de las reas que se muestrearon, fueron:
Area de Yanayacu
Plataforma 38X:
Suelo contaminado con petrleo crudo (1-38X).
Borra de la poza API (2-38X).
Suelo contaminado con lodo.
Plataforma 22X:
Agua de la poza API.
Borra de la poza API.
Laguna natural de Batera 3:
Borra de la laguna natural de bateria 3.
Suelo contaminado con petrleo crudo.
Plataforma 60X:
Petrleo crudo del pozo N60 Area de Pavayacu.

Area de Pavayacu
Plataforma 1104:
Borra de poza API.
Agua de la poza API.
Plataforma 1107:
Desecho slido base aceite (lodo de perforacin).
Plataforma 144:
Tierra con petrleo de la poza API.

Area de Corrientes
Plataforma 1003:
Residuo slido base aceite.
Tierra contaminada.
Plataforma 1001:
Borra y agua de la laguna ubicada en las cercanas de la plataforma 1001.
Plataforma 33X:
Tierra contaminada ubicada debajo de la plataforma.
Plataforma 44X:
Borra y agua de la poza API.
Plataforma 57X:
Suelo contaminado alrededor de la plataforma.
Borra y agua de la poza API.
De estas muestras se tomaron 500 ml. 500 g., segn el tipo de muestra, y se procesaron con el fin
de aislar nuestras cepas bacterianas bio remediadoras.

Procesamiento de las muestras
Aislamiento de cepas bacterianas:
- Tomar 10 g. de muestras slidas y agregar 90 ml. de agua destilada estril (dilucin: 10-); para las
muestras lquidas no fue necesario hacer diluciones.
- Tomar 10 ml. de muestra lquida o dilucin de la muestra slida, e inocular a 45 ml. de caldo
nitrogenado con petrleo crudo del pozo 57XC (1.6 %).
- Incubar a 42C por 24horas.
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- Trancurrido el tiempo de incubacin, se tom 10 ml del sistema anterior y se le agreg el caldo
nitrogenado con petrleo crudo del pozo 57XC (3.2 %).
- Incubar a 42C por 24horas.
- Transcurrido el tiempo de incubacin; se sembraron por estras para aislamiento de colonias en
placas, con agar Petrleo.
- Incubar a 42C por 24 horas.
- Transcurrida la incubacin, efectuar tincin Gram y aislar las colonias en tubos con agar Petrleo.
- Incubar a 42C por 24 horas.
- Despus resembrar en tubos con agar triptosa de soya, considerando el origen de la muestra,
diferencias externas y tincin Gram.
- Incubar a 42C por 24 horas.
- Observar el crecimiento y despus taponar los viales con tapones de jebe y sellarlos con parafina.
- Guardar en cepario a 4C.
- Las cepas bacterianas se aislaron para ser sometidas a las pruebas de capacidad degradativa y
emulsificante del petrleo crudo.

Seleccin de cepas bacterianas biorremediadoras.
Capacidad degradativa de petrleo de las cepas bacterianas: (Westakle et-al 1988).
- Colocar en frascos de vidrio 50 ml de medio nitrogenado con 0.5 ml. de petrleo crudo.
- Agregar 5 ml. de cepa bacteriana estandarizada al nefelmetro #3 de Mc. Farland.
- Incubar cada sistema a temperatura ambiente (25-28C) por 21 das.
- Medir diariamente los siguientes parmetros para determinar la capacidad degradativa.

Produccin de biomasa: peso seco.
Pesar un crisol (P1).
Agregar al crisol 1,0 ml del contenido del sistema.
Llevar al crisol a 60-70C por 1 hora.
Pesar nuevamente el crisol (P2) para determinar el peso seco (PS) expresado en g/ml: Ps= P2-P1.
Se efectuaron estos pasos diariamente.
Se anotaron los resultados para establecer curva de crecimiento.

Determinacin de valores cinticos.
Con los datos obtenidos de la produccin de peso seco se determinaron los valores cinticos, con las
siguientes frmulas.
- Velocidad especfica de crecimiento (u)

Ti Tf
Xi Ln Xf Ln
u

=
Donde: Xi = Biomasa inicial
Xf = Biomasa final
Ti = Tiempo inicial
Tf =Tiempo final
- Productividad (Pr)
Pr= u.X
Donde : u = Velocidad Especfica de
Crecimiento.
X = Biomasa final

- Incremento de Biomasa (I.B)
I.B. = 100 .
Xf
Xi Xf

Donde:
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Xi = Biomasa inicial
Xf = Biomasa final

Actividad emulsificante de las degradadoras de petrleo crudo.
Se emple la metodologa propuesta por Goldman y Col (1982), modificada por Merino y Col
(1992).
Se reactivaron las cepas que presentaron capacidad degradativa de petrleo, incubndolas por 18 h.
en 2ml de caldo Extracto de Levadura-Etanol.
El medio mnimo con extracto de levadura etanol se reparti en cantidades de 18 ml. en frascos de
150 cc.
Agregar 2ml. del cultivo joven ajustando la turbidez a #3 de la escala turbidimtrica de Mc.
Farland.
Incubar a 30C por 72 horas.
Transcurrido el tiempo de incubacin, centrfugar 10ml del cultivo a 5000rpm por 30 minutos en
tubos de prueba.
Colectar el sobrenadante en tubos de prueba.
Agregar al sobrenadante 0.1-0.2 ml de petrleo crudo, agitando luego (la agitacin se realiza con la
finalidad de producir la posible emulsin).
Se prepar un tubo blanco basado en el medio de cultivo sin inoculacin y se calibr a cero.
Se trasvas la preparacin a tubos del Spectrofotmetro HACH y se efectu la lectura de la
absorbancia
La conversin de la absorbancia a unidades de actividad emulsificante, se hizo considerando la
absorbancia de 0,816 a una unidad de actividad emulsificante por mililitro (1 UAE/ml)
Identificacin de las cepas bacterianas bioremediadoras.
Evaluacin de las cepas bacterianas bioremediadoras sobre suelo contaminado con petrleo crudo.
Anlisis de TPH del material puro.
Se envi una muestra representativa del suelo contaminado con petrleo crudo de la parcela de 2m
x 1 m, seleccionada de la plataforma 57 para el anlisis de hidrocarburos totales del petrleo (TPH),
el que os indic el grado y la cantidad de contaminante existente en el suelo a bioremediar.
Recoleccin y acondicionamiento del material contaminado.
Debido a que alrededor de la plataforma 57 existe demasiada humedad (zona de aguajal), se debi
transportar el material a un lugar seguro donde se le pueda controlar la cantidad de humedad,
colocar la geomembrana para evitar posibles filtraciones a otras capas superficiales y, encima de
sta, se coloc el material contaminado a bioremediar.
Ajuste de la humedad
Inicialmente se dej secar para disminuir su humedad debido a que es zona de aguajal.
Proteccin del material contaminado a bioremediar
Debido a que la zona del lote 8 est ubicada en la zona de vida Bosque Hmedo Tropical, que se
caracteriza por precipitaciones pluviales abundantes, se debi transportar el material a un lugar
donde exista un techo para proteger al sistema cuando comiencen la poca lluviosa.
Medida del TPH
La medicin de TPH nos dar un valor inicial de hidrocarburos para hacer los ajustes respectivos al
sistema.
Concentracin de nutrientes N, P, K.
Se deber agregar Nitrgeno, Fsforo, Potasio, cuya cantidad de se deber formular teniendo como
base los tipos de microorganismos aislados.
Medicin de la humedad
Se efectuaron mediciones de la humedad que, tericamente, en un proceso de bioremediacin no
debe ser inferior al 20%, ni superior al 40%.
Medicin de TPH (Hidrocarburos Totales del Petrleo)
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Se realizaron mediciones de TPH en campo para tener una cantidad de hidrocarburos con la que
inicia el sistema, se efectuaron mediciones con equipo Soxhlet, y la identificacin de las cadenas
hidrocarbonadas que presenta la muestra inicial a travs de CG-MS.
Agregar el consorcio bacteriano bioremediador
Se agreg 1 litro/m2 del consorcio bacteriano bioremediador 2(BL3), 12(1003), 4(57), 5(57), 9(57),
Borra (B3); los cuales fueron seleccionados especialmente para este tipo de crudo.
Mezcla, arado y trillado
Se efectu la mezcla, el posterior arado y finalmente el trillado, en forma diaria durante el primer
mes de tratamiento para oxigenar al sistema, y para que el contaminante en cuestin est en
contacto con los microorganismos bioremediadores. Despus la frecuencia fue semanal durante los
meses siguientes.
Muestreo del sistema
Se tomaron muestras diarias para anlisis en campo de TPH, humedad, slidos y agua, hasta llegar a
una concentracin de TPH menor del 5%, pero al final del tratamiento se efectuaron anlisis
especficos, como TPH con un equipo Soxhlet, e identificar las cadenas hidrocarbonadas livianas,
que son asimiladas por las cepas bacterianas bioremediadoras a travs de CG-MS despus del
tratamiento.
Agregar al ambiente
Los resultados de TPH nos indicaron que las muestras de suelo en laboratorio, alcanzaron los
rangos normales permitidos; por lo tanto, se procedi a agregarlo al ambiente para que desarrollen
plantas nativas de la zona.

