Manual de Quimica Clinica

EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO HOSPITAL SAN RAFAEL YOLOMB - ANTIOQUIA
MANUAL DE QUIMICA CLINICA
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ELABORADO POR: CAROLINA HOYOS VELASQUEZ BACTERIOLOGA COOPERATIVA COOMAN
LABORATORIO CLINICO EMPRESA SOCIAL DEL ERSTADO HOSPITAL SAN RAFAEL DE YOLOMBO YOLOMBO 2008

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ACIDO URICO
1. Metodo Anlisis enzimtico colorimtrico por cido urico con factor aclarante de lpidos (LCF) (PAP) 2. Fundamento Determinacin del Acido Urico por la reaccin con la uricasa. El perxido de hidrgeno formado reacciona por la accin cataltica de la peroxidasa con cido 3,5-dicloro-2-hydroxybenzenesulfnico (DCHBS) y 4-aminofenazona (PAP) para producir un complejo rojo-violeta de quinonemina como indicador. 3. Muestras Suero o plasma con heparina o EDTA, orina. Diluir la orina 1 + 10 con agua destilada. 4. Condiciones del paciente Para determinacin en suero. Antes: Explicar el procedimiento al paciente. Llevar estrictamente los siguientes puntos. Suspender la medicacin de drogas como: alopurinol, salicilatos, fenilbutazona, calmantes o analgsicos, cido ascrbico (vitamina C), buscapina, diurticos de la trazida, tioles libres, purinas metiladas, cido homogentstico y altas cantidades de glucosa. Dos das antes del examen evitar ejercicios violentos.

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24 horas antes del examen, el paciente debe abstenerse de ingerir carnes rojas, mariscos y frijoles ya que contienen altos contenidos de purina. 48 horas antes de la venoclisis suspender el consumo de alcohol. Durante: Recoger 5 - 7 ml de sangre venosa en un tubo de tapn rojo. Retomar nuevamente la ingesta de cualquier medicamento que pueda alterar los resultados. Despus: Aplicar presin en el sitio de puncin. Para determinacin en Orina: Orina de 24 horas, teniendo en cuenta las indicaciones anteriores. Nota Las muestras lipmicas generalmente generan turbidez en la mezcla del reactivo con la muestra, lo que lleva a resultados elevados falsos. El LCF aclara completamente la turbidez causada por muestras lipmicas. Los valores en sangre total varan con la proporcin de clulas en la sangre debido a que las clulas tambin contienen muchas ms sustancias que interfieren en la reaccin. 5. Condicin de la muestra La sangre debe recogerse en tubos limpios, libres de metales pesados, ya que estos y los cianuros son inhibidores enzimticos. La prueba no se ve influenciada por valores hasta 100mg/dl de hemoglobina o por valores de bilirrubina hasta 20mg/dl. La estabilidad de la muestra es: Temperatura ambiente 3 das Refrigerado 2 - 8C por 5 das. Congelado 20C, seis meses. En orina de 24 horas con preservativos y a temperatura ambiente 2 das. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: 520nm, Hg 546 nm. Paso de luz: 1 cm Temperatura: 20 - 25 C 37C Medir: frente a blanco de reactivos

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7. Tecnica Pipetear: Blanco Estndar Muestra Blanco ---------Muestra ------25 Estndar ------25 Solucin Reactiva 1000 1000 1000 Mezclar, incubar a 20-25C durante 20-50 minutos, leer las extinciones frente a blanco de reactivos. Lmite de dilucin 15 mg/dl, con concentraciones superiores diluir la muestra 1 + 1 con solucin de cloruro sdico al 0.9% y repetir la determinacin, el resultado multiplicarlo por 2. 8. Valores de referencia Hombres: 3.7 - 7.0 mg/dl. Mujeres: 2.4 - 5.7 mg/dl. 9. Interferentes de la prueba El cido ascrbico en concentraciones teraputicas no interfiere en la prueba, pero en cantidades excesivas puede dar resultados elevados. Sustancias qumicas con efecto antiuricosrico. Acido etacrnico, furosemida, diurticos de la benzotiacida. Sustancias que inhiben competitivamente la secrecin tubular del urato. El p- aminohipurato, lactato, acetoacetato y B. hidroxibutrico. Por otra parte, ciertos frmacos como los salicilatos, fenilbutazona entre otros, inhiben la secrecin de cido rico a dosis bajas, pero causan un efecto urosrico intenso a dosis altas, debido a que estos frmacos pueden inhibir reabsorcin tubular a niveles altos. El exceso del lactato tambin se asocia con la hiperuricemia en los casos de ejercicio fuerte y toxemia del embarazo.
Notas El etanol altera el metabolismo del cido rico aumentando la produccin de urato y por la supresin de la excrecin renal de cido rico. Esta ltima es el resultado

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del exceso de lactato producido por la oxidacin del etanol a acetaldehdo, que inhibe competitivamente la secrecin tubular renal del urato. 10. Control de calidad Cada vez que se determine cido rico correr con las muestras un estndar acuoso y dos suero control liofilizado. Asegurarse que la lectura del blanco est dentro del rango permitido. Almacenamiento adecuado de los cartuchos reactivos. Evaluacin permanente de resultados. Adecuada extraccin y manipulacin de muestras lmites aceptables en los controles. Correlacion clinico patologica Numerosas enfermedades, alteraciones fisiolgicas, cambios bioqumicos e incluso factores sociales y de comportamiento se asocian a modificaciones de la concentracin de cido rico en el plasma. El aumento del cido rico es mucho ms frecuente y clnicamente ms significativo que su disminucin. Entre las etiologas ms comunes de hiperuricemia se cuentan el fallo renal, la cetocidosis, el exceso de lactato y el uso de diurticos. La hiperuricemia tiene tambin una relacin positiva con la hiperlipidemia, obesidad, aterosclerosis, diabetes mellitus, hipertensin. En los pacientes hipertensos la reduccin del flujo sanguneo renal y el aumento de la resistencia vascular pueden ser responsables de la disminucin de la fraccin de filtracin del urato. La ingestin de alimentos ricos en purinas, por ejemplo carnes, vsceras y levaduras producen una hiperuricemia leve. Es de mucha importancia la determinacin de cido rico, pues los valores altos son diagnstico de gota. La gota es un trastorno del metabolismo de purinas o de la excrecin renal de cido rico caracterizado por: Hiperuricemia. Precipitacin de urato monosdico en forma de depsitos (tofos) por todo el cuerpo, excepto por el SNC, aunque presenta predilecciones por articulaciones, tejido subcutneo y bolsas sinoviales. Ataques clnicos recidivantes de artritis. Nefropata y a menudo nefrolitiasis. Las reservas de cido rico pueden superar los 30 g.

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Se han identificado dos defectos enzimticos ligados al cromosoma sexual como etiologa de la gota primaria: Una deficiencia de (H 6 PRT) hipoxantin guanin - fosforrobosil transferasa. Una hiperactividad de fosforribosil - fosfato La presencia de amonio en cualquiera de los reactivos, anticoagulantes o agua destilada aumentan los valores.
ALBUMINA
1. Metodo Prueba fotometrica colorimetrica para Albumina Metodo BCG 2. Fundamento. El verde de bromocresol forma con la albumina en buffer de citrata un complejo coloreado. La absorbancia de este complejo es directamente proporcional a la concentracion de albumina en la muestra. 3. Muestras Suero plasma con EDTA heparina. Estable 1 mes a 2-8 grados y 1 semana entre 15 y 25 grados 4. Condiciones del paciente El paciente debe tener un ayuno de por lo menos 8 horas y durante este perido no hacer esfuerzoz corporales intensos, ya que esto puede aumentar la concentracin de protenas. El uso del torniquete no ha de execeder los 30 segundos, su prolongacin tiende a aumentar los niveles de protenas en la muestra de suero. 5. Condiciones de la muestra No usar plasma heparinizado porque se puede alterar el valor. Patron de albmina y el RGT son estables hasta la fecha de vencimiento cuando se almacenan de 2 a 25 grados centigrados, despues de abierto debe evitarse la contaminacin.

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6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: Hg 546 nm, 578 nm 1 cm 20 a 25 frente a blanco de reactivo por serie.
7. Tecnica Pipetear en tubos de ensayo: Patrn albmina Muestra Reactivo blanco ---------1,0 ml patrn 10 ul ---1,0 ml muestra ---10 ul 1,0 ml
Mezclar bien y dejar los tubos durante 5 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia del patrn y de la muestra frente al blanco de reactivo. El color es estable durante al menos 30 minutos. ABS muestra ____________ X 4 g/dl albmina ABS patrn 8. Valores normales 3.8 5.1 g/dl en hombres y mujeres.
9. Interferencias La prueba no es influenciada por valores de Bilirrubina hasta 20mg/d. Hemoglobina (1 g/L). La reaccin de la albmina con el verde de bromocresol es inmediata. Otras proteinas reaccionan lentamente, por lo que es conveniente no demorar la lectura. 10. Correlacion clinicopatologica. Hay 3 factores que pueden disminuir su concentracin:

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1) Prdidas cuantiosas o frecuentes, (hemorragias, albminuria persistente, paracentesis, catabolismo excesivo). 2) Por sntesis defectuosa como ocurre en la mayor parte de las hepatopatas. 3) Por carencia de materia prima como en la hipoalimentacion. Otras: Trastornos pulmonares. Anemia persistente Neoplasia nefrosis lipoidea. Edemas carenciales. La manifestacion clnica mas llamativa es el edema. MICROALBUMINURIA
1. Metodo Prueba de turbidimetra para la cuantificacin de microalbmina en orina humana. 2. Fundamento Las partculas de ltex con anticuerpos anti-albmina humana, son aglutinadas por uALB presente en la muestra del paciente. El proceso de aglutinacin provoca un cambio de absorbancia proporcional a la concentracin de uALB de la muestra, y por comparacin conocida se puede determinar el contenido de uALB en la muestra ensayada. 3. Muestra Orina fresca. 4. Condiciones de la muestra La orina debe ser lo ms fresca posible, y se debe ajustar su pH a 7.0 con NaOH/HCl 1 mol/L. Es estable por 7 das cuando se le aade azida sdica para prevenir posibles contaminaciones. 5. Metodo de determinacion Longitud de onda: 540 nm (530-550 nm) Paso de luz: 1 cm Temperatura: 37C Medicin: frente a agua destilada

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6. Tecnica Reactivo de trabajo muestra 1000 ul 7 ul
Mezclar y leer la absorbancia frente a agua destilada y leer a los dor minutos despus y se multiplica el valor por la concentracin del calibrador.
7. Valores de referencia Hasta 15 mg/L 8. Interferencias No interfieren valores de Glucosa 2 g/L, hemoglobina 10g/L, creatinina 3 g/L. La urea > de 1g/L y bilirrubina > 10mg/dl interfieren. Correlacion diagnostica Se define la microalbmina como la tasa de excresin de albmina en orina entre 20 y 200 ug/min, concentracin que, siendo superior al valor normal, esta aun por debajo de la concentracin considerada como una proteinuria convencional. La microalbuminuria es un marcador del riesgo de la nefropata diabtica, as como de alteraciones cardiovasculares en pacientes que sufren diabetes mellitus insulinodependientes o bien insulina no-dependiente.

