Tincin de Van Gieson

La Tincin de Van Gieson corresponde a la mezcla de cido pcrico-fucsina cida y hematoxilina frrica de Weigert. Es el mtodo ms simple mediante tincin para diferenciar colgeno de otros tejidos conectivos. Esta tcnica fue desarrollada por el neuropsiquiatra y patlogo Ira Van Gieson.

Corte histolgico. Bronquio secundario de avestruz. Tincin Van Gieson

[editar] Tcnica de tincin

Los preparados histolgicos son sumergidos en agua por unos 5 minutos. Se sumergen 5 minutos en hematoxilina frrica de Weigert. Se lavan en agua corriente (hasta que no suelte mas colorante). Se lavan en agua destilada. Se sumerge en acido pcrico-fucsina cida por 5 minutos. se sumerge en alcohol al 95 por 10 minutos Se sumerge en alcohol al 100 por 5 minutos Se sumerge dos veces diferentes frascos de xilol 5 minutos en cada ocasin.

[editar] Resultados

Ncleos celulares: Color marrn a negro. Colgeno (tejido conectivo fibroso): Color rosa o rojo. Msculo y Citoplasma: Color amarillo.

Laboratorios

Tcnicas Histolgicas Bsicas - Inmunohistoqumica - Cursos - Normas de Seguridad

Laboratorio de Tcnicas Histolgicas Bsicas: Renovado hace unos pocos aos, este laboratorio es el sitio de realizacin de los preparados histolgicos que se emplean como material de apoyo docente en la enseanza de la Histologa en pregrado y post-grado. Permanentemente se elaboran preparados de tejidos y rganos con la finalidad de mantener actualizado y completo el laminario que sirve para estudiar los contenidos y cumplir con los objetivos especficos del Programa Prctico de la asignatura para los estudiantes del primer ao de Medicina y de las diversas especialidades clnicas que asisten a nuestra ctedra. De igual manera, nuestro Laboratorio de Tcnicas Histolgicas Bsicas sirve para prestar asesora tcnica, en cuanto a procesamiento de tejidos, a diversas dependencias de la Universidad de Los Andes. Las muestras procesadas provienen del Departamento de Anatoma Patolgica del Instituto Autnomo Hospital Universitario de Los Andes y del Bioterio, entre otros.

- Lista de Preparados Histolgicos: Se emplean tcnicas de coloracin de rutina tales como Hematoxilina-Eosina, Tricrmicos, Impregnaciones argnticas, Tcnicas Histoqumicas (cido Perydico de Schiff, Sudn, entre otros).

Amgdala Palatina Ano Aorta Aparato de Golgi (Ganglio Raqudeo) Aparato de Golgi (Intestino Delgado) Apndice cecal Arteria Elstica Astrogla (fibrosa y protoplsmica) Bazo Bola de Edema Bulbo y Corteza Cerebral Cardias Cartlago Elstico Cartlago Fibroso Cartlago nasal Clulas Planas Cerebelo Corazn Cordn Umbilical Conducto Heptico Crestas ampulares Diente Duodeno Enca Epfisis Epipln Esfago Estomago Faringe Fosas Nasales Fundus Ganglio Linftico Ganglio Raqudeo Ganglio Simptico Glndula Mamaria Glndula Partida Glndula Suprarrenal Glndula Paratiroides Glndula Tiroides Hgado Hipfisis Histiocitos Hueso Fresco Hueso Seco Intestino ( Celulas caliciformes ) Intestino (Colon ) Intestino Delgado (Duodeno) Intestino Delgado (Ileon) Intestino Degado. (Yeyuno) Labio Lengua Lipofuscina Mecencfalo Mdula Espinal Mdula sea Meiosis

Microgla Mitocondrias Mitosis Mucoso (tejido conectivo cordn umbilical) Msculo Cardiaco Msculo Estriado esqueltico Msculo liso Nervio de sapo (no Disociado) Nervio de sapo (Disociado) Nervio Perifrico Odo Ojo Ojo (parte posterior) Osificacion Endocondral Osificacin Endoconjuntiva Ovario Paladar Blando Paladar Duro Pncreas Paquete Vasculo- Nervioso Partida Prpado Pasaje Anal Pasaje Cardial Pene Pasaje Pilrico Piel Axila Piel Fina Piel Tejido Conectivo Denso Piel Feto Piel Gruesa Piel Gruesa Placenta Plexos Coroideos Prstata Pulmn Recto Rin Tejido Adiposo Tejido Conectivo Elstico Tejido Conectivo Fibroso Tejido Conectivo Mesenquimtico Tendn Tendn y Cartlago Fibroso Testculo Testculo y Epiddimo Timo Joven Timo Involucionado Traquea Trompa de Falopio Ua Uretra Urter tero Vejiga Retrada Vejiga Distendida

Mesenquimtico (tejido conectivo)