Resultados
Aislamiento de Cepas Bacterianas.
Se aislaron 32 cepas codificadas segn el orden de aislamiento y procedencia de las muestras, de las
cuales se seleccionaron aquellas que desarrollaron en las primeras 24 horas de incubacin.
Estas cepas bacterianas fueron sometidas a pruebas de capacidad degradativa y emulsificante de
petrleo crudo.

Los promedios obtenidos para cada cepa de la produccin de peso seco, indican que los ms altos
los tienen las cepas: 2(BL3), 5(57X), 2(57X), 9(57X), Borra (B3), 1(B1107), 12(1003), 4(57X),
116(57X), (1-38X), 7(57X), en ese orden.
Los valores cinticos en cuanto a la velocidad especfica de crecimiento de las cepas bacterianas,
determinaron que las mejores cepas son: 5(1-38X), Borra (B3), 1(57X), 2(57X), 4(57X), 2(BL3),
12(1003), 5(57X), 9(57X), 116(57X), 11(57X).
Los valores cinticos en cuanto a la productividad de las cepas bacterianas, determinan que las
mejores cepas son: 9(57X), 2(57X), 116(57X), 4(57X), 2(BL3), 12(1003), 5(57X), 5(1-38X).
En cuanto a los valores cinticos respecto a su Incremento de Biomasa de las cepas bacterianas, se
ha determinado que las mejores cepas son: 9(57X), 2(57X), 2(BL3), 12(1003), 4(57X), 5(57X), 5(1-
38X), borra (B3), 1(57X), 7(57x), 8(B57X), 4(1107).

Conclusiones
Observndose las diferentes capacidades degradativas y emulsificantes, como tambin las
modificaciones en las caractersticas fsicas de petrleo crudo, efectuadas por las 32 cepas
bacterianas aisladas y evaluadas del lote 8, nos lleva a la conclusin que las mejores cepas
bacterianas son: 9(57X); 4(57X); 5(57X); Borra (B3); 12(1003); 2(BL3).

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2.- Aplicacin de bio remediacin

Bio-remediacin de suelos de la plataforma 57X-Corrientes del lote 8
En el rea de Corrientes, lote 8 de PLUSPETROL, hay plataformas de produccin con 3 ms
pozos dirigidos o desviados, productores de petrleo. Antes del ao 1993 no exista en el pas, una
reglamentacin ambiental y, como en la mayora de pases, se acumularon pasivos ambientales.
Uno de los lugares con pasivos ambientales, producto de derrames de petrleo en tierra, heredados
por PLUSPETROL, fue la plataforma denominada 57X Corrientes. La zona es inundable en forma
cclica, dependiendo de la creciente o vaciante de los ros, la zona est con mucha agua tipo aguajal,
o el terreno se seca, respectivamente. El aguajal es la parte boscosa donde crece el rbol de aguaje,
que es un fruto comestible muy popular en la selva; el rbol crece naturalmente en zonas
inundables. Este lugar fue escogido para aplicar trabajos de bioremediacin con bacterias
degradadoras de hidrocarburos, como aplicacin de los resultados de laboratorio.

Asignacin de la categora de riesgo al lugar

Para aplicar este concepto, debemos mencionar una breve historia:
Con motivo del traspaso del lote 8 en julio de 1996, del ente petrolero estatal PETROPERU, a favor
de PLUSPETROL, se acord elaborar un Estudio Ambiental para determinar las responsabilidades
de remediacin de los pasivos ambientales. En el estudio se determinaron los Lmites de
Intervencin y Lmites Objetivo, compensando la falta de legislacin en Per, en cuanto a lmites
permisibles de hidrocarburos en suelos. En el estudio se consider lo siguiente:
La determinacin de valores de intervencin se basa en una estrategia de evaluacin de riesgo para
cada sitio identificado. Los niveles especficos se determinan segn la clasificacin de riesgo
correspondiente. En casos de contaminantes de posible presencia natural en la zona, como por
ejemplo metales o cloruros, se tomar en cuenta los contenidos en terrenos no afectadas por la
industria del petrleo. En el caso de los hidrocarburos y las sustancias orgnicas de fabricacin
artificial no existe contenido natural en esta zona as que se puede presumir una concentracin
aledaa de cero. Existen tres categoras de riesgo:

(1) Riesgos a la salud humana.
Esta clasificacin corresponde a la categora mas alta, e incluye sitios donde en la actualidad se
pueden ver afectados las fuentes de agua potable, o donde la poblacin podra resultar expuesta
directamente a travs de inhalacin, adsorcin o ingestin de sustancias peligrosas. Los valores
especficos de intervencin, por tanto, deben ser generalmente ms estrictos, y los valores objetivo
para la remediacin, ms estrictos que para otros sitios. Estos valores se basan en criterios
establecidos internacionalmente para la salud humana.

(2) Riesgo al ambiente.
Esta categora incorpora sitios de jerarqua intermedia. En estos sitios se puede constatar riesgo
para los receptores ecolgicos en un plazo mediano o largo, pero no se espera que exista un riesgo
severo para la salud humana, ya sea por el tipo de contaminacin o la baja probabilidad de
exposicin a los humanos. Los niveles de intervencin para este nivel de riesgo se basan en la
evaluacin profesional de la probabilidad de que la degradacin natural llegue a eliminar los
contaminantes remanentes dentro del plazo disponible. Tambin se considera si los efectos
contaminantes se encuentran aislados geogrficamente y las posibilidades prcticas de efectuar los
trabajos de remediacin.

(3) Sitios de bajo riesgo (de consideracin esttica o solamente de normatividad).
Sitios de uso industrial o sitios donde no se presenta riesgo para la salud humana o el ambiente se
ubican en esta categora de jerarqua mnima. Esta categora incluira derrames limitados en
ubicaciones industriales. Los niveles de intervencin para esta categora se rigen por evaluaciones
home principal volver al indice exit
basadas en criterios de esttica o prcticas, y estn basadas principalmente en la extensin o
volumen del derrame. En el Cuadro 1 se detallan los criterios utilizados para la clasificacin
propuesta en la evaluacin de los riesgos. Asimismo, respecto a la ubicacin con relacin a la
poblacin aledaa, aquella poblacin residente a menos de 400 m se considera como de alto riesgo.
La poblacin a ms de 5 km. est fuera de riesgo, excepto en casos determinados.
Cuadro 1: Ejemplos de clasificacin de sitios por su categora de riesgo.
Clase de impacto Prioridad 1: Riesgo a la
salud humana
Prioridad 2: Riesgo
al ambiente
ecolgico
Prioridad 3: Riesgo
Reducido
Derrame o
residuos de
hidrocarburos en
tierra
Impactos en zonas
prximas a fuentes de
agua potable, por
ejemplo en pozas donde
existe un alto potencial
de lixiviacin al agua o
donde se planifica el
desarrollo de terrenos
para la agricultura.
Derrames
significativos (de
mas de 10 bls) en
zonas externas a las
plantas de
produccin, o en
oleoductos.
Tambin incluye
pozas con bajo
potencial para la
lixiviacin.
Derrames contenidos
enteramente dentro de
las plantas de
produccin u otras
zonas industriales sin
riesgo de fuga a zonas
circundantes.
Derrames o
residuos de
hidrocarburo en o
cerca del agua

Derrames o residuos a
ros o quebradas en
zonas pobladas
Derrames
confinados a
pantanos, aguajales u
otras zonas de poco
flujo o en zonas
alejadas de centros
poblados.
Derrames menores,
contenidos
enteramente dentro de
las zonas de
produccin.
Descarga de agua
de formacin
Descargas activas
afectando cuerpos
receptores (quebradas o
ros) en zonas pobladas.
Descargas inactivas
que han dejado alto
contenido de
residuos de
hidrocarburo o sal en
sitios alejados de
zonas de produccin.
Suelos impactados por
hidrocarburos o
salinidad dentro de las
zonas de produccin.
Lagunas y pozos
de lodo de
perforacin
Lodos desechados o
almacenados de manera
inadecuada, cerca de
poblaciones
Lodos almacenados
o desechadas de
manera inadecuada,
en zonas alejadas de
poblaciones
Lodos almacenados en
pozas inadecuadas o
en mal estado.
Otros
contaminantes
Derrames con contenido
de otros compuestos
orgnicos (PCB o
plaguicidas) en reas
accesibles a la
poblacin. Lixiviacin
o descargas de rellenos
sanitarios o aguas
servidas que impacten a
fuentes de agua potable.
Residuos industriales
mal manejados.
Residuos industriales
en las reas de
almacenamiento.
Erosin mayor Cortes de camino o
zonas de produccin
Cortes de camino o
zonas de produccin
home principal volver al indice exit
impactadas por
erosin donde se ve
afectada la calidad
del agua de ros o
quebradas por
escorrenta o
sedimentacin.
afectadas por erosin
sin efecto en los
cursos de agua

Estndares de
intervencin
Criterios de salud
humana
Criterios de
degradacin o
regeneracin natural
Criterios estticos o
normativos

Cuadro 2: Niveles de Intervencin para sitios de Categora 1
Clase de impacto Parmetro y nivel Observaciones
Clase 1. Derrames
de hidrocarburos
en tierra
TPH
1
= mas de 5000 mg/kg. (0.5%)
con alta probabilidad de lixiviacin.
Tambin se considerar la salinidad
del suelo en caso de presentarse
daos a la vegetacin.
La existencia de este tipo
de condicin es de baja
probabilidad.
Clase 2. Derrames
de hidrocarburos
en o cerca del
agua
TPH=10 mg/L, o residuos
significantes en el lecho o en la
superficie de cursos de agua.
Cursos de agua
estacionales o permanentes
generalmente son de
mayor sensibilidad que
cuerpos sin flujo (cochas).
Clase 3.
Descargas de
aguas de
formacin
TPH=10 mg/L
Metales Pesados
2
=5 mg/L Ba
0.4 mg/L Pb.
Salinidad
3
=250 mg/L, de cloruros
(equivalente a 700 uS/cm de
conductividad). Las
concentraciones se miden en el
cuerpo afectado.
La presencia de agua de
alta salinidad es
caracterstica de las aguas
de formacin.
Clase 4. Lodos de
perforacin
Ba= mas de 750 mg/kg, Pb= mas de
375 mg/kg
En adicin el
confinamiento del lodo
debe ser inadecuado.
Clase 5. Otros
contaminantes
PCB = trazas
Plaguicida s= trazas
Solventes = trazas
Aguas servidas = efluentes no
clorinados y un contenido de
organismos coliformes en el cuerpo
receptor mayor al nivel normado en
el Per para agua potable.
Poco probable debido al
uso limitado de estos
compuestos en la industria
petrolera.
La norma aplicada para
aguas servidas es norma de
adecuacin establecido por
la Ley General de Aguas.
Clase 6. Erosin Requiere accin si se estima que la
regeneracin natural no ocurrir en
15 aos
4
y existe una probabilidad
de que se vean afectados cuerpos de
agua de uso como agua potable.


1
TPH son las siglas inglesas para Total Petroleum Hydrocarbon o Hidrocarburos Totales. Este
parmetro, para el cual existe capacidad instalada de anlisis en Per, es una medida de la suma de
los componentes orgnicos del hidrocarburo. Las sustancias potencialmente peligrosas forman una
home principal volver al indice exit
parte de este conjunto. El anlisis de TPH, por medio de cromatografa de gas (EPA 8015M), es
mucho ms sensible y especfico a hidrocarburos, que el anlisis denominado Aceites y Grasas.

2
Los metales indicados son los dos metales comnmente encontrados en aguas de produccin y
para los cuales existe Nivel Mximo Permisible promulgado por la Direccin General de
Hidrocarburos de Per(DGH). La presencia de estos puede indicar la presencia de otros metales de
alta toxicidad tambin.

3
Equivale al lmite para cloruros fijado por la DGH para descargas de agua producida. El valor de
conductividad (de fcil medicin en campo) es un equivalente aproximado a un contenido de 250
mg/L de cloruros, y se usa de manera referencial. La salinidad no est normada en s, sino se usa
el cloruro, que s es parmetro normado, como indicador.
4
En la prctica se puede constatar que si no se observa el comienzo de una regeneracin natural en
dos aos, con toda probabilidad no se ver una recuperacin en 15 aos.
Los niveles de intervencin que se proponen aqu, se encuentran generalmente basados en criterios
de remediacin aplicados en los EE.UU, y en observaciones en la Amazona Peruana, de
biodegradacin y recuperacin de suelos impactados por hidrocarburos, aguas de produccin o
erosin. En el Cuadro 3 se describen los niveles de intervencin para la Categora 2.

