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DETERMINACIÓN DE VITAMINA C MEDIANTE EL MÉTODO FOTOMÉTRICO CON 2,4

DINITROFENILHIDRAZINA

DERMINATION OF VITAMIN C BY THE PHOTOMETRIC METHOD WITH 2,4


DINITROFENILHIDRAZINA

Anyi S. Marzola1, Greisy P. Yepez1, Cerly Y. Negrete1, Emanuel Misa1, Daniela Cuadrado1,

Esilda Torres1

RESUMEN

En el presente informe de laboratorio de análisis de alimentos se realizó la prueba de

determinación de vitamina c, mediante el método fotométrico 2,4 dinitrofenilhidrazina (2,4 dnph),

utilizando como muestra un fruta de guayaba dulce. Al realizar los procesos de oxidación y

condensación respectivamente se llevó a medir la absorbancia de la muestra, del blanco

muestra, la absorbancia de la solución patrón y del blanco de la solución patrón, para así utilizar

los datos obtenidos en la ecuación que nos da la guía de la práctica y determinar el contenido

de vitamina c de la muestra de guayaba dulce; arrojándonos un valor de 714.29mg/100g.

PALABRAS CLAVES: 2,4 Dinitrofenilhidrazina, ácido ascórbico, fotométrico, guayaba.

1. INTRODUCCIÓN

La guayaba es una fruta tropical procedente de los países del Caribe, América Central y del

Sur. Cuando está madura, esta fruta desprende un aroma profundo que se hace irresistible a

cualquier paladar. Una de las propiedades más destacadas de la guayaba es su alto contenido

en vitamina C, ya que por cada 100 gramos contiene alrededor de 60 mg de vitamina

1
Estudiantes Universidad de Córdoba, Facultad de Ingenierías, Programa de Ingeniería de
Alimentos, Análisis de Alimentos, Sede Berastegui
C, cantidad seis veces mayor que la de otras frutas cítricas como la naranja o el limón (Ferreiro

2017).

La vitamina C es una vitamina hidrosoluble, sensible al calor. Es un cofactor enzimático

implicado en diversas reacciones fisiológicas (hidroxidación). Es necesario para la síntesis del

colágeno y de los glóbulos rojos, y contribuye al buen funcionamiento del sistema inmunitario.

También juega un papel en el metabolismo del hierro. El ácido ascórbico es un azúcar con

propiedades antioxidantes. Su aspecto es de polvo o cristales de color blanco-amarillento. El

nombre "ascórbico" procede del prefijo a (que significa "no") y de la palabra latina escorbutus

(escorbuto), una enfermedad causada por la deficiencia de vitamina C, que es necesaria para la

síntesis correcta del colágeno en los seres humanos. Fibras de colágeno que permiten

mantener la estructura de los tejidos. Los primates, incluido el ser humano, han perdido la

capacidad de sintetizar el ácido ascórbico y deben obtenerlo de la comida (Fernández 2016).

Existen muchos métodos para la determinación de ácido ascórbico, unos basados en la

formación de un compuesto coloreado, mediante la adición de un reactivo como es el caso de

2,4- Dinitrofenilhidrazina el cual es ampliamente utilizado. El procedimiento depende del

principio de la oxidación de ácido L-ascórbico en ácido dehidroascórbico y 2,3-dicetogulónico,

seguido de la reacción con 2,4-dinitrofenilhidrazina. Después del tratamiento con ácido

sulfúrico, un producto de color rojo parduzco se forma cuya absorbancia se mide a 520 nm. La

absorbancia del color formado es proporcional a la cantidad de ácido ascórbico (más ácido

dehidroascórbico) presentes en la solución antes de la oxidación. Además existen otros

métodos como solución de iodo decimo normal (Martinez, Herrera, & Jaraillo 2015).

El objetivo de la práctica fue determinar la cantidad de vitamina c en una muestra de alimento

(guayaba) mediante el método fotométrico 2,4 dinitrofenilhidrazina.

2. MATERIALES Y MÉTODOS
Para la realización de la práctica de determinación de vitamina C por el método de 2,4

dinitrofenilhidrazina (2,4-DNPH) se utilizó una guayaba dulce, la cual según la literatura

contiene 228.3 mg/100g de vitamina C.

Para la preparación de la muestra se obtuvo el extracto liquido de la pulpa luego de macerar y

posteriormente filtrar; pesando de esta manera 0.11 g de muestra; se introdujo en un beaker al

cual se le añadieron 20 mL de ácido oxálico al 0.5% homogenizando, para ser transvasado a un

balón aforado de 50 mL y luego terminar de aforar.

