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Áurea Simón Soro

Vanesa Macías Caño


Seminario de Infecciones fúngicas
2010 - 2011
CARÁCTERÍSTICAS GENERALES
B. dermatitidis

http://visualsunlimited.photoshelter.com/search?
Colonias de Blastomyces
dermatitidis en agar sangre
incubadas a 30ºC

http://visualsunlimited.photoshelter.com/search?
I_DSC=Blastomyces+dermatitidi&I_DSC_AND=t&_ACT=search
FILOGENIA
CARÁCTERÍSTICAS
Phylum
GENERALES
Crecimiento Éspora Patógeno Hábitat Tipo de Nota
asexual humano micosis clínica
Ascomycota Dimórfico conidia Blastomyces Ubicua Sistémica Inhalación
(Ajellomyces)

http://visualsunlimited.photoshelter.com/search?
dermatitidis

Fase asexual (Conidias)


Blastomyces dermatitidis

Fase sexual (Ascosporas)


Ajellomyces dermatitidis
CICLO SEXUAL / ASEXUAL
ASPECTO DE LA COLONIA

http://www.gefor.4t.com/about.html
1 2

http://microbiology.mtsinai.on.ca/mig/difungi/dffig14.shtml
BLASTOMICOSIS
• La blastomicosis, enfermedad de Gilchrist o
blastomicosis norteamericana
– Enfermedad piogranulomatosa ν
– Afecta: humanos, perros, gatos…
– Producida por el B. Dermatitidis
– En suelo y madera
– Endémico: norteamérica
– Diagnóstico diferencial
histoplasmosis

http://visualsunlimited.photoshelter.com/search?
I_DSC=Blastomyces+dermatitidi&I_DSC_AND=t&_ACT=search
FORMAS CLÍNICAS
1.- blastomicosis autolimitada aguda:

– rara
– infección respiratoria leve y autolimitada.

2.- blastomicosis pulmonar:

– infección progresiva que requieren tto. JAVMA, Vol 231, No. 8, October 15, 2007
– Similar a bronconeumonía (infección bronquial y pulmonar)
– comienzo insidioso y es crónica
– síntomas inespecíficos, tos seca o productiva, dolor torácico, disnea
(dificultad en la respiración), fiebre, escalofríos y sudoración abundante.
– En algunos casos produce distrés respiratorio del adulto.

3.- blastomicosis diseminada extrapulmonar:

– por diseminación hematógena (a través de la sangre)


– provoca infección local de diferente órganos, piel, tejido subcutáneo y
mucosa oral o nasal, aparato génito urinario (próstata, testículos y
riñones), huesos (vértebras, epífisis y médula ósea), ganglios linfáticos,
encéfalo, etc.
EPIDEMIOLOGÍA
B. dermatitidis
• Incidencia 1-2 casos/100.000 personas en áreas endémicas

• La fase miceliar saprofítica del hongo en el medio ambiente


produce conidiosporas (forma infectante).

• El hábitat: suelos húmedos +  materia orgánica, umbríos y


con pH<6 y mayor si el suelo ha sido removido.

• Por tanto, en márgenes de los ríos y lagos con árboles caídos.

• Asociado a construcción de cabañas o mulles en estas zonas.

• Es muy frecuente en riveras y zonas lacustres del centro y


sudeste de EEUU y Canadá. νWisconsin 1986 a 1995
1,4 casos/100.000 habitantes

• En Canadá: sudeste de Ontario alrededor del área de Kenora


 suelos húmedos y acídicos.

• La blastomicosis tiene distribución mundial (incluye África)


http://mushingmum.blogspot.com/
Incidencia B. Dermatitidis
en norteamérica

www.google.es/minimaps/blastomices%20red
FACTORES DE VIRULENCIA
B. dermatitidis
F. DE VIRULENCIA H.
DIMÓRFICOS

Brandhorst, TT y otros. (1999) Dirigida gen interrupción revela una adhesina indispensable para patogenicidad de dermatititdis
Blastomyces. J. Exp. Med. 189, 1207-1216

Bundock, P. et al. (1995), Trans-reino de T-ADNla transferencia de Agrobacterium tumefaciens a Saccharomyces cerevisiae.
EMBO J. 14, 3206–3214

Finkel-Jimenez, BE et al. (2001) Down-regulation of phagocyte TNF-α production by the WI-1 adhesin imparts pathogenicity on
Blastomyces dermatitidis. J. Immunol. 166, 2665–267
BAD 1

Vinculación de BAD1 en
Blastomyces dermatitidis (Bd),
con la transición de fase de
molde para la levadura, la
adhesión, la modulación y la
evasión de la respuesta inmune
http://botit.botany.wisc.edu/toms_fungi/jan2001.html
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11755082
VACUNA B. dermatitidis
• Vacunas atenuadas recombinantes  Delección en la adhesina
BAD1 (F. Virulencia indisp.)
– Vacunación en an. de exp.  superv a  plazo
– Superv. en un 90% en una expos. a una inf. Pulm. letal
– Estudian las T CD4+ ( resp.) > L. T y L.B (no en inmunodef)
• Producción de TNF<α > IFN γ
• Producción de especies reactivas de O2> NO
– Deficiencias en T  nº granulomas 3x que los salvajes
– Ratones wld y μ deficientes  granulomas solo levadura muerta de la
vacuna sin difundir a otros tejidos

www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC163319/pdf/401314.pdf
VACUNA B. dermatitidis
Importancia de CD - 28
• L. T CD4+ y CD8+  principal respuesta frente al
hongo
• CD28 -/- estudios de interrupción de la
coestimulación y mantenimiento de células T (tipo I)
dependientes de citokinas
– Si se les vacuna a estos ratones  protección 3 meses
– Inducción de respuesta óptima protectora en L. T
– Prescindible para el mantenimiento L. T memoria

Marcel et all. CD28 Is Required for OptimalF Induction, but Not Maintenance, of Vaccine-
Induced Immunity to Blastomyces dermatitidis. nfection and Immunity, November
DIMORFISMO B.
• Esto le
dermatitidis
permite infectar a individuos
inmunocompetentes y también causar
enfermedades respiratorias y sistémicas

• Medoff demostró mediante el tratamiento del


micelio con el inhibidor p-(PCMS), previene la
conversión a la forma de levadura, 
muestra que la inoculación l ya no puede
causar enfermedad en un modelo de
infección de ratón

• Además, las conidias son vulnerables a la


muerte y fagocitosis por los macrófagos y
neutrófilos  la conversión a la forma de
levadura produce un grado deprotección
α - (1-3)GLUCANO
• Es un componente de la pared celular (genes no
identificado)
– Se encuentra en la pared exterior de la levadura
– α-y β-glucano es más uniforme en las paredes
celulares de la forma del micelio
– la pérdida de la pared celular 
reducción de la virulencia en cul-
tivos y animales de experimenta-
ción
Modelo de la

Role of cell-surface molecules of B. dermatitidis " in host- pathogen Interactions” Bruce


S. Klein and Simon L. Newman. Trend in Microbilogy (246 voL 4 ). JUNE 1996
patogénesis
molecular de
la
blastomicosi
interacción
s. de
Eventos tempranos en la
B.
dermatitidis conidios y la
levadura con los
componentes celulares y
otros de la inmunidad
innata,

(a) en el alveolo
(b, c) en los tejidos.

Se muestra cómo las


interacciones huésped-
patógeno pueden ser
modulada por los
POTENCIAL REDOX
• > eficiencia en sustratos no vivos
• La resistencia a la actividad antimicótica de los PMN ≠
hongos oportunistas y patógenos primarios
– PMN eliminan las conidias de Aspergillus y Rhizopus y las
hifas de Candida
– NO ejercen actividad antifúngica contra las levaduras de
Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis y
Paracoccidioides brasiliensis;
• Necesitan 140 veces más H2O2 para matar la forma levadura de un
hongo patógeno verdadero que para matar la conidia o hifa de un
oportunista;
• se relaciona con la composición de la pared de cada uno de los
estadios del hongo.

SCHAFFNERW . Coccjdioidomycosisa mongv isitors tü a Coccidioides immitis endemic area: An


outbreak in a military reserve. J Jnfect Dis 1995; 171: 1672-1675.
PRODUCCIÓN DE MELANINA

Blastomyces dermatitidis produces melanin in vitro and during infection Joshua D. Nosanchu et all.
FEMS Microbiology Letters 239 (2004) 187–193
PRODUCCIÓN DE MELANINA

Blastomyces dermatitidis produces melanin in vitro and during infection Joshua D. Nosanchu et all. FEMS Microbiology Letters
OTROS F. DE VIRULENCIA
INMUNIDAD CONTRA
B. dermatitidis
INMUNIDAD
INMUNIDAD NATURAL
INMUNIDAD
NATURAL 
PMN
• Destruyen eficientemente los hongos
• Tienen una vida media de 1 – 4 días
• Pueden causar neutopenia
– Candida sp
• Enfermedad granulomatosa
– Déficit de anión superóxido (NADPH oxidasa),
mieloperoxidasa
• Acción contra:
– B. dermatitidis
INMUNIDAD NATURAL 
NK
• Efecto fungida
– Directo
• Otros como C. Albicans

natural killer cells attacking/copyright UCL


– Indirecto
• IFN – gamma
• TNF – alfa
• GSM-CSF
INMUNIDAD NATURAL  S.
DEL COMPLEMENTO
• Activado por:
– Vía alterna por la pared celular de:
• H. capsulatum
• B. dermatitidis
• Se genera C3b que:
– Opsoniza y favorece la fagocitosis
– Complejo de ataque a membranas
(MAC) con actividad lítica
– Vía clásica (inmunogénesis) http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Complement_d

• H. Capsulatum
• B. Dermatitidis
• Se genera:
– Formación de Ac específicos
– Manosa de la pared  se une a C1q

www.rincondelvago.com/tecnica-
CONCENTRACIÓN DE
HIERRO
• Almacen de hierro celular
– Transferrina (proteína transportadora)
• Por ejemplo los Dermatofitos compiten por el hierro
– Ferritina (proteína de almacenamiento)
• Hay hongos que tienen capacidad de
secuestrar el hierro libre o ferroso (Fe++ )

http://es.wikipedia.org/wiki/Transferrinahttp://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Ferri
I. NATURAL 
MACRÓFAGOS
• Alveolares
– Fagocitan partículas infectantes
– Patógenos verdaderos y oportunistas
alumnatbiogeo.blogspot.com/2009_11_01_arc
hive.html

• Residentes
– Condicionados a la estimulación
por citoquinas durante la respuesta
inmune adquirida
– Producen NO
– B. dermatitidis, H. capsulatum
http://pathmicro.med.sc.edu/book/mycol
-sta.htm
INMUNIDAD
HUMORAL
• Principal defensa contra los
mo. extracelulares y sus
toxinas  NO en B.
dermatitidis
• SI. ataca a los ag con ac
secretados por + antigénica.
INMUNIDAD CELULAR
• Respuesta SI adaptativa mediada por linfocitos T

• Ataca hongos intracelulares (B. dermatitidis), capaces


de sobrevivir y proliferar en el interior de los fagocitos y
otras células del huésped.

• Importante contra las micosis profundas

mesa6-lab2.blogspot.com
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
B. dermatitidis
PROTOCOLO
DIAGNÓSTICO
• Clínico – epidemiológico - lesional

• Diagnóstico directo

• Diagnóstico micológico

• Histopatológico

• Medios de cultivo

• Inmunológico

• Diagnóstico molecular: PCR


Epidemic of Pulmonary
Blastomycosis (Namekagon
Fever) in Wisconsin Canoeists

Epidemic of Pulmonary Blastomycosis (Namekagon Fever) in Wisconsin Canoeists. F R


Cockerill, 3rd, G D Roberts, J E Rosenbla. November 2010.
CLÍNICO – EPIDEMIOLÓGICO -
LESIONAL
• Manifestación pulmonar
– Diagnóstico diferencial con:
• Tuberculosis
• Nocardiosis
• Neumonía bacteriana necrotizante
• Enfermedad neoplásica
CLÍNICO – EPIDEMIOLÓGICO -
LESIONAL
• Manifestación extrapulmonar:
– Piel y tejido subcutáneo
• Placas verrugosas
• Úlceras cutáneas
• Dx con pioderma gangrenoso, carcinoma de
células escamosas y otras enfermedades cutáneas
– Osteoarticular
• Indolente e involucra también a los pulmones
• propagación contigua
– Genitourinaria
• Prostatitis/epidimitis/Obstrucción urinaria
• Blastomicosis genitourinario femenino dx con TBCy neoplasia
– SNC
• Lesión o masa/meningitis crónica  PMN en LCR
– Otros
• Laringe, tiroides, senos y ojos
CLÍNICO-EPIDEMIOLÓGICO-
LESIONAL

http://www.saber.ula.ve/tropical/contenido/capitulo3/capitulo22/contenidocapitulo-es.html
http://www.hopkins-arthritis.org/physician-corner/case-rounds/case8/8_case.html
CARCINOMA DE ESCROTO
RELACIONADO POR B.
dermatitidis

.D. Jordan, S. T. Martz & C. P. Hollowell : Cutaneous Blastomycosis Mimicking Squamous Cell
Carcinoma of the Scrotum . The Internet Journal of Urology. 2008 Volume 5 Number 2
CARCINOMA DE ESCROTO
RELACIONADO POR B.
dermatitidis
DIAGNÓSTICO DIRECTO
• Examen directo al M.O
– Fresco: +/- KOH / NaOH
– Tinciones: azul de lactofenol, Gram, tinta
china, histopatológicas
• Cultivo
– Medio de Saboureaud glucosado +/-
antibióticos
– Dimorfismo:
• 25º Saboureaud
• 37º BHI
DIAGNÓSTICO
• Identificación
– Filamentosos: carácterísticas macro/micro
– Levaduriformes: pruebas bioquímicas

• Auxonograma

• Zimograma

• Detección de exo - ag

• Sondas de ácidos nucleicos


y PCR
DIAGNÓSTICO
HISTOPATOLÓGICO

http://www.saber.ula.ve/tropical/contenido/capitulo3/capitulo22/contenidocapitulo-es.html
M. CULTIVO – DX DE
COLONIAS

file:///Users/vamaca/Desktop/blastomices%20red/Mycology%20Online%20%7C%20Blastomyces
%20dermatitidis.webarchive

RG-3 Organismo. Los cultivos de B. dermatiditis representan un riesgo biológico


graves para el personal de laboratorio y deben ser manejados con extrema precaución
en un gabinete de patógenos manejo adecuado.
P. DE SUSCEPTIBILIDAD
ANTIFÚNGICA

En En
investigació investigació
n n

file:///Users/vamaca/Desktop/blastomices%20red/Mycology%20Online%20%7C%20Blastomyces
PRUEBAS SEROLÓGICAS
• Prueba de inmunodifusión (precipitación).
– Requiere de 2 a 3 semanas para ser positivo.
– Positiva 80%  Cuando es positivo, hay cerca de 100% de
especificidad.

• La fijación del complemento (FC).


– Requiere de 2 a 3 meses después de la aparición de la enfermedad
para desarrollar anticuerpos detectables.
– Otra desventaja de la FC es que reacciona con otras infecciones por
hongos (coccidioidomicosis e histoplasmosis).
– La ventaja es que es una prueba cuantitativa 
Se puede seguir la respuesta del paciente a la
enfermedad mediante el control
de los títulos de anticuerpos

• Inmunoensayo enzimático (EIA).


– Aceptación por micólogos.
– Fácil de realizar
– El anticuerpo se detecta temprano en el proceso
de la enfermedad.

http://www.scribd.com/doc/9429440/INMUNOENSAYOS
Antígenos Fúngicos, Controles
Positivos y Láminas de inmunodifusión para
usar en
la Prueba de inmunodifusión (ID)
• Las pruebas serológicas de Blastomicosis deberían ser requeridas cuando
un paciente muestre signos de una infección respiratoria que progresa
gradualmente y/o cuando las lesiones estén presentes en la piel, lo que
constituye un signo frecuente de diseminación

• Blastomicosis no tiene síntomas patognomonicos o características


radiológicas específicas.

• La prueba ID de Blastomicosis es específica y los anticuerpos son


detectados contra el antígeno “A’(positiva en aproximadamente el 80% de
los casos probados por cultivo) y reacciones positivas pueden ser la base
para un tratamiento inmediato del paciente

• El aumento de anticuerpos (es decir el título) se relaciona con la actividad


de la enfermedad

• Las pruebas negativas, sin embargo, no excluyen el diagnóstico de


Blastomicosis

• Si las precipitinas están presentes en la prueba ID de blastomicosis, la


prueba de especimen de suero por CF no es necesaria.
Inmuno-Micológicos, In
PCR – GEN DE VIR. BAD1
• Desarrollo de un ensayo basado en PCR para la detección de B. dermatitidis de
muestras de suelo

• Primers específicos para una parte de la región promotora del gen de virulencia
BAD1.

• Un estándar de control interno, pTJV2-2, fue construida para validar los resultados
de muestras de suelo.

• Los límites de detección de PCR para el plásmido control y B. dermatitidis ADN


genómico fueron de 0.1 y 500 femtogramos, respectivamente.

http://botit.botany.wisc.edu/toms_fungi/burgess_schwan_volk_blastomyces.pdf
PCR – GENES
RIBOSOMALES

Coccidioidomycosis and blastomycosis: Advances in molecular diagnosis Ralf Bialek et alI. EMS
Immunology and Medical Microbiology 45 (2005) 355–36
TRATAMIENTO
B. dermatitidis
TRATAMIENTO
FARMACOLÓGICO
• Anfotericina B

• Der. azólicos:
http://www.netdrugs.info/dci/anfote.shtml
– Ketoconazol
– Fluconazol
– Itraconazol

Tratamiento de las micosis profundas. Martínez Ferrández et all. Acta médica.1


RESUMEN DE TTO.
FARMACOLÓGICO
CURIOSIDAD
B. dermatitidis
CURIOSIDAD
B. dermatitidis
CUESTIONES
PARA RESPONDER
Sí no comentas B.
Dermatitidis irá a
devorarte
CUESTIÓN 1
• B. Dermatitidis es un hongo que
produce infección oportunista
localizada

– Verdadero

– falso

falso
CUESTIÓN 2
• La blastomicosis se da sobretodo en
terrenos secos y con poca
vegetación

– Verdadero

– Falso

falso
CUESTIÓN 3
• B. Dermatitidis no tiene ciclo asexual

– Verdadero

– falso

falso
CUESTIÓN 4
• La afectación de la blastomicosis es
principalmente osteoarticular

– Verdadero

– falso

falso
CUESTIÓN 5
• La inmunidad innata no tiene un
papel fundamental en la defensa
contra el hongo

– Verdadero

– Falso

falso
BIBLIOGRAFÍA
B. dermatitidis
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