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BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA.
Generalidades La bilis se forma en el hgado y presenta muchos componentes, incluyendo sales biliares, fosfolpidos, colesterol, bicarbonato, agua y bilirrubina. El metabolismo de la bilirrubina proviene en un 80% de la descomposicin de los hemates envejecidos en el sistema retculo endotelial (bazo, hgado y medula sea). Un 5% de los citocromos citoplasmticos y mitocondriales hepticos; y el otro porcentaje de los eritrocitos defectuosos destruidos en la medula sea antes de ser liberados. La hemoglobina es liberada desde los hemates y descompuesta en molculas de Heme y globina. El heme es catabolizado despus para formar biliverdina que se transforma en bilirrubina. Hem hem oxigenasa Biliverdina Biliverdina reductasa Bilirrubina.
Esta forma de bilirrubina se denomina no conjugada (indirecta) que es transportada en el plasma en forma libre unida a la albmina, hasta las clulas hepticas en donde es conjugada con el cido glucoronico; conjugacin catalizada por la enzima Bilirrubin - glucoronil - transferasa. La bilirrubina conjugada se excreta despus por las clulas hepticas hacia los canalicemos intrahepticos, que acaban conducindola a los conductos hepticos, el conducto biliar comn y el intestino. El rin no excreta bilirrubina no conjugada puesto que es insoluble en agua y en general se encuentra unida a la albmina, por tanto no atraviesa la membrana glomerular. La orina normalmente contiene una pequea cantidad de urobilingeno, pero no de bilirrubina, esta solo aparece cuando la concentracin en plasma se encuentra aumentada y siempre es de bilirrubina conjugada. El examen de la orina para los pigmentos biliares (bilirrubina) y urobilingeno se emplea en la investigacin de la ictericia. La bilirrubina total del suero incluye la bilirrubina libre o no conjugada (reaccin indirecta) y una pequea cantidad de bilirrubina conjugada o de reaccin directa. El nivel de la bilirrubina serica total, es til para evaluar la extensin y el progreso de la ictericia.

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La designacin de Bilirrubina como directa e indirecta deriva de observaciones, llevadas a cabo por Van Den Berg en 1913, de que parte de la bilirrubina reacciona directamente con el reactivo de Erlich, mientras que la otra hay que adicionarle alcohol.
1. Metodo Mtodo modificado de Jendrassik/Grf. 2. Fundamento La Bilirrubina reacciona con al cido sulfanlico diazotado (DSA) formando un color rojo. La absorbancia de este color a 546 nm es directamente proporcional a la concentracin de bilirrubina en la muestra. Los glucoronidos de la bilirrubina solubles en agua reaccionan directamente con DSA mientras la bilirrubina indirecta conjugada con albumina reacciona slo en la presencia de un acelerador. Bilirrubina total = bilirrubina directa + bilirrubina indirecta. 3. Muestra Suero o Plasma con heparina. Evitar muestras hemolizadas, y deben estar protegidas de la luz. La muestra es estable por 3 das a una temperatura de 2 a 8 grados, alajada de la luz. 4. Condiciones del paciente Reposo de 15 minutos antes de la toma de muestra. Ayuno de ocho horas. El ayuno prolongado produce aumento de bilirrubina ya que parte de esta se almacena en el tejido adiposo y al suceder la lipolisis se libera y sale a la circulacin. El uso de torniquete no debe prolongarse ms de 30 segundos. 5. Condiciones de la muestra No agitar el tubo, ya que en caso contrario los resultados de la prueba podran ser inexactos. Proteger la muestra de sangre de la luz brillante. Mencionar en el volante del laboratorio cualquier frmaco que pudiera afectar los resultados de la prueba. Debe procesarse la muestra el mismo da.

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6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 7. Tecnica Bilirrubina total Pipetear en tubos oscuros o protegidos de la luz: Blanco 1 ml .... Muestra 1 ml 1 gota 546 nm 1 cm 20 a 25 grados C frente a blanco de muestra.
Reactivo TBR Reactivo TNR
Mezclar cuidadosamente e incubar por 5 minutos. Muestra 100 ul 100 ul Mezclar e incubar a temperatura ambiente de 10 a 30 min. Leer la absorbancia de la muestra frente al blanco. Bilirrubina directa Pipetear en tubos oscuros o protegidos de la luz: Blanco 1 ml .... Muestra 1 ml 1 gota
Reactivo DBR Reactivo DNR
Mezclar cuidadosamente e Incubar por 2 minutos. Muestra 100 ul 100 ul Mezclar e incubar a temperatura ambiente exactamente por 5 minutos. Leer la absorbancia frente al blanco.

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8. Valores de referencia Bilirrubina total: 0.1 - 1.0 mg/dl o 5.1 - 17.0 umol/l. Bilirrubina indirecta: 0.2 - 0.8 mg/dl o 3.4 - 12.0 umol/l. Bilirrubina directa: 0.1 - 0.3 mg/dl o 1.7 - 5.1 umol/l. Bilirrubina total en el recin nacido: 1 a 12 mg/dl 17.1 - 20.5 umol/l. Para obtener la concentracin de la Bilirrubian indirecta se resta o establece la diferencia de la concentracin de la Bilirrubina total y Bilirrubina directa. Bilirrubina indirecta = B. total - B. directa.
9. Interferentes La exposicin prolongada (ms de 1 hora) a la luz solar directa o artificial puede causar disminucin de la bilirrubina en un 50%. La hemlisis de la sangre y la lipemia pueden producir resultados errneos. Entre los frmacos que pueden causar niveles aumentados de bilirrubina total se incluyen: Esteroides, anabolizantes, antibiticos (Eritromicina), antipaldicos, cido ascrbico, diurticos, morfina, anticonceptivos orales, salicilatos y vitamina A, etc. Entre los frmacos que reducen los niveles de bilirrubina total se incluyen barbitricos, cafena, penicilinas y salicilatos (dosis elevadas). 10. Estabilidad No es muy estable, se altera rpidamente con la luz, por lo tanto, debe procesarce la muestra lo ms rpido posible. El almacenamiento no es conveniente, si se necesita debe refrigerarse por pocos das (3 das a 2-8 C) protegida de la luz. 11. Linealidad La prueba es lineal hasta 25 mg/dl, si la concentracin es mayor de 25 mg/dl, diluir la muestra 1 + 4 con solucin fisiolgica y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 5. Correlacion diagnostica La determinacin de bilirrubina total es til para evaluar la extensin y progreso de la ictericia en problemas hepatocelulares, obstructivos y prehepticos. La ictericia es una coloracin amarillenta de los tejidos corporales (piel, membranas mucosas y esclerticas), causada por niveles sanguneos de bilirrubina anormalmente altos; el color amarillo se aprecia cuando la bilirrubina serica total

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supera los 2.5 mg/dl. La ictericia se debe a un defecto en el metabolismo o la excrecin normales de bilirrubina, defecto que puede ocurrir en cualquier fase del metabolismo de la bilirrubina desde su formacin hasta su excrecin intestinal.
Ictericia pre hepatica Hay aumento de la bilirrubina indirecta. No hay bilirrubinuria. Causas: Metabolismo aumentado del Heme: esferocitosis hereditaria, enfermedad drepanocitica, policitemia, etc. Eritropoyesis ineficaz acelerada: Anemia megaloblstica, talasemia intoxicacin por plomo. Destruccin prematura de eritrocitos defectuosos. Hiperbilirrubinemia por derivacin. Cirrosis. Insuficiencia cardiaca congestiva. Sndrome de Gilbert Recin Nacidos. Sndrome de Cliger - Najjan I y II. Ictericia hepatocelular Hay aumento mayor de la bilirrubina directa y puede haber aumentos menores de B. indirecta o estar normal y la bilirrubina total aumentada. En general hay bilirrubinuria. Causas: Shock por hipoxia. Hepatitis viral, alcohol y txica. Cirrosis por alcohol.
Ictericia post - hepatica o colestasica Hay aumento de bilirrubina directa y se presenta Bilirrubinuria. Causas: Obstruccin intraheptica: debido a obstruccin por frmacos, hormonas esteroideas, hepatitis aguda, virica o alcohlica, cirrosis biliar primaria, atresia de conductos, tumores metastsicos etc.

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Colestasis extraheptica o quirrgica: debido a carcinoma en conducto, vescula biliar, pncreas o ampolla de Vater; clculos biliares, por edema en la cabeza del pncreas. Nota La bilirrubina directa diferencia la ictericia Pre-heptica de la hepatocelular y obstructiva y la bilirrubina indirecta hace la diferenciacin entre la hepatocelular obstructiva y las Pre-hepticas.

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PERFIL LIPIDICO MINIMO
Generalidades de lipidos Los lpidos constituyen la principal reserva energtica de los seres vivos y tambin forman parte de la membrana celular y regulan la actividad de la clula y tejidos. Los lpidos totales estn compuestos por: colesterol libre, esteres de colesterol, triglicridos, fosfolpidos y cidos grasos libres. Todos estos lpidos con excepcin de los cidos grasos que estn ligados a la albmina, se encuentran en el plasma como lipoprotenas. Perfil lipidico minimo El dato del colesterol total y los triglicridos da una informacin global de los lpidos que circulan en el organismo, pero s se requiere tener un concepto claro de cmo estn incidiendo los lpidos en el aparato circulatorio, se debe tener un estudio fraccionado de las lipoprotenas que es lo que se conoce como perfil lipdico. En el estudio del perfil lipdico mnimo se deben tener en cuenta los siguientes parmetros: Aspecto del suero: se realiza la prueba en fro en caso de obtener sueros lechosos, se coloca el suero durante 12 horas en refrigeracin (4C) esto con el objeto de ayudar a clasificar las trigliceridemias as: Capa cremosa en la superficie y nadante transparente, significa presencia de triglicridos exgenos (quilomicrones). Capa cremosa en la superficie y nadante turbio significa triglicridos exgenos y endgenos (quilomicrones y VLDL). Aspecto uniformemente lechoso significa presencia de triglicridos endgenos (VLDL). El aspecto del suero no indica que el paciente este normal, porque valores de colesterol aumentados no producen ninguna turbidez. El colesterol total del cuerpo: comprende el colesterol libre y esterificado. 70% esterificado, 30% libre. Transportado principalmente por LDL, HDL, IDL y VLDL. Triglicridos HDL colesterol VLDL colesterol: se evala mediante la formula trigliceridos/5, cuando estos son < 400 mg/ml. LDL colesterol: se determina con la formula de Friedewald

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LDL C = CT- (VLDL C + HDL C ). Indice arterial se determina mediante la formula CT/HDLC
LDLC/ HDLc.
Interpretacion del perfil lipidico mnimo Lpido mg/dl Colesterol Total LDL Colesterol HDL hombres HDL mujeres Trigliceridos Indice arterial: Deseable <200 <130 >35 >45 <200 Hombres <=5 Mujeres <=4.5 Riesgo potencial 200-239 130-159 25-35 40-45 >200 Riesgo alto >=240 >=160 <25 <40 >200
Estas cifras nos indican que la arteriosclerosis se esta verificando en forma normal. Cifras superiores establecen un alto riesgo de enfermedad coronaria.

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COLESTEROL TOTAL
1. Metodo Prueba enzimtica colorimtrica para colesterol con factor aclarante de lpidos (LCF) CHOD-PAP 2. Fundamento El colesterol se determina despus de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. El indicador es la quinonemina formada por el perxido de hidrgeno y 4aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa. 3. Muestra Suero o plasma con heparina o EDTA. 4. Condiciones del paciente Esta prueba no necesita de ayuno pero como generalmente se realiza con el resto del perfil lipdico, se deben seguir los requerimientos que para este se indiquen. No se debe ingerir alcohol 24 horas antes de la prueba. 5. Condiciones de la muestra La muestra ideal es suero plasma heparinizado con EDTA. Extraer 5-10 ml de sangre en un tubo seco. Anotar cualquier frmaco que pueda modificar los valores de Colesterol. Separar el suero de los glbulos rojos en la media hora siguiente a la extraccin, para evitar la redistribucin del Colesterol entre las diversas lipoprotenas. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda 500 nm, 546 nm Paso de luz: 1 cm Temperatura: 25 37 grados C. Medicin: frente a blanco de reactivo.

