INTRODUCCION:

Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, hidrogeno y oxígeno. Todos los
carbohidratos son azucares pequeños, solubles en agua (glucosa y fructosa, por ejemplo) o bien
cadenas, como el almidón y la celulosa, que se elaboran enlazando subunidades de azúcar. (1)

En la naturaleza los carbohidratos se presentan como monosacáridos, oligosacáridos y

polisacáridos. Los monosacáridos se clasifican en aldosas si tienen un grupo aldehído y cetosas si
tienen un grupo cetona. Todos los monosacáridos, aldosa o cetosas y la mayoría de los disacáridos
son azucares reductores (excepto la sacarosa) porque uno de sus dos carbonos anoméricos no
está formando enlace glucosídico. (2)

El método DNS es una técnica colorimétrica que emplea un procedimiento que se basa en una
reacción redox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra, seguido
de la determinación espectro fotométrica a 540nm de los azucares reductores.

Esta técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentación o
para cuantificar los productos de una reacción enzimática. Este método ha sufrido varias
modificaciones a través de los años para adecuarse al análisis de diferentes materiales y su
principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un método
espectrofotométrico

El método del DNS no es recomendable utilizarlo para la determinación de azúcares reductores en

muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de fermentación que la contengan.
Estudios de Otero y colaboradores muestran dispersión en la determinación de azúcares
reductores en mieles por el método del DNS con la modificación de Miller (3)

MATERIAL:

 1 baño maría
 1 triple
 1 mechero
 3 vidrios de reloj
 1 piseta con agua
 1 espátula
 Balanza semianalítica
 Celdas
 1 probeta de 100 mL
 1 pipeta de 5 mL
 1 matraz aforado de 50 mL
 27 tubos de ensayo
 1 gradilla
 1 vaso de pp de 250 mL
 3 vasos de pp de 50 mL
 1 propipeta
 1 agitador magnético
 1 micropipeta de 100 a 1000 µL
REACTIVOS:

 Glucosa
 NaOH
 Tartrato de Na-K
 Ácido 3,5 dinitrosalicílico
 2 Jugos

METODOLOGIA:

Preparación del reactivo del ácido 3,5 dinitrosalicílico: en frío

Se pesaron 0.5 g de ácido 3,5 dinitrosalicílico, 15g de tartrato de Na-K y 0.8 g de NaOH. Se disolvió
el NaOH en 20 ml de agua y se añadió en agitación el tartrato de Na-K lentamente. Se completa
con agua hasta 40 ml y se comenzó a añadir lentamente el ácido 3,5 dinitrosalicílico. Se dejó en
agitación hasta que se incorporen totalmente todos los reactivos y se enrasó a 50 ml.

Desarrollo de la reacción del DNS

En tubos de cristal de 10 ml se adicionó 0.5 ml de muestra y 0.5 ml del reactivo de DNS. Los tubos
se colocaron en baño de agua a 100 ºC por 5 min. Se enfriaron hasta temperatura ambiente y se
le añadió 5 ml de agua destilada. Se agitó y se realizó la lectura a 540 nm en espectrofotómetro.

Curva patrón de Glucosa

Se preparó la solución patrón de Glucosa a las siguientes concentraciones: 0.5, 0.9, 1.3, 1.5 y 1.9
g/L. Se desarrolla la reacción con el reactivo DNS.

Para poder preparar estas soluciones se realizó una solución madre con una concentración de 10
g/L

RESULTADOS:

Tabla 1. Curva Patrón elaborada en diferentes concentraciones con sus respectivas absorbancias.
Resultados de la concentración de Glucosa en g/L por el método de DNS en frío.

Absorbancias
Concentración 1 2 3 Promedio
0.5 g/L 0.056 0.154 0.16 0.12333333
0.9 g/L 0.253 0.418 0.243 0.30466667
1.3 g/L 0.378 0.341 0.36 0.35966667
1.5 g/L 0.43 0.453 0.435 0.43933333
1.9 g /L 0.731 0.635 0.65 0.672
Se realizó un estudio de determinación de azúcares reductores totales en soluciones puras de
glucosa.
Grafica 1. Grafica de la curva patrón, con una R2= 0.9547, lo cual es un alto coeficiente de
correlación para las curva patrón de Glucosa utilizando el método del DNS en frío.

Curva Patron
0.8
0.7
y = 0.1221x + 0.0088
0.6 R² = 0.9547
Absorbancias

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 1 2 3 4 5 6
Concentraciones g/L.

Utilizando este procedimiento el DNS en frío mostró una desviación pequeña, ya que el método del
DNS en frío mostró altos coeficientes de correlación g/L de azúcares.

La desviación de la curva patrón, puede haber sido causada por contaminantes presentes en el jugo
que no son azucares, o alguna contaminación en el material manejado.

Tabla 2. Resultados de la concentración de azúcares reductores totales al 3% por el método de

DNS en frío.

Tabla 2.
Absorbancias 1 2 3 Promedio
Jugo de manzana 0.068 0.072 0.069 0.069666667
Jugo de Guanábana 0.074 0.071 0.078 0.074333333
Se estableció un procedimiento para la determinación de reductores totales en jugos de dos
diferentes sabores de la marca Ades que se venden alrededor del mundo, se determinaron por el
método del ácido 3,5 dinitrosalicílico.

Tabla 3. Concentración calcula por medio de y= 0.1221x + 0.0088, de la curva patrón de la

Glucosa.

Jugos Concentración
Jugo de guanábana 0.53671853
Jugo de manzana 0.4984985
0.498 g/L x Factor de dilución

0.498 – 3%

X ----100% x= 16.6 g/L

7.5 ---200 mL

x------1000 mL x= 37.5 gramos, en el caso del jugo de manzana.

0.53671853----3%

x----------------100% x= 17.89 g/ L.

7.4---200 mL

x------1000 mL x= 37 gramos, en el caso del jugo de guanábana.

El método DNS sirve para calcular la concentración de azúcares reductores en distintos materiales,
en este caso se utilizaron jugos. En el experimento realizado nos da que el jugo de manzana tiene
37.5 g de azúcar reductor/L y el jugo de guanábana 37 g de azúcar reductor/ L. . En la tabla
nutricional del jugo menciona que tienen un total de 20 gramos de azucares por 200 mL, en este
caso se podría mencionar que contienen 37.5 g/mL de azucares reductores presentes en la muestra
de jugo de manzana y 37 g/L en el jugo de guanábana.

El procedimiento se basa en una reacción redox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores
presentes en la muestra. El método del DNS no es recomendable utilizarlo para la determinación
de azúcares reductores en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de
fermentación que la contengan.

Los valores obtenidos, pueden ser válidos, ya que son valores más pequeños que la concentración
original de azucares que es 7.4 y 7.5. Recordando que se disminuyó la concentración de los jugos,
para así poder utilizar la curva patrón elaborada de Glucosa. (Grafica 1).

CONCLUSIONES:

En esta práctica se realizó un procedimiento para la determinación de azúcares reductores totales

en jugos comerciales (manzana y guanábana) por el método del DNS. Este procedimiento del DNS
se llevó a cabo en frío lo que demostró un alto coeficientes de correlación de los azúcares
reductores totales en las muestras como se observa en los resultados, esto se debió a que este
procedimiento se basa en una reacción redox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores
presentes en las muestras de jugos.

También se realizó una curva patrón que se elaboró con diferentes concentraciones de Glucosa y
se pudo observar que la absorbancia de esta es directamente proporcional a la concentración de
azucares presentes en las soluciones. Utilizando el procedimiento del DNS en frío para calcular una
curva patrón de glucosa se observó que la gráfica mostró una desviación pequeña al tener una R2=
0.9547, esta desviación en la curva patrón se pudo deber a los contaminantes presentes en el jugo
que no son azucares, o alguna contaminación en el material manejado.

BIBLIOGRAFIA:

(1) Audesirk, Audesirk, y Byers, 2003

(2) Manual de técnicas analíticas, ICIDCA, 1974.

(3) Otero M. A. y colaboradores, Limitaciones del método del ácido 3,5 DNS en mieles finales,
Revista ICIDCA No 1, XX, 1986