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Objetivo especifico
MARCO TERICO
La calidad del agua se define como: el conjunto de caracteres fsicos qumicos y
biolgicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea
segura para el fin destinado (DGCOH, 1982).
Para que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos factores:
a) Fsicos. Color, olor, sabor, temperatura, conductividad especfica, slidos, pH.
b) Qumicos. Alcalinidad, metales, nutrimentos, sulfatos, OD (Oxgeno Disuelto), DBO
(Demanda Bioqumica de Oxgeno).
c) Biolgicos. El mtodo microbiolgico para detectar la presencia de
microorganismos coliformes en el agua contempla tres fases: Prueba Presuntiva,
Prueba Confirmativa, Prueba Completa.
Los parmetros fsico-qumicos dan informacin extensa de la naturaleza de las
sustancias qumicas del agua y sus propiedades fsicas, sin aportar informacin de su
influencia en la vida acutica; los mtodos biolgicos aportan esta informacin pero no
sealan algo acerca del contaminante o contaminantes responsables.
ENFERMEDAD
AGENTE
ORIGEN BACATERIANO
MICROBIOLOGA I
LAB.N3 Determinacin de la calidad del agua por su contenido
bacterial
Conceptos:
Escherichia coli bacteria del grupo coliforme que fermenta la lactosa y manitol,
con produccin de cido y gas a 44,5 0,2 C en 24 horas, produce indo a partir
del triptfano,oxidase negativa, no hidroliza la urea y presenta actividad de las
enzimas galactosa y glucuronidase, que es considerado el ms especfico
indicador de contaminacin fecal reciente y de eventual presencia de organismos
patognicos.
3. Microbiolgicos
Ausencia total de bacterias coniformes, Streptococus faecalis, clostridios sulfito.
Ausencia total de elementos formes.
Un mximo de 200 bacterias aerobias/ml de agua a 37C.
RECUENTO DE COLONIAS EN PLACA
MICROBIOLOGA I
LAB.N3 Determinacin de la calidad del agua por su contenido
bacterial
Es un mtodo muy utilizado cuando se necesita determinar el tamao de la poblacin
bacteriana de una muestra.
El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollar
una colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homognea con
respecto a su composicin microbiolgica, es posible que una colonia se origine de
un microorganismo o de cientos de ellos, dando en este ltimo caso un recuento
menor del real.
Tambin es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan
crecer en las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.).
En este caso el recuento tambin ser inferior al real. Lo que s se sabe es que cada
colonia observada se form a partir de por lo menos un microorganismo.
Esta es una condicin necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una
unidad formadora de colonia (U.F.C.) a los efectos de los clculos. Se admite, por lo
tanto, que en los mtodos de recuento de microorganismos vivos, son inevitables los
errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeas, es posible cometer
grandes errores.
BACTERIAS COLIFORMES
- Mtodo de los tubos mltiples (NMP nmero ms probable).
Este mtodo podr utilizarse para cualquier tipo de agua y ser el
procedimiento oficial obligatorio en casos de litigio.
Determinacin del nmero de coliformes mediante siembra de distintos
volmenes del agua a analizar en series de tubos conteniendo medio de cultivo
liquido lactosado y resiembra en medios de cultivo selectivos con incubacin a
temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva,
de confirmacin de coliformes totales y de confirmacin de coliformes fecales.
- Mtodo del filtro de membrana (mtodo alternativa).
Determinacin del nmero de coliformes mediante filtracin de volmenes
determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubacin sobre
medios de cultivo a temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las
determinaciones de coliformes totales y de coliformes fecales.
ESTREPTOCOCOS FECALES
- Mtodo de las tubos mltiples (NMP nmero ms probable).
Este mtodo podr utilizarse para cualquier tipo de agua y ser el
procedimiento
oficial obligatorio en casos de litigio. Fundamento.
Determinacin del nmero de estreptococos mediante siembra de distintos
volmenes del agua a analizar en series de tubos conteniendo medio de
cultivo liquido glucosado con agentes inhibidores selectivos e incubacin a
temperatura adecuada. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva y
de confirmacin de estreptococos fecales.
- Mtodo del turro de membrana (mtodo alternativo)
MICROBIOLOGA I
LAB.N3 Determinacin de la calidad del agua por su contenido
bacterial
Determinacin del nmero de estreptococos fecales mediante filtracin de
volmenes determinados del agua a analizar por filtros de membrana e
incubacin sobre medio de cultivo selectivo a temperatura adecuada.
Toma de muestras para anlisis microbiolgico
Las muestras que se tomarn para el anlisis deben ser representativas para poder
determinar as su calidad microbiolgica. Hay normas para la toma de muestras de
aguas segn sus distintas procedencias (grifos, pozos, depsitos, lagos, ros,
manantiales, etc.). Para su recogida debe utilizarse frascos estriles y debe
recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.
Agua de los grifos: Se tiene que dejar correr el agua durante un periodo de 1 a
2 minutos. Destape el frasco esterilizado con los cuidados necesarios a modo
de no contaminar el medio y luego cirrelo.
Si el agua estuviera clorada (piscinas) el frasco con el que se tomara la
muestra de 100 ml deber contener 0.1 ml de solucin de tiosulfato de sodio al
3% para neutralizar el cloro residual.
Pozos: Cuando no hay grifos u otro tipo de conduccin, amarre una cuerda
esterilizada al frasco de toma de muestras y recolecte la muestra. El frasco
debe estar lleno hasta sus 4/5 de su volumen.
Agua de superficie: Recolecte la muestra contra la corriente, lo ms distante de
la orilla y siempre bajo la superficie (ms o menos a 30 cm de profundidad).
Veamos un caso prctico: Se han contado las tres placas sembradas de la dilucin 10-4
y se ha obtenido un recuento de 43, 45 y 47 colonias respectivamente en las tres
placas. Para expresar el resultado del recuento, primeramente se hace la media de las
tres placas (43+45+47:3=45) que sera de 45 colonias. Puesto que se ha sembrado
0.1 ml. para saber el nmero de colonias por mililitro ser necesario multiplicar por 10,
por tanto ser 45x10=4.5X102 en el mililitro de la dilucin 10 -2. As, en la muestra
original el nmero de unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC /ml) ser de
4.5x102 x104 es decir, 4.5x106 UFC/ml
PROCEDIMIENTO
MICROBIOLOGA I
LAB.N3 Determinacin de la calidad del agua por su contenido
bacterial
Recoger en 3 frascos esterilizados muestras de agua de distintos lugares.
Coger cierto volumen de agua de cada muestra y diluirlo con agua destilada
hasta tener las siguientes concentraciones: 1 ml; 0,1ml, 0,01ml
Preparar el agar nutritivo y vertirlo en 3 placas Petri esterilizadas.
Verter 1 ml de cada una de las nuevas concentraciones en las placas.
Incubar las placas con muestra de agua durante 50 horas variando la
temperatura de 22 - 28C segn sea el lugar del muestreo.
Despus de haber transcurrido las 48 horas realizar el respectivo conteo de
colonias. Si el recuento debe ser postergado temporalmente, guardar las
placas a 5 10C por un perodo no mayor de 24 horas, pero evitar que sea
sta una prctica de rutina
RESULTADOS
Muestras de agua
Muestra
Estanque de
Arquitectura
Estanque de pabelln
central
Grifo FIA
Fecha
19/04/16
Hora
5:30 pm
Temperatura
22C
19/04/16
5:34 am
22C
19/04/15
12:08 pm
22C
Muestra
1mL
227
Dilucin
10-1mL
47
10-2mL
12
Estanque de
pabelln central
177
Grifo Baos
Varones FIA
180
49
Estanque de
Arquitectura
U.F.C
177
-
Observaciones
Tamao de la colonia:1-5 mm
Color: Cremas
T.OBS:72 horas
Tiempo de incubacin:
Tamao de la colonia:2-5 mm
Color: Cremas
T.OBS:72 horas
Tiempo de incubacin:
Tamao de la colonia:1-5 mm
Color: Cremas
T.OBS:72 horas
Tiempo de incubacin:
Para realizar el contaje se escogen las placas que muestren entre 30 y 300 colonias.
Para visualizar mejor es conveniente ubicar la placa sobre una caja con tapa de vidrio
y luz. Dar el resultado en ufc/ml (no en bacterias por gramo):
CONCLUSIONES
MICROBIOLOGA I
LAB.N3 Determinacin de la calidad del agua por su contenido
bacterial
RECOMENDACIONES
Se recomienda hacer una limpieza constante del estanque del pabelln central.
Se debe realizar un monitorio constante del grifo de FIA a fin de eliminar las
colonias de bacterias.
Se sugiere realizar adicional a la prueba realizada la prueba de coliformes
totales a fin de obtener una base referencial de la calidad bacteriolgica.
Se recomienda mantenimiento de reservorios de agua de la FIA a fin de evitar
posibles infecciones gastrointestinales; ya que las muestras presentaron
presencia de colonias en registro.
ANEXOS
microbiolgicos.
MICROBIOLOGA I
LAB.N3 Determinacin de la calidad del agua por su contenido
bacterial
BIBLIOGRAFA
Food and Drug Administration (2003) Bacteriological Analytical Manual. 9th ed.
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Madigan, M T y Martinko, J M., Brock, Biology of Microorganisms, 11a ed. 2006, pp
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Brooks, Geo F., Batel, Janet S. y Morse, Stephen A., Microbiologa Mdica de Jawetz.
Manual Moderno 17a Edicin 2002, pp 274-275
Kornacki J.L. & Johnson J.L. (2001) Enterobacteriaceae, Coliforms, and Escherichia
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Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K. (Eds.) APHA.
Washington. 69-82.
International Commission on Microbiological. Specifications of Foods (2005)
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http://www.digesa.minsa.gob.pe/publicaciones/descargas/reglamento_calidad_agua.pd
f.