LA CENTRFUGA, T3 (I)

Tema 3. Aparataje auxiliar del laboratorio

1. CENTRFUGA. La centrfuga es un aparato que nos proporciona una tcnica de separacin que est basada en el movimiento de las partculas, de modo que stas son desplazadas hacia el extremo distal del eje de rotacin segn sus diferentes masas y formas.

1.1. -

Descripcin.

La centrfuga es un aparato que necesariamente debe constar de: Rotor o cabezal: es el lugar donde se colocan las muestras. Existen dos tipos de rotores: o Cabezal horizontal u oscilante: es el diseo tpico, y permite el uso de cuatro contenedores que oscilan libremente entre las ramas del rotor. En su interior pueden situarse adaptadores para los distintos tipos de portamuestras. En este tipo de cabezal las muestras oscilan hasta ponerse en posicin horizontal, en ngulo recto con el eje de rotacin. Adopta la posicin vertical o de reposo cuando la centrfuga est parada. o Cabezal angular o de ngulo fijo: en este tipo de centrfuga, los tubos de muestra estn en posicin fija formando un ngulo de entre 25 y 40 con el eje de rotacin, o bien de 90 en la centrfuga especial diseada para el estudio del hematocrito sanguneo. Eje de la centrfuga: es el vstago que soporta el rotor y acta como eje de rotacin. Motor: acciona el vstago con el rotor o cabezal que contiene las muestras sobre las que se va a ejercer la fuerza centrfuga. Accesorios: el rotor se encuentra incluido en el interior de una cmara que generalmente lleva tapadera, con una cerradura de seguridad que no permite su apertura hasta que haya terminado de centrifugar y est en posicin de reposo. Dependiendo del modelo, las centrfugas pueden llevar: interruptor de puesta en marcha, temporizador, control de velocidad, freno, protector para 1

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minimizar la produccin de aerosoles, refrigerador para reducir la temperatura de la cmara y el calor que se produce por la friccin del rotor con el aire.

1.2.

Fundamento.

La fuerza centrfuga relativa (FCR) es la fuerza requerida para que se produzca la separacin. Las unidades de esta fuerza se expresan como el nmero de veces mayor que la gravedad (g). La FCR se calcula mediante la frmula: FCR = 1,118 105 r n2 r = distancia horizontal del radio en cm desde el centro de rotacin hasta el fondo del tubo durante la centrifugacin. n = velocidad de rotacin del motor, viene dada como revoluciones por minuto. La FCR de una centrfuga, como vemos, depende de la velocidad del motor y del radio de giro, que van a ser las variantes segn el modelo y tipo de centrfuga. Por todo ello, para poder reproducir con exactitud unas condiciones de centrifugacin en cualquier tipo de centrfuga, es necesario definir la FCR para cada tipo de separacin. Existe un nomograma en el que sabiendo la FCR necesaria y el radio de giro de la centrfuga a emplear se obtiene el n de rpm sin necesidad de usar las frmulas. Esto demuestra que la FCR aplicada a un tubo con cabezal de ngulo fijo puede ser mucho ms baja que la aplicada a otro tubo igual en un rotor de cabezal horizontal, aplicando igual n de rpm ya que el radio de giro es mayor en este tipo que en el anterior, porque el tubo de ngulo fijo es mayor en este tipo que en el anterior, porque el tubo de ngulo fijo es incapaz de oscilar hacia fuera. Una vez definida la FCR, veamos, segn el rotor, como acta la fuerza. Cabezal oscilante: durante la centrifugacin las partculas se desplazan de forma constante a lo largo del tubo, de modo que el sedimento es distribuido uniformemente contra el fondo del mismo; por ello la superficie del sedimento es plana. El sobrenadante puede quitarse con una pipeta o por decantacin, segn lo compacto que quede.

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Cabezal angular: al actuar la FCR, las partculas son conducidas hacia fuera horizontalmente pero chocan en el lado del tubo, por lo que el sedimento impacta contra el borde y el fondo de ste, son la superficie del sedimento paralela al eje de la centrfuga; al desacelerar y parar, el sedimento se deposita en el borde inferior del tubo a causa de la gravedad, formndose un sedimento menos compacto.

1.3.

Utilidad.

La centrfuga es hoy un aparato imprescindible en cualquier laboratorio como tcnica de separacin. Separacin del suero o plasma. Este se separa de todo el paquete celular. Esta es una actividad primordial del laboratorio; para ello emplearemos una FCR entre 850 y 1000 g durante 10 minutos, o bien entre 1000 y 1300 g cuando utilicemos tubos de sangre con separador de gel. Concentracin de clulas. Estos componentes de los lquidos biolgicos se concentran para facilitar el diagnstico microscpico del sedimento (ej, sedimento urinario) y tambin el estudio qumico del sobrenadante o sedimento. Para ello suele emplearse una FCR de 450 g durante 5 minutos. Separacin de sustancias. Previamente podemos precipitarlas

qumicamente. Se usa, por ejemplo, en la tcnica de determinacin de HDLcolesterol, en la que se hacen precipitar el LDL-colesterol y el VDL-colesterol. O bien en la separacin de protenas o anticuerpos marcados, ligados a otras sustancias, de las formas libres. Aclarar lquidos orgnicos. La centrfuga acta separando las fases lquidas de diferente densidad. Separar quilomicrones del suero o fraccionar las distintas lipoprotenas. Para este tipo de actividad se necesitan unas centrfugas especiales que puedan adquirir una FCR muy alta que acte durante muchas horas o incluso das para realizar su funcin se separacin. Para ello se disearon las ultracentrfugas, que son centrfugas generalmente de cabezal angular que actan a gran velocidad y llevan una cmara refrigerada para evitar el calor que se produce en su interior por rozamiento.

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1.4.

Control y mantenimiento.

Para un adecuado funcionamiento de la centrfuga es necesario seguir algunas recomendaciones: 1. Utilizar tubos resistentes a la FCR. Poner un amortiguador en el fondo del adaptador como antichoque y para evitar que el sobrenadante pueda ser movido. Tener cuidado de que no sobresalga el tubo del portatubos, ya que puede impedir la oscilacin en las centrfugas de cabezal oscilante. 2. Equilibrar correctamente la centrfuga colocando los tubos, cubetas, etc, de igual peso, forma y tamao en posiciones opuestas en el interior de los contenedores, manteniendo una disposicin geomtrica simtrica; se pueden emplear tubos con agua cuando falta alguno. Esto es necesario, pues la descompensacin del rotor puede causar vibraciones que si son pequeas pueden no notarse, producindose poco a poco un desgaste de la centrfuga que aumentar la frecuencia de las roturas de los tubos y llevar a una peor sedimentacin. 3. Tapar los recipientes para evitar la evaporacin que puede causar el aumento de la temperatura que se produce en el interior de la cmara debido al rozamiento, as como para impedir la formacin de aerosoles que pueden ser contaminantes. 4. No forzar el paro de la centrfuga con el freno de mano o con alguna maniobra manual, evitando de este modo la posible mezcla de las dos partes ya separadas, y adems el peligro de accidente. 5. Comprobar la velocidad de centrifugacin, por lo menos cada tres meses, mediante un aparato externo de conocida exactitud (tacmetro). 6. Limpieza peridica, o tras rotura de algn tubo, de la cmara y los contenedores para impedir en los posible la propagacin de agentes infecciosos. El temporizador de la centrfuga debe ser comprobado cada semana frente a un temporizador de referencia. La temperatura de una centrfuga refrigerada, cada mes. Los conmutadores, cepillos y escobillas del motor, cada tres meses, y reemplazarlos cuando sea necesario.