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7. Tecnica Pipetear Blanco ---------1000 l Estndar ---10 l ---1000 l Muestra ------10 l 1000 l
Blanco Estndar Muestra Rvo Color
Mezclar, incubar 10 minutos a 20 25 grados, o 5 minutos a 37 grados C. Leer la absorbancia frente a blanco de reactivo. 8. Valores de referencia Varan con la edad y el laboratorio. RECIEN NACIDOS LACTANTES NIOS ADULTOS/ ANCIANOS 53 135 mg/dl 70 175 mg/dl 120- 200 mg/dl < 220 mg/dl Sospechoso mayor de 220 Elevado mayor de 260
9. Interferencias La Ovariectoma aumenta los niveles de Colesterol. Hay frmacos que elevan los niveles de Colesterol como: Hormona adrenocorticotrpica, Esteroides anablicos, Corticosteroides, bloqueadores beta-adrenrgicos, Adrenalina, Anticonceptivos orales, sulfamidas, Diurticos tiacdicos, Vitamina D. Hay otros que disminuyen los valores como: Andrgenos, Allopurinol, Quelantes de las sales biliares, Captopril, Niaciana, Nitratos, Colchicina, Colestipol, Eritromicina, Isoniacida, Liotironina (Cytomel), Lovastatina (Mevacor), Neomicina (oral).
Notas El test no se afecta con valores de hemoglobina inferiores a 200 mg/dl, ni de Bilirrubina menor a 5 mg/dl. Evitar el contacto con los reactivos ya que son muy corrosivos.

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Muestras lipmicas usualmente generan turbidez en la muestra que se va a analizar, generando resultados falsamente elevados 9. Linealidad El test es lineal hasta una concentracin de Colesterol de 750 mg/dl (19.3 mmol/l). Para concentraciones mayores diluir la muestra con solucin salina al (0.9%), 1 + 2 y repetir la determinacin, multiplicar el resultado por 3. 10. Control de calidad Hacer control peridico a equipos y reactivos para evitar resultados falsos positivos falsos negativos. Para la tcnica se debe montar un control Normal y uno Patolgico. Correlacion diagnostica Niveles sospechosos: 220 mg/dl 5.7 mmol/l Niveles elevados: 260 mg/dl 6.7 mmol/l Niveles superiores: 300 mg/dl Necesitan tratamiento. Resultados anormales Niveles aumentados en: Hipercolesterolemia, Hiperlipemias, Hipotiroidismo, Sndrome nefrtico, embarazo, Hipertensin, Xantomatosis, Colestasis heptica, Dieta rica en Colesterol, Infarto de miocardio, aterosclerosis, Cirrosis biliar, Estrs, nefrsis, Diabetes Mellitus descontrolada. Niveles disminuidos en: Sepsis, Desnutricin, Mala absorcin, Hipertiroidismo, Enfermedad heptica, Anemia hemoltica, Anemia perniciosa, Medicacin hipocolesterolemiante.

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COLESTEROL HDL 1. Metodo Colesterol precipitnte. 2. Fundamento Los quilomicrones, VLDL y LDL se precipitan por adicin de cido fosfotngstico y cloruro de magnesio. Despes de centrifugar, el sobrenadante contiene las HDL que se van a determinar. 3. Muestra Suero o plasma con anticoagulante EDTA o heparina. 4. Condiciones del paciente Ayuno de 12-14 horas previas a la extraccin de sangre. Debe sealarse que si bien la falta de ayuno no afecta los niveles de HDLc sanguneo, en la mayora de las personas la lipemia posprandial interfiere con muchos de los mtodos analticos. Abstenerse de no ingerir alcohol por 72 horas antes de la toma de la muestra (no es necesario). 5. Condiciones de la muestra La muestra debe separarse del coagulo dentro de las dos horas de la extraccin y conservarse a 4C a menos que se analice de inmediato. HDL es estable en la muestra de suero durante 7 das a 4C o durante 4 meses a 20C. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda 500 nm, 546 nm Paso de luz: 1 cm Temperatura: 25 37 grados C. Medicin: frente a blanco de reactivo

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7. Tecnica A. Precipitacin pipetear muestra precipitante Macro 500 ul 1000 ul Micro 200 ul 500 ul
Mezclar bien, incubar por 10 minutos a temperatura ambiente. Centrifugar por 2 minutos a 10000 rpm 10 minutos a 4000 rpm. Despes de centrifugar, separar el sobrenadante claro del precipitado dentro de 1 hora y determinar la concentracin del colesterol HDL con el reactivo de Colesterol total. B. Determinacin
Agua destilada Estndar Sobrenadante Reactivo de color
Blanco 100 ul ------1ml
Estndar 100 ul ---1ml
Problema ---100 ul 1ml
Mezclar, incubar todos los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos a 37C por 5 minutos. Leer la absorbancia de la muestra y el estndar frente al blanco de reactivo antes de una hora. Notas El sobrenadante debe ser claro. En las muestras con un contenido de triglicridos altos se pueden presentar precipitaciones incompletas de las lipoprotenas o flotacin por parte de las mismas sobre l liquido, observando un sobrenadante turbio, en ese caso, se hace una dilucin 1: 1 con solucin cloruro de sodio al 0.9% y se repite la precipitacin de la muesta diluida. El resultado se multiplica por dos. El cido ascrbico disminuye los valores. Limite de dilucin 310 mg/dl.

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8. Valores de referencia Mujeres > 45mg/dl Hombres > 35mg/dl 9. Correlacion diagnostica La HDL contrarresta la accin nociva que puede tener la LDL sobre nuestro organismo, al evitar la arteriosclerosis excesiva porque remueve y elimina a travs de la bilis cantidades considerables de LDL en forma de cidos biliares y esteroides neutros. La LDL juega un papel muy importante en el funcionamiento arterial y por esto debemos tratar que el organismo tenga estrictamente la cantidad necesaria que requieren sus funciones, para evitar la arteriosclerosis prematura, complementada con un nivel de HDL lo ms elevado posible, siendo esta la mejor forma de luchar contra este mecanismo fisiolgico. Resultados Anormales. Niveles aumentados de HDL correlacionan con disminucin en el desarrollo de enfermedad cardiocirculatoria. Se observa en: mayor produccin de Apo I y Apo II y actividad fsica fuerte. Niveles disminuidos de HDL correlacionan con riesgo aumentado de enfermedad cardiocirculatoria, obesidad, sedentarismo, hipertriglicridemia, deficiencia familiar de Apo I y Apo II, deficiencia de LPL 1 con afectacin del metabolismo de quilomicrones y VLDL.

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TRIGLICERIDOS
1. Metodo Prueba enzimtica colorimtrica para triglicridos con factor aclarante de lpidos. GPO-PAP 2. Fundamento Los triglicridos son determinados despus de hidrlisis enzimtica con lipasa. El indicador es Quinineimina formada a partir de perxido de hidrgeno, 4aminoantipirina y 4-chlorofenol bajo la influencia cataltica de peroxidasa. 3. Muestra Suero o plasma heparinizado o palsma con EDTA 4. Condiciones del paciente El ayuno debe ser entre 12 y 14 horas. No hacer ejercicio fuerte antes de la prueba. No se debe ingerir alcohol 24 horas antes de la prueba. No consumir grandes cantidades de Carbohidratos y grasas 48 horas antes de la prueba. 5. Condiciones de la muestra La muestra ideal es suero plasma heparinizado con EDTA. Extraer 5-10 ml de sangre en tubo seco y separar el suero de los glbulos rojos en la media hora siguiente a la extraccin, para evitar la redistribucin de los Triglicridos entre las diferentes lipoprotenas. Notas La lipemia, la hemlisis hasta 10 mg/dl 170 mmol/l, metablitos y una serie de frmacos de uso comn NO interfieren con el mtodo. Los volmenes de la reaccin sugeridos se pueden modificar sin ningn cambio en los clculos. Los Triglicridos permanecen estables 3 das a 4C, la temperatura de 25C permite la liberacin de glicerol de los fosfolipdos y produce un incremento aparente del valor de los Triglicridos. Es importante describir el aspecto del suero. Antes de procesar la muestra se debe observar y anotar el aspecto del suero ya que si este est lechoso, se le debe hacer la prueba en fro, que consiste en

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colocarlo en la nevera por 12 horas, luego de las cuales se observa las caractersticas que presenta el nadante y el sobrenadante. Los Triglicridos no permanecen en el suero a 25C, debido a que fcilmente se libera el glicerol; a 4C son estables por 3 das.
6. Metodo de determinacion Longitud de onda: 500 nm, 546 nm Paso de luz: 1 cm Temperatura: 20, 25 37 grados C Medicin: frente a blanco de reactivo 7. Tecnica Pipetear: Blanco ------------1000 l Estndar ---10 l ------1000 l Muestra ------10 l ---1000 l Control ---------10 l 1000 l
Blanco Estndar Muestra Control Reactivo
Mezclar, e incubar por 10 minutos a 25C o por 5 minutos a 37 grados C, leer con Blanco de reactivo. Estabilidad de la reaccin 1 hora. Linealidad El mtodo es lineal hasta 1000 mg/dl (11.3 mmol/l) de Triglicridos. Para concentracin superior diluir la muestra 1+5, con solucin salina al 0.9%, repetir la determinacin y multiplicar el resultado por 6.
8. Valores de referencia EDAD 0 5 aos 6 11 aos 2 15 aos 16 19 aos Adultos / ancianos HOMBRES 30 86 mg/dl 31 108 mg/dl 36 138 mg/dl 40 163 mg/dl 40 160 mg/dl MUJERES 32 99 mg/dl 35 114 mg/dl 41 138 mg/dl 40 128 mg/dl 25 135 mg/dl

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9. Interferencias Elevando los valores Colestiramina, Estrgenos y anticonceptivos orales. Disminuyendo los valores Acido ascrbico, Asparraginasa, Clofibrato y colestipol.
10. Correlacion diagnostica
Niveles aumentados en: Hiperlipemias, Hipotiroidismo, Dieta rica en carbohidratos, Diabetes mal controlada, Riesgo de enfermedad coronaria y vascular, Hipertensin, Embarazo, Infarto de miocardio, Cirrosis alcohlica, Sndrome nefrtico, Enfermedad con almacenamiento de glucgeno. Niveles disminuidos en: Sndrome de mala absorcin, Desnutricin, Hipertiroidismo. Nota: Los trigliceridos elevados afectan el clculo de las LDL, por lo tanto cuando esto sucede las LDL no se deben reportar.

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CREATININA
Generalidades Sus aumentos suelen ser proporcionales con respecto a los de la urea, aun cuando en general son ms tardos. Tiene particular inters diagnostico y pronstico en los siguientes casos: Nefropatas: Cuando en una insuficiencia renal con uremia, se observan cifras superiores a 5mg/100ml, l pronostico es fatal a corto plazo. Esto solo sucede en las fases avanzadas, ya que en las precoces, dada la facilidad de eliminacin de la creatinina solo aumentan el cido rico y la rea. En las nefritis agudas generalmente no hay elevacin; en los casos en que existe (40%) es un cambio reversible y de escaso valor pronostico. En las nefrsis por txicos (Hg y Ag.) es donde se observan mayores elevaciones; en la insuficiencia cardiaca avanzada puede originarse una retencin discreta o moderada de creatinina aunque no exista verdadera nefropata. En obstrucciones urinarias (Afecciones de prstata, vejiga, urter, etc.) y en la anuria refleja (clculos uretrales), se producen as mismo elevaciones marcadas de creatinina incluso 30 mg o ms, igualmente reversibles con la reparacin de la obstruccin. En el gigantismo y acromegalia se observan discretas elevaciones. Cada 24 horas se transforma un 2% de creatina en creatinina. La cantidad de creatinina por unidad de masa muscular es constante y por lo tanto la degradacin espontanea es constante. Como resultado de este fenmeno la concentracin plasmatica de creatinina es estable y varia en menos de 10% diario en individuos normales. 1. Metodo Reaccin de Jaffe Prueba fotomtrica colorimrtica para mediciones de punto final desproteinizacin.