Cuadro 3. Niveles de Intervencin para sitios de la Categora 2.
Clase de impacto Parmetro y nivel
Clase 1: Derrames de hidrocarburo a
tierra
TPH= 5 %
Clase 2: : Derrames de hidrocarburo en
o cerca del agua
TPH= Amplias zonas cubiertas por capa de
hidrocarburo y calificadas como Categora 2 segn
el anlisis de riesgo.
Clase 3: Descarga de aguas de
formacin
Amplias zonas sin cobertura vegetal intacta con
salinidad que impida la regeneracin a su estado
natural en un plazo estimado de al menos 15 aos.
Clase 4: Lodos de perforacin Ba = mas de 2000 mg/kg, Pb= mas de 1000 mg/kg.
Adems, el confinamiento del lodo debe ser
inadecuado.
Clase 5: Otros contaminantes PCB= presencia
Plaguicidas = indicacin
Solventes =indicacin
Otros =qumicos mal manejados o desechados
Clase 5: Erosin Alta turbidez en aguas que llegan a zonas pobladas

Se escogi la plataforma 57X para aplicar la bio remediacin, por ser la nica en el yacimiento
Corrientes, que haba quedado sin limpiar y restaurar, debido a que no tena produccin, los pozos
estaban cerrados, se esperaba la remediacin pactada con el anterior operador del lote y, sobre todo,
que se haba proyectado reactivar la produccin de los pozos.

Estndar de intervencin
Caracterizacin Inicial del sitio
La plataforma 57X se ubica 750 m al sur de la Plataforma 12X,en un claro de 130m x100m, en el
rea de Corrientes. Tiene 3 pozos: 51XCD, 57XC y 59 XCD.
Considerando la necesidad de intervenir los pozos de la plataforma, que haban sido abandonados
temporalmente por el anterior operador, se proyect ampliar la red de trochas carrozables o
carreteras afirmadas, para permitir el acceso desde la plataforma 12X a la plataforma 57X. Debido a
ello, se decidi efectuar la remediacin del rea impactada por hidrocarburos.
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Se observaron manchas de petrleo crudo que presentaba material orgnico contaminado (hojas,
tallos, maderas, races, hojarasca, etc.), en la parte superficial de la mancha, a una profundidad de 5
centmetros.
Pero en la parte inferior de esta capa se encontraba el suelo contaminado con petrleo crudo, con
una profundidad de 40 centmetros aproximadamente.
La cantidad de material a bioremediar, tena un rea de 70 x 30metros.

Asignacin de Categora de Riesgo y Estndar de Intervencin
Para la remediacin de la plataforma 57X, se le asign la categoa 2:Niveles de intervencin para
sitios con riesgo ambiental, debido a que la urgencia para la remediacin a niveles aceptables es
menos crtica. Sin embargo, estos sitios pueden representar un riesgo a la salud ambiental, a
mediano o largo plazo, debido a la Recalcitrancia de los Hidrocarburos pesados de este
contaminante.

Nivel de Objetivo
El parmetro y nivel para el impacto de Clase 1: Derrame de hidrocarburo a tierra, es de TPH
menor a 5% en peso.
Metodologa
Caracterizacion Inical del Sitio
Clase de impacto: Derrame de petrleo crudo en tierra.
Ubicacin del impacto: Plataforma 57.Corrientes .Lote 8. Pluspetrol.
Extensin aproximada del rea: 210 m2.

Evaluacin del Area Impactada.
Area: 40 m x 30 m (1200 m2)
Profundidad: 0.40 m
Volumen Estimado: 540 m3
Se estim un volumen de 540 m3 que corresponden nicamente a suelo contaminado con petrleo
crudo, el cual se someter al proceso de Bioremediacin in-situ.

Limpieza Preliminar:
Inspeccin de la Plataforma 57 X
En la visita de inspeccin a la plataforma 57X se determin la cantidad de terreno manchado con
petrleo crudo al igual que la del material orgnico manchado (maderas, troncos manchados, restos
de plantas, etc.).
Se calcul un promedio de 1350 m
2
de suelo contaminado alrededor de la plataforma. Un total de
540 m
3
en volumen de tierra contaminada a tratar.
Esta cantidad de material contaminado fue tratada mediante la tcnica de bioremediacin in-situ,
utilizando las bacterias bioremediadoras aisladas del Lote 8-en la selva peruana.
Se calcul utilizar un promedio de 1300 litros de la suspensin bacteriana bioremediadora, para
1350 m
2
de suelo contaminado con petrleo crudo.
Pero antes de agregar la suspensin bacteriana bioremediadora, se deber fortalecer el crecimiento
de las algas nativas que toleran concentraciones elevadas de petrleo crudo, con lo cual nos
proporcionar la oxigenacin necesaria para las bacterias hidrocarburoliticas.

Requerimientos Para Limpieza de la plataforma 57X
Personal de Trabajo
Seis (6) personas para la limpieza preliminar de la plataforma (retiro de material orgnico
manchado), tuvieron un adecuado equipo de proteccin personal, como: casco, lentes de proteccin
negros, proteccin bucal, ropa de trabajo: polo y pantaln, guantes de jebe y, para los pies, botas de
jebe.
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Instrumentos de Trabajo
05 Palas de corte.
04 Machetes
08 Baldes de plstico.
01 Sacabocados.
01 carretilla.
Equipos
01 bomba de diafragma
02 barreras de contencin para contingencia.

