INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

LABORATORIO DE MTODOS DE ANLISIS

SEPARACION

E IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR

CROMATOGRAFIA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA.

Seccin: VI

ALUMNO: Miranda Alvarado B. Aurora 4IM1 Fecha: 09/03/16

FUNDAMENTO.
En la cromatografa sobre papel y en la cromatografa en capa fina la fase estacionaria no
se dispone en forma de columna, sino que est constituida, en el primer caso por una hoja
de papel filtro, y en el segundo, por una capa de adsorbente finamente dividido extendida
sobre una placa de vidrio o de plstico. El sustrato a analizar se coloca cerca del borde
del papel o de la superficie absorbente en forma de una pequea mancha circular,
obtenida aplicando una gota de la solucin de la muestra y dejndola secar. Luego, se
sumerge este borde del papel o de la placa en el disolvente revelador o de desarrollo
que constituye la fase mvil. El disolvente asciende por el papel o la placa por capilaridad,
arrastrando consigo el sustrato. Antes de que alcance el extremo superior del papel o de
la placa, se detiene el flujo de disolvente retirando el papel o la placa de la cmara de
desarrollo y se marca el frente de disolvente. Normalmente, el sustrato no se ha
desplazado a la misma velocidad que el disolvente, sino que ha quedado retrasado,
retenido en el papel o la placa. Las sustancias que se separan se detectan posteriormente
de forma apropiada. Por variacin y preparacin adecuada de la capa de adsorcin se
consigue el anlisis de mezclas de sustancias tanto hidrfilas como lipfilas. La mayor
ventaja de este mtodo es, junto a su gran capacidad de separacin, la rapidez del
proceso. La fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La fase
estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser por lo general menos polar que
la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor
velocidad sern los menos polares. Al realizar la eleccin del adsorbente se debe tener en
cuenta el tamao de las partculas del adsorbente, cuanto ms finamente dividido est
mayor ser su adhesin al soporte, aunque tambin se le puede aadir un adherente.
Objetivos.

Separar los aminocidos presentes en jugo de naranja por cromatografa

bidimensional en capa fina
Identificar los aminocidos separados por comparacin de los valores de Rf con
los de soluciones tipo de aminocidos.
Comparar el grado de resolucin de la cromatografa bidimensional, con el de la
unidimensional.

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Resultados.
Placas I y II respectivamente. En ambas placas, los aminocidos fueron colocados en el
siguiente orden: Glu, Arg, Gly, His, Met, Phe, Pro, Tyr, Lys, Thr y la muestra problema.

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Imgenes de las placas III y IV respectivamente

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TABLA 1. CROMATOGRAMAS UNIDIMENSIONALES TIPO DESARROLLADOS EN LAS 2 FASES

MVILES.
Aminocido
Frente
Frente del
Rf
Frente
Frente del
Rf
de
disolvente
de
disolvente
soluto
soluto
1a Fase Mvil
2a Fase Mvil
Arg
2.6
8.1 0.320987654
1.3
8.05 0.161490683
Lys
4.5
7.8 0.576923077
0.95
9.95 0.095477387
Pro
5.4
7.9 0.683544304
2.4
8.1 0.296296296
Gly
6.3
8.1 0.777777778
2.6
8.1 0.320987654
His
6.9
8.1 0.851851852
1.1
8.1 0.135802469
Glu
7.3
8.3 0.879518072
3
8.1
0.37037037
Thr
6.9
7.8 0.884615385
3.2
8.1 0.395061728
Tyr
7
7.8 0.897435897
5.15
8
0.64375
Met
7.2
8
0.9
5
8.15 0.613496933
Phe
7.4
7.9 0.936708861
5.5
8.15 0.674846626

TABLA 2. CROMATOGRAMA BIDIMENSIONAL TIPO DESARROLLADO EN LAS 2 FASES MOVILES.

1a Fase Mvil
No. De
mancha

2a Fase Mvil

Frente del
disolvente

Rf

Frente
de
soluto
2.5

7.5

3.9

7.5

0.33333333
3
0.52

5.05

7.5

5.65

7.5

6.1

7.5

6.2

7.5

6.3

7.5

0.67333333
3
0.75333333
3
0.81333333
3
0.82666666
7
0.84

6.3

7.5

6.65

7.5

10

7.25

7.5

Aminocido
correspondien

Frente
de
soluto
1.4

Frente del
disolvente

Rf

8.25

0.16969697

Arg

1.1

8.25

0.133333333

Lys

2.6

8.3

0.313253012

Pro

2.15

8.3

0.259036145

Gly

1.35

8.3

0.162650602

His

1.9

8.3

0.228915663

Glu

3.1

8.3

0.373493976

Thr

0.84

5.2

8.3

0.626506024

Tyr

0.88666666
7
0.96666666
7

4.95

8.3

0.596385542

Met

5.75

8.3

0.692771084

Phe

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TABLA 3. CROMATOGRAMA BIDIMENSIONAL PROBLEMA DESARROLLADO EN LAS 2

FASES MVILES.

No de
Mancha
1
4
2
5
3
6
7
8

Frente del
soluto
2.1
2.9
3
3.25
3.3
5.55
6.05
7.3

1a Fase Mvil
Frente del
disolvente
7.65
7.65
7.65
7.65
7.65
7.65
7.65
7.65

Rf (Orden
creciente)
0.274509804
0.379084967
0.392156863
0.424836601
0.431372549
0.725490196
0.790849673
0.954248366

Frente de
Soluto
1.4
3.8
2.7
4.1
3.35
2.6
3.1
5.65

2a Fase Mvil
Frente del
disolvente
8.3
8.25
8.25
8.25
8.25
8.2
8.2
8.15

Rf
0.168674699
0.460606061
0.327272727
0.496969697
0.406060606
0.317073171
0.37804878
0.693251534

TABLA 4. CROMATOGRAMA BIDIMENSIONAL PROBLEMA (IV) DESARROLLADO EN LAS 2

FASES MVILES
No. De Mancha
Rf Creciente en la 1
Rf en la 2 Fase Mvil Aminocido
Fase Mvil
correspondiente
1
0.274509804
0.168674699 Arg
4
0.379084967
0.460606061 No identificado
2
0.392156863
0.327272727 No identificado
5
0.424836601
0.496969697 No identificado
3
0.431372549
0.406060606 No identificado
6
0.725490196
0.317073171 Pro
7
0.790849673
0.37804878 Thr
8
0.954248366
0.693251534 Phe

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Discusiones.
En nuestra placa problema, se pudo identificar solamente los aminocidos arginina,
prolina, treonina y fenilalanina, como se puede observar en nuestras tablas de resultados,
los valores de Rfs de los cromatogramas tipo son casi iguales o se acercan mucho a los
valores con los que se identific cada aminocido citado. Sabemos que la distancia
recorrida por las manchas (componentes y, en este caso aminocidos) va muy ligada a
la composicin de la fase mvil y que cada aminocido se comporta de distinta manera
dependiendo la fase mvil que se est utilizando ya que la polaridad y solubilidad de la
misma cambia, por eso fue muy importante que durante la experimentacin trabajamos
con la misma fase mvil dependiendo de la placa tipo, excepto claro est, en las
bidimensionales en las que utilizamos dos fases mviles distintas, pero se trabajaron por
separado para obtener el resultado que esperbamos, y as, el desarrollo de una fase
mvil no interfiriera con el desarrollo de la otra. Esto lo hicimos ya que, como pudimos
observar en las cromatografas unidimensionales que hicimos, en el punto de la muestra
problema (De jugo), en ambas placas no se observa con nitidez la separacin total de los
aminocidos, se puede ver en cambio manchas muy dispersas o en su caso, barridas que
se interpretaran como una sola ya que no se puede ver en donde termina y empieza el
siguiente aminocido. As con el segundo desarrollo, aquellas manchas que quedaron
juntas, se separan hacia el lado que corre el solvente en esa ocasin, que debemos
recordar debe ser hacia un lado distinto de donde se dej correr el primer disolvente,
debido a que como se mencion antes, cada aminocido se comporta de manera distinta
con cada disolvente, as, aunque con la primer fase mvil tienen un comportamiento muy
similar o incluso igual, con la segunda es distinto permitiendo de esta forma la separacin
completa de los mismos. Entonces, al tener los Rfs iguales o muy similares, podemos
concluir qu aminocidos tenemos, ya que esto quiere decir que al comportarse los
componentes del problema igual los de las placas tipo con ambos disolventes, se trata del
mismo aminocido.
Obtuvimos varios aminocidos que no se identificaron, esto se puede deber
principalmente, a que en nuestras placas tipo colocamos nicamente 10 muestras de
aminocidos conocidos, de los 20 principales, dejando de lado 10 de los cuales no
conocemos los datos, y posiblemente los que no identificamos en nuestro jugo se
encuentren dentro de estos desconocidos.
Segn la literatura, los aminocidos que se encuentran en mayor cantidad en el zumo de
naranja y en orden descendente, son: cido asprtico, arginina, prolina, acido glutmico,
alanina, leucina, serina, valina y fenilalanina. De los cuales slo identificamos los ya
subrayados adems de la treonina Eso quiere decir que, probablemente, los aminocidos
no identificados sean cualquiera de los anteriormente citados (c. Asprtico, cido
Glutmico, alanina, leucina, serina o valina)
Conclusiones.
Se pudo ver una separacin de aminocidos en la muestra problema, aunque hubo
algunos aminocidos que no se pudieron identificar.
Se logr identificar Arg, Pro, Tyr y Phe.