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2. Fundamento La creatinina en solucin alcalina forma un complejo coloreado rojo-naranja con cido picrico. La absorbancia de este complejo es directamente proporcional a la creatinina en la muestra. 3. Muestra Suero o plasma heparinizado u orina 4. Condiciones del paciente La muestra de sangre no requiere ayuno previo ya que la excrecin de creatinina depende muy levemente de la alimentacin y de la diuresis. Por lo menos 8 horas antes del examen no realizar esfuerzos corporales intensos. 5. Condiciones de la muestra La muestra de suero para creatinina es inestable a temperatura ambiente, refrigerada de 2 4 C por 24 horas. Congelada a 20 C es estable por 6 meses La creatinina puede ser determinada en cualquier lquido biolgico, pero las muestras mas usadas son suero, plasma y orina. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 546 nm (500-550 nm) 1 cm 25 C frente a blanco de reactivo
7. Tecnica Estndar 500 50 ---Muestra 500 ---50
Solucin Trabajo Estndar Suero
Mezclar y poner en marcha el cronmetro y leer la absorbancia a los 30 segundos y a los 90 segundos. A2-A1= Creatinina

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8. Valores de referencia Creatinina en suero o plasma Mujeres Hombres 0.5 1.0 mg/dl. 0.7 1.2 mg/dl.
Estos valores estn influenciados por el sexo (siendo menor en la mujer), masa muscular del individuo. 9. Interferentes de la muestra y la reaccion Interferentes positivos: Acido ascrbico, piruvato, acetona, cido acetoactico, levulosa, glucosa, cido rico, protenas, barbitricos y antibiticos de la cefalosporina. Las temperaturas altas y los prolongados tiempos de reaccin (> a 5 minutos), aumentan esta interferencia. El piruvato, acetona, cido actico, aminocidos y protenas o cualquier compuesto con un grupo metilo o metileno activo, introduce errores debido a su acoplamiento con el picrato por un mecanismo anlogo al de la creatinina; todos estos compuestos pueden producir sustancias coloreadas que aumentan la absorbancia en la reaccin del complejo coloreado. La bilirrubina y otros productos de degradacin de la Hb, causan una interferencia negativa probablemente por su oxidacin en medio bsico fuerte a compuestos incoloros, dando como resultado una disminucin de la absorbancia, lo que se interpreta como una menor concentracin de creatinina. Esta interferencia negativa se observa con frecuencia en el anlisis cintico de la creatinina. 10. Correlacion diagonstica El nivel de creatinina en suero depende de 2 factores: La velocidad de produccin. La velocidad de filtracin. Dado que la fuente de creatinina serica es la creatina muscular y la fosfocreatina, una mayor cantidad de masa muscular produce un aumento de la creatinina serica. Los valores de creatinina exhiben una respuesta escasa o nula a las modificaciones dietticas o a las alteraciones del equilibrio electrolitico.

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La concentracin de creatinina en sangre, como la de la urea, se aumenta con el descenso de la funcin renal y el principal empleo de la determinacin de creatinina serica esta en la evaluacin de la funcin renal. En nefritis crnica cuando la concentracin de BUN esta muy por encima de 50 mg/dl, el aumento de la creatinina es proporcional y las concentraciones de creatinina mayores a 5 mg/dl se consideran de importancia diagnostica grave. Niveles disminuidos se encuentran en la distrofia muscular. Notas La especificidad de la reaccin depende del pH, temperatura y tiempo. Los volmenes de reaccin podrn aumentarse o disminuirse del fotmetro, sin que se alteren los resultados finales. El cido pcrico es txico. Evite la inhalacin, ingestin y contacto con la piel, lavar enseguida con polietilenglicol 400, con abundante agua.

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DEPURACION DE CREATININA
Generalidades Es un mtodo til para seguir el progreso de una enfermedad renal evolutiva, porque nos da informacin de cmo esta la filtracin glomerular. La relacin entre la concentracin de una sustancia en orina y sangre es el mejor ndice de funcin renal, que la concentracin de dicha sustancia aislada en sangre o en orina. La depuracin de la creatinina endgena es un mtodo til para seguir el progreso de una enfermedad renal evolutiva, siempre y cuando los resultados se interpreten en forma comparativa y no absoluta. 1. Muestra Tcnica para el suero, el mismo procedimiento de creatinina en suero. Tcnica para la orina: Diluir 1:100 con Solucin Salina 0.9%. Valores de referencia: Hombres: 98 156 ml/minuto Mujeres: 95 160 ml/minuto Limite de dilucin: 500 mg/dl
2. Condiciones del paciente La muestra de sangre debe obtenerse durante el periodo de recoleccin de la orina. La muestra de orina se recoge durante un periodo determinado, generalmente 24 horas aunque es posible reducirlo a 4, 8 12 horas. El control cronolgico de la recoleccin de las muestras es esencial para la realizacin correcta de la prueba. Para la recoleccin de la orina el paciente debe fijar una hora cero. Descartar la orina de esa hora y a partir de entonces recoger todo el volumen de orina, inclusive la muestra del tiempo fijado para la recoleccin. Marcar en el frasco la hora de iniciacin de la recoleccin. Guardar refrigerada y en frasco bien tapado. El paciente debe abstenerse de ingerir carne, t y caf durante las 24 horas anteriores a la recoleccin. Debe seguir tomando agua, para asegurar un volumen urinario de 1 ml por minuto cuando menos.

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Interrumpir toda terapia diurtica. 3. Condiciones de la muestra Muestra de suero libre de hemlisis fuerte y de ictericia (ya que una ligera hemlisis no afecta la determinacin). La muestra de orina debe refrigerarse o agregarse un inhibidor bacteriano. La concentracin de creatinina debe determinarse antes de las 24 horas de recogida la muestra, ya que los grmenes producen variacin en el pH promovindose as la conversin de creatinina en creatina, la cual no puede medirse por la reaccin de Jaff, adems producen creatininasas que destruyen la creatinina. 4. Metodo de determinacion Longitud de onda: 546 nm (500-550 nm) Paso de luz: 1 cm Temperatura: 25 C Medicin: frente a blanco de reactivo 5. Tecnica Pipetear: Estndar 500 50 ---Muestra 500 ---50
Solucin Trabajo Estndar Orina diluida
Dilucin de la orina * Hacer una dilucin de la orina de 1: 50. 10 ml de orina + 490 ml de agua destilada; el resultado se multiplica por 50.
Calculo Creatinina en Orina* ________________ Creatinina en suero
Volumen (ml) _________ 1140 (Constante)

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6. Valores de referencia Creatinina en suero o plasma Creatinina en orina Depuracin de Creatinina: Mujeres Hombres Mujeres 0.8 1.2 mg/dl. 0.9 1.4 mg/dl. 1900 mg/24 h. 75 115 ml/min. 16 22 mg/Kg peso/24 h 85 125 ml/min. 21 26 mg/Kg peso/24 h
Hombres
7. Interferencias Los mismos de la gua anterior.
Notas Los volmenes de reaccin podrn aumentarse o disminuirse proporcionalmente segn las necesidades del fotmetro, sin que se alteren los resultados finales. Entre las causas de error estn: mal cronometrado o recogida inadecuada de la muestra de orina, ejercicio fuerte durante la prueba, lo cual aumenta los niveles urinarios, la hidratacin inadecuada del paciente, que seria una fuente de error negativa.
8. Correlacion diagnostica En enfermedades renales avanzadas la excrecin urinaria de creatinina excede a la velocidad de filtracin glomerular a causa de la secrecin tubular, por lo que el verdadero valor de filtracin glomerular esta por debajo de la depuracin de la creatinina.

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El filtrado glomerular disminuye notablemente en G.N.A. y crnica; disminuciones se observan en pielonefritis crnica e hipertensin.
ligeras
La filtracin glomerular normal es en un adulto de 125 ml/min. Si la depuracin plasmatica de una sustancia es mayor que la filtracin glomerular debe interpretarse como que esta sustancia es secretada por el tbulo y si por el contrario, la depuracin es menor que la filtracin, podemos concluir que esta sustancia es reabsorbida. La depuracin de creatinina disminuye en personas de edad, en nios y personas de baja estatura por esto se hace necesario realizar la correccin del valor obtenido, multiplicando el resultado por 1.73/A para obtener el valor real de la depuracin en estos pacientes. En las personas obesas la depuracin esta alterada por lo tanto se hace necesario la correccin.

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GLICEMIA Generalidades Glucemia o glicemia: Este trmino se refiere a la presencia de la glucosa en sangre. La glucosa sangunea proviene de dos fuentes: La ms importante es la absorcin intestinal de glucosa alimenticia que normalmente puede llevar los valores sanguneos de glucosa hasta 138 -140 mg/dl. La liberacin de glucosa por el hepatocito mediante un mecanismo que se acelera al disminuir la glicemia sangunea. Glucogenesis: Formacin de glucgeno (hgado, msculo en mayor proporcin y tambin leucocitos, en el tejido nervioso en muy poca cantidad). Glucogenolisis: Movimiento de glucgeno almacenado para producir glucosa-6fosfato. Glucolisis: Llevar la glucosa-6-fosfato hasta piruvato para producir actyl Co A (ciclo de krebs). Gluconeogenesis: Formacin de glucosa a partir de otro sustrato diferente al glucgeno ejemplo: aminocidos. 1. Metodo Prueba enzimtica colorimtrica por glucosa. Metodo con desproteinizacin. GOD-PAP. 2. Fundamento La glucosa de determina despes de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno formado reacciona bajo la catlisis de la peroxidasa con fenol y 4-aminofenazona produciendo un complejo rojo-violeta usando la quinonemina como indicador.

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3. Muestra Sangre total, suero o plasma 4. Condiciones del paciente No se requiere preparacin diettica especial, a menos que el paciente consuma diariamente menos de 150grs. de hidratos de carbono. Ayuno de diez a doce horas. No tomar caf, ni haber fumado antes o durante la prueba. No realizar ejercicio antes o durante la prueba. No presenta glucosuria positiva antes de dar la carga de glucosa. Umbral renal (T.M.) 160-180 mg/dl. En el momento de la toma de la muestra el paciente debe estar sentado erguido. 5. Condiciones de la muestra La separacin del suero debe hacerse dentro de los 20 o 30 minutos de la extraccin. La estabilidad de la muestra es de 8 horas. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 7. Tecnica Pipetear: BLANCO PATRON MUESTRA RVO. COLOR Blanco ---------1000 Patron ---10 ---1000 Muestra ------10 1000 500 nm 546 nm 1 cm 20. 25 37 C frente a blanco de reactivo
Mezclar, incube a temperatura de 20 - 25C por 10 minutos 5 minutos a 37C. Leer la absorbancia de la muestra y el patrn contra el blanco de reactivo.