Para el procedimiento de oxidación se tomaron 25 mL de la solución de la muestra y se llevaron

a un embudo de separación, al cual se le añadieron 3 gotas de 2,6-diclorofenolindofenol para

presenciar una coloración rosada el cual es índice de la oxidación total, se agitó suavemente y

se procedió a realizar la separación. Se realiza un lavado de la fase etérea con 7.5 mL de ácido

oxálico, se agitó y recogió en el balón aforado, se repite el lavado pero con 5 mL de ácido

oxálico.

Para la condensación se utilizaron balones aforados de 25 mL y se utilizaron 10 mL de la

solución de muestra y de patrón previamente oxidadas; para la muestra y el blanco se

adicionaron 5 gotas de tiourena y a la muestra 2,5 mL de DNHP, se agitó y se llevó a

calentamiento durante 1 hora a 37°C; dejando el blanco a temperatura ambiente; pasado el

tiempo ambos se llevaron a un baño de hielo durante 10 minutos, adicionando 2,5 mL de DNPH

al blanco, se aforaron los balones con ácido sulfúrico al 25% y por último se midió la

absorbancia en el espectrómetro a 520nm.

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Para obtener los μg de vitaminas C presentes en el volumen tomado de la guayaba para la

condensación con DNPH, se aplica la siguiente fórmula:


𝐴𝑀−𝐴𝑀𝑃𝐿
Vit. C = 𝑅
𝐴𝑃−𝐴𝑃𝐵𝐿

Donde:

AM = absorbancia de la muestra

AMBL = absorbancia del blanco muestra

AP = absorbancia del patrón

APBL = absorbancia del blanco patrón

R = μg de vit. C en los mL de patrón usados para la condensación

Los valores obtenidos en el espectrofotómetro para cada variable fueron:

AM= 0,098

AMBL= 0.048

AP= 0,084

APBL= 0,049

R= 0,05 mg (1000μg)= 50μg/mL; utilizamos 10mL; 500μg/mL.

Al reemplazar los valores en la ecuación obtenemos:

0,098−0,048
Vit. C = 0,084−0,049
500

Vit. C= 714.29mg/100g

El contenido de vitamina c en la muestra de guayaba dulce utilizada es de 714.29mg/100g,

comparando con la USDA (departamento de agricultura de los estados unidos) la guayaba

dulce contiene 228.3 mg/100g, de vitamina c, por lo que se infiere que el resultado obtenido en

la práctica de laboratorio de análisis de alimentos es erróneo, esto debido a errores cometidos


a la hora de realizar la práctica ya sea en el punto de oxidación al realizar el lavado o en el

punto de condensación, generando inconvenientes en la lectura de la muestra en el

espectrofotómetro y por ende, como se aprecia, en el resultado final.

4. CONCLUSIONES

A partir de la práctica realizada en el laboratorio de análisis de alimentos de la universidad de

córdoba, se determinó el contenido de vitamina C en una muestra de guayaba siguiendo a

cabalidad cada uno de los procedimientos especificados en la guía, por ser la guayaba una

muestra solida fue algo difícil obtener el zumo de dicha fruta, ya que esta tuvo que ser filtrada

varias veces.

En los resultados obtenidos logramos evidenciar que se vio una gran variación entre lo que nos

indica la literatura y el resultado obtenido en laboratorio, lo cual nos permite concluir que

tuvimos algunos errores al momento de realizar la solución de la muestra, por ende al momento

de la lectura de la muestra en el espectrofotómetro se dieron inconvenientes que se vieron

reflejados el resultados desacertados de vitamina C en la guayaba.

5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Ferreiro, C., La guayaba: una fruta insuperable en vitamina C (en línea), 2017.
https://biotrendies.com/la-guayaba-una-fruta-insuperable-en-vitamina-c.html. Acceso: 20 de julio
(2019).

Fernández, L. Evaluación de la concentración de ácido ascórbico en cocona ( solanum


sessiliflorum dunnal), por fotometría. Universidad nacional "Toribio rodríguez de Mendoza",
Perú, marzo de 2016, p2-3.
http://repositorio.untrm.edu.pe/bitstream/handle/UNTRM/762/FIA_192.pdf?sequence=1&isAllow
ed=y. Acceso: 20 de julio (2019).
Martínez, J., Herrera, O. & Jaramillo, M. Determinación de vitamina c a partir de dos muestras
de zumo de naranja y jugo comercial. (En línea), 2015.
https://es.slideshare.net/camilovalenmar/determinacin-de-vitamina-c-a-partir-de-dos-muestras-
de-zumo-de-naranja-y-jugo-comercia. Acceso: 20 de julio (2019).

U.S. DEPARTMENT OF AGRICULTURE (En línea), 2019. https://fdc.nal.usda.gov/fdc-


app.html#/food-details/341568/nutrients. Acceso: 20 de julio (2019).

ANEXO: