Espectro de Absorción

Espectros de absorción Un espectro de absorción es una representación gráfica de

la absorbancia de un analito (o de otra magnitud equivalente) en función de la
longitud de onda de la radiación , l , (o de otro parámetro relacionado con la energía
de la radiación utilizada).
El máximo de absorbancia obtenido en el espectro de absorción de un analito, nos
dará la longitud de onda que proporciona la mayor sensibilidad posible, y por tanto
será la que se utilizará en el análisis espectrofotométrico de dicho analito. Todas las
disoluciones que presentan color, absorben radiación electromagnética
perteneciente al espectro visible, el cual puede dividirse en varias zonas según se
muestra en la tabla siguiente:
 Calibración
 Calibración. Concepto y tipos
 Por calibración se entiende “el conjunto de operaciones
que establecen, en condiciones especificas, la relación
entre los valores de una magnitud indicados por un
instrumento de medida o sistema de medida, o los
valores representados por una medida materializada o
por un material de referencia, y los valores
correspondientes de esa magnitud realizados por
patrones”.
 Esta definición de calibracion es la comunmente
aceptada, pero existe otra según la cual la calibracion
también se puede considerar como la caracterización de
la respuesta de un instrumento en función de las
propiedades de un analito. Establece la relación entre
una magnitud y la concentración de la sustancia medida

 Basados en estas dos definiciones , Se puede hablar por

lo tanto de dos tipos de calibración.
Trabajo martes !!
 Definir Calibracion Instrumental
 Definir Calibracion Analitica
 Diferencias

 Ejemplos

 Graficos

 y otros relacionados con Calibracion

Retomando ……..
 Los métodos químicos cuantitativos tienen carácter
absoluto. En ellos, la propiedad medida es función directa
de la concentración o de la cantidad, de acuerdo con una
relación de proporcionalidad, P=KC, donde P representa
la magnitud de la propiedad medida, y C es la
concentración o la cantidad Además, la constante, K es
única, esto es, tiene un valor perfectamente definido,
deducible de las leyes estequiométricas
 Por su parte, los métodos instrumentales tienen carácter
relativo. También se basan en la medida de una propiedad, P,
(normalmente física), que es función de la concentración,
P=KC. Sin embargo, a diferencia de los métodos químicos, la
constante de proporcionalidad no es única, al depender de las
condiciones experimentales. Así, por ejemplo, en
espectrofotometría, la absorbancia, A, (propiedad medida) está
relacionada con la concentración por
A=εbC

Es evidente, que si se conocen todos los parámetros implicados en la constante

K (ε y b en espectrofotometría, ) estos métodos adquieren carácter absoluto. Sin
embargo, en la práctica, estas relaciones apenas se usan, muchas veces por la
dificultad de medir las variables implicadas. Por ello, la concentración de la
muestra se determina preferentemente por comparación con muestras patrón.
 Definicion de Calibracion

 Calibración es el conjunto de operaciones que establecen,

en condiciones especificadas, la relación entre los valores de
una magnitud indicados por un instrumento de medida o un
sistema de medida, o los valores representados por una
medida materializada o por un material de referencia, y los
valores correspondientes de esa magnitud realizados por
patrones
 Tipos de Calibrados

 Los tres métodos de comparación con patrones

empleados más frecuentemente son los que utilizan
curvas de calibrado obtenidas mediante series de
patrones, el método de las adiciones estándar y el
método del patrón interno
1. Curvas de calibrado

 La utilización de curvas de calibrado obtenidas a partir

de series de patrones es, posiblemente, el método más
utilizado. Consiste en medir la propiedad analítica de
interés, P1, P2, P3, etc. en una serie de muestras de
composición conocida, C1, C2, C3, etc. y preparadas
todas ellas en las mismas condiciones
El calibrado obtenido se emplea para determinar la cantidad o concentración en
una muestra desconocida midiendo la magnitud de P en idénticas condiciones
que los patrones y obteniendo C por interpolación
La curva de calibrado se representa siempre con la respuesta del instrumento en
el eje vertical (y) y las concentraciones sobre el eje horizontal (x).
El valor de C se puede acotar teniendo en cuenta la precisión de las medidas
para las diversas concentraciones, y a tal fin existen métodos estadísticos
adecuados
 Generalmente se utilizan calibrados en los que existe una
relación lineal entre la señal analítica (y) y la concentración
(x), tomando precauciones experimentales para asegurar
que la linealidad de la respuesta se conserve en un amplio
margen de concentraciones. En estos casos la forma de
proceder consiste en obtener la recta de regresión de y
sobre x (esto es, la "mejor" línea recta a través de los
puntos de la gráfica de calibración, y que puede obtenerse,
por ejemplo, por el método de mínimos cuadrados) y
utilizarla para estimar la concentración de muestras
problema por interpolación, así como también para estimar
el límite de detección del procedimiento analítico.
2. Método de las adiciones estándar

 El método consiste en añadir sobre una serie de

alícuotas, cantidades conocidas del componente a
determinar, y medir la magnitud de la propiedad analítica
de interés tras las diferentes adiciones.

 Por ejemplo la adicion de estandar es utilizada Cuando

se analizan muestras complejas, como alimentos ó
cenizas vegetales, suele ser imposible o muy difícil
preparar estándares que se asemejen a las muestras. En
este caso, el método de las adiciones estándar es útil
para contrarrestar los efectos de matriz
3.-Método del patrón interno

 En este método, una sustancia pura, ausente en la

muestra, se añade en concentración fija y conocida a los
patrones y a la muestra. Se miden luego las respuestas
del analito y del patrón interno, se calculan los cocientes
entre ambas respuestas y se representan frente a las
concentraciones de los patrones
 El método se utiliza frecuentemente en espectrometría
de emisión y en algunos métodos de rayos X. Su
principal ventaja es que con él se eliminan los problemas
de fluctuación instrumental, ya que tanto el componente
de interés (analito), como el patrón interno experimentan
las mismas variaciones.
 Independientemente de la técnica instrumental
responsable de la señal analítica (cuyas características
se estudian en forma particular) los parámetros que se
determinan a partir de las curvas de calibración
obtenidas con cualquiera de ellas son
 la linealidad
 la sensibilidad
 el límite de detección
 el límite de cuantificación
 el intervalo analítico
 Linealidad del sistema de medición

 La linealidad de la curva de calibración (habilidad para asegurar que los

resultados obtenidos directamente o por medio de una transformación
matemática definida) es un requerimiento fundamental en la práctica del
análisis químico cuando se realizan curvas de calibración. En general la
linealidad no se cuantifica pero se observa por simple inspección o
mediante pruebas significativas de no linealidad. La no linealidad se
elimina mediante la selección de un intervalo de operación más restringido.
 Como ya se mencionó con anterioridad, para demostrar la linealidad se
requieren cumplir ciertos criterios de aceptación en la que estadísticamente
se puede justificar esa linealidad; para ello es necesario calcular
 la pendiente (m)
 la ordenada al origen (b)
 el coeficiente de determinación (r2 )
 Como criterio de aceptación de la linealidad a partir de la curva de
calibración (conjunto de concentraciones que describen el intervalo
en el cual se deberá cuantificar el compuesto por analizar) se
considera r2 >0.98
 Sensibilidad. La sensibilidad de método mide su capacidad
para discriminar entre pequeñas diferencias en la concentración
del analito. Dos factores limitan la sensibilidad. la pendiente de
la curva de calibración y la precisión del sistema de medida.

 Para dos métodos que tengan igual precisión, el que tenga la

mayor pendiente será el más sensible; es importante señalar
que para determinar la pendiente de la curva se considera
únicamente el intervalo lineal de la misma puesto que cuando la
curva pierde su linealidad la pendiente también es diferente. Por
otra parte, es importante mencionar que, al igual que la
linealidad, también la pendiente de la curva puede ser distinta
para matrices diferentes; esto significa que la pendiente de la
curva depende de todas las condiciones de medida y que éstas
deben ser iguales (o al menos similares) para los estándares y
la muestra problema
 Límite de detección (LD). En general este término se define
como la mínima concentración del analito detectable por el
método. Su determinación es importante (particularmente
en análisis de trazas) pero los problemas asociados con ella
son diversos; estos problemas han sido estadísticamente
estudiados y varios criterios de decisión han sido
propuestos. Aunque ninguno es universal uno de los más
aceptables es el de la concentración que correspondería a
la medida del “promedio del blanco+ 3s”.
 Los términos "límite de detección" y "sensibilidad" no
son exactamente sinónimos. La sensibilidad de una
técnica se define correctamente como la pendiente del
calibrado, y si éste es lineal, puede medirse en cualquier
punto de él. Sin embargo, el límite de detección de un
método se calcula con ayuda de la zona del calibrado
próximo al origen, y para ello se utiliza, tanto la
pendiente, como la ordenada en el origen.
 Límite de cuantificación (LC) Llamado también límite de
determinación, se define como la más pequeña
concentración del analito que puede ser determinada
con un nivel de exactitud y precisión aceptables.
Dependiendo del convenio utilizado se considera como
la concentración de analito que corresponde al valor del
promedio del blanco mas 5, 6 o 10 veces la desviación
estándar del mismo (esta última es la más común).
 Intervalo analítico. Está definido como el intervalo de
concentración en que el analito puede ser determinado
mediante la utilización de la curva de calibración; se
considera que es el comprendido entre el límite de
cuantificación hasta la concentración en la cual se pierde
la linealidad de la curva
 A título de ejemplo, a continuación se muestra la curva
de calibración obtenida al representar la absorción de
radiación (absorbancia ,A) de disoluciones estándar de
albúmina sérica. A partir de esta curva se explicarán los
parámetros antes mencionados. Se conoce que el
promedio de 10 mediciones del blanco fue 0.015 con
una desviación estándar de 0.002
 En esta curva se observa linealidad hasta valores de
absorbancia iguales a 0.4; este valor corresponde a una
concentración igual a 0,0207 mol//L El coeficiente de
correlación de la curva considerando únicamente estos
cuatro puntos es igual a 0,9987 mientras que si se
consideraran todos ellos el coeficiente de correlación
sería igual a 0,9382.
Fin!!!!!!!!!