FIJADORES COMPUESTOS: En su composicin intervienen un nmero variable de fijadores simples racionalmente elegidos con el fin de complementar la accin de cada

uno de ellos o atenuar sus defectos. a) Lquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-actica. b) Lquido de Zenker, mezcla bicromato-sublimado-actica.
Trata de combinar los efectos favorables del sublimado y del dicromato potsico. En la prctica habitual ha sido sustituido por B5. Su empleo ha quedado prcticamente restringido al proceso de refinacin-decalcificacin a que son sometidas las biopsias de mdula sea cuando se realiza una fijacin inicial con B5.
Se la puede emplear para la preservacin de componentes ricos en sangre y para la realizacin de mtodos tricrmicos y coloracin de miofilamentos.

Preparacin:

SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml.

Cloruro de mercurio 12.5 gr Dicromato de potasio 6.3 gr Sulfato de sodio 2.5 gr Agua destilada 250 ml

C. ACTICO GLACIAL.. 5.0 ml. El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca progresivamente, por lo que debe recomponerse antes de su uso. El tiempo de fijacin puede ser mas prolongada que con la solucin de b5 porque el cido actico que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobreasar las 48 horas. Tras la fijacin el material debe ser tratado con sulfato sdico al 5% durante 1-2 horas.

c) Lquido de Helly, mezcla Zenker-formol. d) Lquido de Bouin, mezcla picro-formos-actica.

Solucin muy usada como alternativo a la formalina cuando queremos fijar ciertos Tejidos como piel rganos endocrinos, testculos y tejido embrionario en general. Sin embargo no est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los cuales provoca una severa distorsin. Preparacin: - SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO (C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)..750.0 ml.

FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml. C. ACTICO GLACIAL.50.0 ml. PH. FINAL2.2 TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas

e) Lquido de Bouin-Hollander,
es una variante del liquido de Bouin especialmente indicado para la fijacin de los cilindros de biopsia de mdula sea cuando no es posible controlar el tiempo de fijacin de la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso conservar las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento. Preparacin:

ACETATO NEUTRO DE COBRE.2.5 gr. C. PCRICO..4.0 gr. FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml. C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml. AGUA DESTILADA..100.0 ml. Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se aade el cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial. Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin oscila entre 48-72 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin

f) Liquido de Duboscq-Brasil, o Bouin alcohlico.

Es una alternativa de lquido de Bouin cuando la pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una velocidad de penetracin mucho mas elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias hidrosolubles como el glucgeno ya que evita su disolucin.

Preparacin:

ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml. C. PCRICO0.5 gr. FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml. C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.

Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno a 5 milmetros es de 2 a 3 horas.

g) Liquido de Gendre,
Es una variacin que est especialmente diseada para la fijacin del glucgeno y pigmentos derivados de la hemoglobina. Preparacin:

SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml. FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml. C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml. El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe realizarse sucesivamente 2 lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100

h) Liquido de Mller,
Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los fijadores de Orth y de Zenker. Preparacin:

DICROMATO POTASICO2.5gr. SULFATO SDICO..1.0 gr. AGUA DESTILADA 100.0 ml. Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en agua corriente durante unas horas.

g) Liquido de Orth,
Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de tejido nervios. Preparacin:

Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller. Solucin de trabajo: en el momento de su uso se mezclan: SOLUCIN STOCK..90.0 ml.

FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml. El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los tejidos han de ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al 70%

g) Liquido de Carnoy,
Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para los hidratos de carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin fijadora es extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo produce una excesiva retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos as como una pobre conservacin estructural del ADN.
Frmula que penetra muy rpidamente y tiene aplicacin en citologa para la coloracin de cidos nucleicos. Est compuesta por:

ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml. CLOROFORMO.30.0 ml. C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml. El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar demasiado la deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol en la composicin de lquido fijador, que adems provoca menor retraccin tisular, y para conservar la pieza se deposita en alcohol etlico absoluto.

g) Liquido de Clarke,
Se utiliza en citologa exfoliativa. Provoca buena fijacin de cidos nucleicos y es muy empleada para la impregnacin argntica de NOR. Si se desea colorear el ARN con la tcnica de Brachet (verde de metil-pironina) se debe agregar 30 ml de cloroformo por cada 70 ml de solucin stock. preparacin: Etanol absoluto 60 ml Acido actico 20 ml

Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son en esencia casi idnticas. La denominacin B5 corresponde en realidad a una modificacin de la de Zenker. La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de hecho la fijacin en una mezcla que contenga sublimado es hoy da prcticamente imprescindible para el diagnstico morfolgico en las patologas del sistema linfoide y hematopoytico. Es debido a la gran importancia que se da a la observacin de finos detalles nucleares como es la presencia o no de hendiduras o repliegues nucleares y del nucleolo para catalogar un tumor maligno de ganglios

linfticos, o de mdula sea (leucemias) como de alto o bajo grado de malignidad y por tanto recomendar la teraputica ms oportuna. Adems estas soluciones B5 zenker formol son los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y para fibrina. Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular.

Solucin de 35: *Solucin stock de B5: Esta mezcla es estable durante bastante tiempo pero concentrado en frasco opaco y oscuridad.

CLORURO MERCRICO... 12.0 gr. ACETATO SDICO....2.5 gr. AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml. *Solucin de trabajo de B5: Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo reduce el sublimado a cloruro mercurioso y mercurio metlico que se depositan en forma de un precipitado blanco grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de endurecimiento que posee el sublimado, el tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems el espesor mximo de las muestras no debe superar los 4 mm debido al escaso poder de penetracin de la mezcla fijadora. Debido a la aparicin de precipitados mercricos sobre los tejidos las secciones histolgicas antes de ser coloreados. Han de ser sometidas a un tratamiento especfico mediante soluciones que eliminan estos depsitos. Tras la fijacin los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol etlico al 70-80% - SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml. - FORMALINA CONCENTRADA .2.0 ml.

Solucin de Zenker-Formol Eliminacin del pigmento mercrico: *Solucin stock de Zenker: - CLORURO MERCRICO5gr. - DICROMATO POTSICO...2.5 gr. - SULFATO SDICO 1 gr. - AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml. * Solucin de trabajo: en el momento de su uso mezclamos: - SOLUCIN STOCK DE ZENKER..95 ml. - FORMALINA CONCENTRADA...5 ml. Tanto para la solucin almacenada como para la de trabajo deben guardarse las mismas precauciones que para la de B5

Eliminacin del pigmento mercrico o deszenkerizacin: Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con soluciones yodadas y utilizamos: *Solucin de LUGOL: - YODURO POTSICO..2gr.

- CRISTALES DE YODO ..1gr. - ALCOHOL ETLICO 70-80%................................................100 ml. *Solucin de tiosulfato sdico: - TIOSULFATO SDICO..5gr. - AGUA DESTILADA...100ml. Despus de la desparafinacin hay que tratar los cortes durante diez minutos con la solucin yodada a continuacin lavar bien en agua destilada despus decolorar durante dos minutos en la solucin en agua corriente durante 10 minutos antes de realizar la coloracin.

Aquellas que no contienen formol: