Protocolo de Extraccin de Protenas. 1.- Extraer tejido y colocar en el homogeneizador vidrio-vidrio (Potter), previamente enfriado y en hielo. 2.

- Agregar buffer de homogenizacin frio, en la razn de un volumen de tejido es a 5 volmenes de buffer (1:5). Se muele el tejido mediante 30 golpes, en hielo. 3.- Agregar inhibidor de proteasas. Agregar 0.01 volumen de inhibidor de proteasas 100X del volumen obtenido, en hielo. (El inhibidor se puede agregar en el paso 2) 4.- Una vez homogenizado, se centrifuga la muestra a 14000g por 10min. a 4C. 5.- Rescatar sobrenadante 6.- Calcular concentracin de protenas de la muestra, con BCA o Bradford. 7.- Agregar buffer de carga 5X 8.- Recalcular concentracin de protenas de la muestra. 9.- Hervir muestra 5 minutos. 10.- Congelar a -20C.

Buffer Homogenizacin. Solucin Tris-HCl pH 7.4 (3mM) Sacarosa (320mM) Stock 1M 2M Para 10mL 50 L 1.6mL