Roger Mario John Wong Practica 7: Fluoremetria 2-06-08

Ingenieria ambiental

INTRODUCCION

La fluorescencia de Stokes es la emisión de un fotón de longitud de onda

mayor (menor frecuencia y energía) por una molécula que ha absorbido un
fotón de longitud de onda menor. Ambos absorción y emisión de fotones son
características únicas de la estructura de cada molécula en particular, es decir
para cada molécula se tiene un par único de conjuntos de longitudes de onda
absorbidas (espectro de absorción, que en el caso de las moléculas
fluorescentes se llama espectro de excitación) y de longitudes de onda
emitidas. La luz emitida es siempre de una longitud de onda mayor que la
absorbida, debido a una pérdida parcial de la energía de excitación del electrón
previa a la emisión.
Algunas ventajas de este método analítico en comparación a otros
métodos analíticos son: la sensibilidad y especificidad de las mediciones, tiene
amplio rango de concentraciones a las cuales se peudes hacer la medicion, la
velocidad y simplicidad del método y el bajo costo.
Existen dos tipos de instrumentos para medir fluorescencia: el
fluorómetro y el espectrofluorómetro. El fluorómetro trabaja con filtros, mide la
fluorescencia excitando las moléculas a una longitud de onda (seleccionada
con el filtro de excitación) y midiendo la luz emitida por la muestra a una
longitud de onda mayor (también seleccionada con un filtro). El
espectrofluorómetro utiliza un monocromador para la luz de excitación y puede
usar otro monocromador o filtros para medir la luz de emisión. Para esta
practica se usara una fluorometro.

MATERIALES Y METODOS

“Se siguió el protocolo establecido en la Práctica”

RESULTADOS

Tabla 1 Fluorescencia estándares de 4-metilumbeliferona

Tubo Concentración (μM) F
0 1 1000
1 0.5 525
2 0.25 266
3 0.125 139
4 0.0625 70
5 0.0313 32.8
6 0.0156 19.3
7 0.00781 9.4
8 0.00391 5.4
9 0.00195 3.2
10 0.000976 1.1
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Tabla 2 Log-Fluorescencia y log-concentración de estándares de 4-

metilumbeliferona
Tubo Concentración (μM) F
0 0 3
1 -0.301 2.72
2 -0.60 2.42
3 0.9 2.14
4 -1.2 1.85
5 -1.51 1.52
6 -1.81 1.29
7 -2.11 0.97
8 -2.41 0.74
9 -2.71 0.052
10 -3.01 0.05

DISCUSSION

Al observar las graficas de los estanderes se puede ver que al aplicar los
resultados obtenidos directamente de las mediciones del fluoró metro en el
plano cartesiano con escala logarítmica se obtiene una recta. Si se aplica los
logaritmos de los resultados también se obtiene una recta. Entonces dentro del
rango de concentraciones que se usó la relación entre la fluorescencia y la
concentración es lineal.

BIBLIOGRAFIA
Guia de analisis instrumental, Dr. Rubén Salcedo Hernández,Dra. Ma. Guadalupe
Ortiz Flores, Dr. José Eleazar Barboza Corona