La curva de calibrado es un mtodo de qumica analtica empleado para medir la concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin

con una serie de elementos de concentracin conocida. Se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometra) y la variable a determinar (la concentracin). Para ello, se efectan diluciones de unas muestras de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una funcin matemtica que relacione ambas; despus, se lee el mismo carcter en la muestra problema y, mediante la sustitucin de la variable independiente de esa funcin, se obtiene la concentracin de esta. Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y, empleando la curva de calibracin, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta encontrar la concentracin del analito. Las curvas de calibracin suelen poseer al menos una fase de respuesta lineal sobre la que se realiza un test estadstico de regresin para evaluar su bondad. Qu se entiende por curva de calibracin? Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de una sustancia (por ejemplo la albmina srica bovina que vimos antes) que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia (protenas) presente en una muestra incgnita. En muchas determinaciones se cumple una relacin proporcional entre la magnitud o intensidad de color que da una reaccin y la cantidad del reactivo que la provoca. Por ejemplo: si la presencia de 10 ug de protenas en una solucin genera la aparicin de un color azul plido cuando es agregada a una mezcla reactiva, la presencia de 20 ug de protena dar lugar a que la solucin se torne azul ms oscuro y as sucesivamente. La relacin entre intensidad de color y concentracin de la sustancia (una medida de la cantidad de esa sustancia) es proporcional y as, si se grafica el valor de intensidad de color medido con un aparato adecuado (espectrofotmetro o colormetro) en funcin de las concentraciones crecientes de la sustancia se obtiene una recta. Es decir, a mayor cantidad de protena, mayor cantidad de producto de reaccin y por lo tanto, mayor intensidad de color. Curva de Calibracin Dado que se ha trabajado con datos reales, los grficos que se obtienen no son tan ideales, pero esta situacin no es un obstculo ya que dentro de ciertos valores es posible trazar la recta ms probable que une una serie de puntos, con el uso de los programas de clculo de las computadoras.

Hay que advertir que una respuesta lineal no se obtiene en todo el rango de concentraciones posibles sino dentro de un conjunto de valores que dependen de numerosos factores dependientes del mtodo de medicin. Por otra parte, este tipo de curvas no se limita solamente a la determinacin de un elemento o compuesto qumico sino que tiene mltiples aplicaciones. Ley de Beer y Linealidad La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una sustancia podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer de dos formas: 1. Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2 soluciones, una problema (P) y una estndar (S), podemos establecer la siguiente relacin matemtica entre ellas: 2. A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la representacin grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentracin (eje de abcisas). Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus A, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se averigua por interpolacin de las A de las soluciones problema en la curva de calibracin. Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y Concentracin. Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin falsamente baja de cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para que su concentracin entre en los lmites de la linealidad. Linealidad y mtodo de minimos cuadrados En muchos tipos de anlisis qumico se mide la respuesta del procedimiento analtico a cantidades conocidas de analito (llamadas patrones o estndares), y basndose en ellas se puede interpretar la respuesta a una muestra de contenido desconocido. Para ello, es preciso preparar una curva de calibrado que es un grfico que muestra la respuesta de un mtodo analtico en funcin de cantidades conocidas del analito. La mayora de las veces se trabaja en una regin en la que la curva de calibrado es recta. El mtodo de los mnimos cuadrados es la tcnica que nos permite trazar la mejor recta a la que se ajustan los puntos experimentales, que de hecho estn ms o menos dispersos y no se encuentran exactamente en lnea recta. Este procedimiento supone que los errores de los valores de y son sustancialmente mayores que los de los valores de x. Esta condicin normalmente es cierta en una curva de calibrado, si la respuesta experimental medida (valores de y) es menos cierta que la cantidad del analito (valores de x). Un segundo supuesto es que las incertidumbres (las desviaciones estndar) de todos los valores de y son similares. En la mayora de los textos de Qumica Analtica se pueden encontrar las ecuaciones que permiten ajustar una serie de datos experimentales a una recta. Sin embargo, las calculadoras actuales permiten obtener de forman sencilla la ecuacin y=a+bx, donde a es la ordenada en el origen y b la pendiente de la recta de calibrado. Para ello es necesario que cada alumno consulte el manual de su calculadora. Tambin es posible obtener la regresin de la recta, r, que nos indica la bondad de la misma: cuanto ms se aproxime este valor a 1 ms se aproximan los puntos a una recta. En Qumica Analtica, una curva de calibrada ajustada por mnimos cuadrados debe tener una r 1>r>0,995. Si la r es menor deberemos de representar los puntos para descartar alguno de ellos. Finalmente, es posible tambin introducir el valor de y (seal analtica para la muestra de concentracin desconocida) en la calculadora y obtener el valor de x (concentracin).