2.-Toma de muestra
Se tom una muestra representativa del rea para el anlisis de Hidrocarburos Totales del Petrleo
(TPH).

3.-Crecimiento de Algas Verdes (19/05/2001)
Despus de la limpieza preliminar de la plataforma 57X, retirando la hojarasca, maderas, etc., se
propici el crecimiento de algas verdes en un 70% de la plataforma, las cuales tienen tolerancia a
concentraciones elevadas de hidrocarburos, y brindaron al sistema el oxgeno necesario para la
degradacin del hidrocarburo presente, por parte de la micro flora bacteriana bioremediadora.

4.-Criterios de Bio-remediacion
Tipo y concentracin de contaminante:
Tipo de hidrocarburos Hidrocarburo pesado
Concentracin de hidrocarburos. TPH :21.74 %p
Hid. Livianos :0.274 %p
Hid. Pesados :21.466%p
Antigedad de la contaminacin: Ms de 20 aos.

Tcnica de bio-remediacin
La tcnica de bio-remediacin fue seleccionada segn el lugar donde se produjo la contaminacin:
Bioremediacin in-situ.

Descripcion de la Tcnica:
La plataforma 57X se encuentra en una zona de Bosque Tropical Lluvioso, por lo que la
humedad del rea a remediar es superior al 45%, debido a esto se procedi a hacer un agujero de
2 m de dimetro y 1 m de profundidad, con ayuda de la retroexcavadora en el extremo izquierdo
del rea contaminada, al costado de la carretera, para almacenamiento de agua y crudo presente
en el rea contaminada.
El hidrocarburo flotante presente en el agujero fue recuperado con la ayuda de la bomba
diafragma.
El agua que se encontr dentro del agujero se mezcl con las cepas bacterianas bio-
remediadoras y su nutriente NPK, para luego, con la ayuda de la motobomba porttil, ser
drenada y regresada al rea de la plataforma 57X para la implantacin de las bacterias en el
sistema.
Esta recirculacin se hizo semanalmente durante los primeros tres meses de tratamiento.

Presencia de microorganismos
Inoculacin. M.H.T. 10
5
a 10
6
UFC/g suelo
M.D.H.10
3
a 10
4
UFC/g suelo
Bioaumentaci: adicin de microorganismos propagados en bioreactores, con el caldo de
propagacin.

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Nutrientes:
Fuentes de Carbono: Hidrocarburos del Petrleo Crudo.
Fertilizante NPK 15/15/15 y oligoelementos o elementos minoritarios (micro nutrientes).

Aereacin
En los procesos de campo, la aereacin se produce por remocin del suelo con herramientas
agrcolas; lo cual se hizo con el apoyo de 2 ayudantes generales por 4 das a la semana, durante los
tres primeros meses.

Condiciones ambientales
pH. 6 y 8
Si es menor de 6, se puede incrementar mediante la incorporacin de cal al suelo previa
evaluacin en laboratorio, de la concentracin de cal a agregar.
Si es mayor de 8, se puede disminuir mediante la incorporacin de Acido Fosfrico o Azufre al
suelo, previa evaluacin en laboratorio de la concentracin a agregar.
Humedad.
humedad del orden del 70 % de la capacidad de campo.
Temperatura.
20 C y 40 C.

Presencia de metales y sales
Metales pesados, sodio en alta concentracin, sales inorgnicas (NaCl, sulfatos, carbonatos, etc.).
Para esto se utiliz plantas de totora, como fito remediacin.

Biodisponibilidad
Actividad de los microorganismos y transferencia de masa desde el suelo hasta el microorganismo.
Anlisis de otros factores importantes en biodegradacin de hidrocarburos en suelo: toma de
muestras y anlisis qumicos.
Toma de muestras Aleatoria.
Anlisis qumicos TPH - APHA 2280 D.
Hid. Livianos - APHA 2280 F.
Cromatografia de Gases y Espectrofotometria de Masas.
Anlisis Microbiolgicos
Microorganismos Heterotrficos Totales (MHT): Tcnica de Vertido en
Placa.
Microorganismos Degradadores de Hidrocarburos (MDH): Tcnica del
Nmero Mas Probable (NMP).
Revegetacin
Despues de concluido el proceso se procedi a transplantar especies nativas Cyperacea piri-piri,
Juncacea totora y Eichornia puto-puto
Abandono del rea
Despus de la revegetacin estimulada se procedi a limpiar los alrededores, levantar las
herramientas usadas y el abandono del rea.

COSTOS

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CONCLUSIONES

En el laboratorio, la concentracin inicial de TPH era 21,74 % en peso, despus de 61 das de
tratamiento se obtuvo un TPH final de 3,15 % en peso.
Los resultados de laboratorio indican que las cepas bacterianas tienen mayor preferencia en la
degradacin de hidrocarburos pesados.
La bioremediacin in-situ del suelo impactado por derrames en la Plataforma 57X, se dio
progresivamente, pero en un tiempo ms largo que en laboratorio; y tuvo un porcentaje de
reduccin de hidrocarburos del 45,45% en 7 meses.
Despus de 12 meses, la concentracin de TPH fue de 4.6%.
Las plantas nativas se sembraron en el mes sexto de tratamiento y no se observaron problemas
en su crecimiento.
La concentracin de microorganismos degradadores de hidrocarburos est en 5,00E+06 NMP/g
de suelo.

BIBLIOGRAFIA

BRANDT Y PLUSPETROL PERU CORPORATION, 1998. Biorremediacin de residuos slidos
contaminados con lodo base aceite. Pozos Pavayacu 1104H y 1102D, lote 8.
Iquitos Per.157 pp.

ERCOLI, E.; J. GALVEZ; E. ARANZADI. 1994. Degradacin biolgica en suelos contaminados
con hidrocarburos.
Laboratorio de bioproceso. Facultad de Ingeniera. Universidad de Cuyo.

GUERRA, E.; I. BENAVENT; R. ALDANA. 1997.Identificacin y Evaluacin de cepas nativas
biorremediadoras sobre suelos contaminados con petrleo crudo. Instituto de hidrulica.
Hidrologa e Ingeniera Sanitaria Universidad de Piura. Piura Per.50pp

MERINO, F.; S. GUTIERREZ; R. PALOMINO. 1997. Aislamiento y Caracterizacin de
Microbiologa y Biotecnologa Microbiana (S-22). U.N.M.S.M.- Lima.

MERINO, F.; C. VELASCO; L. AZAERO. 1996. Evaluacin de un medio de cultivo para la
produccin de emulsificantes por va microbiana. Laboratorio de Fisiologa y Gentica y Ecologa
Microbiana. U.N.M.S.M.- Lima.92pp

RENTERIA, A.; H. Miranda. 1997. Aislamiento y seleccin primaria de cultivos bacterianos
capaces de utilizar petrleo como nica fuente de carbono. Laboratorio de Biotecnologa.
Universidad Nacional de Trujillo- Per.

TANTALEAN, J.; R. ALTAMIRANO. 1998. Aislamiento y Evaluacin del Crecimiento de
Pseudomonas spp. Hidrocarburoclsticas en petrleo Diesel 2. Facultad de Ciencias U.N. San Luis
Gonzaga de Ica Per.

TREJO, C. 1996. Aislamineto de bacterias degradantes y emulsificantes de petrleo, de ambiente
no contaminados por hidrocarburos. Tesis Lic. Microbiologa y Biotecnologa. Programa
Acadmico Microbiologa. U.N.M.S.M. Lima- Per.124pp

WATKINSON, R.; P. MORGAN. 1994. Biodegradacin de los componentes de petrleo.
Revistas Bioqumica de la Degradacin Microbiana. Holanda.


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FIGURAS


Diagrama de la Tcnica de bio-remediacin

Diagrama de la ubicacin del agujero para recoleccin de crudo y almacenamiento del agua para su
re circulacin al sistema.

Disposicin del desecho recolectado

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Diagrama del Tratamiento de Bioremediacin (Inoculacin y Re circulacin Bacteriana) de la
plataforma 57X.

Tabla de Resultados obtenidos de los anlisis trimestrales de las muestras de suelo contaminado de
la Plataforma 57X

Fecha N de
muestra
Cdigo
de
muestra
TPH
%
peso
MHT
Ufc/g
de suelo
MDH
NMP/g
de suelo
Hume
dad %
Temp.
C
% de
reduccin
de TPH
23/06/01 1 SP57-01 22 3,50E+06 2,50E+0
6
77,06 26,5 0
23/09/01 2 SP57-07 20 4,00E+06 3,40E+0
6
50 27 9,09
23/12/01 3 SP57-15 12 7,00E+06 5,00E+0
6
66,88 29 45,45

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FOTOGRAFIAS EN PLATAFORMA 57X CORRIENTES






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