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8. Valores de referencia
Criterios de diagnstico para DM por PTOG

Normal Ayunas P.T.O.G. Adulto < 115 < 140 Nio < 130 < 140 Diabetes mellitus Adulto >= 140 >= 200 Nio >= 140 >= 200 Intol. A la glucosa Adulto 115 - 139 140 - 199 Nio 130 139 140 199
9. Carga de glucosa Nios: 1.75 gr de dextrosa por kilogra la prueba tamiz consiste en administrar la carga de dextrosa y tomar una muestra despus de una hora post-ingesta. Para la P.O.T.G, 100 gr. de dextrosa en 300 ml.de agua. Nota El tiempo mximo para ingerir la carga de glucosa oral es de 5 minutos, a partir de los cuales se empezara tomar los tiempos para la toma de las muestras asi: Gestantes 1-2 y 3 horas, no Gestantes 2 horas postcarga. Utilizar mtodos de laboratorio previamente estandarizados y sueros control Diagnostico de diabetes mellitus El principal objetivo de diagnstico es la indentificacin de pacientes con riesgo de hiperglicemia sintomtica de cetoacidosis diabetica (CAD) o coma hiperosmolarno no cetnico (CHNC) o de complicaciones clnicas tardas, descartando aquellos pacientes que presentan fluctuaciones en el lmite superior de la concetracion plsmatica normal, que pueden no entraar los riesgos asociados a la DM. En los pacientes asintomticos el diagnstico de DM se establece cuando se cumplen los criterios diagnsticos de los valores de glicemia recomendado por diferentes asociaciones o grupos de estudio de diabetes as: National diabetes data group Basal >= a 140 mg/dl en dos ocasiones consecutivas sea en adultos o en nios. La prueba de tolerancia oral a la glucosa (P.T.O.G.) tiene como finalidad la de descartar o de diagnsticar una diabetes mellitus tipo 2 (D.M.tipo 2.), cuando se sospecha una diabetes a pesar de la ausencia de hiperglicemia en ayunas o sistomtica, por ejemplo en aquellos paciente que presentar trastornos clnicos

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que pudieran deberse a una DM no diagnsticada ejemplo: polineuropata, retinopata y nefropatia, etc. Los criterios diagnsticos por P.T.O.G. solo son vlidos para individuos sanos que no presentan infecciones, enfermedades cardiovasculares o vasculares Cerebrales agudas, enfermedades endocrinas que deterioren la tolerancia a la glucosa o enfermedades hepticas, renales o del S.N.C., tampoco pacientes tratados con frmacos que alteren la prueba de tolerancia oral a la glucosa (tiazidas, glucocorticoides, ac. Nicotinico, anticonceptivos orales que contengan estrgenos sintticos). No se debe realizar la P.T.O.G. a los pacientes que presenten naseas, vmito, sudoracin, desmayos o palidz durante la realizacin de la prueba. En la P.T.O.G., por lo menos dos valores deben ser > = 200 mg/dl. Adultos: dos horas y en cualquier otro momento de la P.T.O.G... Nios: asintomaticos deben ser mas estricto en diagnstico por P.T.O.G.,(dado el mayor riesgo de un exceso de diagnstico de DM). La P.T.O.G, debe repetirse para corroborar el diagnstico de DM, tanto en nios como en adultos. Los pacientes con intolerencia a la glucosa pueden presentar mayor riesgo de hiperglicemia en ayunas o sintomatica, pero en muchos casos la intolerencia a la glucosa no progresa, o puede tambin revertir a la normalidad. Valores normales Despus de un ayuno de 10 a 12 horas los valores de glicemia deben estar ubicados entre 70-110 mg/dl (segn el mtodo utilizado). Los valores de glicemia posprandial pueden ir hasta 160 mg/dl. (Guillermo Farias quimica clnica, dcima edicin). *Criterios diagnosticos reportados por el comite de expertos en el diagnostico y clasificacion de diabetes mellitus. sintomas de diabetes, acompaados de una glicemia a cualquier hora mayor o igual a 200 mg/dl. Los sintomas clsicos incluyen poliuria, polidipsia y prdida de peso. 2. Glicemia en ayunas mayor o igual a 126 mg/dl. Ayunas se define como la no ingesta calrica al menos por 8 horas.

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3. Dos horas poscarga durante una prueba de tolerancia oral a la glucosa (PTOG) mayor o igual a 200 mg/dl. Para ello se utiliza 75 gramos de glucosa anhidra disueltos en 300 cc de agua. En la ausencia de hiperglicemia inequvoca con descompensacin aguda, estos criterios deben ser confirmados por otra prueba realizada un da diferente. Los valores normales para la glicemia en ayunas, se han establecido en 110 mg/dl, la razn para ello es la perdida de la primera fase de secrecin de insulina a partir de esta cifra. La prueba de tolerancia utilizaba valores a la hora, hora y media y a las dos horas. De acuerdo a los nuevos criterios solo se tiene en cuenta los valores a las 2 horas. Se han establecido tres criterios para el diagnostico de diabetes, cada uno de ellos debe ser confirmado con una prueba posterior. Por ejemplo, sntomas con una glicemia al azar > de 200 mg/dl, debe ser confirmado subsecuentemente por una glicemia en ayunas a 126 mg/dl, una glicemia 2 horas postcarga a 200 mg/dl, o una glicemia al azar a 200 mg/dl. Las categorias para la glicemia en ayunas quedan establecidas de esta foma: * Glicemia normal: Menor a 110 mg/dl. * Hiperglicemia en ayunas: Entre 110 mg/dl y 126 mg/dl. * Diagnostico provisional de diabetes (debe ser confirmado): a 126 mg/dl. Para la prueba de tolerancia a la glucosa, las categorias, son: * Glucemia normal: Menor de 140 mg/dl, 2 horas poscarga. * Disminucin de la tolerancia a la glucosa: Entre 140 mg/dl y 200 mg/dl, 2 horas poscarga. * Diagnostico provisional de diabetes (debe ser confirmado): a 200 mg/dl. El comit no recomienda la utilizacin de los niveles de hemoglobina glicada para el diagnostico de la diabetes, si bien los niveles de hemoglobina glicada presentan una distribucin similar a la glicemia, las pruebas utilizadas para ella no estan estandarizadas, por lo cual asignar un valor diagnostico es difcil; por el momento solo continua como prueba para el control y no para el diagnostico. Diagnostico de hipoglicemia Depende si el paciente presenta manifestaciones del sistema nervioso central (S.N.C) inexplicadas o sintomas adrenergicos inexplicables.

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En ambos casos para el diagnstico se requiere valores plsmaticos anormalmente bajos, los cuales se corrigen al aumentar la glucosa sangunea. Por lo general una glucosa plsmatica anormalmente baja se define menor de 50mg/dl en el varn, menor de 45mg/dl en la mujer, y en lactante y nios menor de 40mg/dl . (Se pueden encontrar valores menores de los expuestos en un ayuno de 72 horas). El paciente con deterioro de la conciencia o crisis convulsiva debe efectuarse la glucosa con tirilla y gota de sangre obtenida al colocar un aguja para iniciar la perfusin de lquido; si se obtiene un valor anormalmente bajo, se perfunde glucosa de inmediato. La mejora inmediata de los sintomas del S.N.C., tras un aumento de glucosa, confirman el diagnstico de hipoglicemia de ayuno o inducida por frmacos. El diagnstico debe completarse con valoraciones de insulina proinsulina y peptido C y tambin la busqueda de drogas que puedan estar ocasionando la hipoglicemia (insulina alcohol, sulfas que producen un 50% de las hipoglicemias. Otros frmacos como salicilatos, propanolol etc.) Criterios diagnosticos para diabetes gestacional Ayunas >= 105 mg/dl 1 hora >= 190 mg/dl 2 horas >= 165 mg/dl 3 horas >= 145 mg/dl Normal: Hasta 135 mg/dl. Anormales: Valores de glicemia entre 135 - 180 mg/dl sugieren la realizacin de una P.T.O.G. de 3 horas con una carga de dextrosa de 100 gramos. Valores de glicemia > 180 mg/dl en ms de una oportunidad son diagnsticos de D.M.G

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UREA
1. Metodo Metodo completamente enzimtico para determinacin cintica de urea. GLDH. 2. Fundamento La urea es hidrolizada en presencia de agua y ureasa para producir amonio y dixido de carbono. El amonio producido en esta reaccin se combina con 2oxoglutarato y NADH en presencia de glutamato-deshidrogenasa (GLDH) para formar glutamato y NAD+. La prueba ha sido mejorada de forma que la GLDH es la enzima lmite. La disminucin de la absorbancia es proporcional a la concentracin de urea dentro de los intervalos de tiempo dados. Ya que la prueba cintica es muy rpida, ha sido diseada para ser realizada preferiblemente en analizadores. 3. Muestra Suero o plasma, orina diluida 1:1000 con agua destilada.
4. Condiciones del paciente 24 horas antes de tomar la muestra, el paciente debe llevar una dieta pobre en protenas y 12 horas de ayuno total. 5. Condiciones de la muestra Por accin bacteriana se puede perder la urea, por lo tanto debe analizarse pocas horas despes de recogida o conservarse en refrigeracin. Sueros lipmicos causan turbidez en la solucin final.

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6. Metodo de determinacin Logitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 340 nm, 334 nm, 365 nm 1 cm 25C, 30C 37C Lectura contra blanco de reactivo
7. Tecnica Pipetear Blanco ------1ml Patrn ---10 ul 1ml Muestra 10 ul ---1ml
Muestra Patrn Reactivo
Mezcle, lea la absorbancia de la muestra y el estandar despes de 30 segundos y lea nuevamente al minuto, calcule la diferencia 8. Valores de referencia Suero 10-55 mg/dl 1, 7-9, 1 mmo1/1 Orina 20-35 mg/24 horas 333-583 mmo1/24 horas El mtodo es lineal hasta 200 mg/dl (33, 3 mmo1/1) de urea para suero o plasma y 200 g/L (330 mmol/L) para la orina. Para concentraciones ms altas mezclar un volumen de la muestra con un volumen igual de agua destilada, repetir el ensayo y multiplicar el resultado por dos. El patrn, la muestra y la solucin 1 deben pipetear en el fondo de los tubos de ensayo y mezclarse cuidadosamente.

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9. Interferencias La prueba no es influenciada por hemoglobina hasta 500 mg/dl, triglicridos hasta 2000 mg/dl, bilirrubina hasta 60 mg/dl, glucosa hasta 500 mg/dl y cido ascrbico hasta 30 mg/dl.
10. Correlacion diagnostica La urea se encuentra aumentada por encima de los valores normales en caso de insuficiencia renal u obstruccin de vas urinarias, nefritis aguada, TBC renal, Gota Crnica y en todas aquellas entidades donde el volumen del filtrado glomerular se ha reducido una quinta parte de lo normal. Cuando existe uremia los sntomas incluyen letargo, anorexia, nusea y vmito, deterioro mental y confusin, sacudidas musculares, convulsiones y coma. La anemia es un carcter prominente en la uremia crnica porque est deprimida la eritropoyesis. El nitrgeno urico de la sangre, el nitrgeno no proteico y la creatinina estn elevados y los niveles sanguneos de estas sustancias se emplean como ndice de la gravedad de la uremia. Los valores de la urea pueden disminuirse en alteraciones hereditarias de la sntesis de urea o cuando existe una ingesta inadecuada de protenas, o una enfermedad heptica grave.
Determinacion de nitrogeno ureico El nitrogeno ureico se saca de dividir el valor de la urea por un factor que es 2.14.
PROTEINAS TOTALES
Generalidades. La cifra normal de las proteinas totales del suero est comprendida entre 6 y 8 mg/ ml encontrndose de 1 gramo menos en los pacientes que guardan cama por mas de dos semanas las protenas totales estn integradas por la fraccin albmina y bla fraccion globulina. La priemera regula la presin osmtica coloidal de la sangre, aporta la nutricion celular, interviene en el equilibrio cido-bsico, transporta los lipidos originando los compuesos que se denominan, lipo-protenas y sirve de medio de transporte a multitud de elemntos como esteroides, hierro, cobre, vitaminas liposolubles. La fraccin globulina se sintetiza especialmente en las clulas plasmticas y tienen como misin principal fabricar anticuerpos, de donde se origianan el nombre de inmunoglobulinas. 1. Metodo Prueba colorimtrica fotomtrica para protenas totales (Biuret) 2. Fundamento Los iones cpricos con las protenas y peptidas en solucin alcalina forman un complejo prpura. La absorbancia de este complejo es proporcional a la concentracin de protenas en la muestra. 3. Muestras. Suero y plasma heparinizado. Estable 8 dias a 2-8 C. Los anticoagulantes quelantes interfieren. 4. Condiciones del paciente La muestra ha de tomarse con 8 horas de ayuno. Evitar todo esfuerzo corporal intenso por lo menos 8 horas antes de la toma de la muestra. El ejercicio causa aumento de la concentracin de protenas en un 6 a 12%. El uso de torniquete no ha exceder los 30 segundos, su prolongacin tiende a aumentar los niveles de protenas en la muestra de suero en aproximadamente 0.5 g/dl.
5. Metodo de determincion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 6. Tecnica Pipetear en tubos de ensayo: Blanco Agua destilada Patrn proteina Muestra Reactivo 10 ul ------1,0 ml Patrn ----10 ul ----1,0 ml Muestra --------10 ul 1,0 ml 340 nm, 334 nm 365 nm 1 cm 25C, 30C 37C frente a blanco de reactivo
Mezcle, lea la absorbancia de la muestra y estndar despes de 30 segundos y lea exactamente al minuto despes calcule la diferencia y multiplique por 80. ABS Muestra ____________ X 80= mg/dL protena ABS Patrn 7. Valores de referencia Suero: 65 80 g/L Plasma: 68 83 g/L 8. Interferentes La hemoglobina (0,2 g/L). La bilirrubina (15 mg/dl) La lipemia moderada no interfiere. La presencia de dextrano (utilizado como expansor del plasma) ocasiona una floculacin de la mezcla de reaccin que puede separarse por centrifugacin sin que afecte los resultados.
9. Corelacion clinicopatologica Cuando hay hemoconcentracin por shock, vmitos, diarreas profusas, quemaduras, sudoracion excesiva, fistulas digestivas etc. Se obtienen falsas hiperproteinemias. Las cifras bajas generalmene corresponden a malnutricion, tambien puede estar disminuida en: Nefrosis lipoidea. Edemas carenciales. Neoplasias. Afecciones hpaticas crnicas. Anemia persistente. De la cifra total que integran las protenas, entre 3.5 y 5.5 g/ml corresponden a la albmina y entre 1.5 y 3g/ml a la globulina.
PROTEINURIA
Generalidades. Tambien conocida como albminuria, es la cantidad de protena excretada por la orina. Normalmente es de 40 a 80 mg con lmite mximo, 150/24 horas, cantidad no detectable por los sistemas habituales para dosificarla. Es el indicador ms importante de enfermedad renal complementado con el sedimento microscpico. La albmina constituye entre un 60 y un 90 % de la prtena excretada y el resto est por globulinas principalmente globulina Alfa- 1 y Alfa 2. Tiene como mecanismo el aumento de la permeabilidad de las membranas glomerulares, reabsorcin tubular disminuida, aumento de la filtracin glomerular o alteracines en la composicion proteca que la hace filtrar ms facilmente. La cantidad no permite valorar la gravedad de la afeccin, pero su dosificacion peridoca si valora el progreso o regresin de la lesin. 1. Metodo Metodo colorimtrico cuantitativo para determinacin de protenas en orina y lquido cefalorraquideo. 2. Fundamento. La proteina presente en la muestra reacciona en medio cido con el complejo Rojo rojo de pirogalol y el molibdato originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectofotometria. 3. Muestras. Orina de 24 horas, orina ocasional lquido cefalorraquideo. Recoger la orina, medir el volumen y conservarla a 2-8 C. Estable 8 dias. 4. Condiciones de la muestra Se debe recoger orina de 24 horas u orina ocasional. En caso de orinas muy turbias es conveniente centrifugarlas.
5. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicion: 6. Tecnica Blanco ------1 ml patron 20 ul ---1 ml muestra ---20 ul 1 ml 580 nm, 600 nm 620 nm 1 cm 37 C frente a blanco de reactivo
Patron Muestra reactivo
Mezclar e incubar durante 10 minutos a 37 C leer la absorbancia contra el blanco Calculos: Proteinas de 24 horas:
Muestra Patron x volumen x 100 Muestra Patron x 100
Proteina en orina ocasional:
Protenas en lquido cefalorraquideo: Muestra Patron x 100 7. Valores de referencia Orina de 24 horas 30 140 mg/24 h (hasta 160mg/24h en mujeres embarazadas) Orina ocasional 25 mg/dl Lquido cefalorraquideo 15 45 mg/dl (en adultos de ms de 60 aos se extiende a 60 mg/dl) 8. Interferencias La hemolisis puede ser causa de resultados falsamente aumentados tanto en orina como en LCR. Los conservantes para orina como cido clorhdrico,, cido benzoco o timol pueden causar resultados falsamente disminuidos. Algunas drogas o medicamentos pueden interferir en la reaccin.
9. Correlacion diagnostica Hay condiciones fisiolgicas o benignas deonde se puede observar un aumento en la excresin urinaria de protenas como el ejercicio violento, la fiebre, hipotermia, el embarazo. La determinacin de protenas es importante en la deteccin de patologas renales, como en la disfuncin glomerular. El LCR es til para evaluar la permeabilidad de la barrera hematoenceflica en muchas enfermedades inflamatorias o infecciosas del SNC, como ocurre en la meningitis bacteriana, viral o de otros origenes.
TRANSAMINASAS
Generalidades El hgado contiene un gran numero de enzimas, de todas ellas las de mayor importancia clnica son la fosfatasa alcalina (Pa), las transaminasas (GOT ASAT Y GPT ALAT) y la CGT (gamaglutamiltranspeptidasa o GT). Las transaminasas son enzimas que catalizan las reacciones de transferencia de grupos aminos de un aminocido a un cetocido, para la sntesis de aminocidos distintos a los originales. Existen dos tipos de transaminasas, la transaminasa glutamicopirvica Alaninoaminotranferasa y la transaminasa glutamicooxaloactica Aspartatoaminotransferasa , estas enzimas estn localizadas particularmente en el hgado, corazn, etc; la GPT es una enzima exclusivamente citoplasmtica, en tanto que la GOT es una enzima binocular, es decir, que esta constituida por dos isoenzimas, una citoplasmtica y otra mitocondrial; se van a diferenciar por su movilidad elctrofortica, pH ptimo de accin, propiedades cinticas e inmunolgicas y a.a. que la componen. En los eritrocitos se encuentra la GOT soluble y en los leucocitos y reticulocitos estn los dos tipos enzimticos. La GPT es un enzima que tambin se encuentra en rin, corazn, msculo esqueltico pero en mayor concentracin en el Hgado, la GPT se puede encontrar en plasma, orina, LCR, y en eritrocitos pero en bajas concentraciones.
ASPARTATO AMINOTRASFERASA (GOT) 1. Metodo Prueba liquiUV 2. Fundamento Metodo cintico para la determinacin de la actividad de ASAT o GOT de acuerdo a las recomendaciones del panel de expertos de la IFCC. Sin activacin por piridoxalfosfato. 3. Muestra Suero o plama con heparina o EDTA. 4. Condiciones del paciente Tener en cuenta que los sueros hemolisados pueden alterar el resultado. Los sueros muy lipmicos o ictricos tambien pueden alterar el resultado. 5. Condiciones de la muestra Sueros que pueden ser recolectados con EDTA o Heparina, se debe tener en cuenta que los sueros hemolisados pueden alterar el resultado. Se debe tener un ayuno mnimo de 8 horas. Se recomienda analizarlas despus d una hora de tomada la muestra
6. Metodo de determinacion
Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin:
365 nm, 340 nm, 334 nm 1 cm 25, 30 37C frente a aire
7. Tecnica Temperatura Muestra Reactivo de trabajo 25-30C 200 1000 37C 100 1000
Mezclar y leer la absorbancia despes de un minuto y leer exactamente al minuto a los 2 y los 3 y hacer los clculos 8. Valores de referencia 25 C 18 U/L 15 U/L 30 C 25 U/L 21 U/L 37 C 37 U/L 31 U/L
Hombres hasta Mujeres hasta 9. Interferencias
Se deben descartar la muestras hemolizadas porque la GOT puede aumentar la actividad de la muestra. Las muestras de plasma tienden a ser ms turbias que las de suero por lo tanto pueden causar resultados errticos en la absorbancia. El oxalato inhibe la actividad de la enzima, no se debe usar como anticoagulante. La temperatura de incubacin tiene gran importancia en la determinacin enzimtica por lo cual de se recomienda utilizar la de 37C Cuando los valores de la GOT estn aumentados se recomienda realizar un perfil para funcin cardaca y heptica. Linealidad En caso de sobrepasar la linealidad diluir 0.1ml mas 0.9ml de solucin salina y multiplicar por 10. En casos de baja absorbancia es debido a que por ser una reaccin enzimtica se consume el NADH en la incubacin, en estos casos tambin se debe diluir. 10. Correlacion diagnostica Los valores aumentados de esta enzima suceden cuando hay muerte en las clulas del miocardio (infarto al miocardio), en las prximas 6-12h despus de la oclusin de una arteria coronaria; el grado del aumento es proporcional a la
magnitud del dao, osea que una lesin grande puede hacer elevar los valores >200 unidades, los valores mximos se ven en al cabo de 48h y recupera sus valores normales de 3-5 das. Las cifras de GOT tambin se ven aumentadas en lesiones agudas de las clulas hepticas como en las hepatitis virales y lesiones por intoxicacin con frmacos o txicos como tetracloruro de carbono. Los aumentos moderados se observan en las etapas finales de la cirrosis, ictericias obstructivas.
ALANINA AMINOTRANSFERASA (GPT)
1. Metodo Prueba liquiUV para alanina aminotransferasa. 2. Fundamento Es un mtodo cintico para la determinacin de la actividad de la GPT de acuerdo con las recomendaciones del panel de expertos de la IFCC sin activacin por piridoxalfosfato. Los mtodos para la medicin de GPT son muy semejantes a los de la GOT; el cido pirvico producido por la enzima a partir de alanina y cido alfacetoglutarato se transforma en cido lctico por efecto de la deshidrogenasa lctica. La transformacin simultnea de NADH en NAD va seguida por una disminucin de la absorbancia a 340nm. 3. Muestra Suero o plasma con EDTA o heparina. 4. Condiciones del paciente Tener en cuenta que los sueros hemolisados pueden alterar el resultado. Los sueros muy lipmicos o ictricos tambien pueden alterar el resultado. 5. Condiciones de la muestra Sueros que pueden ser recolectados con EDTA o Heparina, se debe tener en cuenta que los sueros hemolisados pueden alterar el resultado. Se debe tener un ayuno mnimo de 8 horas. Se recomienda analizarlas despus d una hora de tomada la muestra