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La resolucin en una cromatografa en capa fina unidimensional es menor que en la

bidimensional ya que los componentes en cierta muestra, no siempre tienen una
separacin optima con una sola fase mvil.
PREGUNTAS EXTRA
1. Investigar en la literatura los aminocidos que contienen el jugo empleado
como problema. Compare sus resultados y concluya.
Aminocidos del zumo de naranja:
Nutriente
Cantidad
cido asprtico
75 mg.
cido glutmico
33 mg.
Alanina
15 mg.
Arginina
47 mg.
Cistina
5 mg.
Fenilalanina
9 mg.
Glicina
9 mg.
Hidroxiprolina
0 mg.
Histidina
3 mg.
Isoleucina
8 mg.

Nutriente
Leucina
Lisina
Metionina
Prolina
Serina
Tirosina
Treonina
Triptofano
Valina

Cantidad
13 mg.
9 mg.
3 mg.
44 mg.
13 mg.
4 mg.
8 mg.
2 mg.
11 mg.

2. Escriba la reaccin completa y con nombres, de la ninhidrina con un

aminocido.
3. Es posible cambiar el orden de las fases mviles? Explique su respuesta.
Si, en teora, el orden en el que se apliquen las fases mviles no afectar el

resultado,
sin

embargo, como en todo experimento puede

haber una pequea diferencia
propia ya del mtodo.
4. Indique las
posibles fuentes de error de esta tcnica.

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o
o
o
o

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Que la cmara no se haya saturado con la fase mvil correctamente o que,

al momento del desarrollo, la cmara se haya movido.
El error del analista al medir las distancias para el clculo de los Rfs.
La mala aplicacin de las muestras en las placas, o que, estas mismas no
se hayan cortado de manera correcta al inicio del experimento.
Contaminar las placas al momento de maniobrarlas, por medio del mismo
tacto.

Bibliografa:
**Qumica orgnica 5 edicin, Paula Yurkanis, Ed. Pearson Pg. 1029,1030
**Https://books.google.com.mx/books?
id=htRP2dHJkXgC&pg=PA323&dq=cromatografia+en+capa+fina&hl=es419&sa=X&ved=0ahUKEwiex9bQ7bLLAhUqs4MKHQTEB2AQ6AEIGjAA#v=onepage&q=
cromatografia%20en%20capa%20fina&f=false
**http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
**https://books.google.com.mx/books?
id=Pm7lNZzKlaoC&pg=PA9&dq=cromatografia+en+capa+fina&hl=es419&sa=X&ved=0ahUKEwiex9bQ7bLLAhUqs4MKHQTEB2AQ6AEIJDAC#v=onepage&q=
cromatografia%20en%20capa%20fina&f=false