Vescula Seminal

Procedimientos de Rutina Fijacin Fijadores Qumicos Simples: Son sustancias qumicas de estructura no compleja, que se mezclan con agua destilada para lograr la proporcin adecuada. Ejemplos: Ac. Actico Alcohol etlico C2H5OH Formaldehido H-CHO Ac. Pcrico Ac. Crmico Dicromato de potasio K2Cr2O7 Bicloruro de Mercurio HgCl2 Tetraxido de osmio OsO4 Glutaraldehido Permanganato de potasio KMnO4 Compuestos o Mezclas fijadoras: Se originan por la combinacin de varios de los fijadores qumicos simples, y tienen usos particulares para los cuales fueron creados. Ejemplos: Formol tamponado Formol calcio Lquido de Zenker Lquido de Bouin Lquido de Helly Fijador de Carnoy Lquido de Flemming Zenker-formalina

Inclusin En parafina u otro medio de inclusin Es el procedimiento mas utilizado que se realiza para poder cortar los tejidos en secciones suficientemente delgadas que permitan el paso de la luz, de modo que los detalles finos puedan ser observados al microscopio. Aunque los tejidos adquieren cierta consistencia al ser sometidos a la fijacin, por lo general continan siendo demasiado blandos para poder cortarlos en lminas delgadas (para Microscopa ptica) o ultrafinas (para microscopia

electrnica de transmisin); por lo tanto es necesario que la porcin de tejido a estudiar sea infiltrada y englobada por una sustancia lquida o semilquida, de modo que una vez solidificada adquiera la suficiente dureza para formar bloques que puedan cortarse.

Corte Es el proceso que tiene como finalidad la obtencin de cortes muy delgados del tejido o espcimen que se encuentra incluido o no. Este se realiza por medio de un instrumento llamado micrtomo. Existen diversos tipos de micrtomos, siendo algunos adaptados para un trabajo especial. Generalmente se consideran cinco clases de micrtomos: Rotacin, Micrtomos de rotacin, deslizamiento, balanceo, congelacin, vibratomo y para cortes ultrafinos.

Coloracin Hematoxilina-Eosina Protocolo. Preparacin de los colorantes Hematoxilina La hematoxilina es un colorante natural y de naturaleza qumica bsica que se extrae de la corteza del rbol Hematoxylon campechianum, oriundo de Centroamrica. En el comercio se encuentra en forma de cristales rosados o amarillentos solubles en agua o en alcohol. Tradicionalmente se ha mantenido que la hematoxilina en su forma natural no es un colorante, para ser empleada como tal, ha de ser oxidada previamente a hematena. Tras el proceso de oxidacin, normalmente se debe incrementar su capacidad tintorial agregndole determinados grupos auxocromos que, adems, le confieren un carcter fuertemente bsico y son los responsables de su especificidad por los ncleos celulares. Como auxocromos se emplean sales metlicas bivalentes o trivalentes, por lo general en forma de alumbres de tal forma que se forman diversas lacas de hematoxilina de carcter catinico y tonalidad azulada o negruzca, dependiendo de la sal metlica utilizada. La laca de hematoxilina ms utilizada es la producida a partir del alumbre alumnicopotsico, conocida tambin en forma genrica como hemalumbre. Reactivos: Alumbre de Amonio o de Potasio (mordiente) 50 g Cristales de hematoxilina 1 g Yodato de Sodio 0,2 g cido ctrico 1 g Hidrato de cloral (bactericida) 50 g Agua destilada 1000 mL Procedimiento: - Calentar la mitad del volumen de agua destilada a una temperatura por debajo del punto de ebullicin.

- Pesar el alumbre de amonio o de potasio y agregarlo al agua que se est calentando hasta que se disuelva. - Pesar los cristales de hematoxilina y agregarlos hasta que se disuelvan (aproximadamente en 20 minutos). - Agregar el resto del agua destilada. - Pesar y agregar el cido ctrico, dejar reposar por 10 minutos. - Pesar y agregar el yodato de sodio, dejar reposar por 10 minutos. - Pesar y agregar el hidrato de cloral, dejar reposar por 10 minutos. - Envasar en frasco mbar y almacenar en la oscuridad. Mientras ms tiempo permanezca en depsito, el proceso de maduracin del colorante ser mejor y se obtendrn mejores resultados. Eosina La eosina es un colorante xantnico artificial y de naturaleza qumica cida, es un derivado hidroxiantnico halogenado con tres grupos arilo. Las diferencias de coloracin que existen entre ellos estn motivadas por el tipo y nmero de tomos de halgeno que contienen (eosina Y: cuatro tomos de bromo y la eosina B: dos tomos de bromo). En general, los colorantes xantnicos tienen autofluorescencia espontnea y colorean los tejidos de diversas tonalidades entre rojo y rosado. Por lo comn, se difunden fcilmente en las estructuras hsticas, sobre todo en las ms compactas, a las cuales tien debido a que, por su carcter cido, son atrados fuertemente hacia los radicales bsicos de la histidina, lisina y arginina presentes en las protenas citoplasmticas y tisulares. Para la preparacin de la eosina (solucin madre), el procedimiento es el siguiente: Solucin A Reactivos Cantidad Eosina amarillenta (Y) 3 g Alcohol etlico o isoproplico 300 mL Agua destilada 200 mL Solucin B Reactivo Cantidad Biebrich escarlata 1 g Agua destilada 100 mL Procedimiento: - Preparar las 2 soluciones por separado. Las dos soluciones constituyen la solucin madre. - Tomar 1 parte de la solucin madre y 3 partes de alcohol al 70 %. - Agregar 3 6 gotas de cido actico. Mtodo de la Hematoxilina-Eosina Existen mltiples variantes, segn se emplee un tipo u otro de eosina y de hematoxilina (generalmente se emplea la de Harris, aunque tambin se emplean la de Mayer y la de Ehrlich). Por lo comn, este mtodo siempre consta de una etapa inicial, en la que se colorean los ncleos celulares con la hematoxilina, y una fase ulterior de contraste citoplasmtico y de los componentes extracelulares con la eosina.

Procedimiento Tcnico: Soluciones: - Xilol - Alcohol isoproplico al 95 % - Agua corriente - Hematoxilina - Eosina - Xilol/Alcohol Protocolo: - Despus del desparafinaje, 3 baos en alcohol isoproplico al 95 % (3 recipientes distintos), el ltimo bao debe ser el ms prolongado (5 minutos). - Bao en agua corriente durante 2-3 minutos, agitar suavemente. - Bao en hematoxilina por 5 minutos - Bao en agua corriente por 5 minutos. - Bao en eosina, sumergir la lmina porta-objetos y sacarla inmediatamente. - 3 baos rpidos en alcohol isoproplico al 95 %. - 1 bao rpido en la solucin de xilol/alcohol. - 2 baos rpidos en xilol.

Coloracin Hematoxilina-Eosina Resultados: Ncleos y material basfilo en tonos de morado. Citoplasma en tonos de rosado Glndula salival Sublingual, objetivo 40X

Montaje Cuando se extrae el porta-objetos del ltimo bao con xilol (bao de aclaramiento), se coloca una gota de blsamo de Canad, de Martex o de Merckoglass, sobre un extremo del corte y se deja caer suavemente la laminilla cubre-objetos, limpiando luego cualquier exceso, al endurecer el medio de montaje, la lmina porta-objetos protegida con la laminilla cubre-objetos, se puede observar al microscopio.

Histoqumica cido Peridico de Schiff (PAS) Es de amplia aplicacin en el diagnstico histopatolgico rutinario. Puede colorear compuestos como los hidratos de carbono o sustancias relacionadas con ellos. Compuestos PAS positivos: - Polisacridos simples - Mucopolisacridos neutros - Mucoprotenas - Glucoprotenas del suero, membrana basal y fibras reticulares - Glucolpidos - Pigmentos ceroides y ciertas lipofuscinas Coloraciones de contraste: - Hematoxilina - Amarillo de Mars - Azul de Toluidina - Picrocarmin de ndigo - Verde de metilo

cido Peridico de Schiff (PAS) Hematoxilina Resultados: - Ncleos: azul -Clulas caliciformes y Chapa estriada en fucsia Intestino delgado, objetivo 40X

Tricrmicos Las coloraciones tricrmicas, son tinciones especiales que permiten visualizar claramente las fibras de colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia; en menor intensidadse tien las fibras reticulares. Se emplean tres colorantes para diferenciar los ncleos, citoplasma y las fibras de colgeno. Tipos de mtodos tricrmicos: - Mallory - Masson - Van Gieson - Gomori

Tricrmico de Van Gieson. Resultados: Clulas: - Ncleos: negro - azul - Citoplasma: amarillo Colgeno: rojo intenso Piel humana, objetivo 40X

Tincin de van Gieson (VG) Diseada para diferenciar entre el msculo y el tejido conectivo. Este es un ejemplo del modelo 'tinte grande/tinte pequeo'. El tinte pequeo es cido pcrico con un peso molecular de 229 mientras el tinte grande es fucsina cida, de peso molecular 585. Ambos pigmentos se usan en el mismo bao tincional por el tiempo suficiente para que todos los elementos sean coloreados hasta la saturacin. Sin embargo, el tinte de alto peso molecular tiene dificultades para penetrar algunas estructuras y se deposita mas o menos sobre la superficie, y por lo tanto se lava fcilmente, mientras el cido pcrico penetra en el tejido y es mantenido por puentes de hidrgeno. El mecanismo tincional es una combinacin de propiedades fsicas del tejido y de uniones qumicas. Cualquier cido de alto peso molecular puede trabajar con el cido pcrico. La contratincin nuclear es usualmente hematoxilina de Weigert. Estructura Color

Ncleos Msculo

Negro o gris Amarillo

Tejido conectivo Rojo