6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 365 nm, 340 nm, 334 nm 1 cm 25, 30 37C frente a aire
7. Tecnica Temperatura Muestra Reactivo de trabajo 25-30C 200 1000 37C 100 1000
Mezclar y leer la absorbancia despes de un minuto y leer exactamente al minuto a los 2 y los 3 y hacer los clculos Linealidad Hasta 154mmol/L o 9gm/L (segn el Kit utilizado). Si sobrepasa la linealidad diluir 1 + 10 y multiplicar por 11 8. Valores de referencia 25C 5-23U/L 5-19U/L 30C 7-32U/L 7-26U/L 37C 9-43U/L 9-36U/L
Hombres hasta Mujeres hasta Precauciones
El Buffer/sustrato esta compuesto con sodio de azida 0.095% evitar contacto con mucosas y piel.
9. Interferencias Se deben descartar la muestras hemolizadas porque la GOT puede aumentar la actividad de la muestra. Las muestras de plasma tienden a ser ms turbias que las de suero por lo tanto pueden causar resultados errticos en la absorbancia. El oxalato inhibe la actividad de la enzima, no se debe usar como anticoagulante. La temperatura de incubacin tiene gran importancia en la determinacin enzimtica por lo cual de se recomienda utilizar la de 37C Cuando los valores de la GOT estn aumentados se recomienda realizar un perfil para funcin cardaca y heptica.
10. Correlacion diagnostica Las cifras de GPT pueden estar tambin ligeramente aumentadas en el infarto al miocardio, pero esto se debe posiblemente al dao del hepatocito secundario por alteracin en la circulacin. Los niveles sericos de GPT se encuentran considerablemente aumentados en las lesiones agudas de las clulas hepticas, a veces es mayor el aumento que la de la GOT, por esta razn se considera ms especfica la GPT en patologas del hgado. La determinacin de la GOT y GPT se encuentran aumentadas en las insuficiencias cardiacas y como consecuencia del estasis Heptico, si la insuficiencia es aguda se pueden elevar los valores de 1000 a varios miles U/L, lo que nos puede ayudar a diagnosticar un infarto del miocardio teniendo muy en cuenta no llegar a confundirse con una hepatitis viral ya que en estas tambin aumentan, se debe analizar todos los datos clnicos posibles para hacer un buen diagnostico y reconfirmar con enzimas como GT, CHE y GPT que son hepatoespecificas. En la ictericia heptica (hepatocelular) y la post-heptica se utilizan la GOT y GPT para diferenciarlas. En la post-hepptica es difcil encontrar valores superiores a 200U/L, en colestasis intra-heptica los niveles de GOT y GPT son anlogos a los de la ictericia post-heptica. En la hepatitis viral se observa una elevacin de ambas enzimas, en contraste con la cirrosis heptica que se elevan poco las GOT y disminuyen las GPT. El anlisis de estas dos enzimas es de til ayuda para detectar dao a nivel del hgado y determinar una hepatitis ya sea viral o por txicos como drogas. Los valores de La GPT, GOT, y la determinacin de la fosfatasa alcalina son los de mayor utilidad para el diagnstico de las hepatitis, los valores elevados de estas tres enzimas son caractersticos de las hepatitis agudas y enfermedades necrotizantes del hgado en contraste con la elevacin de la fosfatasa alcalina y disminucin de GOT y GPT que nos da indicios de una ictericia obstructiva. Nota Gran parte del xito de obtener buenos resultados en este tipo de determinaciones enzimticas esta en el correcto manejo del tiempo a la hora de la lectura (pues las enzimas actuaran hasta consumir el substrato), un buen trabajo organizado, un buen lavado del material y no dejar de lado el uso de los controles.
AMILASA
GENERALIDADES Las amilasas son enzimas contenidas en la secrecin pancretica las cuales catalizan la hidrlisis de los polisacridos tales como : El almidn, amilopeptina, glucgeno y sus productos parcialmente hidrolizados. Actua sobre las uniones 1-4 de las cadenas rectas del almidn y tambin sobre las uniones 1-6 glucosdicas de las cadenas ramificadas como las de amilopeptina y glicgeno. La - amilasa es una endoenzima que se denominaas porque todos los productos de la hidrlisis tienen la configuracin () en el C1 de la unidad de la glucosa reductora. La - Amilasa suele estar presente en el pncreas ( 200 mg/kg ) glndulas salivales, hgado, msculo, tejido adiposo, orina, sangre, heces, leche, semen, rin, cerebro, trompas de falopio, pulmn, intestino, bazo y corazn. 1. Metodo Prueba colorimtrica para amilasa alfa-1,4-glucan-4-glucanohidrolasa. 2. Fundamento La prueba colorimtrica utiliza un nuevo substrato, 2-cloro-4-nitrofenilmaltotrisido. Este substrato reacciona directamente con la amilasa y no requiere de enzimas de restriccin. La liberacin de 2-cloro-4-nitrofenol del substrato y el resultante incremento de absorbancia por minuto es directamente proporcional a la actividad de la amilasa en la muestra. 3. Muestra Suero o plasma heparinizado, orina No hay prdida de la actividad en 5 das a 4C.
4. Condiciones del paciente No requiere ayuno. Evitar la utilizacin del torniquete por ms de 30 segundos. 5. Condiciones de la muestra Puede utilizarse plasma heparinizado. No utilizar citrato, oxalato o EDTA porque inhiben la actividad de la enzima. Se recomienda el uso de pipetas automticas para la medicin de las soluciones para evitar la contaminacin de las mezclas con saliva. Si la determinacin excede el valor diluir la muestra con 500 ul de solucin salina y 100 ul de muestra y multiplicar por 6. 6. Metodo de determinacin Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 7. Tecnica Temperatura Muestra reactivo factor 25C 20 ul 1000 ul 9864 37C 10 ul 1000 ul 24820 Hg 405 nm, 400 nm 410 nm 1 cm 25 C 37C frente a agua destilada
Mezclar bien incubar por un minuto a la temperatura deseada. Leer la absorbancia a los 1, 2 y 3 minutos Y multiplicar por el factor correspondiente. 8. Valores de referencia Temperatura Suero, plasma Orina espontnea Orina 24 horas 25C 120 U/l 600 U/l 450 U/24h 37C 220 U/l 1000 U/l 900 U/24h IFCC 28-100 U/l <460 U/l <410 U/l
9. Correlacion diagnostica Los nivele elevados en el suero son siempre transitorios. Corresponden a episodios agudos y slo duran 3 das, pero en la orina persisten hasta por 10 das. Cuando hay ruptura del embarazo ectpico, se libera una gran cantidad de amilasay se produce una hiperamilasemia, dato til para su diagnstico. La lcera pptica perforada, aumenta los niveles de amilasa. En la pancreatitis aguda, sus niveles aumentan en las primeras 24 a 36 horas, obteniendo niveles normales al 3 da. 10. Interferencias La aplicacin de morfina produce contraccin del esfinter de Oddi y eleva los niveles hasta 900 unidades, dato que se debe tener en cuenta cuando se dosifica en pacientes con posible pancreatitis aguda y han recibido este analgsico.
AMILASURIA
En condiciones normales se elimina una cantidad de amilasa por la orina, comprendida entre 35 y 250 unidades, con cifras estremas en las 24 horas de 835 a 6150 unidades. Este factor hay que tenerlo en cuenta y valorar el tiempo que ha durado la recoleccin. La dosificacin urinaria a veces es ms ventajosa que la hemtica pues el suero solo se eleva durante unas 72 horas y en la orina persiste por varios das. Tambin se eleva en la parotiditis y litiasis parotidea y marcada disminucin en su eliminacin en el carcinoma pancretico, insuficiencia renal y pancreatitis crnica.
FOSFATASA ALCALINA
1. Metodo Metodo espectofotmetro con tampon AMP 2. Fundamento La fosfatasa alcalina cataliza en medio alcalino la transferencia del grup fosfato del 4-nitrofenilfosfato al 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP), liberando 4-nitrofenol. La concentracin cataltica se determina a partir de la velocidad de formacin del 4-nitrofenol, medido a 405 nm. 3. Muestra Suero o plasma Es estable al menos por 7 das a una temperatura de 2 a 8 C. 4. Condiciones del paciente El paciente debe tener un ayuno minimo de 8 horas. Debe permanecer en reposos 15 minutos antes de la toma de la muestra. El ejercicio puede alterar el resultado. 5. Condiciones de la muestra Puede trabajarse con plasma, pero este no debe contener floruros ni oxalatos. La utilizacin de EDTA inhibe la reaccin. El mejor anticoagulante es la heparina, los valores obtenidos en plasma y suero siempre son iguales 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 405 nm 1 cm 37C frente a vacio
7. Tecnica Reactivo de trabajo muestra 1000 ul 20 ul
Leer la absorbancia inicial y efectuar lecturas cada minuto por 3 minutos y promediar los resultados y multiplicar por el factor 2764. 8. Valores de referencia Adultos: 26 117 U/l 9. Interferencias Los anticoagulantes como el floruro, EDTA, oxalato y citrato interfieren en la reaccin. Las muestras hemolizadas interfieren por la fosfatasa alcalina eritrocitaria. 10. Correlacion diagnostica Se origina principalmete en los huesos y en el higado, por lo tnto esta bien establecida su relacin con la formacin osea, por eso cuando el crecimiento disminuye sus niveles bajan a cifras similares al del adulto. Cuando hay deficiencia de vitamina D, raquitismo, enfermedad de Paget, hiperparatiroidismo, fracturas en consoliacin y en metastasis seas, sus niveles aumentan. Tambin aumentan en la ictericia, en el abseso heptico.
CALCIO
1. Metodo Determinacin cuantitativa para calcio 2. Fundamento El calcio en medio neutro, forma un complejo de color azul con arsenazo III (cido 1,8-dihidroxi-3,6-disulfo-2,7-naftalenen-bis (azo)-dibenzenarsnico). La intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de calcio existente en la muestra. 3. Muestra Suero o plasma 4. Condiciones del paciente No requiere ayuno. 5. Condiciones de la muestra Debe ser separado lo antes posible de los hemates. No usar oxalato o EDTA como anticoagulante ya que interfieren en la determinacin de calcio. Orina efectuar la recogida de orina de 24 horas en recipientes libres de calcio. Antes de la recogida adicionar al contenedor 10 ml de cido ntrico al 50% Diluir la orina en agua destilada para el anlisis y multiplicar por dos. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 650 nm 1 cm 37C frente a agua destilada
7. Tecnica blanco ----1000 ul estndar 10 ul --1000 ul muestra --10 ul 1000 ul
Estndar Muestra reactivo
Mezclar e incubar 2 minutos. Leer la absorbancia frente a blanco de reactivo. El color es estable como minimo una hora. 8. Valores de referencia Suero o plasma: Adultos Nios Recin nacidos Orina: Adultos Nios 9. Interferencias Se recomienda utilizar material de plstico, si se utiliza material de vidrio debera lavarse con cido ntrico diluido con agua destilada. La mayoria de los detergentes destinados al uso del laboratorio contienen agentes quelantes. Trazas de los mismos, invalidan la determinacin. 10. Correlacion diagnostica El calcio es el mineral ms abundante e importante del cuerpo humano, el 99% se halla en los huesos. Una disminucin de los niveles de albmina causa una disminucin del calcio en suero. Niveles bajos de calcio pueden atribuirse ahipoparatiroidismo, pseudohipoparatiroidismo, deficit de vitamina D, mal nutricin o mala absorcin. La mayoria de las causas de hipercalcemia son debidas a enfermedades oncolgicas, intoxicacin por vitamina D, aumento de la retencin renal, osteoporosis, sarcosidosis, tirotoxicosis e hiperparatiroidismo.
8.5 10.5 mg/dl 10 - 12 mg/dl 8.0 13 mg/dl
2.1 2.6 mmol/l 2.5 3 mmol/l 2.0 3.2 mmol/l
50 300 mg/24h 80 160 mg/24h
MAGNESIO
1. Metodo Metodo colorimtrico calmagita. 2. Fundamento El magnesio forma un complejo de color prpura al reaccionar con la calmagita en medio alcalino. La intensidad del color es proporcional a la concentracin de magnesio. 3. Muestra Suero o plasma heparinizado Orina. Diluida 1:10 con agua destilada acidificada hasta 3.4 con HCL. 4. Condiciones del paciente No requiere ayuno 5. Condiciones de la muestra Utilizar material limpio 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 7. Tecnica blanco ----1000 ul estndar 10 ul --1000 ul muestra --10 ul 1000 ul 520 nm 1 cm 25 C frente a blanco de reactivo.
Estndar Muestra reactivo
Mezclar e incubar por 5 minutos La coloracin es estable por 30 minutos. 8. Valores de referencia 1.6 2. 5 mg/dl 9. Correlacion diagnostica La hipomagnesemia implica manifestaciones similares a la hipocalcemia. Niveles bajos son propios de trastornos gastrointestinales con malaabsorcin, perdida anormal de lquidos, tratamiento insulnico del coma diabetico, hipertiroidismo, tratamientos con diurticos, glomerulonefritis, pielonefritis entre otros. Los niveles altos implican una depresin del sistema nervioso central y la excitabilidad neuromuscular.
FOSFORO
1. Metodo Anlisis fotomtrico UV para la determinacin de fosforo. 2. Fundamento El fosforo reacciona con molibdato en un medio fuertemente cido para la formacin de un complejo. La absorbancia de este complejo leido en Uvcercano es directamente proporcional a la concentracin de fsforo. 3. Muestra Suero. 4. Condiciones del paciente No requiere ayuno. 5. Condiciones de la muestra No se debe usar plasma. Los anticoagulantes pueden causar resultados falsamente bajos. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 7. Tecnica blanco ---------1000 ul estndar ---10 ul ---1000 ul muestra ------10 ul 1000 ul 340 nm, Hg 334 nm 1 cm 20...25C frente a blanco de reactivo
Blanco Estndar muestra reactivo
Mezclar e incubar por lo menos 1 minuto a temperatura ambiente. Leer la absorbancia de la muestra frente a blanco de reactivo antes de 1 hora. 8. Valores de referencia Adultos Nios: 2.5 5.0 mg/dl 4.0 7.0 mg/dl
9. Interferencias Muestras ictricas y lipmicas requieren un blanco de muestra. Sueros lipmicos o hemolzados no deben ser usados. La contaminacin del material de vidrio es la mayor fuente de error en este anlisis. Por lo tanto se recomienda material de plstico. 10. Correlacion diagnostica Esta regulado por la hormona paratiroidea, la cual controla la excrecin urinaria y su movilizacin osea por medio de la vitamina D. Los valores elevados se encuentran en la insuficiencia renal crnica, la acromegalia, hipoparatiroidismo, fracturas evolutivas y la enfermedad de Addison. Las valores bajos se encuentran en el raquitismo, osteomalacia, infecciones de flora cocoide gram negativa en su forma septicmica y en la hipervitaminosis D.
CREATINCINASA (Ck)
Generalidades. Normalmente los msculos estriados tienen una alta concentracin, y muy poca se encuentra en el miocardio y el cerebro (CK). En el infarto de miocardio sus unidades se elevan entre 3 y 6 horas, despes de iniciado. Tiene su mxima concentracin entre las 24 y 48 horas, empezando a descender despes de dicho tiempo, lentamente, para retornar a la normalidad entre 3 y 6 dias despes. 1. Metodo Prueba lquida UV activada por NAC creatin kinasa. 2. Fundamento La cratina quinasa (CK) cataliza la fosforilacin del ADP por el fosfato de creatina, obtenindose creatina y ATP. La concentracin cataltica se determina, empleando las reacciones acopladas de la hexoquinasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, apartir de la velocidad de formacin del NADPH, medido a 340 nm. Mtodo estndar modificado de acuerdo con las recomendaciones del cmite ECCLS. 3. Muestra Suero o plasma heparinizado o con EDTA. 4. Condiciones del paciente Evitar actividad corporal intensa 48 horas antes de la extraccin de la muestra, porque produce una considerable elevacin de la concentracin enzimtica en plasma. En el momento de la extraccin evitar la contaminacin con el lquido del tejido muscular que puede elevar los valores de la CK.
5. Condiciones de la muestra La muestra de suero o plasma para Creatina quinasa es estable al menos 7 das a 2-8 Centigrados. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 7. Tecnica Precalentar el reactivo de trabajo a la temperatura ambiente minutos. 25C 30C 50 ul 1000 ul durante unos Hg 365 nm, 340 nm o Hg 334 nm 1 cm 25, 30 37C contra aire
Muestra Reactivo
37C 25 ul 1000 ul
Mezclar y transferir de inmediato a una cubeta. Insertarla en el portacubetas termotizado. Poner el cronmetro en marcha. A los 3 minutos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada minuto durante tres minutos. Comprobar que las diferencias entre absorbancias sean sensiblemente iguales. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio. Calculos. Considerando que el coeficiente de absorcin molar del NADPH a 340 nm es 6300, se deducen las siguientes frmulas para calcular la concentracin cataltica: Macro: Micro: A/min x 4127 = U/L A/min x 3333 = U/L
8. Valores de referencia Temperatura de reaccion 25 C 30 C 37 C Hombres U/l 10-80 15-125 24-195 Mujeres U/l 10-70 15-110 24-170
9. Interferencias La hemlisis 10. Correlacion diagnostica Se encuentra elevada en la distrofia muscular progresiva. Traumatismos musculares, por aplicacin de inyecciones y relajantes musculares, e intervenciones quirurjicas elevan sus cifras ligeramente. El valor clinco est en una elevacin manifiesta y su relacin con el CK-MB y las otras enzimas que se alteran en el infarto.
CREATINCINASA FRACCION MB
Generalidades. Estudios electroforeticos demostraron que tiene dos cadenas M y B . la cadena M deriva su nombre del msculo esqueltico y la B de Brain ( cerebro ), tejido nervioso. la combinacin de las cadenas origina la CK-MB, reconociendose 3 isoenzimas, que toman el nombre segn el sitio donde predomina. Musculo esqueletico Cerebro Miocardio CK-MM. CK-BB. CK-MB.
La CK-MB predomina en el miocardio y sus niveles se elevan cuando existe proceso necrtico del msculo cardaco. Tanto la enzima original CK como su isoenzima CK-MB, se elevan desde las 3 hasta las 6 horas post-infarto, las concentraciones mximas son a las 12-24 horas, recuperndose los valores normales entre las 24 y 72 horas. La CK-MB aumenta notablemente en el infarto. Cardaco y lo hace progresivamente segn su extensin y evolucin clnica.
Metodo Prueba Humazym M-test Mtodo por inmunoinhibicin para CK-MB. Fundamento La prueba se basa en una determinacin enzimtica de CK acompaada de un mtodo de inmunoinhibicin. Un anticuerpo es incoroporado al reactivo el cual se une especificamente a la subunidad M, inhibiendo la actividad enzimtica de esta subunidad B. Debido a que la concentracin de CK-BB en circulacin es mnima, la actividad remanentre multiplicado por el factor 2, representa la actividad de la izoenzima CK-MB. Muestra Suero, o plasma heparinizado o con EDTA.
Condiciones del paciente Evitar actividad corporal intensa 48 horas antes de la extraccin de la muestra, porque produce una considerable elevacin de la concentracin enzimtica en plasma. En el momento de la extraccin evitar la contaminacin con el lquido del tejido muscular que puede elevar los valores de la CK-MB Condiciones de la muestra La Concentracion de CK total en la muestra debe ser inferior o igual a 1000 U/L. Si es superior, diluir el suero con NaCl 150 mmol/L. La CK-MB en suero es estable al menos 7 dias a 2-8 C. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: Tecnica muestra Reactivo 40 ul 1000 ul Hg 334 nm, 340 nm, HG 365 nm 1 cm 25C, 30C 37 C contra aire.
Mezcle e incube por 10 minutos a temperatura ambiente lea la abosorbancia y luego lea exactamente a los 5 minutos. Calcular la diferencia y multiplicar por el factor 8254. Valores de referencia 25 C CK total hombres mujeres CK-MB >80 U/l >70 U/l >10 U/l 30C >130 U/l >110 U/l >16 U/l 37C >195 U/l >170 U/l >25 U/l
La actividad CK-MB esta en un rango entre 6 y 25 % de la actividad de la CK total.
Correlacion diagnostica Presta una gran utilidad en los casos en que la CK se encuentra notablemente aumentada por causas ajenas al infarto y la CK-MB esta dentro de los lmites normales. Esta aumenta notablemente en los infartos cardicos.
LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)
1. Metodo Prueba lquida para deshidrogenasa lctica. 2. Fundamento Mtodo modificado basado en las recomendaciones del SCE. 3. Muestra Suero o plasma con EDTA o heparinizado. 4. Condiciones del paciente Extraer la sangre despus de 8 horas de ayuno para evitar muestras lipmicas. Seperar el suero antes de los 30 minutos. El uso de torniquete no se debe prolongar de 60 segundos. 5. Condiciones de la muestra No se recomienda congelar la muestra, por prdida de la actividad. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 7. Tecnica 25C 30C 20 ul 1000 ul 37C 10 ul 1000 ul Hg 334 nm, 340 nm, HG 365 nm 1 cm 25C, 30C 37 C contra aire.
muestra reactivo
Mezclar y leer la absorbancia despus de 1 minuto y leer luego a los 1, 2 y 3 minutos hacer un promedio y multiplicar por el factor 16345
8. Valores de referencia temperatura adultos hombres mujeres Nios 12meses 25C 120-240 U/l 30C 160-320 U/l 37C 225-450U/l IFCC <243 <244 Hasta 500 U/l
9. Interferencias El oxalato y el citrato interfieren en la reaccin. 10. Correlacion diagnostica En el infarto al miocardio sus niveles se aumentan entre las 24 48 horas y tiene su mxima concentracin a los 2 4 das, permaneciendo elevada hasta por 8 14 das.
TROPONINA
1. Metodo Prueba inmunocromatogrfica en un paso para la deteccin de la troponina I cardaca humana en el suero o plasma. 2. Fundamento La prueba emplea un conjugado de anticuerpo monoclonal anti cTnl y colorante en fase mvil, anticueropos anti-cTnl (ratn), fijados en la lnea de prueba, y anticuerpos anti-ratn IgG (cabra) en la lnea de control. Como la muestra fluye por la almohadilla absorbente, la troponina humana I se une al conjugado anti-cTnl-colorante para formar un inmunocomplejo, el cual se liga a los anticuerpos anti-cTnl en la lnea de prueba y produce una lnea de prueba rojo-violeta(T). El exceso de conjugado reacciona en la lnea de control formando una segunda lnea rojo-violeta de control C, para demostrar el correcto funcionamiento. 3. Muestra Suero o plasma 4. Condiciones del paciente Extraer la sangre despus de 8 horas de ayuno para evitar muestras lipmicas. Seperar el suero antes de los 30 minutos. El uso de torniquete no se debe prolongar de 60 segundos. 5. Condiciones de la muestra Las muestras que contienen partculas de turbidez pueden dar resultados inconsistentes. Muestras lipmicas o hemolticas no deben ser procesadas. 6. Tecnica Lleve el test a temperatura ambiente Dispense 2 gotas de la muestra enla ventana S.
Evite la formacin de brbujas en la ventana. Lea los resultados a los 15 minutos. Las muestras positivas desarrollan una lnea de prueba T en los primeros minutos. No lea despus de 15 minutos para evitar errores. 7. Valores de referencia Negativo Positivo 8. Interferencia La prueba no puede determinar niveles inferiores a 0.5 ng/ml de troponina I. El resultado negativo no excluye la posibilidad de un infarto al miocardio. Debe considerarse repetir la prueba despus de 12 horas de iniciado el dolor.
HEMOGLOBINA GLICOSILADA
1. Metodo Mtodo rpido de separacin por resina de intercambio inico. 2. Fundamento La formacin de glicohemoglobina ocurre irreversible y progresivamente en los eritrocitos a travs de los 120 das de vida normal de estas clulas. Dado que la concentracin de glicohemoglobina en el eritrocito refleja el nivel promedio de glucosa en la sangre de las 4 a 6 semanas anteriores y es estable por la vida de los eritrocitos, la medicin es proporciona una prueba de gran valor para evaluar el control a largo plazo de los pacientes diabticos. 3. Muestra Sangre total con EDTA. 4. Condiciones del paciente Ayuno de 8 horas. 5. Condiciones de la muestra No debe utilizarse muestras hemolizadas para no alterar el resultado. 6. Metodo de determinacion Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medicin: 415 nm Hg 405 nm 1 cm 25C frente a agua destilada.
7. Tecnica Etapa de hemlisis Reactivo lisante 500 ul Mezclar e incubar por 5 min Determinacin de HbA1 Pipetear 100 ul de hemolisado Tapar a 1 cm aproximadamente Mezclar por 5 min Leer la absorbancia Determinacin de Hb total Pipetear 20 ul de hemolisado Mezclar cuidadosamente Leer la absorbancia HbA1= F X HbA1 muestra Hb total 8. Valores de referencia pacientes Metabolismo normal Diabticos descontrolados 9. Correlacion diagnostica La dosificacin de la hemoglobina glicosilada es importante en un diabtico como la glucosa. %HbA1 4.5 7.0 % >8.5%
Muestra 100 ul 15C 25C reactivo
5 ml de agua destilada
BIBLIOGRAFIA
Manual de quimica clinica. Colegio mayor de Antioquia Insertos de las tcnicas.
Elabor Carolina Hoyos Velsquez Cargo: Bacteriloga FECHA: XXXXXXXXXXXX
Revis XXXXXXXXXXXXXXXXXX Cargo: XXXXXXXXXXXX
Aprob XXXXXXXXXXXXXXXXX Cargo: XXXXXXXXXXXX
Fecha: XXXXXXXXXXXXXX Fecha: XXXXXXXXXXXX
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